Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-10-02T11:49:35Z No. of bitstreams: 1 475296 - Texto Completo.pdf: 1059884 bytes, checksum: dfe493d659fd6e13b6ac8c1bcc09a9aa (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-02T11:49:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 475296 - Texto Completo.pdf: 1059884 bytes, checksum: dfe493d659fd6e13b6ac8c1bcc09a9aa (MD5) Previous issue date: 2015-02-13 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS / Neonatal exposure to lipopolysaccharides (LPS) generates a stressful stimulus capable of affecting the development of important systems, which causes lasting behavioral and neuroendocrine alterations. The aim of this study is to evaluate the response to an inflammatory stimulus in Balb/c mice exposed to LPS-induced neonatal stress at different ages and genders. Mice underwent intraperitonial injections on postnatal days 3 and 10 with either LPS (100ug/Kg) or saline solution. After 21 or 60 days of age, either saline solution was injected or an inflammatory stimulus was induced by the injection of 1% carrageenan. Inflammatory cytokines, reactive oxygen species and NETs production were measured in the peritoneal lavage. Our findings indicate that LPS-induced neonatal stress can reduce inflammatory cytokines in young animals, males and females. In adults, however, only females showed the same response pattern. In nLPS group, an increase in NETs production was observed in animals that were 60-days-old when compared to 21-days-old in both genders, which indicates an effect of neonatal stress on the ontogeny of NETs formation. The production of ROS was not affected by neonatal stress, even though an increased production was found among adults regardless of neonatal intervention. The results shown here indicate that LPS-induced neonatal stress can alter cytokine production in response to inflammatory stimuli at different ages, in a gender dependent way. Moreover, it seems like the formation of NETs throughout life is also influenced by alterations undergone during the neonatal period. / A exposi??o neonatal ao lipopolissacar?deo (LPS) gera um estimulo estressor capaz de afetar o desenvolvimento de importantes sistemas, dando origem a altera??es comportamentais e neuroend?crinas duradoras. O objetivo desta disserta??o ? avaliar a resposta a um est?mulo inflamat?rio em camundongos Balb/c submetidos ? estresse neonatal por LPS em diferentes idades e sexos. Os camundongos receberam, no 3? e 10? dias de vida, inje??o i.p. de LPS (100?g /Kg) ou solu??o salina. Ap?s 21 ou 60 dias de vida, os mesmos foram submetidos ? inje??o de solu??o salina ou a um est?mulo inflamat?rio atrav?s da inje??o de carragenina 1%. Foram mensurados no lavado peritoneal citocinas inflamat?rias, esp?cies reativas de oxig?nio e produ??o de Redes Extracelulares de Neutr?filos (NETs). Os resultados encontrados demonstram que o estresse neonatal por LPS diminui a libera??o de citocinas inflamat?rias nos animais jovens machos e f?meas. J? nos adultos, somente as f?meas apresentaram a mesma resposta. Foi encontrado um aumento na produ??o de NETs nos animais do grupo nLPS com 60 dias quando comparado com animais nLPS com 21 dias, em ambos os sexos, indicando um efeito do estresse neonatal sobre a ontogenia da forma??o de NETs. A produ??o de ROS n?o sofreu influ?ncia do estresse neonatal, por?m foi encontrada uma maior produ??o na idade adulta, independente da interven??o neonatal. Os resultados do presente estudo indicam que o estresse neonatal por LPS altera a produ??o de citocinas em resposta a um est?mulo inflamat?rio em diferentes idades, em um efeito dependente do sexo. Al?m disso, parece que a forma??o de NETs ao longo da vida tamb?m ? influenciada pelas altera??es no per?odo neonatal.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-10-26T11:19:38Z No. of bitstreams: 1 475882 - Texto Completo.pdf: 18258562 bytes, checksum: 5b76b66a03e3116f7e13505a183443a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T11:19:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 475882 - Texto Completo.pdf: 18258562 bytes, checksum: 5b76b66a03e3116f7e13505a183443a8 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The major depressive disorder (MDD) is a psychiatric condition which profoundly alters with the brain metabolism and neurochemistry characterized by a state of deep, chronic sadness, accompanied by anhedonia, sensation of worthlessness and lack of motivation, often leading the patient to suicide. The ventral tegmental area (VTA) is an important dopaminergic region intimately associated with the pathophysiology of MDD. Ketamine is a drug that antagonizes the glutamatergic NMDA receptors which has been shown to exert an immediate antidepressant effect and the treatment with ketamine is a promising new alternative for MDD therapeutic. Furthermore, the small animal positron emission tomography (microPET) is a technique which allows the assessment of the temporal-spatial distribution of radiolabelled molecules in vivo, and the utilization of 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) as a radiotracer for this analysis still needs standardization in our University. In this sense, this thesis has been divided into two stages. Firstly, we standardized the brain metabolic assessment technique using 18F-FDG associated with microPET in Wistar rats, and with it, we rendered a neurometabolic atlas of the distribution of 18F-FDG in 56 brain regions. We compared our neurometabolic data with data from five other scientific articles which assessed the biochemical and immunohistochemical activity of cytochrome c oxidase (COX), these techniques are traditionally used for assessment of ex vivo brain metabolism. Thus, we ranked the regions analyzed in our study and the regions from the selected COX studies, and correlated the rankings with the Spearman test for non-parametric ranked data correlation. In this study we detailed the distribution of 18F-FDG in the brain of Wistar rats. On four of the selected studies we did not find a correlation, only on Shumake at al.?s study we found a moderate correlation (r=0.56, p=0.023). In the second stage, we