Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA12MA087.pdf: 1147805 bytes, checksum: 749e6e38b1399033aef2801d2ef1b25f (MD5) Previous issue date: 2012-03-09 / The bovine mastitis is a disease that causes more losses in dairy farming, significantly reducing the production and milk quality. A causative agent of mastitis is the Corynebacterium sp. , especially the specie Corynebacterium bovis, but their role in intramammary infection is not yet defined, since some studies consider this agent, a minor pathogen of the mammary gland, causing no change in production and composition milk, though others, realize the large capacity of Corynebacterium sp. in causing mastitis, placing it as a risk factor for the development of the activity. Meet the microbiological profile of milk samples, the specific action of the agents in the mammary gland and its effect on milk quality, are of great importance in mastitis control programs. This study aimed to determine the prevalence of Corynebacterium sp. n the milk of cows from dairy herds located in five Brazilian states and to correlate the presence of this agent with the management of the milking herd and the somatic cell count of bulk tank milk and milk of individual cows. We conducted a longitudinal study from January 2010 to July 2011, in dairy herds located in the states of SC, PR, RS, MG and PE, which were performed in four colletions (at six months intervals) of milk samples in each herd. A questionnaire was applied in each farm to obtain data and information on the practices of milking herds, such as teat disinfection and teat drying, which may influence the occurrence of mastitis by Corynebacterium sp. Of the 4949 milk samples analyzed, submitted to microbiological culture, 666 (13,46%) had isolation of Corynebacterium sp. Minas Gerais was the state with the highest pravelence off this agent (21,07%) compared to others states. Risk factors associated with the management of milking, such as teat disinfection before and after milking and dry cow treatment showed no statistically significant influence on the prevalence of Corynebacterium sp. in milk samples analyzed. The isolation of Corynebacterium sp. in milk samples did not affect the SCC of bulk tank milk of the herds, but in the CMT, the presence of this agent caused variations in the number of positive mammary quarters and the degree of score in their test. Therefore Corynebacterium sp. is a causative agent of mastitis of great relevance not only by the frequency of isolation observed in this study, but also by the effect of CMT in individual cows and consequently in the herd SCC / A mastite bovina é a enfermidade que mais causa prejuízos na pecuária leiteira, reduzindo, significativamente, a produção e qualidade do leite. Um dos agentes causadores da mastite é o Corynebacterium sp., principalmente a espécie Corynebacterium bovis, porém seu papel na infecção intramamária ainda não é definido, pois alguns estudos consideram este agente, um patógeno menor da glândula mamária, sem causar alteração da produção e composição do leite, entretanto outros, constatam a grande capacidade do Corynebacterium sp. em causar mastite, colocando-o como um fator restritivo para o desenvolvimento da atividade leiteira. Conhecer o perfil microbiológico de amostras de leite, a ação específica dos agentes na glândula mamária e seu efeito na qualidade do leite, são de grande relevância em programas de controle da mastite. Este estudo teve como objetivos determinar a prevalência de Corynebacterium sp. no leite de vacas de rebanhos leiteiros localizados em cinco estados brasileiros e, correlacionar a presença deste agente com o manejo de ordenha dos rebanhos e com a contagem de células somáticas do leite do tanque e do leite individual das vacas. Foi realizado um estudo longitudinal, de janeiro de 2010 a julho de 2011, em rebanhos leiteiros localizados nos estados de SC, PR, RS, MG e PE, nos quais foram realizadas quatro coletas (semestrais) de amostras de leite em cada rebanho. Foi aplicado um questionário, em cada propriedade, para obter dados e informações sobre o manejo de ordenha dos rebanhos, como a desinfecção pré e pós-ordenha, secagem dos tetos, que possam influenciar na ocorrência de mastite por Corynebacterium sp. Do total de 4949 amostras de leite analisadas, submetidas a cultura microbiológica, 666 (13,46%) apresentaram isolamento de Corynebacterium sp. Minas Gerais foi o estado que apresentou a maior prevalência deste agente (21,07%) comparado aos demais estados. Os fatores de risco associados ao manejo de ordenha das propriedades, como a desinfecção dos tetos pré e pós-ordenha e o tratamento de vaca seca não apresentaram influência estatística significativa na prevalência de Corynebacterium sp. nas amostras de leite analisadas. O isolamento de Corynebacterium sp nas amostras de leite não afetou a CCS do leite do tanque dos rebanhos, porém no CMT, a presença deste agente causou variações no número de quartos positivos e no grau de escore no respectivo teste. Portanto, Corynebacterium sp. é um agente causador de mastite de grande relevância, não só pela freqüência de isolamento observada no presente estudo, mas também pelo efeito no CMT individual das vacas e consequentemente na CCS do rebanho

