Objetivos: O objetivo principal deste trabalho foi avaliar a contribuição do conhecimento, da religiosidade, do medo, da qualidade de vida, dos grupos de referência e de variáveis sociodemográficas e comportamentais na prática da doação de sangue em uma amostra representativa da população de usuários de atenção primária à saúde do município de Ribeirão Preto, São Paulo. Como objetivos específicos, propôs-se uma versão em português da Blood or Injection Fear Scale e desenvolveu-se um instrumento para a avaliação do conhecimento sobre a doação de sangue na população brasileira denominado Blood Donation Knowledge Questionnaire (BDK-Brazil). As propriedades métricas desses instrumentos também foram avaliadas. Métodos: Tratou-se de estudo transversal com amostragem aleatória estratificada. As 41 unidades básicas de saúde do município foram agrupadas em 12 estratos, de acordo com a área geográfica e o Índice Paulista de Vulnerabilidade Social (IPVS). O tamanho amostral calculado para o estudo foi de 1,054 entrevistas. Os participantes responderam perguntas sobre a prática da doação de, conhecimento sobre a doação, religiosidade, medo, qualidade de vida e variáveis sociodemográficas e comportamentais. Para responder ao objetivo principal do estudo os dados foram incluídos em um modelo de equações estruturais e a prática da doação foi considerada a variável dependente (construto central). O modelo estrutural foi avaliado por meio de matriz de correlações policóricas. O ajuste do modelo foi analisado considerando-se os índices de qualidade do ajustamento e a significância dos caminhos causais (?), avaliados pelos testes z, considerando um nível de significância de 5%. Resultados: a doação de sangue foi mais frequente no sexo masculino e entre indivíduos maior nível socioeconômico e educacional. Entre os que nunca doaram sangue, maiores frequências de participantes do sexo feminino, mais jovens, de menor nível socioeconômico, solteiros e sem religião foram detectadas. No modelo estrutural, as variáveis medo, conhecimento e as variáveis sociodemogáficas idade, sexo, nível econômico e educacional foram significativas. Conclusão: Os8 resultados do nosso estudo sugerem associação da prática da doação de sangue com o medo de sangue, injeções e reações vasovagais, com o conhecimento e com variáveis sociodemogáficas como sexo, idade, nível econômico e escolaridade. O medo foi considerado uma barreira relevante para a decisão de doar sangue, bem como a falta de conhecimento sobre o processo da doação. Além disso, há evidências que entre os usuários de atenção primária à saúde, o grupo menos propenso a doar sangue é formado pelas mulheres, os mais jovens e com menor nível socioeconômico e educacional / Objectives: The main objective of this study was to evaluate the contribution of knowledge, religiosity, fear, quality of life, blood donation of peers and sociodemographic and behavioral variables in the practice of blood donation in a representative sample of the population of primary healthcare users in the city of Ribeirão Preto, São Paulo. As specific objectives, a Portuguese version of the Blood or Injection Fear Scale (BIFS) was proposed and an instrument for the evaluation of knowledge about blood donation in the Brazilian population denominated Blood Donation Knowledge Questionnaire (BDK-Brazil) was developed. The metric properties of these instruments were also evaluated. Methods: This was a crosssectional study with randomized stratified sampling. The 41 healthcare facilities of the municipality were grouped into 12 strata, according to the geographic area and the Paulista Social Vulnerability Index. The sample size calculated for the study was 1,054 interviews. Participants answered questions about the blood donation practice, knowledge about donation, religiosity, fear, quality of life and sociodemographic and behavioral variables. To address the main objective of the study the data were included in a structural equation model and the blood donation practice was considered the dependent variable (central construct). The structural model was evaluated through polychoric correlation matrix. The fit of the model was analyzed considering the goodness of fit indices and the significance of the causal paths (?), evaluated by the z-tests, considering a level of significance of 5%. Results: Blood donation was more frequent in males and among individuals with higher socioeconomic and educational level. Among those who never donated blood, higher frequencies of female participants, younger, lower socioeconomic level, single and non-religious were detected. In the structural model, the variables fear, knowledge and sociodemographic variables age, sex, socioeeconomic and educational level were significant. Conclusion: The results of our study suggest the association of the blood donation practice with fear of blood, injections and vasovagal reactions, knowledge and10 sociodemographic variables such as gender, age, socioeconomic and educational level. Fear was considered a relevant barrier to the decision to donate blood as well as lack of knowledge about the donation process. In addition, there is evidence that women, the youngers participants and those with lower socioeconomic and educational level are less likely to donate blood among primary healthcare users.

No presente foi avaliado a atividade antimicrobiana de duas técnicas de antissepsia cutânea utilizadas rotineiramente em doadores de sangue em um serviço de Hemoterapia na cidade de Ribeirão Preto. Esse estudo teve como objetivo principal, estabelecer e comparar o percentual de redução microbiana em 50 doadores de sangue antes e após a aplicação de duas técnicas de antissepsia cutânea. Em cada braço do doador foi aplicado uma técnica de antissepsia, na primeira técnica utilizou-se o Polivinilpirrolidona-iodo (PVPI) degermante a 10% em movimentos de descida e subida por 30 segundos combinado com o PVPI a 10% em movimento circular único do centro para a periferia aplicados 30 segundos antes da punção venosa. Na segunda técnica foi utilizada solução de digluconato de clorexidina alcoólica a 0,5% em movimentos de descida e subida por 30 segundos e esperado secar por mais 30 segundos para a posterior punção venosa. Foram coletados swabs cutâneos no local da punção antes e após a aplicação de ambas as técnicas de antissepsia. Os swabs foram semeados em meio de cultura Ágar Sangue, Ágar Manitol Salgado e Ágar Mac Conkey e colocados em estufa à 37ºC por um período de 48 horas. Após esse período, foi realizada a contagem das colônias que cresceram nos meios de cultura. A técnica com PVPI a 10% obteve um percentual médio de redução microbiana de 98,57% no meio de cultura Ágar Sangue, 98,87% no meio de cultura Ágar Manitol Salgado e 100% no meio Mac Conkey. Já a técnica com clorexidina a 0,5% obteve percentual médio de redução microbiana de 94,38% no meio de cultura Ágar Sangue, 95,06% no meio Ágar Manitol Salgado e 100% no meio de cultura Mac Conkey. As análises estatísticas evidenciam que a técnica com PVPI a 10% obteve maior redução microbiana, sendo considerada, no presente estudo, mais eficaz que a Técnica com clorexidina a 0,5%. / In this study were evaluated the antimicrobial activity of two technique of skin antisepsis routinely used in blood donors in a transfusion service in the city of Ribeirão Preto. This study had as main objective, to determine and compare the percentage of bacterial reduction in 50 blood donors before and after application of two methods of skin antisepsis. In each arm of the donor was applied a technique of antisepsis, the first technique used the Polyvinylpyrrolidone-iodine (PVPI) degermant 10% in ascending and descending movements for 30 seconds combined with PVPI alcohol 10% in one circular motion from center to periphery applied 30 seconds prior to venipuncture. The second technique was used chlorhexidine gluconate solution 0.5% alcohol in ascending and descending movements for 30 seconds and waited for another 30 seconds to dry for later venipuncture. Skin swabs were collected at the puncture site before and after application of both techniques of antisepsis. The swabs were seeded in culture Blood Agar, Mannitol Salt Agar and MacConkey agar and placed in an oven at 37°C for a period of 48 hours. After this period, counts were performed in the colonies that grew in culture. The technique with PVPI 10% had an average rate of microbial reduction of 98.57% in the culture medium Blood Agar, 98.87% in the culture medium Mannitol Salt Agar and 100% in Mac Conkey medium. Since the technique with chlorhexidine 0.5% Total average percentage of bacterial reduction of 94.38% in the culture medium Blood Agar, 95.06% in the middle Salt Mannitol Agar and 100% in Mac Conkey medium. Statistical analysis showed that the technique with PVPI 10% was greater than bacterial reduction being considered in the present study, the most effective technique with chlorhexidine 0.5%.

