Dentre as oito espécies do gênero Listeria, a única transmitida por alimentos, patogênica para humanos, é a Listeria monocytogenes. De grande preocupação para a indústria alimentícia, este microrganismo pode ser encontrado em diversas superfícies de plantas processadoras de alimentos, sendo capaz de se aderir e formar persistentes biofilmes. No presente trabalho, foi estudada a influência da concentração de glicose e do tempo de incubação na formação de biofilme por uma cepa de L. monocytogenes, sorotipo 1/2a, cultivada em três diferentes temperaturas, 7°C, 25°C e 37°C, através de planejamento experimental utilizando a Metodologia de Superfície de Resposta. As duas variáveis testadas, para os intervalos estudados, foram significativas (p<0,05) na formação de biofilme somente na temperatura de 37°C e, tanto concentrações de glicose tendendo a zero combinadas com tempos de incubação próximos a 26 h, como maiores concentrações de glicose combinadas com menores tempos de incubação, dentro da faixa de estudo aplicada, representaram boas condições para a formação de biofilme. Foi também realizada a análise transcricional de genes relacionados à formação de biofilme e virulência em duas cepas de L. monocytogenes, sorotipos 1/2a e 4b, cultivadas a 7°C e 37°C (condição controle), pela técnica de PCR quantitativo em tempo real (RT-qPCR). Para ambas as cepas, os genes sigB, prfA, luxS, sufS, sufU, ltrC e flaA apresentaram transcrição significativamente aumentada (p<0,05) a 7°C, em comparação aos resultados para a condição de cultivo a 37°C, enquanto que o gene hly não variou significativamente a sua transcrição entre as duas temperaturas. O gene actA foi mais transcrito a 7°C para a cepa denominada 55, do sorotipo 1/2a, enquanto que não variou significativamente a sua transcrição entre as duas condições de crescimento para a cepa denominada 47, do sorotipo 4b. No entanto, para a cepa 55, o gene degU não demonstrou diferença estatisticamente significativa entre seus níveis de transcrição nas duas temperaturas estudadas, mas para a cepa 47, apresentou transcrição significativamente aumentada a 7°C. Interessantemente, a presença do gene agrA não foi detectada na cepa 47, e os seus níveis de transcrição foram menores a 7°C para a cepa 55. Estes resultados demonstram que os dois sorotipos estudados, responsáveis por muitos dos casos humanos de listeriose, apresentam mecanismos moleculares diferentes, nas temperaturas de 7°C e 37°C. / Among the eight species of genus Listeria, the only transmitted by food, pathogenic for humans, is Listeria monocytogenes. Of great concern to the food industry, this microorganism can be found in various areas of food processing plants, being able to adhere and form persistent biofilms. In the present work, the influence of glucose concentration and incubation time on biofilm formation by a strain of L. monocytogenes, serotype 1/2a, grown in three different temperatures, 7°C, 25°C and 37°C, have been studied, through an experimental design using the Response Surface Methodology. The two variables tested, for the studied intervals, were significant (p<0,05) in the biofilm formation only at a temperature of 37°C and, both glucose concentrations tending to zero combined with incubation times near to 26 h, and higher glucose concentrations combined with lower incubation times, within the applied range study, represented good conditions for biofilm formation. Transcriptional analysis of genes related to biofilm formation and virulence in two strains of L. monocytogenes, serotypes 1/2a and 4b, grown at 7°C and 37°C (control condition), was also performed, by real-time quantitative PCR (RT-qPCR). For both strains, sigB, prfA, luxS, sufS, sufU, ltrC and flaA genes showed significantly increased transcription (p<0,05) at 7°C, in comparison with results for the growth condition at 37°C, whereas hly gene did not varied significantly its transcription between the two temperatures. The actA gene was more transcribed at 7°C for the 55 strain, serotype 1/2a, while did not varied significantly its transcription between the two growth conditions for the 47 strain, serotype 4b. However, for 55 strain, the degU gene did not showed statistically significant difference for its transcription levels between the two studied temperatures, but for 47 strain, presented significantly increased transcription at 7°C. Interestingly, the presence of agrA gene was not detected in 47 strain, and its transcription levels were lower at 7°C for 55 strain. These results demonstrate that the two studied serotypes, responsible for many of the human listeriosis cases, have different molecular mechanisms, at temperatures of 7 and 37°C.