analyzed the influence of acute ketamine treatment on the depressive-like behavior, the glucose metabolism and tyrosine hydroxylase activity (TH) (a rate-limiting dopamine synthesis enzyme) in the VTA of animals exposed to the chronic unpredictable stress (CUS). In this study, 48 Wistar rats were divided into four groups: 1-Control, 2-Ketamine, 3-CUS, 4-CUS+Ketamine. The animals undergone the CUS protocol were expose to several stressors, twice-daily, for 28 consecutive days. The treatment consisted of a single intraperitoneal injection of 10mg/kg of ketamine. For the behavioral analysis the sucrose preference test, the open field test, and the forced swim test were executed. The glucose metabolism and TH immunoreactivity in the VTA were analyzed by 18F-FDG-microPET and immunohistochemistry for TH, respectively. The CUS groups showed a decrease in sucrose solution intake and an increase in the immobility time on the forced swim test, and ketamine treatment was able to reverted the depressive-like behavior (p<0.05. The CUS protocol and ketamine treatment did not influence upon the 18F-FDG uptake or the TH immunoreactivity in the VTA. The results obtained in this thesis aid on the standardizing of the use of 18F-FDG with microPET, for the analyses on brain metabolism in our university. Furthermore, with the CUS protocol, we confirmed the acute, antidepressant effect of ketamine, however, our finds indicated that this effect is not related to metabolic or dopaminergic physiology in the VTA. / O transtorno depressivo maior (MDD) ? um dist?rbio psiqui?trico que altera profundamente a neuroqu?mica e o metabolismo encef?lico; caracterizado clinicamente por um estado de tristeza profunda cr?nica, acompanhada por anedonia, sensa??o de desvalia e falta de motiva??o, podendo levar o paciente a cometer suic?dio. A ?rea tegmental ventral (VTA) ? uma importante regi?o dopamin?rgica intimamente relacionada com a patofisiologia do MDD. A cetamina ? um f?rmaco antagonista de receptores NMDA glutamat?rgicos que apresenta um r?pido efeito antidepressivo e o tratamento agudo com cetamina ? uma promissora alternativa terap?utica para os pacientes com MDD. Ademais, a tomografia por emiss?o de p?sitrons para pequenos animais (microPET) ? uma t?cnica que permite avaliar a distribui??o temporal-espacial de mol?culas radiomarcadas in vivo, e a utiliza??o do 18F-Fluorodeoxiglicose (18F-FDG) como r?dio-tra?ador para este tipo de an?lise ainda necessita ser padronizada junto a nossa Universidade. Deste modo, esta tese de doutorado foi dividida em duas etapas. Primeiramente, padronizamos a t?cnica de an?lise do metabolismo encef?lico de ratos Wistar com uso de 18F-FDG associada ao microPET, e com isso confeccionamos um atlas neurometab?lico detalhado da distribui??o de 18F-FDG em 56 regi?es encef?licas. Comparamos os dados neurometab?licos obtidos com dados de cinco artigos da literatura cient?fica que realizaram avalia??es bioqu?micas e imunoistoqu?micas da atividade do citocromo c oxidase (COX), t?cnicas tradicionalmente utilizadas para an?lise do metabolismo encef?lico ex vivo. Para a compara??o, ordenamos as regi?es analisadas em nosso estudo e as regi?es dos estudos de COX selecionados, ent?o correlacionamos estas ordena??es atrav?s do teste n?o param?trico de correla??o para dados ordenados de Spearman. Neste estudo detalhamos a distribui??o de 18F-FDG no enc?falo de ratos Wistar. Em quatro dos estudos selecionados n?o encontramos correla??o, somente com o estudo de Shumake et al. encontramos uma correla??o moderada (r=0,56, p=0,023). Na segunda etapa, analisamos a influ?ncia do tratamento agudo com a cetamina sobre o comportamento s?mil-depressivo, o metabolismo de glicose e a atividade da enzima tirosina hidroxilase (TH) (uma enzima limitante na s?ntese de dopamina) na VTA de animais submetidos protocolo de estresse cr?nico imprevis?vel (CUS). Neste estudo, 48 ratos Wistar foram divididos em quatro grupos: 1-Controle, 2-Cetamina, 3-CUS, 4-CUS+Cetamina. Os animais submetidos ao protocolo CUS foram expostos a estressores variados, duas vezes ao dia, por 28 dias consecutivos. O tratamento foi uma ?nica administra??o intraperitoneal de 10mg/kg de cetamina. Para an?lise comportamental foram realizados os testes de prefer?ncia a sacarose, campo aberto e nado for?ado. O metabolismo da glicose e a imunorreatividade para TH na VTA foram analisadas por meio do 18F-FDG-microPET e imunoistoqu?mica para TH, respectivamente. Os grupos CUS apresentaram uma diminui??o do consumo de solu??o de sacarose e um aumento no tempo de imobilidade no teste de nada for?ado e o tratamento com cetamina foi capaz de reverter o comportamento s?mil-depressivo (p<0,05). O protocolo CUS e o tratamento com cetamina n?o exerceram influ?ncia sobre a capta??o de 18F-FDG e a imunorreatividade para TH na VTA. Os resultados obtidos com esta tese de doutorado possibilitaram a padroniza??o do uso de 18F-FDG com microPET, para an?lise do metabolismo encef?lico de ratos Wistar em nossa Universidade. Ademais, com o uso do protocolo CUS, confirmou-se o efeito antidepressivo agudo da cetamina, contudo nossos achados indicam que este n?o ? relacionado a altera??es metab?licas ou da histofisiologia dopamin?rgica da VTA.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-10-27T10:18:03Z No. of bitstreams: 1 475905 - Texto Completo.pdf: 1401811 bytes, checksum: 19cd968fdd31375f38cfc99aff08663c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-27T10:18:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 475905 - Texto Completo.pdf: 1401811 bytes, checksum: 19cd968fdd31375f38cfc99aff08663c (MD5) Previous issue date: 2015-09-28 / In this study, we evaluated the antinociceptive, antiinflammatory and antioxidant effects of lavender essential oil. The antioxidant activity was tested in vitro and used as screening for subsequent experiments. In animals, the effect of lavender essential oil was compared to those displayed by known antiinflammatory and analgesic drugs (dexamethasone, tramadol and indomethacine). Attempts have been made in order to suggest a probable mechanism of action. Considering the pharmacological potential of the lavender essential