Bordetella pertussis e B. parapertussis são agentes etiológicos da coqueluche. A IL-12 liga a imunidade inata e adaptativa. Investigamos alguns mecanismos que controlam a síntese de IL-12 em macrófagos medulares murinos (MfDM) ativados in vitro com estas duas espécies de bactérias. Demonstramos que IL-12p40 e TNF-a foram produzidos pelos MfDM ativados com qualquer uma das bactérias. A síntese de IL-12p40 foi dependente de TNF-a, MyD88 e NFkB e independente de MAPK p38 e ERK 1/2. Durante a estimulação com B. pertussis a produção de IL-12p40 foi dependente de TLR-4, mas com B. parapertussis envolveu outras vias independentes de MyD88 e TLR-4. Estas bactérias não induziram a síntese de IL-12p70, necessitando de sinais moleculares adicionais de IFN-g, que aumentou a síntese desta citocina. A produção de IL-12 p70 aumentou após o bloqueio das vias PI3K, MAPK p38 e ERK1/2 assim como após a adição exógena de PT sobre MfDM ativados com B. parapertussis. Portanto, diversas vias de sinais dependentes e independentes de TLR-4 controlam a produção de IL-12 neste modelo. / Bordetella pertussis and B. parapertussis are etiological agents of whooping cough. IL-12 links the innate and adaptive immunity. We investigated the ability of both bacteria to modulate IL-12 by in vitro activation of bone marrow derived macrophages (MfDM). We demonstrated that IL-12p40 and TNF-a were produced after stimulation of cells with either bacterium. IL-12p40 production was dependent on TNF-a, MyD88 and NFkB but independent of MAPK p38 and ERK 1/2. During B. pertussis activation the production of IL-12p40 was dependent on TLR-4, while B. parapertussis activation was MyD88 and TLR-4 independent. However, the bacteria alone did not induce IL-12p70 synthesis, requiring IFN-g as an additional signal. Evidences indicated MAPK p38, ERK1/2 and PI3K during B. pertussis and B. parapertussis activation, as well as the exogenous addition of PT to B. parapertussis activated MfDM, was critical for the up regulation of IL-12p70. This finding indicates that different TLR-4 dependent and independent signaling pathways may control the production of IL-12 in this model.

Bordetella bronchiseptica é um dos agentes etiológicos da tosse dos canis, infecções do trato respiratório superior em gatos, rinite atrófica, broncopneumonia em suínos, sendo freqüentemente isolada em coelhos e animais de laboratório. O impacto deste agente em saúde humana ainda é subestimado, o risco da infecção de pessoas imunodeprimidas que tem contato com animais domésticos existe e é relatado na literatura. No Brasil não há estudos caracterizando o agente isolado a partir de espécies de animais de companhia. O conhecimento dos aspectos epidemiológicos da infecção por Bordetella bronchiseptica é de fundamental importância para a adoção de medidas efetivas de controle e prevenção da infecção em seres humanos e animais domésticos, neste sentido, estudos de epidemiologia molecular são de grande relevância. O presente estudo tem como objetivos caracterizar amostras de Bordetella bronchiseptica isoladas de cães e gatos através da eletroforese em campo pulsado (PFGE) e do perfil de resistência a antimicrobianos. Foram isoladas 45 amostras provenientes de três cães e onze gatos de diferentes gatis, canis e clínicas veterinárias e as mesmas foram discriminadas em sete perfis através dos padrões de resistência e em quatorze perfis genotípicos através da PFGE. / Bordetella bronchiseptica is one of the etiologic agents of kennel cough, cat superior respiratory tract infections, swine bronchopneumonia, being frequently isolated from rabbits and laboratory animals. The impact of this agent in human health is still underestimated; the risk of immunosuppressed persons who have contact with domestic animals exists and is reported in literature. In Brasil, there are no studies characterizing the agent isolated from pet species. The knowledge of epidemiological aspects of Bordetella bronchiseptica is of fundamental importance to adopt effective control measures and prevention of human and domestic animals, in that sense, studies of molecular epidemiology are very relevant. This study aims to characterize strains of Bordetella bronchiseptica from dogs and cats through pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and antimicrobial resistance profile. Forty five strains from three dogs and eleven cats from different catteries, shelters, and veterinary clinics were separated in seven profiles based in resistance patterns and fourteen genotypic profiles through PFGE.