A utilização de pesticidas organoclorados é motivo de preocupação das entidades ligadas à área de saúde em todo o mundo. Apesar de as formas de contaminação serem bem conhecidas, não há um controle eficaz na fiscalização do seu uso no Brasil. Sabe-se que altos níveis séricos destes compostos nos organismos de seres humanos e animais acarretam sérios problemas de saúde. Tendo em vista essa realidade, foi realizado, em 2009, o Projeto Piloto do I Inquérito Nacional de Populações Expostas a Substâncias Químicas, cujo subprojeto \"doadores de sangue\" teve como objetivo mensurar as concentrações de substâncias químicas no sangue de 547 residentes da região metropolitana de São Paulo, dentre elas os pesticidas organoclorados. Este trabalho teve como objetivos avaliar as concentrações dos pesticidas hexaclorobenzeno (HCB), alfa-HCH, ?-HCH, beta-HCH, beta-HCH, heptacloro, heptacloro epóxido, dieldrin, mirex, o,p\'-DDT, p,p\'-DDT, o,p\'-DDE, p,p\'-DDE, o,p\'-DDD e p,p\'-DDD nesta população e compará-las com as encontradas em outros países e determinar fatores associados aos níveis mais elevados destas substâncias. O método analítico utilizado foi de cromatografia a gás. Os resultados deste estudo indicam que a população adulta de São Paulo não está exposta a níveis preocupantes de pesticidas organoclorados, pois dentre os compostos analisados, apenas o beta-HCH e o p,p\'-DDE tiveram um número significante de amostras acima do limite de quantificação, 10,7% e 31,2% das amostras respectivamente. Quando utilizada a metade do limite de quantificação para substituir os valores abaixo do limite de quantificação do método, o valor médio encontrado para o beta-HCH foi de 0,028 ug/dL e para o p,p\'-DDE foi de 0,045 ug/dL. Este estudo propôs dois modelos multivariados para explicar os fatores associados aos compostos beta-HCH e p,p\'-DDE no sangue dos doadores. Segundo o modelo de Regressão Logística Ordinal Multivariado, os fatores associados a níveis mais altos de beta-HCH foram ter idade entre 26 e 45 anos e ser do sexo feminino. Para o p,p\'-DDE os fatores associados a níveis mais altos foram ter idade entre 26 e 45 anos, ser do sexo feminino e ter trabalhado com pesticidas, enquanto receber renda mensal de 3 a 5 salários mínimos e consumir derivados de origem animal uma ou mais vezes por semana foram associados a níveis mais baixos de p,p\'-DDE. Segundo o modelo de Regressão Linear Múltipla, os fatores associados a níveis mais altos de beta-HCH foram o sexo feminino, ter contato prévio com pesticidas na região agrícola, ter trabalhado com pesticidas em campanhas de saúde pública, ter trabalhado em empresas de capacitores ou transformadores, ter trabalhado em indústrias de solventes clorados, ter renda mensal de 3 a 5 salários mínimos, consumo de carnes uma ou duas vezes por semana e consumo de frutos do mar uma ou duas vezes por semana, enquanto consumo frequente de cerveja e ter renda mensal de 1 a 3 salários mínimos foram associado a níveis menores de beta-HCH. Já para o p,p\'-DDE, os fatores associados a níveis mais elevados foram ser do sexo feminino, ser não branco, ter trabalhado com pesticidas e consumir água de fontes que não sejam minerais ou de rede, enquanto o consumo frequente de bebidas alcoólicas foi associado a níveis mais baixos de p,p\'-DDE / The use of organochlorine pesticides is a cause of concern to the entities of the health field worldwide. Although the ways of contamination are well known, there is no effective surveillance of its use on Brazil. It\'s known that high levels of these compounds on human beings and animals entails serious health problems. Foreseeing this reality, a Pilot study of the 1st National Inquiry of Populations Exposed to Chemical Compounds was carried out in 2009, in a subproject called \"blood donors\" had the objective to measure the concentrations of chemical compounds on serum from 547 residents of the metropolitan area of São Paulo, among them, the organochlorine pesticides. This study had as objectives to evaluate the levels of the pesticides hexachlorobenzene (HCB), alfa-HCH, beta-HCH, beta-HCH, beta-HCH, heptachlor, heptachlor epoxide, dieldrin, mirex, o,p\'-DDT, p,p\'-DDT, o,p\'-DDE, p,p\'-DDE, o,p\'-DDD e p,p\'-DDD on blood donors and compare these with the ones found on other countries and to find out factors associated with higher levels of those compounds in the population. The analytical method used was gas chromatography. The results of this study indicate that, overall, the population in São Paulo is not exposed to high levels of these compounds because of all compounds analyzed, only beta-HCH and p,p\'-DDE had a significative number of samples above the quantification limit, 10,7% and 31,2% of the samples respectively. Using the half of the quantification limit to substitute the values below the quantification limit, the beta-HCH mean level was 0.028 ug/dL and p,p\'-DDE mean level was 0.045 ug/dL. This study proposed two multivariate models to explain the factors associated with beta-HCH and p,p\'-DDE blood levels. According to the Multivariable Ordinal Logistic Regression model, the factors associated with higher levels of beta-HCH were age between 26 and 45 years and female gender. For the p,p\'-DDE, the associated factors with higher levels were age between 26 to 45 years, female gender and previous work with pesticides while having income of 3 to 5 minimum wages and consumption of derivates of animal origin at least once per week were associated to lower levels of p,p\'-DDE. According to the Multiple Linear Regression model, the factors associated with higher levels of beta-HCH were female gender, previous contact with pesticides on agricultural region, working with pesticides on campaigns of public health, in companies of capacitators or transformers, in companies of chlorinated solvents, having income of 3 to 5 minimum wages, consumption of meat once or twice per week, and consumption of seafood once or twice per week, while frequent consumption of beer and income of 1 to 3 minimum wages lead to lower levels of beta-HCH. Factors associated with higher levels of p,p\'-DDE were female gender, being non-white, previous work with pesticides and consumption of water from sources that not mineral or mains, while frequent consumption of alcohol were associated with lower levels of p,p\'-DDE

