Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438061.pdf: 2839596 bytes, checksum: 6a94dcd2e48c0f8aa666231a6a1d1a83 (MD5) Previous issue date: 2012-01-27 / This study aimed to evaluate the antiproliferative effect of catechin, as if it has the capacity to reverse the phenotype of GRX cells, and the mechanisms involved in these outcomes. We evaluated the growth and cell proliferation in hepatic stellate cell line activated, the GRX, which were treated with catechin, and cocoa extract, and between the possible mechanisms involved in cell growth was assessed by cell necrosis release of lactate dehydrogenase, apoptosis, by expression of caspase 3 and PARP, as well as the expression of autogagia LC3. The cell cycle was measured by the expression of p53 and p27, as well as inflammatory pathways of IL-6 and COX-2 were assessed by RTPCR Real-time quantification and fibrogenic factor TGF-β. The phenotypic reversion was determined by the presence of fat in the cells with Oil-Red, as well as the expression of PPAR γ, an important regulator of adipogenesis. We evaluated the total collagen and collagen type 1 cells after treatment. It can be seen that both catechin as the cocoa extract decreased the cell growth and proliferation and that this decrease was not due to necrosis and even the activation of apoptosis and autophagy. Catechin induced cell cycle arrest by the reduction of p53 and p27, as well as decreasing the expression of inflammatory proteins such as IL-6 and COX-2 and TGF-β factor fibrogenic. The phenotypic reversion, can observe the presence of fat droplets in the cells after treatment with catechin and cocoa extract, as well as a reduction in collagen type I and an increase in expression following treatment with PPAR γ catechin. In conclusion, catechin decreases cell growth GRX, probably anti-inflammatory activity and for stopping the cell cycle. Catechin decreases the synthesis of TGF-β by cells demonstrating the potential antifibrotic effect. It also presents the property to revert the activated phenotype of GRX cells to a quiescent state and this mechanism may be via activation of PPAR gamma metabolic pathway. / O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito antiproliferativo da catequina, assim como, se esta apresenta capacidade de reverter o fen?tipo das c?lulas GRX, e quais os mecanismos envolvidos nestes desfechos. Foi avaliado o crescimento e prolifera??o celular em linhagem de c?lulas estreladas hep?ticas ativadas, as GRX, as quais foram tratadas com catequina e extrato de cacau, e entre os poss?veis mecanismos envolvidos no crescimento celular foi avaliada necrose celular pela libera??o da lactato desidrogenase, apoptose, pela express?o de Caspase 3 e PARP, assim como, autogagia pela express?o de LC3. O ciclo celular foi avaliado pela express?o de p53 e p27, assim como, as rotas inflamat?rias da IL-6 e COX-2 foram avaliadas por RT-PCR em tempo real e a quantifica??o do fator fibrog?nico TGF-β. A revers?o fenot?pica foi avaliada pela presen?a de gordura nas c?lulas, por Oil-Red, assim como, pela express?o de PPARγ, um importante fator regulador da adipog?nese. Foi avaliado o col?geno total e o col?geno do tipo 1 nas c?lulas ap?s os tratamentos. Pode-se observar que tanto a catequina como o extrato de cacau diminuiu o crescimento e prolifera??o celular e que esta diminui??o n?o foi por necrose e nem mesmo pela ativa??o da apoptose e autofagia. A catequina induziu uma parada no ciclo celular, pela redu??o da p53 e p27, assim como, diminuiu a express?o de prote?nas inflamat?rias como a IL-6 e COX-2 e o fator fibrog?nico TGF-β. Quanto a revers?o fenot?pica, pode-se observar a presen?a de got?culas de gordura nas c?lulas ap?s tratamento com catequina e extrato de cacau, assim como, uma diminui??o do col?geno tipo I e um aumento na express?o de PPARγ ap?s tratamento com catequina. Em conclus?o, a catequina diminui o crescimento das c?lulas GRX, provavelmente por atividade anti-inflamat?ria e por parar o ciclo celular. A catequina diminui o s?ntese de TGF-β pelas c?lulas demostrando um potencial efeito antifibr?tico. Apresenta ainda, a propriedade de reverter o fen?tipo ativado das c?lulas GRX para um estado quiescente e este mecanismo pode ser via ativa??o da rota metab?lica PPARγ.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438119.pdf: 1374944 bytes, checksum: ed0d2c4ba08c684fb0fe51136bb75979 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Endosulfan is a broad spectrum organochlorine pesticide that is still widely used in many developing countries. Following application endosulfan can get to watercourses through surface runoff from agricultural fields and disturb the nontarget aquatic animals including freshwater fish species. Given that the activity of the enzyme acetylcholinesterase (AChE) is one of the most recurrently used biomarkers of exposure to pesticides and there are controversial results concerning the effects of endosulfan exposure and AChE activity in fish, the aim of the present study was to evaluate the effects of endosulfan in brain AChE activity and its gene expression pattern using adult zebrafish (Danio rerio) as an animal model. Moreover, we have analyzed the effects of endosulfan exposure in different parameters of zebrafish swimming activity and in long-term memory formation. After 96 hours of exposition, fish in the 2.4 μg endosulfan/L group presented a significant decrease in AChE activity (9.44 ? 1.038 μmol SCh.h-1.mg protein-1; p = 0.0205) when compared to the control group (15.87 ? 1.768 μmol SCh.h-1.mg protein-1; p = 0.0205). The downregulation of brain AChE activity is not directly related with the transcriptional control as demonstrated by the RT-qPCR analysis. Our results reinforce AChE activity inhibition as a pathway of endosulfan-induced toxicity in brain of fish species. In addition, exposure to 2.4 μg endosulfan/L during 96 hours impaired all exploratory parameters evaluated: decreased line crossings (273.7 ? 28.12 number of line crossings compared to the control group 344.6 ? 