<p>U ovom radu su izolovani specifičn<em>i&nbsp; Bordetella bronchiseptica</em>&nbsp; bakteriofagi iz iz<br />priodne sredine koji pripadaju familiji&nbsp; <em>Siphoviridae</em>. Bakteriofagi su&nbsp; okarakterisani u<br />cilju razmatranja njihove uloge u lizogenoj konverziji bakterije i mogućnosti<br />primene u kontroli vrste&nbsp;<em> B. bronchiseptica</em>. U tu svrhu ispitivane su morfolo&scaron;ke<br />karakteristike odabranih faga, litički&nbsp; spektar faga, i karakteristike genoma i proteina<br />faga. Takođe, ispitivana je i stabilnost faga u različitim uslovima sredine, njihova<br />litička efikasnost i efekat na formiranje i vec formirani biofilm. U radu je ispitana i<br />uloga faga u produkciji biofilma,&nbsp; rezistenciji na antibiotike, procesu hemolize i<br />pokretljivosti kod vrste&nbsp; <em>B. bronchiseptica</em>.&nbsp; Rezultati ovog rada jasno ukazuju na<br />ulogu faga u lizogenoj konverziji vrste&nbsp;<em> B.&nbsp; bronchiseptica</em>&nbsp; kao&nbsp; i mogućnost njihove<br />primene, uz određene modifikacije, kao anti-<em>B.bronchiseptica</em> agenasa.</p> / <p>In this paper <em>Bordetella bronchiseptica</em> specific phages belonging to family <em>Siphoviridae</em> were isolated from environment. Bacteriophages were characterized to determine their role in the lysogenic conversion of bacteria and their possible usage in <em>B. bronchiseptica </em>control. For this purpose, morphological characteristics of the selected phages, the phage lytic spectrum, and the characteristics of phage genome and the proteins were examined. Also, the stability of phage in different environmental conditions was studied as well as their lytic efficiency, effect on the biofilm formation and formed biofilm. The paper also examined the role of phages in the production of biofilm, resistance to antibiotics, the process of hem olysis and the motility of<em> B. bronchiseptica </em>species. The results of this study clearly indicate the role of phage in lysogenic conversion in <em>B. bronchiseptica</em> as well as their potential for <em>B. bronchiseptica</em> control.</p>

Introdução: a coqueluche é uma doença causada pela Bordetella pertussis (BP), sendo mais frequente e grave em lactentes menores de um ano de idade. Com a introdução da vacina, houve redução na incidência mundial da doença, porém nos últimos 10 anos observa-se uma recrudescência. Pode apresentar-se de forma menos característica em lactentes, especialmente antes do final do esquema vacinal para o primeiro ano de vida. O quadro clínico, nesses pacientes, pode ser semelhante ao das infecções por vírus respiratórios (VR) que são os agentes etiológicos mais frequentes nas infecções de vias aéreas, nessa faixa etária. São necessários estudos que avaliem a importância da pesquisa de VR em lactentes com suspeita clínica de coqueluche. Objetivos: em lactentes com suspeita de coqueluche: identificar as prevalências de BP, VR e codetecções; analisar e comparar as características clínicas e a evolução, segundo a etiologia identificada e analisar o impacto do diagnóstico etiológico sobre o uso de macrolídeos. Métodos: estudo de coorte prospectivo, com crianças menores de um ano de idade, hospitalizadas com suspeita clínica de coqueluche entre junho de 2014 e junho de 2016 e submetidas à pesquisa etiológica para identificação de BP (\"swab\" de nasofaringe para cultura e/ou PCR) e pesquisa de VR (aspirado de nasofaringe para imunofluorescência indireta). Dados clínicos, demográficos e evolutivos foram coletados com o preenchimento de protocolo clínico-laboratorial padronizado. Resultados: no período de estudo foram analisados 59 lactentes. Em 18 (30,5%) houve identificação de BP, em 23 (39%) de algum vírus respiratório. Em quatro (7%), houve codetecção de BP e algum VR. O vírus mais frequentemente identificado foi o VSR (73%). As características com maior sensibilidade para o diagnóstico de infecção por BP foram tosse seguida de cianose e ser filho de mãe não vacinada com dTpa. Sibilos e desconforto respiratório apresentaram alta sensibilidade para a identificação de VR. Na análise bivariada apresentaram maior chance de infecção por BP: menor idade (OR = 1,86), ausência de febre (OR = 4,9), não ser vacinado para coqueluche (OR = 4,4), leucocitose superior a 20.000/mm3 (OR = 5,4), linfocitose superior a 