Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 459408.pdf: 1270061 bytes, checksum: a4594eb8c40c25e57008dc9d40066c93 (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / We evaluated haplotype and allele frequencies, as well as statistical forensic parameters, for 23 Y-chromosome short tandem repeats (STRs) loci of the PowerPlex?Y23 system (DYS19, DYS385a/b, DYS389I/II, DYS390, DYS391, DYS392, DYS393, DYS437, DYS438, DYS439, DYS448, DYS456, DYS458, DYS635, Y-GATA-H4, DYS481, DYS533, DYS549, DYS570, DYS576, DYS643) in a sample of 150 apparently healthy males, resident in south Brazil. A total of 150 different haplotypes were identified. The highest gene diversity was observed for the single locus marker DYS570 (GD = 0.7888) and for a two-locus system DYS385 (GD = 0.9009). We also examined 150 father-son pairs by the same system, and observed a total of 13 mutations were identified in the 3,450 father-son allelic transfers, with an overall mutation rate across the 23 loci of 3.768 x 10-3 (95% CI = 3.542 x 10-3 to 3.944 x 10-3). In all cases there was only one locus mutated with gain/loss of repeats in the son (5 one-repeat gains, and 7 one-repeat and 1 two-repeat losses); we observed no instances of mutations involving a non-integral number of repeats. / Foram avaliadas as frequ?ncias al?licas e haplot?picas, bem como os par?metros estat?sticos forenses, para 23 l?cus Short Tandem Repeat (STRs) de cromossomo Y presentes no kit comercial PowerPlex?Y23 system (DYS19, DYS385a/b, DYS389I/II, DYS390, DYS391, DYS392, DYS393, DYS437, DYS438, DYS439, DYS448, DYS456, DYS458, DYS635, Y-GATA-H4, DYS481, DYS533, DYS549, DYS570, DYS576, DYS643) em uma amostra de 150 homens saud?veis, residentes no sul do Brasil. Um total de 150 hapl?tipos diferentes foram identificados. A maior diversidade gen?tica foi observada para o marcador de l?cus ?nico DYS570 (GD = 0,7888) e para o l?cus duplo DYS385 (GD = 0,9009). Tamb?m foram analisados 150 de pares de pai-filho pelo mesmo sistema, e um total de 13 muta??es foram observadas em 3.450 transfer?ncias al?licas entre pais-filhos, com uma taxa geral de muta??o nos 23 l?cus de 3.768 x 10-3 (95% CI = 3.542 x 10-3 - 3.944 x 10-3). Em todos os casos foi encontrado apenas um l?cus mutado com ganho ou perda de repeti??es no filho (5 ganhos de repeti??o ?nica, 7 perdas de repeti??o ?nica e 1 perda de dupla-repeti??o). N?o foi observado nenhum caso de muta??o envolvendo um n?mero n?o integral de muta??es.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 459527.pdf: 855354 bytes, checksum: 2ebbe767e99c1ddc288d33fdf6ff1ebe (MD5) Previous issue date: 2013-03-26 / Salmonella enterica is an important pathogen that causes gastroenteritis, and is transmitted to human through the consumption of contaminated food, especially from animal origin. The use of antimicrobials for therapeutic purposes in veterinary medicine and as growth promoters in animals used for food production has been considered one of the causes of emergence and spread of multi-drug resistant (MDR) S. enterica, representing a major risk to public health. Thus, the aim of this study was to determine antimicrobial resistance profiles as well as to characterize the main determinants involved on phenotypes of resistance in S. enterica isolates from poultry by-product meal and from other samples derived of poultry production chain, especially from environment of broiler houses. A total of 203 S. enterica isolates was analyzed, being 106 from poultry by-product meal and 97 isolated mainly from drag swabs. Higher percentages of resistance were detected in S. enterica isolated from drag swab when compared with isolates from poultry by-product meal. The highest percentages of resistance were found to sulfonamides followed by tetracycline, trimethoprim-sulfamethoxazole, nalidixic acid, streptomycin and spectinomycin. The majority of isolates was sensitive to ciprofloxacin and enrofloxacin. MDR phenotypes were detected in 37 (18.2%) isolates and the profile penta-resistant (ampicillin, chloramphenicol, streptomycin, tetracycline and sulphamethoxazole) was detected in S. Heidelberg, S. Cerro and two S. Senftenberg. Class 1 integrons was found in 26 isolates (12.7 %), and did not detect the presence of class 2 integron. A S. Senftenberg isolated from environment was found to harbor two class 1 integrons: one integron with a typical 3 CS, and the other with an atypical 3′CS linked to the qacH sul3. The sul1, sul2 and sul3 genes were detected in 18.7%, 32.5% and 31.2% S. enterica phenotypically resistant to sulfonamide, respectively. blaCMY, blaCTX-M and blaTEM genes were detected in 23.8%, 9.5% and 85.7% of isolates resistant to β -lactams, respectively. Resistance determinants tetA, tetB and tetC were observed in 70%, 10% and 10% of isolates resistant to