A Síndrome de Sézary (SS) é um dos tipos mais comuns de linfoma cutâneo de células T (CTCL). Esta síndrome é caracterizada por eritrodermia, linfadenopatia generalizada e presença de células tumorais na pele, linfonodos e sangue periférico. A imunidade do hospedeiro está comprometida nesta síndrome, contudo, estudos relacionados à imunidade inata, particularmente sobre as células Natural Killer (NK) são mais escassos. As células NK exercem um papel essencial na resposta imune antitumoral. A proposta deste estudo é caracterizar o perfil fenotípico associado à ativação e inibição das células NK e a capacidade de secreção de citocinas em resposta aos agonistas de receptores Toll-like (TLR), TLR4, TLR7/TLR8 e TLR9 em pacientes com SS. Foram selecionados 14 pacientes com SS (7 homens, 7 mulheres), com 48-85 anos de idade provenientes do Ambulatório de Linfomas Cutâneos do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP, e um grupo controle com 22 indivíduos sadios (11 homens, 11 mulheres, idade de 48-75). Os resultados evidenciaram diminuição percentual de células NK CD56dim do sangue periférico dos pacientes SS, bem como baixa expressão de marcadores de ativação, NKG2D e NKG2C. A forma solúvel dos ligantes de NKG2D, MICB e MICA solúvel (sMICA/MICB), foi detectada em níveis séricos elevados para sMICB, e sMICA foi detectado em apenas 2 pacientes. Houve uma correlação negativa entre os níveis de sMICB e o percentual de células NK CD56brightCD16 NKG2D+. O perfil de secreção de citocinas das células NK, mostra, já na condição sem estímulo, um aumento percentual de TNF e CD107a em células NKCD56dim de pacientes com SS. Após o estímulo com os agonistas de TLR7/TLR8 houve um aumento na produção de CD107a e TNF nas células NKCD56bright e de TNF para as células NKCD56dim. Na produção de citocinas induzidas por agonistas de TLRs nos sobrenadantes de células mononucleares, foi observado que os agonistas TLR2 e TLR4 foram capazes de estimular a produção de IL-6, TNF e IL-10 enquanto o agonista de TLR7/8 mostrou um efeito adjuvante para a secreção de IFN-alfa, IFN-y e IL-10. Além disso, foi observado aumento de expressão de RNAm para TLR2 em células mononucleares avaliada por PCR em tempo real, como também para os fatores relacionados à resposta antiviral, como interferon tipo I (IFN- alfa), receptor de IFN-beta e interferon tipo III (IFN- ) em pacientes com SS. Quanto aos níveis séricos de citocinas, foi detectado aumento de IL-5 (citocina Th2), IL-6 (pró-inflamatória) e IL-10 (reguladora) nos SS, não diferindo quanto aos níveis de IL-1beta, IL-2, IL-17a, TNF e TGF-beta em relação ao grupo controle. Os resultados mostram que há uma diminuição percentual de células NK CD56dim, alteração da expressão dos receptores de ativação e elevação de ligantes solúveis que podem bloquear a ativação das células NK nos pacientes com SS. Além disto, as células NK exibem diminuição da produção de IFN-alfa, que contribuem na diminuição da resposta Th1. Há uma baixa responsividade das células NK aos ligantes de TLRs. Contudo, há um efeito adjuvante dos ligantes de TLRs em células mononucleares dos pacientes com SS, sendo que os agonistas de TLR2/4 e TLR7/8 foram capazes de restaurar parcialmente a produção de citocinas. Os resultados evidenciam que nos pacientes com SS, apesar da redução percentual das células NK, essas células são funcionais, mas que podem ser bloqueadas pelos ligantes solúveis de receptores de ativação. O uso de ligantes de TLRs pode ser uma estratégia para potencializar a produção de citocinas na Síndrome de Sézary / Sézary syndrome (SS) is one of the most common types of cutaneous T-cell lymphoma (CTCL). This syndrome is characterized by erythroderma, generalized lymphadenopathy and presence of tumor cells in the skin, lymph nodes and peripheral blood. Immunity of the host is compromised in syndrome, a study has related an innate immunity, particularly in Natural Killer (NK) cells are more scarce. NK cells play an essential role in the antitumor immune response. The aim of this study is to characterize the phenotypic profile associated with the activation and inhibition of NK cells and cytokine secretion capacity in response to the TLR4, TLR7 / TLR8 and TLR9 receptor agonists in SS patients. METHODS: We selected 14 patients with SS (7 men, 7 women, 48-85 years old) from the Cutaneous Lymphoma Outpatient Clinic of the Medical School of USP, and a control group with 22healthy individuals (11 men , 11 women, 48-75 years old). The results showed a decrease in CD56dim NK cells in the peripheral blood of SS patients, as well as low expression of activation markers, NKG2D and NKG2C. The soluble form of NKG2D, MICB and soluble MICA (sMICA/MICB) ligands was detected at high levels in serum for sMICB, and sMICA was detected in only 2 patients. There was a negative correlation between sMICB levels and the percentage of NK cells CD56brightCD16 NKG2D+. The cytokine secretion profile of NK cells, in the unstimulated condition, showed an increase of TNF and CD107a in NKCD56dim cells of SS patients. Upon stimulation of TLR7 / TLR8 agonists, CD107a and TNF production was higher in NKCD56bright cellsandforTNF in CD56dim cells.The agonists TLR2 and TLR4 in NK cells were able to stimulate the production of IL-6, TNF and IL-10,, while TLR7/8 agonist showed an adjuvant effect for secretion of IFN-alfa, IFN-y e IL-10. In addition, increased expression of TLR2 mRNA was observed in mononuclear cells evaluated by real-time PCR, simirlaly for factors related to antiviral response, such as interferon type I (IFN-alfa), IFN-Type III receptor (IFN - ) in patients with SS. Forserum levels of cytokines, IL- 5 (cytokine Th2), IL-6 (proinflammatory) and IL-10 (regulatory) were detectedhigher in SS, not differing in levels of IL-1beta, IL-2 , IL-17a, TNF and TGF-beta in relation to the control group. The results show that, there is a percentage decreased of CD56dim NK cells, alteration in activation receptor expression and elevation of soluble ligands that block theactivation of NK cells in SS patients. In addition, NK cells exhibit decreased IFN-? production, thatcontribute to the decrease in Th1 response. There is low responsiveness of NK cells to TLR ligands. However, there is an adjuvant effect of TLR ligands on mononuclear cells of SS patients, with TLR2/4 and TLR7 / 8 agonists is able to partially restore cytokine production. The results show that patients with SS, despite the percentage reduction of NK cells, these cells are functional, but can be blocked by soluble ligands of activation receptors. The use of TLR ligands may be a strategy to potentiate a production of cytokines in Sézary Syndrome