10.000/mm3 (OR = 4,0) e de infecção por VR: sibilos (OR = 4,33). Após o ajuste para confundidores, os maiores preditores para BP de forma independente foram: ausência de sibilos (OR =5,7) e leucocitose superior a 20.000/mm3 (OR = 5,38). O número de pacientes com codetecção não permitiu a análise comparativa de gravidade com aqueles com agente único. Em apenas um paciente o resultado da pesquisa viral positiva resultou em suspensão de macrolídeo. Conclusão: além da BP, os VR também foram etiologias frequentes nos lactentes com suspeita clínica de coqueluche, além de casos de codetecção de BP e VR. Foram identificadas características clínicas/laboratoriais sugestivas, porém não patognomônicas das etiologias identificadas o que corrobora a necessidade da pesquisa etiológica para VR, nessa situação clínica / Introduction: Pertussis is a disease caused by Bordetella pertussis (BP), being more frequent and severe in infants less than one year old. After vaccine introduction, there was a reduction in the global incidence of the disease, but in the last ten years there was a resurgence. It may present less characteristically in infants, especially before the end of the vaccine scheme for the first year of life. The clinical picture in these patients may be similar to that of respiratory virus infections (VR), which are the most frequent etiologic agents in airway infections in this age group. Studies is necessary to evaluate the importance of RV research in infants with clinical suspicion of pertussis. Objectives: In infants with suspected pertussis: identify the prevalence of BP, VR and codetections; analyze and compare the clinical characteristics and evolution according to the identified etiology and analyze the impact of the etiological diagnosis on the use of macrolides. Methods: A prospective cohort study with children under one year of age hospitalized with suspected clinical pertussis between June 2014 and June 2016 and submitted to etiological research to identify BP (nasopharynx swab for culture and/or PCR) and VR (nasopharyngeal aspirate for indirect immunofluorescence). Clinical, demographic and evolution data were collected with the completion of a standardized clinical-laboratory protocol. Results: During the study period, 59 infants were analyzed. In 18 (30.5%) there was identification of BP, in 23 (39%) of some respiratory virus. In four (7%), there was BP detection and some RV. The virus most frequently identified was RSV (73%). The characteristics with greater sensitivity for the diagnosis of BP infection were cough followed by cyanosis and the mother\'s non-vaccinated dTpa. Wheezing and respiratory distress presented high sensitivity for RV identification. In the bivariate analysis they presented a greater chance of BP infection: lower age (OR = 1.86), absence of fever (OR = 4.9), not being vaccinated for pertussis (OR = 4.4), leukocytosis higher than 20,000/mm3 (OR = 5.4), lymphocytosis greater than 10,000/mm3 (OR = 4.0) and RV infection: wheezing (OR = 4.33). After adjustment for confounders, the largest predictors for BP independently were: no wheezing (OR = 5.7) and leukocytosis higher than 20,000/mm3 (OR = 5.38). The number of patients with codetection did not allow the comparative analysis of severity with those with single agent. In only one patient, the result of positive viral research resulted in macrolide suspension. Conclusion: In addition to BP, RVs were also frequent etiologies in infants with clinical suspicion of whooping cough, as well as cases of BP and VR codetection. Clinical/laboratory characteristics suggestive, but not pathognomonic, of the identified etiologies have been identified, which corroborates the need for etiological research for RV in this clinical situation

