Orientador: Jaime Amaya-Farfan / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-05T16:53:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_VeraSoniaNunesda_D.pdf: 1659294 bytes, checksum: b94c247266521ad928f9d47c78675c8e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: As fibras alimentares são entendidas como carboidratos ou substâncias poliméricas afins em alimentos que não sendo digeridas nem absorvidas no intestino superior, possuem vários efeitos fisiológicos e bioquímicos no intestino baixo e no restante do organismo, incluindo a modulação da população microbiótica, alterações na dinâmica dos fluídos fisiológicos, produção de diversos tipos de nutrientes, caracterizando-se como componente essencial da alimentação. A primeira fase deste trabalho teve como objetivo avaliar in vitro o efeito bifidogênico da mucilagem extraída da farinha da polpa do quiabo (Hibiscus esculentus, L.), como controle do crescimento de Lactobacillus acidophilus La-5, foi utilizado o meio de cultura MRS (Man, Rogosa, Sharpe), e para a cultura de Bifidobacterium lactis Bb-12, o MRS enriquecido com L-cisteína denominado MRS modificado (MRSm). A segunda fase consistiu de um estudo comparativo dos efeitos ocorridos em ratos da linhagem Wistar, recém-desmamados (RD) com os que consumiam dietas AIN-93G, tendo como fontes de fibras: celulose (CC), inulina (CI) e a polpa de quiabo liofilizada (EQ). Nesse ensaio biológico foi avaliado o impacto da fibra na ingestão alimentar, trânsito intestinal, excreta fecal e morfologia intestinal, assim como os conteúdos: estomacal, cecal, colônico e do intestino delgado. Foram determinadas também as concentrações dos ácidos biliares fecais, a produção de ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) e lactato no ceco e cólon. Adicionalmente foi estudado o impacto que esta fibra poderia exercer sobre o metabolismo da glicose em ratos diabéticos. Os resultados do ensaio in vitro, mostraram que a mucilagem na concentração de 1,0%, promoveu aumento expressivo do número de células, de 17,57% para Lactobacillus acidophilus, e de 70% para Bifidobacterium lactis Bb-12, em relação ao controle de crescimento MRS e MRSm, respectivamente. As análises microbiológicas aos 28 dias de alimentação demonstraram que a população de lactobacilos do grupo EQ foi superior em 0,680 log ufc/g de fezes, em relação ao RD. E aos 14 dias a população de bifidobactérias no grupo EQ foi superior em 0,382 log ufc/g de fezes, em relação ao CIA soma dos níveis de acetato, lactato, propionato e butirato colônico foram superiores para o grupo EQ quando comparados aos grupos CC e CI, indicando efeito positivo na produção destes ácidos orgânicos pela fibra do quiabo. A morfologia intestinal mostrou ser independente do tipo de fibra utilizado na dieta. Os níveis de ácidos biliares secundários foram excretados em maiores quantidades pelo grupo EQ, estes resultados associados ao menor tempo de trânsito intestinal resultaram em menor tempo de permanência destes metabólitos toxicogênicos no lúmem. No ensaio de indução de diabetes pela estreptozotocina, em ratos diabéticos alimentados com polpa de quiabo (EQD) a taxa de insulina foi superior aos ratos diabéticos alimentados com inulina (CID) e celulose (CCD). As reservas de gorduras epididimárias do grupo EQD foram menores em relação aos CCD e CID (P<0,05), sendo que o fator positivo para o grupo EQD foi ter apresentado menor perda de peso corporal, menor consumo de água e menor excreção urinária. Diante destes resultados, foi possível verificar um efeito global positivo associado ao consumo da fibra de quiabo pelo rato, sugerindo que o consumo do quiabo como parte integral da dieta poderá proporcionar efeitos fisiológicos benéficos ao individuo / Abstract: Dietary fiber is understood as any polymer normally occurring in foods, generally of carbohydrate nature, that is not digested and absorbed in the upper digestive tract and that is responsible for various physiological and biochemical effects in the lower gastrointestinal tract and the rest of the body, including alteration of the distribution of the bowel microbiota, improvement of physiological fluid dynamics, the production of some micronutrients, and which can be considered as essential components the human diet. This work consists of two sections. The first section consisted of an in vitro study of the bifidogenic effects of the mucilage extracted from okra (Hibiscus esculentus, L.). The second section was an in vivo study with Wistar rats just weaned, as initial group (IG), compared with fed with standard (AIN-93G) diets, formulated utilizing as source of dietary fiber: cellulose control (group CC), inulin control (IC) and okra experimental (OE), estimating such parameters as feed uptake, fecal output, transit time, GI tissue mass, and the stomach, cecal, fecal and small intestine contents. Additionally the impact of the fiber on the concentration of bile acids, gut morphology, short chain fatty acid (SCFA) and lactate production in cecum and colon and the fiber effect on the metabolism in streptozotocin induced diabetic rats were also studied. The results of the in vitro assay showed that mucilage concentration by 1% mucilage resulted in a substantial rise in cell counts, 17.57% Lactobacillus acidophilus and 70% Bifidobacterium lactis Bb-12, when compared to the MRS and MRSm medium, respectively. Microbiological analyses of the assay showed that the lactobacillus in the experimental OE group on the 28th day was over 0.680 log cfu/g of feces larger when compared to the IG. On the 14th day, the levels of bifidobacteria in the group OE were higher by 0.382 log ufc/g of feces than in the IC group. The results suggested there was a selective stimulation of the lactobacillus and bifidobacteria populations in the OE group. Meanwhile, the OE diet elicited higher levels of short chain fatty acids (SCFA) and lactate in cecum and colon as opposed to the IC and CC groups, showing that the okra fiber stimulates intestinal organic acid production. The intestinal morphology showed independent of the type of fiber. The amounts of secondary bile acids (lithocholic and deoxicholic) were excreted more by OE group. This results associated the lesser transit time, results time lesser this toxigenic metabolic at lumen. With regard to the induction of diabetes by streptozotocin, diabetic rats feeding with okra (OED) the serum insulin was biggest when compared than diabetic rats feeding inulin (ICD) and cellulose (CCD). These results confirm that in the diabetics rats of OED the insulin production was bigger, maybe the fiber of okra had protector effects in these animals. The epididymal fats and kidney was smaller than CCD and ICD, although the OED showed the lowest body weight loss. These results showed that the okra mucilage was beneficial to the rat when introduced in the diet, suggesting that this fiber may exhibit similar effects in human beings / Doutorado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Doutor em Alimentos e Nutrição