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCV07MA017.pdf: 1501268 bytes, checksum: 0c5a0b4d77bc053bc7b71daf56488e43 (MD5) Previous issue date: 2007-02-05 / Staphylococcal mastitis causes considerable economic losses to the producer, the milk industry and to the consumers. Staphylococcus aureus is an important cause of bovine mastitis worldwide, and effective preventive or therapeutic alternatives are lacking. The predominance of staphylococcal capsular polysaccharide types 5 and 8 among human isolates from many sources is well documented, but there seems to be a greater variation in the distribution of capsular serotypes among isolates from cattle. This information is important for the rational design of a vaccine for the prevention of staphylococcal mastitis, because surface antigens capsular polysacharides of S. aureus are sorotype-specific immunogens and antibodies to these antigens should be present so that it happens the opsonophagocytic. Of the 256 samples of bovine staphylococci and 56 samples bubaline included in this study, isolated of mastitis milk in Brazil, between 1995 and 2006. They were identified as S. aureus 164 strains of bovine and 27 of bubaline, the other samples were identified as Staphylococcus coagulase-negatives. Sorotyping of the 164 samples of S. aureus isolated of bovine and 27 of bubalino for the technique of colony immunoblot. Capsular types 5 and 8 accounted approximately 70% of the bovine isolates and 85% of the bubaline isolates. Type 8 was significantly more frequent (51,83%), type 5 was less frequent, accounting for 17,07% of the isolates and rest were non-typeables (31,1%). Sorotype 5 was predominant in strains from bubaline sources (62,96%), among which the frequency of the sorotype 8 was of 22,22% and the smallest occurrence it was of non-typeables (14,81%). These results underscore the variability in capsule production by bovine isolates of S. aureus from different geographic regions. Therefore, was observed prevalence antigenic of CP5 and CP8 and that should be considered when of the development of capsular-vaccines for bovine and bubaline mastitis for S. aureus, to be used at national level, because it has direct influence on the efficiency of the same ones / A mastite estafilocócica ocasiona prejuízos consideráveis aos produtores, à indústria leiteira e aos consumidores. O Staphylococcus aureus é a mais importante causa de mastite bovina em todo o mundo, e inexistem alternativas preventivas e terapêuticas efetivamente eficientes para seu controle. A predominância de polissacarídeos capsulares estafilocócicos tipos 5 e 8 em amostras humanas isoladas de diversas origens geográficas é bem documentada, porém, em relação a isso parece existir uma grande variação na distribuição de sorotipos capsulares entre as amostras isoladas de bovinos. Esta informação é importante num projeto racional de uma vacina para prevenção da mastite estafilocócica, pois antígenos polissacarídeos de superfície do S. aureus são imunógenos sorotipo-específicos e, anticorpos para estes antígenos, devem estar presentes para que ocorra a opsonofagocitose. Das 256 amostras de estafilococos bovinas e 56 amostras bubalinas incluídas neste estudo, isoladas de leite mastítico no Brasil, entre 1995 e 2006, foram identificados como S. aureus 164 isolados de bovinos e 27 de bubalinos, as demais amostras foram identificadas como Staphylococcus coagulasenegativos. Foram sorotipificadas as 164 amostras de S. aureus isoladas de bovino e 27 de bubalinos pela técnica de colony immunoblot. Cápsulas tipo 5 e 8 foram encontradas em aproximadamente 70% dos isolados de bovino e 85% dos isolados bubalinos. O tipo 8 foi significativamente mais freqüente (51,83%), o tipo 5 foi o menos freqüente, encontrado 17,07% dos isolados e o restante foram nãotipificáveis (31,1%). O sorotipo 5 foi predominante nas cepas de origem bubalina (62,96%), entre as quais a freqüência do sorotipo 8 foi de 22,22% e a menor ocorrência foi de não-tipificáveis (14,81%). Os resultados ressaltam a variabilidade na produção de cápsula por isolados de S. aureus bovinos de diferentes regiões geográficas. Portanto, observou-se uma prevalência antigênica de CP5 e CP8 e isso deve ser considerado quando do desenvolvimento de vacinas-capsulares contra mastite bovina e bubalina por S. aureus, a ser utilizada a nível nacional, pois tem influência direta sobre a eficiência das mesmas