21.30, p=0.0483), traveled distance (23.44 ? 2.127 meters compared to the control group 29.39 ? 1.585, p=0.0281), mean speed (0.03 ? 0.003 meters/seconds compared to the control group 0.04 ? 0.002, p=0.0275) and body turn angle (69,940 ? 4,871 absolute turn angle compared to the control group 88,010 ? 4,560 p=0.0114). These results suggest that endosulfan exposure significantly impairs animals' exploratory performance, and potentially compromises their ecological and interspecific interaction. Our results also showed that the same endusulfan exposure did not compromise animals' performance in the inhibitory avoidance apparatus. These findings provide further evidence of the deleterious effects of endosulfan exposure in the nervous system. / Endosulfan ? um pesticida organoclorado de amplo espectro ainda utilizado largamente em muitos pa?ses subdesenvolvidos. As aplica??es repetidas de endosulfan podem se incorporar aos cursos de ?gua por meio da lixivia??o dos solos das planta??es e atingir animais aqu?ticos, incluindo esp?cies de peixes. Dado que a atividade da enzima acetilcolinesterase (AChE) ? um dos biomarcadores de exposi??o aos pesticidas mais utilizados de forma recorrente e h? resultados controversos envolvendo os efeitos da exposi??o ao endosulfan e a atividade da AChE em peixes , o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do endosulfan na atividade da AChE cerebral e seu padr?o de express?o g?nica utilizando zebrafish adulto (Danio rerio) como modelo experimental. Al?m disso, n?s analisamos os efeitos da exposi??o ao endosulfan em diferentes par?metros de locomo??o do zebrafish e na forma??o da mem?ria de longo prazo. Ap?s 96h de exposi??o, os peixes do tempo com 2,4 μg/L de endosulfam apresentaram um decr?scimo significante na atividade da AChE (9.44 ? 1.038 μmol SCh.h-1.mg prote?na-1; p = 0.0205) quando comparados com o grupo controle (15.87 ? 1.768 μmol SCh.h-1.mg prote?na-1; p = 0.0205). A regula??o inibit?ria da atividade da AChE cerebral n?o est? diretamente relacionada com o controle transcricional como demostrado pela an?lise de RT-qPCR. Nossos resultados refor?am a inibi??o da atividade da AChE como via da toxicidade induzida pelo endosulfan em c?rebro de de peixe. Al?m disso, a exposi??o de 2,4 μg/L do endosulfan durante 96h prejudicou todos os par?metros explorat?rios avaliados: linhas cruzadas (273.7 ? 28.12 n?mero de linhas cruzadas em compara??o com o grupo controle: 344.6 ? 21.30, p=0.0483), dist?ncia viajada (23.44 ? 2.127 metros comparados com o grupo controle 29.39 ? 1.585, p=0.0281), velocidade m?dia (0.03 ? 0.003 metros/segundos comparados com o grupo controle 0.04 ? 0.002, p=0.0275) e mudan?as de ?ngulo (69,940 ? 4,871 mudan?as de ?ngulo absolutas comparadas com o grupo controle 88,010 ? 4,560 p=0.0114). Esses resultados sugerem que a exposi??o ao endosulfan prejudica significativamente a performance explorat?ria dos animais e, potencialmente, compromete suas intera??es interespec?ficas e ecol?gicas. Nossos resultados tamb?m demonstraram que a mesma exposi??o ao endosulfan n?o compromete a performance dos animais no aparato de esquiva inibit?ria. Esses achados fornecem evid?ncias adicionais de efeitos delet?rios da exposi??o ao endosulfan no sistema nervoso.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438124.pdf: 1241897 bytes, checksum: 68c450ddba15c588f04067f7bd75dae9 (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive tumor of the CNS and most deadly primary tumors. Despite the malignant gliomas are generally treated with radiotherapy, often they exhibit a significant radioresistance that limits the treatment success. It can be postulated that molecular changes commonly observed in these tumors contribute to this resistance. The nucleotide ATP is an important signaling molecule in CNS and it is a selective P2X7 purinergic receptor (P2X7R) ligand at high concentrations. Some studies have reported that P2X7R is responsible for ATP-induced cell death in various cell types, but some human glioma cells were resistant to death induced by ATP. In addition to ATP resistance, patients with GBM develop spontaneous antitumor immune responses. These studies show the requirement for an exogenous induction of the immune system to generate an antitumor response. IL-17 is a pro-inflammatory cytokine and its role in cancer is already unknown. Herein, we first aimed to characterize a radiosensitive human glioma cell line for sensitivity to ATP and to investigate whether activation of the P2X7R could be involved in the death of this cell line. Furthermore, aimed to elucidate the IL-17 receptor susceptibility to irradiation, as well as, elucidate the effect of IL-17 and a possible interaction between this cytokine and P2X7R in human glioma cells. The human glioma cell lines U-138 MG and U-251 MG were resistant to death when treated with either ATP (5 mM) or BzATP (100 μM), a selective P2X7R agonist, whereas in the radiosensitive M059J glioma cell line, the high ATP (5 mM) or BzATP (100 μM), significantly diminished the cell viability (32.4% ? 4.1 and 24.6% ? 4.0, respectively). The M059J lineage expresses significantly higher P2X7R levels when compared to the U-138 MG and U-251 cell lines (0.40 ? 0.00; 0.28 ? 0.01 and 0.31 ? 