Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-06-13T17:40:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) merged (3).pdf: 2859898 bytes, checksum: 09007e1f478ead6b0273d0459b360222 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T17:40:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) merged (3).pdf: 2859898 bytes, checksum: 09007e1f478ead6b0273d0459b360222 (MD5) Previous issue date: 2015-02-11 / CAPES / A Organização Mundial da Saúde (OMS) estima que até 2030 sejam previstos 27 milhões de casos incidentes de câncer, 17 milhões de mortes por câncer e 75 milhões de pessoas vivas, anualmente, convivendo com esta doença. No Brasil, as estimativas para o ano de 2012, válidas também para o ano de 2013, apontam a ocorrência de aproximadamente 518.510 novos casos de câncer, reforçando a magnitude do problema do câncer no país. Apesar da inserção de novos fármacos na terapia contra o câncer, vários tumores sólidos ainda não dispõem de tratamento adequado. Assim, é necessária a busca de novas alternativas medicamentosas para melhorar a eficácia do tratamento de doenças neoplásicas avançadas. Uma das principais áreas estudadas atualmente no mundo é a pesquisa de novos medicamentos com propriedades antitumorais. Microorganismos endofíticos podem ser entendidos como aqueles que vivem no interior das plantas, habitando, suas partes aéreas, como folhas e caules sem causar aparentemente nenhum dano a seus hospedeiros e conseguem viver nos tecidos internos das plantas e dispõem de uma riqueza bioquímica ainda não muito bem explorada. Os metabólitos secundários são compostos de baixo peso molecular, produzidos por fungos endofíticos em resposta às condições ambientais. Esses compostos apresentam potencial aplicação como os antibióticos. O objetivo do presente estudo foi avaliar seis gêneros da micoteca/URM quanto à produção do taxol. Os gêneros foram cultivados em meio BD (Batata Dextrose) por 72 horas em temperatura ambiente seguida de filtração a vácuo para extração do DNA. As reações de PCR foram realizadas com iniciadores e condições específicas para a amplificação do gene ITS do rDNA. Os produtos do gene ITS rDNA amplificados foram purificados e sequenciados. Os dados obtidos pelo sequenciamento do gene ITS rDNA foram analisados e comparados, pelo programas BLAST. Após a confirmação foram realizadas fermentações, seguidas da extração do metabólito secundário com acetato de etila. Os extratos foram analisados em Cromatografia em Camada Delgada (CCD) que mostrou um resultado satisfatório quando correlacionada a técnica Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC). Dessa forma, se faz necessário uma continuidade desse estudo para otimização do processo de fermentação e extração do produto bioativo. / The World Health Organization estimates that by 2030 are provided 27 million incident cases of cancer, 17 million deaths from cancer and 75 million people alive each year living with this disease. In Brazil, the estimates for the year 2012, also valid for the year 2013 indicate the occurrence of approximately 518,510 new cases of cancer, reinforcing the magnitude of the cancer problem in the country. Despite the inclusion of new drugs in cancer therapy, several solid tumors still lack appropriate treatment. Thus, the search for new medicinal alternative is needed to improve the effectiveness of treatment of advanced malignancies. One of the main areas currently studied in the world is the search for new drugs with antitumor properties. Endophytic microorganisms can be understood as those who live within the plant, dwelling, its aerial parts such as leaves and stems without apparently causing any damage to their hosts and can live in the internal tissues of plants and have a biochemical wealth yet very well traveled. Secondary metabolites are low molecular weight compounds produced by endophytes in response to environmental conditions. These compounds have potential application as antibiotics. The aim of this study was to evaluate six genera of mycology collection / URM for the production of taxol. The genera were cultured in BD (Potato Dextrose) for 72 hours at room temperature followed by vacuum filtration for DNA extraction. PCR reactions were performed with specific primers and conditions for the gene amplification of the rDNA ITS. The STI gene amplified rDNA products were purified and sequenced. The data obtained by sequencing of the ITS rDNA were analyzed and compared by BLAST programs. After confirming fermentations were performed, followed by secondary metabolite extraction with ethyl acetate. The extracts were analyzed by Thin Layer Chromatography, which showed a satisfactory result when correlated Liquid Chromatography Technical High Efficiency. Thus, if a continuation of this study to optimize the process of fermentation and extraction of bioactive product is necessary.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-18T18:16:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE FINAL - BIBLIOTECA- luciana.pdf: 2116020 bytes, checksum: 80cd9b81843b4b25db9ab797a238c9a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-18T18:16:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE FINAL - BIBLIOTECA- luciana.pdf: 2116020 bytes, checksum: 80cd9b81843b4b25db9ab797a238c9a9 (MD5) Previous issue date: 2014-02-10 / Introdução: A obesidade tem sido associada ao desenvolvimento e progressão de diferentes tipos de câncer. Vários mecanismos tentam explicar essa associação, mas há uma necessidade de melhor compreensão dos processos biológicos relacionando câncer e obesidade. A análise proteômica poderá fornecer o conhecimento a nível molecular de fatores envolvidos nesta associação, inferindo-a na prática clínica a partir de novas alternativas de prevenção e tratamento. Objetivos: Analisar o perfil de proteínas significativamente expressas no plasma de pacientes obesos no pré-operatório e seis meses após a cirurgia, avaliando, de maneira prospectiva, os efeitos da perda de peso na regulação da expressão de proteínas relacionadas ao aparecimento de tumores, através do IMC e percentual de perda de peso, bem como avaliar a influência da insulina na expressão das proteínas potencialmente carcinogênicas antes e após a cirurgia bariátrica. Métodos: Foram estudados 40 pacientes, selecionados em dois grupos: controle (n=10) e obesos (n=30), o último foi estratificado, para afastar variáveis de confusão, de acordo com a técnica cirúrgica (Derivação gástrica em Y de Roux, DGYR, n=11 e Gastrectomia vertical, GV, n=19), o IMC (≤ 40 kg/m2 e >40 Kg/m2) e concentração sérica de insulina (≤21 mU/L e >21 mU/L). Foram coletadas amostras de sangue para análise proteômica, através do plasma, utilizando a eletroforese bidimensional. As proteínas foram identificadas pelo TagIdent tool Expert protein Analysis System (Expasy), através do ponto isoelétrico (pI) e peso molecular da proteína; espécie Homo sapiens. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa em seres humanos do Centro de Ciências da Saúde da Universidade Federal de Pernambuco. Resultados: Foram identificadas seis proteínas relacionadas à carcinogênese, hiperexpressas nos pacientes obesos, que não estavam presentes no grupo controle e tornaram-se ausentes após a cirurgia. Tais proteínas foram o Receptor da apolipoproteína B, o Receptor beta do fator de crescimento derivado de plaquetas, a Trombospondina- 2, o receptor da Lipoproteína de baixa densidade, a Transtirretina e a Podoplanina. Ainda, foram identificadas duas proteínas carcinogênicas hiperexpressas em todos os subgrupos, mais nos pacientes com obesidade grave (IMC>40 Kg/m2) e hiperinsulinemia (>21 mU/L), a saber: a tetraspanina-13 e a proteína de ligação de ácido graxo hepática (FABPL). Essas não foram mais expressas após o procedimento cirúrgico. A apoliporpoteína A1 estava hiperexpressa em todos os subgrupos no pré-operatório, permanecendo após a cirurgia, independente do percentual de perda de peso, porém desapareceu nos pacientes com hiperinsulinemia. Finalmente, a Calicreína 11, foi detectada em todos os grupos de obesos, pré-operatório, permanecendo presente após a cirurgia, exceto no grupo com obesidade grave e hiperinsulinemia e no grupo que apresentou menor percentual de perda de peso. Conclusão: Na amostra estudada, foram identificadas proteínas potencialmente carcinogênicas nos pacientes portadores de obesidade: Receptor da apolipoproteína B, o Receptor beta do fator de crescimento derivado de plaquetas, a Trombospondina- 2, o receptor da Lipoproteína de baixa densidade, a Transtirretina e a Podoplanina. A perda de peso induzida pela cirurgia promoveu o desaparecimento dessas proteínas. A mudança nos níveis séricos de insulina influenciou na expressão da ApoA1 após a cirurgia; A calicreína 11 não foi influenciada pela perda de peso nem pela mudança nos níveis de insulina. / Introduction: Obesity has been associated with the development and progression of different types of cancer. Various mechanisms have been tried in an attempt to explain this association, but a greater understanding of the biological processes relating cancer and obesity is required. Proteomic analysis can provide molecular level knowledge of the factors involved in this association, improving clinical practice through new methods of prevention and treatment. Aim: Analysis of proteins significantly expressed in the plasma of obese pre-operative patients and patients six months after surgery, evaluating, in a prospective manner, the effects of weight loss in the regulation of the expression of proteins related to the appearance of tumors, through BMI and weight loss percentage, as well as analyzing the influence of insulin in the expression of potentially carcinogenic proteins before and after bariatric surgery. Methods: A total of 40 patients were divided into two groups: control (n=10) and obese (n=30). The latter group was stratified to remove confounding variables, in accordance with surgical technique used (Roux-En-Y gastric bypass, RYGB, n=11 and Sleeve Gastrectomy, SG, n=19), BMI (≤ 40 kg/m2 and >40 Kg/m2) and serum insulin concentration (≤21 mU/L and >21 mU/L). Blood samples were collected for proteomic analysis from plasma using two-dimensional electrophoresis. Proteins were identified using the TagIdent Expert protein Analysis System (Expasy) tool, through isoelectric point (pI) and molecular weight of protein; species Homo sapiens. The study was approved by the Ethics Committee in Research of Human Beings of the Centro de Ciências da Saude of the Universidade Federal de Pernambuco. Results: Six proteins related to carcinogenesis were hyperexpressed in obese patients, which were not present in the control group and absent following surgery. These proteins were the receptor of apolipoprotein B, the beta receptor of platelet derived growth factor, thrombospondin- 2, the low density lipoprotein receptor, transthyretin and podoplanin. Two carcinogenic proteins were hyperexpressed in all the subgroups, more frequently in patients with severe obesity (BMI>40 Kg/m2) and hyperinsulinism (>21 mU/L), namely: tetraspanin-13 and the fatty acid binding protein of the liver (FABPL). These were not expressed after surgery. The apoliporpotein A1 was hyperexpressed in all the pre-operative subgroups, and remained after surgery, irrespective of the weight loss percentage, but disappeared in patients with hyperinsulinism. Finally, Kallikrein 11, was detected in all groups of obese pre-operative patients, and remained after surgery except in the group with severe obesity and hyperinsulinism and in the group with lowest weight loss percentage. Conclusion: In the sample group studied, the following potentially carcinogenic patients were identified in obese patients: receptor of apolipoprotein B, the beta receptor of the platelet derived growth factor, trhrombospondin- 2, the low density lipoprotein receptor, transthyretin and podoplanin. Surgical weight loss resulted in the disappearance of these proteins. A change in insulin serum levels influenced the expression of ApoA-1 following surgery; Kallikrein 11 was not influenced by weight loss or by changes in insulin levels.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-18T19:49:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) PETRA-BARROS-DOS-SANTOS_2014_TESE-V1.pdf certo.pdf: 4627249 bytes, checksum: 6c79cc3c6be74f0d0c7501dc9cde4dcf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-18T19:49:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) PETRA-BARROS-DOS-SANTOS_2014_TESE-V1.pdf certo.pdf: 4627249 bytes, checksum: 6c79cc3c6be74f0d0c7501dc9cde4dcf (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / CAPES / O câncer de mama invasivo é associado a uma alta capacidade de promover metástase. A progressão do câncer de um estágio pré-maligno para o maligno, metástase e como as células do tumor podem interagir e se adaptar rapidamente com o microambiente tumoral é foco de investigação. As integrinas, glicoproteínas transmembrana, estão envolvidas nos processos de invasão e metástase assim como na adesão célula-célula e célula-matriz extracelular. Particularmente a β1-integrina está envolvida na proliferação e diferenciação de células no desenvolvimento de tecidos epiteliais. O aumento da sialilação (mediado por sialiltransferases; STs) e da ramificação β1,6 de oligossacarídeos (mediado pela enzima β1,6-N-acetilglicosaminiltransferase (MGAT5) tem sido associada com uma variedade de mudanças estruturais nos carboidratos de superfície celular e