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Juliana Dias Martins.pdf: 1294689 bytes, checksum: c255ebaebb32633087fe7f7d358cd8e8 (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / The bovine mastitis consists of an inflammation of the mammary gland, with acute to chronic evolution, which occurs when an infectious agent attacks the mammary gland. It is characterized by physical, chemical and sensory alterations of the milk, caused by microorganisms that invade the mammary gland and cause pathological changes in the glandular tissue. Mastitis can be classified according to the form of presentation as clinical or subclinical. Several symptoms are observed in the clinical form of the disease such as the secretion of milk with lumps, pus or watery aspect, and edemaciated stiff and febrile teats and udder. On the other hand, no symptoms can be observed in the mammary gland and milk in subclinical cases. Mastitis is a major cause of economic losses in dairy cattle farms, mainly due to reduced milk production, changes in the composition and increased somatic cell count (CCS). The objective of this study was to evaluate the prevalence of the main bacteria that cause (clinical and subclinical) bovine mastitis, and to check the sensitivity to various antimicrobial agents of clinical mastitis. The agents most frequently isolated from clinical mastitis were Streptococcus uberis and Staphylococcus aureus and the antibiogram demonstrated greater sensitivity and efficacy of the active principles linezolid, amikacin, gentamicin and imipenen regarding the isolated agents. In subclinical mastitis Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis and Staphylococcus sp. Were the agents most frequently identified and that determined the highest mean values of CCS. The average CCS of cows with subclinical mastitis was approximately 743 x 103 cs/mL. The study was conducted in eight dairy farms in the State of Goiás. The results were obtained by frequency analysis. In conclusion, that the results emphasize the importance of assessing the sensitivity profile of microorganisms that cause clinical mastitis in each herd studied allowing greater precision in medication prescription for future cases of clinical mastitis and for dry cow therapy. The use of other techniques such as real time PCR is also important for the detection of the main microorganisms causin subclinical mastitis, which can be indicated as a routine method, due to its specificity, providing a precise bacteriological diagnosis. / A mastite bovina constitui-se num processo inflamatório da glândula mamária, com evolução aguda a crônica; ocorre quando um agente infeccioso agride a glândula mamária. Caracteriza-se por alterações físicas, químicas e sensoriais do leite, provocadas por microrganismo que invadem a glândula mamária e provocam modificações patológicas no tecido glandular. A mastite pode ser classificada quanto à forma de apresentação, em clínica ou subclínica. A forma clínica observa-se vários sintomas como secreção de leite com grumos, pus ou de aspecto aquoso, tetos e úbere apresentando edemaciados, rígidos e febris. Na forma subclínica os sinais na glândula mamária e no leite são inaparentes. A mastite constitui uma das principais causas de perdas econômicas nas explorações de bovinos leiteiros, devido principalmente à redução na produção de leite, alterações na composição e aumento da contagem de células somáticas (CCS). Objetivou-se neste trabalho, avaliar a prevalência das principais bactérias causadoras da mastite bovina (clínica e subclínica), e verificar o perfil de sensibilidade dos agentes a diversos antimicrobianos da mastite clínica. Os agentes mais isolados da mastite clínica foram Streptococcus uberis e Staphylococcus aureus e o antibiograma demonstrou uma maior eficácia dos principios ativos linezolid, amikacina, gentamicina e imipenene, frente aos agentes isolados. Na mastite subclínica Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Staphylococcus sp foram os agentes mais frequentemente identificados e que determinaram maiores valores médios de CCS. A CCS