Bovine mastitis, or inflammation of the mammary gland, has substantial economic and animal welfare implications. A genetic basis for mastitis resistance traits is recognized and can be used to guide selective breeding programs. The discovery of regions of the genome associated with mastitis resistance, and knowledge of the underlying molecular mechanisms responsible, can facilitate development of efficient mastitis control and therapeutic strategies. The objectives of this dissertation research were to identify sites of genetic variation associated with mastitis resistance, and to define the contributions of the milk-secreting epithelial cells to mammary gland immune responses and mastitis resistance. Twenty seven regions of the bovine genome potentially involved in mastitis resistance were identified in Holstein dairy cattle. Additionally, this research demonstrates a role of bovine mammary epithelial cells in mastitis resistance, and provides guidance for the use of an in vitro model for mastitis studies. Primary bovine mammary epithelial cells from mastitis-resistant cows have differential expression of 42 inflammatory genes compared with cells from mastitis-susceptible cows, highlighting the importance of epithelial cells in mastitis resistance. Bovine mammary epithelial cells display both similarities and differences in pro-inflammatory gene expression compared to fibroblasts, and their expression of inflammatory genes is influenced by administration of the enzyme phospholipase A2. The growth potential of milk-derived bovine mammary epithelial cells in vitro can be extended, facilitating their use in mastitis studies, by transfection with a viral protein. Collectively, this research contributes to current knowledge on bovine mastitis resistance and in vitro models.

L’objectif de ce travail a été de caractériser la souche MPEC Escherichia coli P4. Une étude phylogénétique a montré qu’elle appartenait au groupe phylogénétique A de l’espèce E. coli et que son génome “core” se rapprochait de celui de la souche commensale non pathogène E. coli K12 MG1655 appartenant également au groupe A. Une recherche au sein de son génome de gènes codant différents facteurs de virulence connus chez les autres pathotypes de l’espèce E. coli a permis de détecter uniquement la présence du gène traT, codant un facteur de résistance au sérum. Un criblage de quinze loci d’ARNt connus pour accueillir fréquemment des îlots génomiques, effectué au sein de son génome, a révélé, pour sept d’entre eux la présence de telles structures. Le séquençage partiel ou complet des régions aval à ces sept loci a montré la présence systématique de séquences nucléotidiques différentes de celles présentes chez E. coli K12 MG1655. Si l’analyse du contenu de ces îlots n’a pas encore permis d’expliquer directement la virulence d’E. coli P4, leur mise en évidence est une première de ce type au sein du pathotype MPEC et laisse envisager la découverte d’autres régions génomiques spécifiques à ce pathotype, pouvant expliquer son tropisme et sa nature. Par ailleurs, afin d’évaluer le rôle d’E. coli P4 dans la caséinolyse élevée du lait observée lors d’une mammite bovine, une sécrétion apparemment constitutive de quatre protéases extracellulaires a été mise en évidence par zymographie caséines. L’activité caséinolytique de ces enzymes ne semble toutefois pas significative, laissant envisager plutôt un rôle dans la virulence de la souche / The objective of this work was to characterize the MPEC Escherichia coli P4 strain. A phylogenetic study showed that it belongs to the phylogenetic group A of the E. coli species and that its core genome is similar to the one of the commensal non-pathogenic E. coli K12 MG1655 strain which also belongs to the group A. A search in its genome of different genes encoding virulence factors known among other pathotypes of the E. coli species was done and only the traT gene, encoding a serum resistance factor, was detected. A screening of fifteen tRNA loci known for frequently hosting genomic islands, made in its genome, revealed for seven of them the presence of such structures. The partial or complete sequencing of the regions downstream from these seven loci showed the systematic presence of nucleotide sequences different from those present in E. coli K12 MG1655. If the content analysis of these islands does not yet explain the virulence of E. coli P4, their highlighting is the first of this kind in the pathotype MPEC and suggests the discovery of other genomic regions specific to this pathotype, which may explain its tropism and its nature. In addition, to assessing the role of E. coli P4 in milk caseinolysis observed during bovine mastitis, a constitutive secretion of four extracellular proteases was highlighted by casein zymography. However, the caseinolytic activity of these enzymes does not seem significant. This fact may suggest a role in virulence of the strain