Le genre Bordetella comporte à l’heure actuelle neuf espèces, majoritairement responsables d’infections respiratoires. B. pertussis, agent de la coqueluche, est le modèle de travail de cette thèse avec d’autres espèces telles que B. holmesii et B. avium. Les endotoxines bactériennes sont les composants essentiels de la membrane externe des bactéries à Gram-négatif. Du point de vue chimique, ce sont des lipopolysaccharides (LPS) qui provoquent un grand nombre de désordres physiopathologiques allant de la simple fièvre, à faible dose, jusqu’au choc endotoxinique mortel, à forte dose. L’analyse structurale des LPS de Bordetella est la spécialité majeure du laboratoire et la structure des endotoxines de la plupart des espèces de ce genre y a été décrite. Il est admis que le lipide A, qui constitue la région hydrophobe des LPS, est responsable de la majorité des activités biologiques de ces molécules. Ainsi, la moindre variation structurale de ces molécules a une répercussion importante sur la reconnaissance hôte-pathogène, les activités biologiques et la virulence bactérienne. A titre d’exemple, il a été mis en évidence que la modification spécifique, par substitution des groupes phosphate du lipide A, avec de la glucosamine, jouait un rôle majeur dans la modulation de la réponse immunitaire. Cette originalité structurale qui a été mise en évidence dans notre équipe chez B. avium, B. bronchiseptica puis chez B. pertussis; elle semble être un trait spécifique des Bordetelles. Il faut savoir que la coqueluche fait des ravages dans les pays sous-développés et touche les nouveau-nés dans de nombreux pays, comme la France, d’une maladie infectieuse mortelle dans les cas graves. Le vaccin qui ne peut être injecté qu’à l’âge de 2-3 mois et dont les rappels ne sont pas régulièrement suivis est imparfait. Les spécialistes du domaine ont reconnu qu’un complément antigénique serait nécessaire pour le rendre plus efficace. Au cours de cette thèse, nous avons analysé la structure des LPS d’isolats cliniques de B. pertussis afin d’étudier leur évolution et leur adaptation avec le temps ainsi que leur application vaccinale potentielle. De plus, concernant deux souches de B. pertussis, BP338 et BP18-323 nous avons contribué à la mise en évidence de nouveaux gènes impliqués dans la biosynthèse de la GlcN substituant les groupes phosphate de la région lipidique et à expliquer la différence de longueur du seul acide gras distinct entre les deux souches. L’étude de l’influence de ces éléments structuraux sur l’activation du complexe, TLR4/MD-2 apporte de nouveaux éclairages sur les interactions entre les lipides A et ce récepteur. Nos études sur les isolats cliniques de B. holmesii, pathogène opportuniste responsable d’affections de type coqueluche, montrent une grande hétérogénéité structurale du lipide A au sein d’un même isolat. Nous avons montré dans cette souche la présence d’un marqueur spécifique des souches de Bordetella, il s’agit d’un acide gras présent uniquement chez les lipides A des isolats humains. Nos travaux effectués sur des isolats cliniques de B. pertussis appartenant aux ères pré- et post-vaccinales et provenant de différents pays, montrent une perte du matériel génétique avec une déficience de certains antigènes majeurs. Nous avons démontré, via des méthodes physico-chimiques, que ces modifications ne concernaient pas les LPS de ces isolats. La stabilité de ces antigènes ainsi que nos méthodes de purification, nous permettent de proposer que ces LPS détoxifiés soient de bons candidats pour améliorer l’efficacité des vaccins coquelucheux acellulaires. Enfin, toutes les études structurales présentées dans cette thèse ont permis de mieux comprendre la régulation de certains gènes en réponse à un stress extérieur. Elles participent, sur l’exemple d’un pathogène majeur, au déchiffrage des mécanismes moléculaires qui mènent à la virulence et à l’adaptation bactérienne. / The Bordetella genus is actually composed of nine species responsible for respiratory infections. B. pertussis, the agent of whooping cough, is the main model of this thesis along with other species such as B. holmesii and B. avium. Bacterial endotoxins are the major components of Gram-negative bacteria external membrane. From a chemical point of view, they are lipopolysaccharides (LPS) causing a high number of pathophysiological disorders ranging from low fever at weak doses, to lethal endotoxic choc at high ones. Structural analysis of the Bordetellae LPS is the major specialty of our group where the endotoxin structures of most species of the genus were described. It is well-known that lipid A, which constitutes the hydrophobic moiety of LPS, is responsible for the majority of biological activities of these molecules. Thus, any structural change of these molecules has an important impact on host-pathogen recognition, biological activities and bacterial virulence. For