média dos rebanhos com mastite subclínica foi de aproximadamente 743 x 103cel/mL. O estudo foi realizado em oito propriedades leiteiras, localizadas no Estado de Goiás. Os resultados encontrados foram analizados pela análise de frequência. Conclui-se que os resultados obtidos ressaltam a importância da avaliação do perfil de sensibilidade de microrganismos causadores de mastite clínica em cada rebanho estudado, possibilitando maior precisão na prescrição medicamentosa para os futuros casos de mastite clínica e a terapia da vaca seca. É importante também a utilização de outras técnicas como a de PCR em tempo real para a detecção dos principais microrganismos causadores de mastite subclínica, a qual pode ser indicada como método a ser utilizado na rotina, devido a sua especificidade, fornecendo um diagnóstico bacteriológico preciso.

A mastite bovina apresenta alta prevalência nos rebanhos leiteiros e a antibioticoterapia é o procedimento mais utilizado no tratamento da mesma. O Staphylococcus aureus, agente etiológico mais frequentemente isolado em casos de mastite, tem demonstrado em diversos estudos aumento crescente no padrão de resistência aos antimicrobianos. O desenvolvimento de bactérias resistentes e a presença de resíduos de antimicrobianos no leite estimulam o desenvolvimento de novos tratamentos que solucionem estes problemas. O muco dos moluscos Achatina fulica é composto por uma glicoproteína, denominada achacin, com atividade antimicrobiana sobre bactérias Gram positivas. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram avaliar a atividade antimicrobiana in vitro do muco de A. fulica sobre S. aureus, bem como determinar e avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) do muco de A. fulica purificado sobre S. aureus ATCC 25923 e isolados de S. aureus provenientes de infecções intramamárias bovina. O muco foi purificado mediante cromatografia líquida de alta eficiência e a fração com atividade antimicrobiana foi submetida à quantificação protéica e microdiluição em caldo. A CIM do muco purificado determinada para a cepa ATCC 25923 correspondeu a 50 µg/mL e para os isolados de S. aureus, variou entre 12,5 e 100 µg/mL. Sendo que destes, dois isolados (6,7 %) apresentaram CIM de 12,5 µg/mL, três (10 %) CIM de 25µg/mL, vinte e três (76,6 %) CIM de 50 µg/mL e dois (6,7 %) apresentaram CIM de 100 µg/mL. A CIM50 para os isolados correspondeu a 50 µg/mL e a CIM90 a 100 µg/mL. No presente estudo observou-se que o muco purificado apresentou atividade antimicrobiana com ação bactericida. Estes resultados proporcionam perspectivas para a compreensão e otimização de protocolos microbiológicos deste potencial biofármaco com a finalidade de empregá-lo futuramente na terapêutica veterinária para o controle de infecções intramamárias causadas por S. aureus. / The bovine mastitis is highly prevalent in dairy herds and antibiotic therapy is the procedure most commonly used to treat it. Staphylococcus aureus is the most frequently isolated etiologic agent in cases of mastitis and it has been shown in several studies the pattern of increasing antimicrobial resistance. Due to the development of resistant bacterias and the presence of antimicrobial residues in the milk the development of new treatments to solve those problems are required. The mucus of the molluscs Achatina fulica contains a glycoprotein called achacin that presents antimicrobial activity against Gram positive bacteria. The aim of this study was the evaluation of the in vitro antimicrobial activity of the A. fulica mucus of on S. aureus, as well the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of A. fulica mucus purified on S. aureus ATCC 25923 and isolates of S. aureus from bovine intramammary infections. The mucus was purified by high performance liquid chromatography. The protein content in portion presenting the was quantified and microdiluted. The MIC determined for the purified mucus strain ATCC 25923 was 50 µg/mL and for the isolates of S. aureus ranged between 12,5 and 100 µg/mL. Among these samples, two isolates (6,7 %) showed MIC of 12,5 µg/mL, three (10 %) of MIC 25 µg/mL, twenty-three (76,6 %) MIC of 50 µg/mL and two (6,7 %) had an MIC of 100 µg/mL. The MIC50 for isolates was 50 µg/mL and MIC90 to100 µg/mL. It was found that the purified mucus showed bactericidal activity. The results showed in the present work improved the understanding and optimization of the biopharmaceutical microbiological potential that could be applied in new protocols in future veterinary therapy for the control of intramammary infections caused by S. aureus.

