Uma das maiores dificuldades das terapias de reprodução assistida é a seleção de células germinativas de boa qualidade para posterior fertilização e implantação. Atualmente, a seleção de oócitos se dá basicamente por avaliação morfológica, que não reflete satisfatoriamente a competência oocitária. Assim, a busca por bioindicadores da qualidade oocitária é necessária. O cumulus oophorus forma um conjunto de células somáticas que circundam o oócito no folículo antral,mantendo uma relação íntima com a célula germinativa, com comunicação direta via junções tipo GAP. As células do cumulus oophorus são descartadas após técnicas de fertilização in vitro, o que as torna um material de fácil acesso, livre de conflitos éticos. Uma série de metodologias de análise das células do cumulus foram propostas para identificação de anormalidades no oócito. Porém, nenhuma delas é rotineiramente utilizada na clínica. Os processos celulares das células do cumulus refletem as condições do microambiente folicular, e podem, assim, trazer evidências das condições oocitárias. Nosso grupo analisou as células do cumulus primeiramente por meio de abordagens de bioinformática, que revelaram processos celulares relacionados ao desenvolvimento de embriões até o estágio de blastocisto. Com base nestes resultados, análises de parâmetros bioquímicos e expressão gênica das células do cumulus foram realizadas e permitiram a identificação de possíveis biomarcadores da qualidade do oócito que levam em consideração as características clínicas das pacientes. Estas análises indicaram que expressão do gene PTGS2 e a atividade da enzima Glutationa-S-Transferase como indicadores da formação de blastocistos em pacientes com diferentes variáveis clínicas (backgrounds) analisados. Se confirmados, estes parâmetros poderão ser utilizados como biomarcadores no ambiente clínico, elevando as taxas de sucesso em técnicas de reprodução assistida. / One of the great challenges in assisted reproduction techniques is the selection of appropriate germ cells for fertilization and implantation. Nowadays, oocyte selection occurs basically through morphological evaluation, which does not reflect satisfactorily the oocyte competence. Therefore, the search for bioindicators of oocyte quality is necessary. The cumulus oophorus forms a set of somatic cells that surround the oocyte in the antral follicle, participating in the processes of oocyte maturation and folliculogenesis. These cells maintain an intimate relationship with the germ cell, with direct communication via GAP junctions. Cumulus oophorus cells are discarded in in vitro fertilization techniques, which makes them an easy-access material that can be collected in a free-of-ethicalissues way. A series of cumulus cell analysis methodologies were proposed to identify abnormalities in the oocyte. However, none of them is routinely used in clinical environment. The cellular processes of cumulus cells reflect the conditions of the follicular microenvironment, and may thus bring evidences of oocyte conditions. Our group analyzed cumulus cells in search of predictors of oocyte quality primarily through bioinformatics approaches, which revealed cellular processes related to the development of embryos up to the blastocyst stage. Based on these results, analyzes of biochemical parameters and gene expression of cumulus cells were performed and allowed the identification of possible biomarkers of oocyte quality that takes into consideration patients clinical variables. These analysis indicated PTGS2 expression and Glutathione-S-Transferase activity as indicators of blastocyst formation in all patient profiles (backgrounds) analyzed. If confirmed, these parameters may be used as biomarkers in clinical environment, improving assisted reproduction success rates.

O carcinoma basocelular (CBC) é uma neoplasia cutânea maligna de baixo potencial metastatizante, originada das células da camada basal da epiderme. Sua importância clínico-epidemiológica pode ser constatada pelo fato de constituir a neoplasia maligna mais comum na espécie humana, cujo principal fator etiológico é a exposição à radiação ultravioleta. Apesar da baixa incidência de metástases, a neoplasia pode adotar um comportamento localmente agressivo, com comprometimento de estruturas profundas e de forte apelo estético, como ocorre na região periocular. Uma das complicações advindas de sua infiltração neste sítio anatômico consiste na invasão de tecidos orbitários cujo tratamento é a exenteração, conduta mutiladora que consiste na retirada do globo ocular e das partes moles da órbita acometida. O objetivo deste estudo foi avaliar os casos de CBC com invasão orbitária que foram submetidos à exenteração no Hospital de Clínicas de Ribeirão Preto, no período de 1992 a 2012, para a possível identificação de fatores clínicos e morfológicos que possam predizer uma evolução desfavorável da neoplasia. Foi realizada uma coleta de dados clínicos, epidemiológicos e histopatológicos dos casos submetidos à exenteração a partir dos prontuários médicos dos pacientes. As lâminas referentes aos exames anátomo-patológicos foram revistas e foi realizado estudo imuno-histoquimico para os marcadores p53, bcl-2, actina de músculo liso e metaloproteinase-1. O grupo controle foi composto por pacientes com diagnóstico da neoplasia em topografia periocular, sem sinais de invasão orbitária. Para os casos com invasão orbitária o número de casos positivos marcados para p53 (0,21) e para actina de músculo liso (0,21) foi significantemente menor que o número de casos positivos para bcl-2 (0,63) e MMP-1 (0,58) (p= 0,0331). Entretanto, o número de casos positivos para bcl-2 (0,63) foi significantemente maior que o número de casos marcados por MMP-1 (0,58) (p=0,0126). Para os tumores sem invasão orbitária, o número de casos positivos para p53 (0,31) e actina (0,31) foi significantemente menor que o número de casos positivos para bcl-2 (0,63) eMMP-1 (0,50) (p=0,0273). Os resultados indicam que a invasão orbitaria por carcinoma basocelular palpebral ocorre com maior frequência no sexo masculino, em pacientes com longa história clínica de múltiplas lesões e submetidos a múltiplos procedimentos. Além disso, os marcadores estudados aparentemente não podem predizer um comportamento mais agressivo do tumor. / Basal cell carcinoma (BCC) is a malignant skin cancer of low metastasizing potential originated from the basal cells of the epidermis. Its clinical and epidemiological importance is evidenced by the fact that it is the most common malignancy in humans and it has as the main etiological factor the exposure to ultraviolet