oil, we have also investigated its possible toxic effects. We demonstrated that the dose of 0,6 g/kg is well tolerated orally. This dose was considered safe and was used in subsequent experiments. The antiinflamatory activity was tested using two models of acute inflammation: the pleurisy induced by carrageenan and the ear edema induced by croton oil. The inflammatory response evoked by carrageenan and by croton oil were reduced by the pre-treatment of animals with lavender oil. On pleurisy, the drug used as positive control, dexamethasone, was more efficacious. However, in the ear swelling, the antiedematogenic effect of the oil was similar to the obtained for dexamethasone.The antinociceptive activity was tested using the model of pain induced by formalin injection into the hind paw of rats. In this model, lavender oil consistently inhibited nociception and presented a similar effect to tramadol. This finding suggests that the mechanism involved in the antiinflammatory effect of lavender may be related to interference in the system of intracellular second messenger phospholipase C/inositol phosphate. In conclusion, the results of this study reveal remarkable analgesic and antiinflammatory activities for the lavender essential oil. Furthermore, the effectiveness of the oil associated with the low toxicity support the interest for the application of lavender essential oil in aromatherapy, and demonstrated its important therapeutic potential. / Neste estudo, foram avaliadas as atividades antinociceptiva, antiiflamat?ria e antioxidante do ?leo essencial de lavanda. A atividade antioxidante foi testada in vitro e serviu como screening para os experimentos posteriores. Em animais, o efeito do ?leo essencial de lavanda foi comparado com drogas analg?sicas e anti-inflamat?rias conhecidas (dexametasona, tramadol e indometacina, respectivamente). Isto foi feito na tentativa de sugerir um prov?vel mecanismo de a??o. Considerando o potencial terap?utico do ?leo essencial de lavanda foi realizado tamb?m um estudo de toxicidade aguda, no qual foi demonstrado que o ?leo essencial de lavanda na dose de 600 mg/kg ? bem tolerado oralmente. Esta dose foi considerada segura e utilizada nos experimentos posteriores. A atividade anti-inflamat?ria foi testada atrav?s de dois modelos de inflama??o aguda: pleurisia induzida por carragenina e edema de orelha induzido pelo ?leo de cr?ton. As respostas inflamat?rias produzidas pela carragenina e pelo ?leo de cr?ton foram significativamente reduzidas ap?s o tratamento com ?leo de lavanda.Enquanto na pleurisia a droga usada como controle, dexametasona, foi mais eficaz, no edema de orelha o efeito antiedematog?nico do ?leo foi similar ao observado para a dexametasona. A atividade antinociceptiva foi testada utilizando o modelo de dor induzida por formalina injetada na pata de ratos. Neste modelo, o ?leo de lavanda inibiu a nocicep??o espont?nea provocada pela formalina e apresentou efeito similar ao tramadol. Esses resultados sugerem que o mecanismo envolvido no efeito anti-inflamat?rio da lavanda pode estar relacionado a um antagonismo de receptores acoplados a prote?na G ou interfer?ncia no sistema de segundo mensageiros intracelulares fosfolipase C/fosfato de inositol. Em conclus?o, os resultados deste estudo revelam atividades anti-inflamat?rias e antinociceptivas do ?leo essencial de lavanda. Al?m disso, essas atividades paralelas ? baixa toxicidade encontrada tamb?m suportam o interesse para aplica??o do ?leo de lavanda na aromaterapia e demostram seu importante potencial terap?utico.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-12-09T10:02:14Z No. of bitstreams: 1 476575 - Texto Completo.pdf: 1094891 bytes, checksum: ee0be971c01fb37fae36fa4f70aa88b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-09T10:02:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 476575 - Texto Completo.pdf: 1094891 bytes, checksum: ee0be971c01fb37fae36fa4f70aa88b0 (MD5) Previous issue date: 2015-08-21 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Since the principles of management in agriculture by man, technology has increased exponentially, allowing rapid development of this sector. However, many improvements are linked to use of chemically synthesized compounds, with the environment and the human being exposed to these pollutants, often harmful. Nevertheless, the amount of these herbicides is increasing. The herbicide based on quinclorac, as Facet? acts as a growth inhibitor, immediately absorbed by germinated seeds, roots and leaves and then transported to the plant. This agent is commonly applied in rice fields and in southern Brazil, the quinclorac is most often detected in studies with agrochemical residues used on these crops and is considered a major water contaminant. Several animal studies have demonstrated the negative biological effect of this xenobiotic, as changes in behavior, development and production of corticosteroids, which may cause malformations, cell differentiation and reproduction problems. Given the high sensitivity of tadpoles to environmental stressors, we choose as model Lithobates catesbeianus species, which has, among ran?dae family, a great plasticity and toughness, due probably to be an introduced species in Brazil. To perform this study were acquired 79 tadpoles with 4 months old, on stage 25 (pro metamorphic) of the Gosner table. Animals were divided into tanks of 60L of water with constant aeration in natural photoperiod and temperature, pH of 7.4, fed ad libitum on chow. Since there was manipulation and euthanasia of animals, the study was submitted to the Ethics Committee on Animal Use (CEUA) of PUCRS.The herbicide was added at day 8 in X1 concentrations (0,05?g/L), X2 (0,1?g/L), X3 (0,2?g/L) and X4 (0,4?g/L). The objective of the research was to analyze the possible alterations in the activity of antioxidant enzymes and levels of lipid peroxidation (LPO) liver; as well as the levels of corticosterone (CORT), glucose and uric acid (UA) in plasma after exposure of the herbicide. Since there was no difference between groups control 7 days (C7) and control 14 days (14), except for the UA as the groups were compared