Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 425497.pdf: 1039069 bytes, checksum: f6309e74e675843d15c679f3c6d18090 (MD5) Previous issue date: 2010-07-05 / Neste estudo foram avaliados os efeitos antifibr?ticos e antiproliferativos do suco total da pimenta vermelha Dedo-de-Mo?a, Capsicum baccatum (CB) e de fra??es da semente e do fruto de CB extra?das com os solventes de diferentes polaridades: ?gua, metanol/?gua, butanol e diclorometano. O estudo foi realizado in vitro, em cultura de c?lulas GRX, uma linhagem murina de c?lulas hep?ticas estreladas, que est?o no est?gio de miofibroblastos, mimetizando um modelo de fibrose hep?tica humana. O suco de pimenta e suas fra??es inibiram a prolifera??o celular da linhagem GRX. Este efeito foi comparado com a indometacina, utilizado como controle positivo da revers?o fenot?pica e conhecido por exercer efeito antiproliferativo e anti-inflamat?rio. Para justificar se o suco total e fra??es de CB provocaram inibi??o do crescimento das c?lulas GRX atrav?s de um mecanismo celular ou por morte celular, foi dosada a libera??o da enzima Lactato Desidrogense (LDH) ap?s o tratamento. Os grupos foram comparados com o controle de morte celular total Tween 5%, que obteve valores significativamente maiores de LDH, demonstrando que o efeito antiproliferativo do suco e fra??es de CB n?o foi atrav?s de morte celular. Al?m disso, na tentativa de verificar se havia aumento do estresse oxidativo, foram dosadas as subst?ncias reativas ao ?cido tiobarbit?rico (TBARS). Nenhum dos grupos tratados diferiu significativamente do controle. Ap?s tratamento com suco total e fra??es de CB durante 5 dias, as culturas celulares foram coradas com Oil Red O, corante que evidencia a presen?a de gordura no citoplasma celular. Tanto as culturas tratadas com o suco total, quanto ?s culturas tratadas com as fra??es de CB, apresentaram forma??o de got?culas de gordura e mudan?a fenot?pica evidente maiores que o controle e que o controle positivo de revers?o do fen?tipo, a indometacina (aumento de 400x). Al?m disso, a quantifica??o do TGF-β, que ? um mediador pr?-fibrog?nico, no sobrenadante das culturas tratadas com suco e fra??es de CB foi menor do quando comparada ao controle. Esses resultados demonstraram os efeitos antifibr?ticos da pimenta vermelha Capsicum baccatum e evidenciam seu importante potencial terap?utico como agente antifibr?tico.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 426212.pdf: 638472 bytes, checksum: ea98899a1819c8c97f6081d821d52bc4 (MD5) Previous issue date: 2010-09-23 / A sepse ? uma s?ndrome complexa ocasionada pela resposta inflamat?ria sist?mica descontrolada do indiv?duo, que representa um grave problema epidemiol?gico em todo mundo. Sendo que, as citocinas inflamat?rias representam o papel central na patog?nese do choque s?ptico. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito de duas drogas, N-acetilciste?na (NAC), um tiol-composto precursor da glutationa e a Frutose-1,6-bisfosfato (FBP), um metab?lito glicol?tico de alta energia, no tratamento da sepse experimental, atrav?s da avalia??o do efeito imunomodulador (in vitro) e efeito terap?utico (in vivo), com o intuito de se obter drogas alternativas para o tratamento do choque s?ptico. O modelo experimental escolhido para o estudo in vitro, foi ? cultura de c?lulas mononucleares do sangue perif?rico isoladas de humanos saud?veis atrav?s de gradiente de centrifuga??o, Os linf?citos T foram estimulados durante 96 h com fitohemaglutinina, sendo utilizadas concentra??es isoladas de NAC nas concentra??es de 1, 5, 10 e 15 mM e associadas ? FBP na concentra??o de 1,25 mM. Os resultados sugerem que tanto a NAC como sua associa??o com a FBP inibem a prolifera??o celular, agindo como potentes agentes na imunomodula??o, sugerindo o uso destas contra doen?as inflamat?rias. Para a experimenta??o in vivo, utilizaram-se ratos Wistar machos, divididos em cinco grupos experimentais: (i) controle normal (n?o induzidos); (ii) controle s?ptico (induzidos com uma c?psula com conte?do fecal n?o est?ril e E. coli (1,5 x 109 C.F.U.); (iii) induzidos e tratados com FBP (500 mg/kg I.P.); (iv) induzidos e tratados com NAC (150 mg/kg I.P.); (v) induzidos e tratados com a associa??o da FBP (500 mg/kg I.P.) com NAC (150 mg/kg I.P.). Na tentativa de se explicar o mecanismo de a??o, principalmente o resultados do grupo s?ptico e tratado com NAC, foram realizadas an?lises hematol?gicas, dosagens bioqu?micas, al?m da verifica??o do estresse oxidativo tecidual. Tamb?m foram realizadas hemoculturas, a fim de se verificar se houve indu??o s?ptica. Nossos resultados sugerem que a NAC impediu a mortalidade dos animais ap?s a indu??o s?ptica. Estes dados comprovam a validade do uso da NAC no tratamento da sepse, possivelmente pela sua propriedade de ser um precursor da glutationa, pela sua capacidade hepatoprotetora e poss?vel prote??o renal. Nossos dados tamb?m demonstram que a a??o sin?rgica com FBP n?o melhora o quadro, esta em parte explicada pelo aumento do TBARS renal e pela diminui??o da glutationa hep?tica.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 426503.pdf: 1716586 bytes, checksum: 85d4033429c9874555c7283407951928 (MD5) Previous issue date: 2010-09-10 / A Tuberculose (TB), causada pelo Mycobacterium tuberculosis, permanece entre as principais causas de morte por doen?as infecto-contagiosas no mundo e estima-se que um ter?o da popula??o mundial esteja infectada. A co-infec??o com o HIV e a emerg?ncia de TB resistente a m?ltiplas drogas representam um desafio a sa?de p?blica e tem estimulado a pesquisa por novos e mais efetivos agentes terap?uticos contra a doen?a. Os nucleot?deos pirimid?nicos s?o mol?culas essenciais em in?meras rea??es bioqu?micas e suas rotas de bioss?ntese s?o indispens?veis a progress?o da TB. Nesse contexto, a prote?na UMP quinase de M. tuberculosis (MtUMPK), que catalisa a fosforila??o de UMP a UDP, ? um alvo promissor para o desenho racional de drogas anti-TB. Neste trabalho ? reportado a clonagem da regi?o codificante do gene pyrH, a express?o da prote?na recombinante em E. coli e a purifica??o da enzima. Al?m disso, confirmaram-se a identidade e a atividade biol?gica da MtUMPK. Cromatografia de exclus?o por tamanho indicou que a prote?na ? um tetr?mero em solu??o e estudos cin?ticos revelam um comportamento alost?rico, sugerindo que a MtUMPK participa na regula??o de s?ntese de purinas versus pirimidinas. Experimentos atrav?s da t?cnica de calorimetria de titula??o isot?rmica (ITC) revelaram que o mecanismo cin?tico para os substratos ? sequencial ordenado, onde a mol?cula de ATP liga-se na enzima livre, seguido da liga??o do UMP, e que a libera??o dos produtos ADP e UDP ocorre de forma aleat?ria.