Submitted by Leticia Schettini (leticia@ufrrj.br) on 2016-09-20T14:14:37Z No. of bitstreams: 1 2016 - NAIARA DE MIRANDA BENTO RODRIGUES.pdf: 1508318 bytes, checksum: bbf2aebb5d43033339bf559d73461919 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-20T14:14:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016 - NAIARA DE MIRANDA BENTO RODRIGUES.pdf: 1508318 bytes, checksum: bbf2aebb5d43033339bf559d73461919 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPQ / Mastitis adversely affects milk production and in general cows do not regain their full production levels post recovery, leading to considerable economic losses. Moreover the percentage decrease in milk production depends on the specific pathogen that caused the infection and enterobacteria are responsible for this greater reduction. These microorganisms are preferentially found in the habitat of animals in places contaminated with feces, urine, clay and also organic beds. Phenotypic tests are among the currently available methods used worldwide to identify enterobacteria; however they tend to misdiagnose the species despite the multiple tests carried out and they can delay the antibiotic therapy by clinic veterinary. On the other hand the MALDI-TOF MS technique has been attracting attention for its precise identification of several microorganisms at species level. In the current study, 183 enterobacteria were detected in milk (n=47) and fecal samples (n=94) collected from cows; also water (n=23) and milk line samples (n=19) collected from a farm in Rio de Janeiro with the purpose to present the MALDI-TOF MS technique as efficient methodology and also as a ?gold standard? to better understand the possible current biochemical errors in enterobacteria identification considering isolates from bovine environments. This proteomic technique confirmed 92.9% (170/183) of the enterobacteria species identified by biochemical tests that showed high sensitivity (> 81%) and specificity (> 89%). The gyrB sequencing was made in eigth from thirteen misidentified enterobacteria and confirmed 100% the MALDI-TOF results, so the proteomic technique was used as a ?gold standard? for this study. The amino acid decarboxylation test made the most misidentifications and Enterobacter spp was the largest misidentified genus (76.9%, 10/13). E.coli was prevalent (83%, 152/183) in all samples and the bovine milk presented the most enterobacteria diversity. The Salmonella sp wasn?t detected in feces bovine samples and all water samples from different points in the farm presented unacceptable microbiological standards. Was identified enterobacteria in milkers hands and nasal cavity also in the milking machines used on the property. These results aim to contribute significantly to the characterization of the Enterobacteriaceae as well in understanding of its spread in dairy production environment , assisting in need diagnostic of possible agents involved in bovine mastitis as well as to implement properly targeted prophylactic measures. / A mastite bovina afeta negativamente a produ??o de leite dificultando a recupera??o dos n?veis de produ??o total das propriedades leiteiras, levando a perdas econ?micas consider?veis. Esta redu??o no percentual da produ??o de leite pode estar associada ao agente patog?nico espec?fico que causou a infec??o, sendo as enterobact?rias frequentemente respons?veis pela mastite ambiental. Estes microrganismos s?o preferencialmente encontrados no habitat normal dos animais como locais que apresentam esterco, urina, barro e camas org?nicas. Os testes fenot?picos est?o entre os m?todos dispon?veis atualmente utilizados para identificar as enterobact?rias; no entanto, eles podem ocasionalmente identitificar erroneamente algumas esp?cies apesar dos m?ltiplos ensaios realizados. Al?m disso, a demora na sua execu??o pode tardar a antibioticoterapia realizada em campo. Por outro lado, a t?cnica de MALDI-TOF MS tem atra?do a aten??o pela sua identifica??o precisa dos v?rios microorganismos em n?vel de esp?cie. No presente estudo, um total de 183 enterobact?rias foram isoladas a partir de amostras de leite (n=47) e fezes colhidas de vacas em lacta??o (n=94); amostras de ?gua (n=23) e na linha de ordenha (n=19) em uma propriedade situada no Rio de Janeiro. A proposta foi utilizar a t?cnica de MALDI-TOF MS como um m?todo eficaz de identifica??o bacteriana de enterobact?rias e descrever a permanencia destes microrganismos no ambiente de produ??o leiteira. A t?cnica prote?mica confirmou 92,9% (170/183) das esp?cies de enterobact?rias identificadas pelos testes bioqu?micos convencionais. O sequenciamento do gene gyrB, realizado em oito das 13 enterobact?rias que apresentaram identifica??o discordante, confirmou em 100% o resultado da t?cnica prote?mica, que foi utilizada como metodologia de refer?ncia no presente estudo. O g?nero Enterobacter foi o mais discordante pelo m?todo bioqu?mico (76,9%, 9/13). A E.coli foi a esp?cie predominante (83%, 152/183) em todas as amostras avaliadas, sendo que o leite bovino apresentou maior diversidade de enterobact?rias. N?o foi detectada a presen?a de Salmonella spp. nas amostras de fezes bovinas e todas as amostras de ?gua dos diferentes pontos de coleta da propriedade apresentaram padr?es microbiol?gicos inaceit?veis. Foram isoladas enterobact?rias das m?os e cavidades nasal dos ordenhadores, bem como nas ordenhadeiras mec?nicas utilizadas na propriedade. Estes dados visam contribuir de forma significativa para a caracteriza??o das enterobacterias bem como para a compreens?o e sua descri??o no ambiente de produ??o leiteira, auxiliando no diagn?stico preciso dos poss?veis agentes envolvidos na mastite bovina bem como na implementa??o de medidas profil?ticas devidamente direcionadas.

