Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-08-23T17:03:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 689039 bytes, checksum: 27e53b6de7b54d46e280835f480113c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-23T17:03:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 689039 bytes, checksum: 27e53b6de7b54d46e280835f480113c9 (MD5) Previous issue date: 2017-07-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A ordem Hemiptera é dividida nas subordens: Sternorryncha, Coleorryncha, Heteroptera e Auchenorryncha. Heteroptera constitui um dos maiores grupos de insetos formado por 75 famílias, entre elas Anthocoridae. A família Anthocoridae possui cerca de 600 espécies em todo o mundo, sendo que Amphiareus constrictus e Blaptostethus pallescens são espécies predadoras que podem ser usadas no controle biológico de pragas agrícolas. O entendimento das relações filogenéticas, bem como da biologia reprodutiva dessas espécies podem contribuir para o manejo e uso desses insetos no controle de pragas. Considerando que desde 1950 os espermatozoides têm sido utilizados como uma importante ferramenta em várias áreas da biologia, incluindo a taxonomia e filogenia. Nós apresentamos neste trabalho informações sobre a estrutrura e ultraestrutura dos espermatozoides de A. constrictus e B. pallescens, usando técnicas de microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Os espermatozóides de A. constrictus e B. pallescens são finos e longos, medindo 220 μm e 185 μm de comprimento, dos quais 36 μm e 17 μm correspondem aos núcleos, respectivamente. Quando corados com DAPI (para DNA), a metade posterior do núcleo em B. pallescens apresentou pouca fluorescência. Enquanto que em A. constrictus esta característica foi observada somente nos últimos 5 μm. Em ambas as espécies, como em Heteroptera em geral, os espermatozóides têm, na região da cabeça, um acrossomo e núcleo, e na região flagelar, um axonema com 9 + 9 + 2 microtúbulos, dois derivados mitocondriais (DMs) e um adjunto centríolo na transição núcleo-flagelo. No entanto, ao contrário da maioria dos Heteroptera, nessas espécies, os DMs são assimétricos e o adjunto centríolo é bastante longo e circunda completamente a extremidade nuclear posterior e as pontas anteriores dos DMs. Essas características podem ser consideradas como derivadas, apoiando assim a condição derivada de Anthocoridae dentro de Cimicomorpha. Além disso, vários traços dos espermatozóides dessas duas espécies distinguem facilmente uma espécie (e provavelmente uma tribo) da outra, por exemplo, a diferença de formatos nos DMs e a longa projeção anterior do adjunto centríolo paralelo ao núcleo em B. pallescens. / The order Hemiptera is divided into four suborders: Sternorryncha, Coleorryncha, Heteroptera and Auchenorryncha. Heteropterais one of the largest groups of insects, is made up of 75 families, among them Anthocoridae. The Anthocoridae family has about 600 species worldwide, and Amphiareus constrictus and Blaptostethus pallescens are predatory species that can be used in the biological control of agricultural pests. The understanding of the phylogenetic relationships, as well as the reproductive biology of these species can contribute to the management and use of these insects in pest control. Considering that since 1950 spermatozoa have been used as an important tool in several areas of biology, including taxonomy and philogeny. We present in this work information on the structure and ultrastructure of spermatozoa of A. constrictus and B. pallescens using microscopy techniques of light and transmission electronics. The spermatozoa of A. constrictus and B. pallescens are fine and long, measuring 220 μm and 185 μm in length, of which 36 μm and 17 μm correspond to the nuclei, respectively. When stained with DAPI (for DNA), the posterior half of the nucleus in B. pallescens exhibited low fluorescence. While in A. constrictus this feature was observed only in the last 5μm. In both species, as in Heteroptera in general, the spermatozoa have in the head region an acrosome and nucleus, and in the flagellar region, an axoneme with 9 + 9 + 2 microtubules, two mitochondrial derivatives (MDs), and a centriole adjunct in the nucleus-flagellum transition. However, unlike most Heteroptera, in these species, the MDs are asymmetric and the centriole adjunct is quite long, and circulates completely the posterior nuclear end, and the anterior tips of the MDs. These features can be are considered as derived, thus supporting the condition derived of Anthocoridae within Cimicomorpha. In addition, several traits of the spermatozoa of these two species easily distinguish one species (and probably a tribe) from the other, for example, the difference of formats in the MDs, and the long anterior projection of the centriole adjunct parallel to the nucleus in B. pallescens.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-25T13:00:50Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2438121 bytes, checksum: 254e4736b353b33dece0ddecd4cd997e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T13:00:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2438121 bytes, checksum: 254e4736b353b33dece0ddecd4cd997e (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os Hemiptera são insetos hemimetábolos distribuídos dentre quatro subordens monofiléticas, Sternorrhyncha, cujas relações Auchenorrhyncha filogenéticas e são Heteroptera. estudadas: Estes Coleorrhyncha, insetos apresentam diversificados hábitos alimentares que variam dentre a fitofagia, zoofagia, dentritivoria, hematofagia e onivoria. Devido a esta variedade de hábitos e o conhecimento da filogenia dos táxons superiores do grupo, os hemípteros tornam-se interessantes modelos de estudos comparativos do intestino. Analisando-se a compartimentalização da digestão e a produção de enzimas no intestino médio de insetos foi levantada a hipótese de que características deste órgão