O dengue vírus é o responsável por uma das mais importantes doenças transmitidas por vetores em todo o mundo, causando cerca de 390 milhões de infecções anualmente em mais de 100 países. Estima-se que mais de 3,51 bilhões de pessoas (40% da população mundial) estejam vivendo em regiões de risco. A distribuição geográfica dos tipos de dengue aumentou drasticamente nas últimas décadas, impulsionada pela expansão de sua principal espécie de vetor, o Aedes aegypti, o crescimento da população humana, as viagens, o comércio internacional e a crescente urbanização nos trópicos e subtrópicos. Objetivos: Realizar a caracterização molecular do genoma completo do vírus da DENGUE; Avaliar tendências evolutivas que possam estar ocorrendo na epidemia brasileira, comparando nossos achados com os pré-existentes na literatura; Métodos: Amostras de doadores e receptores de sangue coletadas entre 15 de fevereiro a 15 de junho de 2012 em bancos de sangue e hospitais nas cidades de Recife, PE e Rio de Janeiro, RJ. Foi realizado o genoma viral de 90 amostras e posteriormente foram realizadas analises de filodinâmica viral e modelo matemático para estimar dados epidemiológicos. Resultados: As análises filogenéticas indicam que o surto foi causado pelo dengue vírus 4 genótipo II, embora dois isolados do genótipo I também tenham sido detectados pela primeira vez no Rio de Janeiro. A análise evolutiva e as estimativas de modelagem são congruentes, indicando um número reprodutivo acima de 1 entre janeiro e junho, com pelo menos dois terços das infecções sendo despercebidas. A análise de modelos sugere que a transmissão viral começou no início de janeiro, o que é consistente com múltiplas introduções, muito provavelmente dos estados do norte do Brasil, e com um aumento simultâneo de viagens aéreas dentro do país para o Rio de Janeiro. Discussão: O sistema nacional de vigilância notificou 213.000 casos de dengue no RJ e PE em 2012, por outro lado, inferimos pelo menos um número 3,4 vezes maior de infecções de dengue, de acordo com as estimativas anteriores com base em dados sorológicos. Modelos baseados na temperatura e pesquisas entomológicas mostraram que a região amazônica do Brasil é altamente adequada para a transmissão do DENV durante todo o ano. A explicação mais parcimoniosa para a ausência de casos notificados em centros urbanos estudados até 2012. O Rio de Janeiro recebe consistentemente novas linhagens de DENV mostrando ser improvável que as cadeias de transmissão dentro deste estado sejam sustentadas em várias estações do ano e, portanto, necessitarão de reintrodução da origem. Conclusão: A combinação de dados genéticos e epidemiológicos de doadores de sangue pode ser útil para antecipar a disseminação epidêmica de arbovírus. / Dengue virus is responsible for one of the most important vector-borne diseases in the world, causing about 390 million infections annually in more than 100 countries. It is estimated that more than 3.51 billion people (40% of the world\'s population) are living in regions at risk. The geographic distribution of dengue types has increased dramatically in recent decades, driven by the expansion of its major vector species, Aedes aegypti, human population growth, travel, international trade and increasing urbanization in the tropics and subtropics. Objectives: To carry out the molecular characterization of the complete genome of the DENGUE virus; Evaluate evolutionary trends that may be occurring in the Brazilian epidemic, comparing our findings with those in the literature; Methods: Samples of donors and blood recipients collected between February 15 and June 15, 2012 in blood banks and hospitals in the cities of Recife, PE and Rio de Janeiro, RJ. A viral genome of 90 samples was performed and phylodynamics and mathematical models were analyzed to estimate epidemiological data. Results: Phylogenetic analyzes indicated that the outbreak was caused by dengue virus 4 genotype II, although two genotype I isolates were also detected for the first time in Rio de Janeiro. Evolutionary analysis and modeling estimates are congruent, indicating a reproductive number above 1 between January and June, with at least two-thirds of the infections being unnoticed. Model analysis suggests that viral transmission began in early January, consistent with multiple introductions, most likely from the northern states of Brazil, and with a simultaneous increase in air travel within the country to Rio de Janeiro. Discussion: The national surveillance system reported 213,000 dengue cases in RJ and PE in 2012, on the other hand, we inferred at least a 3.4 times higher number of dengue infections, according to previous estimates based on serological data. Temperature based models and entomological surveys have shown that the Amazon region of Brazil is highly suitable for DENV transmission throughout the year. The most parsimonious explanation for the absence of reported cases in urban centers studied by 2012. Rio de Janeiro consistently receives new DENV lineages showing that it is unlikely that the transmission chains within this state will be sustained at various seasons of the year and therefore will require reintroduction of origin. Conclusion: The combination of genetic and epidemiological data from blood donors may be useful in anticipating the epidemic spread of arboviruses

Objetivos: O objetivo principal deste trabalho foi avaliar a contribuição do conhecimento, da religiosidade, do medo, da qualidade de vida, dos grupos de referência e de variáveis sociodemográficas e comportamentais na prática da doação de sangue em uma amostra representativa da população de usuários de atenção primária à saúde do município de Ribeirão Preto, São Paulo. Como objetivos específicos, propôs-se uma versão em português da Blood or Injection Fear Scale e desenvolveu-se um instrumento para a avaliação do conhecimento sobre a doação de sangue na população brasileira denominado Blood Donation Knowledge Questionnaire (BDK-Brazil). As propriedades métricas desses instrumentos também foram avaliadas. Métodos: Tratou-se de estudo transversal com amostragem aleatória estratificada. As 41 unidades básicas de saúde do município foram agrupadas em 12 estratos, de acordo com a área geográfica e o Índice Paulista de Vulnerabilidade Social (IPVS). O tamanho amostral calculado para o estudo foi de 1,054 entrevistas. Os participantes responderam perguntas sobre a prática da doação de, conhecimento sobre a doação, religiosidade, medo, qualidade de vida e variáveis sociodemográficas e comportamentais. Para responder ao objetivo principal do estudo os dados foram incluídos em um modelo de equações estruturais e a prática da doação foi considerada a variável dependente (construto central). O modelo estrutural foi avaliado por meio de matriz de correlações policóricas. O ajuste do modelo foi analisado considerando-se os índices de qualidade do ajustamento e a significância dos caminhos causais (?), avaliados pelos testes z, considerando um nível de significância de 5%. Resultados: a doação de sangue foi mais frequente no sexo masculino e entre indivíduos maior nível socioeconômico e educacional. Entre os que nunca doaram sangue, maiores frequências de participantes do sexo feminino, mais jovens, de menor nível socioeconômico, solteiros e sem religião foram detectadas. No modelo estrutural, as variáveis