Atualmente a terapia e as práticas de manejo da mastite estão baseadas na administração de agentes antimicrobianos com ampla atividade contra os microrganismos mais comuns desta doença. Os fármacos são administrados diretamente no canal da teta e/ou por sistêmica. Os tratamentos com antimicrobianos são realizados durante o período seco como terapia preventiva, ou durante o período de lactação como terapia curativa. O leite produzido por animais tratados pode conter resíduos do medicamento. A presença de resíduos de antimicrobianos no leite constitui um risco para a saúde pública devido ao fenômeno de múltipla resistência, bem como uma causa de perdas econômicas, considerando a fabricação de queijo e iogurte, entre outros derivados lácteos. A proposta deste estudo foi avaliar alguns fatores que contribuem para a ocorrência de resíduos em vacas tratadas além do período recomendado para descarte. Os fatores avaliados foram: fisiológico, como a produção leiteira; clínico, como a mastite e farmacológico como a via de administração e o fármaco utilizado. Foi usado um teste comercial para a detecção de resíduos (Delvotest®) por inibição microbiológica. Entre os fatores estudados, foi demonstrada a influência da produção leiteira, ou seja, animais com produção leiteira maior do que 20L/dia apresentaram menor ocorrência de resíduo (39,5%), quando comparado com aqueles com produção menor do que 20L/dia (70,7%) e a diferença foi significante (P < 0,0001). Entre os fatores clínicos foi determinado que a presença e intensidade do processo inflamatório contribuem para a ocorrência de resíduos. Deste modo, entre os quartos com mastite clínica tratados o nível de resíduo foi 47,7%, os quartos com mastite subclínica tratados apresentaram 34,9% e os controles 9,5% (quartos sem mastite tratados) e a diferença entre os três grupos foi significante (P = 0,0381, P = 0,0008, P = 0,0209). Ao se comparar a ocorrência de resíduos no leite de quartos tratados durante a lactação (41,9%) com os resíduos nos quartos que receberam a terapia de vaca seca (23,2%) foi observado um maior nível entre os grupos tratados durante a lactação e a diferença foi significante (P < 0,0001). Em relação aos fatores farmacológicos, a via de aplicação bem como o grupo farmacológico do antimicrobiano utilizado no tratamento foram demonstradas diferenças estatísticas tanto para os diversos antimicrobianos, quanto para as vias de administração. Um maior nível de resíduo foi observado entre os grupos farmacológicos em quartos tratados por via intramamária com aminoglicosídeos (gentamicina) (66,7%). E o maior nível de resíduo foi observado quando ambas as vias foram utilizadas simultaneamente, tanto para aminoglicosídeos (93,7%), quanto para betalactâmicos (100%). O conhecimento de que o pKa dos antimicrobianos irá determinar diferentes níveis de distribuição nos órgãos e tecidos sustenta a hipótese que a via de administração pode influenciar a presença de resíduos de antimicrobianos no leite. Conseqüentemente, o uso simultâneo das duas vias de administração, uma prática comum, contribuiu também para um alto risco da ocorrência de resíduos de antimicrobianos. Deve-se ressaltar que a redução da presença de resíduos no leite não depende apenas de normas e regulamentos, mas envolve uma orientação aos produtores e aos veterinários para controlar e/ou prevenir os fatores de risco. Assim, os resultados deste estudo irão contribuir para esclarecer alguns aspectos importantes para um melhor entendimento da ocorrência de resíduo no leite além do período recomendado para descarte. / Current mastitis therapy and management practices are base on the administration of antimicrobial agents with high activity against most common mastitis bacterial pathogens. Drugs are administrated directly into the teat canal and/or systemically. Antibiotic treatments are performed during the dry period as preventive therapy, or during the lactating periods as therapeutic cure. Milk produced from treated animals may contain drug residues. The presence of antibiotic residues in milk constitutes a public health risk due to the multi-resistance phenomenon, as well as, a source of economical losses, considering the industries of cheese and yogurts, among others dairy products. The purpose of this study was evaluated some factors that contribute to the occurrence of residues in treated cows beyond the recommended discarded period. The evaluated factors were: physiological, as milk production, clinical, as mastitis and pharmacological, as routes and antimicrobials. It was used a commercial test for residues detection (Delvotest®) by microbiological inhibition. Among the clinical factors it was demonstrated the influence of the milk production, so animals with milk production higher than 20 L/day showed lower occurrence of residues (39.5%), compared to the ones with less than 20 L/day (70.7%) the difference was significant (P<0.0001). Among the clinical factors it was determinated that the presence of inflammatory process and the intensity of it, contributes to the presence of residues. Therefore, among the clinical mastitis treated quartes the level of residues was 47.7%, while the subclinical treated quartes showed 34.9% and, the control ones 9.5% (i.e. treated quartes without mastitis) and the difference among the three groups was significant (P=0.0381, P=0.0008, P=0.0209).Comparing the residues in milk from treated quartes during lactation (41.9%) with the quartes that received the dry cow therapy (23.2%) it was observed a higher level of residues among the groups treated during the lactation and the difference was significant (P<0.0001). Among the pharmacological factors, the routes as well the pharmacological group of the antimicrobials used in the treatment showed statistical differences either among the antimicrobials as well as the administration routes. A high level of residues was observed among pharmacological groups in quartes treated by intramammarian route with aminoglicosides (gentamicin) (66.7%). And, the highest level of residues was observed when both route where used simultaneously, either with aminoglicosides (93.7%) as well as with betalactamics (100%). The knowledge that different pKa among the antimicrobials will determine the level of distribution in different organs and tissues, support the hypothesis that the administration route could influence the presence of residues of antibiotics in milk. Consequently, the simultaneous use of both administration routes, a very usual practice, could also contributes to a higher risk of antimicrobial residue occurrence. To reduce this possibility, it is not only a matter of Regulatory Affairs, but also involves the dairy farmers and veterinarians\' proper orientation about how to avoid and to control the risk factors, therefore, the results of this study will contribute to clarify some important aspects to a better understanding of the occurrence of residues in milk beyond the recommend discard period.