radiation. Despite the low incidence of metastases, the cancer can adopt a locally aggressive behavior with involvement of deep structures and it can have a strong aesthetic appeal, as in the periocular region. One of the complications arising from its infiltration in this anatomical site consists of orbital tissue invasion whose treatment is exenteration, a mutilating procedure consisting of the removal of the eyeball and the soft tissue of the affected orbit. The aim of this study was to evaluate the cases of BCC with orbital invasion that underwent exenteration at the Clinics Hospital of Ribeirão Preto Medical School, University of Sao Paulo, from 1992 through 2012, for possible identification of clinical and morphological factors that can predict an unfavorable evolution of the tumor. The clinical data were obtained from the patients\' charts and we have reviewed all the slides from exenteration specimens and performed immunohistochemical studies with p53, bcl-2, smooth muscle actin and metalloproteinase-1(MMP-1). The control group consisted of age-matched patients with eyelid basal cell carcinomas without orbital invasion. For cases with orbital invasion the number of positive cases labeled for p53 (0.21) and actin (0.21) was significantly lower than the number of positive cases for bcl-2 (0.63) and MMP -1 (0.58) (p = 0.0331). However, the number of positive cases for bcl-2 (0.63) was significantly greater than the proportion of positive cases for MMP-1 (0.58) (p = 0.0126). For cases without orbital invasion the number of positive cases for p53 (0.31) and actin (0.31) was significantly lower than the number of positive cases for bcl-2 (0.63) and MMP-1 (0.50) (p = 0.0273), even though the number of positive cases marked for MMP-1 (0.50) was not significantly different from number of positive cases for bcl-2 (0.63) (p = 0.059). The results indicate that orbital invasion of basal cell carcinoma of the eyelid was more frequent in male sex and that the patients have usually a long history of multiple lesions and were submitted to several procedures. In addition, our results suggest these markers can not predict an aggressive behavior for basal cell carcinomas of the periocular region.

A poluição atmosférica interfere diretamente com a saúde populacional. Há evidências de que os animais de companhia representam sentinelas para fatores ambientais onde o homem e os demais animais estariam expostos. Animais podem ser usados como indicadores de poluição ambiental. O desenvolvimento industrial e urbano tem originado, em todo o mundo, um aumento crescente da emissão de poluentes atmosféricos. A complexa mistura de gases, partículas sólidas e substâncias químicas presentes no ar ("indoor" e "outdoor") podem gerar a genotoxicidade, levando as alterações citogenéticas, mutações ou produção de adutos de DNA. O trabalho tem o objetivo de avaliar moforlogicamente 36 cães coletando o epitélio olfatório e pulmonar de cães saudáveis oriundos das diferentes regiões da cidade de São Paulo (zona Leste, Oeste, Norte e Sul). Analisou-se ainda, a quebra do DNA pela técnica do teste do Cometa (Eletroforese em gel de célula isolada) e Micronúcleo, marcar o aduto 8´hydroxy 2´deoxyguanosine pelo teste do Elisa (Enzyme linked immunosorbent assay), associando-os com o índice de poluição atmosférica (PM10), fornecidos pela CETESB. Não houve resultado significante na avaliação feita em escore de 0 a 3 pelo exame histopatológico e não há relação entre o índice de Material particulado Atmosférico e a lesão de DNA pelo Teste do Cometa no epitélio olfatório. Não há correlação entre idade e a lesão de DNA pelo Teste do Cometa no epitélio olfatório e pelo epitélio pulmonar. Há correlação significativa entre o índice de Material particulado Atmosférico e a lesão de DNA no epitélio pulmonar pelo Teste do Cometa. A utilização do epitélio pulmonar em cães no teste do COMETA demonstrou resultado significante, podendo ser indicado como um bioindicador do ar atmosférico. Este projeto mostrou uma tendência da zona Sul ser uma região menos poluída, onde há menor alteração histopatológica pulmonar e menor lesão de DNA em cães comparada à outras regiões com maior índice de material particulado. O teste do Micronúcleo foi padronizado, porém não mostrou resultado significante. O teste Elisa teve resultados opostos ao teste Cometa, sugerindo sua relação com o índice de ozônio. / The atmospheric pollution directly interferes with the population health. Evidences have been shown that pets represent sentinels for environmental factors which the man and the other animals would be susceptible. Animals can be used as indicatives of the environmental pollution. The industrial and urban developments have originated, in the whole world, an increase of the emission of atmospheric pollutants. The complex indoor "mixture of gases, solid particles and chemical substances in the air can induce genotoxicity, leading the citogenetic alterations, mutations or production of DNA adducts. Thus, this work has the objective to evaluate morforlogically the olfactory and pulmonary epitelia of 36 healthy dogs of the different regions of the city of São Paulo (zone East, West, North and South). The DNA breaks was analyzed by the Comet assay (Eletroforese in gel of isolated cell) and Micronucleus. The analysis of the 8´hydroxy 2´deoxyguanosine adduct was performed by Elisa test (Enzyme linked immunosorbent assay). The parameters were associated with the index of atmospheric pollution (PM10), supplied for the CETESB. The histopathological evaluation of the epithelium included the graduation of 0 to 3. No relationship with the index of atmospheric particulated material with the level of DNA breaks by the Comet assay in the olfactory epithelium was obtained. It does not have correlation between age and the injury of DNA for the Test of the Comet in the olfactory epithelium and neither for the pulmonary epithelium. It has significant correlation between the index of atmospheric particulate material and the injury of DNA in the pulmonary epithelium for the Comet assay. The use of the pulmonary epithelium in dogs in the COMET assay resulted significant, being able to be indicated as a bioindicador of atmospheric air. This project showed that the South region of the Sao Paulo city is apparently a less polluted region. The animals from that region show minor pulmonary alterations and lesser injury of DNA, in comparison with dogs from other regions. The micronucleus test did not show significant results. The Elisa test showed opposite results when compared to the Comet assay, suggesting its relation with the ozone index.

