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Introdução: Avaliar o impacto das intervenções em saúde passa a ser obrigação, principalmente, daqueles que são responsáveis pelas decisões em saúde. Entre estes, estão os profissionais que prescrevem e determinam tratamentos, atuando como fontes geradoras de despesa, bem como os gestores, que devem garantir a melhor aplicação de recursos e ampliação do atendimento à população. A escassez de recursos tem levado os sistemas de saúde do mundo inteiro a incorporar metodologias de avaliação econômica para a tomada de decisão. Entre as demandas crescentes da população está a necessidade de transplantes, entre os quais o transplante de medula óssea (TMO). Um procedimento de alto custo, pela grande utilização de recursos no tratamento, tempo elevado de internação, além do investimento em prevenção de desfechos aos quais estes pacientes ficam sujeitos: infecções, rejeição ao enxerto e mortalidade. Objetivos: Este estudo tem como propósito avaliar a relação de custobenefício da criação de uma unidade de ambiente protegido (UAP) destinada a pacientes hematológicos submetidos a TMO em um hospital universitário brasileiro. Identificar os custos da criação e manutenção da UAP, estimar os custos associados à realização de transplantes de medula óssea em pacientes portadores de doenças hematológicas bem como os benefícios da implantação desta unidade em relação à freqüência de ocorrência de agravos de morbidade e mortalidade. Delineamento: Quase-experimento. Métodos: Trata-se de um estudo retrospectivo, onde a população é formada por coorte de pacientes adultos que realizaram TMO entre 5 de janeiro de 2004 e 7 de maio de 2007 – denominado Período 1 (P1) – e 4 de junho de 2007 e 18 de março de 2008 – denominado Período 2 (P2). Para a identificação do custo do paciente foram analisados todos os recursos utilizados por este a partir de sua primeira internação para a realização do transplante e as posteriores, num período de até seis meses de acompanhamento, considerando: custo da unidade de internação; nutrição; recursos de Serviços de Apoio ao Diagnóstico e Tratamento (SADT); custo em nota de sala; custos de procedimentos realizados; hemoterapia; oxigenoterapia; medicamentos utilizados; nutrição parenteral; radioterapia e quimioterapia. Para efeitos de comparação todos os custos foram ajustados para jan/08. Para medir o impacto assistencial, foram pesquisados desfechos como ocorrência de infecções e doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH). Resultados: Foram analisadas 166 pacientes e 233 internações no período pré-intervenção enquanto no período posterior foram analisados 45 pacientes e 58 internações hospitalares. O custo mediano por paciente foi de R$ 43.087,81 em P1 e R$ 37.303,87 em P2 (p= 0,466), esse mesmo custo quando estratificado por tipo de transplante resultou em redução de R$ 122.944,69 para R$ 100.555,48 em casos alogênicos (p=0,011) e mantevese igual em casos autólogos, sendo R$ 28.453,05 em P1 e R$ 28.305,24 em P2 (p=0,237). O índice de proteção da UAP sobre a variável infecção hospitalar, demonstrado através da razão de densidade de incidências foi de 0,83 (IC de 95% 0,56 a 1,23) e a taxa de infecção foi reduzida de 2,08% para 1,75%, sendo observada uma redução de 0,17 na incidência da mesma. A mortalidade na internação de realização do transplante foi reduzida de 0,16 em P1 para 0,11 em P2 e o índice de reinternação, de 0,40 para 0,28, respectivamente. Conclusão: A intervenção realizada no tratamento de pacientes submetidos a TMO, internação em UAP, demonstrou uma redução de 13% no custo mediano dos pacientes. O resultado por tipo de TMO demonstrou-se fortemente custo-benéfico nos casos alogênicos, aqueles considerados de maior complexidade e custo. Os dados de infecção, mortalidade e reinternação sugerem uma intervenção eficaz quando analisada sob a perspectiva dos desfechos assistenciais. Do ponto de vista econômico, também foi observado resultado favorável à intervenção em estudo, ainda que o mesmo também não tenha apresentado força estatística. / Objective: To evaluate the cost-benefit of creating a protected environment (PE) ward for hematological patients undergoing bone marrow transplantation (BMT) at Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), public school hospital with 740 beds, located in Southern Brazil. Methods: A retrospective study, quasi-experimental design, with