0.01, respectively) and irradiation upregulated P2X7R expression in all lineages. Additionally, the selective P2X7R antagonist A740003 (10 ?M) significantly decreased the cell death caused by irradiation. We provided novel evidence indicating that M059J human glioma cell line is ATP-P2X7R sensitive, pointing out the relevance of the purinergic P2X7R in glioma radiosensitivity. The IL-17 receptor was significantly more expressed after irradiation (2 Gy), showing a possible participation of the IL-17/R on the irradiation susceptibility. The treatment with IL-17 (10 ng/ml) diminished approximately 62% the human glioma cell lines viability. Other preliminary result showed that the P2X7R antagonist was able to partially reverse the toxicity caused by IL-17 in these cell lines. Our data show an antitumor role of this cytokine and corroborate to the idea of a possible interaction between IL-17/P2X7R. This work prospects for studies to be conducted to better understanding the action of IL-17 in gliomas and interaction IL-17/P2X7R / O glioblastoma multiforma (GBM) ? considerado o mais agressivo tumor do sistema nervoso central (SNC), e o mais letal entre os tumores prim?rios. Apesar dos gliomas malignos serem geralmente tratados com radioterapia, muitas vezes estes exibem uma significativa radioresist?ncia que limita o sucesso do tratamento. Pode-se postular que mudan?as moleculares comuns observadas nestes tumores contribuem para essa resist?ncia. O nucleot?deo ATP ? uma importante mol?cula de sinaliza??o no SNC e um ligante seletivo do receptor purin?rgico P2X7 (P2X7R) em altas concentra??es. Estudos mostram que o P2X7R ? respons?vel pela morte induzida pelo ATP em v?rios tipos de c?lulas, por?m, algumas c?lulas de glioma humano mostram-se resistentes ? morte induzida pelo ATP. Al?m da resist?ncia ao ATP, pacientes com GBM espontaneamente desenvolvem resist?ncia a respostas imunes antitumorais. Estudos levantam a necessidade de uma indu??o ex?gena do sistema imunol?gico a fim de gerar uma resposta antitumoral. A IL-17 ? um citocina pr?-inflamat?ria e seu papel no c?ncer ainda ? desconhecido. O presente trabalho primeiramente objetivou caracterizar uma linhagem de glioma humano radiossens?vel quanto ? sensibilidade ao ATP e investigar se a ativa??o do P2X7R poderia estar envolvida na morte destas c?lulas. Al?m disso, visou elucidar a susceptibilidade do receptor da IL-17 ? radioterapia, bem como, o efeito da IL-17 e uma poss?vel intera??o entre esta citocina e o P2X7R em c?lulas de glioma humano. As linhagens celulares de glioma humano U-138 MG e U-251 MG mostraram-se resistentes ? morte, quando tratadas com ATP (5 mM) ou BzATP (100 ?M), agonista seletivo do P2X7R. Na linhagem de glioma radiossens?vel M059J, o tratamento com alta concentra??o de ATP (5 mM) ou com BzATP (100 ?M), diminuiram significativamente a viabilidade celular (32,4% ? 4,1 e 24,6 ? 4,0%, respectivamente). A linhagem M059J expressou n?veis significativamente maiores do P2X7R quando comparada com as linhagens celulares U-138 MG e U-251 MG (0.40 ? 0.00; 0.28 ? 0.01 e 0.31 ? 0.01, respectivamente) e a irradia??o aumentou a express?o do P2X7R em todas linhagens. Al?m disso, o antagonista seletivo do P2X7R, A740003 (10 μM), diminuiu significativamente a morte celular causada pela irradia??o. Nesta primeira parte do trabalho, fornecemos novas evid?ncias indicando que a linhagem de glioma humano M059J ? sens?vel ao ATP-P2X7R, apontando a relev?ncia do P2X7R na radiossensibilidade do glioma. Na segunda parte deste trabalho, observou-se que o receptor da IL-17 foi significativamente mais expresso ap?s a irradia??o (2 Gy) mostrando uma poss?vel participa??o da via IL-17/R na susceptibilidade ? irradia??o. O tratamento com a IL-17 (10 ng/ml) diminuiu em aproximadamente 62% a viablidade de linhagens celulares U-138 MG e M059J de glioma humano. Outros resultados preliminares mostraram que o antagonista do P2X7R foi capaz de reverter parcialmente a toxicidade causada pela IL-17 nestas linhagens. Nossos dados demonstram um papel antitumoral desta citocina e corroboram com a id?ia de uma poss?vel intera??o entre a IL-17/P2X7R. Este trabalho deixa perspectivas de estudos a serem realizados para melhor compreender a a??o da IL-17 nos gliomas e a intera??o IL-17/P2X7R

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438254.pdf: 475511 bytes, checksum: 55b686575a0c7ed0d039db86576374f6 (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / Ewing?s sarcoma is a highly aggressive tumor of bone and soft tissues. It affects mainly children and young adults. In about 88% to 95% there is the occurrence of a translocation between the EWS gene (22q12 locus) and two members of ETS transcription factors family: FLI1 (11q24 locus) or ERG (21q22). The most common translocation involves gene EWS and FLI1. This translocation leads to the formation of EWS/FLI1chimeric aberrant transcription factor. The EWS/FLI1 regulates the NR0B1 gene promoter through a direct binding to GGAA microsatellites sequences. Our objective was to identify and describe the molecular structure of GGAA motifs in NR0B1 promoter in unrelated Ewing's Sarcoma patients and healthy subjects from South Brazilian population. Were identified 21 different alleles in the 224 subjects. All alleles had at least 4 to 5 consecutive GGAA motifs. The 24.2, corresponding to (GGAA)7A(GGAA)7A(GGAA)10 sequence, was the most frequent in our population, being present in 50.4% of subjects. Allele 24.2 could be associated to Ewing's sarcoma development since it was significantly more frequent among patients. Differences in the global configuration of NR0B1 promoter GGAA microsatellites (size, sequence, amount and position of GGAA repeats and single 'A' base insertions) could result in differences in Ewing's sarcoma susceptibility. These results would provide insights for the understanding of tumorigenesis. / O sarcoma de Ewing ? um tumor altamente agressivo que afeta ossos e tecidos moles. Ele acomete principalmente crian?as e adultos jovens. Em torno de 88% a 95% dos casos verifica-se a ocorr?ncia de uma transloca??o entre o gene EWS (l?cus 22q12) e dois membros da fam?lia do fator de transcri??o ETS: o FLI1 (11q24) ou o ERG (21q22). A transloca??o mais frequente envolve os genes EWS e FLI1. Esta transloca??o leva ? forma??o do fator de transcri??o quim?rico aberrante EWS/FLI1. O fator EWS/FLI1 regula o promotor do gene NR0B1 atrav?s de uma liga??o direta a sequ?ncias de microssat?lites GGAA. Nosso objetivo foi identificar e descrever a estrutura molecular de motivos GGAA no promotor de NR0B1 em pacientes com Sarcoma de Ewing n?o relacionados e n?o afetados da popula??o sul brasileira. Foram identificados 21 alelos diferentes em 224 indiv?duos estudados. Todos os alelos tiveram, pelo menos, de 4 a 5 motivos consecutivos GGAA. O alelo 24.2, correspondente a sequ?ncia (GGAA)7A(GGAA)7A(GGAA)10, foi o mais freq?ente em nossa popula??o, estando presente em 50,4% de todos os indiv?duos. O alelo 24.2 pode estar associado ao desenvolvimento do Sarcoma de Ewing, dado que sua frequ?ncia foi significativamente mais alta entre afetados. Diferen?as na configura??o global dos microssat?lites GGAA no promotor de NR0B1 (em rela??o ? tamanho, sequ?ncia, quantidade e posi??o das repeti??es GGAA e inser??es de base ?nica A ) podem resultar em diferente susceptibilidade ao sarcoma de Ewing. Tais resultados poder?o fornecer subs?dios para uma melhor compreens?o da tumorig?nese.