A Síndrome de Sézary (SS) é um dos tipos mais comuns de linfoma cutâneo de células T (CTCL). Esta síndrome é caracterizada por eritrodermia, linfadenopatia generalizada e presença de células tumorais na pele, linfonodos e sangue periférico. A imunidade do hospedeiro está comprometida nesta síndrome, contudo, estudos relacionados à imunidade inata, particularmente sobre as células Natural Killer (NK) são mais escassos. As células NK exercem um papel essencial na resposta imune antitumoral. A proposta deste estudo é caracterizar o perfil fenotípico associado à ativação e inibição das células NK e a capacidade de secreção de citocinas em resposta aos agonistas de receptores Toll-like (TLR), TLR4, TLR7/TLR8 e TLR9 em pacientes com SS. Foram selecionados 14 pacientes com SS (7 homens, 7 mulheres), com 48-85 anos de idade provenientes do Ambulatório de Linfomas Cutâneos do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP, e um grupo controle com 22 indivíduos sadios (11 homens, 11 mulheres, idade de 48-75). Os resultados evidenciaram diminuição percentual de células NK CD56dim do sangue periférico dos pacientes SS, bem como baixa expressão de marcadores de ativação, NKG2D e NKG2C. A forma solúvel dos ligantes de NKG2D, MICB e MICA solúvel (sMICA/MICB), foi detectada em níveis séricos elevados para sMICB, e sMICA foi detectado em apenas 2 pacientes. Houve uma correlação negativa entre os níveis de sMICB e o percentual de células NK CD56brightCD16 NKG2D+. O perfil de secreção de citocinas das células NK, mostra, já na condição sem estímulo, um aumento percentual de TNF e CD107a em células NKCD56dim de pacientes com SS. Após o estímulo com os agonistas de TLR7/TLR8 houve um aumento na produção de CD107a e TNF nas células NKCD56bright e de TNF para as células NKCD56dim. Na produção de citocinas induzidas por agonistas de TLRs nos sobrenadantes de células mononucleares, foi observado que os agonistas TLR2 e TLR4 foram capazes de estimular a produção de IL-6, TNF e IL-10 enquanto o agonista de TLR7/8 mostrou um efeito adjuvante para a secreção de IFN-alfa, IFN-y e IL-10. Além disso, foi observado aumento de expressão de RNAm para TLR2 em células mononucleares avaliada por PCR em tempo real, como também para os fatores relacionados à resposta antiviral, como interferon tipo I (IFN- alfa), receptor de IFN-beta e interferon tipo III (IFN- ) em pacientes com SS. Quanto aos níveis séricos de citocinas, foi detectado aumento de IL-5 (citocina Th2), IL-6 (pró-inflamatória) e IL-10 (reguladora) nos SS, não diferindo quanto aos níveis de IL-1beta, IL-2, IL-17a, TNF e TGF-beta em relação ao grupo controle. Os resultados mostram que há uma diminuição percentual de células NK CD56dim, alteração da expressão dos receptores de ativação e elevação de ligantes solúveis que podem bloquear a ativação das células NK nos pacientes com SS. Além disto, as células NK exibem diminuição da produção de IFN-alfa, que contribuem na diminuição da resposta Th1. Há uma baixa responsividade das células NK aos ligantes de TLRs. Contudo, há um efeito adjuvante dos ligantes de TLRs em células mononucleares dos pacientes com SS, sendo que os agonistas de TLR2/4 e TLR7/8 foram capazes de restaurar parcialmente a produção de citocinas. Os resultados evidenciam que nos pacientes com SS, apesar da redução percentual das células NK, essas células são funcionais, mas que podem ser bloqueadas pelos ligantes solúveis de receptores de ativação. O uso de ligantes de TLRs pode ser uma estratégia para potencializar a produção de citocinas na Síndrome de Sézary / Sézary syndrome (SS) is one of the most common types of cutaneous T-cell lymphoma (CTCL). This syndrome is characterized by erythroderma, generalized lymphadenopathy and presence of tumor cells in the skin, lymph nodes and peripheral blood. Immunity of the host is compromised in syndrome, a study has related an innate immunity, particularly in Natural Killer (NK) cells are more scarce. NK cells play an essential role in the antitumor immune response. The aim of this study is to characterize the phenotypic profile associated with the activation and inhibition of NK cells and cytokine secretion capacity in response to the TLR4, TLR7 / TLR8 and TLR9 receptor agonists in SS patients. METHODS: We selected 14 patients with SS (7 men, 7 women, 48-85 years old) from the Cutaneous Lymphoma Outpatient Clinic of the Medical School of USP, and a control group with 22healthy individuals (11 men , 11 women, 48-75 years old). The results showed a decrease in CD56dim NK cells in the peripheral blood of SS patients, as well as low expression of activation markers, NKG2D and NKG2C. The soluble form of NKG2D, MICB and soluble MICA (sMICA/MICB) ligands was detected at high levels in serum for sMICB, and sMICA was detected in only 2 patients. There was a negative correlation between sMICB levels and the percentage of NK cells CD56brightCD16 NKG2D+. The cytokine secretion profile of NK cells, in the unstimulated condition, showed an increase of TNF and CD107a in NKCD56dim cells of SS patients. Upon stimulation of TLR7 / TLR8 agonists, CD107a and TNF production was higher in NKCD56bright cellsandforTNF in CD56dim cells.The agonists TLR2 and TLR4 in NK cells were able to stimulate the production of IL-6, TNF and IL-10,, while TLR7/8 agonist showed an adjuvant effect for secretion of IFN-alfa, IFN-y