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 427653.pdf: 2414896 bytes, checksum: d0dff31a4951859f81e62225da52e018 (MD5) Previous issue date: 2010-10-08 / Os transportadores de drogas s?o cada vez mais reconhecidos como importantes na disposi??o das drogas e na resposta terap?utica. A P-glicoprote?na ? um transportador, codificado pelo gene humano MDR1 (ABCB1), de grande relev?ncia cl?nica, pois apresenta ampla especificidade de substrato, incluindo uma variedade de drogas com diferentes estruturas atualmente em uso cl?nico. Efavirenz ? substrato para a glicoprote?na-P e ? metabolizado pelo Citocromo P- 450 (CYP) 2B6. No presente estudo, foi investigada, de forma prospectiva, a influ?ncia do gen?tipo para os diferentes polimorfismos do MDR1 (1236C>T, 2677G>T, 3435C>T) sobre a resposta imunol?gica e virol?gica ao tratamento de pacientes infectados pelo HIV, sem tratamento pr?vio. O gen?tipo MDR1 foi analisado em 81 pacientes do Centro Municipal de Atendimento ? Sorologia (CEMAS), em Santa Cruz do Sul (RS, Brasil), que iniciaram terapia antiretroviral entre 2009 e 2010. Os dados foram obtidos ao in?cio do tratamento e nas semanas 12 e 24 ap?s o in?cio da terapia. Os gen?tipos MDR1 de cada indiv?duo foram determinados com a utiliza??o de rea??o em cadeia da polimerase, seguida de an?lise dos fragmentos de restri??o (PCR-RFLP). Durante as primeiras semanas de terapia antiretroviral, o padr?o de diminui??o da carga viral foi similar para todos os pacientes ap?s 12 e 24 semanas de tratamento com Efavirenz. A redu??o da carga viral em 12 e 24 semanas n?o se mostrou associada aos gen?tipos dos polimorfismos 1236C>T, 2677G>T e 3435C>T do gene MDR1. O padr?o do aumento das c?lulas T CD4+ foi similar para todos os pacientes ap?s 12 e 24 semanas de tratamento com Efavirenz. O aumento no n?mero de c?lulas T CD4+ foi significativamente associado ? presen?a do alelo 3435T, sendo mais elevado nos homozigotos 3435TT, intermedi?rio em 3435CT e menos elevado em 3435CC em contrapartida, n?o se mostrou associado aos gen?tipos dos polimorfismos 1236C>T e 2677G>T do gene MDR1. A resposta individual ao tratamento antiretroviral ? um fen?meno complexo que ? influenciado por um grande n?mero de vari?veis biol?gicas. Novos estudos sobre o papel dos polimorfismos do transportador MDR1 e enzimas envolvidas no metabolismo de drogas s?o necess?rios para elucidar o papel dos efeitos farmacogen?ticos na terap?utica para o HIV.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 430781.pdf: 5344417 bytes, checksum: ac9d8005af7e08aa4f34ebcea8bacac1 (MD5) Previous issue date: 2011-01-25 / O objetivo deste estudo foi determinar o papel da Frutose-1,6-bisfosfato na modula??o do processo inflamat?rio na sepse induzida por C. albicans, na express?o de COX-2, IL-6 e NF-Kappa B e na produ??o de NO e express?o de iNOS em macr?fagos. Um modelo de sepse intratraqueal foi realizado em camundongos CF-1 utilizando cepas de C. albicans sens?veis e resistentes ao fluconazol. FBP(500mg/kg) foi administrada aos animais no momento no momento da indu??o no grupo Sepse+FBP. Cinco a seis animais de cada grupo foram mortos 24h, 5dias e 10 dias ap?s a indu??o de sepse. O sangue foi coletado para a realiza??o do perfil hematol?gico completo e para o ensaio das citocinas (IL-6 e MCP-1). O restante dos animais foram utilizados para dados de mortalidade. A fim de determinar o poss?vel efeito anti-inflamat?rio da FBP, uma s?rie de transfec??es utilizando promotores dos genes COX-2, IL-6 e NF-Kappa B foram realizados em c?lulas RAW. A produ??o de NO em macr?fagos e a express?o de iNOS em RAW tamb?m foi realizada. Investigamos ainda as regi?es do promotor do gene da COX-2 que realizam a media??o dos efeitos do zymosan. Transfec??es transientes com uma s?rie de contru??es com muta??es na regi?o promotora da COX-2 foram realizadas para elucidar os efeitos do zymosan na transcri??o da COX-2. A mortalidade diminuiu significativamente nos animais que receberam FBP ap?s indu??o no grupo C. albicans sens?vel ao fluconazol. As citocinas e os ?ndices