diretamente envolvidas na carcinogenese. Esta tese objetivou investigar a associação entre a expressão da β1-integrina na sobrevivência e metástase de 225 pacientes diagnosticados com carcinoma ductal invasivo de mama (CDI) utilizando técnica de microarranjos de tecidos (tissue microarrays - TMAs) e comparar com 67 pacientes diagnosticados com carcinoma ductal in situ (CDIS); avaliar a expressão da MGAT-5, assim como, a presença de ácidos siálicos (SA) α2,3 e α2,6 ligados. Os dados foram relacionados com marcadores imunohistoquímicos clássicos (RE, RP, Ki-67, HER-2 e P53), VEGF, MUC1 e com dados clínicohistopatológicos de cada paciente. O perfil de carboidratos das células neoplásicas foi avaliado empregando técnica de histoquímica com lectinas MAL-II (Lectina de Maackia amurensis,específica para o SA-α2,3), SNA (Lectina de Sambucus nigra, específica para o SA-α2,6) e L-Pha (Leucoaglutinina de Phaseolus vulgaris, específica para β1,6-N-acetilglicosamina). Os resultados demonstraram que a β1-integrina foi superexpressa em 32,8% dos casos de CDI e foi associada com a expressão de MGAT-5 (p=0.0001), HER-2 (p = 0.019), VEGF (p =0.011), assim como todas as lectinas utilizadas no trabalho e teve uma associação significativa com a ocorrência de metástase e morte (p=0.001, p=0.05, respectivamente). A análise de sobrevivência mostrou que a superexpressão desta proteína tem valor prognóstico (p= 0.002) na sobrevivência específica (número de meses após diagnóstico até a ocorrência da morte pela doença). Não houve associação quanto à expressão de β1-integrina e MGAT-5 (p= 0.559, p=0.07; respectivamente) entre os casos de CDI e CDIS. A presença de SA-α2,6 nos glicoconjugados das células neoplásicas verificada através da marcação com a lectina SNA, foi diferenciada entre os casos de CDI e CDIS (p=0.034, mais expressa em CDI) assim como na sobrevida específica das pacientes, tempo livre da doença e acometimento de linfonodos (p=0.026, p=0.041, p=0.048; respectivamente). SNA também se mostrou uma sonda eficiente, sendo sua marcação uma variável independente (Cox regression) associada com a baixa sobrevida das pacientes que expressam o SA-α2,6-ligado (p=0.004). Nossos resultados suportam o princípio de que a superexpressão da β1-integrina está associada com a agressividade do tumor além de poder ser considerada como alvo terapêutico e que a histoquímica com lectinas usando SNA se mostra uma ferramenta importante no auxílio do prognóstico da doença. / The invasive breast cancer is associated with a high ability to promote metastasis. The progression of a premalignant to a malignant stage, metastasis and how tumor cells can interact and adapt quickly to the tumor microenvironment is the focus of many research. Integrins, transmembrane glycoproteins are involved in invasion and metastasis process, as well as in cell- cell and cell-extracellular matrix adhesion. Particularly β1 integrin is involved in the proliferation and differentiation of cells of the epithelial tissues development. Increased sialylation (mediated by sialyltransferases; STs) and the β1,6 branching oligosaccharides (mediated by the enzyme β1,6-N-acetylglucosaminyltransferase, MGAT5) has been associated with a variety of structural changes in cell surface carbohydrates and directly involved on carcinogenesis. This thesis aimed to investigate the association between β1 integrin expression on survival and metastasis of 225 patients diagnosed with invasive ductal breast carcinoma (IDC) using tissue microarrays (TMAs) and compare with 67 patients diagnosed with ductal carcinoma in situ (DCIS); Evaluate the expression of MGAT5 expression, as well, the presence of α2,3 and α2,6-linked sialic acid (SA) were also evaluated. All data were related to classical immunohistochemical markers (ER, PR, Ki-67, HER-2 and p53), VEGF and MUC1 and the clinicopathologic features for each patient. The carbohydrate profile of neoplastic cells was evaluated using lectin histochemistry technique with MAL-II lectin (Maackia amurensis lectin, specific to α2,3-linked SA), SNA (Sambucus nigra lectin, specific for α2,6-linked SA) and PHA-L (Phaseolus vulgaris leucoagglutinating, specific for β1,6-N-acetylglucosamine). Results showed that the β1 integrin was overexpressed in 32.8% of the IDC cases and was related to the expression of MGAT5 (p=0.0001), HER-2 (p=0.019), VEGF (p=0.011) as well all lectins used in this work and had a significant association with the occurrence of metastasis and death (p=0.001, p=0.05, respectively). Survival analysis showed that overexpression of this protein has prognostic value (p=0.002) in specific survival (number of months from diagnosis until the occurrence of death by breast cancer). No association was found for β1 integrin and MGAT5 expression (p=0.559, p=0.07, respectively) between DCIS and IDC cases. The presence of α2,6-linked SA in cancer cells glycoconjugates, observed by SNA staining, was different between DCIS and IDC cases (p=0.034) as well the specific survival of patients, the disease free survival and lymph nodes committed (p=0.026, p=0.041, p=0.048, respectively). SNA also proved to be a efficient probe, it’s staining showed as an variable independent (Cox Regression) related with patients low survival that express the α2,6-linked SA (p=0.004). Our results support the principle that overexpression of β1 integrin is associated with tumor aggressiveness and it can be considered as a therapeutic target and lectin histochemistry technique, using SNA, shows as an important tool to aid the prognosis.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-09-13T13:59:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Patricia-PPGCF-UFPE.pdf: 2867855 bytes, checksum: ee02a03595d9c3ad837ac895a50e4148 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-13T13:59:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Patricia-PPGCF-UFPE.pdf: 2867855 bytes, checksum: ee02a03595d9c3ad837ac895a50e4148 (MD5) Previous issue date: 2016-02-17 / CAPES / A primeira parte do trabalho teve como objetivo a análise da eficiência do ligante de compostos com atividade citotóxica in vitro contendo o núcleo 4-tiazolidinona em sua estrutura química. Foram encontrados 121 compostos na literatura e as métricas EL, FQ e LipE foram calculadas. Os valores médios calculados de EL e LipE foram abaixo dos valores mínimos adequados. Para os compostos estudados, 14% obtiveram EL ≥ 0,3 e somente um composto obteve LipE ≥ 5-7. Para o FQ, 29% dos compostos obtiveram valores acima de 0,8 e três compostos apresentaram valores acima de 1,0, mostrando excepcional eficiência do ligante. A segunda parte do trabalho foi a síntese e avaliação da citotoxicidade de análogos tiossemicarbazônicos e 4tiazolidinônicos. Os compostos foram planejados com