Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-28Bitstream added on 2014-06-13T18:55:58Z : No. of bitstreams: 1 pitangui_ns_me_arafcf.pdf: 11259600 bytes, checksum: 17b255999c9caee5aaf2d3e40ea94a70 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Histoplasma capsulatum var. capsulatum é um fungo dimórfico que causa a histoplasmose, uma micose respiratória e sistêmica. H. capsulatum é primariamente adquirido após a exposição ao aerosol, pela inalação de microconídeos ou fragmentos de hifas. A evolução da doença respiratória depende da capacidade da levedura de Histoplasma em sobreviver e se replicar dentro dos macrófagos alveolares. Neste contexto, é conhecido que a adesão às células do hospedeiro constitui o primeiro passo para a colonização e é essencial para o estabelecimento da infecção. Em vista disso, alguns microrganismos aderem às superfícies biológicas e não biológicas formando biofilmes. Biofilmes são comunidades dinâmicas de microrganismos, que aderidos às superfícies, produzem uma matriz exopolimérica e essa formação representa um estado que permite que as células microbianas sobrevivam em ambientes hostis e dispersem para colonizar novos nichos. Com base na importância potencial de biofilmes para sua sobrevivência no hospedeiro humano e na natureza, este trabalho foi desenvolvido para investigar pela primeira vez a formação de biofilme por H. capsulatum correlacionando com sua capacidade em aderir às células epiteliais, bem como definir particularidades da interação entre macrófagos e H. capsulatum, incluindo análise de fragmentação nuclear pelo ensaio do cometa e TUNEL. Os ensaios foram realizados in vitro com duas cepas clínicas de H. capsulatum, uma isolada no México e a outra no Brasil. Além disso, foi realizada análise proteômica diferencial do fungo em biofilme e sob a condição planctônica. Os resultados mostraram que H. capsulatum é capaz de formar biofilmes e ambos os isolados selecionados tem uma alta capacidade em aderir aos pneumócitos (A549). Através de análise proteômica, o isolado EH-315 exibiu diferentes perfis protéicos, com aproximadamente... / Histoplasma capsulatum var. capsulatum is a dimorphic fungus that causes histoplasmosis, a respiratory and systemic mycosis. H. capsulatum is primarily acquired after exposure to the aerosol, by microconideas or hyphal fragments inhalation. The development of a respiratory disease depends on the ability of Histoplasma yeast to survive and replicate within alveolar macrophages. In this context, it is known that the adhesion to host cells is the first step in the colonization and is essential for the establishment of the infection. As a result, some microorganisms adhere to biological and non-biological surfaces producing biofilms. Biofilms are dynamic communities of microorganisms that adhere to surfaces producing an exopolimeric matrix, and this formation is a state that allows microbial cells to survive in hostile environments and to disperse to colonize new niches. Based on the potential importance of biofilms to survive in the human host and in nature, this study was performed to investigate, for the first time, the biofilm formation by H. capsulatum correlating with their ability to adhere to epithelial cells, as well as defining features of the interaction between macrophages and H. capsulatum, including analysis of nuclear fragmentation by comet assay. In addition, we performed differential proteomic analysis of the fungus in biofilm and under planktonic conditions. The results demonstrated that H. capsulatum is able to form biofilms and both selected isolates have a high ability to adhere to pneumocytes (A549). Through proteomic analysis, the EH-315 isolate exhibited different protein profiles, with approximately 250 proteins exclusively expressed in the biofilm format and others with different levels of expression when compared to the fungus in planktonic growth. The sequencing by MALDI-TOF/TOF revealed that most proteins are nuclear or are involved in the metabolism... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-25Bitstream added on 2014-06-13T19:55:47Z : No. of bitstreams: 1 silva_bl_me_botib.pdf: 198846 bytes, checksum: ff23adb2c290d1b6ce0ce5d4e1ddfa11 (MD5) / Os alimentos minimamente processados surgiram como uma interessante alternativa para o consumidor que procura por produtos de boa qualidade, saudáveis e de fácil preparo e consumo. No entanto, micro-organismos patogênicos podem estar presentes desde a produção ou serem introduzidos através de equipamentos e utensílios mal higienizados ou pela manipulação inadequada. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi a avaliação microbiológica de hortaliças, legumes e frutas minimamente processados, em relação aos parâmetros microbiológicos descritos na legislação brasileira, que permite até 102/g de coliformes termotolerantes para hortaliças e até 5 x 102/g, para frutas, na ausência de Salmonella em 25 gramas do produto. Entretanto, a legislação não contempla a pesquisa de Staphylococcus aureus, bactéria potencialmente produtora de enterotoxinas, cujo habitat é a mucosa nasal e que pode ser transmitida aos alimentos pela intensa manipulação. Dentro do mesmo gênero, existem as espécies de estafilococos coagulase negativa (ECN), que apresentam grande potencial patogênico, por possuírem os mesmos genes para a produção de enterotoxinas, encontrados em S. aureus. Assim, o trabalho também