Superfícies híbridas nanoestruturadas Pt/Au com os depósitos de Au de 20, 50 e 100 nm de espessura foram obtidas pelo processo fotolitográfico. O molde utilizado foi um arranjo de microeletrodos interdigitados. As superfícies híbridas nanoestruturadas Pt/Au contendo 20, 50 e 100 nm de Au desenvolvidas foram caracterizadas por microscopia ótica, microscopia eletrônica de varredura, microscopia de força atômica, voltametria cíclica e espectroscopia de impedância eletroquímica. Então, aplicadas como sensores para detecção eletroquímica dos biomarcadores ácido ascórbico, ácido úrico, dopamina, hidroquinona e nitrito. Numa segunda etapa, as nanoestruturas de ouro foram recobertas com monocamada auto-organizada (self-assembled monolayers - SAM) de alcanotiol (cistamina, ácido mercaptoacético e 11-mercaptoundecanóico) visando a preparação da superfície para imobilização de biomoléculas, incluindo enzimas e anticorpos. A superfície híbrida bimetálica bifuncional nanoestruturada Pt/Au-SAM foi obtida realizando-se varreduras cíclicas em solução contendo 0,1 mol L-1 de H2SO4 em intervalos de varreduras de potenciais específicos para cada SAM, através deste procedimento foi possível remover a SAM somente da superfície da platina e mantendo sobre as nanoestruturas de ouro. A enzima glicose oxidase (Aspergillus niger) foi imobilizada por ligação covalente com auxílio de EDC/NHS e o ferroceno foi utilizado como mediador de elétrons. A caracterização eletroquímica foi feita em solução aquosa contendo 0,1 mol L-1 de ácido sulfúrico supra puro e em solução contendo 5,0 mmol da sonda redox ferrocianeto e ferricianeto de potássio utilizando-se a técnica de voltametria cíclica e espectroscopia de impedância eletroquímica. O peróxido de hidrogênio formado como produto da reação da catálise enzimática foi determinado sobre a superfície da platina em solução contendo 0,1 mol L-1 de PBS. A constante cinética aparente de Michaelis-Menten (KMapp) e a constante catalítica kcat foram calculadas e comparadas com outros transdutores relatados na literatura. A terceira aplicação foi a utilização desta superfície híbrida como um imunossensor eletroquímico para detecção de cortisol salivar. O anticorpo Anti-cortisol foi imobilizado com auxílio de EDC/NHS a SAM. Esse dispositivo foi imerso em soluções contendo 3.1 x 10-15 - 1.5 x 10-3 mol L-1 de cortisol. A relação sinal-concentração foi obtida através da técnica de espectroscopia de impedância eletroquímica observando-se a variação de transferência de carga com relação à variação de concentração de cortisol adsorvido ao dispositivo Pt/Au/SAM/Anticorpo-cortisol. Os limites de detcção obtidos foram 0,08, 207, 0,3, 11,1, 11,3, 0,2 × 10-6 e 9,3 × 10-13mol L-1 para glicose, ácido ascórbico, dopamina, hidroquinona, nitrito e ácido úrico, respectivamente. / Nanostructured hybrid surfaces Pt/Au containing 20, 50 and 100 nm of Au was obtained by the photolithographic process. The template used was an interdigitated microelectrodes array. The nanostructured hybrid surfaces Pt/Au containing 20, 50 and 100 nm of Au was characterized by optical microscopy, scanning electron microscopy, atomic force microscopy, cyclic voltammetry and electrochemical impedance spectroscopy. Then, applied as sensors for electrochemical detection of biomarkers ascorbic acid, uric acid, dopamine, hydroquinone and nitrite. In a second step, the gold nanostructures were coated with self-assembled monolayer (self-assembled monolayers - SAM) of alkanethiol (cystamine, mercaptoacetic acid and 11-mercaptoundecanoic acid) aiming at preparing the surface for biomolecule immobilization, including enzymes and antibodies. The bifunctional nanostructured hybrid surface Pt/Au-SAM was obtained by performing cyclic scans solution containing 0.1 mol L-1 H2SO4 at specific potential scans intervals for each SAM through this procedure was only possible to remove the SAM the platinum surface and holding on the gold nanostructures. The enzyme glucose oxidase (Aspergillus niger) was immobilized with EDC/NHS and ferrocene was used as an electron mediator. The electrochemical characterization was performed in an aqueous solution containing 0.1 mol L-1 of sulfuric acid and in a solution containing 5.0 mmol of potassium ferrocyanide and ferricyanide redox probe using cyclic voltammetry technique and electrochemical impedance spectroscopy. The hydrogen peroxide formed as a product of the enzyme-catalyzed reaction was measured on the surface of platinum solution containing 0.1 mol L-1 PBS. The apparent Michaelis-Menten kinetic constant (KMapp) and the catalytic constant kcat were calculated and compared with other transducers reported in the literature. The third application was the use of this hybrid surface and an electrochemical immunosensor for detecting salivary cortisol. Anti-cortisol antibody was immobilized at the SAM (mercaptocaetic acid) with EDC/NHS. This device was dipped in solutions containing 3.1 x 10-15 - 1.5 x 10-3 mol L-1 of cortisol. The signal-concentration relationship was obtained by electrochemical impedance spectroscopy technique of observing the variation in load transfer with respect to variation of cortisol concentration device adsorbed to Pt/Au/SAM/antibody-cortisol. The detection limit obtained were 0.08, 207, 0.3, 11.1, 11.3, 0.2 × 10-6 mol L-1 for glucose, ascorbic acid, dopamine, hydroquinone, nitrite, uric acid, respectively. Keywords: Nanostructured hybrid surface, sensors, biosensors, imunosensors, biomarkers, uric acid, ascorbic acid, dopamine, hydroquinone, glucose, cortisol.