tetracycline, respectively. aadA and aadB genes were detected in 26.1% and 32.1% of isolates resistant to aminoglycosides, as well as the presence of strA and strB genes in 44.4% and 34.9% of S. enterica isolates phenotypically resistant to streptomycin. The presence of a heterogeneous profile of antimicrobial determinants and mobile genetic elements in the isolates analyzed indicates the potential risk that these bacteria represent to human health. / A Salmonella enterica ? um importante pat?geno causador de gastrenterite transmitido para humanos atrav?s do consumo de alimentos contaminados, principalmente os de origem animal. O uso de antimicrobianos para fins terap?uticos na medicina veterin?ria e como promotores de crescimento em animais destinados ? produ??o de alimentos tem sido apontado como uma das causas do surgimento e dissemina??o de S. enterica multi-resistentes (MDR), constituindo um grande risco para a sa?de publica. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi determinar o perfil de resist?ncia a antimicrobianos, bem como caracterizar os principais determinantes envolvidos nos fen?tipos de resist?ncia em isolados de S. enterica provenientes de farinhas de aves e de outras amostras oriundas da cadeia produtiva do frango, especialmente do ambiente de cria??o. Um total de 203 isolados de S. enterica foi analisado, sendo 106 oriundos de farinhas de aves e 97 provenientes, principalmente, de suabes de arrasto. Percentuais mais elevados de resist?ncia foram detectados em S. enterica isoladas de suabe de arrasto, quando comparadas com isolados de farinhas de aves. Os maiores percentuais de resist?ncia foram encontrados para sulfonamida, seguida por tetraciclina, trimetoprim-sulfametoxazol, ?cido nalid?xico, estreptomicina e espectinomicina. A maioria dos isolados foi sens?vel ? ciprofloxacina e ? enrofloxacina. Fen?tipos de MDR foram observados em 37 (18,2%) isolados, sendo que o perfil penta-resistente (ampicilina, cloranfenicol, estreptomicina, sulfametoxazol e tetraciclina) foi detectado em S. Heidelberg, S. Cerro e em duas S. Senftenberg. Integrons de classe 1 foram detectados em 26 isolados (12,7%), e n?o foi observada a presen?a de integron de classe 2. Uma S. Senftenberg isolada a partir do ambiente apresentou dois integrons de classe 1: um com um 3 CS t?pico e outro com 3′CS at?pico ligado a qacH sul3. Os genes sul1, sul2 e sul3 foram detectados, respectivamente, em 18,7%, 32,5% e 31,2% dos isolados de S. enterica fenotipicamente resistentes ? sulfonamida. Os genes blaCMY, blaCTX-M e blaTEM foram detectados 23,8%, 9,5% e 85,7% dos isolados resistentes aos β-lact?micos, respectivamente. Os determinantes de resist?ncia tetA, tetB e tetC foram observados em 70%, 10% e 10% dos isolados resistentes ? tetraciclina, respectivamente. Os genes aadA e aadB foram encontrados em 26,1% e 32,1 % dos isolados resistentes aos aminoglicos?deos, assim como a presen?a dos genes strA e strB foi detectada em 44,4% e 34,9% dos isolados de S. enterica fenotipicamente resistentes ? estreptomicina. A presen?a de um perfil heterog?neo de determinantes de resist?ncia e de elementos gen?ticos m?veis nos isolados analisados indica o potencial risco que estas bact?rias representam para a sa?de humana.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 386734.pdf: 182882 bytes, checksum: 4a2a643c6647c972126c8c7162f5ec24 (MD5) Previous issue date: 2006-12-15 / A pimenta Capsicum baccatum var. pendulum, conhecida popularmente como pimenta dedo-de-mo?a, ? bastante utilizada na gastronomia brasileira, desde a ?poca do Descobrimento. As pimentas t?m grande import?ncia na economia do pa?s, estando o Estado do Rio Grande do Sul entre os cinco maiores produtores. Estudos mostram que as pimentas do g?nero Capsicum apresentam uma s?rie de efeitos fisiol?gicos ben?ficos, mostrando-se excelente alimento nutrac?utico. Assim, o presente trabalho objetiva avaliar o potencial antiinflamat?rio da esp?cie C. baccatum var. pendulum, atrav?s de diferentes modelos experimentais de inflama??o (pleurisia, peritonite, sepse e les?o vascular por posicionamento de colar), al?m de avaliar a sua a??o antidislipid?mica e antioxidante em animais. Os resultados mostram que a pimenta apresenta intensa a??o hipocolesterol?mica, antiinflamat?ria e antioxidante, e que estes efeitos parecem estar relacionados com a presen?a de capsaicin?ides, vitaminas e polifen?is.