objetivou o isolamento dessas bactérias, a pesquisa dos genes que codificam a produção de enterotoxinas clássicas e biofilme e, a partir da presença dos genes, foi pesquisada a produção in vitro desses fatores. A produção de biofilme foi verificada em plástico, aço inoxidável e vidro. Foram analisadas 200 amostras, e nenhuma apresentou contaminação por Salmonella, mas 157 (78,5%) estavam fora dos limites aceitáveis em relação à quantidade de coliformes termotolerantes. Em relação aos estafilococos, 50 amostras (25%) apresentaram contaminação por ECN e 7 (3,5%), por estafilococos coagulase... / Minimally processed foods emerged as an interesting alternative for the consumer that seeks for products with good quality, which are healthy, easy to prepare and to consume. Nevertheless, pathogenic microorganisms may be present in these products since production, or may be introduced by badly sanitized equipment and utensils, or by improper manipulation. Therefore, the objective of this work was the microbiological evaluation of minimally processed vegetables and fruits, regarding the microbiological parameters described in the Brazilian law, which allows for up to 10² thermotolerant coliforms in vegetables and up to 5 x 10² in fruits, in the absence of Salmonella in 25 grams of the product. However, the law does not consider the research of Staphylococcus aureus, bacteria that is a potential producer of enterotoxins, whose habitat is the nasal mucosa and that may be transmitted to food by the intense manipulation they are subjected. In the same genus, there are the coagulase-negative staphylococci species (CoNS), which presents huge pathogenic potential, for having the same genes for enterotoxin production found on S. aureus. Thus, this work also aims the isolation of these bacteria, the research of genes that codify for the production of classical enterotoxins and biofilm and, as from the presence of these genes, the research of the production in vitro of enterotoxins and biofilm. The biofilm production was tested on plastic, stainless steel and glass, which are the most used materials in equipments and utensils. 200 samples were analyzed, and none presented contamination by Salmonella, although 157 (78.5%) were outside the acceptable limits regarding the quantity of thermotolerant coliforms. From these 200 samples of minimally processed products, 50 (25%) presented coagulase-negative staphylococci (CoNS) and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-02Bitstream added on 2014-06-13T20:29:37Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_dcv_me_botib.pdf: 990055 bytes, checksum: 07196c8f0c321ad972ef51db39060685 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Bactérias do gênero Salmonella estão entre as principais causas de enfermidades transmitidas por alimentos (ETA), sendo que os de origem animal são os maiores responsáveis pela veiculação desse micro-organismo, principalmente frangos que são portadores assintomáticos de alguns sorotipos patogênicos para o homem. A Instrução Normativa n° 70 (2003), do Programa de Redução de Patógenos do Ministério da Agricultura e Abastecimento confere um controle minucioso sobre o processo de abate, garantindo a higiene correta dos alimentos e sua segurança em todos os estágios da produção. Porém, a presença de micro-organismos formadores de biofilmes nas indústrias de alimentos, como a Salmonella, é motivo de preocupação pelas falhas que podem ocorrer no processo de higienização. As propriedades físico-químicas de uma superfície podem exercer influência sobre a adesão dos micro-organismos, os quais aderem mais facilmente às superfícies hidrofóbicas (PVCs) do que às hidrofílicas (vidro ou metais como aço inox). Assim como outras bactérias patogênicas, as salmonelas possuem fímbrias e produzem celulose, que vão influenciar na sua adesão às superfícies e estão entre os principais componentes da matriz em biofilmes. Os genes agf (agregative fímbrias) estão envolvidos na biossíntese de fímbrias, enquanto o segundo componente, a celulose, é produzida pelos genes bcsA, bcsB, bcsZ e bcsC (síntese de celulose bacteriana). A produção de fímbrias, co-regulada pelo regulador tipo LuxR, o agfD, vai regular indiretamente a produção de celulose atuando no gene adrA. A expressão dos dois componentes leva à formação dessa matriz. Sendo assim, o presente trabalho teve por objetivo a pesquisa da presença desses genes nas cepas de Salmonella sp., isoladas de frango e o comportamento dessas cepas quanto à produção... / Bacteria of the genus Salmonella are among the leading causes of foodborne disease (FBD), being, those from animals, the most responsibles for placement this microorganism, especially poultry that are asymptomatic carriers of some serotypes pathogenic to humans. Normative Instruction No. 70 (2003), of the Pathogen Reduction Program of the Ministry of Agriculture and Supply gives rigorous control over the slaughter process, ensuring proper food hygiene and safety in all stages of production. However, the presence of microorganisms forming biofilms in the food, such as Salmonella, is a cause of concern due to the failures that may occur in the process of cleaning. The physicochemical properties of a surface can influence the adhesion of microorganisms, which adhere more readily to hydrophobic surfaces (PVCs) than to hydrophilic (glass or metals such as stainless steel). Like other pathogenic