Os objetivos do presente estudo foram: a) avaliar a frequência de isolamentos de patógenos causadores de mastite em rebanhos leiteiros comerciais; b) determinar a susceptibilidade antimicrobiana de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. isolados de casos de mastite subclínica c) avaliar o perfil de multirresistência de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. d) Detectar o gene mecA em Staphylococcus spp. resistentes a oxacilina/meticilina; e) avaliar a associação entre as práticas de manejo e tratamento de mastite e a susceptibilidade antimicrobiana de Staphylococcus aureus isolados de rebanhos leiteiros. Foram selecionados para o presente estudo 13 rebanhos leiteiros a partir de um total de 60 rebanhos vinculados a um laticínio da região de Pirassununga/SP. Questionários previamente formulados foram respondidos pelos responsáveis do rebanho para avaliar a associação entre as práticas de manejo e tratamento de mastite e a susceptibilidade antimicrobiana de S. aureus. Após a seleção dos rebanhos e aplicação dos questionários, 1069 amostras de leite compostas foram coletadas durante 24 meses, em quatro períodos para realização de cultura e identificação dos patógenos, testes de susceptibilidade antimicrobiana e detecção do gene mecA. Os testes de susceptibilidade foram realizados em todos os isolados de Staphylococcus spp. e em 50% de Streptococcus spp. selecionados aleatoriamente. Os antimicrobianos testados foram: ampicilina 10 mg; clindamicina 2 &micro;g, penicilina 1 mg; ceftiofour 30 &micro;g; gentamicina 10 mg; sulfatrimetropin 25 &micro;g, enrofloxacina 5 &micro;g; sulfonamida 300 &micro;g, tetraciclina 30 &micro;g; oxacilina 1 mg; cefalotina 30 &micro;g e eritromicina 5 &micro;g. Todos os isolados de Staphylococcus spp. que apresentaram resistência a oxacilina/meticilina foram avaliados quanto à presença do gene mecA. Entre os isolados, Staphylococcus coagulase negativa foi o mais prevalente (28,6%), seguido por S. aureus (27,8%) e Corynebacterium spp. (10,9%). A susceptibilidade antimicrobiana dos isolados de S. aureus foi de 95,23% (eritromicina), 93,33% (cefalotina) e 65,71% (ampicilina). A susceptibilidade antimicrobiana dos isolados de Staphylococcus coagulase negativa (SCN) foi de 93,33% (cefalotina), 89,91% (eritromicina) e 62,03% (ceftiofur). Entre os isolados de Staphylococcus coagulase positiva (SCP), a susceptibilidade antimicrobiana foi de 93,33% (eritromicina), 91,11% (clindamicina e sulfonamida). A susceptibilidade antimicrobiana dos isolados de Streptococcus agalactiae foi de 38,46% (ampicilina) e 50% (sulfatrimetropin) e os isolados de S. dysgalactiae apresentaram susceptibilidade à tetraciclina de 19,44% e a clindamicina de 47,22%. A multirresistência foi maior entre os isolados de SCN (20,3%) e S.aureus (15,7%). Não foi detectado o gene mecA em nenhum dos isolados de Staphylococcus spp. Houve associação entre as variáveis para os seguintes antimicrobianos: a) tratamento de mastite clínica: ampicilina (P = 0,0055), ceftiofur (P = 0,0481), sulfatrimetropin (P= 0,0293), sulfonamida (P = 0,0043) e tetraciclina (P = 0,0058); e envio de amostras para cultura e antibiograma: ampicilina (P=0,0032), tetraciclina (P=<0,0001). Os principais fatores de risco para susceptibilidade antimicrobiana de S. aureus foram o não envio de amostras para cultura e antibiograma para tetraciclina (OR=6.012), penicilina (OR=4.687), eritromicina (OR=3.059) e ampicilina (OR=2.571), tratamento de mastite clínica para ampicilina (OR=2.178), ceftiofur (OR=1.956), gentamicina (OR=1.668), oxacilina (OR= 1.132) e penicilina (OR= 1.261) e tratamento de vaca seca para enrofloxacina (OR=2.111) e tetraciclina (OR=2.075). Os microrganismos mais frequentemente isolados foram Staphylococcus coagulase negativa e S. aureus. Os testes de susceptibilidade realizados para as espécies de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. apresentaram alta susceptibilidade para a maioria dos antimicrobianos testados. Com exceção de Streptococcus agalactiae para ampicilina e sulfatrimetropin e os isolados de S. dysgalactiae para tetraciclina e clindamicina. A maioria dos Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. não apresentaram perfil de multirresistência. Nenhum dos isolados de Staphylococcus spp. fenotipicamente resistentes a oxacilina/meticilina apresentaram o gene mecA. O maior fator de risco associado à susceptibilidade de S. aureus foi em relação à tetraciclina, penicilina, eritromicina e ampicilina para o não envio de amostras para cultura e antibiograma. Dois fatores de risco importantes identificados foram relacionados à ampicilina, ceftiofur, gentamicina, oxacilina e penicilina para o tratamento de mastite clínica e à enrofloxacina e tetraciclina para o tratamento de vaca seca. / The aims of this study were: a) to evaluate the frequency of mastitis pathogens in commercial dairy herds, b) to determine the antimicrobial susceptibility of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. isolated from subclinical mastitis c) to evaluate the profile of multidrug resistance of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. d) to detect the mecA gene in Staphylococcus spp. resistant to oxacillin / methicillin, e) to evaluate the association between management practices and treatment of mastitis, and antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus isolates from dairy herds. Thirteen dairy herds were selected from a total of 60 dairy farms in the region of Pirassununga / SP. Questionnaires formulated previously were answered by dairy farmers to evaluate the association between mastitis treatment practices and