e IL-10. In addition, increased expression of TLR2 mRNA was observed in mononuclear cells evaluated by real-time PCR, simirlaly for factors related to antiviral response, such as interferon type I (IFN-alfa), IFN-Type III receptor (IFN - ) in patients with SS. Forserum levels of cytokines, IL- 5 (cytokine Th2), IL-6 (proinflammatory) and IL-10 (regulatory) were detectedhigher in SS, not differing in levels of IL-1beta, IL-2 , IL-17a, TNF and TGF-beta in relation to the control group. The results show that, there is a percentage decreased of CD56dim NK cells, alteration in activation receptor expression and elevation of soluble ligands that block theactivation of NK cells in SS patients. In addition, NK cells exhibit decreased IFN-? production, thatcontribute to the decrease in Th1 response. There is low responsiveness of NK cells to TLR ligands. However, there is an adjuvant effect of TLR ligands on mononuclear cells of SS patients, with TLR2/4 and TLR7 / 8 agonists is able to partially restore cytokine production. The results show that patients with SS, despite the percentage reduction of NK cells, these cells are functional, but can be blocked by soluble ligands of activation receptors. The use of TLR ligands may be a strategy to potentiate a production of cytokines in Sézary Syndrome

O objetivo do presente estudo foi investigar a estratégia nutricional neonatal das raias Rhinoptera bonasus e Rhinoptera brasiliensis, analisando suas interações tróficas e dependência do recurso materno durante as fases iniciais da vida. Lipídios, ácidos graxos (FA) e isótopos estáveis (SI) foram analisados em diferentes tecidos, como ferramentas para avaliar as alterações durante o crescimento em raias jovens-de-ano (YOY), divididas em dois grupos, YOY I (<=50 cm) e YOY II (50-70 cm). O registro de YOY em três anos consecutivos (2015, 2016 e 2017) e a permanência dos filhotes durante o ano, confirmam que a região de Bertioga é uma área de berçário para as espécies R. bonasus e possivelmente para R. brasiliensis. Em R. bonasus, as concentrações plasmáticas de triacilglicerol e &#946;ß-hidroxibutirato não diferiram entre YOY I e II. No entanto, a concentração plasmática de colesterol (CHOL) foi maior em YOY I quando comparado com YOY II. O perfil de FA foi similar no fígado, músculo e plasma de R. bonasus, com predomínio de FA polinsaturados (PUFA), seguidos por FA saturados (SFA) e monoinsaturados (MUFA). No músculo de R. bonasus ocorreu uma diminuição de DHA (ácido docosahexaenoico) e ARA (ácido araquidônico) e um aumento de EPA (ácido eicosapentaenoico) com o aumento do tamanho corporal, reduzindo a relação DHA/EPA (indicador de posição trófica). Diferenças na composição de FA do fígado e músculo entre R. bonasus e R. brasiliensis foram encontradas na somatória de SFA, MUFA e PUFA, sugerindo que as espécies apresentam diferentes dietas ou diferentes períodos de nascimento. Em R. bonasus os valores de &#948;15N diminuíram com o aumento do tamanho corpóreo, e os valores mais altos foram encontrados na nadadeira dorsal e hemácias (RBC) de YOY I comparados a YOY II. Em YOY I e II, o &#948;13C da nadadeira foi maior que nas RBC. Comparando-se as duas espécies, R. bonasus apresenta maior valor de &#948;15N e &#948;13C nas RBC que R. brasiliensis, indicando que particionam recursos alimentares, com diferentes níveis tróficos e/ou forrageiam em diferentes locais, apesar das duas espécies serem simpátricas na região de estudo. Esses dados combinados demonstram que estas raias investem significativamente nos jovens e, consequentemente, em melhores condições nutricionais no nascimento, pois os dados encontrados sugerem que filhotes não mostraram deficiência de FA essenciais (EFA), como observado em tubarões placentários. Valores elevados de CHOL, ARA e DHA em YOY I, e posterior redução com o aumento do tamanho corpóreo, sugere o uso destes substratos em processos metabólicos. Os dados sugerem ainda que animais maiores aumentam as habilidades de forrageamento, demonstradas pelo aumento plasmático de EFA, tais como EPA e DHA e uma diminuição de SFA em YOY II. Tais aspectos metabólicos ligados à estratégia nutricional neonatal são fundamentais para compreender os padrões de investimento materno e recursos energéticos necessários nas fases iniciais de vida de elasmobrânquios vivíparos / The aim of the present study was to investigate the neonatal nutritional strategy adopted by species R. bonasus and R. brasiliensis, related to its trophic interactions and maternal resource dependency during the early stages of life. Lipids, fatty acids (FA) and stable isotope (SI) were assessed in different tissues, as tools to evaluate biomarkers changes during growth in young-of-the-year (YOY) rays, divided into two stages, YOY I (<=50 cm) and YOY II (50-70 cm). The registration of YOY in three consecutive years (2015, 2016 and 2017) and the permanence of the YOY during the year, confirms that the region of Bertioga is a nursery area for R. bonasus and possibly to R. brasiliensis. In R. bonasus the plasma triglycerides and &#948;-hydroxybutyrate did not differ between YOY I and II. Plasma cholesterol (CHOL) was higher in YOY I than in YOY II. FA profiles were similar in liver, muscle and plasma, with a predominance of polyunsaturated FA (PUFA), followed by saturated FA (SFA) and monounsaturated FA (MUFA). In R. bonasus