example, it has been demonstrated that the specific modification by grafting glucosamine on lipid A phosphate groups plays a major role in modulating the immune response. This structural peculiarity was highlighted by our team first in B. avium, B. bronchiseptica then in B. pertussis; it seems to be a unique trait of Bordetella. It should be noted that pertussis wreaks havoc in developing countries and affects newborns in several others, including France, where this infectious disease causes a significant death toll. The vaccine, which cannot be injected before the age of 2-3 months, could be improved and boosters are not regularly monitored. Experts in the domain have recognized the lack of an antigenic complement to make it more effective. In this thesis, we analyzed the structure of LPS from B. pertussis clinical isolates to study their evolution and adaptation over time along with their potential use in the design of new vaccines. In addition, regarding two strains of B. pertussis, BP338 and BP18-323, we have contributed to the identification of new genes involved in the biosynthesis of GlcN substituting the phosphate groups of the lipid moiety, which helped explaining the difference in the length of the single fatty acid differing between the two strains. The analysis of the influence of these structural elements on the activation of the receptor complex, TLR4/MD-2 sheds new light on the interactions between lipids A and this receptor. Our studies on clinical isolates of B. holmesii, an opportunistic pathogen responsible for pertussis-like illness, show great structural heterogeneity in the lipid A of these isolates. We showed the presence of a specific marker of Bordetella species, namely a fatty acid present only in the lipid A of human isolates. Our works on B. pertussis clinical isolates belonging to pre- and post-vaccine eras and coming from different countries show a loss of genetic material with a deficiency in certain major antigens. We have demonstrated, via physico-chemical methods, that these modifications did not affect the LPS of these isolates. The stability of these antigens and our ability to purify them, allow us to propose that detoxified LPS could be good candidates for improving the effectiveness of acellular pertussis vaccines. Finally, all structural studies presented in this thesis have provided insight into the regulation of certain genes in response to external stress. Our compiled work on a major pathogen is an important step in deciphering the molecular mechanisms leading to bacterial virulence and adaptation.

A coqueluche é uma doença respiratória contagiosa, causada pela bactéria Bordetella pertussis. Tendo um significativo impacto epidemiológico, esta doença sofreu uma expressiva redução após o uso disseminado de vacinas pertussis. Efeitos adversos na imunização com a Vacina de células inteiras Whole cell pertussis (wP), atribuídos a presença de lipopolissacarídeos (LPS), levou ao desenvolvimento da Vacina pertussis acelular (aP). Contudo, a imunização com aP não tem demonstrada a mesma eficiência que a imunização com wP. Diante desse cenário o objetivo deste trabalho é desenvolver o processo de produção industrial de uma nova Vacina Pertussis de células inteiras com reduzida quantidade de LPS e baixa reatogenicidade, a Vacina Pertussis Low (wPlow). Para alcançar o objetivo, foram produzidos em escala industrial 25 lotes de cultivos inativados, concentrados e submetidos à extração de LPS com solvente orgânico. Para extração de LPS foram avaliadas 4 diferentes metodologias: filtração de fluxo tangencial (TFF); filtração de fluxo tangencial com lavagem com solução com solvente orgânico (TFFSW); centrifuga tubular (CT); centrifugação de fluxo contínuo de pratos (CFC). A wPlow produzida em centrifuga de bancada e a wP foram usadas para comparação. O processo de bancada resultou na redução de LPS (método Purpald) em média de 75% do conteúdo de LPS e a redução de 81% da atividade endotóxica (dosagem de LAL). Nos processos industriais, por TFF houve a redução de &cong;21% do conteúdo de LPS, porém com aumento de &cong; 52% da atividade endotóxica; por TFFSW houve a redução de 46% do conteúdo de LPS e uma redução endotóxica média de &cong; 24%; por CT ocorreu à redução de &cong; 66% do conteúdo de LPS e de &cong; 73% da atividade