eram semelhantes entre espécies relacionadas filogeneticamente mesmo que estas apresentassem diferentes hábitos alimentares. Estudos comparativos visando investigar esta questão sob o viés morfológico ainda eram ausentes na literatura. Devido a isso, com o objetivo de testar, sob o ponto morfológico, a hipótese de que a evolução do intestino médio em insetos é mais relacionada à proximidade filogenética das espécies que ao hábito alimentar, analisamos a ultraestrutura das células digestivas do intestino médio em Hemiptera levando-se em conta seus diferentes hábitos alimentares e filogenia. Esta análise evidenciou que em Hemiptera as células digestivas do intestino médio são polifuncionais responsáveis pela produção e secreção de enzimas, absorção de nutrientes, reserva de nutrientes, neutralização de compostos tóxicos e osmorregulação. Além disso, as células digestivas são similares, apresentando em todas as espécies, membrana perimicrovilar, microvilosidades, núcleo bem desenvolvido e estruturas de reserva, apesar dos diferentes hábitos alimentares apresentados por estas. Portanto, a ultraestrutura das células digestivas em Hemiptera é mais relacionada à proximidade filogenética das espécies. / Hemiptera are hemimetabolus insects distributed among four monophyletic suborders whose phylogenetic relationships are studied: Coleorrhyncha, Sternorrhyncha, Auchenorrhyncha and Heteroptera. These insects present diverse feeding habits that vary of the phytophagia, zoophagy, detritivore, hematophagy and omnivorism. Due to this variety of diets and the high level phylogeny of the group, Hemiptera become interesting models of midgut comparative studies. Analyzing the compartmentalization of digestion and enzymes production in the insects midgut, was raised the hypothesis that these characteristics were similar among phylogenetically related species even if these presented different eating habits. Comparative studies aiming to investigate this question under the morphological point still were absent in the literature. In order to test the morphological hypothesis that the evolution of the midgut in insects is more related to the phylogenetic proximity of the species than to the diet, we analyzed the ultrastructure of the Hemiptera midgut digestive cells taking into account their different eating habits and phylogenetic relationships. This analysis evidenced that in Hemiptera midgut digestive cell were polyfunctional been responsible for the production and secretion of enzymes, nutrient absorption, nutrient reserve, neutralization of toxic compounds and osmoregulation. In addition, the digestive cells are similar, presenting in all species, perimicrovilar membrane, microvilli, well developed nucleus and reserve structures, in spite of the different alimentary habits presented by these. Therefore, the ultrastructure of the digestive cells in Hemiptera is more related to the phylogenetic proximity of the species.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-10-23T15:48:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 680444 bytes, checksum: 3ad59d2a4a04bcdc7a9e97242f50382d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-23T15:48:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 680444 bytes, checksum: 3ad59d2a4a04bcdc7a9e97242f50382d (MD5) Previous issue date: 2017-07-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Alguns alimentos e determinados nutrientes têm sido associados com o sucesso reprodutivo dos animais ao longo da história. Entre estes, a melancia (Citrullus lanatus), uma fruta pertencente à família Cucurbitaceae, destaca-se por conter importantes componentes fitoquímicos , como o licopeno e a citrulina, sendo que a L-citrulina é um aminoácido isolado da melancia e tem papel na reprodução. Neste trabalho buscou-se avaliar os efeitos da suplementação com extratos de melancia e o aminoácido L-citrulina, sobre os parâmetros testiculares, através de análises morfométricas, estereológicas e hormonal, utilizando-se camundongos albinos Swiss adultos como modelo experimental. Foi feita a extração alcóolica de cada parte da melancia em separado, sendo este extrato submetido à quantificação do aminoácido L-citrulina. Utilizamos 80 camundongos Swiss adultos, com 230 dias de idade, divididos em 8 grupos. O grupo (G1) recebeu água destilada; o grupo (G2) recebeu o aminoácido L-citrulina, na dose de 30 mg/kg de peso corporal; o grupo (G3) recebeu Citrato de Sildenafila, na dose equivalete a um humano de 70kg de peso corporal; o grupo (G4) recebeu extrato da casca/entrecasca com o equivalente de 30 mg/kg de L-citrulina; o grupo (G5) recebeu extrato da casca/entrecasca com o equivalente de 60 mg/kg de L-citrulina; o grupo (G6) recebeu extrato da polpa com o equivalente de 30 mg/kg de L-citrulina; o grupo (G7) recebeu extrato da polpa com o equivalente de 60 mg/kg de L-citrulina e o grupo (G8) recebeu 0,035 g de liofilizado do extrato da semente de melancia ressuspendido em água destilada. O volume diário que cada animal recebeu foi de 0,8mL, ministrados por gavagem, em dose única, durante 39 dias. Os grupos G4, G5, G6, G7, e G8 mostraram aumento no diâmetro do epitélio do túbulo seminífero em comparação com o grupo não tratado (G1) e também com os grupos G2 e G3. Foi observado em G7 aumento da altura do epitélio, sendo que nos demais grupos tratados as alturas do epitélio foram maiores, embora sem significância em relação ao grupo não tratado. O grupo G8 destacou-se dos demais na produção do hormônio testosterona. Os extratos promoveram aumento dos parâmetros como diâmetro de túbulo e altura do epitélio, bem como dos níveis de testosterona sérica. Houve ainda aumento das áreas tubular e epitelial, evidenciando incremento da espermatogênese. / Nutrition has been associated with the reproductive success of animals throughout history. The watermelon (Citrullus lanatus) is a fruit belonging to the family Cucurbitaceae, being one