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438584.pdf: 476074 bytes, checksum: 0144120e5040772f4dc29057d0403105 (MD5) Previous issue date: 2011-03-24 / Iron accumulation in the brain has been associated to the pathogenesis of neurodegenerative disorders. We have previously demonstrated that iron overload in the neonatal period results in severe and persistent memory deficits in adult rats. Here, using the animal model of cognitive impairment induced by iron overload we tested the effects of NaBut in ameliorating memory. Rats received vehicle or 10.0 mg/kg Fe+2 orally at postnatal days 12-14. When animals reached the age of 2 months, they received an acute intraperitoneal injection of vehicle or NaBut (1.2 g/kg) immediately after the training session in either novel object recognition or inhibitory avoidance tasks. Retention test sessions were performed 24 hours after training. Animals that received iron in the neonatal period showed severe memory deficits. A single acute injection of NaBut was able to recover memory deficits in iron-treated rats. The results provide evidence that NaBut may be considered for the treatment of cognitive decline associated with neurodegenerative disorders. / O excesso de ferro no enc?falo tem sido relacionado com a patog?nese de diversas doen?as neurodegenerativas, como por exemplo, as doen?as de Alzheimer e de Parkinson. Reconhece-se o per?odo neonatal como cr?tico para o estabelecimento do conte?do normal de ferro no c?rebro adulto, podendo, de forma determinante alterar a distribui??o cerebral deste metal de acordo com o grau de absor??o apresentado. Estudos realizados anteriormente em nosso laborat?rio indicaram que a administra??o de ferro no per?odo neonatal prejudica severamente a mem?ria em ratos adultos. Muitos estudos demonstram que a transcri??o g?nica ? um processo necess?rio para a plasticidade e a consolida??o da mem?ria de longa dura??o. A acetila??o das histonas ocorre nos res?duos lisina, neutralizando sua carga positiva, diminuindo a afinidade entre a prote?na e o DNA, levando o relaxamento da estrutura da cromatina, permitindo o recrutamento da maquinaria transcricional. A deacetila??o das histonas ? um processo revers?vel, que ocorre pela a??o das histonas deacetilases (HDACs), as quais representam a principal via de manipula??o farmacol?gica do epigenoma, com promissores valores terap?uticos. Nos ?ltimos anos ocorreu um aumento no n?mero de estudos sugerindo que o Butirato de s?dio (NaBut), um inibidor espec?fico de HDACs, apresenta um poss?vel potencial como agente terap?utico no tratamento de doen?as neurodegenerativas. No entanto, a caracteriza??o de seus efeitos ? limitada pela falta de estudos utilizando modelos animais adequados que reproduzam aspectos de doen?as neurodegenerativas. Portanto, o objetivo deste estudo foi determinar se os d?ficits de mem?ria induzidos pelo tratamento neonatal com ferro podem ser revertidos pela administra??o de NaBut. Para tanto, ratos machos receberam ve?culo (5% de sorbitol em ?gua) ou ferro (10,0 mg/kg) via oral do 12? ao 14? dia p?s-natal. Ao atingirem a idade adulta, ambos os grupos foram divididos em grupos experimentais que receberam inje??es agudas de NaBut (1,2g/Kg) ou ve?culo por via intraperitoneal, imediatamente ap?s a sess?o de treino nas tarefas de esquiva inibit?ria e reconhecimento do objeto novo. Os resultados mostraram que uma inje??o aguda imediatamente ap?s a sess?o de treino n?o afetou a mem?ria em ratos controles, mas foi capaz de reverter os d?ficits de mem?ria induzidos pelo tratamento neonatal com ferro, tanto na tarefa de reconhecimento de objeto quanto na tarefa de esquiva inibit?ria. A partir dos resultados obtidos nos testes de mem?ria de reconhecimento de objeto, e no teste relacionado ? mem?ria aversiva, a esquiva inibit?ria, podemos sugerir que o NaBut apresenta resposta satisfat?ria como modulador da mem?ria, permitindo-nos inferir sua potencialidade como agente terap?utico para o tratamento dos preju?zos de mem?ria que acompanham muitas doen?as neurodegenerativas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438710.pdf: 388887 bytes, checksum: 75275a00e6033933e4d572bb06d67de4 (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / Population data of seven short tandem repeat loci of the PowerPlex? CS7 were obtained from a sample of 401 individuals from Rio Grande do Sul (Southern Brazil). The loci are the two pentanucleotides STRs in the PowerPlex? 16 (PENTA D and PENTA E), an extra pentanucleotide (PENTA C), and four loci STR in the FFFL Fluorescent STR System (LPL, F13B, FES/FPS, and F13A01). Allele frequency and other forensically relevant statistics data were generated for these seven loci. All of the analyzed loci meet Hardy-Weinberg equilibrium expectations and no linkage disequilibrium were found, except for LPL locus. The observed and expected heterozygosity, power of discrimination and exclusion and polymorphic information content were calculated. The combined power of discrimination and combined power of exclusion were 0.999999987 and 0.998159054, respectively. Genetic distances between population from Rio Grande do Sul and other populations are presented. / Dados populacionais de sete loci Short Tandem Repeat do kit comercial PowerPlex? CS7 foram obtidos a partir de uma amostra de 401 indiv?duos do Rio Grande do Sul (sul do Brasil). Os loci s?o os dois pentanucleot?deos STRs do PowerPlex? 