Atualmente a terapia e as práticas de manejo da mastite estão baseadas na administração de agentes antimicrobianos com ampla atividade contra os microrganismos mais comuns desta doença. Os fármacos são administrados diretamente no canal da teta e/ou por sistêmica. Os tratamentos com antimicrobianos são realizados durante o período seco como terapia preventiva, ou durante o período de lactação como terapia curativa. O leite produzido por animais tratados pode conter resíduos do medicamento. A presença de resíduos de antimicrobianos no leite constitui um risco para a saúde pública devido ao fenômeno de múltipla resistência, bem como uma causa de perdas econômicas, considerando a fabricação de queijo e iogurte, entre outros derivados lácteos. A proposta deste estudo foi avaliar alguns fatores que contribuem para a ocorrência de resíduos em vacas tratadas além do período recomendado para descarte. Os fatores avaliados foram: fisiológico, como a produção leiteira; clínico, como a mastite e farmacológico como a via de administração e o fármaco utilizado. Foi usado um teste comercial para a detecção de resíduos (Delvotest®) por inibição microbiológica. Entre os fatores estudados, foi demonstrada a influência da produção leiteira, ou seja, animais com produção leiteira maior do que 20L/dia apresentaram menor ocorrência de resíduo (39,5%), quando comparado com aqueles com produção menor do que 20L/dia (70,7%) e a diferença foi significante (P < 0,0001). Entre os fatores clínicos foi determinado que a presença e intensidade do processo inflamatório contribuem para a ocorrência de resíduos. Deste modo, entre os quartos com mastite clínica tratados o nível de resíduo foi 47,7%, os quartos com mastite subclínica tratados apresentaram 34,9% e os controles 9,5% (quartos sem mastite tratados) e a diferença entre os três grupos foi significante (P = 0,0381, P = 0,0008, P = 0,0209). Ao se comparar a ocorrência de resíduos no leite de quartos tratados durante a lactação (41,9%) com os resíduos nos quartos que receberam a terapia de vaca seca (23,2%) foi observado um maior nível entre os grupos tratados durante a lactação e a diferença foi significante (P < 0,0001). Em relação aos fatores farmacológicos, a via de aplicação bem como o grupo farmacológico do antimicrobiano utilizado no tratamento foram demonstradas diferenças estatísticas tanto para os diversos antimicrobianos, quanto para as vias de administração. Um maior nível de resíduo foi observado entre os grupos farmacológicos em quartos tratados por via intramamária com aminoglicosídeos (gentamicina) (66,7%). E o maior nível de resíduo foi observado quando ambas as vias foram utilizadas simultaneamente, tanto para aminoglicosídeos (93,7%), quanto para betalactâmicos (100%). O conhecimento de que o pKa dos antimicrobianos irá determinar diferentes níveis de distribuição nos órgãos e tecidos sustenta a hipótese que a via de administração pode influenciar a presença de resíduos de antimicrobianos no leite. Conseqüentemente, o uso simultâneo das duas vias de administração, uma prática comum, contribuiu também para um alto risco da ocorrência de resíduos de antimicrobianos. Deve-se ressaltar que a redução da presença de resíduos no leite não depende apenas de normas e regulamentos, mas envolve uma orientação aos produtores e aos veterinários para controlar e/ou prevenir os fatores de risco. Assim, os resultados deste estudo irão contribuir para esclarecer alguns aspectos importantes para um melhor entendimento da ocorrência de resíduo no leite além do período recomendado para descarte. / Current mastitis therapy and management practices are base on the administration of antimicrobial agents with high activity against most common mastitis bacterial pathogens. Drugs are administrated directly into the teat canal and/or systemically. Antibiotic treatments are performed during the dry period as preventive therapy, or during the lactating periods as therapeutic cure. Milk produced from treated animals may contain drug residues. The presence of antibiotic residues in milk constitutes a public health risk due to the multi-resistance phenomenon, as well as, a source of economical losses, considering the industries of cheese and yogurts, among others dairy products. The purpose of this study was evaluated some factors that contribute to the occurrence of residues in treated cows beyond the recommended discarded period. The evaluated factors were: physiological, as milk production, clinical, as mastitis and pharmacological, as routes and antimicrobials. It was used a commercial test for residues detection (Delvotest®) by microbiological inhibition. Among the clinical factors it was demonstrated the influence of the milk production, so animals with milk production higher than 20 L/day showed lower occurrence of residues (39.5%), compared to the ones with less than 20 L/day (70.7%) the difference was significant (P<0.0001). Among the clinical factors it was determinated that the presence of inflammatory process and the intensity of it, contributes to the presence of residues. Therefore, among the clinical mastitis treated quartes the level of residues was 47.7%, while the subclinical treated quartes showed 34.9% and, the control ones 9.5% (i.e. treated quartes without mastitis) and the difference among the three groups was significant (P=0.0381, P=0.0008, P=0.0209).Comparing the residues in milk from treated quartes during lactation (41.9%) with the quartes that received the dry cow therapy (23.2%) it was observed a higher level of residues among the groups treated during the lactation and the difference was significant (P<0.0001). Among the pharmacological factors, the routes as well the pharmacological group of the antimicrobials used in the treatment showed statistical differences either among the antimicrobials as well as the administration routes. A high level of residues was observed among pharmacological groups in quartes treated by intramammarian route with aminoglicosides (gentamicin) (66.7%). And, the highest level of residues was observed when both route where used simultaneously, either with aminoglicosides (93.7%) as well as with betalactamics (100%). The knowledge that different pKa among the antimicrobials will determine the level of distribution in different organs and tissues, support the hypothesis that the administration route could influence the presence of residues of antibiotics in milk. Consequently, the simultaneous use of both administration routes, a very usual practice, could also contributes to a higher risk of antimicrobial residue occurrence. To reduce this possibility, it is not only a matter of Regulatory Affairs, but also involves the dairy farmers and veterinarians\' proper orientation about how to avoid and to control the risk factors, therefore, the results of this study will contribute to clarify some important aspects to a better understanding of the occurrence of residues in milk beyond the recommend discard period.