of the cultivars more produced in the world and of great economic importance. Among the main phytochemical components of watermelon are lycopene and citrulline. L-citrulline is an amino acid isolated from watermelon and has a role in reproduction. The aim of this study was to evaluate the effects of supplementation with watermelon extracts on testicular parameters through morphometric, stereological and hormonal analyzes using adult Swiss albino mice as an experimental model. The alcoholic extraction of each part of the watermelon was done separately, being this extract subjected to the quantification of the amino acid L-citrulina. Were used 80 adult Swiss mice, with 230 days of age, divided into 8 groups. Group (G1) received only distilled water; The G2 group received the amino acid L- citrulline at a dose of 30 mg / kg body weight; The group (G3) received Sildenafil citrate, the dose being calculated in equivalence to a human of 70 kg body weight; Group (G4) received bark / ribs extract with the equivalent of 30 mg of the amino acid L-citrulline per kg body weight; The group (G5) received bark / ribs extract with the equivalent of 60 mg of the amino acid L-citrulline per kg of body weight; Group (G6) received pulp extract with the equivalent of 30 mg of the amino acid L-citrulline per kg of body weight; (G7) received pulp extract with the equivalent of 60 mg of the amino acid L-citrulline per kg of body weight and group (G8) received 0.035 g of lyophilized extract of the watermelon seed resuspended in distilled water. The daily volume that each animal received was 0.8 mL, given by gavage in a single dose for 39 days. Groups G4, G5, G6, G7, and G8 showed an increase in the diameter of the seminiferous tubule epithelium compared to the untreated group (G1) and also to the G2 and G3 groups. G7 increased the height of the epithelium, and in the other treated groups the epithelium heights were higher, although not statistically significant in relation to the untreated group. The watermelon extract promoted increased parameters such as tubule diameter and height of the epithelium, as well as serum testosterone levels. There was also an increase in epithelial area signaling increasing spermatogenesis.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-05-13T15:14:43Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1203710 bytes, checksum: 13bfbcd1c9950629b1067c5108f7e184 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-13T15:14:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1203710 bytes, checksum: 13bfbcd1c9950629b1067c5108f7e184 (MD5) Previous issue date: 2009-07-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Dengue vírus, membro da família Flaviviridae, é o agente etiológico da dengue e é transmitido através da picada do mosquito Aedes aegypti. Até o momento não existe tratamento específico, e o controle da doença baseia-se na tentativa de conter o mosquito vetor, desse modo a Organização Mundial de Saúde considera de extrema importância o desenvolvimento de uma vacina eficaz contra esta doença. Neste contexto, foi construído um candidato vacinal pCID2Et expressando a proteína E truncada do vírus dengue-2, sem a expressão concomitante de prM. Testes demonstraram correta, porém reduzida expressão de E, e apenas uma pequena porcentagem de camundongos imunizados foi protegida quando desafiados com vírus dengue-2. Estes resultados justificam o aprimoramento desta construção vacinal, buscando o aumento da expressão de proteína E e assim proporcionar uma imunização mais eficaz. Desse modo, nosso objetivo foi aprimorar este plasmídeo através da inserção das proteínas prM/DENV-2 e prM/DENV-3. Neste ínterim foram construídos dois plasmídeos pCID2EtprMD2 e pCID2EtprMD3, cujas análises bioquímicas já realizadas indicaram aumento de expressão relativo de proteína E de 67,02% por pCID2EtprMD3 com relação a pCID2EtprMD2. Para avaliar os efeitos da expressão aumentada de proteína E na imunogenicidade dos plasmídeos foi realizada a avaliação imunogênica dos mesmos. Os plasmídeos pCID2EtprMD3, pCID2EtprMD2 e pCID2Et foram utilizados na imunização de camundongos e os resultados demonstraram que pCID2EtprMD3 apresentou maior indução do sistema imune, tanto em relação à expressão de células TCD4 + e TCD8 + de memória quanto em relação à secreção de anticorpos específicos para a proteína E. / The Dengue virus, member of the Flaviviridae family, is the etiological agent of the dengue disease, and its transmitted trough the bite of Aedes aegypti mosquitoes. There isn t a specific treatment so far, and the disease control is based on trying to control the mosquito vectors. Thus, the development of an efficient vaccine has been considered high priority by the World Health Organization (WHO). In this context, a vaccinal candidate pCID2Et expressing the truncated DENV-2 - E protein, without the concomitant expression of prM has been constructed. Tests demonstrated that the E protein was correctly expressed but in reduced quantity and only a small percentage of the immunized mice was protected when challenged with DENV-2. These results justify the improvement of this vaccine candidate aiming the increasing of E protein expression in order to achieve a more efficient immunization. This way, our objective was the improvement of this plasmid through the insertion of the prM/DENV-2 e prM/DENV-3. So, we constructed two recombinant plasmids pCID2EtprMDEN2 e pCID2EtprMD3, witch reveled by biochemical analysis that there was a relative expression increase of 67,02% by pCID2EtprMDEN3 in relation to pCID2EtprMDEN2. In order to evaluate the effects of this better expression on plasmid immunogenicity, we performed some immunologic analysis of these plasmids. The plasmids were utilized in animal vaccination and the results showed that pCID2EtprMD3 had increased induction of the immune system xiiiwhen compared to pCID2EtprMD2 an pCID2Et, both in relation to the expression of TCD4 + e TCD8 + total and memory cells, as on the secretion of specific anti-E antibodies. / Dissertação antiga, sem ficha catalog. e Folha de aprov.