Orientador: Antonio Carlos Paes / Coorientador: Osimar de Carvalho Sanches / Banca: Maria Lúcia Gomes Lourenço / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Erica Engelberg Teixeira da Silva Hucke / Banca: Helder Esteves Thomé / Resumo: Ehrlichiose Monocítica Canina (EMC) é uma enfermidade infecciosa, potencialmente fatal, causada por Ehrlichia canis, transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus. O curso da enfermidade é dividido em três fases: aguda, subclínica e crônica. O objetivo deste estudo foi avaliar as lesões anatomopatológicas que ocorreram no parênquima e no endotélio vascular do encéfalo, coração, pulmão, fígado, rim, baço e linfonodo mesentérico de 16 cães que vieram a óbito acometidos pela EMC na fase crônica. Esses animais apresentaram sinais clínicos neurológicos, porém na avaliação microscópica não exibiam lesões que justificassem esses sintomas. No coração foi possível notar a presença de alterações vasculares visíveis, como Coagulação Intravascular Disseminada, necrose dos miócitos próximos a esses vasos, congestão e hemorragias devido à severa trombocitopenia desenvolvida durante a infecção. No pulmão notou-se pneumonia em grande parte dos animais estudados. O fígado também se apresentou acometido, mas não diretamente pela infecção, mas sim por consequência de outros fatores prejudiciais relacionados à doença. Em todos os rins avaliados a glomerulonefrite se mostrou presente. Em todos os 16 animais pode-se notar a esplenomegalia. O linfonodo mesentérico não é uma estrutura muito estudada em animais com EMC, mas pode-se notar um grande infiltrado plasmocitário. No entanto, cocluiu-se que a vasculite foi responsável por grande parte das lesões, sendo predominante o infiltrado plasmocitário / Abstract: Canine Monocytic Ehrlichiosis (CME) is an infectious disease, potentially fatal, caused by Ehrlichia canis, transmitted by Rhipicephalus sanguineus. The course of the disease is divided into three stages: acute, chronic and subclinical. The aim of this study was to evaluate the pathological lesions that occurred in the parenchyma and the vascular endothelium of the brain, heart, lung, liver, kidney, spleen and mesenteric lymph node of 16 dogs that died affected by CME in the chronic phase. These animals showed neurological signs, but in microscopic evaluation showed no injury to justify these symptoms. In the heart it was possible to notice the presence of visible vascular abnormalities, such as disseminated intravascular coagulation, necrosis of the myocytes near these vessels, congestion and bleeding due to severe thrombocytopenia developed during infection. In the lung was noted pneumonia in most animals studied. The liver also appeared affected, but not directly by infection, but as a result of other harmful factors related to the disease. In all evaluated kidneys showed this glomerulonephritis. In all 16 animals can be noted splenomegaly. The mesenteric lymph node is not a very studied structure in animal CME, but you may notice a large plasma cell infiltrate. However, the vasculitis was responsible for much of the lesions, predominant being the plasma cell infiltrate / Doutor

Orientador: Marileda Bonafim Carvalho / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Luciano Henrique Giovaninni / Resumo: A erliquiose canina é uma doença causada pela bactéria Gram-negativa Ehrlichia canis transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus. A enfermidade é endêmica em muitas regiões do mundo e motivo de investigação científica em muitos países. Independentemente dos muitos avanços sobre a patogênese e o diagnóstico da doença existem poucos conhecimentos sobre o acometimento renal. O presente estudo teve por escopo caracterizar a condição clínico-laboratorial, com enfoque na função renal, de cães com erliquiose monocítica canina (EMC) naturalmente adquirida, associada ou não à babesiose, ambas em fase subclínica, antes, durante e após tratamento convencional. Foram avaliados 30 cães adultos, sem distinção de sexo ou de raça, atendidos no Hospital Veterinário - Unesp - campus de Jaboticabal. Os