bacteria, Salmonella possess fimbriae and produces cellulose, which will affect their adherence to surfaces and are among the main components of the matrix in biofilms. Genes agf (agregative fimbriae) are involved in the biosynthesis of fimbriae, while the second component, cellulose, is produced by genes bcsA, bcsB, bcsZ and bcsC (bacterial cellulose synthesis). The production of fimbriae, co-regulated by LuxR type regulator, the agfD, will regulate the production of cellulose indirectly acting on the gene adrA. The expression of these two components leads to the formation of this matrix. Therefore, this study aimed to research the presence of these genes in strains of Salmonella isolated from poultry and the behavior of these strains for the production of biofilm at different temperatures (16º, 20º, 28º and 35ºC) and materials (glass, PVC and stainless steel) as well as the analysis of the characteristic morphology expressed at 28°C, optimum temperature for the production of biofilm

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T19:49:33Z : No. of bitstreams: 1 nascimento_acmob_me_botib.pdf: 365893 bytes, checksum: 7a173728f136f9b95dc827e38a28e865 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Leveduras oportunistas do gênero Candida são capazes de disseminar-se em hospedeiros susceptíveis, num processo crescente nos últimos anos. Um fator complicador destes quadros ocorre quando estas leveduras são capazes de produzir biofilme, principalmente quando associadas a cateteres ou outros dispositivos médicos, elevando o poder de penetração e invasão em órgãos do hospedeiro. Por também conferir maior resistência às drogas antifúngicas do que as células dispersas, o biofilme fúngico tornou-se um dos maiores problemas no combate a estas infecções. A base genética da produção de biofimes nestas leveduras é complexa, porém já foi determinado o envolvimento de genes da família ALS, codificadores de glicoproteínas de adesão. Dentre os oito genes desta família (ALS1 ao ALS7 e ALS9), destaca-se o papel de ALS3. O gene ALS3, assim como todos os outros genes da família, apresenta uma estrutura composta por 3 domínios. O domínio 5’, região bem conservada; um domínio central que apresenta motifs de 108pb repetidos em tandem, com variações de tamanho entre os genes da mesma família e entre o mesmo gene em diferentes espécies, em uma mesma espécie e até mesmo entre alelos de uma mesma cepa, e o domínio 3, menos conservado que o domínio 5’, que pode apresentar variações de tamanho e de algumas seqüências de aminoácidos. Tendo em vista a crescente incidência de infecções por esse microrganismo em todo o mundo, o presente estudo objetivou investigar a freqüência das diferentes espécies de Candida em nossa região e caracterizá-las quanto à susceptibilidade a drogas antifúngicas e produção de biofilme, e possível correlação da produção de biofilme com polimorfismos de tamanho do gene ALS3. Os resultados obtidos confirmam a crescente incidência de espécies não-albicans, principalmente isoladas de infecções invasivas como cultura... / Opportunistic yeasts of the genus Candida are able to disseminate into the bloodstream in susceptible hosts, in an increasing course in the recent years. A complicating factor is when these yeasts are capable of producing biofilms, especially associated with catheters or other medical devices. Biofilm also confers greater resistance to antifungal drugs than dispersed cells, so the fungal biofilm has become one of the greatest problems in combating these infections. The genetic basis of the biofim production by yeasts is complex, but it has been know the involvement of ALS gene family, encoders of adhesion glycoproteins. Among the eight genes of this family (ALS1 to ALS7 and ALS9), the ALS3 are considered the most important. The ALS3 gene, such as the others members of the family, have three general domains: the 5’domain, conserved, with approximately 1300-pb; followed by a central domain consisting entirely of tandem-repeats of a 108-pb sequence, that are somewhat variable; and the 3’ domain, which is least conserved in length and sequence. Considering the increase incidence of these infections worldwide, the aims of this study were identify the frequency of Candida species in our region, to characterize the profile of antifungal susceptibility; to quantify the biofilm production and to correlate this production with the ALS3 gene length polymorphism. Our data confirm the increase incidence of non-albicans species, mainly when obtained from invasive infections, such as blood and peritoneal fluid, in which C. parapsilosis was the most frequent isolated species. The same was also observed to biofilm production, in which isolates obtained from invasive infections (blood and peritoneal fluid) are more biofilm producers than that obtained from vaginal secretion and urine. Among the different species, isolates of non-albicans also are more biofilm producers than C. albicans. Polimerase... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3533.pdf: 12329125 bytes, checksum: 19d4177c70f080851ba4d97e52f0f0b7 (MD5) Previous issue date: 2011-03-25 / Financiadora de Estudos e Projetos / The bacterium Streptococcus mutans is one of the main initiators species of biofilm and is related to the etiology of caries. Currently there have been many studies investigating ways to reduce bacterial adhesion and biofilm formation on biomaterials, in order to prevent diseases and infections, such as the use of silver nanoparticles embedded in the materials. However, few studies have investigated the benefits of these particles in materials that are utilized within the oral cavity. The main objective of this research was to compare biofilm formation of this specie on the composite resin in its commercial form today and an experimental composite resin, which were added silver nanoparticles, which are bactericidal, using a method of counting viable cells recovered from the biofilms. Were produced cylindrical specimens of 4 mm in height and circular base of 4 mm in diameter, resin and resin with nanoparticles at three different concentrations, 0.1, 0.3 and 0.6% by mass. They were incubated in liquid medium with sucrose, containing about 108 CFU/ml, to cause bacterial adhesion and biofilm formation in vitro. The count of viable cells from the samples was made after the disintegration of biofilms on them adhered in ultrasonic tank, and was performed after 1 day, 4 days and 7 days of incubation. Considering the mean and standard deviation values, the results showed that on the experimental resins with concentrations of 0.3% and 0.6% of silver nanoparticles, the number of adhered bacterial cells was lower than in resin in its commercial form today, no silver, and also smaller than the resin to 0.1% in the three incubation periods studied. The scanning electron micrograph of a biofilm of S. mutans adhered to the surface of each specimen was also performed after the same time intervals, and allowed morphological analysis of the structure of cells and cell clusters attached to surfaces. A compression test was also performed to verify if the inclusion of antibacterial nanoparticles in the resin does not affect the mechanical performance of the same. The results of this trial showed that the resin with 0.3% concentration of nanoparticle had a better mechanical properties in compression, and resin with a concentration of 0.6% worse performance, compared with the resin without silver nanoparticles, It was concluded that the composites with 0.3% silver nanoparticles are advantageous for clinical application, because it showed how a material less favorable to bacterial adhesion, without prejudice to its mechanical resistance. They may therefore benefit patients, assisting in the prevention of recurrent caries, which occur around the margins of restorations, and in the maintenance of good oral hygiene. / A bactéria Streptococcus mutans é uma das principais espécies iniciadoras do biofilme dentário e está relacionada à etiologia da cárie. Atualmente surgem muitos estudos que buscam novas maneiras de reduzir a adesão bacteriana e a formação de biofilme sobre biomateriais, com a finalidade de prevenir a ocorrência de infecções e a transmissão de doenças, tais como o uso de nanopartículas de prata incorporadas nestes materiais. Porém poucos são os estudos que investigam os benefícios destas partículas em materiais que são empregados dentro da cavidade bucal. O principal objetivo desta pesquisa foi comparar a formação do biofilme desta espécie bacteriana sobre a resina composta fotopolimerizável em sua forma comercial atual e uma resina composta experimental, onde foram acrescentadas nanopartículas de prata, que são bactericidas, utilizando um método de contagem de células viáveis recuperadas dos biofilmes. Foram produzidos corpos de prova cilíndricos, de 4 mm de altura e base circular de 4 mm de diâmetro, de resina e de resina com nanopartículas em três concentrações diferentes, 0,1, 0,3 e 0,6% em massa. Eles foram incubados em meio de cultura líquido com sacarose, contendo cerca de 108 UFC/ml, para que ocorresse a adesão bacteriana e a formação de biofilme, in vitro. A contagem de células viáveis provenientes dos corpos de prova foi feita após a desagregação dos biofilmes sobre eles aderidos em cuba ultrassônica, e foi realizada após 1 dia, 4 dias, e 7 dias de incubação. Considerando-se a média e desvio padrão dos valores, os resultados mostraram que sobre as resinas experimentais com as concentrações de 0,3 % e 0,6 % em massa de nanopartículas de prata, o número de células bacterianas aderidas foi menor do que na resina não modificada, sem prata, e também menor do que na resina a 0,1 %, nos 3 períodos de incubação estudados. A eletromicrografia de varredura do biofilme de S. mutans aderido sobre a superfície de cada corpo de prova foi realizada também após os mesmos intervalos de tempo, e permitiu a análise morfológica das células e da estrutura dos conjuntos celulares aderidos às superfícies. Foi realizado um ensaio de compressão para verificar se a inclusão das nanopartículas bactericidas na resina não prejudica o desempenho mecânico da mesma. Os resultados deste ensaio mostraram que, em comparação com a resina não modificada, a resina com a concentração de 0,3 % de nanopartículas teve um melhor desempenho mecânico em compressão, e a resina com a concentração de 0,6 % um desempenho pior. Concluiu-se que as resinas compostas com 0,3% de nanopartículas de prata são vantajosas para a aplicação clínica, pois se apresentaram como um material menos favorável à adesão bacteriana, sem prejuízo à sua resistência mecânica. Podem portanto beneficiar os pacientes, auxiliando na prevenção das cáries recidivantes, que ocorrem ao redor das margens de restaurações, e na manutenção de uma boa condição de higiene bucal.