16 (PENTA D e PENTA E), um pentanucleot?deo extra (PENTA C), al?m dos quatro loci STR do kit comercial FFFL Fluorescent STR System (LPL, F13B, FES/FPS e F13A01). As frequ?ncias al?licas e outros dados estat?sticos de relev?ncia forense foram analisados. Todos os loci atenderam ?s expectativas de Hardy-Weinberg e n?o foram encontrados desequil?brios de liga??o, exceto para o locus LPL. A heterozigosidade observada e esperada, o poder de discrimina??o e exclus?o e o conte?do de informa??o polim?rfica foram calculados. O poder combinado de discrimina??o e o poder combinado de exclus?o foram de 0,999999987 e 0,998159054, respectivamente. As dist?ncias gen?ticas entre a popula??o do Rio Grande do Sul e outras popula??es foram apresentadas neste trabalho.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 439217.pdf: 703680 bytes, checksum: 20bc10f7a801c99b27dde05bf2a6dc66 (MD5) Previous issue date: 2012-03-03 / Tuberculosis (TB) remains a leading cause of death worldwide, due to the great adaptability of the bacillus, which can survive in various conditions inside and outside the human host. Previous studies showed evidence that polymorphisms in P2X7 receptor are e associated with increased risk of TB. The present study aimed to analyze the role of purinergic P2X7 receptor in M. tuberculosis infection and host interaction mechanisms in vitro and in vivo. The macrophage murine cell line RAW 264.7 was used for in vitro experiments. . Our results demonstrated that treatment of RAW 264.7 cells with ATP (3 and 5 mM) resulted in a statistically significant reduction of counting colony forming units (CFUs). Male wild-type C57BL/6 (wild-type) and P2X7 receptor KO (P2X7R-/-) mice (25 30 g) were used throughout this study for in vivo. Immunohistochemistry showed that the purinergic P2X7 receptor expression was found significantly augmented in the lungs of mice infected with M. tuberculosis. Furthermore, M. tuberculosis-infected P2X7R-/- mice showed an increase of M. tuberculosis burden in lung tissue, when compared to infected wild type mice. Infected mice showed a marked increase in the spleen weight, in comparison to non-infected animals, indicating the occurrence of splenomegaly. In P2X7R-/- spleens, we observed a significant decrease in the populations of Treg (CD4+Foxp3+), T cells (CD4+, CD8+CD25+ and CD4+CD25+), dendritic cells (CD11c+) and B220+ cells. However, a significant increase in CD11b+ cells was observed in P2X7R-/- mice, when compared to wild-type animals. In the lungs, P2X7R-/- M. tuberculosis-infected mice exhibited pulmonary infiltrates containing an increase of Treg cells (CD4+Foxp3+), T cells (CD4+ and CD8+) and a decrease in the B220+ cells, when compared with wild-type M. tuberculosis-infected mice. The findings observed in the present study provide novel evidence on the role of P2X7 receptors in the pathogenesis and control of tuberculosis. Whether selective agonists or antagonists of this receptor might be useful for improving TB complications remains a matter to be investigated. / A tuberculose (TB) continua sendo uma das principais causas de morte no mundo, devido ? grande capacidade de adapta??o do bacilo que pode sobreviver em diferentes condi??es dentro e fora do hospedeiro humano. Estudos pr?vios mostraram evid?ncias de que polimorfismos no receptor purin?rgico P2X7 est?o associados ao aumento da suscetibilidade ? TB. O presente estudo objetivou analisar o papel do receptor purin?rgico P2X7, na infec??o por M. tuberculosis em camundongos, e os poss?veis mecanismos de intera??o do receptor P2X7 com o hospedeiro, em modelos in vivo e in vitro. Nos experimentos para avalia??o da viabilidade da micobacteria intracelular in vitro foi utilizada a linhagem de macr?fagos murinos, RAW 264.7. Nossos resultados demonstraram que o tratamento das c?lulas RAW 264.7 com ATP (3 e 5 mM) resultou em uma redu??o estatisticamente significativa da contagem de unidades formadoras de col?nias (CFUs). Nos experimentos in vivo foram utilizados camundongos machos C57BL/6 (tipo selvagem) e camundongos knockout para o receptor P2X7 (P2X7R-/-) (25-30 g). Os resultados com imuno-histoqu?mica mostraram que a express?o do receptor purin?rgico P2X7 foi encontrada significativamente aumentada nos pulm?es de camundongos infectados com M. tuberculosis. Al?m disso, camundongos P2X7R-/- infectados com M. tuberculosis mostraram um aumento da carga da micobacteria no tecido pulmonar, quando comparado com camundongos do tipo selvagem infectados. Camundongos infectados mostraram um aumento marcante no peso do ba?o quando comparado com animais n?o infectados, indicando a ocorr?ncia de esplenomegalia. Em ba?os de camundongos P2X7R-/-, observou-se uma diminui??o significativa nas popula??es de Treg (CD4 + Foxp3 +), c?lulas T (CD4 +, CD8 + CD25 + e CD4 + CD25 +), c?lulas dendr?ticas (CD11c +) e c?lulas + B220. No entanto, houve um aumento significativo de c?lulas CD11b + em camundongos P2X7R-/-, quando comparados aos animais do tipo selvagem. Nos pulm?es, camundongos P2X7R-/- infectados com M. tuberculosis apresentaram infiltrado pulmonar contendo um aumento de c?lulas Treg (CD4 + Foxp3 +), c?lulas T (CD4 + e CD8 +) e uma diminui??o nas c?lulas + B220, quando comparado com camundongos do tipo selvagem infectados com M. tuberculosis. Portanto, os resultados observados no presente estudo fornecem novas evid?ncias sobre o papel dos receptores P2X7 na patog?nese e controle da tuberculose. O uso de agonistas ou antagonistas seletivos deste receptor como uma ferramenta terap?utica continua sendo uma quest?o a ser investigada.