antimicrobial susceptibility. A total of 1,069 composite samples of milk from all herds were collected for culture and identification of pathogens, susceptibility testing and mecA gene detection, over 24 months in four periods. The susceptibility tests were performed in all isolates of Staphylococcus spp. and in 50% of Streptococcus spp. randomly selected. The antimicrobials tested were ampicillin 10mg; 2&micro;g clindamycin, penicillin 1mg; ceftiofour 30&micro;g; gentamicin 10mg; sulfatrimetropin 25&micro;g, 5&micro;g enrofloxacin; 300&micro;g sulfonamide, tetracycline 30&micro;g; oxacillin 1mg; 30&micro;g cephalothin and erythromycin 5&micro;g. All Staphylococcus spp. that were resistant to oxacillin/methicillin in the susceptibility tests were investigated for the presence of mecA gene. Among the isolated bacteria, CNS was the most prevalent (28.6%), followed by S. aureus (27.8%) and Corynebacterium spp. (10.9%). The antimicrobial susceptibility of isolates of S. aureus was 95.23% (erythromycin), 93.33% (cephalothin) and 65.71% (ampicillin). The antimicrobial susceptibility of isolates of coagulase-negative Staphylococcus (CNS) was 93.33% (cephalothin), 89.91% (erythromycin) and 62.03% (ceftiofur). Among strains of coagulase positive Staphylococcus (CPS), the antimicrobial susceptibility was 93.33% (erythromycin), 91.11% (clindamycin and sulfonamide). The antimicrobial susceptibility of the strains of Streptococcus agalactiae was 38.46% (ampicillin) and 50% (sulfatrimetropin) and isolates of S. dysgalactiae were susceptible to tetracycline and clindamycin (19.44% to 47.22%). The multidrug resistance was higher among isolates of CNS (20.3%) and Staphylococcus aureus (15.7%). The mecA gene was not detected in any of Staphylococcus spp isolates. There was an association between variables for the following antimicrobials: a) treatment of clinical mastitis: ampicillin (P = 0.0055), ceftiofur (P = 0.0481), sulfatrimetropin (P = 0.0293), sulfonamide (P = 0.0043) and tetracycline (P = 0.0058); and sending samples for culture and antibiogram: ampicillin (P = 0.0032), tetracycline (P = <0.0001). Major risk factors for antimicrobial susceptibility of S. aureus were not submitting samples for culture and antibiogram for tetracycline (OR = 6.012), penicillin (OR = 4.687), erythromycin (OR = 3.059) and ampicillin (OR = 2.571), treatment of clinical mastitis: ampicillin (OR = 2.178), ceftiofur (OR = 1.956), gentamicin (OR = 1.668), oxacillin (OR = 1.132) and penicillin (OR = 1.261); and dry cow therapy: enrofloxacin (OR = 2.111) and tetracycline (OR = 2.075). The most frequent organisms isolated were coagulase negative Staphylococcus and S. aureus. The susceptibility tests performed for the species of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. showed high susceptibility to most antimicrobials tested. With the exception of Streptococcus agalactiae to ampicillin and sulfatrimetropin and isolates of S. dysgalactiae to tetracycline and clindamycin. Most Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. did not show multidrug resistance profile. None of Staphylococcus spp. phenotypically resistant to oxacillin / methicillin showed the mecA gene. The major risk factor associated with susceptibility of S. aureus to tetracycline, penicillin, erythromycin and ampicillin was not sending samples for culture and sensitivity. Two important risk factors have been identified related to ampicillin, ceftiofur, gentamicin, penicillin and oxacillin for treatment of clinical mastitis and enrofloxacin and tetracycline for the treatment of dry cow dry cow therapy.

A resistência bacteriana é responsável perante o fracasso no tratamento de infecções com agentes quimioterápicos. São necessárias novas alternativas para controlar estes micro-organismos. Entre essas alternativas estão plantas utilizadas tradicionalmente na medicina popular. O presente trabalho avaliou a eficiência dos extratos etanólicos e acetonicos de folhas de Cecropia pachystachya e Curatella americana com atividade antibacteriana in vitro em cepas de Staphylococcus aureus isolado de caso de mastite bovina. Os extratos de C. pachystachya e C. americana apresentam MIC de 2,5 mg.mL-1. O composto isolado de C. pachystachya denominado EEB2 apresentou actividade bactericida para uma concentração de 1,25 mg.mL-1. Estes resultados demonstram que os extratos de C. pachystachya e C. americana contém compostos anti-bacterianos. / Bacterial drug resistance is responsible for the failure of the treatment of infection using chemotherapeutic agents. Thus, new approaches are necessary for the control of these microorganisms. Included among these alternatives are several plants that are traditionally used in folk medicine. Therefore, the aim of this study was to evaluate the antibacterial activity of the ethanolic and acetone extracts of leaves of Cecropia pachystachya and Curatela americana in vitro against S. aureus bacteria isolates from cases of bovine mastitis. The extracts from C. pachystachya and Curatela americana had a MIC of 2.5 mg.mL-1. The compound isolated from C. pachystachya called EEB2 showed bactericidal activity at a concentration of 1.25 mg.mL-1. These results demonstrate that the extracts of C. pachystachya and C. americana contains antibacterial compounds.