with the C14, where they show the same development time of exposed. The results showed significant differences in LPO, especially in animals exposed concentration 0.1 ? g/L (X1) of the herbicide; also induces the increased activity of GST, SOD and CAT; After it followed by a decrease in this activity where noticed in the case of SOD, CAT and GST, an inverse relationship between the concentration of the pesticide and the response of the enzyme system. However, these results did not determine an increase in lipoperoxidation and even cause death to the animal suggesting a high constitutive activity of these enzymes and / or the presence of a non-enzymatic antioxidant system rather desenvolvido.The plasma corticosterone levels showed differences between the groups X1 (0,05?g/L) and X4 (0,4?g/L), a decrease in X4, deducting a decreased responsiveness of animals to prolonged exposure front seven days, at higher concentrations of the pesticide; this response being coupled to increased glucose levels in X3. The UA levels showed a significant reduction in X4 group, however, for further findings on the use of this molecule and its role as an antioxidant by the non-enzymatic system will require new studies. / Desde os princ?pios do manejo com agricultura pelo homem, a tecnologia tem aumentado de modo exponencial, permitindo a r?pida evolu??o deste setor. Por?m, muitas melhorias est?o atreladas a utiliza??o de compostos quimicamente sintetizados, sendo o meio ambiente e o pr?prio ser humano expostos a estes poluentes, muitas vezes nocivos. Mesmo assim, a quantidade desses herbicidas ? crescente. Herbicidas a base de quinclorac, como o Facet? atuam como inibidores do crescimento, sendo imediatamente absorvidos por sementes germinadas, ra?zes e folhas e ent?o translocados para a planta. Este agente ? comumente aplicado em lavouras de arroz e, no sul do Brasil, o quinclorac ? o mais frequentemente detectado em estudos com res?duos de agroqu?micos utilizados nestas lavouras, sendo considerado um grande contaminante de ?guas. Diversos estudos com animais tem demostrado o efeito biol?gico negativo de xenobiontes, como altera??es no comportamento, desenvolvimento e produ??o de corticoides, podendo acarretar malforma??es, problemas de diferencia??o celular e reprodu??o. Tendo em vista a alta sensibilidade de girinos a estressores ambientais, escolhemos como modelo a esp?cie Lithobates catesbeianus, que possui, dentre a fam?lia ran?dea, uma grande plasticidade e resist?ncia, sendo uma esp?cie introduzida no Brasil. Para a realiza??o deste estudo foram adquiridos 79 girinos com 4 meses de vida, no est?gio 25 (pr?-metam?rfico) da tabela de Gosner. Os animais foram divididos em aqu?rios com 60L de ?gua, com aera??o constante em fotoper?odo e temperatura naturais, pH de 7,4, alimentados ad libitum com ra??o. Uma vez que houve manipula??o e eutan?sia dos animais, a pesquisa foi submetida ? Comiss?o de ?tica no Uso de animais (CEUA) da PUCRS.O herbicida foi adicionado no 8? dia nas concentra??es X1(0,05?g/L), X2(0,1?g/L), X3(0,2?g/L) e X4(0,4?g/L). O objetivo da pesquisa foi analisar as poss?veis altera??es da atividade das enzimas antioxidantes e n?veis de lipoperoxida??o (LPO) hep?tica; assim como, dos n?veis de corticosterona (CORT), glicose e ?cido ?rico (AU) no plasma frente ? exposi??o do herbicida. Uma vez que n?o houve diferen?a entre os grupos controle 7 dias (C7) e controle 14 dias (C14), com exce??o da medida de AU, assim os grupos foram comparados com o C14, onde os animais apresentam o mesmo tempo de desenvolvimento dos expostos. Os resultados mostraram diferen?as significativas na LPO, principalmente nos animais expostos a concentra??o 0,1?g/L (X1) do herbicida; induzindo tamb?m, a aumento da atividade da GST, da SOD e da CAT; ap?s seguiu-se uma diminui??o desta atividade onde verificamos, no caso da SOD, CAT e GST, uma rela??o inversa entre a concentra??o do pesticida e a resposta do sistema enzim?tico. Por?m, estes resultados n?o determinaram um aumento na lipoperoxida??o e nem causam mortalidade aos animais o que sugere uma atividade constitutiva alta destas enzimas e/ou a presen?a de um sistema antioxidante n?o enzim?tico bastante eficiente. Os n?veis de corticosterona plasm?tico apresentaram diferen?a entre os grupos X1(0,05?g/L) e X4(0,4?g/L), com decr?scimo no X4, deduzindo uma diminui??o da capacidade de resposta do animal frente ? exposi??o prolongada, sete dias, a concentra??es mais elevadas do pesticida; estando esta resposta aliada a um aumento da glicemia em X3. Os n?veis de AU apresentaram uma redu??o significativa no grupo X4, por?m, para maiores conclus?es sobre o uso desta mol?cula como antioxidante e seu papel junto ao sistema n?o enzim?tico ser?o necess?rios novos estudos.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-01-14T11:44:34Z No. of bitstreams: 1 TES_THIAGO_DE_JESUS_BORGES_COMPLETO.pdf: 18287406 bytes, checksum: a76247b63c9874ac8f9c628b100c9e0b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-14T11:44:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_THIAGO_DE_JESUS_BORGES_COMPLETO.pdf: 18287406 bytes, checksum: a76247b63c9874ac8f9c628b100c9e0b (MD5) Previous issue date: 2015-11-27 / Dendritic cells (DCs) are the major antigen-presenting cells. They provide three main signals to fully activate T cells. Signal one is when the complex peptide:MHC (p:MHC) expressed by DC is recognized by T cell receptor; signal two is the expression of co-stimulatory molecules from the B7 family (CD80 and CD86). The third signal consists in the cytokines produced by DCs, which will bias the quality of T cell response. Once one of this signal is blocked/interrupted, T cells are not fully activated. T cells are involved in the eradication of pathogens, but also in the pathogenesis of several disorders and, strategies that modulate signal two are being used to treat these disorders. Novel therapies that inhibit the second signal (checkpoint blockade) or T cell modulation by these molecules have being used/tested to manage tumors, autoimmune disorders and transplant rejection. Our group demonstrated that the M. tuberculosis protein DnaK (prokaryote Hsp70) has an immunosuppressive