o objetivo de avaliar a influência dos grupos substituintes pirrolidinil, piperidinil e morfolinil na posição para do anel aromático. A citotoxicidade foi avaliada através do método do MTT em linhagens celulares de carcinoma de laringe humano (HEp-2), câncer de cólon humano (HT-29), câncer de mama humano (MCF7), leucemia humana (MOLT-4) e carcinoma mucoepidermóide de pulmão (NCI-H292). As tiossemicarbazonas e 4-tiazolidinonas propostas foram sintetizadas e purificadas, obtendo-se rendimentos entre 58-87 % e 31-93%, respectivamente. Os compostos foram caracterizados através de RMN 1H e 13C, IV e EMAR. Quanto ao ensaio de citotoxicidade, a triagem inicial, realizada através da avaliação do percentual de inibição celular indicou que cinco tiossemicarbazonas foram ativas nas linhagens celulares HEp-2 e MOLT-4 e uma 4tiazolidinona apresentou citotoxicidade na linhagem celular MCF-7. / The first part of this study aimed to analyze ligand efficiency of compounds with cytotoxic activity tested in vitro containing 4-thiazolidinone nucleus in their chemical structure. 121 compounds were found in the literature and EL, FQ and LipE metrics were calculated. The mean values of EL and LipE were below the appropriate minimum. For the studied compounds, 14% showed EL ≥ 0.3 and one compound obtained LipE ≥ 5-7. For FQ 29% of compounds obtained scores above 0.8 and three compounds showed scores above 1.0, showing exceptional ligand efficiency. The second part of this study describes the synthesis and cytotoxic activity of thiossemicarbazone and 4-thiazolidinone analogues. The compounds were planned to evaluate the influence of pyrrolidinyl, piperidinyl and morpholinyl groups at the para position of the aromatic ring. Cytotoxicity was evaluated by the MTT assay in cell lines of human laryngeal carcinoma (HEp-2), human colon cancer (HT-29), human breast cancer (MCF-7), human leukemia (MOLT-4) and lung mucoepidermoid carcinoma (NCI-H292). Thiosemicarbazones and 4-thiazolidinones proposed were synthesized and purified to give yields between 58-87% and 31-93%, respectively. Compounds were characterized by 1H and 13C NMR, IR and HRMS. As for cytotoxic assay, the initial screening, performed by evaluating the percentage of cell inhibition indicated that the five thiosemicarbazones were active in the cell lines HEp-2 and MOLT-4. 4-thiazolidinone did not show cytotoxicity.

Submitted by Rafael Santana (rafael.silvasantana@ufpe.br) on 2018-01-30T17:59:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Versão Final-TESE-EICB-10-02-2017.pdf: 2121418 bytes, checksum: ad23456aec856da13a2581e107c840e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-30T17:59:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Versão Final-TESE-EICB-10-02-2017.pdf: 2121418 bytes, checksum: ad23456aec856da13a2581e107c840e7 (MD5) Previous issue date: 2016-03-30 / REUNI / O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais frequente no mundo e o mais comum entre as mulheres, correspondendo a 25% de todos os cânceres do sexo feminino. No Brasil, representa a primeira incidência de neoplasia na mulher. O gene c-myc codifica fatores de transcrição que participam, direta e indiretamente, da regulação do ciclo celular, diferenciação, metabolismo, crescimento, apoptose, instabilidade genômica, angiogênese e imortalização celulares. O c-myc tem sido apontado como peça central no processo tumorigênico e sua amplificação está relacionada com carcinomas invasivos que apresentam comportamento clínico mais agressivo e prognóstico reservado. Diante disto, o presente estudo objetivou investigar a relação da amplificação do gene c-myc com fatores prognósticos entre os subtipos moleculares de câncer de mama diagnosticado com carcinoma ductal invasivo (CDI). As amostras de CDI (n=60), fixadas em formalina e embebidas em parafina, foram obtidas no Arquivo de Biópsias do Serviço de Anatomia Patológica do Hospital das Clínicas (HC) da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE). A caracterização dos tumores em subtipos moleculares foi realizada utilizando imunohistoquímica para receptor de fator de crescimento epidérmico do tipo 2 (HER-2), receptores de estrógeno (RE) e progesterona (RP) e o fator de proliferação celular (Ki-67). A detecção da amplificação do gene c-myc foi realizada através de Hibridização in situ cromógena (CISH). Os resultados mostraram maiores frequências para os subtipos Luminal A (37,7%) e Triplo-Negativo (40%). Neste estudo tumores Luminais, notadamente Luminal A, apresentaram correlação estatistica quanto ao nível de diferenciação (p=0,0135), tamanho menor (p=0.5715), em estádio inicial no momento do diagnóstico; e com baixo a médio grau histológico e nuclear ao diagnóstico, respectivamente. Tumores dos subtipos superexpressão de HER-2 e Triplo-Negativo se relacionaram com caraterísticas prognósticas desfavoráveis, apresentando maiores taxas de invasão linfonodal, maiores chances de tumores indiferenciados e predomínio de diagnóstico entre as pacientes mais jovens, respectivamente. A maior frequência de amplificação do c-myc foi observada em 21 tumores (35%) no subtipo Triplo-Negativo, indicando que a amplificação pode estar associada a tumores mais agressivos e por isso um prognóstico reservado. / Breast cancer is the second most common cancer type worldwide and the most common among women, accounting for 25% of all female cancers. In Brazil, it represents the most incident cancer type in women. C-myc gene encodes transcription factors which are, directly and indirectly, involved in cell cycle regulation, differentiation, metabolism, growth, apoptosis, genomic instability, angiogenesis and cell immortalization. It has been considered as playing a role in tumorigenesis and its amplification is associated with more aggressive clinical behavior and poor prognosis in invasive carcinomas. This study aimed to investigate the relationship of c-myc amplification and clinicopathologic features amog the subtypes of invasive ductal carcinomas (IDC) of breast. Formalin-fixed and paraffin-embeded tissues samples (n=60) were retrieved from the Biopsies Archives of Anatomy and Pathology Sector of University Hospital at Federal University of Pernambuco. Tumors subtyping was developed using immunohistochemistry against epidermal growth factor receptor type 2 (HER-2), estrogen and progesterone receptors (ER and PR) and cell proliferating factor Ki-67. c-myc amplification was evaluated via chromogenic in situ hybridization (CISH). Results showed that the most frequent breast carcinomas subtypes were Luminal A (37.7%) and Triple-Negative (40%). Luminal tumors, mainly subtype A, showed to be well differentiated tumours regarding histological grade (p=0.0135), of small size (p=0.5715) at an early stage and presented a low and medium histologic and nuclear grade, respectively, at the time of diagnosis. Triple-Negative and HER-2 superexpression carcinomas were larger tumours, poorly differentiated (p= 0.0570), presenting higher rates of ganglionar involvement, advanced stages tumors and younger patients at the time of diagnosis, presenting the worst prognosis. We observed c-myc amplification in 21 tumours (35%) but no statistical difference was found between amplified and nonamplified and molecular subtypes of breast cancer.