Staphylococcus spp. é uma das principais causas da mastite bovina, onde o uso de antimicrobianos tem sido comprometido por mecanismos de resistência bacteriana e geração de resíduos que alteram a qualidade e segurança alimentar do leite e derivados. Foi avaliada a atividade in vitro da nisina (NS), do brometo de dioctadecildimetilamônio (DDA) e do complexo NS/DDA contra Staphylococcus spp. resistentes isolados de mastite bovina. A CBM50 da nisina e DDA foi 50 e 4&#956;g/mL, respectivamente, enquanto que a CBM50 do complexo NS/DDA foi 3/2&#956;g/mL, com efeito parcialmente sinérgico. O estudo de time-kill revelou redução de 3 log10 UFC/mL após uma hora de interação entre NS/DDA e a bactéria. A microscopia de fluorescência confirmou uma perda da viabilidade após 6 horas de interação. A interação NS/DDA resultou na formação de nanopartículas (148,5 nm) catiônicas (+8,84 mV) cuja interação com a superfície bacteriana negativa (-27,32 mV) resultou em ação bactericida. NS/DDA pode ser uma alternativa promissora contra Staphylococcus spp. resistentes isolados de mastite bovina. / Staphylococcus spp. is a major cause of bovine mastitis, where the use of antimicrobials has been compromised by bacterial resistance mechanisms and waste generation that change the food quality and safety of milk and dairy products. The in vitro activity antibacterial was evaluated of the nisin (NS), of the dioctadecyldimethylammonium bromide (DDA) and of the NS/DDA complex against drug-resistant Staphylococcus spp. isolated from bovine mastitis. The CBM50 of nisin and DDA were 50 and 4&#956;g/ml, respectively, while the CBM50 NS/DDA complex was 3/2mg/mL, with partially synergistic effect. The time-kill study showed reduction of 3log10 CFU/mL after an hour of interaction between NS/DDA and bacteria. Fluorescence microscopy confirmed a loss of viability after 6h of interaction. NS/DDA interaction resulted in formation of nanoparticles (148.5 nm) cationic (+8.84 mV) which interact with negative bacterial surface (-27.32 mV) resulted in bactericidal activity. NS/DDA may be a promising alternative against drug-resistant Staphylococcus spp. isolated from bovine mastitis.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-09T15:48:50Z No. of bitstreams: 1 Milena da Silva Albuquerque.pdf: 915379 bytes, checksum: dd414d9f832cb823db0efc59b06ce1fb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T15:48:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Milena da Silva Albuquerque.pdf: 915379 bytes, checksum: dd414d9f832cb823db0efc59b06ce1fb (MD5) Previous issue date: 2014-12-17 / The objective of this work was to investigate the occurrence of encoding staphylococcal enterotoxin (sea, seb, sec and seg) genes and the toxin gene 1 of Toxic Shock Syndrome (tst) from Staphylococcus aureus, coming from mastitis cases bovine in the micro region of Garanhuns, State of Pernambuco. 93 isolates from Staphylococcus aureus were analyzed, which were obtained from milk samples from cows with clinical mastitis and subclinical from 17 properties in 11 municipalities of the Micro Region of Garanhuns, State of Pernambuco. For the molecular characterization of the species Staphylococcus aureus, one of the Polymerase Chain Reaction (PCR) was performed in order to identify the presence of the nuc gene, and to the molecular characterization of enterotoxins, and Staphylococcal toxin Toxic Shock Syndrome. Specific genes were identified: sea, seb, sec, seg and tst. 93 genes were analyzed and we observed the presence of enterotoxigenic gene in 20 (21.6%) samples, of which 11 (55.0%) were positive for tst gene, seven (35.0%) for the sec gene two (10.0%) for the seg gene. 20 isolates amplified segments to the presence of the sec, seg and tst genes. 16 of these (80.0%) were positive for only one gene, and four (20.0%) were positive for both genes (tst and sec). 17 properties were studied, of which seven (41.2%) had positive cultures for at least one of the genes sec, seg and tst. This was the first hit record of encoding gene of the toxin of toxic shock syndrome in mastitis cows milk samples in the state of Pernambuco. Since there was a variation in the distribution of sec, seg and tst genes in strains from different property, it can be inferred that there is genotypic variation in S. aureus strains that cause bovine mastitis. / Objetivou-se com este trabalho pesquisar a ocorrência de genes codificadores de enterotoxinas estafilocócicas (sea, seb, sec e seg) e do gene da toxina 1 da síndrome do choque tóxico (tst) a partir de isolados de Staphylococcus aureus procedentes de casos de mastite bovina na microrregião Garanhuns, estado de Pernambuco. Foram analisados 93 isolados de Staphylococcus aureus obtidos a partir de amostras de leite de vacas com mastite clínica e subclínica, provenientes de 17 propriedades localizadas em 11 municípios da microrregião Garanhuns, no estado de Pernambuco. Para a caracterização molecular da espécie Staphylococcus aureus, foi realizada uma Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) visando a identificação pela presença do gene nuc, assim como para a caracterização molecular das Enterotoxinas Estafilocócicas e da toxina da Síndrome do Choque Tóxico. Foram identificados os genes específicos sea, seb, sec, seg e tst. Dos 93 isolados analisados, observou-se a presença de genes enterotoxigênicos em 20 (21,6%) amostras, das quais 11 (55,0%) foram positivas para o gene tst, sete (35,0%) para o gene sec, duas (10,0%) para o gene seg. Dentre os 20 isolados que amplificaram segmentos para a presença dos genes sec, seg e tst, 16 (80,0%) foram positivos apenas para um gene e quatro (20,0%) foram positivos para dois genes (sec e tst). Das 17 propriedades estudadas, sete (41,2%) apresentaram amostras positivas para pelo menos um dos genes sec, seg e tst. Este foi o primeiro registro de ocorrência do gene codificador da toxina da síndrome do choque tóxico em amostras de leite de vacas com mastite no estado de Pernambuco. Como houve uma variação na distribuição dos genes sec, seg e tst nas cepas procedentes de diferentes propriedades, pode-se inferir que há uma variação genotípica nas cepas de S. aureus que causam mastite bovina.