O presente estudo avaliou a exposição, os efeitos e a bioacumulação de xenobióticos em mexilhões Perna perna coletados na Praia da Cocanha (Caraguatatuba - referência) e transplantados para: Engenho d\'Água (Ilhabela), Terminal Almirante Barroso - TEBAR (São Sebastião), Ilha das Palmas e Itaipu (Baía de Santos). Após 3 meses de exposição em cada estação do ano, os mexilhões foram analisados quanto à bioacumulação de metais, HPAs, LABs e a biomarcadores de exposição e efeito. Os organismos fixados na Ilhabela apresentaram concentrações mais elevadas de Cd, Hg, alterações significativas nas atividades de Glutationa Peroxidase (GPx) e Glutationa-S-Transferase (GST), no tempo de retenção do vermelho neutro (TRVN) e no desenvolvimento embriolarval (DE); no TEBAR apresentaram bioacumulação de HPAs, Fe, Co, Cd, alteração na atividade de CYP 450 (DBF), nos danos em DNA, lipoperoxidação e no TRVN; na Ilha das Palmas apresentaram bioacumulação de Co, Fe, Cr, Hg, Pb, LABs e alterações nas atividades de DBF, Catalase, GPx, Glutationa Redutase (GR), TRVN e DE; enquanto que os organismos transplantados para Itaipu acumularam Fe, Co, Cd, Hg, Pb e apresentaram alterações nas atividades de DBF, GPX, GR, GST, danos em DNA, TRVN e DE. A integração dos resultados de biomarcadores e bioacumulação propiciou um melhor entendimento da biodisponibilidade e dos efeitos de contaminantes para a espécie estudada no litoral de São Paulo. / The present study aimed to assess the exposure, effects and bioaccumulation ofxenobiotics in the mussel Perna perna transplanted from a clean site (Cocanha Beach, Caraguatatuba) to different sites (Engenho D\'Água Beach - Ilhabela; TEBAR oil terminal - São Sebastião; Palmas Island and Itaipu - Santos Bay). In each season, after 3 months of exposure, the mussels were recollected and their tissues were evaluated for bioaccumulation of metals, PAHs, LABs and biomarkers of exposure and effect. Organisms transplanted to Ilhabela accumulated Cd, Hg and exhibited significant alterations on Glutathione Peroxidase (GPx), Glutathione -S-Transferase (GST), Neutral Red retention time (NRRT) and embryonic development (ED); organisms transplanted to TEBAR accumulated PAHs, Fe, Co, Cd and showed significant differences on CYP 450 (DBF), DNA damage, lipidic peroxidation, NRRT and ED; organisms transplanted to Palmas accumulated Co, Fe, Cr, Hg, Pb, LABs and showed alterations on DBF, Catalase, GPx, Glutathione Reductase (GR), NRRT and ED; whereas organisms transplanted to Itaipu accumulated Fe, Co, Cd, Hg, Pb and exhibited alterations on DBF, GPX, GR and GST activities, DNA damages, NRRT and ED. This integrated assessment of biomarkers and bioaccumulation provided a better comprehension on the bioavailability and effects of contaminants for the studied species in São Paulo shore.

Este estudo teve como objetivo analisar a qualidade dos sedimentos do complexo estuarino de Cananéia-Iguape-Peruíbe (CIP), utilizando Biomarcadores, análises químicas e ecotoxicológicas, a fim de determinar se os metais nos sedimentos estariam biodisponíveis para os organismos bentônicos. As estações PT e PM apresentaram as piores condições, com toxicidade crônica (PT e PM) e aguda (PT), concentração de metais no sedimento e maior indução dos biomarcadores. As piores condições tendem a estar associadas aos sedimentos finos. Os elementos Pb, V, Co, Ni e ZN ultrapassaram os limites de \"Sediment Quality Guidelines\" (SQVs) nas estações PT e PM, Pb ultrapassou também os limites de TEL. A indução dos biomarcadores analisados e danos nos tecidos apresentaram maiores valores durante o inverno. As diferentes ferramentas utilizadas mostram que a contaminação por metais, advindas das atividades de mineração do Alto do Rio Ribeira de Iguape estão influenciando o estuário. A toxicidade encontrada foi atribuída principalmente aos metais, sugerindo que os fatores antrópicos produzem riscos ecológicos. Além disso, como a toxicidade durante o verão se apresenta mais na parte superior do estuário e no inverno essa mesma toxicidade se apresenta nas estações mais ao sul, esse estudo evidenciou que as áreas de deposição parecem mover-se ao longo do estuário, o que depende da quantidade da entrada de água doce no sistema, que se apresenta associada a sazonalidade. / This study aimed to analyze the sediment quality of the Cananéia-Iguape-Peruíbe estuarine complex (CIP) by using biomarkers, geochemical and ecotoxicological analyses, in order to determine if metals from sediments were bioavailable to benthic organisms to the point of causing negative effects. Stations PT and PM presented the worst conditions, with chronic (PT and PM) and acute toxicity (PT), metal contamination and biomarkers induction. Worst condition tend to be associated to fines. Elements Pb, V, Co, Ni and Zn exceeded Sediment Quality Guidelines (SQVs) limits for stations PT and PM, Pb exceeding also TEL values. Biomarkers induction and tissue damage appears to be worse during winter. The different lines of evidence showed that the metal contamination from mining activities on upper Ribeira de Iguape River alters the estuary. Toxicities were attributed mainly to metals suggesting that the anthropic factors are capable of producing ecological risks. Additionally, such as summer toxicity are present in the northern estuarine portion and during winter, this same toxicity appears to be in the southern portion, this study evidenced that depositional areas appears to move along the estuary, which in its turn depends on the freshwater inputs associate to seasonality.