Um total de 107 S. aureus isolados de casos de mastite, glândulas portadoras, pele do úbere, ordenhadores e insufladores, em rebanhos de São Paulo e Pernambuco, foram tipados por técnicas moleculares PCR-RFLP do gene coa e PCR de spa distinguiram seis perfis. Todas as amostras amplificaram genes coa, spa, icaA e 69% produziram biofilme glicose-induzido in vitro. PFGE identificou 31 perfis e 12 linhagens. Uma linhagem foi predominante (P < 0,0001) e amplamente disseminada em ambas as regiões. Um mesmo perfil foi isolado de mastite clínica, subclínica e portadoras. Houve heterogeneidade genética entre isolados de fazenda. Isolados de origem humana e animal constituíram populações distintas. Poucos isolados de leite, insufladores e pele do úbere tiveram igual perfil. Uma amostra extramamária, 77% dos isolados de leite e. 99% de S. aureus de portadoras produziram biofilme. Não foi detectada correlação entre produção de biofilme e CCS. O isolamento sucessivo do mesmo perfil de PFGE de glândulas assintomáticas por mais de 16 dias caracterizou o estágio de portador. / A total of 107 S. aureus isolated from bovine milk, udder skin, milkers and milking machine, from São Paulo and Pernambuco herds was typed by molecular techniques. PCR-RFLP coa gene and PCR spa gene distinguished six amplicons. All strains amplified coa, spa, icaA genes and, 69% produced in vitro glucose-induced biofilm. PFGE identified 31 pulsotypes, 12 lineages. One of the lineages was predominantly isolated (P<0.0001) and widely disseminated. A same pulsotype was isolated from clinical and, subclinical mastitis as well as from carriers. There was genetic heterogeneity among isolates from the herds. Strains from human and animal origin were genetically different. Few isolates from milk, milking machine and udder skin showed similar pulsotype. An extramammary strain, 77% of the milk isolates and, 99% of the S. aureus isolated from carriers produced biofilm. It was not detected any correlation between SCC and biofilm production. The successive isolation during more than 16 days of a same pulsotype from the asymptomatic glands characterized the carrier status.