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-10T20:07:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Sayonara Maria Calado Gonçalves.pdf: 1626779 bytes, checksum: 94856546e77c8485e58e5ed21936d22e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-10T20:07:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Sayonara Maria Calado Gonçalves.pdf: 1626779 bytes, checksum: 94856546e77c8485e58e5ed21936d22e (MD5) Previous issue date: 2016-08-15 / FACEPE / Os produtos naturais estão sendo cada vez mais estudados por causa da sua abundância na natureza, gama de atividades e baixo custo. A betulina (BE) e o ácido betulínico (AB) são obtidos através de fontes naturais e entre suas atividades biológicas estão atividade anti-inflamatória e antitumoral. O câncer é uma doença de grande impacto social que mata milhões de pessoas todos os anos. Hoje, está bem estabelecido a íntima relação entre inflamação/tumorigênese. Sedo assim, 5 novos derivados da BE e 6 derivados do AB foram semissintetizados utilizando substituintes ésteres e halogênios como cloro e flúor. Dos 5 novos derivados da BE, 2 foram capazes de reduzir significantemente os níveis de INF-γ e da COX-2. Em seguida, avaliamos a citotoxicidade celular dos novos derivados da BE (LAFIS 2a, 2b, 2c, 2d e 2e) e do AB (LAFIS 1a, 1b, 1c, 1d, 1e e 1f) frente a 4 linhagens de células tumorais e em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs). Os derivados da BE não apresentaram ação antineoplásica promissora (IC₅₀>70μM), entretanto não foram citotóxicos para as PBMCs (IC₅₀>100μM). Já os derivados do AB se mostraram citotóxicos para as PBMCs e não foram seletivos para as células tumorais. / Cancer is a disease of great social impact that kills millions of people every year. Today, it is well established the close relationship between inflammation/tumorigenesis. Natural products are increasingly being studied because of its abundance in nature, range of activities and low cost. The betulinic acid (BA) and betulin (BE) are obtained from natural sources and from their biological activities are antiinflammatory and antitumor activity. Therefore five news derivatives of BE and six derivatives of BA performed substitutions at C3 and C28 esters using groups and halogens such as chlorine and fluorine. The five new derivatives of BE, two inhibited significantly INF-γ and COX-2. Next, we evaluated in cell cytotoxicity of five new derivatives of betulin (LAFIS 2a, 2b, 2c, 2d and 2e) and AB (LAFIS 1a, 1b, 1c, 1d, 1e and 1f) derivatives, against the four tumor cell lines and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). BE derivatives showed no promising antiproliferative activity (IC50> 70μM), but were not toxic to PBMCs (IC50> 100μM). However, AB derivatives proved toxic to PBMC and not selective for tumor cell lines.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-12T20:37:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-13T22:34:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:34:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Considerado um problema de saúde pública, o câncer tem tido um grande impacto em toda a comunidade, seja em países desenvolvidos ou em países em desenvolvimento. Em mulheres, destacam-se os cânceres de mama e útero, sendo o primeiro o de maior incidência entre as mulheres. Uma detecção precoce desses dois tipos de câncer pode significar um aumento da sobrevida do paciente e de sua cura. Uma das áreas de pesquisa voltada para o estudo do câncer é a busca por biomarcadores que possam ser úteis em sua detecção e/ou tratamento. É de notório conhecimento que uma expressão alterada de glicoconjugados de superfície celular podem contribuir para o fenótipo maligno em eventos oncogênicos. Entre os glicanos desses glicoconjugados, a polilactosamina (poliLacNAc) tem sido alvo de diversos estudos devido ao seu potencial papel em diversas eventos oncogênicos, em especial um envolvimento com o potencial metastático. Assim, a expressão de poliLacNAc e outros carboidratos (GlcNAc) foram avaliados, através de histoquímica com lectinas, em amostras normais e transformadas de colo uterino e mama em diferentes estágios de transformação. Também foram verificados a expressão, utilizando imunohistoquímica, de glicosiltransferases (MGAT5, β3GnT2 e β3GnT3) que podem alterar a expressão das poliLacNAc e galectina-3 (Gal-3), uma proteína que tem afinidade por polilactosaminas que também tem sido associada a eventos oncogênicos, incluído a metástase. Nas amostras de tumores de colo uterino foi observado a presença de cadeias de poliLacNAc foi observada mais expressas nas amostras com maior grau de transformação (carcinomas) quando comparado com as outras amostras normais e pré-malignas, além de que uma expressão nuclear também foi observada significantemente nesse tipo de amostra. Nas amostras de tecidos de mama as poliLacNAc foram pouco expressas em todos as amostras. No entanto, uma expressão de MGAT5, uma enzima que pode regular a expressão de poliLacNAc e que também associada à metástase foi mais observada nas amostras com grau de transformação mais elevado. Essas observações reforçam o potencial envolvimento das cadeias de poliLacNAc e de enzimas chaves que regulam sua expressão, como a MGAT5, durante os eventos de transformação oncogênica. / A public health problem, cancer has a major impact n the entire community, in developed countries or in developing countries. In women, breast and uterine cancers are the most prevalent, being breast cancer the first. An early detection of both cancer can allow an increasing of patient survival and rate of health. One of the goals of cancer science is the biomarker research to use them at detection and/or treatment. It is known that an altered expression of glycoconjugates of cell surface can contribute to the malignant phenotype at oncogenic events. Among these glycans, polylactosamine (polyLacNAc) has been target of many studies for its potential role in many oncogenic events, in especial at the metastatic potential. Thus, the expression of polyLacNAc and others carbohydrates (GlcNAc) was evaluated, using lectin histochemistry, in normal and transformed samples of uterine and breast tissue at different stages. It was also evaluated the expression, by immunohistochemistry, of glycosyltrasnferases (MGAT5, β3GnT2 e β3GnT3) which could regulate polyLacNAc chains and of galectin-3 (Gal-3), a binding protein for polyLacNAc which has been correlated to oncogenic events, including metastasis. At uterine samples, was observed the presence of polyLacNAc chains at high levels in samples which higher degree of transformation (carcinoma) when compared to the normal and pre-malignant samples, and was observed a significant nuclear expression at these samples. In breast samples, polyLacNAc was observed at lower levels at all samples. Besides, MGAT5 expression was observed at higher levels in samples which higher transformation degree. These findings reinforces the potential involvement of polyLacNAc chains and the enzymes involved in its expression, like MGAT5, at oncogenic events.