animais foram distribuídos em 3 grupos - cães normais (GN; n=5), cães com erliquiose subclínica (GE; n=15) e cães com erliquiose e babesiose subclínicas (GEB; n=10). O diagnóstico de EMC foi feito com base nos achados hematológicos, testes de sorologia e PCR. Os achados das avaliações de função renal sugerem fortemente que cães com EMC subclínica, com ou sem coinfecção por Babesia vogeli, apresentam glomerulopatia de curso insidioso. Assim, pode ser sugerido que em áreas endêmicas para estas doenças, as avaliações de rotina incluam contagem de plaquetas e teste sorológico rápido dot- ELISA para diagnóstico de erliquiose para cães com histórico de parasitismo por carrapatos. Intervenções precoces poderão prevenir os casos, tão comuns em nosso meio, de erliquiose crônica diagnosticada somente quando a insuficiência renal crônica se manifesta / Abstract: The canine ehrlichiosis is a disease caused by the Gram-negative bacterium Ehrlichia canis transmitted by the tick Rhipicephalus sanguineus. The disease, endemic in many regions of the world, is an issue of scientific research in many countries. Regardless of many advances in studies on the pathogenesis and diagnosis of the disease, there are few knowledges about the renal involvement. The present study aimed to characterize the clinical and laboratory condition, focusing on renal function in dogs with canine naturally acquired monocytic ehrlichiosis (CME) associated or not with babesiosis in the subclinical phase, before, during, and after conventional treatment. For this purpose, it were evaluated 30 adult dogs, with no gender or breed distinction, selected at the Veterinary Hospital - Unesp - campus Jaboticabal. The animals were distributed in three groups - normal dogs (GN; n=5), dogs with subclinical ehrlichiosis (GE; n=15) and dogs with subclinical ehrlichiosis and babesiosis (GEB, n =10). The CME diagnosis was made based on hematologic findings, serologycal and PCR techniques. Renal function findings strongly suggest that dogs with subclinical CME, associated or not to Babesia vogeli coinfection, develop insidious glomerulopathy. Results suggest that in endemic areas for these diseases, the routine assessments including platelet count and quick serologycal test dot- ELISA are reliable for the diagnosis of canine ehrlichiosis for dogs with a history of parasitism by ticks. Early intervention may prevent cases, so common in our region, of chronic ehrlichiosis diagnosed only when chronic renal failure is manifested / Mestre

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Daniela Gomes da Silva / Resumo: A erliquiose é uma hemoparasitose que acomete cerca de 20 a 30% dos cães atendidos nas clínicas veterinárias do Brasil, podendo levá-los ao óbito. Predomina nas regiões mais quentes do planeta devido ao fato de seu hospedeiro intermediário, um artrópode, prevalecer nos locais de altas temperaturas. Em função da gravidade da enfermidade para os animais e ao potencial zoonótico da doença, estudos envolvendo as possíveis alterações renais são essenciais para o diagnóstico e prognóstico da doença. Neste ensaio, objetivou-se avaliar as proteínas séricas e urinárias de cães com erliquiose na fase subclínica, por meio da técnica de eletroforese em gel de poliagrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Os animais foram devidamente distribuídos em grupo controle (GC), 18 cães saudáveis e grupo doente (GD), integrado por 17 cães acometidos por erliquiose subclínica, sendo que o diagnóstico da infecção foi confirmado ou excluído levando-se em conta a associação de exames clínicos, sorológicos e PCR. Os resultados mostraram que os cães na fase subclínica da erliquiose apresentaram alterações laboratoriais como, trombocitopenia, hiperglobulinemia com hipoalbuminemia compensatória e aumento de proteínas totais, além de anemia. A partir do traçado eletroforético sérico, concluiu-se que os cães infectados na fase subclínica apresentaram elevação na concentração de transferrina, IgG de cadeia pesada, haptoglobina, alfa 1-glicoproteína ácida e proteína de peso molecular 23 kDa. A análise do traçado