role on DCs, and can suppress rejection in a murine skin allograft model. Nevertheless, the molecular mechanism involved in this response need to be further elucidated. In the present work, we demonstrated that the treatment of murine DC with DnaK could decrease the basal levels TNF-?, IFN-? and MCP-1 produced by these cells. This modulation was concomitant with a downregulation of the transcription factors C/EBP? and C/EBP? in a TLR2-ERK-STAT3-IL-10-dependent way. Beyond the signal three, DnaK could also downregulate the expression of MHC II (signal one) and CD86 (signal theree) on DCs, through the induction of a molecule called MARCH1. We developed an-situ treatment of skin grafts with DnaK prior the transplant. We observed that this treatment prolongs allograft survival with a decreased alloimmunity, and this dependent on MARCH1. The molecular pathway TLR2-ERK-STAT3-IL-10 was required for MARCH1 induction by DnaK. Moreover, we found that DnaK modulates a specific skin migratory DC ? the CD103+ DCs. This is the major subset involved in skin allograft rejection. We tested in which innate receptors DnaK could bind and found that DnaK could not bind directly on TLR2, but in the LOX-1 and Siglec-E receptor, in a LOX-1/Siglec-E/TLR2 complex. Finally, from the data obtained we patented a new formulation and method to treat allografts prior the transplantation. Thus, DnaK tolerizes dendritic cells through the modulation of the three signals required to activate T cells. We believe that consists an innovative strategy to treat inflammatory disorders, rejection, asthma and sepsis. / C?lulas dendr?ticas (DCs) s?o as principais c?lulas apresentadoras de ant?genos e fornecem tr?s sinais principais para a ativa??o completa das c?lulas T. O primeiro sinal consiste na apresenta??o do complexo pept?deo:MHC; o segundo sinal ? a express?o de mol?culas co-estimulat?rias da fam?lia B7, como o CD80 e CD86, e o terceiro consiste no conjunto de citocinas produzidas pelas DCs que ir?o moldar o tipo de resposta T que ser? gerada. Uma vez que algum desses dois sinais ? interrompido as c?lulas T n?o s?o ativadas de forma completa e, ainda, podem entrar em anergia ou apoptose. As c?lulas T est?o envolvidas n?o apenas em respostas de defesa, mas tamb?m em uma s?rie de patologias, e estrat?gias que visam sua ativa??o ou inibi??o vem sendo usadas no manejo dessas doen?as. Terapias que visam a inibi??o do segundo sinal (checkpoint blockade) ou a modula??o das c?lulas T pelas mol?culas co-inibit?rias tem sido testadas e utilizadas para tumores, autoimunidade e transplantes. Nosso grupo demonstrou que a prote?na DnaK (Hsp70 procari?tica) de M. tuberculosis tem papel imunossupressor em c?lulas dendr?ticas e in vivo, podendo diminuir a rejei??o de transplantes cut?neos em camundongos. Por?m, os mecanismos envolvidos nessa resposta ainda precisam ser elucidados. No presente trabalho, mostramos que a DnaK foi capaz de diminuir a express?o basal de TNF-?, IFN-? e MCP-1 em DCs de camundongos. Essa modula??o foi concomitante com a diminui??o de dois fatores de transcri??o ? C/EBP? e C/EBP? ? de maneira dependente da via molecular TLR2-ERK-STAT3-IL-10 nas DCs. Al?m do terceiro sinal, a DnaK pode modular a express?o dos n?veis de MHC II (primeiro sinal) e CD86 (segundo sinal) nas DCs, atrav?s da indu??o de uma mol?cula chave chamada MARCH1. Em um modelo murino de aloenxerto cut?neo, o tratamento local com a DnaK, antes do transplante, prolongou a sobrevida do enxerto e diminuiu a aloimunidade de maneira dependente de MARCH1. A indu??o de MARCH1 pela DnaK foi dependente da via molecular TLR2-ERK-STAT3-IL-10 nas DCs. Al?m disso, demonstramos que a DnaK modula exclusivamente um subtipo de DC migrat?rio da pele ? as DCs CD103+. Tamb?m observamos que esse subtipo de DC ? o principal subtipo celular envolvido na rejei??o de transplantes de pele, gerando um conceito biol?gico novo nessa ?rea. Mapeamos os receptores inatos nos quais a DnaK pode se ligar. Testamos dez receptores inatos e vimos que essa prote?na n?o se liga diretamente no TLR2, mas sim nos receptores LOX-1 e Siglec-E, formando o complexo LOX-1/Siglec-E/TLR2. Finalmente, a partir dos dados obtidos nessa tese, formulamos uma composi??o e um m?todo para a modula??o do enxerto antes da realiza??o do transplante, e depositamos uma patente junto ao INPI. Portanto, a DnaK pode tolerizar as c?lulas dendr?ticas atrav?s da modula??o dos tr?s sinais necess?rios para a ativa??o das c?lulas T. Acreditamos que essa estrat?gia pode ser utilizada no tratamento de patologias inflamat?rias, incluindo a rejei??o a transplantes.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-05-10T11:19:25Z No. of bitstreams: 1 TES_MARINA_PETERSEN_GEHRING_COMPLETO.pdf: 5818535 bytes, checksum: 5b089589ca820b17117fd0c8e9d1cc90 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-10T11:19:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_MARINA_PETERSEN_GEHRING_COMPLETO.pdf: 5818535 bytes, checksum: 5b089589ca820b17117fd0c8e9d1cc90 (MD5) Previous issue date: 2016-01-11 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Gliomas represent the most common class of malignant tumors of the central nervous system being the most aggressive, and lethal brain tumors in primary brain tumors. Among the treatments, radiation is one of the most used therapies, but the intrinsic radioresistance of these tumors remains a critical problem in the management of these patients. Currently it is known that the effect of radiation extends beyond the directly cytotoxicity caused in tumor cells. Radiation therapy appears to induce an immunogenic cell death that among the features is ATP release. The ATP can cause cytotoxicity via P2X7 receptor and also acts as a sign of damage activating the immune system. The ATP can be hydrolyzed by enzymes of the purinergic system, among them the ectonucleotidase CD39, to adenosine, which has an opposite effect to ATP, causing immunosuppression. The radiation-induced ATP release and the ability of this nucleotide in modulate immune responses raised the hypothesis about the purinergic signaling participation in the tumor and immune cells response to radiation. Therefore, this