there was a reduction of C22:6n3 (DHA - docosahexaenoic acid) and C20:4n6 (ARA - arachidonic acid), and an increase in C20:5n3 (EPA - eicosapentaenoic acid) in muscle, with increasing body size, resulting in a decrease in DHA/EPA ratio (used as an indicator of trophic position). In terms of SI, &#948;15N values decreased with increasing body size with higher &#948;15N values found in dorsal fin and red blood cells (RBC) of YOY I compared to YOY II animals. In YOY I and II, the &#948;13C of fin tissue was higher than RBC. Comparing both species, R. bonasus presents higher &#948;15N and &#948;13C values in the RBC than R. brasiliensis, suggesting the partition of food resources, at different trophic levels and/or foraging in different locations, despite the two species being sympatric in the region. These combined data demonstrate that cownose rays significantly invest in their young and consequently better nutritional conditions at birth, since the data suggest that the pups did not show essential FA (EFA) deficiency, as observed in placental sharks. High values of DHA, ARA and CHOL in YOY I, and subsequent decrease with increasing body size, confirms the use of these substrates in metabolic processes. In addition, data indicate that larger animals have improved foraging skills, demonstrated by increased plasma levels of EFA, such as DHA, EPA and a decrease of &#931;SFA in YOY II. Such metabolic aspects linked to neonatal nutritional strategy are fundamental factors for understanding the patterns of maternal investment and energy resources required in the early life stages of viviparous elasmobranchs

O câncer de mama é uma doença extremamente heterogênea compreendendo diferentes subtipos moleculares que resultam em evoluções clínicas e condutas terapêuticas distintas. A maior gravidade desta patologia está associada a sua capacidade de formação de metástases Mudanças no padrão de expressão gênica têm sido associadas à manifestação do fenótipo metastático. Neste trabalho, utilizamos microarranjos de tecido (TMAs) para investigar a expressão de 8 biomarcadores candidatos (CIP4, PPIL1, ITGAV, AKAP14, MICA, FXYD1, ARPC3, ABG1) e avaliar seu potencial prognóstico em pacientes com carcinoma ductal invasivo da mama. Destes, ARPC3 PPIL1 e CIP4 mostraram associações estatisticamente significativas com a sobrevida câncer específica e/ou a probabilidade de desenvolvimento de metástases. Determinamos que a expressão aumentada de CIP4 nos tumores está associada a maior probabilidade de desenvolvimento de metástases. CIP4 é uma proteína adaptadora descrita na literatura como moduladora de migração e invasão celular e portanto selecionamos este candidato para caracterização funcional detalhada. Observamos que a expressão de CIP4 encontra-se aumentada em linhagens tumorais com características invasivas. A partir do silenciamento estável e regulado de CIP4 na linhagem metastática MDA-MB-231, determinamos que CIP4 modula positivamente a ativação de MAPK-p38 e a expressão de MMP2 , sugerindo que CIP4 participe em vias de sinalização importantes para a transição epitélio-mesenquima (EMT). O silenciamento de CIP4 resultou em uma redução de aproximadamente 50% da capacidade migratória e invasiva das células tumorais in vitro , e na diminuição da formação de metástases pulmonares in vivo. Coletivamente, nossos resultados indicam que CIP4 tem potencial como marcador de prognóstico assim como um possível alvo terapêutico no controle da disseminação de metástases nos tumores da mama. / Breast cancer is an extremely heterogeneous disease comprising different molecular subtypes that result in different clinical outcomes and therapeutic procedures. The severity of this disease is mainly associated with its ability to produce metastasis. Changes in gene expression profile have been associated with the manifestation of the metastatic phenotype. In this study, we used tissue microarrays (TMAs) to investigate the expression of 8 candidate biomarkers (CIP4, PPIL1, ITGAV, AKAP14, MICA, FXYD1, ARPC3 e ABG1) and to evaluate their prognostic potential in patients with invasive ductal breast carcinoma. Among these, ARPC3, PPIL1 and CIP4 showed statistically significant associations with cancer specific survival and/or the patient\'s probability to develop metastasis. We found that increased expression of CIP4 in tumors is associated with a higher probability of developing metastasis. CIP4 is an adaptor protein described in the literature as a modulator of cell migration and invasion and therefore we selected this candidate for detailed functional characterization. We observed that CIP4 expression is increased in tumor cell lines with invasive characteristics. Following the stable and regulated knockdown of CIP4 in the metastatic line MDA-MB-231, we determined that it modulates positively the activation of MAPK-p38 and the expression of MMP2, suggesting that CIP4 participates in important signaling pathways required for the epithelial mesenchymal transition (EMT). CIP4 silencing resulted in an approximate 50% reduction of the migratory and invasive capacity of tumor cells in vitro and decreased the generation of lung metastases in vivo. Collectively, our results indicate that CIP4 has potential as a prognostic marker as well as a potential therapeutic target to control the metastatic dissemination of breast tumors.