a population made up of cohort of adult patients who underwent BMT from Jan/2004 to May/2007 (P1) and Jun/2007 to Mar/2008 (P 2). Cost information was obtained by identifying the resources used by patients from the query of the computerized system of HCPA. To measure the impact of care, outcomes, such as occurrence of infections and mortality were investigated. Results: We analyzed 166 patients and 233 admissions in the preintervention while in the later period 45 patients and 58 hospitalizations were investigated. The median cost per patient was R$ 43.087,81 in P1 and R$ 37.303,87 in P2 (p = 0.466). This same cost when stratified by type of transplant resulted in a reduction from R$ 122.944,69 to R$ 100.555,48 in allogeneic cases (p = 0.011) and remained the same in autologous cases, of which R $ 28,453.05 in P1 and R $ 28,305.24 in P2 (p = 0.237). The index of protection of the PE on the variable infection, shown through the ratio of incidence density was 0.83 (CI 95% 0.56 to 1.23) and the rate of infection was reduced from 2.08% to 1.75%, and a reduction of 0.17 in its incidence was seen. The level of mortality on hospital stay during the transplantation was reduced from 0.16 in P1 to 0.11 in P2 and the rate of rehospitalization, 0.40 to 0.28, respectively. Conclusion: The intervention performed in the treatment of patients undergoing bone marrow transplantation, hospitalization in PE ward, showed a 13% reduction in the average cost of patients, although this difference was not considered statistically significant. The result by type of BMT showed strongly cost-beneficial in allogeneic cases, those considered of greater complexity and cost. The data of infection, mortality and reinteração suggest an effective intervention when viewed from the perspective of welfare outcomes. From the economic point of view, it was also observed a favorable outcome to the intervention under study, although it has not presented statistical power.

Submitted by Carvalho Dias João Paulo (joao.dias@famerp.br) on 2018-04-04T14:58:22Z No. of bitstreams: 1 lucienedlmiguel_dissert.pdf: 1447414 bytes, checksum: 582a83d74f76a4f73fb4a4901c2660c6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-04T14:58:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lucienedlmiguel_dissert.pdf: 1447414 bytes, checksum: 582a83d74f76a4f73fb4a4901c2660c6 (MD5) Previous issue date: 2016-06-08 / Introduction: Oral mucositis is one of the most frequent diseases resulting from the side effects of Chemotherapy and Radiotherapy. In addition to compromising the quality of life, it increases the risk of infections, especially in patients undergoing bone marrow transplantation. However, genetic risk factors related to the susceptibility to this disease have not been fully clarified. Objectives: The aim of this study was to verify whether there is an association between ABO blood group phenotyping and oral mucositis. Methods: Data were selected from two hundred twenty nine records of patients undergoing HSCT in the Unit of Bone Marrow Transplantation of Hospital de Base São José do Rio Preto; out from the underlying disease between March 2006 and March 2012. Group 1 (G1) comprised data from patients with mucositis demonstrations after HSCT; Group 2 (G2) comprised patients without data mucositis demonstrations after HSCT. The Chi-Square and Fisher Exact tests were used for comparison of proportions between patients with and without oral mucositis and other risk factors. The mean of ages was calculated using the t test. The values of Odds Ratio (OR) and confidence intervals (CI) of 95% were also calculated (p <0.05). Results: No statistically significant differences were observed in the frequency of erythrocyte phenotypes of the ABO blood group in patients with and without oral mucositis (χ2: 2.654, p = 0.448, DF = 3). Statistically significant differences were found between the frequencies of the ABO blood group phenotypes when comparisons were related to the type of transplantation, conditioning and degree of oral mucositis. Conclusion: ABO blood group is not associated to the occurrence of oral mucositis in patients undergoing bone marrow transplantation. / Introdução: Mucosite oral é uma das mais frequentes doenças resultantes dos efeitos colaterais de quimioterápicos e radioterápicos. Além de comprometer a qualidade de vida, aumenta os riscos de infecções, especialmente em pacientes submetidos ao transplante