Acute pancreatitis is an inflammatory process that initiates with the damage of the pancreatic acinar cells and can also involve other organs and peripancreatic tissues. Vascular alterations are proposed as factors that contribute significantly to the morbidity of patients with pancreatitis. However, few studies were directed to understand these alterations and the underlying mechanisms. In this way, the objective of this study was to investigate vascular changes caused by acute pancreatitis induced by common bile duct obstruction (CBDO) on the vascular reactivity of rat mesenteric artery, in order to generate scientific knowledge about the mechanisms involved in this condition and enable future approaches that lead to a better treatment of this disease in humans. For this purpose, adult male Wistar rats were used (220-300 g) and divided into two groups: (i) sham animals, which were submitted to surgery procedure without obstruction of the duct and (ii) CBDO animals which were submitted to surgery procedure and obstruction of the common bile duct. After 24 or 48 h of this surgery, animals were anesthetized and the superior mesenteric artery was removed. Serum samples were also obtained for amylase determination. Mesentery artery rings were obtained (1-2 mm) and used for in vitro reactivity experiments and measurement of nitric oxide (NO) and superoxide anion (O2 -). For the reactivity experiments, the rings were mounted in isolated organ chambers and cumulative concentration-response curves to acetylcholine or phenylephrine were obtained. For evaluating the production of NO and O2 -, rings were incubated with specific fluorescent dyes. Levels of serum amylase were augmented in animals with CBDO after 24 (p<0.05) or 48 h (p<0.001) of obstruction, when compared with sham group, confirming the induction of pancreatitis. Mesenteric rings from CBDO animals showed decreased relaxing response for acetylcholine or contractile response to phenylephrine after 24 or 48 h of induction of pancreatitis, when compared with sham group. Our data also showed an increase in NO (p<0,05) and O2 - (p<0,05) production in the rings collected after 48 h of the surgical procedure, but not after 24 h. These findings showed that acute pancreatitis induction by CBDO impaired relaxation and contractile response, possibly by mechanisms that are triggered by increased NO and O2 - production, probably associated with the inflammatory process. Additional studies are needed to identify the mechanisms underlying these vascular effects of acute pancreatitis. / A pancreatite aguda é um processo inflamatório que se desenvolve a partir de lesão dos ácinos pancreáticos e também pode envolver tecidos peripancreáticos e outros órgãos. Alterações na função vascular são propostas como fatores que contribuem sobremaneira para a morbidade dos pacientes com pancreatite, entretanto poucos estudos foram direcionados para entender estas alterações e os mecanismos subjacentes. Com base nessas premissas, o objetivo do presente estudo foi investigar as alterações vasculares provocadas pela pancreatite aguda induzida por obstrução do ducto biliopancreático (ODBP) sobre a reatividade de artéria mesentérica de ratos, com o intuito de gerar conhecimento científico sobre os mecanismos envolvidos nesta condição e permitir abordagens futuras que levem ao melhor tratamento desta doença em humanos. Para tanto, foram utilizados ratos machos adultos Wistar (220-300 g) que foram divididos em grupos falso operado (Sham), no qual somente houve a cirurgia, sem obstrução do ducto, ou ODBP, o qual foi submetido a cirurgia e obstrução do ducto biliopancreático. Em seguida, os animais dos diferentes grupos foram eutanasiados após 24 ou 48 h e a artéria mesentérica superior foi removida, bem como soro foi separado para dosagem de amilase. Desta artéria foram obtidos anéis com endotélio (1-2 mm) que foram utilizados para a realização dos experimentos de reatividade in vitro e mensuração de óxido nítrico (NO) e ânion superóxido (O2 -). Para os experimentos de reatividade, os anéis foram montados em sistema de banho de órgão isolado e foi testada sua resposta relaxante ou contrátil, mediante estimulação com acetilcolina (ACh) ou fenilefrina (Fen) respectivamente. Para avaliar a produção de NO e O2 -nos anéis dos animais dos diferentes grupos, foram utilizadas sondas fluorescentes específicas para estes radicais livres. Nos animais com ODBP foram encontradas concentrações séricas de amilase elevadas após 24 (p<0,05) ou 48 h (p<0,001), quando comparados ao grupo sham, confirmando a indução da pancreatite. Os anéis dos animais com ODBP demonstraram uma diminuição da resposta relaxante à acetilcolina ou contrátil à fenilefrina após 24 ou 48 h da indução da pancreatite, quando comparados aos animais do grupo sham. Também foi observado aumento na produção de NO (p<0,05) e de O2 - (p<0,05) nos anéis coletados após 48 h, mas não 24 h da indução da pancreatite. Estes achados mostraram que a indução da pancreatite aguda por ODBP prejudica tanto a resposta relaxante quanto a contrátil de anéis de artéria mesentérica, por mecanismos que possivelmente são desencadeados pelo aumento na produção de NO e O2 -, provavelmente associado com o processo inflamatório. Entretanto, experimentos adicionais são necessários para identificar os mecanismos pelos quais a pancreatite aguda causa estes efeitos.