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 460176.pdf: 769931 bytes, checksum: 51ce02520c2340026c784bc9ef36d15d (MD5) Previous issue date: 2014-02-12 / Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most frequent primary tumor of the liver, and is currently one of the major neoplastic diseases, representing 85% of primary liver tumors and is the third leading cause of cancer-related death. The development of the majority of hepatocellular carcinomas related to the presence of a disease resulting from cirrhosis, such as hepatitis B and C. Its incidence has increased in recent years due to the number of patients with infections caused by hepatitis C. The aim of this study was investigate the in vitro effect of fructose-1,6-bisphosphate (FBP) on the growth of HepG2 cells, used as a model to hepatocellular carcinoma. The results showed that the FBP decreases cell proliferation in a dose-dependent manner, not being caused by cell cycle arrest or apoptosis verified by flow cytometry. It was observed that at 72 h of treatment FBP decreased levels of IL-8, which is closely related to the tumor progression and the generation of reactive oxygen species. Moreover, FBP decreased oxidative stress by increasing the levels of catalase and decrease TBARS, this effect is possibly caused by the result of low IL- 8. These findings demonstrated that the FBP may be a potential anticancer agent for the treatment of HCC. / O hepatocarcinoma (HCC) ? o tumor prim?rio de f?gado mais frequente, sendo atualmente uma das principais doen?as neopl?sicas, representando 85% dos tumores hep?ticos prim?rios e sendo a terceira maior causa de morte relacionada ao c?ncer. O desenvolvimento da maioria dos hepatocarcinomas relaciona-se com a presen?a de alguma doen?a decorrente do quadro de cirrose, como hepatite B e C. Sua incid?ncia tem aumentado nos ?ltimos anos devido ao n?mero de pacientes com infec??es por hepatite C. O objetivo deste estudo foi investigar,in vitro, o efeito da frutose-1,6-bisfosfato (FBP) sobre o crescimento das c?lulas HepG2, modelo utilizado como carcinoma hepatocelular. Os resultados demonstraram que a FBP diminui a prolifera??o celular em uma rela??o dose-dependente, n?o sendo essa prolifera??o ocasionada por parada no ciclo celular ou apoptose verificado pelos testes de citometria. Observou-se que em 72 h de tratamento a FBP diminuiu os n?veis de Interleucina 8 (IL-8), sendo esta interleucina relacionada com a progress?o tumoral e a gera??o de esp?cies reativas de oxig?nio. Al?m disso, a FBP diminuiu o estresse oxidativo, aumentando os n?veis de catalase e diminuindoa produ??o das subst?ncias reativas ao ?cido tiobarbit?rico(TBARS), sendo esse efeito antioxidante possivelmente ocasionado por conseq??nte diminui??o de IL-8. Estes resultados demonstraram que a FBP pode ser um agente antineopl?sico em potencial para o tratamento de hepatocarcinoma.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 460859.pdf: 2353123 bytes, checksum: dd594f361c31a6e6ca5c19cd19a8c488 (MD5) Previous issue date: 2014-07-16 / The Mycobacterium tuberculosis NADH-dependent enoyl-acyl carrier protein reductase (MtInhA) catalyzes hydride transfer to long-chain enoyl thioester substrates. MtInhA is a member of the mycobacterial type II dissociated fatty acid biosynthesis system, and is the bona fide target for isoniazid, the most prescribed drug for tuberculosis treatment. Here, a series of piperazine derivatives was synthesized and screened as MtInhA inhibitors, which resulted in the identification of compounds with IC50 values in the submicromolar range. A structure-activity relationship (SAR) evaluation indicated the importance of the chemical environment surrounding the carbonyl group for inhibition. In addition, the structure of one selected compound was supported by crystallographic studies, and experimental geometrical values were compared with semi-empirical quantum chemical calculations. Furthermore, the mode of inhibition and inhibitory dissociation constants were determined for the nine most active compounds. These findings suggest that these compounds interact with MtInhA at the enoyl thioester (2-trans-dodecenoyl-CoA) substrate binding site. Finally, two 9H-fluoren-9-yl-piperazine-containing compounds exhibited moderate antimycobacterial activity against the M. tuberculosis H37Rv strain. / A enzima 2-trans-enoil-ACP redutase de Mycobacterium tuberculosis (MtInhA) catalisa a etapa enzim?tica final no ciclo de alongamento da via de bioss?ntese de ?cidos graxos, convertendo 2-trans-enoil-ACP ? acil-ACP em um mecanismo dependente de NADH. Essa enzima vem sendo descrita como alvo validado para a descoberta de f?rmacos. Nesse trabalho uma s?rie de piperazinas foi sintetizada e avaliada quanto ao potencial inibit?rio da atividade enzim?tica da MtInhA, resultando em compostos com valores de IC50 na faixa de inibi??o de nanomolar. Avalia??es de rela??o estrutura-atividade (SAR) indicam a import?ncia do ambiente qu?mico adjacente ? carbonila para a inibi??o. Al?m disso, a estrutura de um composto foi confirmada por estudos cristalogr?ficos e os valores geom?tricos experimentais foram comparados com valores obtidos atrav?s de c?lculos semi-emp?ricos de obitais moleculares. Experimentos para determina??o do modo de inibi??o e obten??o dos valores das constantes de dissocia??o foram realizados para os nove compostos mais ativos. Os resultados sugerem que esses compostos interagem com MtInhA no s?tio de liga??o dos substratos acil-graxos. Finalmente, dois compostos, contendo na sua estrutura 9H-fluoren-9-il-piperazina exibiram moderada atividade antimicrobiana contra a cepa Mycobacterium tuberculosis H37Rv.