Resumo: Entre os diferentes tipos de patógenos que podem ser transmitidos pelo leite e produtos lácteos, Staphylococcus aureus é um dos mais importantes. Então, torna-se fundamental sua pesquisa em produtos lácteos destinados ao consumo humano. A presente tese investigou 100 amostras de leite do tanque de expansão de 50 fazendas leiteiras no Oeste de Santa Catarina, usando o método de cultivo em Baird-Parker, obtendo 42% de amostras positivas para a presença do agente. A análise das condições de manejo de ordenha não apresentou correlação com a presença do agente nas amostras de leite. A metodologia de referência para detecção de S. aureus recomenda a utilização do ágar Baird-Parker (BP). No entanto, outros meios de cultura podem produzir resultados em um tempo mais curto, como Petrifilm® Staph Express Count System (PSE) e da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR). Assim, este estudo também teve como objetivo comparar a eficiência desta metodologia para a detecção de S. aureus no leite dos tanques. Os resultados mostraram que a PCR - utilizando os primers Sa442- 1 e Sa442-2 - não apresenta limiares de Sensibilidade (53,8), Especificidade (36,5) VPP (23), VPN (69,2), Acurácia (41,0) e Coeficiente de Kappa (-0,067) que justifiquem a sua utilização como método de detecção de S. aureus em amostras de leite de tanque, quando comparado ao cultivo microbiológico em BP. Resultado semelhante foi obtido com o uso do método PSE (100; 14,9; 29,2; 100; 37; 0,083 respectivamente), cuja baixa Especificidade sugeriu incluir também outros estafilococos coagulase-positivos não S. aureus. Investigou-se também a presença de resíduos de antibióticos com Delvotest®. No entanto, não pôde ser estabelecida a correlação entre os resultados dos exames microbiológicos e PCR com os resultados de resíduos de antimicrobianos, devido à ausência desses resíduos nas amostras de leite avaliadas / Abstract: Among the different types of pathogens that can be transmitted by milk and dairy products, Staphylococcus aureus is one of the most important. Then, it becomes fundamental its research in dairy products for human consumption. The present thesis investigated 100 samples of bulk tank milk from 50 dairy farms in the western parto of Santa Catarina, by using the method of cultivation in Baird- Parker, obtaining 42% positive samples to the presence of the agent. The analysis of the management conditions of milking doesn't showed correlaction with the presence of S. aureus in the milk samples. The reference methodology for Staphylococcus aureus detection recommends the use of the Baird-Parker agar (BP). However, others culture media may produce results in a more shorter time, as Petrifilm® Staph Express Count System (PSE) and the Polymerase Chain Reaction (PCR). So, this study also aimed to compare the efficiency of the fore cited methodology for the detection of Staphylococcus aureus in bulk tank milk. The findings showed that PCR - using the primers Sa442-1 e Sa442-2 - doesn't show thresholds of sensitivity (53,8), specificity (36,5), PVP (23), PVN (69,2), Accuracy (41,0) and Kappa Coefficient (-0,067) that justify their use as a method of detection of S. aureus in bulk tank milk samples, when compared to microbiological cultivation in BP. Similar results were obtained with the use of PSE method (100; 14,9; 29,2; 100; 37; 0,083 respectivelly), whose low threshold of Specificity (14,9) suggested include also other staphylococci coagulase-positive other than S. aureus. In addition, antibiotic residues were investigated with Delvotest®. However, could not be established the correlation between the results of microbiological tests and PCR with the results of antimicrobial residues, due to the absence of these residues in the milk samples evaluated / Orientador: Paulo Francisco Domingues / Coorientador: João Pessoa Araújo Júnior / Banca: Hélio Langoni / Banca: Jose Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Adll Knackfuse Vaz / Banca: Nilson Roberti Benites / Doutor

Submitted by ARTHUR POMBO ALMEIDA null (arthurpombo_mv@hotmail.com) on 2016-02-24T11:32:48Z No. of bitstreams: 1 Almeida, A. P. - dissertação mestrado.pdf: 778761 bytes, checksum: f00e92022ebbb906ef31cb9f42ed714d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-26T17:12:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 almeida_ap_me_bot.pdf: 778761 bytes, checksum: f00e92022ebbb906ef31cb9f42ed714d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T17:12:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 almeida_ap_me_bot.pdf: 778761 bytes, checksum: f00e92022ebbb906ef31cb9f42ed714d (MD5) Previous issue date: 2016-02-15 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo desse estudo foi identificar fatores de risco para casos repetidos de mastite clínica (MC). Duas fazendas foram visitadas mensalmente durante 10 meses. Amostras de leite foram colhidas de todos os casos incidentes de MC. Vacas foram observadas prospectivamente e um caso foi definido quando uma vaca sofreu o segundo caso de MC na mesma lactação. Para cada caso, três controles pareados por dias em lactação foram selecionados aleatoriamente a partir do coorte de vacas que não tiveram MC. Em cada visita, uma série de características do úbere e tetas foram avaliadas durante a ordenha. O tempo mediano até a ocorrência do primeiro caso de MC foi de 84 dias e o intervalo entre o primeiro e segundo casos foi de 39 dias. Distância da teta ao solo, hiperqueratose da extremidade da teta e produção de leite foram associadas individualmente à ocorrência de um caso repetido de MC, mas não permaneceram no modelo multivariável final. Vacas avaliadas como "muito fácil de ordenhar" foram 3,7 vezes mais propensas a sofrerem um caso repetido de MC do que vacas avaliadas como "difícil de ordenhar". Vacas cujos úberes eram posicionados abaixo do jarrete, e de paridade >2, foram 3,6 e 2,5 vezes mais propensas a sofrerem um caso repetido de MC do que aquelas cujo úbere foi posicionado acima do jarrete e vacas de paridade 1, respectivamente. Resultados deste estudo destacam a importância das características das tetas e do úbere como fatores de risco para casos repetidos de CM. / The objective of this study was to identify risk factors for the occurrence of repeated cases of clinical mastitis (CM). Two farms were visited monthly during 10 months. Milk samples were collected from all cases of CM. Cows were observed prospectively and a case was defined when a cow experienced the second case of CM within the same lactation. For each repeated case, three controls matched by days in milk (DIM) were randomly selected from the cohort of cows who did not experience CM. On each visit day, a series of udder and teat characteristics were recorded during milking. The median time to occurrence of the first case of CM was 84 DIM and the median interval between the first and second cases was 39 days. Teat to ground distance, teat-end hyperkeratosis, and milk production were individually associated with the occurrence of a repeated case of CM but did not remain in the final multivariable model. The odds of a repeated case of CM were 3.7 times greater for cows who were “very easy to milk”, as compared to cows who were “difficult to milk”. Cows who had their udders below the hock, and those of parity > 2 were 3.6 and 2.5 times more likely to experience a repeated case of CM, as compared to cows whose udder was positioned above the hock, and cows of parity 1, respectively. Findings of this study highlight the importance of teat and udder characteristics as risk factors for repeated cases of CM. / FAPESP: 2014/12642-0