Orientador: Flavia Maria Netto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-09T02:23:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tiengo_Andrea_M.pdf: 1037181 bytes, checksum: fa41390046e1fd743ebaf166db3e45ec (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O amaranto vem se destacando como uma excelente fonte alternativa ou complementar de proteínas alimentares devido à sua composição balanceada em aminoácidos essenciais. A cultura do amaranto (Amaranthus cruentus BR Alegria) vem sendo introduzida no Brasil por sua ótima qualidade nutricional, alto teor de proteínas e melhor valor biológico que a de cereais, e funcional, além de características agronômicas de adaptabilidade. Apesar de o amaranto ter sido bem caracterizado quimicamente e apresentar componentes relacionados a diferentes atividades bioquímicas com potencial fisiológico, pouco se conhece sobre seu potencial funcional. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade inibidora da enzima conversora da angiotensina (ECA) e a capacidade ligante de ácidos biliares (AB) da farinha desengordurada de amaranto e seus produtos. Farinha integral foi obtida pela moagem do grão de Amaranthus cruentus (variedade BR Alegria) e tratada com hexano para obtenção da farinha desengordura (FDA), utilizada para a produção do concentrado protéico de amaranto (CPA). Para obtenção de hidrolisados protéicos, CPA, sem e com tratamento térmico prévio (90°C/ 30 minutos), foi hidrolisado com a enzima Alcalase, até atingir 12% de grau de hidrólise (GH). As farinhas e seus produtos derivados foram caracterizados quanto à composição e perfis eletroforético e cromatográfico de suas proteínas. A digestão in vitro das proteínas também foi avaliada e o material digerido utilizado para avaliação da atividade inibidora da ECA. A farinha integral de amaranto e seus derivados apresentaram composição semelhante à encontrada na literatura. O tratamento térmico prévio do CPA não alterou o padrão de atividade das enzimas utilizadas, pois o perfil eletroforético e cromatográfico (fase reversa e exclusão molecular) mostraram-se semelhantes. Todos os hidrolisados protéicos e digeridos apresentaram capacidade de inibir a ECA in vitro. No entanto, os digeridos do CPA sem e com tratamento térmico prévio (DCPAst e DCPAtt respectivamente) apresentaram menor atividade inibidora da ECA (IC50 de 0,439 mg proteína/mL e 0,475 mg proteína/mL respectivamente) que os hidrolisados com Alcalase tanto antes (HPAst e HPAtt) como após a digestão in vitro (DHPAst e DHPAtt) que apresentaram IC50 0,118 a 0,176 mg de proteína/mL. Estes resultados sugerem que, in vivo, a ingestão da proteína de amaranto intacta pode apresentar menor atividade inibidora da ECA quando comparada à ingestão da proteína previamente hidrolisada com Alcalase. A digestão in vitro não alterou a atividade inibitória da ECA dos hidrolisados, sugerindo que os peptídeos inibidores da ECA liberados pela ação da Alcalase foram resistentes à hidrólise gastrintestinal. A capacidade ligante de ácidos biliares dos produtos de amaranto (FDA, CPA, HPAst e resíduo alcalino ¿ RA - obtido da extração do CPA) e da colestiramina (utilizada como controle positivo), foi diferente em função do ácido biliar estudado (ácidos cólico, taurocólico, glicocólico e deoxicólico). A colestiramina apresentou a maior atividade ligante para todos os AB testados, diferindo-se de todas as amostras (p<0,05). O RA, mais rico em fibras (8,6%), apresentou a menor atividade ligante para os AB testados, com exceção do ácido glicocólico, que os demais produtos. A FDA apresentou atividade ligante intermediária para todos os AB, porém semelhante à do CPA com o ácido deoxicólico e do HPAst com o ácido taurocólico, que apresentaram as maiores atividades. A FDA e CPA apresentaram capacidade ligante de ácidos biliares secundários tóxicos à mucosa intestinal. A partir dos resultados obtidos não foi possível afirmar se foram as proteínas, as fibras ou eventualmente outro componente não avaliado, o principal responsável por esta atividade. Com a comprovação das atividades inibidora da ECA e ligante de ácidos biliares in vitro, sugere-se a realização de estudos in vivo, sendo o experimento in vivo um método mais confiável para avaliar a atividade biológica das proteínas de amaranto e demais componentes / Abstract: Amaranth has been highlighted as an excellent alternative or complementary source of food protein due to its balanced amino acid composition. The culture of amaranth has been introduced into Brazil on account of its optimum nutritional (high protein content and better biological quality than that of cereal protein) and functional quality, apart from its agricultural characteristics and adaptability. Although amaranth has been well characterised chemically and present components related to different biochemical activities with physiological potential, little is known about its functional potential. The objective of the present work was to evaluate the inhibitory activity of the angiotensin converting enzyme (ACE) and the capacity to bind with the bile acids (BA) of defatted amaranth flour and its products. Whole flour was obtained by grinding the Amaranthus cruentus grain (BR Alegria variety), and treating with hexane to obtain the defatted flour (ADF), used to produce the amaranth protein concentrate (APC). To obtain the protein hydrolysates, APC, with and without prior heat treatment (90ºC/ 30 minutes), was hydrolysed using the enzyme Alcalase to a 12% degree of hydrolysis (DH). The flours and their derived products were characterised with respect to the electrophoretic and chromatographic compositions and profiles of their proteins. The in vitro digestibility of the proteins was also evaluated and the digested material used to determine the ACE inhibitory activity. The whole amaranth flour and its derivatives presented a composition similar to that found in the literature, and the prior heat treatment of the APC did not alter the activity pattern of the enzymes used, since the electrophoretic and chromatographic profiles (reverse phase and molecular exclusion) were shown to be similar. All the protein hydrolysates, before and after digestion, showed in vitro ACE inhibitory capacity. However, the digested APC, with or without prior heat treatment (DAPCnt and DAPCht, respectively) presented less ACE inhibitory activity (IC50 of 0,439 mg protein/mL and 0,475 mg protein/mL, respectively) than the Alcalase hydrolysates both before (APHnt and APHtt) and after in vitro digestion (DAPHnt and DAPHtt), which presented IC50 values of from 0,118 to 0,176 mg protein/mL. These results suggest that, in vivo, the ingestion of intact amaranth protein could present less ACE inhibitory activity than when ingesting protein previously hydrolysed with Alcalase. In vitro digestion did not change the ACE inhibitory activity of the hydrolysates, suggesting that the ACE inhibitory peptides liberated by the action of Alcalase were resistant to gastro-intestinal hydrolysis. The bile acid binding capacity of the amaranth products (ADF, APC, APHnt and the alkaline residue ¿ AR ¿ obtained from the extraction of APC) and of cholestyramine (used as the positive control), varied as a function of the bile acid studied (cholic, taurocholic, glycocholic and deoxycholic acids). The cholestyramine showed greater binding activity with all the BAs tested, differing from all the samples (p<0,05). The fibre-rich (8,6%) AR presented the least binding activity with all the BAs tested, as compared to the other products, with the exception of with glycocholic acid. The ADF presented intermediate binding activity with all the BAs, which was nevertheless similar to that of APC with glycocholic acid and of APHnt with taurocholic acid, which presented the highest activities. The ADF and APC presented binding capacity with the secondary bile acids toxic to the intestinal mucous membrane. From the results obtained, it was not possible to affirm if it was the proteins, fibres or even some other non-evaluated component, that was responsible for this activity. Having proven the ACE inhibitory and bile acid binding activities in vitro, it is important to also carry out in vivo studies, since the in vivo experiment is a more reliable method to evaluate the biological activity of the amaranth proteins and their other components / Mestrado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Mestre em Alimentos e Nutrição

Estudos recentes estimam que a maioria das estenoses benignas é de natureza iatrogênica podendo ser evitada. A incidência de lesões graves dos ductos biliares durante a colecistectomia é de aproximadamente 1/300 a 1/500 procedimentos (0,2 a 0,3%). Estas lesões podem resultar em coleperitôneo, fístula biliar, estenose de via biliar ou associação dessas complicações. O objetivo deste trabalho foi de relatar os casos de lesões de vias biliares tratados no Serviço de Cirurgia da Faculdade de Medicina da Universidade Federal de Goiás. Foram estudados retrospectivamente 31 pacientes, de 1990 a 2002, com diagnóstico de lesões de vias biliares pós colecistectomia. 29 pacientes (93,5%) eram do sexo feminino e 2 (6,5%) eram do sexo masculino. A idade variou de 21 a 80 anos com média de 46,6 anos. Pacientes provenientes da capital do Estado de Goiás eram em número de 12 (38,7%) enquanto 19 (61,2%) eram provenientes de outras regiões do país. A colecistectomia foi realizada eletivamente em 24 pacientes (77,4%) enquanto em 7 pacientes (22,5%) foi realizada cirurgia de urgência. A via de acesso através de incisão subcostal foi empregada em 70,9% dos pacientes e a via longitudinal (mediana e paramediana direita) em 29,1%. As principais manifestações clínicas foram icterícia em 87,9% dos pacientes, fístula biliocutânea em 29%, peritonite em 29,0%, colangite em 29% e sepse em 6,4% dos pacientes. A Colangiografia Retrógrada Endoscópica foi o exame mais empregado para o diagnóstico da lesão de via biliar. As lesões dos ductos biliares foram classificadas segundo a classificação proposta por Strasberg. Aproximadamente metade (54,8%) das lesões de vias biliares foram classificadas como Strasberg E3 e E4. A técnica cirúrgica mais utilizada para o tratamento das lesões de vias biliares foi a Hepaticojejunoanastomose, com alça jejunal exclusa em Y de Roux, em 20 (64,5%) pacientes. Os 4 óbitos foram em lesões totais proximais. As lesões parciais evoluíram melhor a longo prazo / Recent studies have estimated that most of the benign biliary stenosis are iatrogenic in nature, and can thus be prevent. The incidence of severe injury to the biliary ducts during a cholecystectomy is of approximately 1/300 to 1/500 