medo, conhecimento e as variáveis sociodemogáficas idade, sexo, nível econômico e educacional foram significativas. Conclusão: Os8 resultados do nosso estudo sugerem associação da prática da doação de sangue com o medo de sangue, injeções e reações vasovagais, com o conhecimento e com variáveis sociodemogáficas como sexo, idade, nível econômico e escolaridade. O medo foi considerado uma barreira relevante para a decisão de doar sangue, bem como a falta de conhecimento sobre o processo da doação. Além disso, há evidências que entre os usuários de atenção primária à saúde, o grupo menos propenso a doar sangue é formado pelas mulheres, os mais jovens e com menor nível socioeconômico e educacional / Objectives: The main objective of this study was to evaluate the contribution of knowledge, religiosity, fear, quality of life, blood donation of peers and sociodemographic and behavioral variables in the practice of blood donation in a representative sample of the population of primary healthcare users in the city of Ribeirão Preto, São Paulo. As specific objectives, a Portuguese version of the Blood or Injection Fear Scale (BIFS) was proposed and an instrument for the evaluation of knowledge about blood donation in the Brazilian population denominated Blood Donation Knowledge Questionnaire (BDK-Brazil) was developed. The metric properties of these instruments were also evaluated. Methods: This was a crosssectional study with randomized stratified sampling. The 41 healthcare facilities of the municipality were grouped into 12 strata, according to the geographic area and the Paulista Social Vulnerability Index. The sample size calculated for the study was 1,054 interviews. Participants answered questions about the blood donation practice, knowledge about donation, religiosity, fear, quality of life and sociodemographic and behavioral variables. To address the main objective of the study the data were included in a structural equation model and the blood donation practice was considered the dependent variable (central construct). The structural model was evaluated through polychoric correlation matrix. The fit of the model was analyzed considering the goodness of fit indices and the significance of the causal paths (?), evaluated by the z-tests, considering a level of significance of 5%. Results: Blood donation was more frequent in males and among individuals with higher socioeconomic and educational level. Among those who never donated blood, higher frequencies of female participants, younger, lower socioeconomic level, single and non-religious were detected. In the structural model, the variables fear, knowledge and sociodemographic variables age, sex, socioeeconomic and educational level were significant. Conclusion: The results of our study suggest the association of the blood donation practice with fear of blood, injections and vasovagal reactions, knowledge and10 sociodemographic variables such as gender, age, socioeconomic and educational level. Fear was considered a relevant barrier to the decision to donate blood as well as lack of knowledge about the donation process. In addition, there is evidence that women, the youngers participants and those with lower socioeconomic and educational level are less likely to donate blood among primary healthcare users.

A hemocromatose hereditária é caracterizada pelo aumento da absorção intestinal de ferro, acarretando progressivo acúmulo no organismo. Os objetivos foram: 1- determinar as frequências das mutações p.C282Y, p.H63D e p.S65C no gene HFE e avaliar os efeitos nas concentrações dos parâmetros do ferro em doadores de sangue; 2- pesquisar mutações nos genes: 2.1- HFE, 2.2- HJV e HAMP, 2.3- TFR2 e SLC40A1, em pacientes portadores de sobrecarga de ferro primária. Participaram 542 doadores de sangue provenientes do Hemocentro da Santa Casa de São Paulo. Foram incluídos 51 pacientes que apresentavam saturação de transferrina ≥ 50% (para mulheres) e ≥ 60% (para homens) e ausência de causas secundárias. Os genótipos para as mutações nos genes HFE foram avaliados pela PCR-RFLP. Foi realizado sequenciamento direto bidirecional para cada éxon dos genes, utilizando o sequenciador Genetic Analizer 3500XL®. Nos doadores de sangue, as frequências dos alelos HFE 282Y, HFE 63D e HFE 65C foram 2,1, 13,6 e 0,6%, respectivamente. Os homens que doaram pela primeira vez, portadores do genótipo HFE 282CY, apresentaram maiores valores de saturação de transferrina; e também os portadores dos genótipos HFE 63DD e 63HD apresentaram maiores concentrações de ferritina sérica, em relação aos de genótipo selvagem. Para os pacientes, 72,5% (37/51) apresentaram ao menos 1 alteração no gene HFE e 11 foram identificados como homozigotos para a mutação p.C282Y. Uma mutação não descrita na literatura (p.V256I) foi identificada no gene HFE e a modelagem molecular (análises de ligação e estrutural) detectou que a mutação não reduziu a afinidade entre as proteínas HFE e β2-microglobulina. No sequenciamento dos éxons dos genes HJV e HAMP foram identificadas as alterações já descritas: HJV p.E302K, HJV p.A310G, HJV p.G320V e HAMP p.R59G. Para o gene TFR2, foram identificados 3 polimorfismos já descritos (p.A75V, p.A617A e p.R752H). No gene SLC40A1 foram observados 6 polimorfismos (rs13008848, rs11568351, rs11568345, rs11568344, rs2304704 e rs11568346) e 1 alteração não descrita previamente na literatura (p.G204S). As conclusões foram: 1- em relação aos doadores de sangue, a presença dos alelos HFE 282Y e HFE 63D foi associada ao maior aporte de ferro nos homens que não doaram sangue anteriormente. 2.1- Para os pacientes com sobrecarga de ferro, a mutação p.C282Y em homozigose, ou em heterozigose composta com a p.H63D, foi a mais frequente alteração encontrada (33,3%). 2.2- O diagnóstico molecular de hemocromatose juvenil (HJ) no Brasil (HJV p.G320V em homozigose) foi relatado. As mutações funcionais HJV p.E302K e HAMP p.R59G foram identificadas, sendo possível que estas alterações possam estar contribuindo para consequências fenotípicas juntas as outras mutações em regiões intrônicas ou regulatórias dos genes. 