hematol?gicos foram similares ao grupo sepse, com exce??o da contagem de plaquetas. A FBP previne significativamente o decr?scimo do n?mero de plaquetas. A FBP parece n?o atuar na transcri??o de COX-2, IL-6 e NF-Kappa B. A FBP reduziu os n?veis de NO no lavado bronco-alveolar atrav?s da inibi??o da express?o de iNOS. A exposi??o ao zymosan (50μg/ml por 24h) marcadamente aumenta a atividade relativa de luciferase em macr?fagos RAW transfectados com o promotor da COX-2. Dele??es nos s?tios de liga??o C/EBP e NF-Kappa B resultam em um importante decr?scimo na atividade do gene rep?rter e uma dele??o no s?tio NF-Kappa B e C/EBP com muta??es nos s?tios CRE e/ou AP-1 anula a atividade da COX-2 induzida por zymosan.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431140.pdf: 1654374 bytes, checksum: 1465b8ac4be5cfbe78bdaa126071ddf5 (MD5) Previous issue date: 2011-04-01 / A enzima guanosina monofosfato (GMP) redutase catalisa a deamina??o redutiva do GMP ? inosina monofosfato (IMP). GMP redutase possui um papel importante na convers?o dos nucleos?deos e nucleot?deos derivados de guanina a nucleot?deos de adenina. Al?m desse fato, como parte da via de salvamento de purinas, tamb?m participa da reutiliza??o de bases livres intracelulares. Nesse trabalho, mostramos a clonagem, a express?o e a purifica??o da GMP redutase codificada pelo gene guaC de Escherichia coli a fim de determinar seu mecanismo cin?tico; bem como as caracter?sticas qu?micas e termodin?micas da rea??o catalisada. Estudos de velocidade inicial e titula??o de calorimetria isot?rmica demonstraram que a GMP redutase possui um mecanismo cin?tico bi-bi ordenado, no qual o GMP liga primeiro ? enzima, seguido pela liga??o do NADPH; o NADP+ se dissocia primeiro, seguido pela libera??o do IMP. A titula??o calorim?trica tamb?m mostrou que a liga??o do GMP e IMP s?o processos termodinamicamente favor?veis. Perfis de pH demonstraram grupos com valores de pK aparentes de 6,6 e 9,6 envolvidos na cat?lise, valores de pK de 7,1 e 8,6 importantes para liga??o do GMP e um valor de pK de 6,4 importante para liga??o do NADPH. Efeito isot?pico prim?rio demonstrou que a transfer?ncia do hidreto contribui para a etapa limitante da rea??o, enquanto que os efeitos isot?picos do solvente prov?m de um ?nico local de protona??o que possui um papel modesto na cat?lise. Efeito isot?pico m?ltiplo sugere que as etapas de protona??o e transfer?ncia do hidreto ocorrem no mesmo estado de transi??o, fornecendo evid?ncia de um mecanismo concerted. Os dados de cin?tica em estado pr?-estacion?rio indicam que a libera??o do produto n?o contribui para a etapa limitante da rea??o catalisada pela GMP redutase de E. coli. Em conjunto, os resultados mostram que a rea??o catalisada pela GMP redutase segue um mecanismo sequencial e ordenado, onde a transfer?ncia do hidreto e do pr?ton ocorrem no mesmo estado de transi??o. Os resultados aqui apresentados foram os primeiros a evidenciar o mecanismo cin?tico da GMP redutase, bem como, os res?duos fundamentais para cat?lise e/ou liga??o, al?m de fornecer informa??es sobre o estado de transi??o da rea??o