study investigated: i) the role of ectonucleotidase CD39/NTPDase1 in the radiation-induced immune response in gliomas, ii) the importance of ATP-P2X7 receptor in the gliomas response to radiotherapy. Using knockout mice for CD39/NTPDase1, we observed that the deletion of this enzyme combined with radiotherapy significantly reduced the immunosuppressive cells Tregs in the tumor and spleen, attenuated the infiltration of myeloid derived suppressor cells caused by radiation and increased CCR7 expression in splenic dendritic cells and macrophages, indicating the presence of freshly mobilized antigen presenting cells available to differentiate in immune-effector cells that sustain a more prolonged antigen-specific T-cell?mediated immune response. Thereby, showing that blocking the activity of CD39/NTPDase1 can control immunosuppressive mechanisms generated by the tumor and promises to improve the radiotherapy response. Furthermore, in this study we observed that radiation actives the P2X7 receptor and by silencing this receptor on the GL261 glioma cell line, we have shown that radiotherapy is less efficient in vivo when compared with mice injected with GL261 WT cells, which constitutively express the P2X7 receptor. We also showed that patients with glioma that overexpress the P2X7 receptor, showed a better response to radiotherapy, revealing the importance of the expression of this receptor on glioma cells as a useful marker to analyze the tumor sensitivity to radiation and a successful radiotherapy response. In summary, our data shed light on the purinergic signaling for modulating the radiotherapy response in gliomas. / Os gliomas representam a classe mais comum de tumores malignos do sistema nervoso central, sendo o tumor cerebral mais agressivo e letal entre os tumores cerebrais prim?rios. Dentre os tratamentos, a radia??o ? uma das terapias mais utilizadas, por?m a radiorresist?ncia intr?nseca destes tumores continua a ser um problema cr?tico na gest?o de destes pacientes. Atualmente, sabe-se que o efeito da radia??o se estende al?m da citotoxicidade direta causada nas c?lulas tumorais. A radioterapia parece induzir uma morte celular imunog?nica, que entre as caracter?sticas est? a libera??o de ATP. O ATP pode causar citotoxicidade atrav?s do receptor P2X7 e tamb?m atua como um sinal de dano celular ativando o sistema imune. O ATP pode ser hidrolisado por enzimas do sistema purin?rgico, dentre elas a ectonucleotidase CD39/NTPDase1, ? adenosina, que tem um efeito aposto ao ATP, causando imunossupress?o. A secre??o de ATP induzida pela radioterapia e a capacidade deste nucleot?deo em modular a resposta imune, levantou a hip?tese da participa??o da sinaliza??o purin?rgica na resposta de c?lulas tumorais ? radia??o e na resposta imune induzida pela radioterapia. Portanto, neste estudo visou-se investigar: i) o papel da ectonucleotidase CD39/NTPDase1 na resposta imune induzida pela radioterapia em gliomas, ii) a import?ncia da via ATP-receptor P2X7 na resposta de gliomas ? radioterapia. Atrav?s de camundongos knockout para a enzima CD39/NTPDase1, observamos que a dele??o desta enzima combinada com a radioterapia reduziu significativamente as c?lulas imunossupressoras Tregs no tumor e no ba?o, atenuou a infiltra??o de c?lulas mieloides supressoras causada pela radia??o, e aumentou a express?o de CCR7 em c?lulas dentr?ticas e macr?fagos localizados no ba?o, indicando a presen?a c?lulas apresentadoras de ant?geno rec?mmobilizadas e dispon?veis para se diferenciarem em c?lulas imunes efetoras que sustentam uma resposta imune mais prolongada mediada por c?lulas T ant?geno espec?ficas. Deste modo, mostrou-se que o bloqueio da atividade da CD39/NTPDase1 pode controlar mecanismos imunossupressores gerados pelo tumor e promete melhorar a resposta ? radioterapia. Al?m disso, neste estudo observou-se que a radioterapia ativa o receptor P2X7 e atrav?s do silenciamento deste receptor na linhagem de glioma GL261, demonstramos que a radioterapia foi pouco eficiente in vivo, quando comparado com camundongos injetados com a GL261 WT, que expressa constitutivamente o receptor P2X7. Tamb?m demonstramos que pacientes com glioma que expressaram mais o receptor P2X7, apresentaram uma melhor resposta a radioterapia, revelando a import?ncia da express?o deste receptor em c?lulas de glioma como um marcador ?til para analisar a sensibilidade tumoral ? radioterapia e para uma resposta bem-sucedida ? radioterapia. Em suma, nossos dados lan?am luz sobre a sinaliza??o purin?rgica para a modula??o da resposta ? radioterapia em gliomas.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-05-17T12:07:46Z No. of bitstreams: 1 DIS_ROGERIO_VALIM_DA_TRINDADE_COMPLETO.pdf: 1934289 bytes, checksum: ad294c842ebebac268c4523f0b1f9420 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-17T12:07:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_ROGERIO_VALIM_DA_TRINDADE_COMPLETO.pdf: 1934289 bytes, checksum: ad294c842ebebac268c4523f0b1f9420 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS / Tuberculosis is the infectious disease that causes more deaths worldwide, along with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). Great efforts have been exerted in recent years to the search for new anti-tuberculosis drugs without success. Drug development platforms fail at different stages of the research and development process and one aspect that contributes to this is the lack of knowledge of the potential molecular drug targets. Both the elucidation of the bioactive compounds mechanism of action and the identification of their cellular targets are important for the development of new drugs. As an experimental alternative to the identification of molecular targets is pulse proteolysis technique, which determines the fraction of proteins differentially degraded after a brief incubation with proteases when comparing samples treated and untreated with a ligand. In this work, we developed the PePTID method: a new method for identification of molecular targets using pulse proteolysis and mass spectrometry analysis. The application of PePTID resulted in a reproducible procedure that minimizes the required