2.3- Mutações funcionais nos genes TFR2 e SLC40A1 não foram identificadas. / Hereditary hemochromatosis (HH) is characterized by increased intestinal iron absorption, which leads to a progressive accumulation of iron in the body. The aims were: 1- to assess the frequency of HFE gene mutations (p.C282Y, p.H63D and p.S65C) and to identify their relationship to iron status in blood donors; 2- to search in primary iron overload patients: 2.1- HFE, 2.2- HJV and HAMP, 2.3- TFR2 and SLC40A1 gene mutations. Blood donors (n=542) were recruited from Hemocentro of Santa Casa Hospital, Sao Paulo, Brazil. The study included 51 patients with transferrin saturation ≥ 50% (women) and ≥ 60% (men) and absence of secondary causes. The genotypes for HFE mutations were evaluated by PCR-RFLP. Subsequent bidirectional sequencing for each gene was performed using the Genetic Analizer sequencer 3500XL®. The frequencies of HFE 282Y, HFE 63D and HFE 65C alleles were 2.1, 13.6 and 0.6% in blood donors, respectively. The first time male donors carrying heterozygous genotype for the p.C282Y mutation had higher transferrin saturation values; and men carrying HFE 63DD and 63HD genotypes had higher serum ferritin concentrations when compared to the wild genotype. Thirtyseven (72.5%) out of the 51 patients presented at least one HFE mutation and 11 were identified as homozygous for the mutation p.C282Y. One novel mutation (p.V256I) in the HFE gene was indentified and molecular modeling (free energy and structural analysis in silico) showed that p.V256I mutation did not reduce the affinity binding between HFE and β2-microglobulin. Sequencing in the HJV and HAMP genes revealed HJV p.E302K, HJV p.A310G, HJV p.G320V and HAMP p.R59G alterations. Sequencing in the TFR2 gene observed 3 polymorphisms (p.A75V, p.A617A e p.R752H); and sequencing in the SLC40A1 gene identified 6 polymorphisms (rs13008848, rs11568351, rs11568345, rs11568344, rs2304704 e rs11568346) and 1 p.G204S non-described mutation. The conclusions were: 1- for blood donors, the presence of HFE 282Y and HFE 63D alleles were associated with alterations on iron status only in first time male blood donors. 2.1- For patients with iron overload, the p.C282Y mutation in homozygous or in compound heterozygous with p.H63D, was the most frequent molecular change found (33.3%). 2.2- The molecular diagnosis of Juvenil Hemochromatosis (JH) in Brazil (homozygous genotype for the HJV p.G320V) was reported. The HJV p.E302K and HAMP p.R59G functional mutations were found and, it is conceivable that they may be contributing to phenotypic consequences together to other mutations in intronic or regulatory regions. 2.3- Functional mutation in the TFR2 and SLC40A1 genes were not identified.

O Hemocentro São Paulo é responsável por manter um banco de dados com informações sobre cada doação ou tentativa de doação de sangue. No entanto, os dados desse banco de dados não possuem a qualidade requerida pelas ferramentas/técnicas de análise. Por essa razão, fica difícil utilizar tais dados para estabelecer relações sistemáticas entre as variáveis armazenadas. A principal contribuição desta tese é a descrição da proveniência para atributos selecionados usando critérios de classificação definidos por especialistas. Este trabalho mostra que é possível fazer investigações detalhadas usando a descrição dos dados sem a necessidade de alterar a estrutura do banco de dados. Durante o período de 1996 a 2006, 1.469.505 doadores foram responsáveis por mais de 2.8 milhões de doações. Após a descrição da proveniência, foram obtidos 252.301 doadores do sexo masculino e 133.056 doadores do sexo feminino e que atenderam aos critérios de inclusão usados nesta tese. Dos 385.357 doadores incluídos na análise, 21.954 (5,7%) tiveram suas doações adiadas devido a seus baixos níveis de hematócrito, 3.850 (1,5%) eram do sexo masculino e 18.104 (13,6%) do sexo feminino. Os resultados obtidos demonstram que, embora os intervalos de espera entre as doações de sangue sejam grandes entre os doadores do sexo feminino e masculino, as mulheres são recusadas mais cedo, por risco de desenvolver anemia, do que os homens. Aproximadamente 12,84% das mulheres e 1,21% dos homens desenvolveriam hematócrito baixo antes da sétima doação. Os dados sugerem que indivíduos com baixo nível de hematócrito devem esperar mais tempo antes de executarem a próxima doação. Portanto, é importante compreender se existe uma ligação entre a doação de sangue e a diminuição no nível de hematócrito, a fim de evitar resultados indesejáveis para os doadores de sangue. O modelo de proveniência apresentado nesta tese não foi definido de acordo com os modelos de proveniência genéricos já implementados. Esta tese apresenta um modelo de proveniência que foi capaz de acrescentar informações semânticas para adquirir conhecimento de um experimento in silico. Um dos principais objetivos foi desenvolver uma abordagem baseada em declarações, tentando responder a importantes questionamentos biológicos. O modelo descrito combina ricas informações em cada processo usando declarações, e se baseia no conhecimento de especialistas. Esta tese também utilizou estatística descritiva e Análise de Sobrevivência. Finalmente, com a validação do modelo em um domínio conhecido, é pretendido expandir esse método para outros sistemas de informação voltados para hemoterapia. / The São Paulo Blood Center is responsible to maintain a database with information on each donation. However, this database does not have the quality required by techniques of analysis. For this reason, it is difficult to use it directly to establish systematic relationships between the variables. The main contribution of this paper is a provenance description of attributes selected using classification criteria defined by specialists. We show that it is possible to make detailed investigations using the data description without the need to change the structure of the database. During 1996 2006, 1,469,505 donors were responsible for more than 2.8 million of donation. After the provenance description, we obtained 252,301 male and 133,056 female that met our inclusion criteria. Of the 385,357 donors included in the analysis, 21,954(5.7%) were deferred due to low hematocrit, 3,850(1.5%) were males and 18,104(13.6%) were females. Our results show that, although the intervals between donations for female and male donors are wider, women presented anemia earlier than men. Approximately 12,84% of the females and 1,21% of the males would develop low hematocrit before the 7th donation. Our data suggest that individuals with low hematocrit level should wait longer before the next donation. Therefore, it is important to understand if there is a connection between blood donation and decrease in hematocrit level in order to prevent undesirable outcomes to blood donors. The provenance model presented here was not defined according to the generic provenance models already implemented. This thesis presents a provenance model that is able to add semantic information to acquire knowledge of an in silico experiment. One of the main purposes is to develop an approach based on declarations in order to answer biological questions. The provenance model described in this paper combines rich information for each process using the declarations, each having expert knowledge as a basis. To evaluate this provenance model we use descriptive statistics and Survival Analysis. Finally, with the validation of the model in a known domain, we intent to apply and validate this provenance model to other hemotherapy information systems.