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431138.pdf: 1089028 bytes, checksum: b3d0bb2ab98885aab405ecc4329e3335 (MD5) Previous issue date: 2011-03-10 / Entre as doen?as infecciosas, a tuberculose se destaca, como sendo a principal causa de morte humana, principalmente em pa?ses em desenvolvimento. Entre os alvos identificados no genoma de Mycobacterium tuberculosis, as enzimas da via do chiquimato merecem aten??o especial, pois s?o essenciais para a sobreviv?ncia dos microorganismos e ausente em mam?feros. O objeto do nosso estudo ? a quinta enzima desta via, a Chiquimato Quinase (SK). Foram aplicados m?todos de virtual screening, a fim de identificar novos potenciais inibidores para esta enzima. Neste trabalho n?s empregamos o programa MOLDOCK em todas as simula??es de docking molecular. A precis?o do docking enzima-ligante foi validada em um conjunto de 12 complexos de SK- ligante, para aquelas estruturas cristalogr?ficas que estavam dispon?veis, gerando um RMSD abaixo de 2,0 ?. A aplica??o deste protocolo em um banco de dados comercialmente dispon?vel permitiu a identifica??o de novas mol?culas com potencial para se tornar drogas contra tuberculose. Al?m disso, foram identificados os res?duos da cavidade de liga??o que s?o essenciais para as intera??es intermoleculares desta enzima

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431141.pdf: 13187681 bytes, checksum: 1ec3202d47e45648161456f90fa14a9e (MD5) Previous issue date: 2011-03-23 / Resveratrol ? um polifenol de ocorr?ncia natural amplamente estudado na preven??o de doen?as associadas ao envelhecimento. Foi caracterizado por aumentar a longevidade em organismos menores e em roedores obesos, mecanismos relacionados a modula??o de sirtu?na 1. Desta forma, foi comparado e apresentado como um importante composto mimetizador de restri??o cal?rica, ?nica interven??o n?o gen?tica conhecida por aumentar a longevidade. Sirtu?nas compreendem uma fam?lia de enzimas NAD+ dependentes que t?m como alvo prote?nas histonas e n?o histonas, regulando uma s?rie de eventos celulares relacionados ao metabolismo. Apesar do resveratrol ter sido apresentado por modular SIRT1, este mecanismo parece ser muito mais complexo e n?o est? completamente elucidado. Neste estudo, n?s investigamos o perfil de transcri??o de SIRT1, SIRT3 e SIRT4 e genes alvos relacionados a estas enzimas, PGC1α, PPARγ e NAMPT, modulados por resveratrol, em um modelo sem inj?ria e estress; e na presen?a de um agente estressor, neste caso o etanol e; ap?s restri??o cal?rica. Para o estudo, foi utilizado zebrafish adulto tipo selvagem, por ser um modelo experimental consolidado, por?m pouco explorado quanto ao mecanismo de sirtuinas, do composto resveratrol e restri??o cal?rica. Para an?lise transcricional foi utilizado a t?cnica de RT-PCR semiquantitativo. Para determina??o do estado de acetila??o H3 lys9 foi utilizado a t?cnica de Western Blotting. As express?es de mRNA foram analisadas em f?gado de zebrafish ap?s exposi??o a diferentes tempos e concentra??es de resveratrol, etanol e, tamb?m no m?sculo, ap?s restri??o cal?rica. Em nosso modelo experimental nem o resveratrol, nem a restri??o cal?rica modularam a express?o de SIRT; por?m, n?s observamos que ambas interven??es apresentaram perfil similar na transcri??o de SIRT3 e SIRT4, diminuindo os n?veis de mRNA no f?gado. N?s sugerimos que o composto pode exercer efeitos ben?ficos similar a RC por modula??o de outras sirtu?nas que n?o SIRT1 e, estas devem ser melhor exploradas. Ainda, n?s demonstramos que resveratrol modula a express?o de sirtu?nas e outros genes analisados como NAMPT, em um modelo sem inj?ria, e esta modula??o deve ser compreendida a n?veis fisiol?gicos uma vez que o composto vem sendo utilizado como composto nutrac?utico por indiv?duos saud?veis. Etanol, aqui utilizado como um agente estressor, n?o causou dano hep?tico, principalmente nos animais que receberam tratamento cr?nico. Por?m, foi poss?vel observar que resveratrol e etanol apresentaram padr?o diferente no perfil de express?o g?nica e acetila??o de prote?na e, que a associa??o dos dois compostos reverteu aos n?veis pr?ximos do controle estas altera??es. Estes resultados consolidam o zebrafish como modelo experimental a ser utilizado na compreens?o da modula??o de sirtu?nas modulado por resveratrol e restri??o cal?rica