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-30. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:17:14Z : No. of bitstreams: 1 000865632.pdf: 903176 bytes, checksum: 3e51870d6b17dcc44625fae1468b3e9d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade da molécula de quorum sensing farnesol na formação de biofilmes simples e misto de Candida albicans ATCC 10231 e Streptococcus mutans ATCC 25175. Inicialmente o farnesol foi diluído em metanol e posteriormente em saliva artificial (SA). Os testes de concentração inibitória mínima (CIM) do farnesol contra as células de Candida albicans ATCC 10231 e Streptococcus mutans ATCC 25175 em suspensão foram baseados no método da microdiluição. O farnesol diluído nas concentrações de 1,56, 3,125, 6,25, 12,5, 25, 50, 70, 150 e 300 mM foi aplicado sobre os biofilmes de Candida albicans e Streptococcus mutans (formação) e após 48 horas de contato sua atividade antibiofilme foi determinada por meio da quantificação da biomassa total (coloração com violeta cristal (CV)), enumeração das unidades formadoras de colônias (UFCs) e atividade metabólica (XTT). Foi ainda realizada uma curva de tempo de morte celular para os dois microrganismos estudados. Após o tratamento com o farnesol, a matriz dos biofilmes foi extraída e analisada em termos de concentração de proteínas e carboidratos, além do teste de pH para S. mutans e verificação das atividades enzimáticas de proteinase, fosfolipase e hemolítica para Candida albicans, ainda a estrutura dos biofilmes foi analisada por meio da microscopia eletrônica de varredura. Os resultados de CIM foram de 150 mM para C. albicans e de 6.25 mM para S. mutans. O farnesol diminuiu a formação de biofilmes simples e mistos, com reduções significativas de 37-90% e 64-96%, respectivamente para a biomassa total e atividade metabólica. Para os biofilmes simples, concentrações de farnesol iguais ou maiores que 3,125 mM promoveram reduções significativas (1,3-4,2 log10; p < 0,05) nas UFCs, enquanto que para os biofilmes mistos reduções... / The aim of this study was to evaluate the activity of a quorum sensing molecule, farnesol, in biofilm formation of Candida albicans ATCC 10231 and Streptococcus mutans ATCC 25175. Initially farnesol was diluted in methanol and then in artificial saliva (AS). Minimum inhibitory concentration tests (MIC) of farnesol against Candida albicans ATCC 10231 cells and Streptococcus mutans ATCC 25175 suspension were based on the microdilution method. Farnesol was prepared at concentrations of 1.56, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 70, 150 and 300 mM, and placed in contact with biofilms in formation of Candida albicans and Streptococcus mutans for 48 hours. Its antibiofilm activity was determined by quantifying the total biomass (stained with crystal violet (CV)), enumeration of colony forming units (CFUs) and metabolic activity (XTT). It was further carried out a cell death time curve for both microorganisms studied. After the treatment with farnesol, the matrix of the biofilm was extracted and analyzed in terms of protein and carbohydrates, in addition to the pH test for S. mutans and examination of enzymatic activities of proteinase, fosfolipase and hemolytic for Candida albicans. The structure of biofilms was analyzed by scanning electron microscopy. The MIC values were 150 mM for C. albicans and 6.25 mM for S. mutans. Farnesol decreased the formation of single and mixed biofilms, with significant reductions of 37-90% and 64-96% respectively for the total biomass and metabolic activity. For single biofilms, farnesol concentrations equal to or higher than 3.125 mM promoted significant reductions (1,3-4,2log10; p <0.05) in the CFU for single biofilms, while in mixed biofilms the reductions (0,67-5,32log10; p <0.05) were noted at concentrations of 1.56 mM. For cell death curve after an hour in contact with those microorganisms, farnesol reduced 1 log10... / FAPESP: 13/23592-0

Submitted by Vanessa Rafaela de Carvalho null (vanessa@fca.unesp.br) on 2016-08-17T15:38:02Z No. of bitstreams: 1 VANESSA RAFAELA DE CARVALHO.pdf: 1265274 bytes, checksum: b22dd09c9d7e691c86790c85e9d494d1 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-19T17:25:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carvalho_vr_me_bot.pdf: 1265274 bytes, checksum: b22dd09c9d7e691c86790c85e9d494d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-19T17:25:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carvalho_vr_me_bot.pdf: 1265274 bytes, checksum: b22dd09c9d7e691c86790c85e9d494d1 (MD5) Previous issue date: 2016-08-09 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Desequilíbrio na composição de espécies bacterianas (disbiose) do intestino é uma característica da doença de Crohn (DC), a mais grave das doenças inflamatórias intestinais (DII). Na disbiose da DII, há um aumento de certos grupos de bactérias, tais como as Proteobacteria, em alguns pacientes. Acredita-se que o aumento destas bactérias deve contribuir para as reações inflamatórias responsáveis pelas lesões observadas no intestino de portadores de DC e retocolite ulcerativa, ao estimular a produção de citocinas por células locais do sistema imune. Proteobacteria, um dos filos predominantes da microbiota intestinal compreende bacilos gram-negativos, dos quais Escherichia coli (E. coli) é o mais conhecido. Dada a importância de Proteobacteria como patógeno ou membro da microbiota intestinal residente humana, este trabalho teve dois objetivos: 1) Investigar a ocorrência de variação numérica na população de Proteobacteria na DC e 2) Caracterizar amostras de E. coli encontradas nesta população, em relação a propriedades de virulência. Visando o primeiro objetivo, DNA de culturas em caldo MacConkey de diferentes materiais clínicos (fezes e biópsias intestinais) de 8 controles e 9 pacientes com DC foram