amount of sample and provides a more robust analysis method compared to other approaches that use pulse proteolysis. / A tuberculose ?, junto com a S?ndrome da Imunodefici?ncia Adquirida (SIDA), a doen?a infecciosa que mais causa mortes no mundo. Grandes esfor?os foram exercidos nos ?ltimos anos para a busca de novos f?rmacos antituberculose, por?m sem muito sucesso. As plataformas de desenvolvimento de f?rmacos falham em diferentes etapas do processo de pesquisa e desenvolvimento e um dos aspectos que contribui para isso ? a falta de conhecimento dos alvos moleculares de potenciais f?rmacos. Tanto a elucida??o do mecanismo de a??o de compostos bioativos quanto a identifica??o de seus alvos celulares s?o importantes para o desenvolvimento de novos f?rmacos. Como alternativa experimental para a identifica??o de alvos moleculares est? a t?cnica de prote?lise pulsada, a qual determina a fra??o de prote?nas diferencialmente degradadas ap?s breve incuba??o com proteases quando comparadas as amostras tratadas e n?o tratadas com um ligante. Nesse trabalho, desenvolvemos o m?todo PePTID: um novo m?todo para identifica??o de alvos moleculares usando a prote?lise pulsada e an?lise por espectrometria de massa. A aplica??o do m?todo PePTID resultou em um procedimento reprodut?vel que minimiza a quantidade necess?ria de amostra e que apresenta uma metodologia de an?lise mais robusta em rela??o a outras abordagens que utilizam a prote?lise pulsada.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-05-17T12:16:55Z No. of bitstreams: 1 DIS_JULIANA_ROMEU_MARQUES_COMPLETO.pdf: 1432001 bytes, checksum: 2d6dc8303449f3f554bf97804d426795 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-17T12:16:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_JULIANA_ROMEU_MARQUES_COMPLETO.pdf: 1432001 bytes, checksum: 2d6dc8303449f3f554bf97804d426795 (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The liraglutide is a glucagon-like peptide 1 (GLP-1) based therapy and an alternative treatment to type 2 diabetes mellitus (T2DM). Apart from its hypogliycemic effect, the drug has been also associated with the prevention of cardiovascular diseases, regulation of blood lipid and anti-inflammatory action. Reports indicate, however, that liraglutide can increase the risk of thyroid cancer and cause pancreatitis. Besides, studies demonstrated that some analogues of GLP-1 have a deleterious bone effect, while others demonstrated to be benefic to the bone. The aim of this study was to evaluate the effect in vitro of liraglutide in mouse pre-osteoblastic cells, MC3T3-E1. The results demonstrated that liraglutide significantly decreased the number of viable cells without inducing apoptosis. The mechanism of this effect is associated to the reactive oxygen species production (ROS), which resulted in an increase of cell autophagy. The decreased number of viable cells indicates therefore that liraglutide may affect the bone formation. / A liraglutida ? uma terapia baseada no horm?nio GLP-1 utilizada como tratamento alternativo para a diabetes mellitus tipo 2 (DM2). O medicamento, al?m do efeito hipoglicemiante, tem sido associado ? preven??o de doen?as cardiovasculares, diminui??o dos lip?deos no sangue e ? a??o anti-inflamat?ria. Relatos indicam, por?m, que a liraglutida pode aumentar o risco de c?ncer de tireoide e provocar pancreatite. Al?m disso, estudos demonstram que alguns an?logos do GLP-1 t?m efeito ?sseo delet?rio, enquanto outros t?m efeito ben?fico. O objetivo deste estudo ? avaliar o efeito da liraglutida sobre o crescimento de c?lulas pr?-osteobl?sticas (MC3T3-E1). Os resultados t?m demonstrado que a liraglutida diminuiu significativamente o n?mero de c?lulas sem induzir a apoptose. O mecanismo deste efeito est? associado ? produ??o de esp?cies reativas de oxig?nio, que resulta em um aumento da autofagia das c?lulas, indicando, desta forma, que pode afetar a forma??o ?ssea.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:09:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 426215.pdf: 1203023 bytes, checksum: a4c95024eb4a04a350ac7a3aeb621944 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / Atualmente, a redu??o do tamanho populacional constitui um problema real para muitas popula??es selvagens e cativas, e muitos estudos t?m sido realizados nesse contexto com o intuito de identificar ?reas de manejo e prote??o de esp?cies amea?adas. O manejo de popula??es naturais tem como objetivo assegurar h?bitats adequados para manter popula??es em tamanhos vi?veis evitando assim que os efeitos do endocruzamento se pronunciem, al?m de manter corredores para facilitar a dispers?o dos organismos e consequentemente o fluxo g?nico entre popula??es. Os grandes carn?voros, por necessitarem de grandes ?reas de vida e serem usualmente perseguidos por ca?adores, s?o bastante vulner?veis ? fragmenta??o de h?bitats Devido ao fato de serem predadores-topo, sua extin??o local geralmente leva ? altera??o de todo o ecossistema. Desta forma, sua conserva??o afeta, de maneira direta e indireta, muitos outros organismos. Os carn?voros est?o entre os organismos que causam maiores desafios e preocupa??es ?s autoridades referentes ? conserva??o. ?reas consideravelmente grandes s?o necess?rias para englobar a ?rea de vida de um ?nico individuo, e territ?rios ainda maiores s?o necess?rios para abranger uma comunidade inteira deste grupo. A on?a-pintada, o maior fel?deo das Am?ricas, encontra-se atualmente em menos de 50% da sua distribui??o original e muitas ?reas remanescentes n?o apresentam tamanho e disponibilidade suficiente de presas para manter uma popula??o saud?vel em longo prazo. No Brasil, a Bacia Amaz?nica e o Pantanal s?o as maiores ?reas de distribui??o da esp?cie onde ainda se encontra popula??es grandes o suficiente para uma viabilidade por um longo per?odo de tempo. No entanto, pouco se sabe sobre a din?mica das popula??es de on?a-pintada nesses biomas, havendo assim uma extrema necessidade de an?lises em n?vel gen?tico-populacional da esp?cie. O presente trabalho teve como objetivo analisar 52 indiv?duos provenientes do Pantanal brasileiro amostrados no per?odo de 2001 a 2008, e fazer infer?ncias gen?ticas sobre esta popula??o, bem como compar?