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431172.pdf: 1194899 bytes, checksum: 952b6d1718311a7687aedbe05f823d2b (MD5) Previous issue date: 2010-09-23 / O peixe zebra ? um dos modelos vertebrados mais importantes para estudos de gen?tica, biologia do desenvolvimento, neurofisiologia e biomedicina, sendo utilizado como um modelo de doen?as humanas e para triagem de novas drogas, tais como f?rmacos para o tratamento da doen?a de Alzheimer. A doen?a de Alzheimer ? uma doen?a neurodegenerativa que se caracteriza pela deposi??o de placas amil?ides, desenvolvimento de emaranhados de neurofibrilas, inflama??o e perda neuronal em diversas partes do c?rebro que contribuem para os d?ficits cognitivos caracter?sticos da doen?a. O sistema colin?rgico, o principal sistema envolvido nesta doen?a, apresenta a acetilcolina (ACh) como neurotransmissor e est? fortemente relacionado ? processos de aprendizado e forma??o da mem?ria. Al?m do sistema colin?rgico, outros sistemas, como o sistema purin?rgico, est?o envolvidos na patologia da doen?a de Alzheimer. Os nucleos?deos e nucleot?deos derivados de purinas exercem um papel de mol?culas sinalizadoras extracelulares em v?rios tecidos, atrav?s dos receptores purin?rgicos. O ATP tem seus n?veis extracelulares controlados por enzimas da fam?lia das ectonucleotidases, entre elas as ectonucleos?deo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases) e a ecto-5?-nucleotidase, que realizam a degrada??o de nucleot?deos p?ricos at? adenosina, um nucleos?deo neuromodulador da homeostase celular. Os polifen?is, os quais s?o compostos derivados de plantas, podem atuar como moduladores da sinaliza??o purin?rgica e colin?rgica, al?m de apresentarem efeitos antioxidantes, com aus?ncia de efeitos colaterais severos, apresentando um grande potencial como tratamento para a doen?a de Alzheimer. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o potencial neuroprotetor dos polifen?is quercetina e rutina na preven??o dos d?ficits cognitivos causados pela escopolamina, um antagonista colin?rgico muito utilizado para testes de novos f?rmacos facilitadores da capacidade cognitiva, bem como seus efeitos sobre as enzimas respons?veis pela modula??o dos n?veis dos neurotransmissores ATP e acetilcolina. Os resultados obtidos demonstram que a administra??o intraperitonial de quercetina ou rutina (50 mg/kg) em peixe zebra previniu o d?ficit cognitivo causado pela exposi??o ? escopolamina (200 μM), como demonstrado pelo aumento da lat?ncia para cruzar para o lado escuro do aparato da tarefa de esquiva inibit?ria. A exposi??o a estes compostos n?o promoveu altera??es na locomo??o dos animais. Al?m disso, foi observado que o tratamento com rutina seguido de exposi??o ? ?gua inibiu a hidr?lise de acetilcolina enquanto que o tratamento com rutina seguido pela exposi??o ? escopolamina diminuiu a hidr?lise de ATP. Com rela??o aos efeitos da quercetina, esta inibiu a hidr?lise de AMP quando sua administra??o foi seguida pela exposi??o ? ?gua ou escopolamina. Portanto, estes resultados demonstram que os polifen?is podem apresentar potencial protetor com rela??o ao preju?zo cognitivo induzido pela escopolamina. Al?m disso, nossos resultados demonstram que rutina e quercetina per se s?o capazes de modular os n?veis de acetilcolina, ATP e adenosina em enc?falo de peixe zebra. Estes resultados s?o promissores em rela??o ? possibilidade de terapia preventiva a ser realizada ao longo da vida, visando a n?o ocorr?ncia de decl?nio cognitivo associado ao envelhecimento