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-08Bitstream added on 2014-06-13T21:05:07Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_lm_dr_jabo.pdf: 458853 bytes, checksum: 0406f864aa66f98b313ad2405eae5c45 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Entre agosto de 2005 e dezembro de 2006, foram obtidas 245 estirpes de Staphylococcus aureus isoladas de amostras de leite de vacas com mastite, de óstios papilares da glândula mamária e de insufladores da ordenhadeira, procedentes de um rebanho bovino produtor de leite tipo B. Com a finalidade de monitorar as estirpes de S. aureus envolvidas em casos de mastite bovina por meio da verificação da relação epidemiológica existente entre as estirpes isoladas, especialmente com vistas aos sítios de localização e vias de transmissão, as estirpes foram submetidas à Eletroforese de Campo Pulsado (PFGE), à amplificação das seqüências codificadoras (sea, seb, sec, sed e tst), por intermédio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), e suas sensibilidades in vitro a 12 antimicrobianos foram determinadas. Os resultados obtidos revelaram 51 diferentes perfis, sendo que a resistência à penicilina foi a predominante entre as 179 (73,1%) estirpes de S. aureus, quando considerada de forma particular (54,8%) ou em conjunto (29,4%). As 66 (26,9%) estirpes restantes foram sensíveis aos 12 antimicrobianos testados e a vancomicina foi o único princípio ativo que se mostrou eficiente a 100% das estirpes testadas. A PFGE revelou 39 pulsotipos distintos, dos quais 25 (64,1%) encontraram-se distribuídos nas 137 (55,9%) estirpes obtidas do leite. Dentre estas, 92 (67,1%) estirpes apresentaram resistência a um ou mais antimicrobianos e foram agrupadas em 22 (88,0%) pulsotipos distintos. Foi observado, também, por meio da PFGE, que nenhum pulsotipo foi isolado por mais de três colheitas consecutivas e que somente o pulsotipo 29 foi identificado em 5 (31,2%) colheitas... / Two hundred and forty five Staphylococcus aureus strains were isolated between August of 2005 and December of 2006 from samples collected from a type-B milk-producing herd. Samples encompassed milk collected directly from mastitic cows, papillas osteuns of mammary glands, and milking machine cups. Samples were subjected to Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) to monitor for the strains of S. aureus and to determine epidemiologic relationships between the isolated strains, taking into account the different precedence of strains. PFGE was used to monitor the presence of specific coding sequences (i.e., sea, seb, sec, sed, and tst) in the milk samples using polymerase chain reaction (PCR) amplification. Moreover, sensitivity of strains to 12 different antibiotics was determined in vitro. Results revealed the presence of 51 different PFGE profiles of S. aureus in the samples, and highlighted 179 (73.1%) penicillin resistant strains. Nonetheless, the 66 (26.9%) other strains were sensitive to all 12 antibiotics tested, and vancomycin was the only antibiotic effective against all tested strains. PFGE also revealed 39 distinct peaks with 25 of them (64.1%) being present in 137 (55.9%) strains obtained from milk. Of these strains, 92 (67.1%) were resistant to one or more antibiotics, and were further grouped in 22 (88.0%) distinct peaks. Additionally, PFGE revealed the presence of no distinct peaks in samples from three consecutive collection times, and that peak 29 was the only one identified in 5 collection times (31.2%). Importantly, PGFE also indicated that in the periods A and H, which corresponded to 12.5% of the total time points, the isolated strains from one collection day (samples from all 3 sources) all had the peaks 2 and 12, respectively...(Complete abstract, click electronic access below)

As plantas medicinais são utilizadas pelo homem desde os primórdios da humanidade. O conhecimento com relação a sua identificação e uso estabelecido pelo processo de experimentação, acertos e erros, é um patrimônio cultural dos povos. Com base nos princípios estabelecidos pela Organização Mundial da Saúde, o resgate destes conhecimentos está sendo valorizado, através das etnociências. As práticas tradicionais em veterinária seguem o mesmo caminho. O novo paradigma para a produção agropecuária, trazido pela agroecologia, integra os conhecimentos tradicionais e aqueles ditos “modernos” para a moldagem de uma agricultura social, cultural, econômica e ecologicamente sustentável. Com base nesses parâmetros, este trabalho teve por objetivo avaliar plantas medicinais indicadas para uso como anti-séptico/desinfetante em situações-problema em produção animal, mais especificamente, em mastite bovina e dermatofitose, por uma