eletroforético urinário dos animais experimentais, associada com o resultado da UPC, o qual revela proteinúria limítrofe nos indivíduos doentes, demonstraram que existem lesões renais, tanto em nível glomerular quanto tubular, em cães com erliquiose na fase subclínica, entretanto, mais estudos se fazem necessários para esclarecer e detalhar melhor as referidas lesões / Abstract: Ehrlichiosis is a hemoparasitosis that affects around 20 to 30% of dogs treated at veterinary clinics in Brazil, which may lead the animal to death. It predominate in the warmer regions of planet because of its intermediate host, an arthropod, that lives in high temperature regions. Due to the severity of the disease to animals and its zoonotic potencial, studies involving the possibles renal disorders are essential for the diagnosis and patient's prognosis. In this trial aimed to evaluate serum and urinary proteins of dogs with ehrliquiosis in the subclinical stage, by electrophoresis in poliacrilamida gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). The animals were divided into control group (CG), 18 health dogs and sick group (SG), the last one with 17 dogs with diagnosis of erlichiosis subclinical, and the diagnosis of infection was conformed or excluded by association of clinical exams, serological tests and PCR. The results showed that dogs on the subclinical stage of ehrlichiosis had laboratory changes as thrombocytopenia, hyperglobulinemia associated with compensatory hypoalbuminemia and increased total protein, and anemia. From the serum electrophoresis, it was concluded that the infected dogs in subclinical phase had increased concentration of transferrin, the heavy chain of IgG, haptoglobin, alpha 1-acid glycoprotein and protein molecular weight 23 kDa. The analysis of urinary electrophoretic trace of the experimental animals, the result associated with the UPC, which shows borderline proteinuria in diseased dogs, showed that there renal lesions, both as tubular glomerular level, in dogs with erliquiosis in the subclinical stage, however, more studies are needed to clarify and better detail these injuries / Mestre

Orientador: Renée Laufer Amorim / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Antonio Carlos Alessi / Resumo: Os mastócitos são células provenientes do precursor CD34 da medula óssea, o mastocitoma (MCT) pertence ao grupo das neoplasias de células redondas e possui etiologia desconhecida, é a neoplasia cutânea mais comum em cães, sem predileção por raça, sexo ou idade. Seu comportamento biológico é bastante agressivo e de alta frequência. A graduação histopatológia proposta Patnaik et al., (1984), é o critério mais utilizado para a graduação histopatológica da neoplasia sendo o grau 1 uma neoplasia bem diferenciada, o grau 2 moderadamente diferenciada e o grau 3 pouco diferenciada ou anaplásica. O presente trabalho teve como objetivos a avaliação do ínidice proliferativo e apoptotico dos MCT em lâmina de Microarranjo de tecido (TMA) utilizando a técnica de imunoistoquiímica e TUNEL. Para tal utilizou-se 166 casos de MCT compondo um arranjo em matriz de amostra tecidual, ou tissue microarray (TMA) com 190 amostras, sendo avaliado o padrão de marcação da proteína Kit, a proliferação celular com o anticorpo primário Ki67 e apoptose com o anticorpo primário caspase-3 clivada e pela técnica da Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Mediated dUTP Nick end Labeling Assey (TUNEL). Quando os casos foram avaliados quanto à imunoexpressão de c-KIT, os tumores (únicos e múltiplos) com expressão citoplasmática da proteína KIT tiveram uma taxa proliferativa maior e uma menor taxa apoptótica quando comparados aos com expressão membranosa. Os MCTs grau 3 tiveram um maior índice proliferativo (imunoexpressão de Ki67) quando comparados aos tumores de graus 1 e 2. Não foi observada correlação entre a imunomarcação do anticorpo primário caspase-3 clivada e a técnica de TUNEL, sendo que a técnica de TUNEL se mostrou mais eficaz na avaliação da apoptose que a imunomarcação para caspase-3 clivada / Abstract: Mast cells are from precursor CD34 