O carcinoma basocelular (CBC) é uma neoplasia cutânea maligna de baixo potencial metastatizante, originada das células da camada basal da epiderme. Sua importância clínico-epidemiológica pode ser constatada pelo fato de constituir a neoplasia maligna mais comum na espécie humana, cujo principal fator etiológico é a exposição à radiação ultravioleta. Apesar da baixa incidência de metástases, a neoplasia pode adotar um comportamento localmente agressivo, com comprometimento de estruturas profundas e de forte apelo estético, como ocorre na região periocular. Uma das complicações advindas de sua infiltração neste sítio anatômico consiste na invasão de tecidos orbitários cujo tratamento é a exenteração, conduta mutiladora que consiste na retirada do globo ocular e das partes moles da órbita acometida. O objetivo deste estudo foi avaliar os casos de CBC com invasão orbitária que foram submetidos à exenteração no Hospital de Clínicas de Ribeirão Preto, no período de 1992 a 2012, para a possível identificação de fatores clínicos e morfológicos que possam predizer uma evolução desfavorável da neoplasia. Foi realizada uma coleta de dados clínicos, epidemiológicos e histopatológicos dos casos submetidos à exenteração a partir dos prontuários médicos dos pacientes. As lâminas referentes aos exames anátomo-patológicos foram revistas e foi realizado estudo imuno-histoquimico para os marcadores p53, bcl-2, actina de músculo liso e metaloproteinase-1. O grupo controle foi composto por pacientes com diagnóstico da neoplasia em topografia periocular, sem sinais de invasão orbitária. Para os casos com invasão orbitária o número de casos positivos marcados para p53 (0,21) e para actina de músculo liso (0,21) foi significantemente menor que o número de casos positivos para bcl-2 (0,63) e MMP-1 (0,58) (p= 0,0331). Entretanto, o número de casos positivos para bcl-2 (0,63) foi significantemente maior que o número de casos marcados por MMP-1 (0,58) (p=0,0126). Para os tumores sem invasão orbitária, o número de casos positivos para p53 (0,31) e actina (0,31) foi significantemente menor que o número de casos positivos para bcl-2 (0,63) eMMP-1 (0,50) (p=0,0273). Os resultados indicam que a invasão orbitaria por carcinoma basocelular palpebral ocorre com maior frequência no sexo masculino, em pacientes com longa história clínica de múltiplas lesões e submetidos a múltiplos procedimentos. Além disso, os marcadores estudados aparentemente não podem predizer um comportamento mais agressivo do tumor. / Basal cell carcinoma (BCC) is a malignant skin cancer of low metastasizing potential originated from the basal cells of the epidermis. Its clinical and epidemiological importance is evidenced by the fact that it is the most common malignancy in humans and it has as the main etiological factor the exposure to ultraviolet radiation. Despite the low incidence of metastases, the cancer can adopt a locally aggressive behavior with involvement of deep structures and it can have a strong aesthetic appeal, as in the periocular region. One of the complications arising from its infiltration in this anatomical site consists of orbital tissue invasion whose treatment is exenteration, a mutilating procedure consisting of the removal of the eyeball and the soft tissue of the affected orbit. The aim of this study was to evaluate the cases of BCC with orbital invasion that underwent exenteration at the Clinics Hospital of Ribeirão Preto Medical School, University of Sao Paulo, from 1992 through 2012, for possible identification of clinical and morphological factors that can predict an unfavorable evolution of the tumor. The clinical data were obtained from the patients\' charts and we have reviewed all the slides from exenteration specimens and performed immunohistochemical studies with p53, bcl-2, smooth muscle actin and metalloproteinase-1(MMP-1). The control group consisted of age-matched patients with eyelid basal cell carcinomas without orbital invasion. For cases with orbital invasion the number of positive cases labeled for p53 (0.21) and actin (0.21) was significantly lower than the number of positive cases for bcl-2 (0.63) and MMP -1 (0.58) (p = 0.0331). However, the number of positive cases for bcl-2 (0.63) was significantly greater than the proportion of positive cases for MMP-1 (0.58) (p = 0.0126). For cases without orbital invasion the number of positive cases for p53 (0.31) and actin (0.31) was significantly lower than the number of positive cases for bcl-2 (0.63) and MMP-1 (0.50) (p = 0.0273), even though the number of positive cases marked for MMP-1 (0.50) was not significantly different from number of positive cases for bcl-2 (0.63) (p = 0.059). The results indicate that orbital invasion of basal cell carcinoma of the eyelid was more frequent in male sex and that the patients have usually a long history of multiple lesions and were submitted to several procedures. In addition, our results suggest these markers can not predict an aggressive behavior for basal cell carcinomas of the periocular region.