endotóxica; com a CFC houve a redução de &cong; 92% do conteúdo de LPS e de &cong; 61% da atividade endotóxica. Os rendimentos de processo foram &cong; 83%, 61%, 37% e 63% respectivamente para os processos de TFF, TFFSW, CT e CFC. Através de microscopia eletrônica, foi possível visualizar a integridade celular após o processamento por CFC, e o principal antígeno vacinal, a toxina pertussis foi detectada na preparação, por western-blot. Quanto à imunogenicidade, anticorpos IgG anti-pertussis foram detectados por ELISA e resultados preliminares não mostraram diferença significativa de redução de colonização pulmonar de B. pertussis em camundongos imunizados com a wPlow ou wP. Diante dos resultados obtidos, podemos concluir que os processos de TFF e TFFSW não foram eficientes na remoção da atividade endotóxica da wPlow, embora tenha ocorrido a redução do LPS. Com relação aos processos utilizando centrífugas industriais, eficientes tanto na remoção do LPS e na redução da atividade endotóxica, houve, contudo, um baixo rendimento no processo com CT. A wPlow produzida por CFC foi imunogênica, indicando a eficácia potencial desta vacina e que a produção em escala industrial é um processo viável. Como parte deste trabalho, a cepa vacinal de Bordetella pertussis foi também caracterizada pelo seu sequenciamento genômico completo (genbank número CP010323). / Whooping cough is a contagious respiratory disease caused by Bordetella pertussis. In the past this infection had a high epidemiological impact, only reduced after the use of pertussis vaccine. The association of adverse events in immunization with whole cell Pertussis vaccine (wP), attributed to the presence of lipopolysaccharides (LPS), has led to the development of acellular Pertussis vaccine (aP). However, it is known that immunization with aP does not have the same efficiency as compared to immunization with wP vaccine. In this scenario, the objective of this work is to develop the industrial production process of a new whole cell pertussis vaccine with reduced amount of LPS and low reatogenicity, the whole cell Pertussis low vaccine (wPlow). To achieve this aim, we produced 25 lots of inactivated and concentrated cultures prepared on an industrial scale and subjected to LPS extraction with organic solvent. We evaluated four industrial processes to extract the LPS from the cells: tangential flow filtration (TFF), TFF with organic solvent washing (TFFSW), tubular centrifugation (CT) and continuous flow centrifugation (CFC). These methodologies were compared with wPlow produced at bench scale obtained by centrifugation and with traditional wP. The bench process resulted in the reduction of 75% of LPS content (Purpald method) and 81% reduction in endotoxic activity (LAL dosage) on average. In the industrial processes, TFF reduced &cong; 21% in LPS content, but with a &cong;52% increase in endotoxic activity; by TFFSW there was a reduction of &cong; 46% of the LPS content and an average reduction of endotoxic activity of &cong;24%; CT reduced &cong; 66% of LPS content and &cong; 73% of endotoxic activity; with CFC there was a reduction of &cong; 92% in LPS content and &cong;1% in endotoxic activity. The process yields were &cong; 83%, 61%, 37% and 63% respectively for the TFF, TFFSW, CT and CFC processes. Through electron microscopy, it was possible to visualize cell integrity after CFC processing, and the major vaccine antigen, pertussis toxin, was detected in the preparation by western blot. As for immunogenicity, anti-pertussis IgG antibodies were detected by ELISA and preliminary results showed no differences in the B. pertussis colonization of lungs in mice immunized with wPlow or wP. We can conclude that the TFF and TFFSW processes were not efficient in removing the endotoxic activity of wPlow, although LPS reduction occurred. Although the processes using industrial centrifuges were efficacious in the removal of LPS and in the reduction of endotoxic activity, there was a low yield in the CT process. The wPlow produced by CFC was immunogenic indicating its potential as a vaccine and that this industrial scale production is a viable process. The characterization of the vaccine strain of Bordetella pertussis by complete genome sequencing was also presented here as part of this work (genbank - number CP010323).