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 460927.pdf: 1283521 bytes, checksum: 4cd3a506cc6198771e3bac28f9c816ad (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / The raw glycerol derived from the biodiesel production is considered an industrial waste that has raised great concerns in the biofuels industry, mainly due to its low commercial value, its reduced assimilation after purification as well as to the high costs associated with its disposal. In this context, the use of microorganisms on biodegradation processes and bioconversion of raw glycerol to molecules with high added-values tends to enhance the biodiesel production chain, and minimize environmental impacts associated with its disposal, often done improperly. Thus, the goal of this work was to investigate and identify, in different environmental samples, the presence of yeasts capable of using raw glycerol as sole carbon source, and investigate in a preliminary manner their eventual metabolic products. Fifty-seven yeasts derived from the regional biodiversity were evaluated and five of them were selected as metabolically able for raw glycerol consumption. The selected isolates were cultured under different conditions of temperature, glycerol concentration and oxygenation in order to establish the best growing conditions. In order to investigate eventual products generated from the raw glycerol assimilation, high-performance liquid chromatography (HPLC) analyses and emulsification assays were performed. As results, this work presents the first report of raw glycerol consumption by Zygowilliopsis californica, Pichia fermentans, Candida melibiosica and by a probable new yeast species of Candida genus (Candida sp.) isolated in this work. Still, this is the first report of this metabolic feature for a species of Zygowilliopsis genus. Moreover, Z. californica and Candida sp. presented some evidence to bear the metabolic potential to produce molecules of industrial interest from raw glycerol. These data may contribute for future strategies that aim the value increase of the biodiesel production chain. / O glicerol bruto derivado da produ??o do biodiesel ? considerado um rejeito industrial que tem despertado grande preocupa??o na ind?stria de biocombust?veis, dentre outros fatores, devido ao seu baixo valor comercial, sua reduzida assimila??o ap?s processo de purifica??o e aos altos custos associados ao seu descarte. Nesse contexto, a aplica??o de microrganismos em processos de biodegrada??o ou bioconvers?o do glicerol bruto em mol?culas de maior valor agregado tende a valorizar a cadeia produtiva do biodiesel, e a minimizar impactos ambientais associados ao seu descarte, muitas vezes feito de forma inadequada. Deste modo, o objetivo desde trabalho foi investigar e identificar, em diferentes amostras ambientais, a presen?a de leveduras capazes de utilizar, como ?nica fonte de carbono, o glicerol bruto, bem como investigar de maneira preliminar eventuais produtos metab?licos. Cinquenta e sete leveduras oriundas da biodiversidade local foram avaliadas e cinco delas selecionadas por apresentaram o potencial metab?lico de interesse. Os isolados selecionados foram cultivados sob diferentes condi??es de temperatura, concentra??o de glicerol e oxigena??o, com a finalidade de estabelecer as melhores condi??es para o seu crescimento. An?lises de cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE) e de atividade emulsificante foram realizadas com a finalidade de investigar eventuais produtos gerados a partir do consumo do glicerol bruto. Como resultados, este trabalho traz o primeiro relato do potencial de utiliza??o de glicerol bruto por Zygowilliopsis californica, Pichia fermentans, Candida melibiosica e por uma prov?vel esp?cie nova do g?nero Candida (Candida sp.) isolada durante este trabalho. Esta ? tamb?m a primeira descri??o desta atividade metab?lica para uma esp?cie do g?nero Zygowilliopsis. De forma adicional, Z. californica e Candida sp. apresentaram ind?cios de capacidade metab?lica para bioconvers?o do glicerol bruto em mol?culas de valor industrial. Os dados levantados neste trabalho poder?o contribuir para futuras estrat?gias que visem ? valoriza??o da cadeia produtiva do biodiesel.