A podoplanina humana consiste em uma proteína associada ao processo de invasão das células epiteliais neoplásicas, sendo sua alta expressão correlacionada com um pior prognóstico para os pacientes com câncer de cabeça e pescoço. A porção citoplasmática da podoplanina pode se ligar a ezrin, uma proteína que vem sendo associada com a ocorrência de metástases e menor sobrevida para os pacientes com neoplasias malignas. O objetivo do presente estudo foi avaliar em 48 carcinomas espinocelulares de lábio inferior a expressão imuno-histoquímica da podoplanina e da ezrin, nas células do front de invasão tumoral, e verificar a correlação entre a expressão das duas proteínas nas células epiteliais neoplásicas. A expressão membranosa e citoplasmática da podoplanina e da ezrin foi avaliada nas células neoplásicas periféricas e centrais das ilhotas tumorais, por meio de um método semi-quantitativo de escores. A associação entre a expressão membranosa e citoplasmática da podoplanina e da ezrin nos tumores foi feita pelo teste de qui-quadrado, com nível de significância de 5% e a correlação entre a expressão das duas proteínas foi realizada pelo teste de correlação de Spearman. Os resultados demonstraram uma forte expressão membranosa e citoplasmática da podoplanina nas células periféricas do front de invasão tumoral com ausência desta expressão na região central das ilhotas tumorais. A imunomarcação da ezrin foi homogênea nos tumores e predominantemente citoplasmática. Uma diferença estatisticamente significativa foi encontrada entre a expressão da podoplanina nas células neoplásicas periféricas e centrais (p<0,001), como também entre a expressão da ezrin membranosa e citoplasmática (p<0,001) nos carcinomas espinocelulares de lábio. Houve uma correlação positiva, porém sem significância estatística, entre a expressão da podoplanina membranosa e da ezrin membranosa ou citoplasmática nas células neoplásicas periféricas. Estes resultados comprovam que a podoplanina e ezrin são fortemente expressas pelas células neoplásicas do front de invasão tumoral e sugerem que ambas proteínas podem estar participando do processo de invasão dos carcinomas espinocelulares de lábio. / The human podoplanin consists in a protein associated to the invasion process of the epithelial malignant cells, being your high expression correlated with poor prognosis in patients with head and neck cancer. The cytoplasmic tail of the podoplanin can bind to ezrin, a protein that have been associated with metastasis and lower survival rate in patients with malignant neoplasms. The aim of this study was evaluate in 48 squamous cell carcinomas of the lower lip, the immunohistochemical expression of podoplanin and ezrin, in the invasive front, and verify correlation between the expression of both proteins by epithelial neoplastic cells. The membranous and cytoplasmic expression of podoplanin and ezrin was evaluated in peripheral and central areas of the tumor islets, using a semi-quantitative score method. The association between the membranous and cytoplasmic expression of podoplanin and ezrin in the tumors was performed by chi-square test, using a significance level of 5% and the correlation between the expression of both proteins was performed by Spearman correlation test. The results showed a high membranous and cytoplasmic podoplanin expression in the peripheral cells of the invasive front, with no expression of this protein in the central cells. The ezrin immunostaining was homogeneous and observed mainly in the cytoplasm of malignant cells. A statistically significant difference was found between the expression of podoplanin in peripheral and central tumor cells (p<0,001), as well between the membranous and cytoplasmic expression of ezrin (p<0.001) in squamous cell carcinoma of the lip. There was a positive correlation, but without statistical significance, between the expression of membranous podoplanin and membranous or cytoplasmic ezrin in the peripheral tumor cells. These results prove that podoplanin and ezrin are strongly expressed by malignant cells of the invasive front tumor and suggest that both proteins may be participating in the invasive process of the squamous cell carcinoma of the lip.

A proteína moesina, uma das proteínas do complexo ERM (ezrina, radixina e moesina), participa do processo de migração de células tumorais controlando a ligação entre o citoesqueleto de actina e os receptores transmembrana. As proteínas ERM vêm sendo investigadas como ligantes de outras glicoproteínas, como a podoplanina, cuja expressão é encontrada em células malignas de diversas neoplasias, incluindo o carcinoma espinocelular (CEC) de boca. O objetivo desse estudo foi avaliar as expressões imuno-histoquímicas da moesina e da podoplanina pelas células malignas no front de invasão de 84 pacientes com CEC de boca e suas associações com a evolução clínica e com o prognóstico dos pacientes. A associação entre a expressão imuno-histoquímica da moesina e da podoplanina pelas células malignas e as variáveis demográficas, clínicas e microscópicas foi avaliada pelo teste qui-quadrado ou teste exato de Fisher. As análises de sobrevida global e livre de doença em 5 e 10 anos foram calculadas pelo estimulador produto-limite de Kaplan-Meier e a comparação das curvas de sobrevida realizada pelo teste de log-rank. Os resultados mostraram que houve expressão da moesina pelas células malignas na região do front de invasão tumoral, entretanto, nenhuma associação estatisticamente significativa foi encontrada entre esta proteína e as características clínicas, demográficas e microscópicas. A expressão da podoplanina, pelas células malignas, foi significativamente associada à radioterapia (p=0,004), à invasão muscular (p=0,006) e ao comprometimento linfonodal (p=0,013). Não houve associação significativa entre a expressão das duas proteínas nos CECs de boca (p=0,460). A forte expressão da moesina pelas células malignas constituiu um fator de prognóstico desfavorável para os pacientes com CEC de boca e estadiamento clínico II e III. O comprometimento linfonodal histopatológico também se mostrou fator de prognóstico significativo para a recidiva da doença (p=0,018). Estes resultados sugerem que a expressão de moesina, pelas células malignas juntamente com o comprometimento linfonodal pode contribuir para determinar os pacientes com CEC de boca que apresentam um pior prognóstico. Além disso, verificamos que as proteínas moesina e podoplanina se expressam pelas células neoplásicas nos CEC de boca mas não parecem estar associadas no processo de invasão tumoral. / The moesin protein, one of the proteins of the ERM complex (ezrin, radixin and moesin) takes part in the migration of tumor cells process by controlling the relation between actin cytoskeleton and transmembrane receptors. The ERM proteins have been investigated as ligants of other glycoproteins, such as podoplanin, which are found in malignant cells of malignant, including oral squamous cell carcinoma (OSCC). The aim of this study was to evaluate the immunohistochemical expressions of moesin and podoplanin by malignant cells in the invasive front of 84 patients with oral squamous carcinoma and its association with clinical outcome and patients\' prognosis. Chi- square or Fisher\'s exact test was used to analyze the association between the moesin and podoplanin expressions by malignant cells and demographic, clinical and microscopic variables in oral squamous cell carcinoma patients. The 5 and 10 years survival rates were calculated by Kaplan-Meier method and the comparison of survival curves were performed using log-rank test. The results showed that there was moesin expression by malignant cells in the invasive front, however, no statistically significant association was found between this protein and demographic, clinical and microscopic features. The expression of podoplanin by malignant cells was significantly associated with radiotherapy (p=0.004), with muscular invasion (p=0.006) and lymph node involvement (p=0.013). There was no significant association between the expression of two proteins in OSCC (p=0.460). The strong expression of moesin by malignant cells was a factor of unfavorable prognosis for patients with OSCC and clinical stage II and III. The histopathological lymph node involvement was also significant prognostic factor for disease recurrence (p=0.018). These results suggest that the expression of moesin by malignant cells and lymph node involvement may help to determine patients with squamous cell carcinoma who have a poor prognosis. Furthermore, we found that moesin and podoplanin proteins are expressed by neoplastic cells in oral squamous cell carcinoma but not appear to be associated in the process of tumor invasion.