procedures (0.2-0.3%). These lesions can result in choleperitoneum, biliary fistula, stenosis of the biliary tract or an association of these complications. The objective of this paper was to report on biliary tract injuries treated at the Surgical Unit of the School of Medicine of the Federal University of Goias. Thirty-one patients with a diagnosis of biliary tract lesions, post cholecistectomy, were studied, retrospectively, from 1990 to 2002. Twenty-nine individuals (93.5%) were female, and two (6.4%), males. Their age ranged from 21 to 80 years (average of 46.6 years).Twelve (38.7%) individuals came from the capital of State of Goias and 19 (61.2%), from other regions. Cholecystectomy was performed as an elective procedure in 24 (77.4%) patients, and 7 (22.5%) underwent emergency surgery. A subcostal incision was used in 70.9% of the cases, while the longitudinal approach was used in 29.1%. The main clinical manifestations were jaundice in 87.9%, cutaneous fistula in 29%, peritonitis in 29%, cholangitis in 29% and sepsis in 6.4% of the patients. The Endoscopic Retrograde Cholangiography was the diagnostic test most frequently ordered. Biliary duct injuries were classified according to the criteria proposed by Strasberg. Aproximately half (54.8%) of the injuries were classified as Strasberg E3 and E4. The most common surgical technique used in the treatment of this condition was a Roux-en-Y hepaticojejunostomy in twenty (64.5%). Four patients with proximal injuries died. Long term followup disclosed better results with partial injuries

Introdução: O acesso biliar ecoguiado é um método de drenagem alternativo à drenagem percutânea transhepática (DPTH) e à cirurgia em pacientes com obstrução biliar distal incurável que falharam drenagem por Colangiopancreatografia Endoscópica Retrógrada (CPRE). Nos casos em que a drenagem ecoguiada anterógrada transpapilar (ou transanastomótica) e o rendez-vous ecoguiado não podem ser realizados como primeira opção, a coledocoduodenostomia (CDT) e a hepaticogastrostomia (HPG) ainda podem ser realizadas em pacientes selecionados. Estas duas vias de drenagem não anatômicas criam uma fístula entra a via biliar e o estômago ou duodeno. Não há dados na literatura que determinem superioridade de uma ou outra técnica. Objetivo: Comparar o sucesso técnico, sucesso clínico e fatores associados entre as duas vias de drenagem em pacientes com obstrução da via biliar distal maligna incurável que não lograram sucesso na drenagem por CPRE ou rendez-vous ecoguiado. Métodos: Entre abril de 2010 e dezembro de 2013, 49 pacientes com obstrução biliar distal maligna incurável que falharam CPRE e rendez-vous ecoguiado foram randomizados para CDT ou HPG. Dados referentes ao sucesso técnico, sucesso clínico, tempo de procedimento, complicações, qualidade de vida e sobrevida foram coletados até três meses após o procedimento. Todos os procedimentos foram realizados em um centro terciário de endoscopia pelo mesmo endoscopista. Próteses biliares parcialmente recobertas (Boston Scientific, Wallflex, 10 mm, 8 cm ou 6 cm) foram utilizadas em todos os pacientes com sucesso técnico. Nos casos de HPG a punção ecoguiada foi intra-hepática no ducto hepático esquerdo. Nos casos de CDT a punção foi extra-hepática no segmento distal não obstruído do colédoco. Após a punção foi realizada colangiografia com introdução de um fio guia hidrofílico de 0,035 polegada. Dilatação com cateter e um dispositivo de needle knife foi realizada para permitir introdução do sistema de disparo da prótese biliar com 8,5 Fr. Resultados: Quarenta e nove procedimentos foram realizados (25 HPG e 24 CDT). Todos os pacientes tinham dilatação da via biliar intra e extra-hepática. A taxa de sucesso técnico foi de 96 % para HPG e de 91% para CDT (p = 0,609). A taxa de sucesso clínico foi de 91% para o grupo HPG e de 77% para o grupo CDT (p = 0,234). No grupo da HPG 5 pacientes (20%) tiveram complicações (3 sangramentos, 2 biliomas e uma bacteremia). No grupo da CDT 3 pacientes (12,5%) tiveram complicações (1 bilioma, 1 sangramento e 1 perfuração). Somente o caso da perfuração necessitou tratamento cirúrgico. As outras complicações foram tratadas clinicamente. O tempo de procedimento médio foi de 47,83 min para a HPG e de 48,88 min para a CDT (p = 0,843). Conclusão: O presente estudo não demonstrou diferença estatisticamente significante em relação ao sucesso técnico, sucesso clínico, complicações e tempo de procedimento entre os dois grupos estudados. Mais estudos são necessários para elucidar o papel de cada via de drenagem / Background: EUS-guided biliary access is an alternative for percutaneous access or surgery in patients with malignant unresectable distal biliary obstruction and failed ERCP. When rendezvous or anterograde transpapillary/transanastomotic intervention fails as primary drainage options, a Choledochoduodenostomy (CDT) or a Hepaticogastrostomy (HGT) can still be performed in selected patients. This procedure creates a new \" \" y I w one route or the other should be recommended. Aim: To compare technical and clinical success and possible associated factors between the two different drainage routes CDT and HGT in patients with distal unresectable malignant biliary obstruction that failed standard ERCP and EUS-guided rendez vouz (RV) maneuver. Methods: Between April/2010 