cells bone marrow, the mast cell tumor (MCT) belongs to the group of round cell malignancies and has unknown etiology, is the most common skin cancer in dogs without distinction of race, sex or age. Its biological behavior is very aggressive and high frequency. The histopathological grading proposal from Patnaik et al., (1984), is the most commonly used criterion for the histopathological grade of the tumor is a tumor grade 1 are well-differentiated, grade 2 are moderately differentiated and grade 3 are poorly differentiated or anaplastic. This study aimed to evaluate the proliferative and apoptotic index of MCT in blade tissue microarray (TMA) using the TUNEL technique and immunohistochemistry. To this end we used 166 cases of MCT composing an tissue microarray (TMA) with 190 samples, and evaluated the pattern of protein labeling kit, cell proliferation, with the primary antibody Ki67 and apoptosis with primary antibody and cleaved caspase-3 by the technique of terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick End Labeling Mediated Assey (TUNEL). When the cases were evaluated for immunoexpression of c-KIT, tumors (single and multiple) with cytoplasmic KIT protein expression had a higher proliferative rate and a lower apoptotic rate when compared to those with membranous expression. Grade 3 MCTs had a greater proliferative index (Ki67 immunostaining) when compared with tumor grades 1 and 2. No correlation was observed between the immunostaining of primary antibody caspase-3 cleavage and TUNEL technique, and TUNEL technique was more effective in assessing apoptosis that immunostaining for cleaved caspase-3 / Mestre

Orientador: Júlio Lopes Sequeira / Banca: Renee Laufer Amorim / Banca: Sara Maria de Carvalho e Suzano / Resumo: Os linfomas não Hodgkin (LNHs) são as neoplasias hematopoiéticas mais comuns nos cães, sendo o Linfoma Difuso de Grandes Células B (DLBCL) o subtipo mais frequente. Os DLBCLs são neoplasias formadas por células linfoides B com padrão de crescimento difuso e podem apresentar pelo menos cinco variantes. O presente trabalho teve como objetivos traçar o perfil imunoistoquímico dos DLBCLs dos cães, classificá-los de acordo com os critérios estabelecidos pela WHO (2008), WHO veterinária (2002) e Classificação de Kiel e efetuar a avaliação dos anticorpos utilizados pelo método de microarranjo de tecido (TMA), comparando-o com o corte convencional. Foi avaliada a expressão imunoistoquímica de marcadores pan B (CD79a, CD20 e PAX-5); a determinação dos índices proliferativo (Ki-67) e apoptótico (caspase-3) e também da expressão de p53 mutante. Foram observados 24 linfomas centroblásticos monomórficos, 4 imunoblásticos B e 1 centroblástico polimórfico de acordo com a classificação de Kiel. Este perfil é de 25 Linfomas de Grandes Células B Difusos/ DLBCL, NOS variante centroblástica e 4 Imunoblásticos de Grandes Células /DLBCL, NOS variante imunoblástica, pela WHO de 2002 e 2008, respectivamente. Houve marcação em 100%, 75,8% e 58,6% dos casos para o CD79a, CD20 e PAX-5, respectivamente. A mediana de porcentagem de marcação para o Ki-67 e para a caspase-3 foi de 45,9% e 10%, respectivamente. Já a expressão da proteína p53 mutante foi verificada em 16 tumores (55,1%). A análise destes marcadores utilizando-se o TMA resultou em perfil imunofenotípico idêntico e medianas de caspase-3, Ki67 e p53 significativamente semelhantes quando comparadas com o corte convencional. Concluiu-se que em nossas amostras não houve diferença estatística entre os diferentes subtipos histológicos em relação aos índices proliferativo e apoptótico e expressão da p53. Ainda, o TMA é uma técnica adequada para avaliação do... / Abstract: Non Hodgkin lymphomas (LNHs) are the most common hematopoietic tumors of dogs, among which Diffuse Large B Cell Lymphoma (DLBCL) is the most frequent subtype. DLBCLs are tumors composed of lymphoid B cell with a diffuse growth pattern and may present at least five variants. The present work intended to delineate the immunohistochemical profile of canine DLBCL, classify them according to the criteria proposed by WHO (2008); veterinary