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 461390.PDF: 2830978 bytes, checksum: c3b746f15a8c1946dc08a31f60e01821 (MD5) Previous issue date: 2014-03-10 / Hereditary hemochromatosis (HH) is a genetic disease where iron balance is deregulated and this metal accumulates in the liver, causing toxic effects and fibrosis. Fibrosis is an exacerbated wound-healing response with extracellular matrix (ECM) deposition. Hepatic stellate cells (HSC), when activated, are the main responsible for ECM production. Fructose-1,6-bisphosphate (FBP) is a sugar and possess innumerous beneficial effects, like enhance cell antioxidant potential, protects liver from damage and reverts the phenotype of activated HSC. Because of this, we aimed to test the effects of FBP in immortalized HSC line (GRX) exposed to free iron (Fe) tempting to simulate what occurs in patients with HH.Fe (1mg/L) treatment for 8 days increased cell growth, whereas Fe + FBP (1mg/L + 0.6mM) decreased cell proliferation to levels below of control. LDH activity, apoptosis rate and cell cycle were not altered in any group. Oil Red-O (ORO) staining showed a decrease in lipid content when GRX cells were Fe-treated (1mg/L) for 8 days. In Fe + FBP (1mg/L + 0.6mM), GRX cells showed increased lipid content and characteristics of quiescent HSC. PPAR-γ expression was diminished on Fe group and same as control on Fe + FBP group. On the contrary, Fe treatment rose Col-1 expression and Fe + FBP reversed it to control levels. TGF-β1 was unaltered in Fe group. However, on Fe + FBP group, TGF-β1 levelswas far bellow of control and Fe-treated group, showing an antifibrotic activity. FBP didn t present antioxidant activity by DPPH assay. Ferrozine assay showed a decreased absorbance after 120 min in all FBP-tested doses, demonstrating that FBP is an iron chelator. These data demonstrate that FBP reverse the phenotype of GRX cells even when in Fepresence and that this could be caused by regulation of PPAR-γ and COL-1. In conclusion, FBP diminished the growth rate and reversed the phenotype of GRX cell, showing a possible antifibrotic effect. / Hemocromatose heredit?ria (HH) ? uma doen?a gen?tica onde o balan?o do ferro est? desregulado e esse metal se acumula no f?gado, causando efeitos t?xicos e, principalmente, fibrose. Fibrose ? uma resposta de cicatriza??o exacerbada com dep?sito de matriz extracelular (ECM). C?lulas estreladas hep?ticas (HSC) quando ativadas s?o as maiores respons?veis pela produ??o de ECM. Frutose-1,6-bisfosfato (FBP) ? um a??car e possui in?meros efeitos ben?ficos, como melhorar o potencial antioxidante da c?lula, proteger o f?gado de les?o e reverter o fen?tipo de HSC ativadas. Por causa disso, nosso objetivo foi testar os efeitos da FBP em uma linhagem imortalizada de HSC (GRX) expostas a ferro livre (Fe), na tentativa de simular o que ocorre em pacientes com HH.O tratamento com Fe (1mg/L) por 8 dias aumentou a prolifera??o celular enquanto o tratamento com Fe + FBP (1mg/L + 0.6mM) a diminuiu para n?veis menores que os do controle. A atividade da LDH, taxa de apoptose e ciclo celular n?o foi alterada em nenhum grupo. A colora??o com OilRed-O (ORO) mostrou uma diminui??o na quantidade de lip?dio intracelular quando as c?lulas foram tratadas com Fe por 8 dias. No grupo Fe + FBP, houve um aumento do conte?do lip?dico e as c?lulas apresentaram caracter?sticas morfol?gicas de c?lulas quiescentes. A express?o de PPAR-γ foi diminu?da no grupo Fe e igual ao controle no grupo Fe + FBP. Ao contr?rio, o Fe aumentou os n?veis de express?o de Col?geno tipo I (Col-1) e o tratamento concomitante com FBP reverteu esse efeito, ficando igual ao controle. A produ??o de TGF-β1 se manteve inalterada no grupo Fe e foi menor que o controle no tratamento com Fe + FBP, mostrando uma atividade antifibr?tica da FBP. O teste de DPPH mostrou que a FBP n?o possui atividade antioxidante em nenhuma dose testada. O teste de Ferrozine mostrou uma diminui??o da absorb?ncia depois de 120 minutos de incuba??o de FBP + Fe em todas as doses testadas, mostrando que a FBP ? um quelante de ferro.Esses dados demonstram que FBP reverte o fen?tipo das c?lulas GRX mesmo quando em presen?a do Fe e que isso pode ser causado pela regula??o da express?o do PPAR-γ e COL-1.Em conclus?o, a FBP diminuiu o crescimentoe reverteu o fen?tipo de c?lulas GRX, mostrando um poss?vel efeito antifibr?tico.