de medula óssea. Contudo, fatores de risco genéticos envolvidos na suscetibilidade a esta doença ainda não foram totalmente esclarecidos. Objetivos: O objetivo geral deste estudo foi verificar se há associação entre os fenótipos eritrocitários do sistema histo-sanguíneo ABO e a mucosite oral. Casuística e Método: Foram selecionados dados de duzentos e vinte nove prontuários de pacientes submetidos ao TCPH na Unidade de Transplante de Medula Óssea do Hospital de Base de São José do Rio Preto, independente da doença de base, entre Março de 2006 e Março de 2012. O grupo 1 (G1) compreendeu dados de pacientes com manifestações de mucosite, após o TCPH; o grupo 2 (G2) compreendeu dados de pacientes sem manifestações de mucosite, após o TCPH. Os testes exato de Fisher e qui-quadrado foram utilizados para comparação das proporções entre pacientes com e sem mucosite oral e outros fatores de risco. As médias de idade foram calculadas com o uso do teste t. Os valores de Odds Ratio (OR) e de intervalos de confiança (IC) a 95% também foram calculados (p<0,05). Resultados: Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes nas frequências dos fenótipos eritrocitários do sistema histo-sanguíneo ABO em pacientes com e sem mucosite oral (χ2: 2.654, p = 0.448, GL = 3). Também não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre as frequências dos fenótipos eritrocitários ABO quando as comparações compreenderam tipo de transplante, condicionamento e graus de mucosite oral. Conclusão: O sistema histo-sanguíneo ABO não está associado à ocorrência de mucosite oral em pacientes submetidos ao transplante de medula óssea.

Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) is an aggressive hematologic tumor and is the most common malignancy in children (Horton and Steuber 2014). This disease is characterized by the infiltration of bone marrow by malignant immature lymphoid progenitor cells and is invariably fatal without treatment. Although multi-agent combination chemotherapy is curative in a significant fraction of ALL patients, treatment currently fails in approximately 20% of children and up to 50% of adults with ALL, making relapse and drug resistance the most substantial challenge in the treatment of this disease(Fielding, Richards et al. 2007, Aster and DeAngelo 2013). Understanding what causes treatment failure is of great medical importance as second line therapies also fail in the majority of relapse T-cell ALL (TALL) patients (Fielding, Richards et al. 2007, Aster and DeAngelo 2013). Using next-generation sequencing to compare the genomes of tumors before and after therapy, mutations in gene cytosolic 5’-nucleotidase II (NT5C2) were discovered in 19% of pediatric samples with relapsed T-ALL(Tzoneva, Carpenter et al. 2013). Preliminary structure function analysis and subsequent in vitro experimental nucleotidase activity assays confirmed that these mutations lead to hyperactive NT5C2 protein. Furthermore, NT5C2 mutant proteins conferred resistance to 6-mercaptopurine and 6-thioguanine chemotherapy drugs when expressed in ALL lymphoblasts, suggesting NT5C2 is responsible for the inactivation of nucleoside-analog chemotherapy drugs. In order to assess the ability of these mutations to lead to novel inhibitor schemes, the functional impact of each mutation was analyzed through robust structure function methods. The result of this in silico analysis, is the identification of a potential allosteric regulatory mechanism of negative feedback inhibition never before described. Most notably, the majority of NT5C2 mutations identified have characteristics that suggest they abrogate the function of this proposed mechanism, yielding a novel viable target for the development of allosteric inhibitors specific for constitutively active NT5C2 mutant proteins. Overall these findings support a prominent role for activating mutations in NT5C2 and chemotherapy resistance in ALL, and highlight new avenues for relapsed ALL therapy development in the future.