INTRODUÇÃO: Atualmente a hepatite C é um importante problema de saúde pública em todo o mundo. Uma característica dessa infecção é o fato de que menos da metade dos indivíduos infectados conhece seu status de portador, consequência de fatores associados às dificuldades de diagnóstico e de acesso à assistência médica e ao tratamento. Por sua vez, a triagem sorológica realizada no momento da doação de sangue possibilita a oportunidade de identificar indivíduos assintomáticos e incluí-los num seguimento. A Fundação Pró-Sangue, do Hemocentro de São Paulo, realiza triagem para hepatite C desde 1992. Nos últimos 20 anos, cerca de três mil doadores foram diagnosticados pela triagem, porém pouco se sabe sobre o acompanhamento médico recebido por estes indivíduos e seus desfechos clínicos. OBJETIVOS: Os objetivos do presente estudo foram: descrever as características do seguimento clínico de pacientes identificados como infectados pelo vírus da hepatite C através da doação de sangue em um serviço de referência; descrever as características sociodemográficas, clínicas e laboratoriais destes doadores; estimar a proporção de doadores de sangue que não receberam acompanhamento clínico adequado após o diagnóstico; identificar os fatores associados ao não acompanhamento clínico adequado dessa população. MÉTODOS: Desenvolveu-se um estudo descritivo de pacientes infectados pela hepatite C identificados através de doação de sangue da Fundação Pró-Sangue. O diagnóstico da infecção pelo VHC foi realizado através de identificação de anticorpo anti-VHC por técnica imuno-enzimática (ELISA) e confirmação através de teste de imunoblot (RIBA), em segunda amostra coletada, no período compreendido entre 1994 a 2012. Os pacientes foram convidados a participar do estudo através do envio de cartas e de telefonemas. As variáveis analisadas durante as entrevistas, por meio de questionário padronizado, foram: demográficas, uso prévio de drogas, transfusão de sangue, consumo de álcool, hábitos sexuais, comorbidades e variáveis relativas ao conhecimento do status sorológico da hepatite C, ao seguimento clínico e à terapia medicamentosa. Análise multivariada foi realizada para identificar fatores associados à falta de encaminhamento para consulta ou perda de seguimento clínico. RESULTADOS: Entre os 2952 doadores de sangue convidados, 781 (26%) concordaram em participar: 57% do sexo masculino, idade média de 47 anos. A principal via de aquisição da hepatite C foi transfusão de sangue anterior (32%). Um total 282 pacientes (36% da coorte estudada [IC 95% 32,7 - 39,6]) não receberam adequado seguimento clínico após o diagnóstico na doação. As principais causas do não seguimento clínico foram a falta de compreensão da necessidade desse acompanhamento (para 71%) ou dificuldades de acesso a serviços de saúde. Após análise multivariada, estiveram associados ao não seguimento adequado: sexo masculino (p < 0,001), cor de pele não branca (p < 0,001), idade abaixo de 50 anos (p < 0,001) e menor escolaridade (p=0.024). CONCLUSÕES: Uma proporção significativa de pacientes com hepatite C, identificados após doação, não recebeu acompanhamento clínico adequado após o diagnóstico e não foi encaminhada para tratamento específico. Os motivos mais frequentes foram: a falta de compreensão, pelos pacientes, da necessidade de cuidados clínicos e falta de acesso aos serviços de saúde. Acreditamos que nossos resultados reforçam a necessidade e a importância de aconselhamento médico adequado no momento do diagnóstico. Reforçam também a necessidade de implementação de estratégias educacionais e de políticas públicas que ampliem o acesso dos pacientes a serviços e tratamentos disponíveis / BACKGROUND: Hepatitis C is a major public health problem worldwide. A characteristic of this infection is the fact that less than half of infected people know their carrier status, as a result of factors associated with barriers to diagnosis and access to healthcare services and specific treatment. On the other hand, serological screening at the time of blood donation provides the opportunity to identify asymptomatic individuals and include them in a follow-up. The Fundação Pro-Sangue de São Paulo , conducts screening for hepatitis C since 1992. Over the past 20 years, about three thousand donors were diagnosed by serological screening, but little is known about the medical care received by these individuals and their clinical outcomes. OBJECTIVE: The objectives of the present study were as follows: to describe the characteristics of the clinical follow-up of patients identified as infected with hepatitis C through blood donation in a reference service; to describe the demographic and clinical characteristics of this group of patients; to estimate the proportion of blood donors who did not receive proper clinical follow-up after diagnosis; to identify the factors associated with inadequate follow-up. METHODS: A descriptive study of patients infected with hepatitis C identified through blood donation at Fundação Pro-Sangue de São Paulo. Patients were identified as anti-HCV positive using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and confirmed by immunoblot recombinant assay (RIBA), from 1994 to 2012. Patients were invited to participate in the study by letters and phone calls. Variables analyzed during the interviews to patients through a standardized questionnaire were: demographic, previous use of drugs, blood transfusion, alcohol consumption, sexual behavior, comorbidities, and variables related to awareness of hepatitis C serological status, clinical follow-up and drug therapy. Multivariate analysis was conducted to identify factors associated with the lack of medical consultation or loss to clinical follow-up. RESULTS: Among 2952 invited blood donors, 781 (26%) agreed to participate: 57% male, mean age of 47 years. The main route of acquisition of hepatitis C was the previous blood transfusion (32%). A total 282 patients (36% of the study cohort [95% CI 32.7 to 39.6]) did not receive proper follow-up or treatment after diagnosis. The main reasons for interruption of clinical follow-up were not understanding the need of medical care (to 71%) or obstacles to access to healthcare services. In multivariate analysis, were associated with inadequate follow-up: male gender (p < 0.001), non-white skin color (p < 0.001) and age below 50 years (p < 0.001) and low education level (p=0.024). CONCLUSIONS: An important proportion of patients identified through blood donation did not receive proper clinical follow-up after diagnosis and were not referred for specific treatment. The most frequent reasons were: lack of understanding, by patients, of the need for clinical care and barriers to access health services. We believe that our results reinforce the need and the importance of proper medical advice at diagnosis of this infection. Our findings also reinforce the need to implement educational strategies and public policies that increase patient access to available services and treatments