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 462086.pdf: 649282 bytes, checksum: e7c3e58982f8ce80fba84600f84c532c (MD5) Previous issue date: 2013-09-30 / Salmonella enterica is considered an important zoonotic pathogen that can be responsible by losses in animal production, especially in poultry husbandry. Different classes of antimicrobials have been used as a prophylactic and/or therapeutic in poultry production, highlighting the quinolones, which also are indicated for human use. The wide use of these antimicrobials may contribute to the selection of microorganisms resistant to these drugs. Resistance to quinolones has been assigned to mutations in genes encoding DNA gyrase and topoisomerase IV, in addition to being associated with the presence of plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR), especially encoded by qnr and aac(6')-Ib-cr genes. Thus, the aim of this study was to evaluate the presence of efflux pump systems involved in the resistance to quinolones using the efflux pump inhibitor carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP), and identify the presence of resistance determinants to quinolones in isolates of S. enterica from poultry-related material. For this, 36 S. enterica strains resistant to quinolones were used. The reduction of the activity of efflux pump systems was detected in 66.7% of isolates tested for nalidixic acid and ciprofloxacin with addition of CCCP. Mutation in DNA gyrase was determined by sequencing and analysis of the gyrA gene, and qnr (A, B, D and S) and aac(6')-Ib-cr genes were detected by PCR. Analysis of the gyrA gene sequences in isolates phenotypically resistant to quinolones identify the presence of mutation leading to the alteration Ser83→Phe and Asp87→Gly, Asn or Tyr in 38,9% and 22,2%, respectively. Plasmid profile analysis showed nine profiles with plasmids that ranged from ~2 kb to ~50 kb, and PMQR genes were found in 22.2% of S. enterica isolates. qnrA and qnrB genes were detected in 11.1% and 5.5% of isolates, respectively, and qnrS was found in 2.7%. None qnrD gene was found in the isolates tested. aac(6')-Ib-cr gene was detected in 8.3% of the isolates. To our knowledge, this study reports for the first time mutations in gyrA in S. Worthington from poultry, as well as this is the first report of the presence of qnrA, qnrS and aac(6')-Ib-cr in S. enterica isolated from samples related to poultry production chain in Brazil. The presence of resistance determinants to quinolones in S. enterica isolates from poultry leads to concern regarding to potential resistance selection due to the use of these antimicrobials in animal production. / A Salmonella enterica ? considerada um importante pat?geno zoon?tico que pode ser respons?vel por perdas na produ??o animal, especialmente na cria??o de aves. Diferentes classes de antimicrobianos t?m sido utilizadas de forma profil?tica e/ou terap?utica na produ??o av?cola, entre elas destacam-se as quinolonas, que tamb?m t?m indica??o para uso humano. A ampla utiliza??o destes antimicrobianos pode contribuir para a sele??o de microrganismos resistentes a estes f?rmacos. A resist?ncia a quinolonas tem sido atribu?da a muta??es nos genes da DNA girase e da topoisomerase IV, al?m de estar associada ? presen?a de determinantes de resist?ncia carreados por plasm?deos (PMQR), especialmente aqueles codificados pelos genes qnr e aac(6 )-Ib-cr. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a presen?a de sistemas de bombas de efluxo envolvidos na resist?ncia a quinolonas utilizando o inibidor Cianeto de Carbonila Clorofenilhidrazona (CCCP), bem como identificar determinantes de resist?ncia a quinolonas em isolados de S. enterica de origem av?cola. Para tanto, foram utilizados 36 isolados de S. enterica resistentes quinolonas. A redu??o na atividade dos sistemas de bombas de efluxo foi observada em 66,7% dos isolados testados para o ?cido nalid?xico e para a ciprofloxacina com adi??o do CCCP. Muta??es na DNA girase foram determinadas por sequenciamento e an?lise do gene gyrA, e os genes qnr (A, B, D e S) e aac(6 )-Ib-cr foram detectados atrav?s de PCR. A an?lise das sequ?ncias do gene gyrA nos isolados fenotipicamente resistentes a quinolonas identificou a presen?a de muta??o levando ? altera??o Ser83→Phe e Asp87→Gly, Asn ou Tyr em 38,9% e 22,2%, respectivamente. A an?lise do perfil plasmidial revelou nove perfis com plasm?deos que variaram de ~2 kb at? ~50 kb e os genes PMQR foram encontrados em 22,2% dos isolados de S. enterica. O gene qnrA e o qnrB foram detectados em 11,1% e 5,5% dos isolados, respectivamente, e o gene qnrS em 2,7%. O gene qnrD n?o foi encontrado em nenhum dos isolados testados. O gene aac(6 )-Ib-cr foi detectado em 8,3% dos isolados. At? onde se sabe, este trabalho relata pela primeira vez muta??es no gene gyrA em S. Worthington de origem avi?ria, bem como, este ? o primeiro relato da presen?a dos genes qnrA, qnrS e aac(6 )-Ib-cr em cepas de S. enterica isoladas de amostras relacionadas com a cadeia produtiva de frangos no Brasil. A presen?a de determinantes de resist?ncia a quinolonas em isolados de S. enterica de origem avi?ria alerta para a poss?vel sele??o de resist?ncia pelo uso destes antimicrobianos na produ??o animal.