-la com uma ?rea previamente estudada na Mata Atl?ntica, onde altos n?veis de estrutura??o foram encontrados. Foram analisados ?ndices de diversidade gen?tica intra-populacional e calculados ?ndices de estrutura??o (Fst e Rst) assim como an?lise Bayesiana de estrutura??o no programa STRUCTURE. Os n?veis de variabilidade foram bastante altos e compar?veis com aqueles encontrados para a esp?cie quando analisada de uma forma mais ampla (em escala filogeogr?fica). Quando as amostras do Pantanal foram analisadas em rela??o ? sua estrutura??o, os dados indicaram a presen?a de apenas uma popula??o, sugerindo que a regi?o amostrada (Pantanal sul) consiste de uma s? unidade gen?tica. No entanto, quando as popula??es da Mata Atl?ntica foram inclu?das na an?lise, as amostras do Pantanal foram alocadas em duas unidades gen?ticas incompletamente diferenciadas, devido provavelmente ? influ?ncia de parentesco entre alguns dos indiv?duos desta regi?o, em combina??o ? prov?vel miscigena??o hist?rica com ?reas transicionais entre os dois biomas. Este parece ter sido o caso da popula??o amostrada na ?rea de influ?ncia da UHE Porto Primavera (MS/SP), situada no limite interior do bioma Mata Atl?ntica e que atualmente encontra-se extinta por a??o humana. Os resultados obtidos ap?iam a infer?ncia de que, no passado, havia conectividade gen?tica entre popula??es do Pantanal e da Mata Atl?ntica de Interior, embasando o delineamento de poss?veis a??es de manejo a fim de retomar a conex?o entre estes dois biomas. Al?m disso, os dados do Pantanal representam a primeira amostragem de uma popula??o geneticamente saud?vel de on?as-pintadas, podendo servir como base para a avalia??o e monitoramento da variabilidade observada nesta esp?cie em regi?es fragmentadas.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-05-19T19:42:39Z No. of bitstreams: 1 TES_PAULA_JULIANA_BRIZUELA_DE_SEADI_PEREIRA_COMPLETO.pdf: 4958315 bytes, checksum: 38858f11b57077cc60813c0fa01390dd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-19T19:42:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_PAULA_JULIANA_BRIZUELA_DE_SEADI_PEREIRA_COMPLETO.pdf: 4958315 bytes, checksum: 38858f11b57077cc60813c0fa01390dd (MD5) Previous issue date: 2016-01-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The gastrin-releasing peptide (GRP) and its receptor (GRPR) were recently identified as specific components of pruritus, suggesting an important pharmacological potential for this system; however, the mechanisms underlying GRP/GRPR activity remain undefined. Herein, we evaluated GRPR localization and downstream signaling pathways. Our data show that GRP directly activates small-size capsaicin-sensitive DRG neurons, an effect that translates into transient calcium flux and membrane depolarization. Expression profile revealed that PI3K? is downstream of the GRP/GRPR axis, observed by GRP-induced Akt phosphorylation in ex vivo naive mouse spinal cords and in GRPR transiently expressing HEK293 cells. However, ex vivo mouse spinal cord stimulation by GRP failed to induce the activation of MAP-kinases, namely ERK 1/2 and p38. Intrathecal GRP administration led to intense scratching behavior, an effect significantly reduced by either GRPR antagonism or the PI3K? inhibition. We assessed whether the GRP/GRPR system is involved in chronic itching using the dry skin model and found that GRPR blockade or PI3K? inhibition reversed the scratching. We also found that p-Akt and GRPR are co-expressed in the spinal cord and in DRG neurons from dry skin mice, and that p-Akt levels are increased in these animals, an effect prevented by GRPR blockade. The intradermal injection of GRP also triggers scratching behavior, which was significantly decreased after treatment with PI3K? inhibitor. The itching response was also induced by the intrathecal injection of an Akt activator. Altogether, these findings are highly suggestive that GRPR is expressed by the peripheral and central terminals of DRG nociceptive afferents, which transmit itch via the PI3K?/Akt pathway. / O pept?deo liberador de gastrina (GRP) e seu receptor (GRPR) foram recentemente identificados como componentes espec?ficos do prurido, com importante potencial farmacol?gico; no entanto, os mecanismos intracelulares que medeiam a atividade do sistema GRP/GRPR permanecem desconhecidos. O presente estudo avaliou a localiza??o do GRPR e as vias de sinaliza??o downstream ativadas por este receptor. Os dados obtidos mostram que o GRP ativa diretamente neur?nios de pequeno di?metro do DRG, sens?veis a capsaicina, um efeito demonstrado pelo fluxo transit?rio de c?lcio e pela despolariza??o da membrana. O perfil de express?o observado sugere que a PI3K? ? ativada downstream ao sistema GRP/GRPR, como indicado pela fosforila??o de Akt (marcador de atividade de PI3K?) induzida por GRP, em medulas de camundongos ex vivo e, em c?lulas HEK293 transfectadas com GRPR. Contudo, a aplica??o de GRP em medulas de camundongos, ex vivo, n?o parece depender da ativa??o das MAP-quinases, ERK1/2 ou p38. A inje??o intratecal de GRP leva a um comportamento de co?ar intenso, que ? significativamente reduzido por antagonistas de GRPR ou pela inibi??o farmacol?gica de PI3K?. Para avaliar se o sistema GRP/GRPR estaria envolvido no prurido cr?nico, foi empregado o modelo de pele seca em camundongos. Neste paradigma experimental, o bloqueio de GRPR ou de PI3K? reverteu o comportamento de co?ar. Os dados obtidos tamb?m mostram que p-Akt e GRPR est?o co-localizados na medula espinhal e em neur?nios do DRG de animais com pele seca e, que os n?veis de p-Akt est?o aumentados nesses animais, um efeito que foi prevenido pelo bloqueio de GRPR. A inje??o intrad?rmica de GRP tamb?m induziu o comportamento de co?ar, que foi significativamente reduzido ap?s o tratamento com inibidor de PI3K?. Finalmente, foi demonstrado que a inje??o intratecal de um ativador de Akt foi capaz de induzir coceira em camundongos. O conjunto de resultados obtidos sugere que o GRPR ? expresso por terminais perif?ricos e centrais de neur?nios nociceptivos do DRG, transmitindo o prurido atrav?s da ativa??o da via PI3K?/Akt.