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-13T19:42:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Karla Mirella Roque Marques.pdf: 1930620 bytes, checksum: 68db38f01378c0217e921e42bca39fb6 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-19T17:27:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Karla Mirella Roque Marques.pdf: 1930620 bytes, checksum: 68db38f01378c0217e921e42bca39fb6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-19T17:27:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Karla Mirella Roque Marques.pdf: 1930620 bytes, checksum: 68db38f01378c0217e921e42bca39fb6 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / CAPES / Nitro-heterocíclicos e tiossemicarbazonas são compostos que despertam o interesse da comunidade científica por apresentarem importantes propriedades citotóxicas e antineoplásicas, entre outras. Neste sentido, com o presente estudo se propôs a avaliar o potencial antitumoral de nove novos derivados 5-nitrotiofeno-tiossemicarbazônicos em diferentes linhagens de células tumorais humanas, assim como seus possíveis mecanismos de ação associados. Os ensaios de citotoxicidade com o método do MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio) frente a sete linhagens de células neoplásicas (HEp-2, HL-60, HT-29, K-562, MCF-7, MOLT-4 e NCIH-292) e células mononucleares do sangue periférico humano utilizando o reagente alamar blue. A análise morfológica foi realizada através de microscopia óptica, por coloração com hematoxilina/eosina. Os estudos de mecanismos de ação foram feitos através dos testes de inibição da topoisomerase II, despolarização de membrana mitocondrial e análise do ciclo celular. O estudo de docking foi realizado usando o sitio ativo da enzima Ribonucleotídeo Redutase, PDB id: 4X3V com auxílio do programa Autodock. Os resultados dos testes de citotoxicidade, revelaram que oito compostos foram capazes de promover a inibição do crescimento celular com percentual superior a 80% em pelo menos uma das linhagens avaliadas, com destaque para o composto LNN-05 que exibiu citotoxicidade frente ao maior número de linhagens com valores de CI50 entre 0,5 e 1,9 μg/mL. No teste do Alamar Blue, os derivados avaliados apresentaram CI50 > 4,0 μg/mL em células saudáveis, mostrando-se menos tóxicos que a doxorrubicina. Os testes de atividade hemolítica em eritrócitos humanos também indicaram ausência de hemólise em 100% para os compostos testados até a concentrações máxima avaliada (250 μg/mL). A avaliação morfológica por microscopia óptica, demonstrou que as células de K-562 apresentaram características de morte celular por apoptose, quando tratadas com o derivado LNN-05 nas concentrações de 0,7, 1,4 e 2,8 μg/mL. Contudo, os estudos de mecanismo de ação conduzidos com o derivado LNN-05 indicaram que sua atividade não se dá por inibição da enzima topoisomerase II. No entanto, a avaliação do potencial transmembrânico e a análise do ciclo celular evidenciaram que o LNN-05, na concentração de 2,8 μg/mL, causa despolarização mitocondrial em 64,2 ± 2,5%; e indução de parada do ciclo celular na fase G1 em células K-562, na dose de 1,4 μg/mL com acúmulo de 86,1% de células nesta fase. Estudo de docagem molecular indicou que os compostos se ligam à enzima ribonucleotídeo redutase, através dos resíduos Glicina50, Valina51, Treonina52, Metionina14 e principalmente, a Arginina21 e que o melhor ligante potencial é o composto LNN-03 com Evalue = -7,84 Kcal/mol, sendo LNN-05 um dos derivados com menor afinidade de ligação com Evalue = -6,39 Kcal/mol. Com base nesses resultados foi possível identificar que derivados 5-nitrotiofeno-tiossemicarbazônicos possuem promissor potencial citotóxico em células neoplásicas humanas, porém estudos adicionais para elucidação dos possíveis mecanismos de ação ainda necessitam ser conduzidos para completo entendimento de seus modos de ação. / Nitro-heterocyclic and thiosemicarbazone are compounds that have aroused the scientific community interest due to, but not limited to its cytotoxic and antineoplastic activities. In this regard, we propose in this project to evaluate the antitumor potential of nine new 5-nitrothiophene-thiosemicarbazone derivatives against several human cancer cell lines, as well as its possible mechanisms of action. The cytotoxicity tests to evaluate the derivatives activity were the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] test for the seven cancer cell lines (HEp-2, HL-60, HT-29, K-562, MCF-7, MOLT-4 and NCIH-292), and peripheral blood mononuclear human cells utilizing the alamar blue test. To analyse the cells morphology, cells were stained with hematoxylin/eosin dyes and visualized through optical microscopy. The mechanism of action studies was accessed via topoisomerase II inhibition, mitochondrial depolarization and cell cycle analysis. Docking analysis using the active site of the ribonucleotide reductase enzyme, PBD id:4X3V was performed utilizing the Autodock software. The results obtained from the MTT test demonstrated that eight compounds were capable of inhibit cell growth more than 80% in at least one of the cell lines, with a highlight for the LNN-05 compound which exhibited cytotoxic activity against most of the cell lines with the lowest IC50 value (0.5 and 1.9 μg/mL). In the alamar blue test, the derivatives showed IC50 value > 9.0 μg/mL against non-cancer cells (peripheral blood mononuclear cells), which means that the compounds are less toxic than doxorubicin. The haemolytic activity test using human erythrocyte also indicated absence of haemolysis for all tested compounds with a maximum dose of 250 μg/mL. The morphological evaluation showed that K-562 cells presented characteristics of cellular death by apoptosis, when treated with the derivative LNN-05 at 0,7, 1,4 e 2,8 μg/mL concentrations. The mechanism of action studies was carried out using the LNN-05 derivative and the analysis suggests that its activity is not by the inhibition of the topoisomerase II enzyme. However, the evaluation of the transmembrane potential and the cell cycle analysis revealed that LNN-05 causes mitochondrial depolarization of 64.2 ± 2.5% at the concentration of 2.8 μg/mL and cell cycle arrest in G1 phase, totalizing 86.1 ± 0.3% at 1.4 μg/mL against K-562 cells. The docking analysis indicated that the compounds bind to the enzyme through the residues of glicine50, valine51, threonine52, methionine14, and mainly arginine21. In addition, the best ligand was LNN-03 with Evalue = -7.84 Kcal/mol, and LNN-05 one of the weakest ligand with Evalue = -6.39 Kcal/mol. Concerning this study, we could identify that the 5-nitrothiophene-thiosemicarbazone derivatives have promising cytotoxic potential against human neoplastic cells; however, further studies are needed to fully elucidate the mechanisms of action of the tested derivatives.