A poluição atmosférica interfere diretamente com a saúde populacional. Há evidências de que os animais de companhia representam sentinelas para fatores ambientais onde o homem e os demais animais estariam expostos. Animais podem ser usados como indicadores de poluição ambiental. O desenvolvimento industrial e urbano tem originado, em todo o mundo, um aumento crescente da emissão de poluentes atmosféricos. A complexa mistura de gases, partículas sólidas e substâncias químicas presentes no ar (&quot;indoor&quot; e &quot;outdoor&quot;) podem gerar a genotoxicidade, levando as alterações citogenéticas, mutações ou produção de adutos de DNA. O trabalho tem o objetivo de avaliar moforlogicamente 36 cães coletando o epitélio olfatório e pulmonar de cães saudáveis oriundos das diferentes regiões da cidade de São Paulo (zona Leste, Oeste, Norte e Sul). Analisou-se ainda, a quebra do DNA pela técnica do teste do Cometa (Eletroforese em gel de célula isolada) e Micronúcleo, marcar o aduto 8´hydroxy 2´deoxyguanosine pelo teste do Elisa (Enzyme linked immunosorbent assay), associando-os com o índice de poluição atmosférica (PM10), fornecidos pela CETESB. Não houve resultado significante na avaliação feita em escore de 0 a 3 pelo exame histopatológico e não há relação entre o índice de Material particulado Atmosférico e a lesão de DNA pelo Teste do Cometa no epitélio olfatório. Não há correlação entre idade e a lesão de DNA pelo Teste do Cometa no epitélio olfatório e pelo epitélio pulmonar. Há correlação significativa entre o índice de Material particulado Atmosférico e a lesão de DNA no epitélio pulmonar pelo Teste do Cometa. A utilização do epitélio pulmonar em cães no teste do COMETA demonstrou resultado significante, podendo ser indicado como um bioindicador do ar atmosférico. Este projeto mostrou uma tendência da zona Sul ser uma região menos poluída, onde há menor alteração histopatológica pulmonar e menor lesão de DNA em cães comparada à outras regiões com maior índice de material particulado. O teste do Micronúcleo foi padronizado, porém não mostrou resultado significante. O teste Elisa teve resultados opostos ao teste Cometa, sugerindo sua relação com o índice de ozônio. / The atmospheric pollution directly interferes with the population health. Evidences have been shown that pets represent sentinels for environmental factors which the man and the other animals would be susceptible. Animals can be used as indicatives of the environmental pollution. The industrial and urban developments have originated, in the whole world, an increase of the emission of atmospheric pollutants. The complex indoor &quot;mixture of gases, solid particles and chemical substances in the air can induce genotoxicity, leading the citogenetic alterations, mutations or production of DNA adducts. Thus, this work has the objective to evaluate morforlogically the olfactory and pulmonary epitelia of 36 healthy dogs of the different regions of the city of São Paulo (zone East, West, North and South). The DNA breaks was analyzed by the Comet assay (Eletroforese in gel of isolated cell) and Micronucleus. The analysis of the 8´hydroxy 2´deoxyguanosine adduct was performed by Elisa test (Enzyme linked immunosorbent assay). The parameters were associated with the index of atmospheric pollution (PM10), supplied for the CETESB. The histopathological evaluation of the epithelium included the graduation of 0 to 3. No relationship with the index of atmospheric particulated material with the level of DNA breaks by the Comet assay in the olfactory epithelium was obtained. It does not have correlation between age and the injury of DNA for the Test of the Comet in the olfactory epithelium and neither for the pulmonary epithelium. It has significant correlation between the index of atmospheric particulate material and the injury of DNA in the pulmonary epithelium for the Comet assay. The use of the pulmonary epithelium in dogs in the COMET assay resulted significant, being able to be indicated as a bioindicador of atmospheric air. This project showed that the South region of the Sao Paulo city is apparently a less polluted region. The animals from that region show minor pulmonary alterations and lesser injury of DNA, in comparison with dogs from other regions. The micronucleus test did not show significant results. The Elisa test showed opposite results when compared to the Comet assay, suggesting its relation with the ozone index.

INTRODUÇÃO: O corte manual da cana-de-açúcar é uma atividade que impõe ao cortador uma elevada carga física, pois requer a execução de movimentos vigorosos, rápidos e repetitivos. Trabalham em condições de elevadas temperaturas ambientais e baixa umidade relativa do ar que, com o uso de vestimentas aumenta risco de sobrecarga térmica, bem como se expõem aos poluentes gerados pela queima da cana-de-açúcar. OBJETIVO: avaliar os efeitos agudos e em longo prazo do trabalho na colheita de cana-de-açúcar queimada nas concentrações da proteína CC16, na função renal e em marcadores inflamatórios sistêmicos, em um grupo de cortadores de cana-de-açúcar. MÉTODOS: Foram avaliados 78 homens, cortadores de cana-de-açúcar empregados em uma usina de açúcar e álcool localizada na Região Oeste do Estado de São Paulo. Eles foram submetidos a avaliações clínicas e à coleta de amostras de sangue e de urina, utilizadas para análises de marcador de toxicidade pulmonar (proteína CC16), de marcadores renais e inflamatórios sistêmicos, em três momentos distintos ao longo do ano: 1) Pré-Safra, (Abril de 2014), no início da jornada de trabalho (7h00min); 2) Três meses após o início da safra, antes e após uma jornada diária de trabalho (7h00min e 16h00min); 3) Após seis meses do início da safra, antes do início da jornada de trabalho (7h00min). Foram realizados registros da concentração de material particulado (MP2,5), temperatura e umidade relativa do ar. RESULTADOS: A concentração de MP2,5 foi de 27,0 (23,0-33,0) ug/m3 e 101,0 (31,0-139,5) ?g/m3 no período da pré-safra e na safra respectivamente. A mediana da temperatura e umidade relativa do ar no período da pré-safra foram de 32,6 (25,4-37,4)°C e 45,4 (35,0-59,7)% respectivamente; no período