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 439240.pdf: 319940 bytes, checksum: 78e312c8115e9e5356969e795047faba (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Although Parkinson s Disease (PD) is predominantly a movement disorder, the presence of cognitive problems related to frontal function, even in the earliest stages has been observed. These problems include attentional, executive and memory deficits. A study using an experimental paradigm developed to investigate the effects of different encoding instructions on contextual memory showed that, unlike healthy controls, PD patients could not reverse their contextual memory deficits and take any advantage of encoding instructions. However, it is unclear whether they have a memory deficit or executive dysfunction would be accountable for results. Attentional and executive deficits observed in PD patients have important implications for daily activities, mainly when patient perform concomitant cognitive and motor activities that are attention demanding. Catechol- O-methyltransferase (COMT) is an enzyme that degrades cortical dopamine. Some studies have examined the relationship between the COMT val158met polymorphism and executive function in PD patients and have found low enzyme activity, associated to met/met polymorphism- implying higher prefrontal dopamine levels- is related to worse performance. However, a recent study did not demonstrate a direct effect of COMT genotype on the executive performance. The present study aimed to characterize different cognitive parameters of patients with PD and to assess their relationship with the COMT polymorphism. In this study participated 18 patients with early disease stage PD and 18 healthy adults matched for age, gender and education. Patients were selected from a data bank of patients genotyped for COMT polymorphism. All participants completed the Wisconsin Card Sorting Test (WCST), the Stroop Color and Word Test, and dual tasking paradigm. In addition, patients completed a contextual memory paradigm. No effect of COMT val158met genotype on frontal function in patients with PD (executive function and contextual memory) was observed. A decrease in cognitive task performance under dual-tasking was observed in PD patients, by contrast to healthy controls. Relative dual-task cognitive cost was significantly greater for PD patients compared to controls in the arithmetic-walking condition. In conclusion, difficulties in performing a cognitive task while walking can be influenced by the executive/attentional load of the task. / Embora a Doen?a de Parkinson (DP) seja predominantemente um dist?rbio do movimento, a presen?a de altera??es cognitivas relacionadas ? fun??o frontal tem sido observada mesmo nos est?gios iniciais da doen?a. Estas altera??es incluem d?ficits atencionais, executivos e de mem?ria. Um estudo usando um paradigma experimental desenvolvido para investigar os efeitos de diferentes instru??es codificadoras na mem?ria contextual mostrou que, ao contr?rio dos idosos, pacientes com DP n?o s?o capazes de reverter seus d?ficits de mem?ria e n?o tiram nenhuma vantagem das instru??es codificadoras. Entretanto, ainda n?o est? claro se estes pacientes t?m um d?ficit de mem?ria ou se as disfun??es executivas seriam as respons?veis pelos resultados observados. D?ficits atencionais e executivos observados em pacientes com DP t?m implica??es importantes nas atividades di?rias, principalmente quando o paciente desempenha atividades concomitantes cognitivas e motoras que requerem aten??o. A catecol- O-metiltransferase (COMT) ? uma enzima que degrada a dopamina cortical. Alguns estudos t?m examinado a rela??o entre o polimorfismo val158met da COMT e fun??o executiva em pacientes com DP e t?m observado que a atividade reduzida da enzima, relacionada ao polimorfismo, que implica em maiores n?veis de dopamina no c?rtex pr?-frontal, est? associada a uma pior performance. Entretanto, um estudo recente n?o demonstrou um efeito direto do gen?tipo da COMT no desempenho executivo. O presente estudo teve por objetivo caracterizar diferentes par?metros cognitivos de pacientes com DP e verificar sua rela??o com o polimorfismo da COMT. Neste estudo participaram 18 pacientes em est?gios iniciais da DP e 18 adultos saud?veis, pareados por idade, g?nero e n?vel educacional. Os pacientes foram selecionados de um banco de pacientes genotipados para o polimorfismo da COMT. Todos os participantes completaram o Teste de Classifica??o de Cartas de Wisconsin, o Teste de Stroop e o paradigma para avalia??o da realiza??o de tarefas simult?neas. Adicionalmente, os pacientes com DP completaram o paradigma de mem?ria contextual. N?o foi observado efeito do polimorfismo val158met da COMT sobre a fun??o frontal (fun??o executiva e mem?ria contextual) dos pacientes com DP. Os pacientes apresentaram um decl?nio cognitivo na realiza??o das atividades simult?neas, ao contr?rio dos controles. O custo cognitivo associado ? realiza??o da tarefa aritm?tica juntamente ? caminhada foi significativamente maior para os pacientes com DP, em rela??o aos controles. Em conclus?o, as dificuldades em realizar uma atividade cognitiva e motora simultaneamente podem ser influenciadas pela carga executiva/atencional da atividade.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 442001.pdf: 1823261 bytes, checksum: 10761416aa58c3d7680e6ff4e42ce20f (MD5) Previous issue date: 2012-08-23 / Microcystins (MCs) constitute a family of cyanobacterial toxins, with more than 80 variants. These toxins are able to induce hepatotoxicity in several organisms, mainly through the inhibition of protein phosphatases PP1 and PP2A and oxidative stress generation. Recent evidence shows that MCs can either accumulate in brain or alter behavior patterns of fish species. Thus, this thesis aimed to study the effects of MC-LR (with the variable amino acids leucine (L) and arginine (R)) exposure on biochemical parameters in zebrafish, emphasizing the cholinergic and purinergic signaling, as well as to evaluate the behavioral patterns and whole-body cortisol levels. In vivo studies showed that 100 μg/L MC-LR for 24 h led to a significant increase in the AChE activity (27%) when zebrafish were exposed to the toxin dissolved in water, but did not cause any significant changes when injected intraperitoneally. In addition, semiquantitative RT-PCR analysis demonstrated that 100 μg/L MC-LR exposure also increased ache mRNA levels in