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T20:27:19Z : No. of bitstreams: 1 barreira_apb_dr_botfmvz.pdf: 3081642 bytes, checksum: 31a0f6fc8ca00d6226b303ef5a047356 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A lesão do tendão do músculo flexor digital superficial (TFDS) é uma importante causa de claudicação em eqüinos, com prevalência de 13 a 30%, de acordo com a atividade eqüestre. Sua instalação pode comprometer a carreira do potro com recidivas ou causar o afastamento das corridas. Além disto, determina longos períodos de recuperação, com prejuízo à função tendínea. Os tratamentos propostos são diversos, mas efeitos como melhora da qualidade ou rapidez da cicatrização não são confirmados por estudos controlados. A terapia intralesional com fatores de crescimento (TGF-ß e IGF- 1), assim como a terapia com choques extracorpóreos vêm mostrando resultados promissores. Recentemente, os avanços médicos têm demonstrado crescente interesse na utilização das células-tronco em terapia de doenças degenerativas e também em cicatrização lenta ou ineficaz. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do implante autólogo de células mesenquimais de medula óssea na cicatrização tendínea, comparando tendões tratados com tendões do grupo controle. Foi induzida lesão do TFDS de ambos os membros anteriores de seis eqüinos, seguida por implante autólogo em apenas um membro de cada animal. Os animais foram avaliados por parâmetros clínicos e ultra-sonográficos e após biópsia realizada ao 48o dia do experimento, foram verificadas características histopatológicas e imunoistoquímicas. Resultados como aumento do infiltrado inflamatório celular, abundância da matriz, diminuição da necrose, discreto aumento no índice de proliferação celular (Ki- 67, clone MIB1) e menor imunomarcação do TGF-ß1 caracterizam a aceleração do reparo tendíneo no grupo tratado. Estudos aprofundados devem ser desenvolvidos com o objetivo de definir a influência do tratamento em fase posterior do reparo. Conclui-se, então,... / The superficial digital flexor tendonitis (SDFT) is an important cause of lameness in horses with incidence from 13 to 30% depending of the exercise modality. This injury can occur in yearlings and compromise its carrier by reinjury or even the impossibility of return to athletic life. Although long periods of rest are necessary to tendon repair, there is an elasticity loss in the tendon. As current treatment regimes have only marginal effects there is interest in researching therapies that influence the quality or the duration of tendon repair. Intralesional therapy with growth factors (TGFß1 e IGF-1) and radial shock wave therapy have been presenting promising results. Recently, medical interest has been directed to the stem cells therapy of degenerative diseases and cases of deficient healing process. This study aims to evaluate the influence of autologous mesenchymal stem cells from bone marrow in tendon healing, comparing treated and none treated tendons. Induced collagen lesions were in both forelimbs TFDS from six horses, followed by autologous implant in one forelimb from each animal. The horses were evaluated by clinical, ultrasonographic, histophatologic and imunohistochemistry parameters. Tendon biopsies were done at day 48. Results such as high inflammation cells infiltration and synthesis of extracellular matrix, few necrosis areas, discrete increase in cellular proliferation (Ki-67) and low immunoreactivity to TGFß1 found in treatment group suggested the acceleration of tendon repair in this group. Further studies should be developed in order to verify the influence of this treatment on later phase of tendon repair. Overall, after analysis of results, we conclude that cellular therapy with mesenchymal stem cells have accelerate tendon repair at 48 days after treatment.

A doença enxerto contra hospedeiro (GVHD) é uma complicação comum nos pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoiéticas (TCTH), sendo considerada a maior causa de morbidade e mortalidade nesses pacientes. O principal objetivo do presente estudo foi relacionar a concentração de células de Langerhans em mucosa bucal de pacientes com GVHDc bucal com a expressão da quimiocina CCL20 e de seu receptor CCR6 no epitélio bucal, a fim de elucidar os mecanismos biológicos envolvidos no recrutamento das células de Langerhans na GVHDc. Foram selecionados fragmentos obtidos por biópsia de mucosa bucal de 60 pacientes onco-hematológicos e hematológicos submetidos previamente ao transplante de células tronco hematopoiéticas no Hospital Amaral Carvalho, Jaú SP, onde 30 pacientes desenvolveram GVHDc em mucosa bucal (Grupo 1) e 30 não desenvolveram GVHDc (Grupo 2). Amostras obtidas a partir de 30 biópsias de lesões não inflamatórias em mucosa bucal constituíram o Grupo Controle (Grupo 3). Cortes microscópicos