Introdução: A epilepsia do lobo temporal mesial (ELTM) é a forma mais comum de epilepsia parcial e com índices significativos de resistência aos tratamentos farmacológicos. Um dos grandes desafios para a neurociência na atualidade é o desenvolvimento de biomarcadores que facilitem o diagnóstico e prognóstico para a epilepsia. Recentemente, algumas pesquisas demonstraram que microRNAs circulantes no sangue são biomarcadores sensíveis e específicos para várias doenças, incluindo do SNC, podendo ser obtido de forma não invasiva e representando um método de detecção eficiente e de baixo custo. Portanto, nosso trabalho teve como objetivo analisar o perfil de expressão dos microRNAs miR-145, miR-181c, miR199a e miR-1183 no hipocampo e fração leucocitária do sangue de pacientes com ELTM e investigar se os mesmos podem auxiliar como biomarcadores de diagnóstico e prognóstico para a epilepsia. Pacientes e métodos: Foram utilizadas amostras de hipocampo e sangue de 20 pacientes com ELTM, sendo 10 com boa evolução pós-operatória (Engel I) e 10 com evolução pósoperatória insatisfatória (Engel III e IV), e para controle foram utilizados hipocampos de necropsias e sangue de indivíduos saudáveis. A análise de expressão dos miRNAs foi feita utilizando a técnica de RQ-PCR. Resultados e Conclusões: As expressões dos miRNAs se comportaram de forma diferente no hipocampo e sangue de pacientes com ELTM quando comparados aos grupos controles. O miR- 145 apresentou-se hipoexpresso no hipocampo e hiperexpresso no sangue. Os miRNAs miR-145, miR-181c, miR199a e miR-1183 apresentaram-se hiperexpressos na fração leucocitária do sangue de pacientes com ELTM, podendo estes contribuir como possíveis biomarcadores para auxiliarem no diagnóstico. Ainda, não encontramos diferenças estatística desses miRNAs no sangue e hipocampo de pacientes Engel I versus Engel III e IV, no entanto, o miR-1183 apresentou-se progressivamente mais expresso no sangue dos pacientes nos grupos controle, no grupo Engel I e no grupo Engel III e IV respectivamente. / Introduction: The mesial temporal lobe epilepsy (MTLE) is the most common form of partial epilepsy and also presents significant resistance to pharmacological treatment. A major challenge for neuroscience today is the development of biomarkers that facilitate the diagnosis and prognosis for epilepsy. Recently, research has shown that microRNAs circulating in the blood are sensitive and specific biomarkers for various diseases, including CNS, they can be obtained noninvasively and represent a low cost detection method. Thus, our study aimed to analyze the expression profile of microRNAs miR-145, miR-181c, miR199a and miR- 1183 in the hippocampus and leukocyte fraction of the blood of patients with MTLE and investigate whether they can assist as diagnostic and prognosis biomarkers for epilepsy. Patients and Methods: Hippocampus and blood samples of 20 patients with MTLE were used; ten with good postoperative outcome (Engel I) and ten with poor postoperative outcome (Engel III and IV), and for the control group hippocampus of necropsy and blood of healthy individuals were used. The analysis of the expression of miRNAs was performed using RQ-PCR. Results and Conclusions: The expression of miRNAs behaved differently in the hippocampus and blood of patients with MTLE when compared with the control groups. This different behavior was most evident in miR-145, which was hypo-expressed in the hippocampus and hyper-expressed in the blood. MiRNAs miR-145, miR-181c, miR199a and miR-1183 were hyper-expressed in the leukocyte fraction from the blood of patients with MTLE, and these can be potential biomarkers to aid in the diagnosis. We found no statistical differences of these miRNAs in blood and hippocampus of patients Engel I versus Engel III and IV, however, miR-1183 was progressively expressed in the blood of patients in the control groups, Engel I and Engel III and IV respectively.

Submitted by Fabiano Malheiro (fabianomalheiro22@hotmail.com) on 2019-02-01T12:00:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese Mohammed Irfan.pdf: 1884865 bytes, checksum: 807ca1e204477a089321e4b789b55df2 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-02-01T12:00:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese Mohammed Irfan.pdf: 1884865 bytes, checksum: 807ca1e204477a089321e4b789b55df2 (MD5) Previous issue date: 2017-09-27 / Sem bolsa / O método de identificação dental por meio de analise das superfícies restauradas é frequentemente utilizado para a identificação de vítimas envolvidas em desastres em massa, acidentes e investigações criminais. Contudo, a utilização desse método é dificultada pela melhoria da similaridade dos materiais restauradores com as estruturas dentárias. O objetivo deste estudo foi desenvolver um produto para facilitar a identificação dental quando da obtenção do odontograma em investigações forenses, através de uma patente, bem como analisar o desempenho deste quanto a validação de um método de diagnóstico. O produto foi desenvolvido para pigmentar, irreversivelmente apenas as estruturas dentais. Assim, restaurações de resina, ionoméricas ou protéticas não são corados onde foram analisados quanto a melhor concentração, teste de envelhecimento para analise de cor e pH do produto. Após diferentes concentrações obteve-se um pulverizador contendo o produto de pronto uso em investigação forense. Quanto ao teste de validação, após obtenção de 42 dentes humanos preparados e dispostos em 3 mandíbulas artificias, três (3) avaliadores calibrados analisaram 3 possíveis métodos de diagnóstico. Grupo I: Padrão ouro empregando a luz ultravioleta (UV) para identificação e Grupos experimentais II e III, ambos contendo o produto pulverizado, sendo que no último existiu também a UV para em concomitante com o corante. Os dados foram tabulados e submetidos à análise estatística, considerando poder de 80% e nível de significância de 5%. Para comparar os desfechos no Período pós-intervenção, de acordo com os grupos de identificações, foi utilizado o teste de especificidade, sensibilidade, valor preditivo positivo (PPV) e valores preditivos negativos (NPV). A comparação das prevalências dos desfechos entre os grupos de tratamento foi realizada através do teste de qui-quadrado de heterogeneidade. As análises foram realizadas no software STATA 15. Os resultados demonstraram que o Grupo experimental III apresentou resultados positivos para a sensibilidade e sensitividade da técnica com alta confiança do examinador no uso da técnica em curto período de identificação dentaria. / The dental identification method by comparing the restored surfaces is often used for the identification of victims involved in mass disasters, Air accidents and in criminal investigations, especially when the remains are compromised. However, the use of this method has become difficult by the improvements in fabrication of resin restorations; they resemble similarities with dental structures. The objective of this study was to develop a product to facilitate dental identification while obtaining the dental chart during forensic investigations, apart from analyzing the performance of this product as the validated diagnostic method a patent has also been deposited demonstrating the ownership of the discovery. The product was developed to irreversibly stain the dental structures only. Thus, restorations of resin, ionomer or prosthodontic appliances are not stained when they are analyzed with best colour concentration and pH of the product. After testing different concentrations an ideal spray was obtained containing the product ready for forensic investigation. For the validation test, cavity preparations were made and restored with resin restorative materials on 42 human teeth which were arranged in 3 artificial jaws, three (3) calibrated evaluators analyzed 3 possible diagnostic methods. Group I: Gold standard using ultraviolet (UV) light for identification and Experimental groups II and III, both containing the pulverized investigative dye, but in Group III apart from investigative dye has utilized UV light. The data were tabulated and submitted to statistical analysis, considering power of 80% and level of significance of 5%. The specificity, sensitivity, positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV) tests were used to compare the outcomes in the post intervention period according to the identification groups. The comparison of the prevalence’s of outcomes between the treatment groups was performed using the chi-square test of heterogeneity. The analysis were performed using STATA 15 software. The results showed that the experimental group III presented positive results for the sensitivity and sensibility for the technique used with high confidence levels of the examiners in a short period of dental identification.