Submitted by Eduardo Barros de Almeida Silva (eduardo.philippe@ufpe.br) on 2015-04-17T13:55:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Edkarlla Sousa Dantas de Oliveira.pdf: 1968915 bytes, checksum: ed71108aa4f0a310b1be620e9e616482 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T13:55:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Edkarlla Sousa Dantas de Oliveira.pdf: 1968915 bytes, checksum: ed71108aa4f0a310b1be620e9e616482 (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / FACEPE / A Biocorrosão, também denominada Corrosão Microbiologicamente Induzida (CMI) está associada à participação dos micro-organismos e seus metabólitos corrosivos na deterioração de diversos materiais. Estas espécies microbianas podem acelerar reações parciais, favorecer ou modificar mecanismos de corrosão através da formação de biofilmes. Estes biofilmes são causadores de graves danos e prejuízos em sistemas que ficam em contato direto com água, tais como, hidrelétricas, tratamento e transporte de água, indústrias alimentícias e de papel, entre outros. Com base na relevância do tema, foram estabelecidos como objetivos desse trabalho, avaliar a microbiota de amostra de água doce proveniente do complexo hidrelétrico Paulo Afonso - BA, isolando-se e quantificando-se os principais grupos de micro-organismos envolvidos no processo de biocorrosão metálica. O estudo foi realizado por um período de 90 dias, em sistema estático utilizando cupons de aço carbono SAE 1010, submersos em amostras de água do rio. A cada 15 dias foram analisadas as concentrações celulares dos principais grupos microbianos presentes no biofilme, a perda de massa e a taxa de corrosão. A superfície metálica foi avaliada por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e Difração de Raio X (DRX). Os resultados mostraram que as bactérias aeróbias heterotróficas e bactérias precipitantes do ferro foram os grupos microbianos que apresentaram maior concentração celular nos biofilmes formados. Também foram encontradas bactérias heterotróficas anaeróbias, Pseudomonas sp. e fungos filamentosos, nos tubérculos associados à corrosão. A taxa de corrosão dos cupons em contato com água doce “in natura” foi maior em relação aos cupons controle. Os biofilmes foram caracterizados por concentrações crescentes de proteínas, com redução dos carboidratos em 60 dias de experimento. Através da microscopia eletrônica de varredura foram visualizadas bactérias e material de corrosão nos biofilmes formados na superfície dos cupons durante 30 dias de exposição à água doce. Nas análises por difração de raio X, os produtos de corrosão lepidocrocita e pirrotita estavam presentes em todas as amostras analisadas. Através dos resultados obtidos pode-se observar a influencia dos micro-organismos na deterioração dos cupons de aço carbono.

Dissertação(mestrado)-Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós–Graduação em Aqüicultura, Instituto de Oceanografia, 2008. / Submitted by Cristiane Silva (cristiane_gomides@hotmail.com) on 2012-08-08T22:52:24Z No. of bitstreams: 1 Graziele.pdf: 800609 bytes, checksum: a78917e56fee21a2cd42824b8e828291 (MD5) / Approved for entry into archive by Bruna Vieira(bruninha_vieira@ibest.com.br) on 2012-08-21T17:14:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Graziele.pdf: 800609 bytes, checksum: a78917e56fee21a2cd42824b8e828291 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-21T17:14:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Graziele.pdf: 800609 bytes, checksum: a78917e56fee21a2cd42824b8e828291 (MD5) Previous issue date: 2008 / As fazendas de cultivo de camarões com altas densidades, liberam efluentes com altas cargas de nutrientes, provocando a degradação da qualidade da água. Isto gera preocupação a respeito do lançamento de efluentes dos cultivos. Em vista disto, este trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência de um sistema integrado de bacia de sedimentação e biofilme na remoção de nutrientes. O estudo foi realizado em ambiente aberto, durante 45 dias. Foram utilizados três tratamentos: a) tratamento TC, sem substrato vertical; b) tratamento T50, superfície interna das caixas aumentada em 50% e c) tratamento T100, superfície interna das caixas aumentada em 100%. As caixas foram abastecidas com o efluente de um cultivo de camarão. Diariamente foram medidos o pH, a salinidade, o oxigênio dissolvido (OD) e a temperatura. Durante os primeiros 15 dias as coletas foram feitas a cada 5 dias, após esse período as coletas de água foram a cada 2 dias, e de biofilme diariamente. As análises de amônia foram feitas em todos os dias de amostragem. As análises de nitrito, nitrato e fosfato, foram feitas de todas as coletas até o 15º dia, e após esse período a cada 6 dias. Do biofilme, a matéria seca foi determinada de todos os dias coletados. A clorofila a analisada a cada 5 dias. E a estimativa de ciliados e flagelados nos dias 5, 10, 15 e 20. Os resultados mostraram que os tratamentos TC e T50 reduziram mais de 80% da amônia e fosfato em 10 dias. O tratamento T100 nos primeiros dias apresentou os menores valores de OD, pH e clorofila a, provocando um pico nas concentrações de amônia e fosfato, retardando a remoção destes nutrientes. Para todos os tratamentos após o 15º dia a concentração de fosfato sofreu uma elevação que se manteve até o final do experimento. Concluindo que ao dobrar a área disponível para fixação de biofilme há uma dificuldade de circulação nos tanques, e um aumento da respiração microbiana, tornando o sistema menos eficiente. Já a bacia de sedimentação sem biofilme, ou com 50% de acréscimo de substrato, ambos são eficientes. Portanto, o efluente deve permanecer na bacia de sedimentação por um tempo mínimo de 10 dias, mas não ultrapassando 15 dias, para não haver elevação nos níveis de fosfato. / The shrimp farms with high densities, release effluents with high loads of nutrients, causing