foram avaliados em coloração de rotina Hematoxilina e Eosina, e submetidos à técnica imuno-histoquímica, utilizando-se anticorpos monoclonais anti-CD1a e anti-CCR6, e anticorpos policlonais anti-CCL20. As células de Langerhans CD1a+ foram quantificadas no epitélio da mucosa bucal, e os resultados demonstraram um maior número destas células nos pacientes com GVHDc quando comparados àqueles sem GVHDc e ao Grupo Controle (p<0,001). A análise da imunomarcação das moléculas CCR6 e CCL20 foi subjetiva com aplicação de escores. Quanto à molécula CCR6, houve maior expressão no Grupo 1 (p<0,001) em comparação aos outros Grupos; porém, quanto à expressão de CCL20, não houve diferença estatística entre os três Grupos (p=0,108). Estes resultados sugerem que o aumento das células de Langerhans, na doença enxerto contra hospedeiro crônica, em mucosa bucal, pode estar associado a maior expressão do receptor CCR6. Possivelmente, o maior recrutamento de células de Langerhans até a mucosa bucal, em pacientes transplantados de medula óssea, colabora para o desenvolvimento da GVHDc bucal. / The graft versus host disease (GVHD) is a common complication in patients undergoing hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), and considered a major cause of morbidity and mortality in these patients. The main objective of this study was to compare the concentration of Langerhans cells in oral mucosa of patients with oral chronic GVHD (GVHDc) with the expression of the chemokine CCL20 and its receptor CCR6 in oral epithelium, in order to clarify the biological mechanisms involved in the recruitment of Langerhans cells in GVHDc. We selected 60 biopsies of oral mucosa from onco-hematological and hematological patients submitted to prior hematopoietic stem cell transplantation at Hospital Amaral Carvalho, Jaú - SP from which 30 patients developed GVHDc in the oral mucosa (Group 1) and 30 did not develop GVHDc (Group 2). The Control Group (Group 3) was obtained from 30 biopsies of non-inflammatory lesions of oral mucosa. Microscopic sections were evaluated in routine Hematoxylin and Eosin staining, and submitted to immunohistochemistry using anti-CD1a and anti-CCR6 monoclonal antibodies, and anti-CCL20 polyclonal antibody. The Langerhans cells (CD1a+) were quantified in the epithelium of the oral mucosa, and the results showed a greater number of these cells in patients with GVHDc compared to those without GVHDc and the Control Group (p<0.001). Analysis of immunostaining of molecules CCL20 and CCR6 were subjective with application of scores. The expression of CCR6 molecule was more significant in Group 1 (p<0.001) compared to other groups, but in relation to CCL20 expression, there was no statistical difference between the three groups (p=0.108). These results suggest that the increase of Langerhans cells in GVHDc affecting oral mucosa may be associated with increased expression of the receptor CCR6. We suggest that the increased recruitment of Langerhans cells to the oral mucosa in patients with transplanted bone marrow contributes to the development of oral GVHDc.

INTRODUÇÃO: O objetivo deste estudo foi de avaliar a eficácia de um centrifugado osteogênico de medula óssea para estimular a consolidação de osteotomias da fíbula em coelhos. MÉTODOS: Este estudo experimental envolveu a utilização de dez coelhos machos adultos da raça Nova Zelândia albino. Realizou-se uma osteotomia transversa médio-diafisária da fíbula direita, seguida da adição local de uma esponja de colágeno absorvível embebida em um centrifugado osteogênico, obtido pela centrifugação de aspirado de medula óssea do osso ilíaco ipsilateral. A fíbula esquerda foi utilizada como controle, sendo feita a mesma osteotomia, porém neste caso adicionando-se somente a esponja de colágeno absorvível. O centrifugado de medula óssea elaborado em laboratório foi submetido à contagem do número de células nucleadas e a teste de viabilidade celular antes de ser administrada no local das osteotomias. Após quatro semanas os animais foram sacrificados para estudo dos calos ósseos formados. Os critérios de avaliação foram a mensuração da densidade mineral utilizando-se a densitometria óssea com DEXA, do volume do calo com tomografia computadorizada multi-slice e dos tecidos formados por meio de histomorfometria. RESULTADOS: O método utilizado para a centrifugação dos aspirados de medula óssea resultou em uma concentração média de células