Um total de 107 S. aureus isolados de casos de mastite, glândulas portadoras, pele do úbere, ordenhadores e insufladores, em rebanhos de São Paulo e Pernambuco, foram tipados por técnicas moleculares PCR-RFLP do gene coa e PCR de spa distinguiram seis perfis. Todas as amostras amplificaram genes coa, spa, icaA e 69% produziram biofilme glicose-induzido in vitro. PFGE identificou 31 perfis e 12 linhagens. Uma linhagem foi predominante (P < 0,0001) e amplamente disseminada em ambas as regiões. Um mesmo perfil foi isolado de mastite clínica, subclínica e portadoras. Houve heterogeneidade genética entre isolados de fazenda. Isolados de origem humana e animal constituíram populações distintas. Poucos isolados de leite, insufladores e pele do úbere tiveram igual perfil. Uma amostra extramamária, 77% dos isolados de leite e. 99% de S. aureus de portadoras produziram biofilme. Não foi detectada correlação entre produção de biofilme e CCS. O isolamento sucessivo do mesmo perfil de PFGE de glândulas assintomáticas por mais de 16 dias caracterizou o estágio de portador. / A total of 107 S. aureus isolated from bovine milk, udder skin, milkers and milking machine, from São Paulo and Pernambuco herds was typed by molecular techniques. PCR-RFLP coa gene and PCR spa gene distinguished six amplicons. All strains amplified coa, spa, icaA genes and, 69% produced in vitro glucose-induced biofilm. PFGE identified 31 pulsotypes, 12 lineages. One of the lineages was predominantly isolated (P<0.0001) and widely disseminated. A same pulsotype was isolated from clinical and, subclinical mastitis as well as from carriers. There was genetic heterogeneity among isolates from the herds. Strains from human and animal origin were genetically different. Few isolates from milk, milking machine and udder skin showed similar pulsotype. An extramammary strain, 77% of the milk isolates and, 99% of the S. aureus isolated from carriers produced biofilm. It was not detected any correlation between SCC and biofilm production. The successive isolation during more than 16 days of a same pulsotype from the asymptomatic glands characterized the carrier status.

L’intensification des pratiques d’élevage s’est accompagnée de l’émergence de pathologies de production, notamment des mammites. Il s’agit d’une inflammation de la glande mammaire, d’origine bactérienne dans la majeure partie des cas. Les mammites constituent à elles seules la première source de pertes financières des cheptels bovins laitiers en France et dans le monde. Néanmoins aucun traitement prophylactique ne permet à ce jour une action préventive à long terme. Parmi les agents étiologiques majeurs des mammites, Escherichia coli (E. coli) tient son importance du fait de sa prévalence et de son impact sur les rendements et la qualité du lait. La part des facteurs de l’hôte dans la capacité à éliminer le pathogène causal est relativement avérée, tandis que le lien entre caractéristiques bactériennes et sévérité de l’infection est plus délicat à établir. Cette étude s’attache donc à déterminer si les interactions entre E. coli et la glande mammaire, en particulier les cellules épithéliales mammaires (CEM) et les neutrophiles, peuvent expliquer des degrés de sévérité variables. L’influence du lait sur ces interactions a également été investiguée. / Along with agricultural intensification of animal production, some pathologies have emerge, especially mastitis. This disease corresponds to an inflammation of the udder, and is generally provoked by bacterial infection. Mastitis on their own constitute the main source of financial impairments within dairy herds in France and worldwide. So far, there is no treatment able to prevent mastitis over time. Among major mastitis pathogens Escherichia coli (E. coli) is of great importance, because of its prevalence and its impacts on milk yield and quality. The mastitis severity has proven to be linked to host factors, but the implication of bacterial characteristics remains unknown. Thus, this study aimed at deciphering whether interactions between E. coli and the mammary gland, especially the mammary epithelial cells (MECs) and neutrophils, may explain a variability in mastitis severity. Influence of milk on these interactions was also investigated.