comunidade agrícola. A coleta de informações referente ao uso das plantas foi realizada junto a COOPAVA, Cooperativa de Agricultores Assentados da reforma agrária, localizada no Município de Piratini, RS, utilizando método participativo, na moldagem de um planejamento de produção de leite em transição agroecológica. As plantas selecionadas foram Baccharis trimera, Bidens pilosa, Eucalyptus sp., Polygonum hydropiper e Tagetes minuta. Utilizaram-se extratos hidroalcoólicos (EHA) e decoctos (DEC) das plantas selecionadas – soluções desinfetantes - para avaliar: atividade antibacteriana frente a microrganismos causadores de mastite, utilizando o método da microdiluição serial em placas para estabelecer atividade inibidora e inativadora dos extratos; concentração inibitória mínima para dermatófitos de interesse em saúde animal e humana; e a cinética de inativação de microrganismos relacionados a mastite bovina pelas soluções desinfetantes. Essas soluções desinfetantes foram confrontadas com 25 amostras bacterianas, sendo nove Staphylococcus coagulase positiva, sete Staphylococcus coagulase negativa, oito Streptococcus spp. e uma Pseudomonas aeruginosa. Todos os extratos avaliados apresentaram ação antibacteriana. O EHA de Eucalyptus foi o que apresentou maior atividade inibidora bacteriana no conjunto do experimento. Quanto à inativação, o EHA de Eucalyptus, o EHA B. trimera e o DEC T. minuta apresentaram os melhores resultados, inclusive atuando frente a P. aeruginosa, embora em concentração mais alta do que frente às outras bactérias (p<0,05). Obteve-se atividade antifúngica de todos os EHA frente a todos os isolados avaliados, variando a CIM de 5,5% para EHA de T. minuta a 19,5% para EHA de B. trimera. Os decoctos de B. trimera e P. hydropiper foram os únicos ativos contra esses fungos. Os três EHA testados quanto a tempo de inativação tiveram bom desempenho frente a bactérias Gram positivas, com eficácia semelhante ao controle clorexidina a 0,18% (p>0,05) frente a S. agalactiae, com e sem a presença de matéria orgânica e, com exceção do EHA de B. trimera, frente a S. aureus sem matéria orgânica. Os decoctos tiveram desempenho inferior, apresentando bom desempenho somente frente a S. agalactiae. O desinfetante controle foi o mais eficaz quando confrontado com P. aeruginosa. Todas as soluções desinfetantes foram sensíveis à matéria orgânica. Pode-se concluir que as plantas medicinais com indicativo anti-séptico/desinfetante podem ser úteis em sistemas de produção agroecológicos, em situações-problema relacionadas aos agentes testados. / Since these ancient times, the succeeding civilization all over the world had used medicinal plants, in human and animal healthcare. The knowledge about it has evolutioned through trial and error methods and it’s the cultural patrimony of the peoples. In consonance to the WHO strategies, the identification and valorization this knowledge is on, by the ethno sciences. Agroecology is the new paradigm that it focuses on a systemic vision to integrate of the traditional and non-traditional practices. Two can complement one another to achieve a cultural, economic, ecologic and social sustainable livestock health care delivery system. This purpose of the present study was to evaluable “in vitro” activity of medicinal plants used to disinfectant/antiseptic in practice livestock to bovine mastitis and dermatophytes disease. The informants were familiar agriculturist on the agrarian reform seatment, on Piratini city, RS, as previous report, using participatory approaches. The five medicinal plants were selectioned: Baccharis trimera, Bidens pilosa, Eucalyptus sp., Polygonum hydropiper and Tagetes minuta. Antibacterial activity (bacteriostatic or bactericidal) of the hidroalchoolic (EHA) or decoction (DEC) extracts were determined through the serial dilution method in the multiple tube system in the microplate against 25 contagious bovine mastitis bacterial – nine Staphylococcus coagulase positive, seven Staphylococcus coagulase negative, eight Streptococcus spp and a P. aeruginosa. Minimal Inhibitory Concentration for six samples of dermatophytes was determined by dilution methods in the microplates. To test antibacterial kinetic, EHA and DEC of B. trimera, Eucalyptus and T. minuta were confronted to S. aureus, S. agalactiae and P. aeruginosa in different times and with or without organic load, included chlorhexidine 0.18% by control. All extracts were antibacterial. EHA from leaves of Eucalyptus sp. was the most bacteriostatic effective, and the same extract plus EHA B. trimera and DEC T. minuta were the best bactericidal. P. aeruginosa was more resistant that Gram positive bacterial (p<0.05). All EHA inhibited all dermatophytes valued. MIC was between 5.5% to EHA T. minuta and 19.5% to EHA B. trimera. DEC B. trimera and P. hydropiper were effective. In the kinetics experiment, the three EHA exhibited a good activity against Gram positive organisms. It were as strong to control, in presence or absence to organic load against S. agalactiae, and excluded EHA B. trimera, against S. aureus without organic load. The DECs were fewer effective. It was acted against S. agalactiae only. Chlorexidine was the best against P. aeruginosa. All disinfection solutions were sensible to organic load. The conclusion were that medicinal plants used ethnoknowledge system can to improved livestock health in the agroecologic systems, related to the studied transmitted agents.