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431159.pdf: 8354772 bytes, checksum: 8abf5160038abef327a3d35aa522175e (MD5) Previous issue date: 2011-03-25 / A tuberculose ? uma doen?a infecciosa cr?nica, causada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis, e requer novas iniciativas urgentes para o seu tratamento e cura em decorr?ncia do surgimento de cepas resistentes a drogas, sua abrang?ncia global, e o significativo aumento de pessoas infectadas entre pacientes imunodeprimidos; al?m do grande n?mero de pessoas infectadas com a forma latente da tuberculose, que atuam como reservat?rio da doen?a. As enzimas que constituem as vias de metabolismo de nucleot?deos s?o alvos promissores para o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento da tuberculose, tanto na sua forma ativa quanto latente. A enzima orotato fosforibosiltransferase (OPRT), pertencente ? via de s?ntese de novo de nucleot?deos de pirimidina, catalisa a transfer?ncia revers?vel do grupamento fosforibosil da mol?cula de 5 -fosfo-?-Dribose 1 -difosfato (PRPP) para o ?cido or?tico (OA), formando orotidina 5 - monofosfato (OMP), mol?cula precursora dos demais nucleot?deo de pirimidina. Este trabalho descreve a clonagem, amplifica??o e caracteriza??o do produto do gene pyrE de M. tuberculosis H37Rv como uma enzima OPRT funcional; a determina??o de suas constantes cin?ticas aparentes e verdadeiras para as rea??es direta e inversa; ensaio de inibi??o pelos produtos; e a determina??o do mecanismo cin?tico da rea??o como sendo Mono-Iso Ordenado Bi Bi, mecanismo que at? ent?o n?o havia sido descrito para uma enzima pertencente ? fam?lia das fosforibosiltransferases do tipo I. As constantes termodin?micas e o perfil de discrimina??o termodin?mica permitiram a identifica??o dos modos de intera??o dos substratos naturais da enzima com seu s?tio de liga??o. A caracteriza??o da rea??o catalisada pela enzima OPRT micobacteriana ? uma etapa essencial para o desenvolvimento de novas drogas de a??o espec?fica que permitam o melhor controle da tuberculose. Os dados resultantes da caracteriza??o da enzima foram utilizados como ponto de partida para o planejamento, sele??o e teste de inibidores seletivos contra a OPRT de M. tuberculosis. Um composto inicial, com valores de na faixa de concentra??o de nanomolar, foi identificado como potencial composto l?der, sendo submetido a diferentes protocolos de derivatiza?ao qu?mica, permitindo a obten??o de uma mol?cula derivada com valores de constantes inibit?rias e perfil de discrimina??o termodin?mica aprimorados. Estes dois compostos foram caracterizados como inibidores competitivos e incompetitivos em rela??o aos substratos naturais da OPRT, OA e PRPP, respectivamente; onde o conhecimento do singular mecanismo cin?tico de rea??o da enzima de M. tuberculosis foi utilizado para o planejamento de mol?culas capazes de formar um complexo tern?rio n?o catal?tico ( ? ? ), inibindo a s?ntese de nucleot?deos de pirimidina e sequestrando mol?culas de PRPP do meio celular, afetando ainda, outros processos metab?licos essenciais. Os resultados deste trabalho colaboram ainda para uma melhor compreens?o do metabolismo de nucleot?deos de micobact?rias e fornecem informa??es relevantes para o avan?o do desenvolvimento de inibidores de a??o seletiva sobre alvos moleculares espec?ficos para o tratamento e profilaxia da tuberculose