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-23Bitstream added on 2014-06-13T20:46:15Z : No. of bitstreams: 1 carneiro_dmvf_dr_botfmvz.pdf: 1096976 bytes, checksum: d797cd50d6dfd4ae9ee39278aaf3fdc4 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Entre os diferentes tipos de patógenos que podem ser transmitidos pelo leite e produtos lácteos, Staphylococcus aureus é um dos mais importantes. Então, torna-se fundamental sua pesquisa em produtos lácteos destinados ao consumo humano. A presente tese investigou 100 amostras de leite do tanque de expansão de 50 fazendas leiteiras no Oeste de Santa Catarina, usando o método de cultivo em Baird-Parker, obtendo 42% de amostras positivas para a presença do agente. A análise das condições de manejo de ordenha não apresentou correlação com a presença do agente nas amostras de leite. A metodologia de referência para detecção de S. aureus recomenda a utilização do ágar Baird-Parker (BP). No entanto, outros meios de cultura podem produzir resultados em um tempo mais curto, como Petrifilm® Staph Express Count System (PSE) e da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR). Assim, este estudo também teve como objetivo comparar a eficiência desta metodologia para a detecção de S. aureus no leite dos tanques. Os resultados mostraram que a PCR – utilizando os primers Sa442- 1 e Sa442-2 – não apresenta limiares de Sensibilidade (53,8), Especificidade (36,5) VPP (23), VPN (69,2), Acurácia (41,0) e Coeficiente de Kappa (-0,067) que justifiquem a sua utilização como método de detecção de S. aureus em amostras de leite de tanque, quando comparado ao cultivo microbiológico em BP. Resultado semelhante foi obtido com o uso do método PSE (100; 14,9; 29,2; 100; 37; 0,083 respectivamente), cuja baixa Especificidade sugeriu incluir também outros estafilococos coagulase-positivos não S. aureus. Investigou-se também a presença de resíduos de antibióticos com Delvotest®. No entanto, não pôde ser estabelecida a correlação entre os resultados dos exames microbiológicos e PCR com os resultados de resíduos de antimicrobianos, devido à ausência desses resíduos nas amostras de leite avaliadas / Among the different types of pathogens that can be transmitted by milk and dairy products, Staphylococcus aureus is one of the most important. Then, it becomes fundamental its research in dairy products for human consumption. The present thesis investigated 100 samples of bulk tank milk from 50 dairy farms in the western parto of Santa Catarina, by using the method of cultivation in Baird- Parker, obtaining 42% positive samples to the presence of the agent. The analysis of the management conditions of milking doesn't showed correlaction with the presence of S. aureus in the milk samples. The reference methodology for Staphylococcus aureus detection recommends the use of the Baird-Parker agar (BP). However, others culture media may produce results in a more shorter time, as Petrifilm® Staph Express Count System (PSE) and the Polymerase Chain Reaction (PCR). So, this study also aimed to compare the efficiency of the fore cited methodology for the detection of Staphylococcus aureus in bulk tank milk. The findings showed that PCR – using the primers Sa442-1 e Sa442-2 - doesn't show thresholds of sensitivity (53,8), specificity (36,5), PVP (23), PVN (69,2), Accuracy (41,0) and Kappa Coefficient (-0,067) that justify their use as a method of detection of S. aureus in bulk tank milk samples, when compared to microbiological cultivation in BP. Similar results were obtained with the use of PSE method (100; 14,9; 29,2; 100; 37; 0,083 respectivelly), whose low threshold of Specificity (14,9) suggested include also other staphylococci coagulase-positive other than S. aureus. In addition, antibiotic residues were investigated with Delvotest®. However, could not be established the correlation between the results of microbiological tests and PCR with the results of antimicrobial residues, due to the absence of these residues in the milk samples evaluated

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-09T11:49:13Z No. of bitstreams: 1 Marcia Nieves Carneiro da Cunha.pdf: 873639 bytes, checksum: 110419134a2cc87e1cbcfafbb7b86801 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-09T11:49:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcia Nieves Carneiro da Cunha.pdf: 873639 bytes, checksum: 110419134a2cc87e1cbcfafbb7b86801 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Bovine Mastitis is one of the main diseases that affect the dairy herds in the world and is considered one of the greatest obstacles to their operation profitable. The greatest losses from mastitis are due to the decrease in milk production, depreciation in nutritional quality, treatment cost, cost of veterinary care and laboratory losses in genetic potential. Several microorganisms are cited as agents of bovine mastitis and the species most frequently isolated are Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis and Escherichia coli. The β-lactam antibiotics are important antibacterial agents, but sensitive to β-lactamase enzymes capable of cleaving the β-lactam ring, rendering them inactive. Inhibitors of β-lactamases are an alternative for diseases treatment caused by resistant-penicillin bacteria. This study evaluated the ability to produce β-lactamase inhibitors by 71 actinomycetes isolated from lichens of the Amazonian and its antimicrobial activity using Staphylococcus aureus, penicillin-resistant isolates of bovine mastitis. The selection of actinomycetes that produced β-lactamases inhibitors was performed using the agar block technique against Klebsiella pneumoniae ATCC 29665 and selected actinomycetes were tested against Staphylococcus aureus penicillin resistant. The best producers of β-lactamase inhibitors were Streptomyces sp. DPUA 1542 and Nocardia sp DPUA 1571, which were subjected to submerged cultivation in the study of the growth curve, pH and antimicrobial activity. The largest inhibition zones using S. aureus, were obtained after 96 hours of culture for both Nocardia sp (13.5 and 12.0 mm) and for Streptomyces sp. (8.0 and 14.0 mm) with diffusion-tests on the discs and wells, respectively. Nocardia sp DPUA 1571 was used in the production of inhibitors of β-lactamases by factorial design where the influence of three variables: concentrations of carbon source (0.5, 1.0 and 1.0%), concentrations of nitrogen source (1.0, 2.5 and 4.0%) and pH (6.0, 6.5 and 7.0) were evaluated. The production carried out in 250mL flasks containing 100mL of culture medium MS-2 modified according to the experimental design, the flasks were incubated in an orbital shaker (200 rpm) at 28 ° C for 120 hours and each 24 hours, aliquots of 5 mL were withdrawn and centrifuged at 5000 rpm for 20 minutes at 4 ° C