As plantas medicinais são utilizadas pelo homem desde os primórdios da humanidade. O conhecimento com relação a sua identificação e uso estabelecido pelo processo de experimentação, acertos e erros, é um patrimônio cultural dos povos. Com base nos princípios estabelecidos pela Organização Mundial da Saúde, o resgate destes conhecimentos está sendo valorizado, através das etnociências. As práticas tradicionais em veterinária seguem o mesmo caminho. O novo paradigma para a produção agropecuária, trazido pela agroecologia, integra os conhecimentos tradicionais e aqueles ditos “modernos” para a moldagem de uma agricultura social, cultural, econômica e ecologicamente sustentável. Com base nesses parâmetros, este trabalho teve por objetivo avaliar plantas medicinais indicadas para uso como anti-séptico/desinfetante em situações-problema em produção animal, mais especificamente, em mastite bovina e dermatofitose, por uma comunidade agrícola. A coleta de informações referente ao uso das plantas foi realizada junto a COOPAVA, Cooperativa de Agricultores Assentados da reforma agrária, localizada no Município de Piratini, RS, utilizando método participativo, na moldagem de um planejamento de produção de leite em transição agroecológica. As plantas selecionadas foram Baccharis trimera, Bidens pilosa, Eucalyptus sp., Polygonum hydropiper e Tagetes minuta. Utilizaram-se extratos hidroalcoólicos (EHA) e decoctos (DEC) das plantas selecionadas – soluções desinfetantes - para avaliar: atividade antibacteriana frente a microrganismos causadores de mastite, utilizando o método da microdiluição serial em placas para estabelecer atividade inibidora e inativadora dos extratos; concentração inibitória mínima para dermatófitos de interesse em saúde animal e humana; e a cinética de inativação de microrganismos relacionados a mastite bovina pelas soluções desinfetantes. Essas soluções desinfetantes foram confrontadas com 25 amostras bacterianas, sendo nove Staphylococcus coagulase positiva, sete Staphylococcus coagulase negativa, oito Streptococcus spp. e uma Pseudomonas aeruginosa. Todos os extratos avaliados apresentaram ação antibacteriana. O EHA de Eucalyptus foi o que apresentou maior atividade inibidora bacteriana no conjunto do experimento. Quanto à inativação, o EHA de Eucalyptus, o EHA B. trimera e o DEC T. minuta apresentaram os melhores resultados, inclusive atuando frente a P. aeruginosa, embora em concentração mais alta do que frente às outras bactérias (p<0,05). Obteve-se atividade antifúngica de todos os EHA frente a todos os isolados avaliados, variando a CIM de 5,5% para EHA de T. minuta a 19,5% para EHA de B. trimera. Os decoctos de B. trimera e P. hydropiper foram os únicos ativos contra esses fungos. Os três EHA testados quanto a tempo de inativação tiveram bom desempenho frente a bactérias Gram positivas, com eficácia semelhante ao controle clorexidina a 0,18% (p>0,05) frente a S. agalactiae, com e sem a presença de matéria orgânica e, com exceção do EHA de B. trimera, frente a S. aureus sem matéria orgânica. Os decoctos tiveram desempenho inferior, apresentando bom desempenho somente frente a S. agalactiae. O desinfetante controle foi o mais eficaz quando confrontado com P. aeruginosa. Todas as soluções desinfetantes foram sensíveis à matéria orgânica. Pode-se concluir que as plantas medicinais com indicativo anti-séptico/desinfetante podem ser úteis em sistemas de produção agroecológicos, em situações-problema relacionadas aos agentes testados. / Since these ancient times, the succeeding civilization all over the world had used medicinal plants, in human and animal healthcare. The knowledge about it has evolutioned through trial and error methods and it’s the cultural patrimony of the peoples. In consonance to the WHO strategies, the identification and valorization this knowledge is on, by the ethno sciences. Agroecology is the new paradigm that it focuses on a systemic vision to integrate of the traditional and non-traditional practices. Two can complement one another to achieve a cultural, economic, ecologic and social sustainable livestock health care delivery system. This purpose of the present study was to evaluable “in vitro” activity of medicinal plants used to disinfectant/antiseptic in practice livestock to bovine mastitis and dermatophytes disease. The informants were familiar agriculturist on the agrarian reform seatment, on Piratini city, RS, as previous report, using participatory approaches. The five medicinal plants were selectioned: Baccharis trimera, Bidens pilosa, Eucalyptus sp., Polygonum hydropiper and Tagetes minuta. Antibacterial activity (bacteriostatic or bactericidal) of the hidroalchoolic (EHA) or decoction (DEC) extracts