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-01T16:28:46Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2181156 bytes, checksum: 1a75ca604e9d172abff343dcc414bc44 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T16:28:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2181156 bytes, checksum: 1a75ca604e9d172abff343dcc414bc44 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses são uma das mais significantes doenças tropicais negligenciadas em todo o mundo, apresentando cerca de 1,3 milhão de novos casos anualmente e 20.000 a 30.000 mortes no mesmo período. Leishmania braziliensis é a principal espécie responsável pela Leishmaniose Tegumentar no Novo Mundo, sendo o Brasil o país com a maior incidência da doença frente a outros países da América do Sul. O arsenal terapêutico contra a Leishmaniose Tegumentar é ainda bastante restrito, e mesmo quando eficazes, as drogas de escolha causam efeitos colaterais graves. Dessa forma, este trabalho é parte de um esforço de várias instituições nacionais e internacionais, financiado pela Comunidade Europeia através do consórcio A- ParaDDisE (http://a-paraddise.cebio.org/), cujo objetivo é a descoberta de novas drogas para o tratamento de doenças parasitárias negligenciadas, incluindo as Leishmanioses. Enzimas modificadoras de Histonas (HMEs), como as histonas deacetilases (HDACs), estão envolvidas em processos celulares cruciais, como a ativação e inibição da expressão gênica. Inibidores dessas enzimas têm sido investigados como drogas candidatas para aplicação na quimioterapia de uma variedade de doenças, incluindo o câncer e doenças parasitárias, uma vez que eles inibem a progressão do ciclo celular e/ou induzem a apoptose. Neste trabalho foram testados compostos inibidores de HMEs (iHMEs), enviados por pesquisadores parceiros do consórcio A-ParaDDisE, em formas promastigotas axênicas e amastigotas intracelulares de L. braziliensis em infeção de células hospedeiras (macrófagos da linhagem Raw 264.7). Os resultados mostram diferentes efeitos para esses iHMEs em promastigotas e amastigotas, como observado para os compostos BSF38 e BSF39, que apresentaram efeito significante em promastigotas, mas não em amastigotas. Já o composto BSF2 foi eficaz em matar tanto as formas promastigotas axênicas quanto as amastigotas intracelulares, atingindo cerca de 95% de ação leishmanicida, similar à droga controle Anfotericina B. Além disto, a toxicidade destes compostos para macrófagos foi mínima ou não existiu. Sendo assim, o BSF2 pode ser considerado um bom alvo para continuidade do desenvolvimento de novas drogas leishmanicidas com ação sobre L. braziliensis. / Leishmaniasis is one of the major neglected tropical diseases worldwide, featuring about 1.3 million new cases annually and 20.000 - 30.000 deaths in the same period. Leishmania braziliensis is the main species responsible for cutaneous leishmaniasis in New World, and Brazil is the country with the highest incidence of the front disease to other countries in South America. The therapeutic arsenal against cutaneous leishmaniasis is still quite limited, and even when effective, the choice drugs cause serious side effects. Thus, this work is part of an effort of several national and international institutions, financed by the European Community by the consortium A-ParaDDisE (http://a-paraddise.cebio.org/), whose objective is the discovery of new drugs for the treatment of neglected parasitic diseases, including leishmaniasis. Histone modifying enzymes (HMEs), such as histone deacetylases (HDACs), are involved in key cellular processes such as activation and inhibition of gene expression. Inhibitors of these enzymes have been studied as candidate drugs for use in the chemotherapy of a variety of diseases, including cancer and parasitic diseases since they inhibit cell cycle progression and / or induce apoptosis. In this study we tested HMEs compounds inhibitors (iHMEs), submitted by A-ParaDDisE research partners, in promastigotes and intracellular amastigotes of L. braziliensis infection in host cells (macrophages of Raw 264.7 lineage). The results show different effects of these iHMEs in promastigotes and amastigotes, as observed for compounds BSF38 and BSF39, which showed significant effect in promastigotes, but not in amastigotes. BSF2 compound was effective in killing both promastigotes axenic forms as intracellular amastigotes, reaching about 95% of leishmanicidal action, similar to drug control Amphotericin B. In addition, the toxicity of these compounds to macrophages was minimal or did not exist. Thus, the BSF2 can be considered a good target for continued development of new drugs acting against L. braziliensis.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-10-16T15:09:11Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 989533 bytes, checksum: 691738d9623dc109309055a3300f56c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T15:09:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 989533 bytes, checksum: 691738d9623dc109309055a3300f56c3 (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O vírus da Dengue é um arbovírus da família Flaviviridae que acomete grande parte da população mundial, possuindo quatro sorotipos (1-4), os quais ocasionam respostas imunes duradouras, mas diferentes. São vírus de RNA fita simples com polaridade positiva de aproximadamente 11Kb, codificando 10 proteínas, sendo 3 delas estruturais e 7 não estruturais. Estudos revelam que peptídeos de secreção de anfíbios possuem várias funções, dentre elas estão atividades antiviral e antimicrobiana, com isso, sequências destes peptídeos vêm sendo sintetizadas e testadas in vitro, a fim de obter compostos ativos para a fabricação de drogas de amplo espectro e de múltipla