and December/2013 49 consecutive jaundiced patients with distal unresectable malignant biliary obstruction that failed previous ERCP and EUS-guided RV maneuver were elected randomly to undergo either EUS-guided CDT or HGT. Data including indications, clinical and technical success, procedural times and complications with a three-month follow-up were prospectively collected in a database. All procedures were performed in a tertiary center by the same endoscopist. A partially covered SEMS (Boston Scientific, Wallflex, 10 mm, 8 cm or 6 cm) was used in all technically successful procedures. After puncture of left hepatic duct in case of HGT or the distal unobstructed segment of common bile duct in case of CDT a cholangiogram was obtained followed by advancement of a 0,035-inch guide wire into the biliary system. Bougies and wire-guided needle-knife were used to perform track dilation to allow passage of an 8.5 Fr stent delivery system. Results: Forty-nine cases (25 HGT and 24 CDT) were performed. All patients had intra and extra hepatic biliary dilation. Technical success rate was 96 % for HGT and 91% for CDT (p = 0.609). Clinical success rate was 91% for HPG and 77% for CDT (p = 0.234). In the HGT group five patients (20%) had complications (3 bleeding, 2 bilomas and 1 bacteremia). In the CDT group 3 patients (12.5%) had complications (1 biloma, 1 bleeding and 1 perforation). Only the perforation patient required surgery. All other complications were managed clinically. The median procedural time was 47.83 min for HGT and 48.88 min for CDT (p = 0.843). Conclusion: No significant difference was found in regards to technical or clinical success, complications and procedure time between the two drainage routes. More studies are needed to clarify situations in which the CDT or the HGT should be advocated

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-12T13:37:04Z No. of bitstreams: 1 pedroluizrodriguesguedes.pdf: 3448334 bytes, checksum: 3bac263ee478fd60c02c5d6036a0e81e (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-12T15:44:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pedroluizrodriguesguedes.pdf: 3448334 bytes, checksum: 3bac263ee478fd60c02c5d6036a0e81e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T15:44:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pedroluizrodriguesguedes.pdf: 3448334 bytes, checksum: 3bac263ee478fd60c02c5d6036a0e81e (MD5) Previous issue date: 2013-07-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Condroitim sulfato (CS) é um glicosaminoglicano (GAG), presente na matriz extracelular (MEC) de vários tecidos de mamíferos, utilizado para o tratamento da osteoartrite e, recentemente, tem despertado grande interesse devido ao seu potencial anti-inflamatório. Vários modelos experimentais in vivo de inflamação são empregados para o estudo da atividade anti-inflamatória, entre eles o modelo de fibrose induzida por colestase extra-hepática. A colestase produz lesão hepatocelular com edema do trato portal, infiltrado leucocitário, proliferação de células epiteliais biliares e fibrose do trato portal. O objetivo deste trabalho foi analisar os efeitos do CS no modelo de colestase extra-hepática emperimental induzido por laqueadura do ducto biliar (BDL) em ratos Wistar. Para isso foram utilizados animais (n = 82) de 6 a 8 semanas de idade eutanasiados 2, 7 ou 14 dias após o procedimento cirúrgico divididos nos grupos: BDL, BDL tratado com CS, Sham e Sham tratado com CS. Foram avaliados peso corporal e do fígado dos animais, concentrações séricas de bilirrubina direta (BD), globulinas, atividades de gama glutamil transpeptidase (Gama GT), fosfatase alcalina (FA), alanina transaminase (ALT) e aspartato transaminase (AST), alterações morfológicas no tecido, atividade de mieloperoxidase (MPO), atividade de metaloproteases (MMP-9, MMP-2 e pró MMP-2) e conteúdo de GAGs no fígado dos animais, além da análise histopatológica do tecido hepático. O CS obtido para a realização do trabalho apresentou teores superiores a 92%, com peso molecular de aproximadamente 40 kDa e um conteúdo dissacarídico com predominância de Δdi4S (65%). BDL gerou vários sintomas relacionados à lesão celular e ao processo inflamatório como aumento dos níveis séricos de BD e globulinas, aumento das atividades de Gama GT, FA, ALT e AST, infiltrado inflamatório e modificação morfométrica, com proliferação ductular, e na MEC do fígado dos animais induzidos. CS levou a redução do aumento inicial das transaminases indicando proteção dos tecidos lesados no procedimento cirúrgico. O tratamento levou à redução do infiltrado inflamatório no tecido, expresso pela diminuição significativa da atividade de MPO no homogenato. A remodelação tecidual também foi reduzida, havendo diminuição da atividade de MMP-9, pró MMP-2 e MMP-2 e ainda dos níveis dos GAGs dermatam sulfato e heparam sulfato presentes, produzidos por células estreladas em resposta ao dano no tecido. Estes resultados mostram que o CS reduziu os efeitos da lesão hepática do modelo e foi capaz de retardar a fibrogênese hepática. / Chondroitin sulfate (CS) is a glycosaminoglycan (GAG) present in the extracellular matrix (ECM) of many mammalian tissue, used for osteoarthritis treatment and, recently, has aroused great interest due to its anti-inflammatory potential. Several in vivo inflammation