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eveline_Xavier.pdf: 537505 bytes, checksum: f46fc6f4fae888045c26180cb3ce26b0 (MD5) Previous issue date: 2008-08-05 / Mastitis is the most frequent disease in dairy cows, it causes great economic losses in herds and dairy industries and represents a hazard for public health. Among the etiologic agents identified, there is a predominance of bacteria species. However, several other groups of microorganisms may be present, one of those is a unicellular alga of the Prototheca genus, the Prototheca zopfii, an environmental agent of bovine mastitis. The infected cows usually have granulomatous changes in mammary tissue. Moreover microorganisms do not respond to routine therapy, resulting in the elimination of the infected animals. The main purposes of this study was to determine the occurrence of Prototheca zopfii on bulk tank milk in the state of Goiás and identify the limit of detection for Prototheca zopfii by two different approaches. We also wanted to know the samples pre-incubated with small concentration of Protoheca zopfii permits us to obtain positive growth in microbiological culture. We analyzed 473 samples from farms with high somatic cell count patterns but we did not detect Protoheca zopfii in any of those samples. The limit of sensitivity of the Prototheca zopfii was analyzed, in the approach of isolation the limit of detection was between 130 to 3,400 UFC/mL. In the approach of tally the limit was between 25 to 300 UFC/mL. It wasn t observed significant difference (p>0,05) between the approaches analyzed. However, significant statistical difference (p<0,05) occurred between the five types analyzed. After the pre-incubation at 37ºC/24h, the limit of sensibility was analyzed by the approach isolation, the limit was 30 UFC/mL, what means that the pre-incubation is so important to decrease the possibility of occurrence of false negative / Entre as enfermidades de grande preocupação para os bovinos leiteiros encontram-se as mastites, incluindo aquelas causadas por Prototheca spp., um agente ambiental, relacionado à mastite bovina que destaca-se pela gravidade das lesões que causam no tecido mamário e pela resistência a ações terapêuticas. Objetivou-se com o presente estudo determinar a ocorrência de Prototheca zopfii no leite cru refrigerado no estado de Goiás, identificar o limite de detecção deste patógeno pelos métodos de semeadura para isolamento, e semeadura para contagem e também verificar se a incubação de amostras de leite com baixo número de células da Prototheca zopfii permite a obtenção de resultados positivos na cultura microbiológica. Foram analisadas 473 amostras originárias de propriedades com histórico de elevada contagem de células somáticas e procedeu-se a avaliação do limite de sensibilidade para o agente por meio do método de semeadura para isolamento, cujo limite de detecção correspondeu à faixa de 130 a 3.400 UFC/mL. Quanto ao método de semeadura para contagem o limite estabelecido foi 25 a 300 UFC/mL. Portanto houve diferença estatística (p<0,05) entre os métodos analisados, porém, não houve diferença estatística (p>0,05) entre as cinco cepas analisadas. Após a incubação das amostras por 24 horas a 37ºC verificou-se que o limite de sensibilidade pelo método semeadura para isolamento diminui para 30 UFC/mL, diminuindo-se assim a possibilidade de ocorrência de falso negativo. Em nenhuma das amostras analisadas foi detectada a presença da Prototheca zopfi

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-12-22T14:31:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Maria Juíva Marques de Faria - 2014.pdf: 3781718 bytes, checksum: 5a98e4c3d48dde6e80b58427a1a73012 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-26T13:13:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Maria Juíva Marques de Faria - 2014.pdf: 3781718 bytes, checksum: 5a98e4c3d48dde6e80b58427a1a73012 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-26T13:13:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Maria Juíva Marques de Faria - 2014.pdf: 3781718 bytes, checksum: 5a98e4c3d48dde6e80b58427a1a73012 (MD5) Previous issue date: 2014-05-07 / Bovine mastitis is an inflammatory/infectious process of the mammary gland, its etiology is complex and multivariate. The most common mastitis has bacterial origin. Because of the high cost to treat this disease, and the bacterial resistance to antibiotics, beyond the losses due to the milk discard or the presence of drug residues in milk, studies are necessary to find out alternative methods to circumvent these problematic. The medicinal plants with antimicrobial activity have been making room in veterinary medicine with the objective to reduce the impact and the use of