aplicabilidade. Os peptídeos de atividade antimicrobiana (PAM) são os mais estudados e eles devem apresentar uma toxicidade seletiva e rápida ação frente aos microorganismos. Por não existir nenhuma droga antiviral eficaz conta o vírus em questão, temos por objetivo avaliar a atividade antiviral de um peptídeo sintético, denominado HS-1, onde sua sequência foi obtida previamente da secreção do anfíbio anuro Hypsiboas semilineatus. Após realizar um teste de citotoxicidade, foram realizados ensaios de neutralização a fim de se investigar seu mecanismo de ação contra o vírus da dengue. Com o intuito de verificar uma possível proteção dos receptores celulares, o peptídeo foi incubado previamente com as células, em um ensaio posterior o peptídeo foi incubado previamente com o vírus, para verificar se o PAM agia sobre a partícula viral e em seguida foram realizados ensaios para verificar se o peptídeo tinha ação sobre a adsorção, internalização e replicação viral. Os resultados foram promissores, pois mostraram que o peptídeo em questão age sobre a partícula viral dos 4 sorotipos da dengue de uma forma muito eficaz, sendo que nas maiores concentrações a inibição chega a 100%, além de ter efeito sobre a inibição da adsorção, o que foi observado para os sorotipos 2 e 3. / Dengue virus is an arbovirus of Flaviviridae family, which has been the most within the world population. There are four serologic types of dengue virus (DENV 1-4), which cause long lasting, though different, immune responses. They are single positive-strand RNA viruses with of approximately 11Kb in length. This RNA is responsible for encoding 10 proteins, 3 structural and 7 non-structural. Several studies reveal that some peptides from skin of amphibians have antimicrobial and antiviral activities. Therefore, sequences of these peptides were synthesized and tested in vitro in order to obtain biologically active compounds to develop drugs with wide spectrum and multiple applicability. The antimicrobial peptides are the most studied and they must present a selective toxicity and quick action against microorganism. Effective drugs against dengue virus haven’t been developed yet. Thereat, the present study aimed to evaluate the antiviral activity against dengue virus of the synthetic peptide HS-1, which sequence was previously obtained from the skin of the anuran Hypsiboas semilineatus. In the cytotoxicity assay, and afterwards neutralization assays were performed to investigate the mechanism of action of the HS-1 peptide against Dengue virus. The first neutralization assay was carried out to determine whether the HS-1 peptide could confer protection to cell receptors against viral infection. For this, the peptide was pre-incubated with VERO cells. In the second neutralization assay the peptide was pre-incubated with Dengue virus to evaluate the ability of this peptide to act directly on viral particle. The subsequent assays were performed in order to determine whether the peptide would act over adsorption, internalization and virus replication. The results were promising; they showed that the peptide in question acts on the viral particle of the four dengue serotypes in a very effective manner. With higher concentrations of peptide, the inhibition reached 100%. In addition, it was found very promising results against inhibition adsorption to serotypes 2 and 3.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:36:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GilDF.pdf: 614986 bytes, checksum: d1c9bd0c9c48f246603e34c3399c231b (MD5) Previous issue date: 2007-06-28 / Goat breeding in the state of Rio Grande do Norte, Brazil has promising economic possibilities, with the proper handling of the natural resources. The introduction of specialized animals has been one of the ways used to improve herd genetics and increase productivity. However, climate has been one of the regional factors that most interferes with the adaptation of the new genetic prevalence resulting from the introduction of exotic breeds, because in their country of origin, the air temperature during most of the year is lower than the animals body temperature. With this in mind, the aim of this study was to characterize behavioral, physiological and morphological profiles and milk production of female Saanen goats belonging to different genetic groups raised in the semi-arid region of Rio Grande do Norte in Northeast Brazil. The study was conducted in the city of Lages (5? 42 00 S and 36? 14 41 W). We used 25 lactating female Saanen goats, distributed into 3 genetic groups: 5 purebred animals, 11 three-quarter bred and 9 half-bred. Behavioral observations were made over three consecutive days in the months of August and September, between 09:00 and 11:30h, when the animals were grazing. Physiological and meteorological data were recorded in the last three days of June, July, August and September at 05:00h and at 16:00h. In the semi-intensive breeding system, the animals from different genetic groups were similar in both field behavior and physiological response patterns. Although the purebred goats had longer hair, they did not show symptoms of thermal discomfort. Their white hair helped to reflect the short wavelength rays and thus eliminate those at the longer wave lengths. We concluded that the animals raised in the semi-intensive milk production system in this study seem to have adapted to the climatic conditions of the semi-arid region of Rio Grande do Norte, Brazil / A caprinocultura do Rio Grande do Norte abrange grande possibilidade econ?mica, com o manejo adequado dos recursos naturais. A introdu??o de animais especializados tem sido uma das maneiras utilizadas para aumentar a produtividade introduzindo uma melhor gen?tica aos rebanhos. Todavia, o clima t?m sido um dos fatores regionais que mais interferem na adapta??o da nova preval?ncia gen?tica com a introdu??o de ra?as ex?ticas, pois em seus pa?ses de origem, geralmente, a temperatura do ar apresenta, na maior parte do ano, valores mais baixos que os do corpo do animal. Neste sentido, o objetivo de presente estudo foi caracterizar a atividade comportamental e perfis fisiol?gicas, morfol?gicas e o desempenho leiteiro de f?meas da ra?a caprina Saanen, pertencentes a diferentes grupos gen?ticos, criados no semi-?rido do Rio Grande do Norte. O trabalho foi conduzido no munic?pio de Lages nas coordenadas geogr?ficas de latitude 5? 