zebrafish brain. The in vitro assays did not reveal any significant changes in AChE activity. We also assessed behavioral patterns and whole-body cortisol levels of adult zebrafish exposed to cell culture of the microcystin-producing cyanobacterium Microcystis aeruginosa. MC-LR exposure (100 μg/L) decreased by 63% the distance traveled and increased threefold the immobility time when compared to the control group. Interestingly, no significant alterations in the number of line crossings were found at the same MC-LR concentration and time of exposure. When animals were exposed to 50 and 100 μg/L, MC-LR promoted a significant increase (around 93%) in the time spent in the bottom portion of the tank, suggesting an anxiogenic effect. In addition, the results also showed that none of the MC-LR concentrations tested promoted significant alterations in absolute turn angle, path efficiency, social behavior, or whole-body cortisol level. Moreover, we evaluated the acute effects of different concentrations of MC-LR on NTPDases (nucleoside triphosphate diphosphohydrolases) and 5 - nucleotidase in adult zebrafish (Danio rerio) brain membranes. The results have shown no significant changes in ATP, ADP and AMP hydrolysis in zebrafish brain membranes. MC-LR in vitro also did not alter ATP, ADP and AMP hydrolysis in the concentrations tested. These findings show that acute exposure to MC-LR did not modulate ectonucleotidases activity in the tested conditions. Taken together these findings provide the first evidence that brain AChE is another potential target for MCs and that MC-LR exposure significantly impairs animal's exploratory performance. Nevertheless, further studies including long-time exposure should be performed in order to achieve a better understanding about MCLR toxicity mechanisms in the central nervous system / Microcistinas (MCs) constituem uma fam?lia de toxinas, com mais de 80 variantes. Estas toxinas s?o capazes de induzir hepatotoxicidade em diversos organismos, principalmente atrav?s da inibi??o das fosfatases PP1 e PP2A e gera??o de estresse oxidativo. Evid?ncias recentes mostram que MCs podem acumular no c?rebro e alterar padr?es comportamentais em diferentes esp?cies de peixes. Portanto, a presente tese teve por objetivo estudar os efeitos da exposi??o ? MC-LR (com os amino?cidos vari?veis leucina (L) e arginina (R)) sobre par?metros bioqu?micos em zebrafish, enfatizando os sistemas colin?rgicos e purin?rgicos, bem como, avaliar padr?es comportamentais e n?veis de cortisol corporal. Resultados do estudo in vivo mostraram que a exposi??o a 100 μg/L de MC-LR durante 24 h causaram um aumento significativo na atividade da AChE (27%) quando zebrafish foi exposto ? toxina dissolvida em ?gua; por?m, a toxina n?o causou mudan?as significativas quando injetada intraperitonealmente. Al?m disso, a an?lise semiquantitativa de RT-PCR demonstrou que a exposi??o ? 100 μg/L de MC-LR tamb?m aumentou os n?veis de RNAm da ache em c?rebro de zebrafish. Os ensaios in vitro n?o revelaram nenhuma altera??o significativa na atividade da AChE. N?s tamb?m avaliamos padr?es comportamentais e n?veis de cortisol corporal de zebrafish adultos expostos ? cultura de c?lulas de Microcystis aeruginosa produtoras de MC-LR. A exposi??o ? MC-LR (100 μg/L) diminuiu em 63% a dist?ncia viajada e aumentou tr?s vezes o tempo de imobilidade quando comparado ao grupo controle. Interessantemente, n?o houve altera??o no n?mero de linhas cruzadas na mesma concentra??o e tempo de exposi??o ? MC-LR. Quando animais foram expostos a 50 e 100 μg/L, a MCLR promoveu um aumento significante (aproximadamente 93%) no tempo gasto na por??o inferior do aqu?rio teste, sugerindo um efeito ansiog?nico. Adicionalmente, os resultados tamb?m mostraram que nenhuma das concentra??es de MC-LR testadas promoveu altera??es significativas nas mudan?as de ?ngulo, efici?ncia de rota e intera??o social ou, no n?vel de cortisol corporal total. Al?m disso, tamb?m foi avaliado o efeito de diferentes concentra??es de MC-LR na atividade das NTPDases (nucleos?deo trifosfato difosfoidrolase) e 5 nucleotidase em membranas cerebrais de zebrafish (Danio rerio) adultos. Os resultados mostraram que n?o houve altera??o nas hidr?lises de ATP, ADP e AMP. Nos experimentos in vitro tamb?m n?o houve altera??o nas hidr?lises dos nucleot?deos nas concentra??es testadas. Estes achados mostram que exposi??o aguda ? MC-LR n?o modulou a atividade das ectonucleotidases nas condi??es testadas. Ademais, fornecem a primeira evid?ncia que a AChE cerebral ? um outro alvo potencial das MCs e que exposi??o ? MC-LR prejudica significativamente a performance explorat?ria do animal. Estudos futuros incluindo exposi??o de longo prazo dever ser feitos para um melhor entendimento dos mecanismos de toxicidade das MCs no Sistema Nervoso Central

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 442629.pdf: 4545565 bytes, checksum: 75785599771804ca3f6535bc606e1454 (MD5) Previous issue date: 2012-08-09 / The clinical depression treatment faces serious obstacles as the disease mechanism is not fully elucidated. In addition, there are no effective means to predict and prevent depression as well as any biological method of diagnosis. The use of antidepressants is still the basis of the treatments for depression. Lithium has been used clinically as effective drug to treat all phases of bipolar disorder, including major depression. The Selective serotonin re-uptake inhibitors (SSRIs), such as fluoxetine and citalopram, and Tricyclic antidepressant (TCA) as clomipramine are drugs constantly used for depression treatment. Recent evidence has shown an involvement of adenosine and its receptors in the pathophysiology of depression. ATP can be stored and co-released with other neurotransmitters like serotonin and can be hydrolyzed by a cell-surface enzyme family known as ectonucleotidases. Among these members, we highlight the nucleoside triphosphate diphosphohtdrolases (NTPDases) and ecto-5'-nucleotidase. They are able to control the availability of ligands