Este estudo teve como objetivo analisar a intenÃÃo do comportamento sexual seguro entre doadores de sangue do Hemocentro de Fortaleza, CearÃ, por meio de sua percepÃÃo de risco e vulnerabilidade ao HIV e adoÃÃo de comportamento para reduÃÃo sexual de risco. Trata-se de uma pesquisa transversal e exploratÃria, realizada com 384 doadores de sangue do Hemocentro de Fortaleza/CE, utilizando-se, para coleta de dados, de um questionÃrio semiestruturado autoaplicado. Os resultados dos dados foram apresentados por associaÃÃes entre conhecimento, comportamento e intenÃÃo dos doadores de sangue com suas caracterÃsticas e analisados por meio de testes &#61539;2 ou de mÃximo verossimilhanÃa. As questÃes fechadas foram analisadas estatisticamente e as questÃes abertas foram organizadas em categorias temÃticas, analisando-as qualitativamente. Observou-se predominÃncia masculina (72,1%); idade mÃdia dos participantes de 32 anos; 94,3% residem em Fortaleza ou RegiÃo Metropolitana; 78,4% apresentaram o ensino mÃdio ou superior como escolaridade e uma renda mensal mÃdia de dois salÃrios mÃnimos. Constata-se que ainda predomina conhecimentos equivocados sobre as formas de transmissÃo do HIV, como 50,2% dos informantes responderam erroneamente ou nÃo sabiam se o vÃrus era transmitido em banheiros pÃblicos e 6% dos doadores de sangue responderam equivocadamente ou ficaram na dÃvida se o vÃrus era transmitido por mosquitos. Com relaÃÃo ao nÃmero de parceiros sexuais, possuem uma mÃdia de 1,5 parceiros/ano. As prÃticas preventivas face ao risco de transmissÃo do HIV foram avaliadas e o preservativo à usado com frequÃncia por 13,1% dos doadores em relaÃÃes com parceiro fixo e por 47,6% quando a parceiro à considerado eventual. De acordo com a classificaÃÃo de Mann em relaÃÃo à vulnerabilidade os sujeitos da amostra assim se comportam: 6,3% enquadram-se como o grupo de vulnerabilidade mÃnima por reportarem nÃo ter atividade sexual, enquanto que 86,9% dos doadores de sangue encontram-se classificados como de vulnerabilidade alta pois possuem parceria Ãnica e nÃo usa preservativos de forma consistente. Pode-se inferir deste estudo que os participantes apresentaram uma grande vulnerabilidade à infecÃÃo ao HIV, o que nÃo se espera de um perfil para doadores de sangue, devido a implicaÃÃes que este resultado pode trazer na seguranÃa transfusional. Portanto, sugere-se a implantaÃÃo de aÃÃes de saÃde relacionadas à prevenÃÃo das DST/AIDS, culturalmente sensÃveis e direcionadas aos doadores de sangue, pois eles tÃm responsabilidade civil e social ao realizarem a escolha de doarem seu sangue para quem o necessita. Nesse aspecto, os Enfermeiros devem incluir aÃÃes de educaÃÃo em saÃde com doadores de sangue, pois estÃo atuando cada vez mais na Ãrea da Hemoterapia e tendo um papel ativo na contribuiÃÃo da melhoria da qualidade dos hemocomponentes transfundidos para a populaÃÃo brasileira. / Este estudo teve como objetivo analisar a intenÃÃo do comportamento sexual seguro entre doadores de sangue do Hemocentro de Fortaleza, CearÃ, por meio de sua percepÃÃo de risco e vulnerabilidade ao HIV e adoÃÃo de comportamento para reduÃÃo sexual de risco. Trata-se de uma pesquisa transversal e exploratÃria, realizada com 384 doadores de sangue do Hemocentro de Fortaleza/CE, utilizando-se, para coleta de dados, de um questionÃrio semiestruturado autoaplicado. Os resultados dos dados foram apresentados por associaÃÃes entre conhecimento, comportamento e intenÃÃo dos doadores de sangue com suas caracterÃsticas e analisados por meio de testes &#61539;2 ou de mÃximo verossimilhanÃa. As questÃes fechadas foram analisadas estatisticamente e as questÃes abertas foram organizadas em categorias temÃticas, analisando-as qualitativamente. Observou-se predominÃncia masculina (72,1%); idade mÃdia dos participantes de 32 anos; 94,3% residem em Fortaleza ou RegiÃo Metropolitana; 78,4% apresentaram o ensino mÃdio ou superior como escolaridade e uma renda mensal mÃdia de dois salÃrios mÃnimos. Constata-se que ainda predomina conhecimentos equivocados sobre as formas de transmissÃo do HIV, como 50,2% dos informantes responderam erroneamente ou nÃo sabiam se o vÃrus era transmitido em banheiros pÃblicos e 6% dos doadores de sangue responderam equivocadamente ou ficaram na dÃvida se o vÃrus era transmitido por mosquitos. Com relaÃÃo ao nÃmero de parceiros sexuais, possuem uma mÃdia de 1,5 parceiros/ano. As prÃticas preventivas face ao risco de transmissÃo do HIV foram avaliadas e o preservativo à usado com frequÃncia por 13,1% dos doadores em relaÃÃes com parceiro fixo e por 47,6% quando a parceiro à considerado eventual. De acordo com a classificaÃÃo de Mann em relaÃÃo à vulnerabilidade os sujeitos da amostra assim se comportam: 6,3% enquadram-se como o grupo de vulnerabilidade mÃnima por reportarem nÃo ter atividade sexual, enquanto que 86,9% dos doadores de sangue encontram-se classificados como de vulnerabilidade alta pois possuem parceria Ãnica e nÃo usa preservativos de forma consistente. Pode-se inferir deste estudo que os participantes apresentaram uma grande vulnerabilidade à infecÃÃo ao HIV, o que nÃo se espera de um perfil para doadores de sangue, devido a implicaÃÃes que este resultado pode trazer na seguranÃa transfusional. Portanto, sugere-se a implantaÃÃo de aÃÃes de saÃde relacionadas à prevenÃÃo das DST/AIDS, culturalmente sensÃveis e direcionadas aos doadores de sangue, pois eles tÃm responsabilidade civil e social ao realizarem a escolha de doarem seu sangue para quem o necessita. Nesse aspecto, os Enfermeiros devem incluir aÃÃes de educaÃÃo em saÃde com doadores de sangue, pois estÃo atuando cada vez mais na Ãrea da Hemoterapia e tendo um papel ativo na contribuiÃÃo da melhoria da qualidade dos hemocomponentes transfundidos para a populaÃÃo brasileira.