drugs indiscriminately, as well as maintain the integrity of the animal and control the dissemination of resistant bacterial lineage. Therefore, the aim of this work was characterize the oleoresin Copaifera spp., verify the antimicrobial activity in vitro of oleoresin and essential oil of Copaifera spp. in combating against aerobic and facultative isolated bacteria from cows’ milk with subclinical grade III mastitis diagnostic and evaluate preliminarily, in vivo, phytotherapic formulation composed of Copaifera spp. The tests for characterization of the oleoresin, confirmed its authenticity and quality, considered appropriate for use. The analyzes performed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC/MS) and electrospray ionization Fourier transformed íonic cyclotron resonance mass spectrometry (ESI FT-ICR MS) identified sesquiterpenes and diterpenes present in the essential oil and oleoresin of Copaifera spp., respectively. The technique of High Performance Liquid Chromatography (HPLC) for sesquiterpenes, especially for β-caryophyllene, can be used in quality control of essential oil and oleoresin of Copaifera spp., as well as in phytotherapic formulation using oleoresin of Copaifera spp. The oleoresin showed better antimicrobial activity than the essential oil of Copaifera spp. (ρ<0,0001) in combating the 55 isolated bacteria. The antibiogram test of the three phytotherapic formulations demonstrated that the oleoresin had antimicrobial activity against the isolated microorganisms. The preliminary evaluation, in vivo, of a phytotherapic formulation containing 20% oleoresin of copaiba was neither effective nor safe, because it intensified the inflammatory process, requiring further tests, such as cytotoxicity and irritability of the raw material plant and of the vehicle used. Key words: Bovine Mastitis. Oleoresin. Essential Oil. Copaifera spp. Minimum Inhibitory Concentration. ESI FT-ICR MS. / Mastite bovina é um processo inflamatório/infeccioso da glândula mamária, de etiologia complexa e multivariada, sendo a de origem bacteriana a mais frequente. Devido aos elevados custos dos tratamentos dessa enfermidade, resistência bacteriana aos antibióticos, além dos prejuízos inerentes ao descarte do leite ou à presença de resíduos de medicamentos no mesmo, faz-se necessário estudos que busquem métodos alternativos para contornar essa problemática. As plantas medicinais com potencial antimicrobiano vêm ganhando espaço na medicina veterinária com o objetivo de reduzir o impacto e o uso de medicamentos de forma indiscriminada, bem como manter a integridade do animal e controlar a disseminação de linhagens bacterianas resistentes. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi caracterizar a oleorresina de Copaifera spp., verificar atividade antimicrobiana in vitro da oleorresina e do óleo essencial de Copaifera spp. frente às bactérias aeróbias e facultativas isoladas de leite de vacas diagnosticadas com mastite subclínica grau III e avaliar preliminarmente, in vivo, formulação fitoterápica à base de Copaifera spp. Os testes de caracterização da oleorresina de Copaifera spp. demonstraram sua autenticidade e qualidade, a qual foi considerada adequada para o uso. As análises realizadas por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/EM) e por espectrometria de massas com ionização por electrospray de ressonância ciclotrônica de íons por transformada de Fourier (ESI FT-ICR MS) identificaram os sesquiterpenos e diterpenos presentes no óleo essencial e na oleorresina de Copaifera spp., respectivamente. A técnica Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) para sesquiterpenos, em especial para β-cariofileno, pode ser utilizada no controle de qualidade de oleorresina e óleo essencial de Copaifera spp., bem como em formulação fitoterápica utilizando oleorresina de Copaifera spp. como matéria-prima vegetal. A oleorresina apresentou melhor atividade antimicrobiana do que o óleo essencial de Copaifera spp. (ρ<0,0001) frente às 55 bactérias isoladas. O teste de antibiograma das três formulações fitoterápicas demonstrou que a oleorresina de copaíba reproduziu a sua atividade antimicrobiana frente aos micro-organismos isolados. A avaliação preliminar, in vivo, de uma formulação fitoterápica contendo 20% oleorresina de copaíba não foi eficaz e nem segura, pois intensificou o processo inflamatório, havendo necessidade de testes futuros, como de citotoxicidade e de irritabilidade dessa matéria-prima vegetal e do veículo utilizado.