water quality degradation. This creates concern about the release of effluents of cultures. In this work, we aimed to assess the efficiency of an integrated system of settling ponds and biofilm in the nutrients removal. The study was conducted in an open environment, for 45 days. We used three treatments: a) treatment TC, without vertical substrate b) treatment T50, inner surface of the tanks increased by 50% and c) treatment T100, inner surface of the tanks increased by 100%. The tanks were supplied with the effluent of a shrimp culture. Daily were measured pH, salinity, dissolved oxygen (OD) and temperature. During the first 15 days the collections were made every 5 days, after that period the collection of water were every 2 days, and biofilm daily. Analyzes of ammonium were performed on all days of sampling. Analyzes of nitrite, nitrate and phosphate, were made of all collections until the 15 th day, and after this period every 6 days. Of the biofilm, the dry matter was determined in every day collected. The chlorophyll-a reviewed every 5 days. And the estimate of ciliates and flagellates on days 5, 10, 15 and 20. The results showed that the treatments TC and T50 reduced more than 80% of ammonium and phosphate in 10 days. The treatment T100 in the first few days showed the lowest values of OD, pH and chlorophyll-a, causing a peak in the concentrations of ammonium and phosphate, delaying the removal of these nutrients. For all treatments after the 15 th day the concentration of phosphate has an elevation which remained until the end of the experiment. Concluding that to double the area available for setting biofilm there is a difficulty in circulation in tanks, and an increase in microbial respiration, making the system less efficient. Already the settlement ponds without biofilm, or with 50% increase in substrate, both are effective. Therefore, the effluent must remain in the basin settling ponds for a minimum time of 10 days but not exceeding 15 days, for no elevation in the levels of phosphate.

Polímeros oriundos de fontes não renováveis são amplamente utilizados na produção de embalagens e para uso na agricultura, em confecção de estufas, sacos para produção de mudas e filmes para cobertura de solo. Estes plásticos são resistentes à degradação e após utilização passam a ser um problema ambiental, portanto, o desenvolvimento de materiais biodegradáveis é uma necessidade, visto que são produzidos de fontes renováveis e decompõem-se rapidamente, diminuindo o impacto sobre o meio ambiente. O reaproveitamento total ou parcial de resíduos perigosos, como os de couro curtido ao cromo III, também tem sido alvo de pesquisas por gerar um ganho ambiental se comparado a disposição em aterros indunstriais para resíduos perigosos. Dentro deste contexto, no presente trabalho foram produzidos filmes de gelatina comercial e filmes de gelatina extraída de resíduo de couro curtido ao cromo III, em associação a plastificante e enzima transglutaminase (TGase) como agente reticulante. A enzima TGase foi estatisticamente significativa nas propriedades de solubilidade, ângulo de contato e elongação dos filmes produzidos com gelatina comercial. Para os filmes produzidos com gelatina extraída de resíduo de couro curtido ao cromo III, a enzima TGase atuou de forma estatisticamente significativa nas propriedades de solubilidade, umidade, ângulo de contato, permeabilidade ao vapor d água e tensão de ruptura dos filmes. As análises térmicas mostraram que a reticulação enzimática aumentou a estabilidade térmica dos filmes. A análise de infravermelho evidenciou a reticluação da enzima transglutaminase nos filmes pelo deslocamento das bandas. No teste de biodegradabilidade em solo simulado, os filmes degradaram-se em 24 horas, comprovando que o polímero é biodegradável. Este estudo demonstrou a viabilidade da utilização de gelatina recuperada de um resíduo para produzir filmes biodegradáveis com melhorias na suas propriedades com adição de um agente reticulante. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Polymers from non-renewable sources are widely used in the production of packaging and for use in agriculture, in the manufacture of greenhouses, bags for the production of seedlings and films for soil cover. These plastics are resistant to degradation and after use become an environmental problem, therefore, the development of biodegradable materials is a necessity, since they are produced from renewable sources and decompose rapidly, reducing the impact on the environment. The total or partial reuse of hazardous wastes, such as chrome-tanned leather III, has also been the subject of research for generating an environmental gain compared to disposal in industrial landfills for hazardous waste. In this context, commercial gelatin films and gelatin films extracted from leather residue to chromium III, in combination with plasticizer and enzyme transglutaminase (TGase) as crosslinking agent were produced in the present work. The enzyme TGase was statistically significant in the properties of solubility, contact angle and elongation of the films produced with commercial gelatin. For the films produced with gelatine extracted from chromium III tanned leather residue, the enzyme TGase was statistically significant in the properties of solubility, humidity, contact angle, water vapor permeability and rupture stress of the films. Thermal analysis showed that enzymatic crosslinking increased the thermal stability of films. Infrared analysis evidenced the reticulation of the transglutaminase enzyme in the films by the bands displacement. In the biodegradability test in simulated soil, the films degraded in 24 hours, proving that the polymer is biodegradable. This study demonstrated the feasibility of using gelatine recovered from a residue to produce biodegradable films with improvements in its properties with the addition of a crosslinking agent.