nucleadas três vezes maior que o número destas células nos aspirados originais, sem destruição celular significativa. A utilização deste centrifugado osteogênico resultou em um aumento médio na densidade mineral óssea dos calos de 40,3% e da quantidade relativa de tecido ósseo de 9,4%, sem aumento significativo nas quantidades relativas de cartilagem ou fibrose. Não houve aumento significativo no volume dos calos ósseos. CONCLUSÃO: A administração de centrifugado osteogênico de medula óssea utilizado neste estudo favoreceu a consolidação óssea de osteotomias experimentais em coelhos, observando-se uma melhora qualitativa do calo ósseo. / INTRODUTION: The purpose of this study was to evaluate the efficacy of a centrifuged osteogenic bone-marrow aspirate to stimulate rabbit fibular osteotomies healing. METHOD: Ten white New Zeeland rabbits were used. A transverse middle-diaphysis fibular osteotomy was performed at the right fibula, where a collagen absorbable sponge embedded in the osteogenic centrifuged bone marrow aspirate was inserted. The left fibula was used as the control group, where the collagen absorbable sponge was inserted without the osteogenic centrifuged aspirate. The centrifuged bone-marrow aspirate was arranged at the laboratory and submitted to nuclear cell count and cell viability test. The rabbits were killed at four weeks after surgery to evaluate bone callus formation. The results analysis was performed with DEXA bone densitometry to evaluate callus mineral mass, multislice computer tomography to evaluate callus volume and histomorphometry to evaluate the relative rate of tissue formation. RESULTS: The bone-marrow centrifugation technique increased the number of nucleated cells by three compared with the number of that cells in the original bone-marrow aspirates, without significant nucleated cell dead. The apply of centrifuged osteogenic bone-marrow aspirate resulted in an increased callus bone mineral mass by 40,3%, and increased relative rate of bone tissue formation by 9,4%, without increase the relative rate of cartilage or fibrous tissue. There was not increased callus volume. CONCLUSION: This study shows that the centrifuged osteogenic bone-marrow aspirate was able to improve the healing of experimental fibular osteotomies in rabbits by qualitative improve of bone callus.

Além de modular o metabolismo energético, o tecido adiposo constitui um regulador endócrino, produzindo fatores como a adiponectina (APN), adipocina pouco expressa na obesidade, com propriedades imunoreguladoras. Neste trabalho investigamos o papel da obesidade e APN em modelos murinho de transplante de pele e doença do enxerto-versus-hospedeiro (GvHD), na obesidade induzida por dieta hiperlipídica (Ob) e animais knockout (KO) para APN. Em suma, receptores Ob e APN KO apresentaram rejeição acelerada de enxerto de pele, associado inflamação do tipo Th1 e Th17. A obesidade também levou a pior GvHD, associado a maior inflamação no fígado, pulmão, intestino junto a dano hepático e intestinal, enquanto a manutenção de dieta HF após o transplante preveniu parciamente este dano. Estudos in vitro corroboraram estes resultados, mostrando maior ativação dendrítica e linfocitária em meio mimetizando a obesidade. Desta forma, este estudo sugere que a obesidade e redução de APN levam a maior rejeição de transplantes sugerindo adiante um papel importante à dieta neste processo. / In addition to modulating energy metabolism, the adipose tissue is an endocrine regulator, producing factors such as adiponectin (APN), an adipokine little in obesity, with immunoregulatory properties. In this work we investigated the role of obesity and APN in skin transplant and graft-versus-host disease (GvHD) in high-fat diet induced obesity (Ob) and knockout (KO) mice for APN. In summary, Ob and APN KO receptors showed accelerated skin graft rejection, associated with Th1 and Th17 type inflammation. Obesity also led to worse GvHD, associated with increased inflammation in liver, lung, intestines along with liver and gut damage, while maintenance of the HF diet after transplantation partially prevented this damage. In vitro studies corroborated these results, showing greater dendritic and lymphocytic activation in conditions mimicking obesity. Thus, this study suggests that obesity and reduced APN lead to greater rejection of transplants further suggesting an important role of diet in this process.