for the study of biological activity and dry weight. The biological activity of the liquid assay was performed using the diffusion-tests on the discs and wells, the best cultive conditions (test 3) with concentration of carbon source of 1.0% concentration of the soy bean flour 1% and pH 6,0, were obtained from the inhibition of up to 22mm diameter test against microorganisms used. The results showed that the actinomycetes are a promising source of β-lactamase inhibitors, demonstrated the potential application to pharmaceutical industry. / A mastite bovina é uma das principais enfermidades que acometem os rebanhos leiteiros no mundo, sendo considerada um obstáculo à sua exploração lucrativa. As maiores perdas causadas pela mastite são devidas à diminuição na produção de leite, depreciação na qualidade nutritiva, custo de tratamento, custo de atendimento veterinário e laboratorial e perdas no potencial genético. Vários microorganismos são citados como agentes etiológicos da mastite bovina sendo que as espécies mais frequentemente isoladas são Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli. Os antibióticos β-lactâmicos são importantes agentes antibacterianos, porém sensíveis às enzimas β-lactamases, capazes de clivar o anel β-lactâmico, tornando-os inativos. Os inibidores de β-lactamases são uma alternativa para o tratamento de doenças causadas por bactérias resitentes à penicilina. Neste estudo foi avaliada a capacidade de produzir inibidores de β-lactamases por 71 actinomicetos isolados de liquens da Região Amazônica e sua atividade antimicrobiana utilizando Staphylococcus aureus, resistentes à penicilina, isolados de mastite bovina. A seleção dos actinomicetos que produziram inibidores de β-lactamases foi realizada através da técnica de bloco de gelose contra Klebsiella pneumoniae ATCC 29665 e os actinomicetos selecionados foram testados contra Staphylococcus aureus resistentes. Os melhores produtores de inibidores de β-lactamases foram Streptomyces sp. DPUA 1542 e Nocardia sp DPUA 1571, os quais foram submetidos a cultivo submerso para o estudo da curva de crescimento, pH e atividade antimicrobiana. Os maiores halos de inibição, utilizando S. aureus, foram obtidos após 96 horas de cultivo tanto para Nocardia sp (13,5 e 12,0 mm) como para Streptomyces sp. (8,0 e 14,0 mm) com os testes-difusão nos discos e poços, respectivamente. Nocardia sp DPUA 1571 foi utilizado na produção de inibidores de β-lactamases por planejamento fatorial onde a influencia de três variáveis foi avaliada: concentrações da fonte de carbono (0,5, 1,0 e 1,0%), concentrações de fonte de nitrogênio (1,0, 2,5 e 4,0%) e pH (6,0, 6,5 e 7,0). A produção ocorreu em Erlenmeyers de 250mL contendo 100mL do meio de cultivo MS-2 modificado de acordo o modelo experimental, os frascos foram incubados em agitador orbital (200 rpm) a 28°C por um período de 120 horas e a cada 24 horas, alíquotas de 5mL foram retiradas e centrifugadas a 5.000 rpm por 20 minutos a 4ºC, para a determinação da atividade biológica e peso seco. A atividade biológica do líquido metabólico foi realizada através da técnica de difusão em disco e poço, nas melhores condições de cultivo (ensaio 3) com concentração da fonte de carbono de 1,0%, concentração do filtrado de soja de 1% e o pH 6,0, foram obtidos halos de inibição de até 22mm de diâmetro frente aos microrganismos teste utilizados. Os resultados permitiram concluir, que os actinomicetos isolados de liquens da Região Amazônica são uma fonte promissora de inibidores de β-lactamases, com potencial para aplicação futura na indústria farmacêutica.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-06T12:22:38Z No. of bitstreams: 1 Elizabeth Sampaio de Medeiros.pdf: 1026668 bytes, checksum: c3f8468fa38781ce0ffddc9e51ab6c38 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-06T12:22:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elizabeth Sampaio de Medeiros.pdf: 1026668 bytes, checksum: c3f8468fa38781ce0ffddc9e51ab6c38 (MD5) Previous issue date: 2008-02-25 / The goal of this research was to evaluate the occurrence and the sensitivity of Staphylococcus spp to antibiotics and disinfectants used in the control of bovine mastitis. Fifteen dairy farms located in the Metropolitan Recife regions (A), Agreste (B) and Zona de Mata (C), of the state of Pernambuco were studied. A total of 1,080 milk samples were collected and submitted to microbiological culture in order to isolate and identify Staphylococcus spp. To study the sensitivity and resistance of Staphylococcus spp to antimicrobials the diffusion disk technique with the following antibiotics was used: amoxiciline (10 mcg), ampiciline (10 mcg), azitromicine (15 mcg), cefquinome (30 mcg), cephalonium (30 mcg), ciprofloxacine (5mcg), cloxacillin (25 mcg), danofloxacine (10 mcg), enrofloxacine (5 mcg), eritromicine (15 mcg),florfenicol (30mcg), gentamicine (10 mcg), penicillin + novobiocine (10 mcg), sulfa (25 mcg) + trimetoprim (5 mcg),tobramicine (10 mcg) e tetraciclina (30 mcg) + neomicine (30 mcg) + bacitracine (10 mcg). For the in vitro study of sensitivity and resistance of S. aureus and Staphylococcus coagulase positive to the disinfectants, the following products were used: iodine (0.5%), chlorine (2.5%), quaternary ammonium (4%), lactic acid and chlorhexidine (2.0%). Of the 1,080 samples analyzed, 740 (68.5%) were positive and 340 (31.5%) negative. From the positive samples, Staphylococcus were isolated in 291 (39.3%). Of these, 170 (58.4%) were classified as coagulase negative Staphylococcus (SCN), 84(28.9%) as Staphylococcus aureus (S. aureus), and 37(12.7%) as coagulase positive Staphylococcus (SCP). The most efficient antibiotic in vitro was the combination between neomicine (98.4%), and bacitracine (99.3%) and tetracycline (89.7%) for regions A, B e C, respectively. The least efficient was ampicillin, which only showed a resistance of 56.5% to the isolates from region A, 72.8% for region B e 71.8% for region C. With respect to the disinfectants, iodine proved to be the most effective for S. aureus and SCP. The least effective was chlorine. Based on the results, it can be concluded with the epidemiological importance of Staphylococcus spp in subclinical mastitis in dairy cows in the regions chosen and the need for periodic evaluation of the antibiotics and disinfectants used to control mastitis. / Objetivou-se com esse trabalho avaliar a ocorrência e a sensibilidade de bactérias do gênero Staphylococcus spp frente aos antibióticos e desinfetantes utilizados no controle das mastites bovinas. Foram estudadas 15 propriedades situadas em municípios da Região Metropolitana do Recife (A), Agreste (B) e Zona da Mata (C) do estado de Pernambuco. Foram coletadas 1080 amostras de leite de vacas com mastite subclínica que foram submetidas ao exame microbiológico para isolamento e identificação dos Staphylococcus spp. Para o estudo da sensibilidade e resistência dos Staphylococcus spp aos antimicrobianos foi empregada a técnica de difusão em discos frente aos seguintes antibióticos: amoxicilina (10 mcg), ampicilina (10 mcg), azitromicina (15 mcg), cefquinome (30 mcg), cephalonium (30 mcg), ciprofloxacina (5mcg), cloxacilina (25 mcg), danofloxacina (10 