amplificados com primers para as regiões V6-V8 do gene que codifica a fração 16S do rRNA (16S V6-V8 rDNA) e, em seguida, sequências específicas (representando táxons bacterianos particulares) contidas nos amplicons foram separadas por temperature gradient gel electrophoresis (TGGE), definindo perfis de banda que refletem a diversidade bacteriana. O segundo objetivo compreendeu a tipagem dos isolados de E. coli destas culturas através da classificação em filogrupos (A, B1, B2 e D) da coleção de referência de E. coli (EcoR), a pesquisa de sorogrupos O25 e O83, determinação das propriedades de aderência e capacidade de produzir biofilme. Análise de 32 culturas de 9 portadores de DC e 24 culturas de 8 controles mostrou uma clara diferença no número de bandas nos perfis de TGGE dos amplicons de 16S V6-V8 rDNA. Amplicons de 8 culturas de 9 portadores de DC tinham no máximo 2 bandas, ao passo que o número de bandas em amplicons de controles tinham pelo menos 3 bandas. Uma das bandas dos casos em que havia duas bandas ou a banda única dos perfis de cultura de casos teve a mesma mobilidade do amplicon de E. coli, colocado no gel como referência da corrida. PCR para detecção de genes de O25 e O83 demonstraram que estes sorogrupos foram dominantes tanto na população de E. coli de portadores de DC como de controles (apenas um paciente controle deu resultado negativo na PCR para ambos sorogrupos). Também, a maioria das cepas de E. coli, tanto de casos como de controles pertenceu ao filogrupo B2. Resultados parciais de testes de adesão em células Hep-2 revelaram que todos os pacientes (controles ou não) apresentaram E. coli aderentes, expressando o padrão agregativo. Testes para avaliar a capacidade de formação de biofilme indicaram que isolados de E. coli das regiões proximais encontrados em controles produzem biofilme de forma mais intensa do que isolados equivalentes de portadores de DC. Como conclusão, os dados apresentados sugerem que a população intestinal de Proteobacteria em portadores de CD apresenta disbiose, associada com um aumento do número de E. coli, uma propriedade que foi determinada por TGGE e confirmada com seqüenciamento de amplicons da região V6, pela técnica Ion Torrent. Por fim, com base nos resultados de tipagem e caracterização bacteriana foi possível observar que amostras tanto de caso como de controles, não houve uma prevalência dos sorogrupos e com base nesse resultado podemos associar que ambos os grupos de estudos freqüentam de forma rotineira o mesmo ambiente hospitalar, podendo indicar um favorecimento na aquisição desses tipos bacterianos. Resultados semelhantes ocorreram com as análises dos sorogrupos, onde apenas o filogrupo D teve prevalência significativa em indivíduos controle. Em relação à produção de biofilme, as amostras encontradas na região proximal do intestino de pacientes controles produzem mais biofilmes do que amostras de portadores de DC da mesma região intestinal, indicando que a parede da mucosa intestinal serve como substrato pode influenciar na formação do biofilme. / Imbalance in intestinal bacterial composition (dysbiosis) is a hallmark of Crohn’s disease (CD), the most severe of inflammatory bowel diseases (IBD). A characteristic of IBD dysbiosis is the elevation of certain groups of bacteria such as Proteobacteria in some patients. It is believed that the augmented bacteria may contribute for the inflammatory reactions underlying the typical lesions observed in the gut of CD and ulcerative colitis patients, by stimulating the production of cytokines by local cells of the immune system. Proteobacteria, one the most prevalent bacterial phyla of the gut microbiota are Gram negative rods of which Escherichia coli (E. coli) is the most well-known member. Given the significance of Proteobacteria as pathogens or member of resident gut microbiota, this work had two purposes: 1) to investigate the occurrence of numerical variation in the population of these bacteria in CD and 2) Characterizing E. coli isolates found in this population, in search for some virulence associated properties. For the first purpose, DNA from MacConkey broth cultures of distinct clinical materials (stools and gut mucosal biopsies) of 9 CD and 8 control patients were amplified with primers for the V6 and V8 regions of the 16S ribosomal RNA gene (16S V6-V8 rDNA) and distinct gene sequences (representing particular bacterial taxa) within the amplicons were resolved by temperature gradient gel electrophoresis (TGGE), defining band profiles, which reflect the bacterial diversity. The second objective consisted in phylotyping (determining A, B1, B2 and D phylogroups), serotyping (search for O25 and O83 genes), analyzing the E. coli isolates of the cultures for adherence properties and competence to produce biofilm. Analysis of 32 cultures from the 9 CD patients and 24 cultures from 8 control subjects showed a clear case-control difference in the number of bands in the TGGE profiles of the 16S V6-V8 rDNA amplicons. Cultures from 8 of 9 CD patients had at most 2 bands, while the number of bands in the cultures from 7 of the 8 controls subjects had at least 3 bands. One of the two bands found in the cultures from CD patients had the same mobility as E. coli, put in the gelas reference for the run. PCR screening for O25 and O83 demonstrated that these serogroups were dominant among the E. coli population from both controls and CD patients (only one control subject was negative for each of these O groups). Also, most of E. coli isolates from both control and CD patients belonged to the B2 phylogroup. Partial results of bacterial adherence to Hep-2 cells revealed that all patients (controls and CD) had aggregative adherent E. coli isolates. Tests to determine the ability to produce biofilm indicated that isolates from the proximal, but not from distal region of the gut or the