As doenças genéticas degenerativas atingem milhões de crianças em todo o mundo. Dentre essas doenças, a distrofia muscular, caracterizada como uma doença monogênica poderia ser tratada na sua origem através da terapia gênica. Assim, este estudo propõe à correção da mutação no gene da distrofina, causador da distrofia muscular através de modificações genéticas específicas. A criação de novas classes de terapêuticos que podem desencadear rearranjos no DNA genômico de maneira específica representa uma nova promessa para experimentos em terapia gênica. A tecnologia usada foi o RNA interferente (RNAi) que é utilizada para regulação da expressão gênica pós-transcricional. A Ku 70 é uma das proteínas específicas para a recombinação não homóloga, o RNAi foi usado na tentativa de atenuar a Ku70, prevalecendo então a expressão da recombinação homóloga, com intuito de corrigir a mutação gênica causadora da distrofia muscular em cães. Para tal avaliação, utilizamos linhagens de células tronco (CT) mesenquimais recentemente isoladas, oriundas de populações mononucleares da médula óssea de cães jovens afetados pela distrofia muscular, apresentando bons resultados em cultivo e caracterização. Este trabalho proporciona além da criação de uma nova terapêutica específica para a correção da distrofia muscular, o aumento do conhecimento e entendimento na indução de modificações genômicas em células, no desenvolvimento de novas classes de agentes terapêuticos moleculares que representam um grande potencial em estudos e no tratamento de várias doenças genéticas e infecciosas, degenerativas ou adquiridas. O presente trabalho apresenta métodos de isolamento e caracterização de células tronco-mesenquimais bem como a utilização de RNAi visando promover a recombinação homóloga entre o DNA transfectado e o alvo no DNA genômico. / The degenerative genetic diseases affect millions of children around the world. Among these diseases, muscular dystrophy, characterized as a monogenic disease can be treated at its source through gene therapy. Thus, this study proposes the correction of the gene that causes muscular dystrophy through genetic modification specific. The creation of new classes of therapeutics that can trigger rearrangements in the genomic DNA in a specific manner represents a new promise for gene therapy experiments. The technology will be used by RNA interference (RNAi) and that used to regulate gene expression post-transcriptional. The 70 Ku is a protein specific to the non-homologous recombination, RNAi was used in an attempt to mitigate the Ku70, then the prevailing expression of homologous recombination, aiming to correct the mutation that causes muscular dystrophy in dogs. For this evaluation, we use mesenchymal stem cell lines recently isolated populations derived from bone marrow mononuclear cells of young dogs affected by muscular dystrophy, presenting good results in characterization and culture. This work also provides the creation of a new specific therapy for the correction of muscular dystrophy, increased knowledge and understanding in the induction of genomic changes in cells in the development of new classes of molecular therapeutic agents have great potential in studies and treatment of various genetic and infectious diseases, degenerative or acquired. This paper presents methods for isolation and characterization of mesenchymal stem cells and the use of RNAi to promote homologous recombination between transfected DNA and genomic target DNA.

The blood system consists of two main lineages: myeloid and lymphoid. The myeloid system consists of cells that are part of the innate immune response while the lymphoid system consist of cells that are part of humoral response. These responses protect our bodies from foreign pathogens. Thus, malignancies in these systems often cause complications and mortality. Scientists world wide have been researching alternatives to treat hematologic disorders and have explored induced pluripotent stem cells (iPSCs) and the conversion of one cell type to another. First, iPS cells were generated by overexpression of four transcription factors: Oct4, Sox2, Klf4 an cMyc. These cells closely resemble embryonic stem cells (ESCs) at the molecular and cellular level. However, the efficiency of cell conversion is less than 0.1%. In addition, many iPS colonies can arise from the same culture, but each has a different molecular signature and potential. Identifying the appropriate iPS cell lines to use for patient specific therapy is crucial. Here we demonstrate that our system is highly efficient in generating iPS cell lines, and cell lines with silent transgenes are most efficient in differentiating to different cell types . Second, we are interested in generating hematopoietic stem cells (HSCs) from fibroblasts directly, without going through the pluripotent state, to increase efficiency and to avoid complications associated with a stem cell intermediate. However, a robust hematopoietic reporter system remains elusive. There are multiple hematopoietic reporter candidates, but we demonstrate that the CD45 gene was the most promising. CD45 is expressed early during hematopoiesis on the surface of HSCs; and as HSCs differentiate CD45 levels increase. Furthermore, the CD45 reporter is only active in hematopoietic cells. We were able to confirm the utility of the CD45 reporter using an in vitro and an in vivo murine model. In conclusion, The goal of this research was to expand the knowledge of stem cell reprogramming, specifically the reprogramming of iPS cells. Furthermore, it is our desire that the CD45 reporter system will undergo further validation and find utility in clinical and cell therapy environments.