42 00 Sul e longitude 36? 14 41 Oeste. Foram utilizadas 25 f?meas em lacta??o da ra?a Saanen, distribu?das em 3 grupos gen?ticos : 5 animais puros, 11 animais ? e 9 animais ?. As observa??es comportamentais foram realizadas durante tr?s dias consecutivos no m?s de agosto e no m?s de setembro, das 09:00 ?s 11:30 horas, per?odo o qual os animais ficavam no pasto. Os dados fisiol?gicos e meteorol?gicos foram registrados nos ?ltimos tr?s dias dos meses de junho, julho, agosto e setembro ?s 05:00 e ?s 16:00 horas. No sistema de cria??o semi-intensiva, os animais de diferentes grupos gen?ticos apresentaram padr?es semelhantes de comportamento em n?vel de campo e em rela??o ?s respostas fisiol?gicas. Quanto aos dados morfol?gicos, embora as cabras puras tenham apresentado p?los de maior comprimento, os animais n?o demonstraram sintomas de desconforto t?rmico. A cor branca do pelo contribuiu para a reflex?o dos raios de onda curta e, conseq?entemente, para a elimina??o dos raios de onda longa. Portanto, os animais criados no sistema semi-intensivo de produ??o de leite deste estudo parecem estar adaptados ?s condi??es clim?ticas do semi-?rido do Rio Grande do Norte

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-10-04T13:54:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1012064 bytes, checksum: 4afa27336f4b5af38cc608a70309aaf8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-04T13:54:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1012064 bytes, checksum: 4afa27336f4b5af38cc608a70309aaf8 (MD5) Previous issue date: 2016-11-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As Leishmanioses são doenças parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania e suas manifestações clínicas podem ser do tipo Leishmaniose Cutânea, Leishmaniose Mucocutânea e Leishmaniose Visceral. Constitui importante problema de saúde pública sendo endêmicas em 88 países com aproximadamente 12 milhões de infectados. Para o tratamento são utilizados os antimoniais pentavalentes e como medicação alternativa, a Anfotericina B e Pentamidina. O arsenal terapêutico é bastante limitado, vários medicamentos têm efeitos colaterais significativos e os parasitos muitas vezes são resistentes às drogas disponíveis. Baseado na necessidade do desenvolvimento de novas drogas para o tratamento das Leishmanioses, neste presente trabalho foi testado o potencial leishmanicida de trinta e um compostos derivados do ácido cinâmico contra Leishmania (Viannia) brasiliensis, agente etiológico da Leishmaniose Tegumentar Americana no Novo Mundo. Dentre esses compostos, vinte e um contém o núcleo 1,2,3- triazólico e quatro contém uma porção izobenzofuranona. A triagem inicial foi feita em macrófagos utilizando os compostos na concentração de 10 μM e nenhum deles apresentou efeito tóxico. No ensaio de citotoxicidade direta sobre formas promastigotas, após 48 horas, um deles, o (E)-3-(3,4,5- trimetoxifenil)-acrilato de 3-oxo-1,3-diidroisobenzofuran-5-ila, identificado como S2, apresentou taxa de 52,25% de inibição de crescimento dos parasitos, valor aproximado do efeito da droga controle Anfotericina B (46,62%). Em ensaios de infecção do parasito em macrófagos, após 72 horas, quatro compostos: Cinamato de (1-(2,5-diclorobenzil)-1H-1,2,3-triazol-4- il)metila (MP05), Cinamato de (1-(2,4,6-triclorobenzil)-1H-1,2,3-triazol-4- il)metila (MP06), Cinamato de (1-(4-metoxibenzil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metila (MP25) e novamente o (E)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-acrilato de 3-oxo-1,3- diidroisobenzofuran-5-ila (S2), inibiram a sobrevivência de amastigotas em 78,98%, 80,12%, 76% e 70,89% respectivamente. Conforme os resultados obtidos, tais compostos mostram-se potenciais para o tratamento da Leishmaniose Tegumentar Americana. / Leishmaniasis are parasitic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and its clinical manifestations may be of the Cutaneous Leishmaniasis type, Mucocutaneous Leishmaniasis and Visceral Leishmaniasis. It is an important public health problem and it has being endemic in 88 countries with approximately 12 million infected people. For the treatment, pentavalent antimonials are used and as an alternative medication, they use amphotericin B and pentamidine. The therapeutic arsenal is quite limited, several drugs have significant side effects and the parasites are often resistant to the available drugs. Based on the need for the development of new drugs for the treatment of Leishmaniasis, in this present work the leishmanicidal potential of thirty-one acid cinnamic derived compounds against Leishmania (Viannia) brasiliensis, etiological agent of American Cutaneous Leishmaniasis in the New World, was tested. Among these compounds, twenty-one contains the 1,2,3-triazole nucleus and four contains an izobenzofuranone portion. Initial screening was done on macrophages by using the compounds at the concentration of 10 μM and none of them showed a toxic effect. In the direct cytotoxicity assay on promastigote forms, after 48 hours, one of them, (E) -3- (3,4,5-trimethoxyphenyl) acrylate 3-oxo-1,3- dihydroisobenzofuran-5-yl, identified as S2, presented a 52.25% rate of inhibition of parasite growth, the approximate value of the control drug Amphotericin B (46.62%). In parasite infection trials on macrophages, after 72 hours, four compounds: (1- (2,5-Dichlorobenzyl) -1H-1,2,3-triazol-4-yl) methyl cinnamate (MP05), Cinnamate (1- (2,4,6-trichlorobenzyl) -1H-1,2,3-triazol-4- yl) methylamine (MP06), 1- (4-Methoxybenzyl) -1H-1,2,3- 4-yl) methylamine (MP25) and (E) -3- (3,4,5-trimethoxyphenyl) acrylate 3-oxo-1,3- dihydroisobenzofuran-5-yl (E2) refrained the survival of amastigotes in 78.98%, 80.12%, 76% and 70.89% respectively. According to the obtained results, such compounds are shown to be potential for the treatment of American Cutaneous Leishmaniasis.