stools, found in controls were stronger biofilm formers than isolates from equivalent sites of CD patients. In conclusion, the data presented here reveal that intestinal population of Proteobacteria of CD patients show dysbiosis associated with the elevation of Escherichia coli and that this variation can be assessed by TGGE and confirmed by sequencing of amplicons V6 region, the technique Ion Torrent. Finally, on the basis of the bacterial typing and characterization results, was observed that samples of both the case and controls, there was a prevalence of serogroups, based on this result we can associate both study groups frequent routinely the same hospital environment and may indicate a favoring the acquisition of these bacterial types. Similar results occurred with the analysis of serogroups, where only the filogrupo D had a significant prevalence in control subjects. For biofilm production, the samples found in the proximal region of the control patients intestine produce more biofilm than DC bearing samples of the same intestinal region, indicating that the intestinal mucosa serves as a substrate may influence the formation of biofilms. / FAPESP: 2013/04475-3

Os biofilmes constituem uma nova forma de vida que oferece maior resistência aos micro-organismos, protegendo-os contra agressões físicas e químicas do meio envolvente, o que facilita a sua adaptação em condições adversas. O desenvolvimento de biofilmes patogênicos em superfícies de contato nas áreas da saúde (próteses e instrumentos cirúrgicos) e alimentícia (equipamentos e tubulações) é a principal causa do acréscimo de contaminações que podem, eventualmente, originar problemas de saúde pública e de ordem econômica. Para prevenir, controlar ou erradicar biofilmes, alternativas tecnológicas vêm sendo desenvolvidas e testadas em materiais com propriedades antimicrobianas. Dentro deste contexto, este trabalho teve por objetivo avaliar as propriedades antimicrobianas dos íons prata (Ag+) implantados no aço inoxidável austenítico AISI 304 a baixa energia (4 keV) no equipamento Ion Plating Diversified (IPD). As bactérias estudadas foram Escherichia coli (IBEc 101) e Staphyloccocus aureus (ATCC 6538). As simulações de Monte Carlo previram para uma determinada energia de polarização, o perfil de dose e profundidade de íons Ag+ implantados no aço. A análise físico-química apresentou doses de prata, na ordem de grandeza de 1016 átomos/cm2 em profundidades menores do que 10 nm. A densidade areal de átomos de prata implantados foi influenciada pela relação entre o índice de corrente de emissão e o tempo de processo. Os resultados microbiológicos obtidos apresentaram uma significativa redução na aderência bacteriana (95% de E. coli e 90% de S. aureus) em relação aos seus controles. Porém, impurezas como o oxigênio encontrado na superfície das amostras alteraram a capacidade de aderência das células bacterianas. A variação do pH do meio de cultura fez com que a repulsão eletrostática entre as células bacterianas e a superfície sólida aumentasse para valores de pH próximos da neutralidade e diminuísse para valores de pH não alcalinos, interferindo desta forma, na adesão das bactérias. Ainda que faltem dados que comprovem seu rendimento e o custo total do produto tratado, existe uma enorme perspectiva de tornar o processo IPD em escala industrial. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2014-11-24T13:14:54Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Fernando Graniero Echeverrigaray.pdf: 3217258 bytes, checksum: 0befcf5967159291ee174c210a9c79d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-24T13:14:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Fernando Graniero Echeverrigaray.pdf: 3217258 bytes, checksum: 0befcf5967159291ee174c210a9c79d8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, CNPq / The biofilms are a new form of life that offers greater resistance to microorganisms, protecting them against physical and chemical aggressions of the surroundings, which facilitate its adaptation in adverse conditions. The development of pathogenic biofilms on contact surfaces used in the health and food industries is the main cause of increased contamination that can, eventually, lead to public health problems and economic order. To prevent, control or eradicate biofilms, technological alternatives are being developed and tested in materials with antimicrobial properties. Within this context, this study aimed to evaluate the antimicrobial properties of silver ions (Ag+) implanted on the surface of austenitic stainless steel AISI 304 by the technique of ion implantation at low energy (4 keV) in an Ion Plating Diversified (IPD) equipment. The bacteria studied were Escherichia coli (IBEc 101) and Staphylococcus aureus (ATCC 6538). The simulations Monte Carlo has predicted for a given energy of polarization, the dose and depth profile of ions Ag+ implanted in steel. Physico-chemical analysis presented doses of silver, in the order of magnitude of 1016 atoms/cm2 at depths less than 10 nm. The areal density of silver atoms implanted was influenced by the relationship between the emission current index and the process time. The microbiological results obtained showed a significant reduction in bacterial adhesion (95% for E. coli and 90% for S. aureus) in relation to its controls. However, impurities such as oxygen found on the surface of samples altered the adhesion of the bacterial cells. The variation of the pH of the culture medium caused the electrostatic repulsion between bacterial cells and solid surface increases to pH values close to neutrality and to shrink to no alkaline pH values, interfering in this way, in the adhesion of bacteria. Missing data yet proving their income and the total cost of the product treated, there is a huge prospect of making the process IPD on an industrial scale.