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-25T20:00:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Larissa Chaves Costa Franca.pdf: 3895385 bytes, checksum: 85214a18492f2479f37dac3c583e539d (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-27T22:20:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Larissa Chaves Costa Franca.pdf: 3895385 bytes, checksum: 85214a18492f2479f37dac3c583e539d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-27T22:20:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Larissa Chaves Costa Franca.pdf: 3895385 bytes, checksum: 85214a18492f2479f37dac3c583e539d (MD5) Previous issue date: 2017-03-30 / FACEPE / Novas e eficazes estratégias para o tratamento do câncer são um grande desafio atualmente. Entre as moléculas anticancerígenas disponíveis no mercado, a β-lapachona (β-lap) tem atraído a atenção por sua potente atividade antitumoral. A encapsulação da β-lap em lipossomas sítio-específicos é uma alternativa na melhoria da eficácia terapêutica, direcionando às células cancerígenas, promovendo assim uma redução dos efeitos adversos. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi encapsular a β-lap em lipossomas sítio-específicos utilizando a Concanavalina A (ConA) como molécula de vetorização às células do câncer. Os lipossomas com concentração lipídica total de 60 mM foram preparados pelo método de hidratação do filme lipídico seguido de sonicação. Utilizando o mesmo método, lipossomas contendo β-lap (0,5 mg/mL) foram produzidos. Diâmetro médio das vesículas, potencial zeta, conjugação da ConA e a eficiência de encapsulação (EE%) da β-lap nos lipossomas foram avaliados. Calorimetria de titulação isotérmica (ITC) foi usada para medir a energia de ligação entre as biomoléculas que compõem o lipossoma. A atividade da ConA foi avaliada antes e depois da conjugação na superfície dos lipossomas pelo ensaio de hemaglutinação. Finalmente, a captura dos lipossomas contendo ConA pelas células de câncer de mama (MCF-7) foi realizada por microscopia de fluorescência. Os lipossomas não revestidos e revestidos com ConA apresentaram tamanho e potencial zeta variando de 97,46 ± 2,01 nm a 152,23 ± 2,73 nm e de -6,83 ± 0,28 mV a -17,23 ± 0,64 mV, respectivamente. A conjugação da ConA e a EE% da β-lap foram aproximadamente 100%. A conjugação da ConA às biomoléculas foi avaliada por parâmetros termodinâmicos (ΔH, ΔS e ΔG) demostrando processos favoráveis e espontâneos. O ensaio de hemaglutinação confirmou que a ConA permaneceu ativa nos lipossomas, uma vez que o Lipo-ConA e o Lipo-PEG-ConA foram capazes de hemaglutinar as hemácias em 128⁻¹ e 256⁻¹, respectivamente, fato não observado com os lipossomas sem ConA. Finalmente, imagens obtidas a partir da microscopia de fluorescência indicaram uma maior captura dos lipossomas revestidos com ConA pelas células MCF-7 após 15 minutos e 24 horas de incubação. Portanto, a captura dos lipossomas pelas células MCF-7 foi influenciada pela presença da ConA na superfície dos mesmo, sugerindo a sua aplicação como um promissor sistema sítio-específico para direcionar a β-lap às células cancerígenas. / New and effective strategies for the treatment of cancer are currently a big challenge. Among the available anticancer molecules in the market, β-lapachone (β-lap) has attracted attention for its potent antitumor activity. The encapsulation of β-lap in site-specific liposomes is an alternative to improving therapeutic efficacy by targeting to the cancer cells, promoting a reduction of adverse effects. The aim of this work was to encapsulate β-lap in site-specific liposomes using Concanavalin A (ConA) as a targeting molecule to cancer cells. Liposomes with total lipid concentration of 60 mM were prepared by the lipid film hydration method followed by sonication. Using same method, liposomes containing β-lap (0.5 mg / mL) were produced. Mean vesicle diameter, zeta potential, ConA conjugation and encapsulation efficiency (EE%) of β-lap in liposomes were evaluated. Isothermal titration calorimetry (ITC) was used to measure the binding energy between the biomolecules, which compose the liposomes. ConA activity was evaluated before and after the surface conjugation of the liposomes by the hemagglutination assay. Finally, the uptake of ConA-coated liposomes by human breast cancer cells (MCF-7) was performed by fluorescence microscopy. Uncoated and ConA-coated liposomes showed size and zeta potential ranging from 97.46 ± 2.01 nm to 152.23 ± 2.73 nm and -6.83 ± 0.28 mV at -17.23 ± 0 , 64 mV, respectively. The conjugation of ConA and EE% of β-lap were approximately 100%. The confirmation of lipid and ConA conjugation by thermodynamic parameters (ΔH, ΔS and ΔG) was determined by favorable and spontaneous process. Hemagglutination assay confirmed that ConA remained active in the liposomes, once Lipo-ConA and Lipo-PEG-ConA were able to hemagglutinate red blood cells at 128⁻¹ and 256⁻¹, respectively, this fact was not observed with liposomes without ConA. Finally, images obtained from fluorescence microscopy indicated a greater capture of the ConA coated liposomes by MCF-7 cells after 15 minutes and 24 hours of incubation. Therefore, the capture of liposomes by MCF-7 cells was influenced by the presence of ConA on the surface of them, suggesting its application as a promising site-specific system to direct β-lap to the cancer cells.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Glêzia Renata da Silva Lacerda.pdf: 4644374 bytes, checksum: 02485394848694860d6eb63dbaec6f39 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / CAPES / Streptomyces é produtor de diversos metabólitos secundários, incluindo L-asparaginase, uma enzima que hidrolisa a asparagina em ácido aspártico e amônia. Logo, tem sido utilizada como agente quimioterápico no tratamento da leucemia linfoblástica aguda, pois estas células não produzem asparagina e dependem do aminoácido livre para a síntese proteica. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade citotóxica, genotóxica e imunomodulatória da L-asparaginase produzida por Streptomyces ansochromogenes UFPEDA-3420. A enzima foi produzida a partir da determinação dos parâmetros ideais de cultivo do micro-organismo. Sua atividade foi determinada pela dosagem de amônia liberada por Nesslerização. O extrato bruto foi purificado por métodos cromatográficos. O peso molecular foi determinado por eletroforese SDS-PAGE. O efeito citotóxico da L-asparaginase foi observado frente às linhagens de células tumorais: HEp-2 (carcinoma de laringe), NCIH-292 (carcinoma mucoepidermoide de pulmão), MOLT-4 (Leucemia linfoblástica humana), K562 (leucemia mielóide), HL-60 (leucemia aguda promielocítica) e MCF-7 (adenocarcinoma de mama), utilizando o ensaio do MTT. Os efeitos genotóxicos foram determinados pelos Testes Cometa Alcalino e de Micronúcleo nas linhagens tumorais NCIH-292, MCF-7 e MOLT-4 e em células normais PBMC (Células Mononucleadas de Sangue Periférico), utilizando as concentrações 12,5, 25 e 50 μg/mL de L-asparaginase, como controle positivo a Doxorrubicina na concentração da sua IC₅₀ para cada célula tumoral: 0,5 μg/mL (NICH-292), 0,04 μg/mL (MOLT-4) e 0,2 μg/mL (MCF-7) e como controle negativo as células sem tratamento. Os parâmetros ideais de cultivo foram fermentação em meio M9, 48 horas, pH=6, 37ºC e rendimento máximo de 743.29 UI/mL. A enzima foi purificada até homogeneidade com fator de purificação 6,06, rendimento 27,68% da atividade inicial e atividade específica final 35.205,76 UI/mg. A enzima purificada apresentou peso molecular de 63,99 kDa, com atividade catalítica ótima em pH=7 e 40ºC. L-asparaginase apresentou valores de Km de 3,224 mM e Vmax de 161,29 UI/min. Quanto aos efeitos citotóxicos, apresentou IC₅₀ de 25 μg/mL frente à linhagem MOLT-4. Foi observado que esta substância possui efeitos genotóxicos sobre as linhagens estudadas. No parâmetro Índice de Danos, as três linhagens tumorais apresentaram resultados significativos para todas as concentrações testadas quando comparadas com células não tratadas, exceto na concentração de 12,5 μg/mL na linhagem MOLT-4. No Teste do micronúcleo, foi observado que em todas as células houve indução à formação de micronúcleos, coferindo efeito genotóxico a enzima. Isso demonstra que nas linhagens MOLT-4 e PBMC, tanto o parâmetro células micronucleadas quanto a frequência de micronúcleos aumentaram de acordo com o aumento da concentração de L-asparaginase, demonstrando um efeito dose/resposta positivo. L-asparaginase induziu a ativação e proliferação de linfócitos TCD8+ e produziu níveis elevados de TNF-α, IFN-γ, IL-2 e IL-10 em 24 horas. O presente estudo possui grande relevância científica, pois consiste no primeiro relato de produção de L-asparaginase por Streptomyces ansochomogenes UFPEDA-3420, sua ação genotóxica em células tumorais e normais e atividade imunomodulatória, de forma inédita. Esse fato é importante, pois L-asparaginase tem sido empregada nas terapias convencionais de controle e tratamento do câncer. Dessa forma, esta enzima configura-se como molécula promissora para utilização em modelos in vivo e para aprofundar testes pré-clínicos. / Streptomyces is a producer of several secondary metabolites, including L-asparaginase, an enzyme that hydrolyzes asparagine in aspartic acid and ammonia. Therefore, it has been used as chemotherapeutic agent in the treatment of acute lymphoblastic leukemia, since these cells doesn’t produce asparagine and depend on free amino acid for protein synthesis. The objective of this study was to evaluate the cytotoxic, genotoxic and immunomodulatory activity of L-asparaginase produced by Streptomyces ansochromogenes UFPEDA-3420. The enzyme was produced from the determination of the ideal microorganism culture parameters. Its activity was determined by the dosage of ammonia released by Nesslerization. The crude extract was purified by chromatographic methods. The molecular weight was determined by SDS-PAGE electrophoresis. The cytotoxic effect of L-asparaginase was observed against tumor cell lines: HEp-2 (laryngeal carcinoma), NCIH-292 (mucoepidermoid carcinoma of the lung), MOLT-4 (human lymphoblastic leukemia), K562(myeloid leukemia), HL-60 (promyelocytic acute leukemia) and MCF-7 (breast adenocarcinoma) using the MTT assay. The genotoxic effects were determined by Alkaline Comet and Micronucleus Tests in NCIH-292, MCF-7 and MOLT-4 tumor cell lines and in PBMC (Mononuclear Peripheral Blood Cells), using the concentrations 12.5, 25 and 50 μg/mL of L-asparaginase, as a positive control to Doxorubicin at the concentration of its IC50 for each tumor cell: 0.5 μg/mL (NICH-292), 0.04 μg/mL (MOLT-4) and 0.2 μg/mL (MCF-7) and as a negative control the cells without treatment. The ideal culture parameters were fermentation in M9 medium, 48 hours, pH=6.37 and maximum yield of 743.29 IU/mL. The enzyme was purified to homogeneity with purification factor 6.06, yield 27.68% of the initial activity and final specific activity 35,205.76 IU/mg. The purified enzyme had a molecular weight of 63.99 kDa, with optimum catalytic activity at pH=7 and 40ºC. L-asparaginase had values of Km of 3.224 mM and Vmax of 161.29 IU/min. Regarding the cytotoxic effects, IC50 of 25 μg/mL was presented in relation to the MOLT-4 lineage. It was observed that this substance has genotoxic effects on the studied strains. In the parameter Damage Index, the three tumor lines presented significant results for all the concentrations tested when compared to untreated cells, except in the concentration of 12.5 μg/mL in the MOLT-4 lineage. In the Micronucleus test, was observed that in all the cells there was induction to the formation of micronuclei, cofering genotoxic effect to the enzyme. This demonstrates that in the MOLT-4 and PBMC lines, both the micronucleate parameters and micronucleus frequency increased as the L-asparaginase concentration increased, demonstrating a positive dose/response effect. L-asparaginase induced the activation and proliferation of TCD8+ lymphocytes and produced elevated levels of TNF-α, IFN-γ, IL-2 and IL-10, in 24 hours. The present study has great scientific relevance, since it consists of the first report of production of L-asparaginase by Streptomyces ansochomogenes UFPEDA-3420, its genotoxic action in normal and tumor cells and immunomodulatory activity, in an unprecedented way. This fact is important because L-asparaginase has been used in conventional cancer treatment and control therapies. Thus, this enzyme is configured as a promising molecule for use in vivo models and to deepen preclinical tests.