Submitted by Maria Aparecida (cidazen@gmail.com) on 2017-04-26T13:41:04Z No. of bitstreams: 1 Dinaura Maramaldo Cruz.pdf: 3121635 bytes, checksum: 83c3cab538352aacd4eaa7920d4fa684 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T13:41:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dinaura Maramaldo Cruz.pdf: 3121635 bytes, checksum: 83c3cab538352aacd4eaa7920d4fa684 (MD5) Previous issue date: 2011-10-04 / The type 1 and type 2 virus human T-lymphotropic type 1 are human retroviruses, that destroy or transform lymphocytes causing diseases that are externalized years or even decades after primary infection. The virus has a worldwide prevalence varies by geographic region and population, Brazil is assigned the highest absolute number of carriers. Risk factors such as transfusions, sharing needles, sexual contact and breastfeeding are no ways to prevent transmission. The objective of this study was the epidemiological profile of the sociodemographic and blood donors, the Blood Center of Maranhão - HEMOMAR with positive serology for HTLV-1/2, identifying the virus types. We analyzed the records of 924 blood donors of the Blood Center of Maranhão - HEMOMAR, which showed positive pattern and indeterminate ELISA test (OD / CO > 0.800) and the Western blot test in the period January 2002 to December 2009. Reactivity was identified for HTLV-1 / 2 by ELISA in the general population of donors is 0.24% (n = 924/398.362) and 0.02% in the Western blot test. Sex, age and color were statistically significant. Considering the group studied, there was a significant number of females, average age 40 years predominantly brown and black. Most had less than eight years. Among the cases 35.6% had co-infection with other serological markers, with higher prevalence for hepatitis B, and Hepatitis C, syphilis and HIV. The Western Blot test revealed the circulation of HTLV type 2 (2,4%) between subjects, but with higher prevalence for HTLV type 1 (70,1%). The presence of HTLV-1/2, the situation of co-infections associated with HTLV indicate the need for adoption of effective public health measures focused on the implementation of prevention strategies, since even in the presence of population studies suggests the existence of risk factors for transmission. Epidemiological studies have been relevant to advances in scientific knowledge about HTLV. The availability of qualified information on the means of transmission, prevention and risk perception, considering cultural and social aspects, are mechanisms for intervention in controlling the virus. / Os vírus linfotrópicos de células T humanas do tipo 1 (HTLV-1) e do tipo 2 (HTLV-2) são retrovírus humanos, que destroem ou transformam os linfócitos causando doenças que se exteriorizam anos ou mesmo décadas após a infecção primária. O vírus tem prevalência mundial que varia de acordo com a região geográfica e população estudada; ao Brasil é atribuído maior número absoluto de portadores. Fatores de risco como transfusões, uso compartilhado de agulhas, aleitamento materno e contato sexual sem prevenção são formas de transmissão. O objetivo deste trabalho foi conhecer o perfil epidemiológico e sociodemográfico dos doadores de sangue, do Hemocentro do Maranhão – HEMOMAR, com sorologia positiva para HTLV-1/2, identificando os tipos virais. Foram analisados os registros de 924 doadores de sangue do Hemocentro do Maranhão – HEMOMAR, que apresentaram padrão positivo e indeterminado no teste ELISA (DO / CO > 0,800) e no teste Western Blot no período janeiro de 2002 a dezembro de 2009. Identificou-se reatividade para o HTLV-1/ 2 pelo teste ELISA na população geral de doadores de 0,24% (n=924/398.362) e 0,02% no teste Western Blot. Sexo, idade e cor foram estatisticamente significantes. Considerando o grupo estudado, houve um número significativo do sexo feminino, média de idade de 40 anos predominando pardos e negros. A maioria tinha escolaridade inferior a oito anos. Entre os casos, 35,6% apresentaram co-infecção com outros marcadores sorológicos, com maior prevalência para Hepatite B, além de Hepatite C, Sífilis e HIV. O teste Western Blot revelou a circulação do HTLV tipo 2 (2,4%) entre os sujeitos, mas com maior prevalência para o HTLV tipo 1 (70,1%). A presença do HTLV-1/2, a situação de coinfecções associadas ao HTLV indica a necessidade de adoção de medidas eficazes de saúde pública focadas na implantação de estratégias de prevenção, uma vez que a presença do mesmo na população estudada sugere a existência de fatores de risco à transmissão. Estudos epidemiológicos têm sido relevantes para avançar no conhecimento científico sobre o HTLV. A disponibilização de informação qualificada sobre os meios de transmissão, prevenção e percepção de risco, considerando aspectos culturais e sociais, constitui mecanismos para intervenção no controle do vírus.