Polímeros oriundos de fontes não renováveis são amplamente utilizados na produção de embalagens e para uso na agricultura, em confecção de estufas, sacos para produção de mudas e filmes para cobertura de solo. Estes plásticos são resistentes à degradação e após utilização passam a ser um problema ambiental, portanto, o desenvolvimento de materiais biodegradáveis é uma necessidade, visto que são produzidos de fontes renováveis e decompõem-se rapidamente, diminuindo o impacto sobre o meio ambiente. O reaproveitamento total ou parcial de resíduos perigosos, como os de couro curtido ao cromo III, também tem sido alvo de pesquisas por gerar um ganho ambiental se comparado a disposição em aterros indunstriais para resíduos perigosos. Dentro deste contexto, no presente trabalho foram produzidos filmes de gelatina comercial e filmes de gelatina extraída de resíduo de couro curtido ao cromo III, em associação a plastificante e enzima transglutaminase (TGase) como agente reticulante. A enzima TGase foi estatisticamente significativa nas propriedades de solubilidade, ângulo de contato e elongação dos filmes produzidos com gelatina comercial. Para os filmes produzidos com gelatina extraída de resíduo de couro curtido ao cromo III, a enzima TGase atuou de forma estatisticamente significativa nas propriedades de solubilidade, umidade, ângulo de contato, permeabilidade ao vapor d água e tensão de ruptura dos filmes. As análises térmicas mostraram que a reticulação enzimática aumentou a estabilidade térmica dos filmes. A análise de infravermelho evidenciou a reticluação da enzima transglutaminase nos filmes pelo deslocamento das bandas. No teste de biodegradabilidade em solo simulado, os filmes degradaram-se em 24 horas, comprovando que o polímero é biodegradável. Este estudo demonstrou a viabilidade da utilização de gelatina recuperada de um resíduo para produzir filmes biodegradáveis com melhorias na suas propriedades com adição de um agente reticulante. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-08-07T14:13:35Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Elizete Baggio Brandalise.pdf: 2076499 bytes, checksum: 5907508a0674b933cdbb4d6b11eb4ecc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T14:13:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Elizete Baggio Brandalise.pdf: 2076499 bytes, checksum: 5907508a0674b933cdbb4d6b11eb4ecc (MD5) Previous issue date: 2017-08-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Polymers from non-renewable sources are widely used in the production of packaging and for use in agriculture, in the manufacture of greenhouses, bags for the production of seedlings and films for soil cover. These plastics are resistant to degradation and after use become an environmental problem, therefore, the development of biodegradable materials is a necessity, since they are produced from renewable sources and decompose rapidly, reducing the impact on the environment. The total or partial reuse of hazardous wastes, such as chrome-tanned leather III, has also been the subject of research for generating an environmental gain compared to disposal in industrial landfills for hazardous waste. In this context, commercial gelatin films and gelatin films extracted from leather residue to chromium III, in combination with plasticizer and enzyme transglutaminase (TGase) as crosslinking agent were produced in the present work. The enzyme TGase was statistically significant in the properties of solubility, contact angle and elongation of the films produced with commercial gelatin. For the films produced with gelatine extracted from chromium III tanned leather residue, the enzyme TGase was statistically significant in the properties of solubility, humidity, contact angle, water vapor permeability and rupture stress of the films. Thermal analysis showed that enzymatic crosslinking increased the thermal stability of films. Infrared analysis evidenced the reticulation of the transglutaminase enzyme in the films by the bands displacement. In the biodegradability test in simulated soil, the films degraded in 24 hours, proving that the polymer is biodegradable. This study demonstrated the feasibility of using gelatine recovered from a residue to produce biodegradable films with improvements in its properties with the addition of a crosslinking agent.

Submitted by Tatiana Santos da Silva null (tatianaengambiental@gmail.com) on 2017-04-27T16:58:43Z No. of bitstreams: 1 2017_Tatiana Santos da Silva.pdf: 2674148 bytes, checksum: 550a2730ada1290262c2c460de534577 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-05-02T17:11:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_ts_me_ilha.pdf: 2674148 bytes, checksum: 550a2730ada1290262c2c460de534577 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-02T17:11:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_ts_me_ilha.pdf: 2674148 bytes, checksum: 550a2730ada1290262c2c460de534577 (MD5) Previous issue date: 2017-03-02 / A aplicação do Reator de Biofilme Aerado em Membrana (MABR) no tratamento de esgotos apresenta como desafio o controle da espessura ótima do biofilme uma vez que elevadas espessuras impedem a transferência de oxigênio e de substratos paras as camadas que compõem o biofilme, findando no decaimento do desempenho do MABR. O objetivo central deste trabalho foi analisar o efeito da velocidade de recirculação sobre a eficiência de remoção de nutrientes e carbono orgânico, em um MABR operado em batelada sequencial com esgoto doméstico bruto. Com um volume de 20 L, o MABR continha um módulo de membranas com 0,08 m2m-3 de área específica, operando com ciclo de batelada de 12 horas. Foram monitorados os seguintes parâmetros: pH, temperatura, oxigênio dissolvido, nitrogênio amoniacal, nitrogênio total, nitrato, nitrito, DQO, fósforo e SSV. A taxa de remoção de amônia alcançada foi de até 75,17% e 62,5% na remoção de Nitrogênio Total para a velocidade de 11 cm/s. Nesta pesquisa houve pouca remoção do fósforo. Na remoção de carbono orgânico foram alcançadas eficiências em torno de 80% nas velocidades de recirculação de 6,3 e 11 cm/s. Assim, a melhor velocidade de recirculação para operação do MABR nas condições apresentadas neste trabalho, seria uma velocidade intermediária a 6,3 e 11 cm/s, na qual ocorreriam tanto a nitrificação e desnitrificação, pela permanência da camada anóxica, e a oxidação pelas heterótrofas.