da Safra foram de 29,7 (24,1-34,0)°C e 54,9 (34,7-63,2)% respectivamente. A idade dos trabalhadores foi de 37,9±11,0 anos, eles cortam, em média, nove toneladas de cana-de-açúcar/dia. Foram observadas reduções agudas e ao longo da safra nas concentrações plasmáticas e urinárias da proteína CC16. Após uma jornada diária de trabalho observou-se evidências de desidratação, queda da filtração glomerular, aumento de biomarcadores de injúria e reparação tubular renal (NGAL, KIM-1, IL-18, calbindina, MCP-1, osteopontina, e TFF-3) e aumento de marcadores inflamatórios sistêmicos (leucócitos, ácido úrico, LDH). Ao longo da safra observou-se aumento significante de cistatina C, ureia, CPK, NGAL e monócitos no sangue e de marcadores urinários como NGAL, MCP-1, TFF-3, fósforo, magnésio e densidade. CONCLUSÃO: O trabalho no corte manual de cana-de-açúcar submete os trabalhadores à sobrecarga física, exposição a poluentes e à elevadas temperaturas. Foi observado efeito agudo e ao longo da safra nas concentrações da proteína CC16, na alteração de biomarcadores inflamatórios sistêmicos, de equilíbrio hidroeletrolítico e na função renal, incluindo alterações de marcadores que sugerem lesão estrutural renal / INTRODUCTION: The manual sugarcane harvesting is an activity that requires considerable physical exertion, involves vigorous, quick, repetitive cutting movements. They work under conditions of high temperatures and low relative air humidity that, with the use of clothing, increases the risk of thermal overload, as well as expose themselves to the pollutants from burning of sugarcane. AIM: To evaluate the short and long-term effects of harvesting burnt sugarcane on the CC16 protein concentrations, renal function, and systemic inflammatory markers in a group of sugarcane cutters. METHODS: A total of 78 sugarcane cutters employed in a sugar-alcohol mill in the state of São Paulo, Brazil were evaluated. They underwent clinical evaluations and the collection of both blood and urine samples, used for analysis of pulmonary toxicity (CC16 protein), renal markers and systemic inflammatory markers performed at three different times throughout the year: 1) In the pre-harvest period (April 2014), at the onset of the working shift (7h00 am); 2) Three months after the onset of the harvest, before and after the daily work shift (7h00 a.m. and 4h00 p.m.); 3) Six months after the onset of the harvest, before the work shift (7h00 am). The concentrations of particulate matter (MP2.5), temperature and relative air humidity were recorded. RESULTS: The concentrations of PM2.5 were 27.0 (23.0-33.0) and 101.0 (31.0-139.5) ?g/m3 in the pre-harvest and harvest periods, respectively. The medians temperature and relative air humidity in the pre-harvest period were 32.6 (25.4-37.4) °C and 45.4 (35.0-59.7) % respectively; in the harvest period were 29.7 (24.1-34.0) °C and 54.9 (34.7-63.2) % respectively. The age of the workers was 37.9 ± 11.0 years, they cut, on average, nine tons of sugarcane/day. Short and long-term reductions in plasmatic and urinary concentrations of CC16 protein were observed. There was an acute increase in the concentrations of markers suggestive of dehydration, decreased glomerular filtration, increased biomarkers of injury and renal tubular repair (NGAL, KIM-1, IL-18, calbindin, MCP-1, osteopontin, and TFF-3 ) and increased systemic inflammatory markers (leukocytes, uric acid, DHL). Six months after the onset of the harvest, a significant increase of cystatin C, urea, CPK, NGAL and monocytes in the blood and urinary markers such as NGAL, MCP-1, TFF-3, phosphorus, magnesium and density were observed. CONCLUSION: The manual sugarcane harvesting exposes workers to physical overload, pollutants and high temperatures. It was observed an acute and chronic effects in the concentrations of CC16 protein, in systemic inflammatory biomarkers, hydroelectrolytic balance and renal function, including changes in markers that suggest renal structural damage

Introdução: Os estudos com proteômica especificamente relacionada à nefrologia e urologia pediátrica são limitados. O diagnóstico do comprometimento da função renal e da sua deterioração na presença de uropatias obstrutivas congênitas (UOC) representa o desafio na rotina da nefro-urologia pediátrica. Novos biomarcadores com o potencial para detecção precoce da lesão renal surgiram recentemente, permitindo a escolha da melhor opção terapêutica no tempo hábil, e assim minimizando ou prevenindo o dano renal definitivo. Objetivos: Avaliar o perfil de dois biomarcadores renais séricos: creatinina (CrS) e cistatina C (CyCs); e seis biomaracadores renais urinários: lipocalina associada à gelatinase neutrofílica (NGAL), proteína ligadora de retinol (RBP), molécula de injúria renal 1 (KIM-1), cistatina C na urina (CyCu), fator transformador de crescimento-beta 1 (TGF-beta1) e microalbuminúria (uALB) durante o primeiro ano de vida em lactentes saudáveis; em relação à detecção precoce da lesão renal em lactentes com UOC; em relação à sua capacidade de prever a necessidade de intervenção cirúrgica em lactentes com UOC. Metodologia: 37 lactentes com UOC foram divididos em três subgrupos: 14/37 casos com hidroureteronefrose unilateral (HU), 13/37 com hidroureteronefrose bilateral (HB) e 10/37 com obstrução de vias urinárias baixas (OTUB); e comparados com 24 lactentes saudáveis. No grupo dos pacientes, as amostras de sangue e urina foram obtidas ao nascer e entre o 3º e 7º dia, 1º, 2º, 3º, 6º, 9º e 12º mês de vida. Grupo de controle seguia o mesmo cronograma, com exceção da coleta de sangue que ocorria ao nascer, entre o 3º e 7º dia, no 6º e 12º mês de vida. Todas as amostras foram armazenadas sob - 70 ºC, e analisadas posteriormente através de imunoensaio enzimático quantitativo (ELISA). Resultados: No grupo-controle, CrS, CyCs, CyCu e RBP refletiram a maturação glomerular e tubular. O ritmo de filtração glomerular pela CyCs atingiu os níveis estáveis no 6º mês de vida (93 ± 22 mL/min/1,73 m2). KIM-1 e TGF-beta1 mantiveram os níveis absolutos próximos ao limite de detecção pelo método. Os valores do NGAL no sexo feminino foram significativamente maiores (p=0,005) ao longo do 1º