Os biofilmes constituem uma nova forma de vida que oferece maior resistência aos micro-organismos, protegendo-os contra agressões físicas e químicas do meio envolvente, o que facilita a sua adaptação em condições adversas. O desenvolvimento de biofilmes patogênicos em superfícies de contato nas áreas da saúde (próteses e instrumentos cirúrgicos) e alimentícia (equipamentos e tubulações) é a principal causa do acréscimo de contaminações que podem, eventualmente, originar problemas de saúde pública e de ordem econômica. Para prevenir, controlar ou erradicar biofilmes, alternativas tecnológicas vêm sendo desenvolvidas e testadas em materiais com propriedades antimicrobianas. Dentro deste contexto, este trabalho teve por objetivo avaliar as propriedades antimicrobianas dos íons prata (Ag+) implantados no aço inoxidável austenítico AISI 304 a baixa energia (4 keV) no equipamento Ion Plating Diversified (IPD). As bactérias estudadas foram Escherichia coli (IBEc 101) e Staphyloccocus aureus (ATCC 6538). As simulações de Monte Carlo previram para uma determinada energia de polarização, o perfil de dose e profundidade de íons Ag+ implantados no aço. A análise físico-química apresentou doses de prata, na ordem de grandeza de 1016 átomos/cm2 em profundidades menores do que 10 nm. A densidade areal de átomos de prata implantados foi influenciada pela relação entre o índice de corrente de emissão e o tempo de processo. Os resultados microbiológicos obtidos apresentaram uma significativa redução na aderência bacteriana (95% de E. coli e 90% de S. aureus) em relação aos seus controles. Porém, impurezas como o oxigênio encontrado na superfície das amostras alteraram a capacidade de aderência das células bacterianas. A variação do pH do meio de cultura fez com que a repulsão eletrostática entre as células bacterianas e a superfície sólida aumentasse para valores de pH próximos da neutralidade e diminuísse para valores de pH não alcalinos, interferindo desta forma, na adesão das bactérias. Ainda que faltem dados que comprovem seu rendimento e o custo total do produto tratado, existe uma enorme perspectiva de tornar o processo IPD em escala industrial. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, CNPq / The biofilms are a new form of life that offers greater resistance to microorganisms, protecting them against physical and chemical aggressions of the surroundings, which facilitate its adaptation in adverse conditions. The development of pathogenic biofilms on contact surfaces used in the health and food industries is the main cause of increased contamination that can, eventually, lead to public health problems and economic order. To prevent, control or eradicate biofilms, technological alternatives are being developed and tested in materials with antimicrobial properties. Within this context, this study aimed to evaluate the antimicrobial properties of silver ions (Ag+) implanted on the surface of austenitic stainless steel AISI 304 by the technique of ion implantation at low energy (4 keV) in an Ion Plating Diversified (IPD) equipment. The bacteria studied were Escherichia coli (IBEc 101) and Staphylococcus aureus (ATCC 6538). The simulations Monte Carlo has predicted for a given energy of polarization, the dose and depth profile of ions Ag+ implanted in steel. Physico-chemical analysis presented doses of silver, in the order of magnitude of 1016 atoms/cm2 at depths less than 10 nm. The areal density of silver atoms implanted was influenced by the relationship between the emission current index and the process time. The microbiological results obtained showed a significant reduction in bacterial adhesion (95% for E. coli and 90% for S. aureus) in relation to its controls. However, impurities such as oxygen found on the surface of samples altered the adhesion of the bacterial cells. The variation of the pH of the culture medium caused the electrostatic repulsion between bacterial cells and solid surface increases to pH values close to neutrality and to shrink to no alkaline pH values, interfering in this way, in the adhesion of bacteria. Missing data yet proving their income and the total cost of the product treated, there is a huge prospect of making the process IPD on an industrial scale.