mcg), enrofloxacina (5 mcg), eritromicina (15 mcg), florfenicol (30mcg), gentamicina (10 mcg), penicilina + novobiocina (10 mcg), sulfa (25 mcg) + trimetoprim (5 mcg), tobramicina (10 mcg) e tetraciclina (30 mcg) + neomicina (30 mcg) + bacitracina (10 mcg). Para o estudo “in vitro” da sensibilidade e resistência dos Staphylococcus aureus e Staphylococcus coagulase positiva aos desinfetantes, foram utilizados o iodo (0,57%), cloro (2,5%), amônia quaternária (4%), ácido lático e clorexidine (2,0%). Das 1080 amostras analisadas, 740 (68,5%) foram positivas ao exame microbiológico e 340 (31,5%) negativas. Das amostras positivas, isolaram-se bactérias do gênero Staphylococcus em 291 (39,3%). Dos 291 isolados, 170(58,4%) foram classificados como Staphylococcus coagulase negativa (SCN), 84(28,9%) como Staphylococcus aureus (S.aureus) e 37(12,7%) como Staphylococcus coagulase positiva (SCP). A melhor eficácia in vitro foi obtida pela associação entre neomicina + bacitracina + tetraciclina com percentuais de 98,4%, 99,3%, 89,7% para as regiões A, B e C respectivamente. O menos eficaz foi a ampicilina que apresentou 56,5% de resistência para os isolados da região A, 72,8% para a região B e 71,8% na região C. Com relação aos desinfetantes, observou-se que o iodo foi o mais eficaz para os S. aureus e SCP e o menos eficaz foi o cloro. Conclui-se com este estudo a importância epidemiológica dos Staphylococcus spp nas mastites subclínicas em vacas leiteiras nas regiões estudadas e a necessidade da avaliação periódica dos antibióticos e desinfetantes utilizados no controle da mastite.

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2017-07-26T14:34:03Z No. of bitstreams: 1 2012 - Elaine Concei??o Liporage de Mendon?a.pdf: 3515906 bytes, checksum: ebf489151f2cd6961ddeeb292cd910a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-26T14:34:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012 - Elaine Concei??o Liporage de Mendon?a.pdf: 3515906 bytes, checksum: ebf489151f2cd6961ddeeb292cd910a7 (MD5) Previous issue date: 2012-03-16 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The use of antibiotic in the control of intramammary infections and in the elimination of its possible sources in dairy farms is an important control measure. However, the inappropriate use of antibiotics can result in the appearance of resistant strains and compromise the efficiency of the treatment. Besides Staphylococcus spp. are among the main pathogens of bovine mastitis, they are often resistant to antibiotics, especially beta-lactamics, mainly by two distinct mechanisms: the production of extracellular enzyme beta-lactamase, encoded by the blaZ gene, and production of PBP2a or PBP2 ' a penicillin-binding protein with low affinity, encoded by the mecA gene. The expression of mecA gene is constitutive or induced by beta-lactamic antibiotics, such as oxacillin and cefoxitin. The mecA gene is inserted into the chromosome through a staphylococcal mobile genetic element, called staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec). The present study evaluated the phenogenotypical resistance profile to betalactam antibiotics of 250 Staphylococcus spp. isolates, using oxacillin and cefoxitin as markers in order to produce data to the knowledge of resistance in dairy farms located in the South-Fluminense and the Metropolitan regions of the State of Rio de Janeiro to support the implementation of measures to control this disease. The assessment of resistance was made through 8 different phenotypic tests and yielded 54 profiles. Disk diffusion and agar screen with oxacillin were used as "gold standard" for the calculation of sensitivity, specificity and prediction once they are recommended by the CLSI veterinarian as standardized tests. Disk diffusion with cefoxitin achieved the best performance in the prediction of oxacillin resistance. Genotypic detection of mecA do not provided any positive isolate, otherwise mecI and mecRI genes were also detected in 11.6% (29/250) of the studied Staphylococcus spp. Four cassette mec types were detected (I, II, III and IV), being type I the most disseminated one. Gene blaZ was detected in 5.2% (13/250) isolates. From these 13 blaZ positive isolates, the whole system comprising blaR1-blaI-blaZ was detected in 23.1% (3/13) isolates / MENDON?A, Elaine Concei??o Liporage. Caracteriza??o fenogenot?pica da resist?ncia antimicrobiana em Staphylococcus spp. isolados de mastites cl?nicas e subcl?nicas em unidades leiteiras de munic?pios do Rio de Janeiro como subs?dio para implementa??o de medidas de controle. 89 p. Disserta??o (Mestrado em Ci?ncias Veterin?rias). Instituto de Veterin?ria, Departamento de Parasitologia Animal, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Serop?dica, RJ, 2012. A utiliza??o de antibi?ticos no controle das infec??es intramam?rias e na elimina??o de prov?veis fontes de infec??o nas fazendas leiteiras se constitui em importante medida de controle. No entanto, o uso inadequado de antibi?ticos no tratamento da doen?a pode gerar o aparecimento de cepas resistentes e comprometer a efici?ncia do tratamento. Bact?rias do g?nero Staphylococcus spp. est?o entre os principais agentes etiol?gicos da mastite bovina e s?o freq?entemente resistentes aos antimicrobianos, em especial aos beta-lact?micos, principalmente por dois mecanismos distintos: a produ??o da enzima extracelular beta-lactamase, codificada pelo gene blaZ, e a produ??o de PBP2a ou PBP2?, uma prote?na ligante de penicilina de baixa afinidade, codificada pelo gene mecA. A express?o do gene mecA ? constitutiva ou induzida por antibi?ticos betalact?micos, como a oxacilina e cefoxitina. O gene mecA est? inserido no cromossomo estafiloc?cico atrav?s de um elemento gen?tico m?vel, denominado cassete estafiloc?cico cromoss?mico mec (SCCmec). O presente estudo avaliou o perfil fenogenot?pico de resist?ncia aos beta-lact?micos em 250 isolados de Staphylococcus spp, utilizando os marcadores oxacilina e cefoxitina, de modo a produzir dados que possam contribuir para o conhecimento da resist?ncia antimicrobiana em algumas propriedades leiteiras das regi?es Sul-Fluminense e Metropolitana do Estado do Rio de Janeiro com o objetivo de subsidiar a implementa??o de medidas de controle dessa enfermidade. A avalia??o da resist?ncia foi feita a partir de 8 diferentes testes fenot?picos, sendo obtidos 54 perfis. Os testes de difus?o em disco simples e ?gar screen com oxacilina foram utilizados como ?padr?o ouro? para os c?lculos dos valores de sensibilidade, especificidade e predi??o por serem preconizados pelo CLSI veterin?rio. O teste de difus?o em disco simples com cefoxitina foi o de melhor desempenho na predi??o da resist?ncia a oxacilina. Na avalia??o genot?pica, n?o foi detectado qualquer isolado positivo para o gene mecA, j? os genes mecI e mecRI foram detectados igualmente em 11,6% (29/250) dos Staphylococcus spp avaliados. Foram detectados os quatro tipos de cassete mec analisados (I, II, III e IV), sendo o tipo I o que teve mais ampla distribui??o entre as regi?es estudadas. Gene blaZ foi detectado em 5,2% (13/250) dos isolados, sendo que nestes, todo o sistema blaZ-blaI- blaR1 foi detectado em 23,1% (3/13) dos isolados.