WHO (2002) and Updated Kiel Classification and also perform the evaluation of the used antibodies on tissue microarray (TMA) method in comparison to conventional histological sections. The immunohistochemical expression of pan B markers (anti CD79a, anti CD20 and PAX-5) was assessed; as well as the determination of proliferation index (Ki-67) and apoptosis (caspase 3) and also the expression of the mutant p53. There were 24 monomorphic centroblastic lymphomas, 4 imunoblastic B and 1 polimorphic centroblastic according to Kiel. That profile is 25 Diffuse Large B Cell Lymphoma/ DLBCL, NOS centroblastic variant and 4 Large Cell Imunoblastic/ DLBCL, NOS imunoblastic variant according to WHO 2002 and 2008 respectively. Immunolabeling was seen in 100%, 75.8% and 58.6% of the cases for CD79a, CD20 and PAX-5 respectively. The immunolabeling median percentage of Ki67 was 45.9% and for caspase-3 it was 10%. The expression of mutant p53 was observed in 16 tumors (55.1%). The analysis of those markers using TMA resulted in identical imunophenotype and significantly similar medians of caspase-3, Ki67 e p53 when compared to conventional sections. In conclusion there was no statistical difference among the histological subtypes regarding proliferation and apoptotic indexes and p53 expression in our samples. Also, TMA is an adequate technique for evaluating imunophenotype, proliferation and apoptotic indexes as well as presence of mutant p53 / Mestre

Orientador: Marlos Gonçalves Sousa / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Gláucia Bueno Pereira Neto / Resumo: A degeneração mixomatosa da válvula mitral (DMVM) é uma cardiopatia progressiva e crônica em cães, caracterizada por um quadro de insuficiência cardíaca congestiva (ICC). Embora os sinais clínicos congestivos sejam importantes, o processo de remodelamento miocárdico que acompanha as cardiopatias pode indicar que o organismo está reagindo contra as imposições da doença. Dessa forma, este estudo foi concebido para avaliar as concentrações séricas das interleucinas (IL) 1b e 4, correlacionando-as aos indicadores ecodopplercardiográficos de função cardíaca em cães com DMVM, apresentam ICC classes Ib e II. O estudo ecocardiográfico evidenciou alterações morfológicas progressivas à medida que a enfermidade se intensificava, comparativamente aos cães saudáveis empregados como controle. Valendo-se do recurso doppler tecidual, constatou-se disfunção diastólica nos animais com DMVM e ICC classe II. A análise das concentrações séricas de IL-1b identificou valores estatisticamente inferiores nos cães da classe Ib comparativamente aos animais controle. Contudo, os cães da classe II apresentaram resultados semelhantes ao grupo controle e aos animais da classe Ib. Da mesma forma, a análise dos resultados da concentração sérica de IL-4 não demonstrou quaisquer diferenças significativas entre grupos. Houve correlação positiva entre IL-1 e as frações de encurtamento e ejeção, ao passo que correlação negativa foi constatada entre a velocidade máxima da onda A do fluxo mitral e as concentrações séricas de IL-1b e IL-4. Foi possível concluir que a ICC decorrente de DMVM desencadeia alterações morfológicas no coração, resultando em disfunção diastólica nos cães classe II. Por outro lado, as concentrações séricas de IL- 1b and IL-4 não permitiram categorizar a severidade da DMVM / Abstract: Myxomatous mitral valve disease (MMVD) is a progressive and chronic cardiopathy, which is characterized by the development of congestive heart failure (CHF). Although the signs of congestion are paramout, the process of remodeling that accompanies cardiac disease might indicate a reaction of the body against the alterations caused by the malady. Therefore, this study was conceived to evaluate the serum concentrations of interleukins (IL) 1b and 4, correlating them with the echocardiographic indicators of cardiac function in dogs with MMVD and CHF classes Ib and II. The echocardiographic study disclosed morphological alterations that progressed along the intensification of the disease, as compared with the control healthy