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-05-24T13:20:21Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3999297 bytes, checksum: 3df888fff3753cef075cf9629a59a85d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-24T13:20:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3999297 bytes, checksum: 3df888fff3753cef075cf9629a59a85d (MD5) Previous issue date: 2017-07-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A abelha Apis mellifera tem importância ecológica e econômica, no entanto, sofre um declínio populacional, talvez devido à exposição a compostos tóxicos, que são excretados pelos túbulos de Malpigui. Durante a metamorfose de A. mellifera, os túbulos de Malpigui degeneram e são formados de novo. O objetivo deste trabalho foi verificar os eventos celulares na renovação dos túbulos Malpighi, acompanhando na metamorfose, quais as etapas da remodelação celular, determinando os tipos celulares e seus papéis na atividade excretora e inicio do controle homeostático em A. mellifera. As análises ultraestruturais e de imunofluorescência mostraram que as células dos túbulos de Malpighi de larvas degeneraram por apoptose e autofagia (larva L5S e pré-pupa) e novos túbulos de Malpigui são formados por proliferação celular. (larva L5S e pupa de olhos castanhos). A ultraestrutura das células dos túbulos de Malpigui sugere que uma remodelação celular ocorra a partir de pupa de olhos marrons, indicando o inicio de uma atividade de excreção nos túbulos de Malpigui pupais. Em abelhas adultas (recém-emergida e forrageira), dois tipos celulares ocorrem nos túbulos de Malpigui, um com características ultraestruturais de produção da urina primária e outro tipo de célula com características que sugerem um papel na reabsorção da urina primária. Este estudo sugere que, durante a metamorfose, os túbulos de Malpigui não são funcionais até pupa de olhos castanhos, indicando que A. mellifera pode ser vulnerável a compostos tóxicos nas primeiras nas fases pupais. Além disso, a ultraestrutura celular sugere que os túbulos Malpigui podem ser funcionais a partir de pupa de olhos marrons e adquirem maior complexidade na abelha operária forrageira. Nos insetos, o intestino posterior é um órgão homeostático, sendo este dividido em piloro, íleo e reto, que reabsorvem água, íons e pequenas moléculas produzidas na filtragem da hemolinfa e nas fezes. Esse estudo reporta as mudanças morfológicas e os eventos celulares que ocorrem no intestino posterior durante a metamorfose da abelha A. mellifera. No intestino posterior, a imunolocalização de autofagossomos e a ultraestrutura as células epiteliais e do revestimento cuticular sugerem que em pré-pupa tem início a degradação cuticular, que em pupas de olhos brancos e rosas é reabsorvida e reciclada por autofagossomos, sendo a deposição da nova cutícula em pupa de olhos castanhos. Em larva L5S e pré-pupa, o intestino posterior apresenta proliferação celular em suas extremidades anterior e posterior. Na pupa, as regiões do piloro, íleo e reto estão evidentes e com proliferações celulares que cessam a partir de pupa de olhos marrons. Apoptose ocorre de larva L5S até pupa de olhos rosas. Em pupas de olhos castanhos e marrons, o epitélio do íleo muda de pseudoestratificado para simples somente após a produção da lâmina basal e o epitélio retal é achatado. Nas células do íleo de pupa de olhos pretos ocorrem grandes vacúolos e espaços subcuticulares, enquanto que na operária adulta forrageira, ocorrem invaginações apicais longas e muitas mitocôndrias, sugerindo uma atividade no transporte de compostos. Os resultados mostram que a morfogênese do intestino posterior é dinâmica, com remodelações teciduais e eventos celulares para a formação de diferentes regiões do órgão, reconstrução de uma nova cutícula e remodelação dos músculos viscerais. / The honeybee Apis mellifera has ecological and economic importance, however, experience a population decline, perhaps due to exposure to toxic compounds, which are excreted by Malpighian tubules. During metamorphosis of A. mellifera, the Malpighian tubules degenerate and are formed de novo. The objective of this work was to verify the cellular events of the Malpighian tubules renewal and accompany in the metamorphosis, which are the gradual steps of cell remodeling, determining different cell types and their roles in the excretory activity and onset of homeostatic control in A. mellifera. Immunofluorescence and ultrastructural analyses showed that the cells of the larval Malpighian tubules degenerate by apoptosis and autophagy (larvae instar L5S and prepupae) and the new Malpighian tubules are formed by cell proliferation (L5S larvae until light-brown eyed pupae). The ultrastructure of the cells in the Malpighian tubules suggest that cellular remodeling only occurs from dark-brown eyed pupae, indicating the onset of excretion activity in pupal Malpighian tubules. In adult bees (newly emerged and forager), two cell types occur in the Malpighian tubules, one with ultrastructural features of primary urine production and another cell type with characteristics that suggest a role in primary urine reabsorpotion. This study suggest that during the metamorphosis, Malpighian tubules are non-functional until the light-brown eyed pupae, indicating that A. mellifera may be more vulnerable to toxic compounds at early pupal stages. In addition, cell ultrastructure suggests that the Malpighian tubules may be functional from dark-brown eyed pupae and acquire greater