Foram submetidas a prova do \"California Mastitis Test\"(CMT), 468 vacas leiteiras pertencentes a seis propiedades rurais produtoras de leite tipo B, localizadas na região do Município de Barretos, SP. Das 56 (12,0 por cento ) fêmeas reagentes a esta prova, 48 (1O,3 por cento ) foram confirmadas através do isolamento e identificação do agente etiológico. A elevada concordância (85,71 por cento ) verificada entre, a prova do CMT e o exame bacteriológico, confirma a eficiência desta prova na detecção de transtôrnos da glândula mamária não perceptíveis clínicamente, uma vez que nenhuma das fêmeas analisadas apresentou sinais da enfermidade. A contagem leucocitária e a pesquisa do teor de cloretos efetuadas nas 56 fêmeas reagentes a prova do CMT, apresentaram concordâncias de 87,5 por cento e 50,0 por cento , respectivamente, em relação ao exame bacteriológico. O Staphylococcus aureus foi o agente etiológico mais frequente (52,08 por cento ) nos casos de mastite bovina. O estudo comparativo entre a contagem padrão em placas e a prova da redução do azul de metileno, efetuado nas 56 amostras reagentes a prova do CMT, revelou que 30 (53,57 por cento ) amostras apresentaram tempo de redução não condizente com o número de microrganismos determinado, isto é, tempo de redução menor que 3 l/2 horas e contagem total de microrganismos inferior a 500.000 microrg/ml. Observou-se, ainda, que destas 30 amostras, 26 (86,67 por cento ) apreesentaram contagens leucocitárias superiores a 2.500.000 leucócitos/ml., sugerindo deste modo, uma provável interferência dos leucócitos quando em número elevado, na prova da redução do azul de metileno. O estudo comparativo entre a contagem padrão em placas e a prova da redução do azul de metileno, efetuado nas 30 amostras negativas a prova do CMT, revelou que 27 (90,0 por cento ) amostras apresentaram o tempo de redução condizente com o número de microrganismos determinado, o que confirma a importância de sua utilização na rotina do Serviço de Inspeção. A provãvel interferência dos leucócitos não compromete a eficiência desta prova, pois as variações observadas ocorrem no sentido de abreviar o tempo de redução, sendo muito pequena a probabilidade de aceitação de um produto com o número de microrganismos superior ao permitido pelo Ministério da Agricultura. Dentre as provas utilizadas pelo Serviço de Inspeção na detecção da mastite bovina a nível de Estabelecimentos Industriais a prova de Whiteside foi a que apresentou maior sensibilidade e especificidade, capaz de revelar a presença de leite anormal em rebanhos cuja prevalência desta doença foi igual ou superior a 7,0 por cento das fêmeas ou 1,4 por cento dos quartos analisados. A pesquisa do teor de cloretos apresentou menor sensibilidade e especificidade, incapaz de revelar a presença de leite anormal em todos os rebanhos analisados. Entretanto, este fato não invalida a utilidade de sua aplicação, pois esta prova pode ser de fundamental importância na detecção de fraudes no leite. A prevalência da mastite bovina em até 20,0 por cento das fêmeas leiteiras ou em ate 5,0 por cento dos quartos examinados, não foi suficiente para colocar os quesitos analisados nas amostras de leite, fora dos padrões normais. Acredita-se que estes padrões devam ser objeto de estudos posteriores. / Four-hundred and sixty-eigth milk cows, belonging to six type B milk producing dayry farms, located in the region of Barretos, SP, Brazil were submitted to \"California Mastitis Test\", of the fifty-six (12,0 per cent ) cows positive to the mentioned test, forty eigth (10,31) had the diagnosis confirmed throght isolation and identification of the etiologic agent. High agreement (85,7 per cent ) was obtained between CMT and bacteriologic examination, which confirms the efficiency of CMT in the detection of diseases of the mammary glands, not perceptible by clinical examination, as none the animals examined presented signs of disease. Leucocyte count and determination of chloride level performed on the fifty-six reactors presented agreement of 87,5 per cent and 50,0 per cent , respectively, with bacteriological examination. Staphylococcus aureus was the most frequently isolated bacterium (52,08 per cent of cases). Comparison between total plate count and reductase test, performed on thirty samples negative to CMT, showed that twenty-seven samples (90,0 per cent ) presented a reduction time compatible with the number of microorganisms present, confirming the importance of reductase test regarding inspection. The theoretical interference of leucocytes was not important in practice, as variations observed were abreviation of reduction time, rendering the propability of accepting a product with a number of microorganisms over legal limits very small. Considering tests used by the Inspection Service for detection of bovine mastitis, the Whiteside test presented highest sensivity and specificity, as it was capable of reveling abnormal milk when prevalence was 7,0 per cent and over, considering animals and 1,1 per cent considering quarters. Chloride level presented lower sensitivity and specificity as it was unable to detect abnormal milk in all dairy farms. However it is very important in the detection of frauds. Prevalence of mastitis of up to 20,0 per cent of animals or of 5,0 per cent of quarters was not sufficient to bring the total milk produced below standards.