Transtornos mentais graves são doenças crônicas altamente incapacitantes que geram um alto custo para a sociedade. Indivíduos acometidos por essas doenças apresentam maior morbidade e mortalidade. Dentre elas, a esquizofrenia parece possuir os piores desfechos. Portanto, estudar a esquizofrenia pode trazer contribuições importantes para o entendimento e manejo de transtornos mentais graves como a depressão maior e o transtorno bipolar. Esse trabalho buscou compreender mecanismos fisiopatológicos da esquizofrenia ao longo de quatro artigos que exploram aspectos de funcionamento cognitivo, funcionamento intelectual, de biomarcadores e de estrutura cerebral. O primeiro artigo investigou as alterações de performance de memória em indivíduos com esquizofrenia em estágios iniciais e tardios da doença comparadas ao transtorno bipolar e a sujeitos saudáveis. Os resultados mostraram que indivíduos com esquizofrenia apresentaram precoces prejuízos cognitivos de memória, diferentemente de indivíduos com transtorno bipolar quando comparados a controles. O segundo artigo investigou as influências das performances cognitiva e intelectual em estruturas cerebrais de indivíduos com esquizofrenia comparados a controles saudáveis. Os resultados indicaram que o funcionamento intelectual pré-morbido estava relacionado ao volume de estruturas globais, enquanto o funcionamento cognitivo estava relacionado ao volume e espessura de massa cinzenta cortical, sugerindo influências diferentes e complementares relacionadas a neurodesenvolvimento e neurodegeneração. O terceiro artigo investigou um biomarcador de envelhecimento precoce, um possível mecanismo para a neuroprogressão na esquizofrenia. Os resultados monstraram que indivíduos com esquizofrenia apresentaram encurtamento de telômero quando comparados a controles, mas não houveram diferenças entre o tamanho de telômero de pacientes e seus irmãos não afetados pela doença. Por fim, o quarto artigo buscou investigar a teoria do envelhecimentoa patológico acelerado na esquizofrenia, integrando os achados dos artigos anteriores. Os resultados demonstraram correlações entre comprimento de telômero, níveis de CCL11, performance de memória, volume de massa cinzenta e tempo de doença em indivíduos com esquizofrenia. Esses achados sugerem que a esquizofrenia seria uma doença do neurodesenvolvimento associada a uma carga adicional ao longo do curso da doença que levaria a um envelhecimento patológico precoce. A partir dos achados em esquizofrenia, pode-se ampliar a compreensão de alterações percebidas nas trajetórias de outras psicopatologias. Com adequado entendimento desses mecanismos, será possível o desenvolvimento de novos tratamentos e intervenções mais efetivas e eficazes. / Severe mental disorders are debilitating chronic diseases that have a high cost to society. Individuals affected by these diseases have increased morbidity and mortality. Among them, schizophrenia seems to have the worst outcomes. Therefore, studying schizophrenia may provide important contributions to the understanding and management of severe mental disorders such as major depression and bipolar disorder. The present study aimed to understand the pathophysiological mechanisms of schizophrenia over four articles that explore aspects of cognitive functioning, intellectual functioning, biomarkers and brain structure. The first article investigated changes in memory performance in individuals with schizophrenia in early and late stages of disease compared to bipolar disorder and healthy subjects. The results showed that subjects with schizophrenia had early cognitive deficits of memory, unlike individuals with bipolar disorder compared to controls. The second article investigated influences of cognitive and intellectual performances on brain structures of individuals with schizophrenia compared to healthy controls. The results indicated that premorbid intellectual functioning was related to volume of global structures, while cognitive functioning was related to volume and thickness of cortical gray matter, suggesting different and complementary influences related to neurodevelopment and neurodegeneration. The third article investigated an early aging biomarker, a possible mechanism of neuroprogression in schizophrenia. The results showed that individuals with schizophrenia had shortened telomeres when compared to controls, but there were no differences between the telometer length of patients and their siblings not affected by the disease. Finally, the fourth article sought to investigate the theory of pathological accelerated aging in schizophrenia, integrating the findings of the previous articles. The results demonstrated correlations between telometer length, CCL11 levels, memory performance, gray matter volume and illness duration in individuals with schizophrenia. These findings suggest that schizophrenia is a neurodevelopmental disorder associated with an additional burden over the course of the disease that leads to a pathological accelerated agig.