dogs. The analysis of tissue doppler imaging documented diastolic dysfunction in dogs with MMVD and class II CHF. The serum concentration of IL-1b was statistically lower than those of both class Ib CHF and control healthy dogs. Nonetheless, similar results were recorded for dogs of class II CHF group and both controls and class Ib animals. Similarly, no significant difference among groups was attained regarding the serum concentration of IL-4. There was a positive correlation between IL-1b and both fractional shortening and ejection fraction, whereas a negative correlation was demonstrated between the peak velocity of mitral A wave and the serum concentrations of IL-1b and IL-4. It was concluded that CHF attributable to MMVD causes cardiac morphological alterations, leading to diastolic dysfunction in class II CHF dogs. Also, the serum concentration of IL-1b and IL-4 did not allow categorizing the severity of MMVD / Mestre

Orientador: Antonio Carlos Alessi / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Mirela Tinucci Costa / Resumo: Neoplasias mamárias são muito frequentes em cadelas. Entre 50 e 70% são malignas. Estudos recentes sobre carcinogênese têm abordado a detecção de células-tronco tumorais (CTTs) em neoplasias mamárias. A CTT é uma célula capaz de se autorrenovar e se diferenciar em células maduras no tecido a qual está inserida. Estudos em cães demonstraram marcações de CTTs por citometria de fluxo em culturas de neoplasias mamárias. Nesse estudo objetivou-se detectar as CTTs por meio de reações imuno-histoquímicas e relacioná-las com graus e tipos histológicos de neoplasias mamárias caninas. Para isso, 136 neoplasias mamárias classificadas de acordo com Cassali et al. (2011) foram selecionadas. Utilizou-se os anticorpos CD44, CD24, Oct-4 e ALDH-1. Quarenta apresentaram o fenótipo CD44+/CD24-, sendo a maioria em graus mais avançados e nas metástases. Para o marcador Oct-4 foi observado aumento significativo de células marcadas nos carcinomas sólidos, do grau II para o grau III. A marcação para o ALDH-1 quando positiva, associou-se com as neoplasias de maior grau de malignidade (II e III). Nos carcinossarcomas não houve diferença significativa entre a marcação dos componentes epiteliais e mesenquimais para os marcadores estudados. No grupo dos adenomas foram observadas poucas células marcadas para CD44 com aumento significativo de células marcadas para os anticorpos CD24 e Oct-4. Nesse grupo não foram observadas marcações para o ALDH-1. O inverso ocorreu nas metástases, sendo a marcação significativamente maior para o anticorpo CD44 e pouco ou ausente nos demais. Em estudos realizados em cães por citometria de fluxo foram encontradas porcentagens de marcações para o fenótipo CD44/CD24 semelhantes aos encontrados nesse trabalho. As marcações para o anticorpo Oct-4 nos carcinomas sólidos condiz... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Canine mammary neoplasias are very common in dogs and most of them are considered malignant. Strategies to new ways to treat these cancers have been proposed as the detection of cancer stem cells (CSC). A CSC is a cell able to self-renew and have abilities to form metastases. In canine mammary tumors these CSCs were isolated by flow cytometry by means of the surface markers CD44+/CD24-. The aims of this study was detect these CSCs by immunohistochemical reactions and relate them with grades and histological types of canine mammary neoplasias. Thus a sample of 136 breast neoplasias classified according by Cassali et al. (2011) were selected and performed immunohistochemical study for antibodies CD44, CD24, Oct-4 and ALDH-1. From 130 samples, 40 showed the phenotype CD44+/CD24-, mostly in the metastases. Grades III normally exhibited more CD44 than CD24. For the marker Oct-4 was significantly increased only in solid carcinomas. The ALDH-1 when present, is associated with a worse prognosis. In carcinosarcomas no significant difference between epithelial and mesenchymal components for markers of CSCs. Benign tumors scored low CD44, high to CD24 and Oct-4 and failed to score ALDH-1. In studies in dogs by flow cytometry were found percentages of CSCs markings similar to those found... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Coorientador: Daniela Bernadete Rozza / Banca: Hélio José Montassier / Banca: Geórgia Modé Magalhães / Resumo: As células dendríticas despertam atualmente um grande interesse de estudos, pois são alvos primários da atividade tumoral sobre o sistema imune. O objetivo principal deste estudo foi avaliar a relação entre o infiltrado inflamatório e as células dendríticas (DCs) nos carcinomas mamários do tipo simples em cadelas. Dois grupos de amostras foram formados, o primeiro composto por 18 amostras de tecido mamário sem alterações (grupo controle) e o segundo, de 26 carcinomas mamários do tipo simples (grupo tumor). Além disso, foram analisados 15 linfonodos provenientes das cadelas com tumor de mama e quatro linfonodos oriundos das cadelas sem tumor de mama. Foi realizada a imunodetecção de DCs mieloides imaturas e maduras, DCs plasmocitoides, linfócitos T, macrófagos e moléculas do complexo de histocompatibilidade maior classe II (MHC-II). Foram também identificados os mastócitos pela coloração especial de azul de toluidina. Para os linfonodos, realizou-se apenas a imunodetecção de DCs mieloides imaturas e maduras. A idade média das cadelas com tumor de mama foi de 9,3 anos (30%) e os cães sem raça definida (SRD) foram os mais afetados. Nenhum linfonodo apresentou focos de micrometástases. Das 17 cadelas acompanhadas para o estudo de seguimento, nove estão vivas e oito vieram a óbito. A causa de morte mais ocorrente foi a provocada por metástases (67%). Nas mamas com tumor, observou-se que os mastócitos e as DCs mieloides maduras apareciam nas regiões peritumorais. As DCs mieloides imaturas, as DCs plasmocitoides, os macrófagos e as células imunomarcadas para MHC-II foram visualizados somente no estroma tumoral. Já os linfócitos T foram encontrados nas porções tumoral e peritumoral. Nos linfonodos a marcação das DCs mieloides imaturas concentrou-se nos folículos linfoides e na zona paracortical; já as DCs maduras apareceram somente no centro dos folículos ... / Abstract: Dendritic cells currently represent a big focus of studies, because they're primary targets of tumor activity on the immune system. The main objective of this study was to evaluate the relationship between the inflammatory infiltrate and dendritic cells (DCs) in mammary carcinomas simple type in female's dogs. Two groups of mammary gland samples were formed, the first was composed of 18 mammary tissue samples unchanged (control group) and the second, with 26 mammary simple carcinomas (tumor group). In addition, 15 lymph nodes were analyzed from bitches with mammary gland tumor and four lymph nodes derived from bitches without mammary gland tumor. Immunodetection was performed to immature and mature myeloid DCs, plasmacytoid DCs, T cells, macrophages and molecules of the major histocompatibility complex class II (MHC -II). Mast cells have also been identified by the special staining toluidine blue. To lymph nodes, the immunodetection was performed only to immature and mature myeloid DCs. The average age of the bitches with mammary tumor was 9.3 years (30 %) and dogs without breed (SRD) were the most affected. No lymph node showed foci of micrometastases. From 17 bitches monitored for follow-up study, nine are alive and eight died. The cause of death more occurred was caused by metastasis (67%). In the mammary glands with tumor, it was observed that the mast cells and mature myeloid DCs appeared in peritumoral regions. The immature myeloid DCs, plasmacytoid DCs, macrophages and cells immunostained for MHC-II were seen only in the tumor stroma. The T cells were founded into the tumor and in peritumoral areas. Into the lymph nodes, the marking of immature myeloid DCs was concentrated in lymphoid follicles and paracortical zone; the mature DCs appeared only in the center of the lymphoid follicles. In mammary gland control, the number of inflammatory cells as well as DCs was minimal. Statistically ... / Mestre