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 462085.pdf: 1068489 bytes, checksum: 5d6806fb1169973228c8e48e31e91c88 (MD5) Previous issue date: 2014-08-19 / We have compared the behaviour and neurochemical effects of synthetic cathinones mephedrone and methedrone in mice, with attempts to evaluate some the mechanisms of action of methedrone, as well as the influence of nightclub-like stimulation on the behaviour. The effects of cathinone derivatives were examined in a series of behavioural tests in mice, and monoamine brain levels were determined by HPLC. Since there is a correlation between club parties and consume of recreational drugs, separated groups were pre-exposed to nightclub-like environment. Cathinone derivatives caused marked hyperlocomotion, allied to motor coordination inability, through 30 min after injection. Moreover, mephedrone caused anxiolytic-like effects, while methedrone induced anxiogenic actions. Both cathinone derivatives increased the latency in the hot-plate test, with a significant reduction of immobility time in tail suspension test. Mephedrone triggered 2- and 3-fold increase of dopamine and serotonin levels, respectively, in the nucleus accumbens, with 1.5-fold elevation of dopamine contents in the frontal cortex. Methedrone caused a 2-fold increase of dopamine in the nucleus accumbens and striatum, and 1.5-fold increase of serotonin levels in the hippocampus and striatum. Part of methedrone effects appear to be dependent on dopamine and serotonin modulation. Noteworthy, nightclub-like stimulation produced a further increase of latency to thermal stimulation, in both mephedrone and methedrone-treated mice. Mephedrone and methedrone induced a series of distinct behavioural changes likely by modulation of dopamine and serotonin systems. Curiously, increased latency to thermal stimulation elicited by cathinones was intensified by nightclub-like environment. / O presente estudo comparou os efeitos das catinonas sint?ticas metiladas, mefedrona e metedrona, sobre diversos par?metros comportamentais e bioqu?micos em camundongos, al?m de avaliar alguns dos poss?veis mecanismos relacionados com os efeitos in vivo da metedrona. Al?m disso, tamb?m foram analisados os efeitos da estimula??o semelhante a nightclubs sobre os efeitos comportamentais das duas subst?ncias de abuso. Os efeitos das catinonas, mefedrona e metedrona, foram avaliados em diversos paradigmas comportamentais e, ainda, sobre os n?veis cerebrais de monoaminas em camundongos, atrav?s de HPLC. Considerando a correla??o entre nightclubs e o consumo de drogas recreacionais, alguns grupos experimentais foram pr?-expostos a um ambiente com temperatura elevada, m?sica eletr?nica e luzes estrobosc?picas, durante sete dias antes da administra??o das subst?ncias-teste, a fim de reproduzir o local de consumo das catinonas. Os derivados das catinonas, mefedrona e metedrona, causaram hiperlocomo??o, associada com sinais de redu??o da coordena??o motora, durante 30 min ap?s os tratamentos. Al?m disso, a mefedrona causou efeitos ansiol?ticos, enquanto a metedrona induziu comportamento ansiog?nico. Ambos os derivados da catinona causaram um aumento da lat?ncia ? estimula??o t?rmica na placa-quente, acompanhado de redu??o marcante do tempo de imobilidade no teste de suspens?o da cauda. A administra??o de mefedrona induziu um aumento r?pido dos n?veis de dopamina e serotonina no nucleus accumbens (2 e 3 vezes, respectivamente), com um aumento na dopamina de 1,5 vezes, no c?rtex frontal. Por outro lado, a metedrona causou uma eleva??o de duas vezes nos n?veis de dopamina no nucleus accumbens e no estriado, al?m de um aumento de 1,5 vezes dos conte?dos de serotonina, no hipocampo e no estriado. A utiliza??o de diferentes ferramentas farmacol?gicas demonstrou que parte dos efeitos da metedrona est? relacionada com a modula??o dos sistemas dopamin?rgico e serotonin?rgico. Finalmente, foi demonstrado que a estimula??o ambiental do semelhante a nightclubs produziu um aumento dos efeitos analg?sicos da mefedrona e da metedrona no teste de placa-quente. A mefedrona e a metedrona induziram uma s?rie de altera??es comportamentais, que foram semelhantes ou distintas, dependendo do paradigma experimental avaliado. Os efeitos destas catinonas sint?ticas parecem estar diretamente relacionados com a modula??o dopamin?rgica e serotonin?rgica. Curiosamente, o aumento da lat?ncia ? estimula??o t?rmica ?s catinonas foi potencializado pela ambienta??o tipo nightclub.