experimental models are employed to study anti-inflammatory activity, including extra-hepatic cholestasis induced fibrosis. Cholestasis produces hepatocellular injury with portal tract edema, leukocyte infiltration, biliary epithelial cells proliferation and portal tract fibrosis. The aim of this work was to analyze CS effects on an extra-hepatic cholestasis experimental model induced by bile duct ligation (BDL) on Wistar rats. For this purpose 6 to 8 weeks old animals (n = 82) were euthanized 2, 7 or 14 days after surgical procedure, previously divided into groups: BDL, CS treated BDL, Sham, CS treated Sham. To analyze disease evolution body and liver weight, serum concentrations of direct bilirubin (BD), globulins, activities of gamma glutamyl transferase (Gama GT), alkaline phosphatase (FA), alanine and aspartate aminotransferases (ALT and AST), morphological changes on tissue, mieloperoxidase (MPO) activity, matrix metalloproteinases (MMP-9, pró MMP-2 and MMP-2) activities and liver GAGs content, besides histopathological analysis of the tissue. CS acquired presented over 92% tenor, molecular weight of approximately 40 kDa and disaccharide content of Δdi4S predominantly (65%).BDL caused many symptoms related to cellular damage and inflammatory process such as increasing BD and globulins, elevation of Gama GT, FA, ALT and AST activities, inflammatory infiltrate and changes on liver morphometry, with ductular proliferation, and on the ECM. CS reduced initial burst on aminotransferases, indicating protection of tissues injured on surgery procedure. Treatment led to reduction of inflammatory infiltrate, showed by significant decreasing on MPO activity. Tissue remodeling was also reduced, with decrease of MMP-9, pro MMP-2 and MMP-2 activities and also of GAGs dermatam sulfate and heparam sulfate levels, produced by hepatic stellate cells in response of tissue damage. These results show that CS reduced cholestasis hepatic injury effects, being capable to slow down liver fibrogenesis.

La cholestase intrahépatique représente environ 40% des lésions hépatiques induites par les médicaments et se caractérise par une accumulation intracellulaire des acides biliaires (AB). Les mécanismes impliqués sont encore mal connus et sa prédiction reste difficile. Le but de ce travail était de caractériser dans la cholestase d’origine médicamenteuse et de développer des méthodes de screening pour sa prédiction précoce, en utilisant la lignée humaine hépatique HepaRG et les hépatocytes humains. Tout d’abord, nous avons démontré que la motilité des canalicules biliaires (CB) est indispensable à la clairance des AB et requiert une alternance de phosphorylation/déphosphorylation de la chaine légère de la myosine (MLC), contrôlé par la voie Rho-kinase/Myosin Light Chain Kinase (ROCK/MLCK). Nous avons ensuite montré pour la première fois que les médicaments cholestatiques altèrent la voie ROCK/MLCK/MLC et la dynamique des CB. En utilisant la famille des antibiotiques résistant à la pénicillinase, dont fait partie la flucloxacilline, responsable de nombreux cas de cholestase, nous avons observé que la dérégulation de ROCK pouvait se faire par activation de HSP27, associée aux voies de signalisation PKC/P38 et PI3K/AKT. Enfin, nous avons montré une capacité variable des médicaments cholestatiques à moduler les profils des AB. En effet, les médicaments cholestatiques majeurs induisent une accumulation préférentielle des AB hydrophobes toxiques, in vitro, dans les premières 24h, qui résulte d’une inhibition de leur amidation. Au total, l’ensemble du travail a permis de progresser dans la compréhension des mécanismes impliqués dans la cholestase d’origine médicamenteuse et de mettre en évidence de nouveaux biomarqueurs utiles pour sa prédiction. / Intrahepatic cholestasis represents around 40% of drug-induced liver injuries and is characterized by intracellular accumulation of bile acids (BA); mechanisms involved and its accurate prediction remains challenging. The aim of the current work was to characterize the mechanisms involved in drug-induced cholestasis and to develop screening methods for its early prediction, using human differentiated HepaRG and primary human hepatocytes. First, we demonstrated that bile canaliculi (BC) motility is essential for BA clearance and requires alternating phosphorylation/dephosphorylation of myosin light chain (MLC) that is controlled by the Rho-kinase/Myosin Light Chain Kinase (ROCK/MLCK) signaling pathway. Then, we showed, for the first time that cholestatic drugs could alter the ROCK/MLCK/MLC pathway and BC dynamics. Using the penicillinase-resistant antibiotics family, including flucloxacillin that is responsible for many cases of cholestasis, we found that deregulation of ROCK could be modulated by HSP27, associated with PKC/P38 and PI3K/AKT signaling pathways. Finally, we evidenced variable potency of cholestatic drugs to modulate BA profiles. Indeed, the well-known cholestatic drugs induced a preferential accumulation of unconjugated toxic hydrophobic BA in vitro within the first 24h that resulted from inhibition of their amidation. Altogether, these data bring new information on the understanding of the mechanisms involved in drug-induced cholestasis and highlight new morphological and molecular predictive biomarkers of drug-induced cholestasis.