were determined through the serial dilution method in the multiple tube system in the microplate against 25 contagious bovine mastitis bacterial – nine Staphylococcus coagulase positive, seven Staphylococcus coagulase negative, eight Streptococcus spp and a P. aeruginosa. Minimal Inhibitory Concentration for six samples of dermatophytes was determined by dilution methods in the microplates. To test antibacterial kinetic, EHA and DEC of B. trimera, Eucalyptus and T. minuta were confronted to S. aureus, S. agalactiae and P. aeruginosa in different times and with or without organic load, included chlorhexidine 0.18% by control. All extracts were antibacterial. EHA from leaves of Eucalyptus sp. was the most bacteriostatic effective, and the same extract plus EHA B. trimera and DEC T. minuta were the best bactericidal. P. aeruginosa was more resistant that Gram positive bacterial (p<0.05). All EHA inhibited all dermatophytes valued. MIC was between 5.5% to EHA T. minuta and 19.5% to EHA B. trimera. DEC B. trimera and P. hydropiper were effective. In the kinetics experiment, the three EHA exhibited a good activity against Gram positive organisms. It were as strong to control, in presence or absence to organic load against S. agalactiae, and excluded EHA B. trimera, against S. aureus without organic load. The DECs were fewer effective. It was acted against S. agalactiae only. Chlorexidine was the best against P. aeruginosa. All disinfection solutions were sensible to organic load. The conclusion were that medicinal plants used ethnoknowledge system can to improved livestock health in the agroecologic systems, related to the studied transmitted agents.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-22Bitstream added on 2014-06-13T18:55:48Z : No. of bitstreams: 1 nader_tt_me_jabo.pdf: 599172 bytes, checksum: 763899c02a69274b2e4175a8a9dc4707 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial de atividade antimicrobiana in vitro dos extratos de algumas plantas endêmicas do Cerrado, tais como Baccharis dracunculifolia, Cochlospermum regium, Croton antisyphiliticus, Eugenia dysenterica e Lippia sidoides, frente a estirpes de Staphylococcus aureus isoladas de leite de vacas com mastite e de fontes de contaminação envolvidas na epidemiologia da mastite bovina. Os extratos foram preparados a partir das partes aéreas e sistema radicular das plantas, utilizando os solventes metanol, hexano e clorofórmio, por processo de maceração estática. Para avaliação da atividade antimicrobiana foram aplicadas as técnicas de difusão em disco, microdiluição em caldo para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (MBC). Dentre os extratos que apresentaram atividade bacteriostática, o extrato hexânico de Baccharis dracunculifolia destacou-se com CIM de 10 mg/mL sobre 45% das estirpes. Enquanto o extrato clorofórmico de Croton antisyphiliticus, com atividade bactericida, inibiu a multiplicação de 100% das estirpes de Staphylococcus aureus, com CIM variando entre 1,03mg/mL e 4,15 mg/mL. O estudo demonstra ainda, que tais extratos vegetais apresentaram resultados superiores aos obtidos com a gentamicina, princípio ativo muito utilizado no combate à mastite bovina, reforçando a importância das plantas medicinais como recurso terapêutico. / The purpose of this study was to assess the potential of in vitro antimicrobial activity of the extracts of certain endemic plants in the Brazilian Cerrado, such as Baccharis dracunculifolia, Cochlospermum regium, Croton antisyphiliticus, Eugenia dysenterica and Lippia sidoides, against strains of Staphylococcus aureus isolated from the milk of cows with mastitis and sources of contamination involved in the epidemiology of bovine mastitis. The extracts were prepared by using aerial parts and radicular systems of the plants, using methanol, hexane and chloroform as solvents, extracted with static maceration. Techniques of disc diffusion, broth microdillution for the determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Bactericidal Concentration (MBC) were used for the assessment of antimicrobial activity. Among the extracts with bacteriostatic activity, the hexanic extract of Baccharis dracunculifolia had a 10 mg/mL MIC against 45% of the strains, whereas the chloroformic extract of Croton antisyphiliticus, with bactericidal activity, inhibited the multiplication of 100% of the Staphylococcus aureus strains, whose MIC varied between 1.03mg/mL and 4.15 mg/mL. The study also demonstrated that the results of these plant extracts are superior to the results obtained with gentamicin, an active principle commonly used against bovine mastitis, reinforcing the importance of medicinal plants as a therapeutic resource.