A Bordetella avium é o agente etiológico da bordetelose aviária, uma doença altamente contagiosa que afeta o trato respiratório superior das aves. B. avium adere-se preferencialmente às células do epitélio ciliado traqueal, promovendo inflamação e deformação da mucosa respiratória. As infecções do trato respiratório das aves resultam em grandes prejuízos para toda indústria avícola, desta forma, o presente estudo teve como objetivo a caracterização genotípica e de sensibilidade a antimicrobianos de isolados de B. avium provenientes de perus com histórico de aerossaculite. Dentre os 300 animais examinados, isolou-se B. avium de 13 aves e foram selecionadas 20 cepas do agente para os estudos posteriores. Através do antibiograma realizado pela técnica de disco difusão observou-se um alto número de cepas resistentes aos antimicrobianos beta lactâmicos (amoxacilina, ampicilina, penicilina e ceftiofur), assim como para lincomicina, sulfonamidas e combinação sulfonamidas/trimetoprima (cotrimoxazol) e uma grande heterogeneidade resultando em 15 perfis distintos. Os antimicrobianos com maiores níveis de sensibilidade foram o florfenicol, seguidos pelas quinolonas, doxiciclina e pelas tetraciclinas. Todas as cepas foram caracterizadas através da PFGE e do AFLP, apresentando 15 pulsotipos e 16 perfis genotípicos respectivamente. Os métodos fenotípicos e genotípicos apresentaram capacidade discriminatória semelhante e revelaram uma grande diversidade dentre os isolados analisados. / Bordetella avium is the etiologic agent of avian bordetellosis, a highly contagious disease that affects the upper respiratory tract of birds. B. avium adheres preferentially to ciliated tracheal epithelial cells, promoting inflammation and deformation of the respiratory mucosa. Infections of the respiratory tract of birds resulting in large losses for the entire poultry industry in this way, this study aimed to characterize genotypic and antimicrobial susceptibility of isolates of B. avium from turkeys with a history of Airsacculitis. Among the 300 animals examined, B. avium was isolated from 13 turkeys and 20 strains were selected for further studies. Through the antibiogram performed by disk diffusion technique was observed a high number of strains resistant to beta-lactamic antibiotics (amoxicillin, ampicillin, penicillin and ceftiofur), as well as, lincomycin, sulfonamides and sulfonamide combination/ trimethoprim (cotrimoxazole) and a high level of heterogeneity resulting in 15 different profiles. The antimicrobials with higher levels of sensitivity were florfenicol, followed by quinolones, doxycycline and tetracycline. All strains were characterized through to PFGE and AFLP, presenting 15 pulsotypes and 16 genetic profiles, respectively. Phenotypic and genotypic methods showed similar discriminatory capacity and presented a high diversity among isolates examined.

El aumento creciente de la incidencia de Bordetella pertussis en poblaciones con elevada cobertura de vacunación ha puesto de manifiesto que las vacunas en uso presentan falencias que han cobrado importancia con el tiempo. Con el fin diseñar vacunas con mayor capacidad protectora nuestra investigación se ha orientado al estudio del fenotipo infectante. Parte de los esfuerzos en este sentido se han centrado en la identificación de los cambios fenotípicos inducidos en B. pertussis en respuesta a la falta de hierro libre, por ser éste el stress nutricional mas importante durante infección. Para ello se ha elegido una estrategia de trabajo que es una combinación de proteómica bidimensional comparativa y análisis serológico del proteoma. La ventaja de emplear esta estrategia es que permitió identificar potenciales factores de virulencia y, a la vez, seleccionar inmunógenos que se expresan en condiciones fisiológicas y que, sin embargo, no están incluidos en ninguna de las formulaciones vacunales en uso. En este trabajo de tesis, por un lado se amplió la caracterización del proteoma de B. pertussis cultivada bajo limitación de hierro mediante una proteómica shotgun, una técnica que presenta alta sensibilidad. Además se describen dos nuevos inmunógenos capaces de mejorar la protección conferida por la vacuna acelular actualmente en uso.

Resumo não disponível.

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