La cholestase intrahépatique est une manifestation fréquente des lésions hépatiques induites par les médicaments; Cependant, les mécanismes impliqués sont peu connus. Nous avons cherché à étudier les mécanismes de la cholestase induite par les médicaments afin d’améliorer sa détection précoce en utilisant les cellules HepaRG humaines. Tout d'abord, nous avons prouvé que les canalicules biliaires (BC) subissaient des contractions spontanées, essentielles pour l'efflux d’acides biliaires et nécessitaient des séries d’alternance dans la phosphorylation/déphosphorylation de la chaîne légère de myosine (MLC2). La courte exposition à des composés cholestatiques a révélé que la modulation des BC était associée à des perturbations de la voie de signalisation ROCK/MLCK. Afin de confirmer notre étude, 12 médicaments cholestatiques et six non cholestatiques ont été analysés et nous avons démontré que tous les médicaments cholestatiques classés sur la base de résultats cliniques provoquaient des perturbations dans la dynamique des BC (dilatation ou constriction), et altéraient la voie de signalisation ROCK/MLCK, tandis que les composés non cholestatiques n'avaient pas d'effet. Nous avons également prouvé que ces changements étaient plus spécifiques que la mesure de l'inhibition de l’efflux comme marqueurs prédictifs non cliniques de la cholestase induite par les médicaments. Afin de confirmer et d’étendre ces conclusions, nous avons analysé les mécanismes impliqués dans les effets cytotoxiques et cholestatiques induits par 4 médicaments de la famille des antagonistes des récepteurs de l'endothéline: deux ayant un lien avec des cas cliniques d'hépatotoxicité (sitaxentan) et/ou cholestase (bosentan), et deux n’ayant pas été impliqués dans l’élévation de transaminases hépatiques ou de bilirubine (ambrisentan et macitentan). Les résultats montrent que le macitentan récemment commercialisé et ayant une structure chimique similaire à celle du bosentan, était capable de causer, comme ce dernier, des altérations in vitro des BC. En revanche, l'ambrisentan n’était pas hépatotoxique et le sitaxentan qui a été retiré du marché pour des cas d’hépatotoxicité, n’affectait pas la dynamique canaliculaire. / Intrahepatic cholestasis represents a frequent manifestation of drug-induced liver injuries; however, the mechanisms involved in such injuries are poorly understood. We aimed to investigate mechanisms underlying drug-induced cholestasis and improve its early detection using human HepaRG cells. First, we proved that bile canaliculi (BC) underwent spontaneous contractions, which are essential for bile acid efflux and required alternations in myosin light chain (MLC2) phosphorylation/dephosphorylation. A short exposure to cholestatic compounds revealed that BC dynamics was altered and associated with impairment of the ROCK/MLCK pathway. Then, in order to confirm our study, 12 cholestatic drugs and six noncholestatic drugs were analyzed and we demonstrated that all cholestatic drugs classified on the basis of reported clinical findings caused disturbances of both BC dynamics (dilatation or constriction), and alteration of the ROCK/MLCK signaling pathway, whereas noncholestatic compounds had no effect. We also proved that these changes were more specific than efflux inhibition measurements alone as predictive nonclinical markers of drug-induced cholestasis. To confirm and extend these conclusions, we analyzed the mechanisms involved in cytotoxic and cholestatic effects induced by the 4 main drugs from the endothelin receptor antagonists family: two related to clinical cases of hepatotoxicity (sitaxentan) and/or cholestasis (bosentan), and two that have not been reported to cause elevation of liver transaminases or bilirubin (ambrisentan and macitentan). The results showed that like bosentan, the structurally similar recently marketed drug, macitentan, could cause in vitro major BC alterations. By contrast, ambrisentan appeared as a safe drug and sitaxentan that has been withdrawn from the market for hepatotoxic cases, did not impair BC dynamics.

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Bile acid-based cation sensors involving through space photo-induced electron transfer (PET) processes have been synthesized. In this approach, appropriate known fluorophores and aza crown ether receptor units were attached on a suitable bile acid scaffold. A through space photo induced electron transfer from N-atom of the aza 18-crown-6 to the excited pyrene was responsible for quenching of the pyrene fluorescence. A fluorescence enhancement was observed with the addition of K+ due to the inhibition of fluorescence quenching by PET mechanism. In order check the relationship between the sensitivity and the molecular structure of the sensors, four different molecules with different geometries were synthesized. The changes in the fluorescence spectra for different sensors were recorded in MeOH. The binding constants calculated by curve fitting showed that while the binding constants did not significantly vary, the sensitivities were different depending on the structure of the sensors. The modular nature of the sensor design was verified by changing the receptor module from aza-18-crown-6 to aza-15-crown-5, keeping other parts of the sensor same, to prepare a sodium selective sensor using the same principle. Fluorescence titration in MeOH confirmed the Na+ selective sensing in the presence of K+. The modular design concept was further extended by replacing the fluorophore pyrene to a coumarin derivative. Coumarin sensors showed a behavior similar to that of the pyrene sensors. In order to check the possibility of sensing metal ions in water, non ionic surfactant, Triton X-100 was chosen to dissolve the sensor in water. Fluorescence titration of the sensors showed a desired selective fluorescence enhancement with the particular metal ions. Merrifield resin and water swellable Tentagel® was used to immobilize the sensor to fabricate reusable sensor beads for detecting the metal ions in non polar solvent and water respectively. Fluorescence enhancements of the sensor beads with the metal ions confirmed the process in the immobilized solid state. K+ and Na+ selective sensor beads successfully demonstrated the fluorescence enhancement with the respective cations. This general strategy can be extended to fabricate other sensors for practical uses.