such as ATP and adenosine to its specific receptors. Adenosine deaminase (ADA) can promote the hydrolytic deamination of adenosine to inosine, modulating the extracellulr levels of this neuromodulator. In cholinergic signaling, after its release, acetylcholine (ACh) promotes the activation of specific muscarinic or nicotinic receptors and thus, it promotes diverse cellular responses. ACh is hydrolyzed by acetylcholinesterase (AChE) in acetate and choline in synaptic cleft. The zebrafish has been used in research behavioral neuroscience and is also a choice model for elucidating the development and function of neuronal circuitry. Considering the cholinergic and purinergic signaling are important participation in the CNS and these neurotransmitter pathways have been identified and characterized in zebrafish, the objective of this study was to evaluate the effect of antidepressants on ectonucleotidases, ADA and ACh activities, which are essential enzymes in the modulation of these signaling pathways in the zebrafish brain. We evaluated the ex vivo effects of fluoxetine (1-10 ?M), clomipramine (1-10 ?M), citalopram (70-300 ?M) on ectonucleotidases and ADA activities. It has been also analyzed the in vitro (1 to 1000 ?M) and ex vivo (1 to 10mg/L) effect of lithium on ectonucleotidases and AChE activities and gene expression. There was a significant inhibition of ADP hydrolysis after ex vivo exposure to lithium at 5 and 10 mg/L, whereas an inhibitory effect was observed for AMP hydrolysis only at 10 mg/L. The same treatment decreased the AChE activity in a concentration of 10mg/L. Lithium did not induce significant changes in the analysis of gene expression patterns in the concentrations tested. In vivo treatment, there were no significant changes inectonucleotidases and AChE activities. Treatment with clomipramine promotes an inhibition ecto-5'-nucleotidase activities at the concentration of 5?M when compared to the control group. For ADA activity, we also observed a significant inhibition in the treatment with clomipramine at concentrations of 5 and 10 ?M in membrane fractions of zebrafish brain. However, treatment with fluoxetine and citalopram did not alter ectonucleotidases and ADA activities in the zebrafish brain. Our findings may contribute to a better understanding of pharmacology of antidepressants and their interaction with the cholinergic and purinergic neurotransmission. / O tratamento cl?nico da depress?o enfrenta s?rios obst?culos j? que o mecanismo da doen?a n?o ? totalmente elucidado. Al?m disso, n?o existem meios eficazes para prever e prevenir a depress?o bem como nenhum m?todo biol?gico de diagn?stico. O uso de f?rmacos antidepressivos ainda ? a base dos tratamentos para depress?o. O l?tio tem sido usado clinicamente como f?rmaco eficaz para tratar todas as fases do transtorno bipolar, incluindo depress?o aguda. Os inibidores seletivos da recapta??o de serotonina (ISRSs), como fluoxetina e citalopram, e os antidepressivos tric?clicos (TCA), como a clomipramina, s?o f?rmacos constantemente utilizados para o tratamento da depress?o. Evid?ncias recentes mostram o envolvimento da adenosina e seus receptores na patofisiologia da depress?o. O ATP pode ser armazenado e co-liberado, juntamente com outros neurotransmissores, como serotonina e noradrenalina, e pode ser hidrolisado at? adenosina por uma fam?lia de enzimas de superf?cie celular, conhecidas como ectonucleotidases. Dentre elas, destacam-se as Nucleos?deo Trifosfato Difosfoidrolases (NTPDases) e a ecto-5?-nucleotidase, capazes de controlar a disponibilidade de ligantes como ATP e adenosina aos seus receptores espec?ficos. A Adenosina desaminase (ADA) pode promover a desamina??o hidrol?tica da adenosina em inosina, modulando os n?veis extracelulares deste neuromodulador. Na sinaliza??o colin?rgica, a acetilcolina (ACh), ap?s liberada, promove a ativa??o de receptores muscar?nicos ou nicot?nicos, e desta maneira a ACh promove diversas respostas celulares. A ACh que permanece na fenda sin?ptica ? hidrolisada pela acetilcolinesterase (AChE) em acetato e colina. O peixe-zebra tem sido utilizado na pesquisa da neuroci?ncia comportamental, sendo tamb?m um modelo de escolha para elucidar o desenvolvimento e a fun??o do circuito neuronal. Considerando que as sinaliza??es purin?rgica e colin?rgica t?m importante participa??o no sistema nervoso central e que essas vias de neurotransmiss?o j? est?o caracterizadas em peixe-zebra, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito de f?rmacos antidepressivos na atividade das ectonucleotidases, ADA e AChE, enzimas essenciais na modula??o destas vias de sinaliza??o em c?rebro de peixe-zebra. Foram avaliados os efeitos ex vivo da fluoxetina (1-10 ?M), clomipramina (1-10 ?M) e citalopram (70-300 ?M) na atividade das ectonucleotidases e ADA. Foi analisado tamb?m o efeito in vitro (1 a 1000 ?M) e ex vivo (1-10mg/L) do l?tio sobre a atividade e express?o g?nica das ectonucleotidases e AChE.A exposi??o ao l?tio inibiu a hidr?lise de ADP nas concentra??es de 5 e 10mg/L e inibiu a hidr?lise de AMP na concentra??o de 10mg/L quando comparado ao grupo controle. Este mesmo tratamento diminuiu a atividade da AChE na concentra??o de 10mg/L.O l?tio n?o induziu altera??es significativas na an?lise do padr?o de express?o g?nica. No tratamento in vitro, n?o foram observadas altera??es na atividade das ectonucleotidases e AChE. O tratamento com a clomipramina mostrou uma inibi??o na atividade da ecto-5?-nucleotidase na concentra??o de 5 ?M quando comparado ao grupo controle. Na atividade da ADA tamb?m observamos uma inibi??o significativa no tratamento com a clomipramina nas concentra??es de 5 e 10 ?M em fra??es de membrana de c?rebro de peixe-zebra. Entretanto, o tratamento com fluoxetina e citalopram n?o alterou a atividade das ectonucleotidases e ADA no c?rebro do peixe-zebra. Nossos resultados podem contribuir para uma melhor compreens?o da farmacologia dos f?rmacos antidepressivos e a sua intera??o com a neurotransmiss?o colin?rgica e purin?rgica.