ano, quando comparados aos do sexo masculino. Em comparação aos controles, a coorte dos pacientes apresentou valores mais elevados para todos os biomarcadores urinários no 1º mês de vida (p <= 0,009), sendo que NGAL (p=0,005), TGF-betsa1 (p < 0,001) e ?ALB (p < 0,001) mostraram-se elevados desde o nascimento, em comparação aos controles. O RBP apresentou o melhor desempenho no subgrupo com HB e OTUB (AUC=0,844, sensibilidade >=83,3%, especificidade 94,3%), assim como o KIM-1 no HU (AUC=0,768, sensibilidade 70,7%, especificidade 82,7%). RBP em combinação com TGF-ß1 ou KIM- 1 e NGAL com CyCs e CyCu, atingiram os melhores resultados para detecção da lesão renal (AUC=0,934, sensibilidade 89,4%, especificidade 92,8%; AUC=0,896, sensibilidade 86,8%, especificidade 81,1%; AUC=0,867, sensibilidade 92,4%, especificidade 79,5%, respectivamente). Nos pacientes operados, os níveis elevados de RBP (p <= 0,043), NGAL (p <= 0,043), KIM-1 (p <= 0,03) e TGF-beta1 (p <= 0,034) baixaram significativamente após a cirurgia, no subgrupo com HU e OTUB. NGAL, isolado ou em combinação, com CyCs e CyCu demonstrou o melhor desempenho para determinar a necessidade cirúrgica (AUC=0,801, sensibilidade 63,6%, especificidade 96,7%; AUC=0,881, sensibilidade 87,7%, especificidade 82,2%, respectivamente). A analise do perfil dos biomarcadores indicou a necessidade da intervenção cirúrgica em 55,4% (7/13) dos casos não-operados e antecipou a decisão cirúrgica no mínimo 3 meses, em 58% (14/24) de todos os pacientes operados, baseada nas diretrizes atuais. Conclusão: A evolução dos valores normais dos biomarcadores no primeiro ano de vida, pode servir como a base para os próximos estudos de detecção precoce de afecções uro-nefrologicas. RBP, NGAL, KIM-1, TGF-beta1 e CyC, individualmente ou em combinação, demonstraram um forte potencial para identificar a lesão renal e servir como uma ferramenta de diagnóstico não-invasivo para diferenciar pacientes que necessitam de intervenção cirúrgica precoce daqueles que se beneficiariam de uma conduta conservadora / Introduction: The proteomics studies specifically related to pediatric nephrology and urology are limited. The diagnosis of renal function impairment and deterioration in congenital obstructive uropathies (COU) represents challenge in pediatric nephrourology routine. New renal biomarkers applied in this setting have potential for early renal injury detection, allowing reliable choice of optimal therapeutic options and thus preventing or minimizing definitive renal damage. Objectives: To analyze the first-year profiles of two serum renal biomarkers: Creatinine (CrS) and Cystatin C (CyCs); and six urinary renal biomarkers: Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin (NGAL), Retinol- Binding Protein (RBP), Kidney Injury Molecule-1 (KIM-1), urine Cystatin C (CyCu), Transforming Growth Factor Beta 1 (TGF-beta1), and microalbuminuria (uALB) in a cohort of healthy infants; in relation to early detection of renal injury capability in a group of infants with COU; in relation to capability of predicting the need for surgery in a group of infants with COU. Methods: 37 infants with COU were divided in 3 subgroups: 14/37 cases with unilateral hydro(uretero)nephrosis (UH), 13/37 with bilateral hydro(uretero)nephrosis (BH) and 10/37 patients with lower urinary tract obstruction (LUTO), compared with 24 healthy infants matched by gestational age and birth weight. In the patient group, blood and urine samples were collected at birth, between 3rd-7th day, at 1st, 2nd, 3rd, 6th, 9th and 12th month of age. In the control group urine sampling followed the same routine with exception that blood sampling was obtained between 3rd-7th day, at 6th and 12th month of age. The samples were stored at -70 ºC, and thereafter analyzed by quantitative enzymatic immunoassay (ELISA). Results: In the group of healthy controls, the values of CrS, CyCs, CyCu and RBP reflected glomerular and tubular maturation. The glomerular filtration rate by CyCs reached steady-state levels at 6th month of life (93 ± 22 mL/min/1,73 m2). KIM-1 and TGF-beta1maintained very low absolute levels, near to the limit of detection by the method. NGAL levels in females were significantly higher (p=0,005) throughout the first year of life, when compared to male gender. In the cohort of patients, all the urinary biomarkers showed significantly higher values at the first month of life (p <= 0,009), while NGAL (p=0,005), TGF-beta1(p < 0,001) e uALB (p < 0,001) were high since birth, compared to control group. The best single biomarker performance was achieved by RBP in BH and LUTO subgroups (AUC=0,844, sensitivity >= 83,3%, specificity 94,3%), and by KIM-1 in UH subgroup (AUC=0,768, sensitivity 70,7%, specificity 82,7%). The best biomarker combination results for all subgroups were obtained by matching RBP with TGF-beta1 or KIM-1 and NGAL with CyC (AUC=0,934, sensitivity 89,4%, specificity 92,8%; AUC=0,896, sensitivity 86,8%, specificity 81,1%; AUC=0,867, sensitivity 92,4%, specificity 79,5%, respectively). In the operated group of patients, the levels of RBP (p <= 0,043), NGAL (p <= 0,043), KIM-1 (p <= 0,03) e TGF-beta1 (p <= 0,034) dropped significantly after surgery, in UH and LUTO subgroups. NGAL alone or in combination with CyCs and CyCu, demonstrated the best performance to determine the need for surgery (AUC=0,801, sensitivity 63,6%, specificity 96,7%; AUC=0,881, sensitivity 87,7%, specificity 82,2%, respectively). Biomarkers\' profile analysis indicated the need for surgical intervention in 55,4% (7/13) of non-operated cases and anticipated clinically based surgical decision for at least 3 months, in 58% (14/24) of all operated patients. Conclusions: The presented biomarkers\' normal values evolution during the first year of life can be of use as a base for future studies that will involve early detection of uronephrological disorders in infants. RBP, NGAL, KIM-1, TGF-beta1 and CyC, alone or in combination, demonstrated strong capability to identify renal injury and serve as a noninvasive diagnostic tool for differentiating between infants that require early surgical intervention from those who would benefit from conservative approach