Submitted by Carvalho Dias João Paulo (joao.dias@famerp.br) on 2018-04-10T18:32:44Z No. of bitstreams: 1 fabioborghi_dissert.pdf: 2895909 bytes, checksum: 286f9c8710bbee1509e1bba599cc0e05 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-10T18:32:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabioborghi_dissert.pdf: 2895909 bytes, checksum: 286f9c8710bbee1509e1bba599cc0e05 (MD5) Previous issue date: 2016-09-26 / Introduction: Schizophrenia is a complex Neuropsychiatric disorder of uncertain etiology. About 30% of the affected population do not respond to the usual treatment with antipsychotic medication, therefore, they are considered a subgroup of refractory schizophrenics. Several different lines of research has been developed to understand the mechanisms related to the pathophysiology of Schizophrenia, standing out the role of oxidative stress. Objectives: To evaluate the oxidative stress biomarkers in Schizophrenia, and uncover a possible association to patients known to be refractory to antipsychotic treatment, also comparing positive and negative symptoms of schizophrenia on the schizophrenic population currently being treated at a tertiary healthcare center. Methods: Eightynine individuals were selected and divided into three groups: G1 - 36 healthy subjects (control group); G2 - 26 non-refractory schizophrenia patients; G3 - 27 refractory schizophrenia patients. All patients met the criteria for Schizophrenia diagnosis, as proposed by DSM-IV (Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders). The Kane et al. criteria and IPAP algorithms (International Psychopharmacology Algorithm Project) were also used to determine the presence of clinically refractory Schizophrenia. Clinical and sociodemographic data of groups were collected, analyzed and compared. For the clinical assessment of the patient’s psychopathological state, the PANSS (Positive and Negative Syndrome Scale) tool was used. The patients had peripheral blood drawn for the measurements of oxidative stress biomarkers: malondialdehyde (MDA), total antioxidant capacity (TEAC), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GSH-Px), using the methodology of high performance liquid chromatography resolution and spectrophotometry. The Chi-Square test (χ2), Fisher’s exact test and Mann- Whitney non-paired test were used for statistical analysis. Results: There was MDA and CAT increase in the patient groups (G2 and G3) as compared to the control group (G1). The enzymatic activity of GSH-Px was reduced in G2 and G3 as compared to the control group. TEAC plasma levels remained similar among all groups. There was no statistic relevant difference among the patient groups concerning the analysis of all the studied biomarkers (MDA, TEAC, CAT and GSHPx). The scores obtained by the PANSS scale also showed no differences between the two groups of patients. The patient groups were similar on sociodemographic and lifestyle habits. Conclusion: Serum MDA, CAT and GSHPx were positively associated to Schizophrenia, unlike TEAC, which was not associated to this condition. Regarding clinical refractority, none of the studied biomarkers was associated to this schizophrenia characteristic, as well as the scores obtained by the PANSS, sociodemographic data and lifestyle habits. / Introdução: A Esquizofrenia é uma doença neuropsiquiátrica complexa, cuja etiologia permanece incompletamente desvendada. Cerca de 30% dos pacientes mostram-se resistentes ao tratamento com medicamentos antipsicóticos, sendo considerados esquizofrênicos refratários. Diversas linhas de pesquisa têm sido desenvolvidas em busca da compreensão dos mecanismos envolvidos na fisiopatologia da Esquizofrenia, com destaque para o papel do estresse oxidativo. Objetivo: Avaliar biomarcadores de estresse oxidativo associados a pacientes com Esquizofrenia, refratários e não refratários ao tratamento antipsicótico e comparar sintomas positivos e negativos em pacientes esquizofrênicos acompanhados em um serviço terciário. Casuística e Método: Foram selecionados 89 indivíduos, divididos em três grupos: G1 - 36 indivíduos saudáveis (grupo controle); G2 - 26 pacientes com Esquizofrenia não refratária; G3 - 27 pacientes com Esquizofrenia refratária. Todos os pacientes preencheram critérios para o diagnóstico de Esquizofrenia, firmado de acordo com o DSM-IV (Manual Diagnóstico e Estatístico de Transtornos Mentais). Os critérios de Kane et al. e os algoritmos do IPAP (International Psychopharmacology Algorithm Project) foram usados para determinar a refratariedade clínica da Esquizofrenia. Os dados clínicos e sociodemográficos dos grupos foram coletados, analisados e comparados. Para a avaliação clínica do estado psicopatológico dos pacientes, foi aplicada a PANSS (Escala das Síndromes Positiva e Negativa). Os pacientes foram submetidos à coleta de sangue periférico para dosagens dos biomarcadores de estresse oxidativo: malondialdeído (MDA), capacidade antioxidante total (TEAC), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GSH-Px), realizados por cromatografia líquida de alta resolução e espectrofotometria. As análises estatísticas compreenderam os testes Qui-quadrado (χ2), teste exato de Fisher e teste não pareado de Mann-Whitney. Resultados: Foi observada elevação de MDA e CAT nos grupos de pacientes (G2 e G3) em relação ao grupo controle (G1). A atividade enzimática de GSH-Px mostrou-se reduzida nos grupos G2 e G3, quando comparada ao grupo controle. Os níveis plasmáticos de TEAC permaneceram semelhantes entre todos os grupos estudados. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos de pacientes (G2 e G3) em relação à análise de todos os biomarcadores estudados (MDA, TEAC, CAT e GSH-Px). Os escores obtidos por meio da escala PANSS não evidenciaram diferenças entre os dois grupos de pacientes (G2 e G3). Os grupos de pacientes mostraram-se semelhantes em relação aos dados sociodemográficos e hábitos de vida estudados. Conclusão: Níveis séricos de MDA, CAT e GSH-Px estão associados à Esquizofrenia, diferentemente de TEAC, que não se associou a essa patologia. Em relação à refratariedade clínica, nenhum dos biomarcadores estudados mostrou associação a essa característica da Esquizofrenia, assim como os escores obtidos pela PANSS, dados sociodemográficos e hábitos de vida.