Orientadores: Jaime Aparecido Cury, Claudia de Mattos Bellato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-04T22:02:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leme_AdrianaFrancoPaes_D.pdf: 2753472 bytes, checksum: 173787317b0f0d3cfb8bd986c229086d (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A cárie dental é uma doença biofilme-dependente e os carboidratos fermentáveis são considerados os fatores ambientais chaves envolvidos na iniciação e desenvolvimento desse processo. Algumas hipóteses baseadas na estrutura, composição e cinética dos íons no biofilme têm sido sugeridas para explicar a maior cariogenicidade do biofilme dental formado na presença de sacarose. Dentre estas, a expressão diferencial de proteínas bacterianas e presença ou ausência de proteínas salivares no biofilme formado na presença e ausência de sacarose tem sido sugerida. Essa tese é composta de dois artigos. O primeiro discute o papel da sacarose na formação do biofilme dental cariogênico e o segundo avalia as proteínas do biofilme formado in situ na presença da sacarose. Entre as várias hipóteses para explicar a menor concentração de íons no biofilme, a hipótese da ausência de proteínas ligadoras de cálcio no biofilme formado na presença de sacarose parece explicar esse fenômeno. No segundo estudo, proteínas ligadoras de cálcio foram identificadas somente no biofilme formado na ausência de sacarose, o que ajudaria a explicar a alta concentração de cálcio na sua matriz. Proteínas de origem bacteriana também foram identificadas e a maioria está associada com funções de manutenção do metabolismo energético, síntese de aminoácidos, tradução e proteínas relacionadas ao estresse. Diferentes proteínas de resposta ao estresse foram expressas nas duas condições avaliadas, sugerindo respostas específicas de adaptação para o biofilme formado na presença e ausência de sacarose. Nossos resultados mostram que a caracterização e estudo da função da proteína no biofilme dental podem ajudar a elucidar importantes aspectos envolvidos na iniciação e desenvolvimento da cárie dental / Abstract: Dental caries is a biofilm-dependent oral disease, and fermentable dietary carbohydrates are the key environmental factors involved with its initiation and development. Some hypotheses based on the structure, composition and ion kinetic aspects of biofilm have been suggested to explain the cariogenicity of biofilm formed in the presence of sucrose. Among them, the differential expression of bacteria proteins and the presence and absence of salivary proteins in biofilm formed in the presence and absence of sucrose has been suggested. Thus, this thesis was comprised by two manuscripts. The first discusses the role of sucrose in cariogenic dental biofilm formation and the second evaluates the proteins from biofilm formed in situ in the presence of sucrose. Among the hypotheses to explain the low inorganic concentration in the biofilm, the absence of calcium-binding proteins in biofilm formed in the presence of sucrose can help explain it. In the second study, calcium-binding proteins were identified only in biofilm formed in the absence of sucrose and help explain the higher calcium concentration in biofilm matrix. Proteins from oral microorganisms were also identified and most of them were associated to housekeeping functions, such as energy metabolism, amino acid biosynthesis, translation and stress-related proteins. Different stress-responsive proteins were expressed in the two conditions evaluated, suggesting specific adaptive-response in biofilms formed in the presence and absence of sucrose. Our results show that the characterization and the study of protein function in dental biofilm help explain important aspects involved with the initiation and development of dental carles / Doutorado / Cariologia / Doutor em Odontologia

Orientador: Cinthia Pereira Machado Tabchoury / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T03:11:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vale_GlauberCampos_M.pdf: 1460431 bytes, checksum: f4cea9778bfb8ccab5e73849a9b301a1 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O biofilme dental exposto a sacarose in situ por 13 dias ou mais apresenta altas concentrações de polissacarídeos extra-celulares (PEC), altas contagens da lactobacilos e baixa concentração inorgânica. Entretanto, essas mudanças e suas conseqüências em estágios inferiores de formação de biofilme são desconhecidas. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a composição microbiológica e bioquímica do biofilme dental formado na presença de sacarose ou glicose + frutose em diferentes tempos, com a finalidade de observar a dinâmica de maturação do biofilme e sua relação com a desmineralização do esmalte. Doze voluntários adultos utilizaram em 3 fases cruzadas de 14 dias, um dispositivo intra-oral palatino contendo 6 blocos de esmalte dental humano, os quais foram expostos 8 vezes ao dia aos seguintes tratamentos: água destilada e deionizada (T1), solução de glicose 10% + frutose a 10% (T2) ou solução de sacarose a 20% (T3). O biofilme foi coletado após 3, 7 e 14 dias de formação e avaliado quanto à composição microbiológica e bioquímica. A análise microbiológica consistiu nas contagens de microrganismos totais (MT), estreptococos totais (ET), estreptococos do grupo mutans (EM), lactobacilos (LB), %EM/MT, %EM/ET e LB/MT. As variáveis bioquímicas avaliadas foram Ca, F, Pi, polissacarídeos intra (PIC) e extracelulares (PEC) no biofilme. Nos espécimes dentais, a perda mineral do esmalte seccionado longitudinalmente foi determinada. Maior desmineralização foi encontrada nos blocos submetidos ao T3 do que nos tratados com T1 e T2 (p < 0,05), sendo a perda mineral considerada significante a partir de 7 dias (p < 0,05). As concentrações de F, Ca e Pi no biofilme dental foram menores no T2 e T3 do que no T1 (p < 0,05), ), sendo que para F e Ca não houve diferença entre os tempos (p > 0,05) e para Pi, 7 e 14 dias mostraram maiores concentrações que no biofilme de 3 dias (p < 0,05). As concentrações de PIC foram significantemente maiores no T2 e T3 do que no T1 (p < 0,05), havendo um aumento com 7 e 14 dias, enquanto as de PEC foram maiores no T3 do que no T1 e T2 (p < 0,05), não mostrando diferença entre os tempos. Em relação à composição microbiana, os resultados mais evidentes foram em relação à contagem de LB e %LB/MT que apresentaram-se maiores no biofilme tratado com T2 e T3 do que no T1, entretanto essa diferença só foi observada a partir do 7o. dia (p < 0,05). Os resultados sugerem que mudanças na composição do biofilme formado na presença de sacarose já são evidentes a partir do 3o. dia de formação, entretanto a perda mineral só é significativa com 7 dias / Abstract: Dental biofilm exposed in situ to sucrose for 13 days or longer presents high concentration of extracellular polysaccharide (EPS), high lactobacilli counts and low inorganic concentration. However, these changes and their consequences at earlier stages of biofilm formation are unknown. Thus, the aim of this study was to evaluate the microbiological and biochemical composition of dental biofilm formed in the presence of sucrose or glucose + fructose at different periods, in order to observe its dynamic of maturation and its relationship with enamel demineralization. Twelve adult volunteers wore, for 3 crossover phases of 14 days, an intra-oral palatal appliance containing 6 human enamel blocks, which were exposed 8 times/day to the following treatments: distilled and deionized water (T1), 10% glucose + 10% fructose solution (T2) or 20% sucrose solution (T3). The biofilm was collected after 3, 7 and 14 days of formation and evaluated with regard to microbiological and biochemical composition. Microbiological analyses consisted in counts of total microorganisms (TM), total streptococci (TS), mutans streptococci (MS), lactobacilli (LB), %MS/TM, %MS/TS and %LB/TM. The biochemical variables evaluated were F, Ca, Pi, intra (IPS) and extracellular (EPS) polysaccharides. In dental specimens, enamel cross-sectional mineral loss was determined. Higher mineral loss was found in enamel blocks treated with T3 than those exposed to T1 and T2 (p < 0.05), however only with 7 days the mineral loss was considered significant (p < 0.05). The concentrations of F, Ca and Pi in dental biofilm were lower in T2 and T3 than in T1 (p < 0.05). Also, for F and Ca no difference was observed among the periods (p > 0.05) and for Pi, 7 and 14-day biofilm showed higher concentrations than 3-day biofilm (p < 0.05). IPS concentrations were significantly higher in T2 and T3 than in T1 (p < 0.05), showing increased concentrations with 7 and 14 days (p < 0.05), whereas EPS concentration did not show statistical difference among the periods (p > 0.05), but showed higher values in T3 than in T1 and T2 (p < 0.05). With respect to microbiological composition, the most evident results were related to LB counts and % LB/TM that showed higher values in T2 and T3 than in T1 (p < 0.05), but this difference was observed only with 7-day biofilm (p < 0.05). The results suggest that the changes on composition of biofilm formed under sucrose exposure are evident at 3 days of formation, however the mineral loss is only significant with 7 days of biofilm formation / Mestrado / Cariologia / Mestre em Odontologia

Orientadores: Francisco Carlos Groppo, Pedro Luiz Rosalen / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T14:44:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cogo_Karina_M.pdf: 1252832 bytes, checksum: c6cff0a881e182ed79ce20ff045dd117 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Existem evidências de que o biofilme presente na região subgengival é o principal agente etiológico das doenças periodontais. O uso do cigarro tem sido associado com a progressão da doença periodontal bem como com a redução da resposta à terapia aplicada a essa doença. Alguns estudos têm indicado uma forte relação entre o hábito de fumar e o consumo de café. No entanto, os mecanismos pelos quais o cigarro e o consumo de café podem afetar o tecido periodontal ainda não foram totalmente esclarecidos. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro os efeitos da nicotina, cotinina e cafeína na viabilidade de algumas espécies bacterianas da microbiota subgengival. Biofilmes mono-espécie de Streptococcus gordonii, Porphyromonas gingivalis e Fusobacterium nucleatum e as combinações de biofilme com duas espécies, S. gordonii + F. nucleatum e F. nucleatum + P. gingivalis foram desenvolvidos em discos de hidroxiapatita banhados em saliva artificial. Um total de sete espécies foi avaliado como células planctônicas, incluindo as espécies acima mencionadas e o Streptococcus oralis, Streptococcus mitis, Propionibacterium acnes e Actinomyces naeslundii. As espécies bacterianas foram incubadas com ou sem nicotina, cotinina e cafeína nas concentrações que variaram de 0,37 a 400 µg/mL para células planctônicas e 400 µg/mL para biofilme. O crescimento das células planctônicas e do biofilme foi avaliado pelos testes de susceptibilidade e "time-kill", respectivamente. Os resultados do teste de susceptibilidade mostraram que a nicotina reduziu o crescimento da S. gordonii (400 µg/mL) e S. oralis (0,37-400 µg/mL); a cotinina estimulou o crescimento das espécies A. naeslundii (0,37 µg/mL) e F. nucleatum (0,37-400 µg/mL) e reduziu o crescimento da S. oralis (400 µg/mL); e a cafeína estimulou o crescimento da F. nucleatum (400 µg/mL). Nos' testes de "time-kill" foram observados um aumento do crescimento do biofilme mono-espécie de F. nucleatum e uma redução da viabilidade do biofilme mono-espécie de S. gordonii, após 24 horas e 48 horas de exposição à cotinina e à cafeína, respectivamente. Es~es resultados indicam que a nicotina, cotinina e cafeína podem afetar, embora em pequena extensão, o crescimento e a viabilidade das espécies bacterianas orais estudadas / Abstract: There are significant evidences that subgingival accumulation of bacterial biofilm is the etiologic agent in periodontal diseases. Cigarette smoking might result in progression of periodontitis and in impaired response to periodontal therapy. Some studiesindicated a strong relationship between cigarette smoking and coffee drinking. However, the mechanisms by which smoking and coffee consumption affect the periodontium are not clear. The purpose of this in-vitro study was to evaluate the effects of nicotine, cotinine, and caffeine on the viability of some bacterial species from the oral microbiota. Single-species biofilms of Streptococcus gordonii, Porphyromonas gingivalis, and Fusobacterium nucleatum and dual-species biofilms of S. gordonii + F. nucleatum and F. nucleatum + P. gingivalis were grown on hydroxyapatite discs. Seven species were studied as planktonic cells, including Streptococcus oralis, Streptococcus mitis, Propionibacterium acnes, Actinomyces naeslundii, and the species mentioned above. Bacteria were incubated in either O or 0.37 to 400 µg/mL of nicotine, cotinine or caffeine for planktonic cells and O or 400 µg/mL for biofilm. The viability of planktonic cells and biofilms was analyzed by susceptibility tests and time-kill assays, respectively. "Susceptibility Tese' showed that nicotine reduced the growth of S. gordonii (400 µg/mL) and S. oralis (0.37-400µg/mL); cotinine stimulated the growth of A. naeslundii (0.37 µg/mL) and F. nucleatum (0.37 -400 µg/mL) and reduced the growth of S. oralis (400 µg/mL), and caffeine stimulated the growth of F. nucleatum (400 µlg/mL). Results of "Killing Assays" showed an enhanced growth of F. nucleatum in single-species biofilm and a reduced viability of S. gordonii in single-species biofilm, 24 h and 48 h after exposure to cotinine and caffeine, respectively. These findings indicated that nicotine, cotinine and caffeine could slightly affect the growth and viability of some oral bacterial strains / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestre em Odontologia

Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T15:07:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Conceicao_RogerioArcuri1983-_M.pdf: 10424524 bytes, checksum: 89cbe29adc4a8c5ae6d006047d311953 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Escherichia coli Patogênica Extra-intestinal (ExPEC) forma um grupo bacteriano heterogêneo quanto a fatores de virulência envolvidos em sua patogenicidade e locais de infecção no hospedeiro. Nosso trabalho teve como objetivo estudar as características fenotípicas e genotípicas da formação do biofilme e filogenia de amostras de Escherichia coli associada à sepse humana (SEPEC), assim como seus padrões de adesão e invasão às células renais (Vero) e endoteliais (Hec-1B). SEPEC mostrou alta prevalência na capacidade de formar biofilme (82,2%) "in vitro", em superfícies de plásticos, sugerindo envolvimento das fimbria tipo 1 (fimH), antígeno 43 (ag43) e antígenos de curli (csgA). No estudo filogenético, 26 (53,2%) amostras de SEPEC foram classificadas como pertencentes ao grupo D, 19 (38,8%) ao grupo B2, 2 ao grupo A (4,0%) e 2, classificadas como pertencentes ao grupo B1 (4,0%). Outras adesinas, invasinas e