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vivian_Favero2.pdf: 2965291 bytes, checksum: d155fba5197427c1d537989b043c51f8 (MD5) Previous issue date: 2014-07-23 / Schistosomiasis is endemic in 74 countries, affecting more than 200 million people. In Brazil, Schistosoma mansoni is the only causative agent of schistosomiasis, which affects 19 states. Control measurements and effective treatment can result in a decrease of the parasitic load of individuals with the severe form. In this matter, when diagnostic methods with adequate sensitivity for monitoring are not used, those measurements may difficult diagnosis, favoring the persistence of the infection for long periods, as well as the environmental contamination and consequently exposure to local population reinfection. In these areas, or where there was recent introduction of S. mansoni, classic parasitological methods to find eggs in feces are not efficient. Although immunological and molecular techniques are currently considered as main diagnostic tools, parasitological methods re necessary to confirm the infection. Helmintex? has been recently described as highly sensitive diagnostic method that isolates eggs from 30 gram of feces through the interaction of eggs with paramagnetic microspheres in a magnetic field. Despite the sensibility, its limitation lies in the number of slides to be analyzed, making the process time consuming and not applicable for clinical routine. In this context, this work opens perspectives for the use of new tools in an attempt to optimize S. mansoni egg detection in the last step of the Helmintex?, using chemiluminescence, and ninhydrin staining. Another alternative tested was the ninhydrin staining. Helmintex? sediments containing S. mansoni eggs were fixed with 70% ethanol and deposited on Whatman Grade 541 filter paper, immersed in a solution of ninhydrin:ethanol (30: 70 %) for later eggs visualization at the optical microscope. Reading time for each filter was counted and registered. Ideal conditions for incubation with ninhydrin were established in 15 minutes at 24 ?C. Reading time for each sample was, in general, of 23 minutes. When compared to the original Helmintex? method, the use of ninhydrin decreased the reading time of the final sediment in, at least, 450 minutes. The results of this work showed that the implementation of new tools in existent diagnostic methods may contribute to a better performance of sensitive techniques with limited application in field studies, and open perspectives to new studies that aim to investigate and to optimize primordial steps of concentration methods. / A esquistossomose ? end?mica em 74 pa?ses, afetando mais de 200 milh?es de pessoas. No Brasil, o Schistosoma mansoni ? o ?nico agente etiol?gico da esquistossomose, que atinge 19 estados. Medidas de controle e tratamento efetivo podem resultar em diminui??o da carga parasit?ria de indiv?duos com a forma severa da doen?a. Assim, quando n?o forem utilizados m?todos diagn?sticos com sensibilidade adequada para acompanhamento, essas medidas podem dificultar o diagn?stico, favorecendo a perman?ncia da infec??o por longos per?odos, al?m da contamina??o ambiental e consequentemente a exposi??o ? popula??o local ? reinfec??o. Nestas ?reas, ou onde ocorreu introdu??o recente de S. mansoni, os m?todos parasitol?gicos cl?ssicos para encontrar ovos nas fezes n?o demonstram efic?cia. Embora as t?cnicas imunol?gicas e moleculares sejam consideradas atualmente as principais ferramentas de diagn?stico, s?o necess?rios m?todos parasitol?gicos para a confirma??o da infec??o. Recentemente, o Helmintex? foi descrito como um m?todo diagn?stico altamente sens?vel que isola ovos a partir de 30 gramas de fezes atrav?s da intera??o dos ovos com microesferas paramagn?ticos em um campo magn?tico. Apesar da sensibilidade, sua limita??o est? no n?mero de l?minas a serem analisadas, tornando o processo demorado e invi?vel para aplica??o na rotina cl?nica. Neste contexto, este trabalho abre perspectivas para a utiliza??o de novas ferramentas na tentativa de otimizar a detec??o de ovos de S. mansoni na ?ltima etapa do m?todo Helmintex?, utilizando a quimioluminesc?ncia, e a colora??o por ninidrina. Outra alternativa testada foi a colora??o do sedimento final com ninidrina. Os sedimentos de Helmintex? contendo ovos de S. mansoni foram fixados com etanol 70 % e depositados em papel filtro Whatman Grau 541, imersos em uma solu??o de ninidrina:etanol (30:70%) para posterior visualiza??o dos ovos corados em microsc?pio ?ptico. O tempo de leitura de cada filtro foi cronometrado. As condi??es ideais para incuba??o com a ninidrina foram estabelecidas em 15 minutos ? 24 ?C. O tempo de leitura para cada amostra foi, em m?dia, de 23 minutos. Em compara??o com o m?todo Helmintex? original, a utiliza??o de ninidrina diminuiu o tempo de leitura do sedimento final em, ao menos, 450 minutos. Os resultados deste trabalho mostraram que a implementa??o de novas ferramentas em m?todos diagn?sticos j? existentes podem contribuir para um melhor desempenho de t?cnicas sens?veis, por?m com aplica??o limitada em estudos de campo, e abrem perspectivas para novos estudos que visam investigar e otimizar etapas primordiais de m?todos de concentra??o.