complexity in the forager worker bee. In insects, the hindgut is a homeostatic region of the digestive tract, divided into pylorus, ileum, and rectum, that reabsorbs water, ions, and small molecules produced during hemolymph filtration. The hindgut anatomy in bee larvae is different from that of adult workers. This study reports the morphological changes and cellular events that occur in the hindgut during the metamorphosis of the honeybee Apis mellifera. We describe the occurrence of autophagosomes and the ultrastructure of the epithelial cells and cuticle, suggesting that cuticular degradation begins in prepupae, with the cuticle being reabsorbed and recycled by autophagosomes in white- and pink- eyed pupae, followed by the deposition of new cuticle in light-brown-eyed pupae. In L5S larvae and prepupae, the hindgut undergoes cell proliferation in the anterior and posterior ends. In the pupae, the pylorus, ileum, and rectum regions are differentiated, and cell proliferation ceases in dark-brown-eyed pupae. Apoptosis occurs in the hindgut from the L5S larval to the pink-eyed pupal stage. In light-brown- and dark-brown-eyed pupae, the ileum epithelium changes from pseudostratified to simple only after the production of the basal lamina, whereas the rectal epithelium is always flattened. In black-eyed pupae, ileum epithelial cells have large vacuoles and subcuticular spaces, while in adult forager workers these cells have long invaginations in the cell apex and many mitochondria, indicating a role in the transport of compounds. Our findings show that hindgut morphogenesis is a dynamic process, with tissue remodeling and cellular events taking place for the formation of different regions of the organ, the reconstruction of a new cuticle, and the remodeling of visceral muscles.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-11T08:45:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2070709 bytes, checksum: 8aca4e1bccb3e3a726679695fe3ab253 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-11T08:45:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2070709 bytes, checksum: 8aca4e1bccb3e3a726679695fe3ab253 (MD5) Previous issue date: 2014-08-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Serine-Arginine Protein Kinase 2 - SRPK2 é uma cinase reguladora de fatores de splicing não-snRNPs (proteínas SR), e de fatores snRNPs (U4⁄U6-U5 tri-snRNP). SRPK2 regula as proteínas SR fosforilando-as em seus resíduos de serina e recrutando- as para a formação do spliceossomo, enquanto atua na formação do complexo U4⁄U6- U5 tri-snRNP, envolvido na seleção do sítio de splicing γ’. As interações com fatores snRNP e não-snRNP são conhecidas e bem estabelecidas funcionalmente, no entanto, pouco se sabe sobre proteínas que regulam o funcionamento da SRPK2, e sobre demais alvos de fosforilação. As proteínas SRPKs possuem seu domínio cinase divido em dois por uma região espaçadora de grande flexibilidade estrutural, passível de interação. Portanto, possível responsável pela seleção de substratos e/ou alvo de regulação. Nosso objetivo com este trabalho foi encontrar novas interações proteicas de SRPK2 através de sua região espaçadora. A técnica escolhida foi o duplo-híbrido em leveduras, no qual estas foram cotransformadas com o plasmídeo pBTM116K/S-SRPK2 trp1 e com uma biblioteca de cDNAs de leucócitos humanos em pACT2 leu2. O experimento foi processado em meio restritivo SD–TRP –LEU –HIS, acrescido de 30mM de 3AT e mantido em estufa 30°C por 120 horas. Ao final deste período, foi verificado o crescimento de 119 colônias de leveduras, submetidas a diferentes testes de ativação dos genes repórteres his3 e lacZ. Os resultados destes testes nos levaram a seleção de 42 clones, que tiveram seus DNAs plasmidiais extraídos, sequenciados e analisados pela ferramenta Blast do NCBI. As proteínas codificadas por estes genes estão funcionalmente relacionadas a processos celulares como biogênese ribossomal, migração, diferenciação, angiogênese, proliferação, sobrevivência e ciclo celular. Estes resultados sugerem novos mecanismos moleculares para a atuação da SRPK2 no processo tumorigênico. / Serine-Arginine Protein Kinase 2 - SRPK2 is a regulator kinase of non-snRNP splicing factors (SR proteins) and of snRNPs factors (U4⁄U6-U5 tri-snRNP). SRPK2 regulates SR proteins phosphorylating them on their serine and recruiting them for the formation of the spliceosome, while acts on the tri-snRNP U4/U6-U5 complex assembly, involved in the splicing γ’ site selection. The interactions with snRNP and non-snRNP factors are known and well-established functionally, however, little is known about the proteins that regulate the functioning of SRPK2, and about other targets of phosphorylation. The SRPKs proteins have their kinase domain divided into two by a spacer region of great structural flexibility, believable of interaction. Therefore, possible responsible for selection of substrates and/or aim of regulation. Our aim with this work was to find new protein interactions of SRPK2 by its space region. The technique chose was two-hybrid yeast, in which yeasts were cotransfected with pBTM116K/S-SRPK2 trp1 plasmid and a human leukocyte cDNA library in pACT2 leu2. The experiment was processed in restrictive medium SD –TRP –LEU –HIS, plus 30 mM of 3AT and keep in a incubator 30°C for 120 hours. At the end of this period, it was found the growth of 119 yeast colonies, subjected a different tests of activation of reporter genes his3 and lacZ. The results of these tests led to the selection of 42 clones, which had its plasmid DNA extracted, sequenced and analyzed by the NCBI Blast tool. The proteins encoded by these genes are functionally related in cellular processes as ribosome biogenesis, migration, differentiation, angiogenesis, proliferation, survival and cell cycle. These results suggest new molecular mechanisms for the performance of SRPK2 in tumorigenic process. / Sem lattes