toxinas como mat (adesina regulada pela temperatura e associada à meningite), iha (Adesina regulado por ferro), neuC (polissacarídeo capsular K1), gimB (ilha de patogenicidade associada à meningite neonatal), ibeA (relacionada à invasão do endotélio cerebral) e tia (locus de invasão toxigênico em E. coli Enterotoxigênica), foram detectadas em freqüências de 38,8%, 32,7%, 24,5%, 12,2%, 10,2%, 18,4%, 69,4% e 57,1%, respectivamente. No teste de adesão, 100% das amostras de SEPEC aderiam e invadiram tanto células Vero como Hec-1B. Através de microscopia eletrônica de transmissão, foram verificados pontos da adesão bacteriana em células Hec-1B, com formações de pedestais entre a membrana plasmática e as células bacterianas. A microscopia eletrônica de varredura, em células Vero, demonstrou pontos da adesão de SEPEC sobre a superfície celular, com a formação de microcolônias envoltas por exopolissacarídeos (EPS) / Abstract: Extraintestinal Pathogenic Escherichia coli (ExPEC) form a heterogeneous group as the bacterial virulence factors involved in its pathogenicity and local infection in the host. Our work aimed study the phenotypic and genotypic characteristics of biofilm formation and phylogeny of sepsis-associated Escherichia coli Human (SEPEC), as well as their patterns of invasion and adhesion to kidney (Vero) and endothelial (Hec-1B) cells. SEPEC showed high prevalence in the ability to form in vitro biofilm (82.2%) on plastic surfaces, suggesting involvement of type 1 fimbriae (fimH), antigen 43 (ag43) and curly fimbriae (csgA). In phylogenetic analysis, 26 (53.2%) SEPEC strains were classified as belonging to group D, 19 (38.8%) to group B2, 2 in group A (4.0%) and 2, classified as belonging to group B1 (4.0%). Others adhesins, toxins and invasin mat (adhesin temperature- egulated associated with meningitis), iha (iron-regulated adhesin), neuC (capsular polysaccharide K1), gimB (pathogenicity island associated with neonatal meningitis), ibeA (brain microvascular endothelial cells invasion) and tia (toxigenic invasion locus from Enterotoxigenic E. coli), were detected at frequencies of 38.8%, 32.7%, 24.5%, 12.2%, 10.2%, 18, 4%, 69.4% and 57.1%, respectively. In the adhesion test, 100% of SEPEC strains adhered and invaded both Vero cells and Hec-1B. Through transmission electron microscopy, were found parts of bacterial adhesion in Hec-1B cells, with the formation of pedestals between the cytoplasmic membrane and bacterial wall-cell. The scanning electron microscopy in Vero cells, showed the accession of points SEPEC on the cell surface, with the formation of microcolonies surrounded by exopolysaccharides (EPS) / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

A Mycobacterium abscessus subspécie abscessus é um pesadelo quando envolvida em infecção pulmonar que são incuráveis, a despeito do uso de antimicrobianos com atividade in vitro, caso o tratamento não inclua a ressecção cirúrgica da área afetada. É a micobactéria patogência de crescimento rápido mais frequentemente isolada de culturas de sítios pulmonares. Há um número reduzido de opções terapêuticas para o tratamento dessas infecções, e é ainda mais reduzido o número de antimicrobianos que atingem concentrações terapêuticas no compartimento intracelular, em particular no fagossomo. O número limitado de antimicrobianos disponíveis para tratamento apontam a necessidade de determinação do perfil de susceptibilidade frente a antimicrobianos isolados e em combinação, nos compartimentos intra e extracelular. Os objetivos deste estudo foram avaliar: a sensibilidade de M. abscessus estruturadas em biofilmes e presentes no interior dos macrófagos; a ocorrência de sinergismo quando da associação entre fármacos, inibidores de betalactamase e o anti-inflamatório. As combinações entre os antimicrobianos foram apenas indiferente quanto ao FIC e a atividade dos fármacos em biofilme e em macrófagos é bacteriostático. / Mycobacterium abscessus subspecies abscessus is a nightmare when involved in lung infection that is incurable, despite the use of antibiotics with in vitro activity, if the treatment does not include surgical resection of the affected area. It is a MCR - rapidly growing mycobacteria pathogenic most frequently isolated from cultures of lung sites. There are a small number of therapeutic options for the treatment of such infections is further reduced and the number of drugs that reach therapeutic concentrations in the intracellular compartment, particularly in the phagosome. The limited number of antimicrobials available for treatment indicate the need for determining the susceptibility profile against antimicrobials alone and in combination, in the intra and extracellular compartments. The objectives of this study were sensitivity of MCR structured biofilms and present in macrophages, the occurrence of synergism when the association between drugs, beta-lactamase inhibitors and anti-inflammatory. Combinations of antimicrobials were just indifferent and the activity of drugs on biofilms and macrophages was bacteriostatic.