Orientador: Andrigo Barboza De Nardi / Coorientador: Mirela Tinucci Costa / Coorientador: Reneé Laufer Amorim / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Daniel Guimarães Gerardi / Resumo: A via PI3K/AKT/mTOR está relacionada com a proliferação, síntese proteica, sobrevivência e motilidade das células. Mutações nesta via tem sido associadas com o processo carcinogênico de diferentes tipos tumorais. Atualmente, inibidores específicos de proteínas como a PI3K, AKT, mTOR, vem sendo testados com o intuito de otimizar a terapia antitumoral em seres humanos e animais. Além de potenciais alvos terapêuticos, o aumento da expressão de algumas destas proteínas tem sido associado a tumores de pior prognóstico em seres humanos. Em cães, o mastocitoma (MCT) é um tumor cutâneo extremamente comum, de comportamento bastante variável e etiologia ainda não esclarecida. Diante disso, o objetivo deste estudo, foi avaliar a imunomarcação dos componentes proteicos da via PI3K/AKT/mTOR, por meio da técnica de imuno-histoquímica e em um segundo momento, associar esses resultados com os parâmetros clínicos dos pacientes, com as características morfológicas e biológicas dos tumores e com o tempo de sobrevida dos pacientes, visando determinar possíveis marcadores prognósticos para esta neoplasia. Para tal 46 MCTs caninos foram utilizados. Todos os tumores apresentaram positividade na avaliação imuno-histoquímica para as proteínas analisadas. As proteínas p-AKT Thr 308 e p-S6K1 apresentaram forte intensidade de imunomarcação, quando comparadas a parâmetros associados a piores prognósticos. Esses resultados indicam que a forte intensidade de imunomarcação de p- AKT Thr 308 e p-S6K1 está relacionada a um pior prognóstico para os cães acometidos pelo MCT cutâneo / Abstract: The PI3K/AKT/mTOR pathway is related to proliferation, protein synthesis, cell motility and survival. Mutations in this pathway have been associated with the carcinogenic process in diferent tumor types. Currently, specific inhibitors of some proteins such as PI3K, AKT, mTOR, are being tested in order to optimize antitumor therapy in humans and animals. Apart from potential therapeutic targets, increased in immunostaining of some of these proteins have been associated with poorer prognostic in humans tumors. In dogs, mast cell tumor (MCT) is an extremely common skin tumor, which presents a highly variable behavior and unclear etiology. Therefore, the aim of this study was to evaluate the immunostaining of the protein components of PI3K/AKT/mTOR pathway, through the technique of immunohistochemistry, and in a second stage, correlate this results with clinical parameters of patients, with morphological and biological tumor characteristics and the survival time of patients to determine possible prognostic markers for this disease. For this, 46 canine MCTs were used. All tumors were positive in immunohistochemical analysis for the proteins analyzed. Proteins p-AKT Thr 308 and p-S6K1 showed increases in the intensity of immunostaining compared to parameters associated with worse prognosis. These results suggest that the increase in the intensity of immunostaining of p-AKT Thr 308 and p-S6K1 are related to a worse prognosis for dogs affected by cutaneous MCT / Mestre

Orientador: Noeme Sousa Rocha / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Cleverson Teixeira / Resumo: O carcinoma mamário é uma doença relativamente frequente entre as cadelas na faixa etária de 10 anos e apresenta morbidade importante, com expectativa de sobrevida média de 5 anos. A citoinclusão é usada rotineiramente na Medicina como método de escolha na investigação, pela rapidez que fornece subsídios para prever a resposta terapêutica. Entretanto, para a cadela se desconhece a aplicação da tal técnica, portanto, o estudo objetivou correlacionar os padrões morfológicos dos tumores mamários caninos encontrados na técnica de citoinclusão e na análise histológica da peça cirúrgica e comparar a marcação de RE, RP e CK5 nos os dois métodos em 25 amostras de carcinoma mamário. A citoinclusão e espécime cirúrgico foram submetidos ao processamento histológico, confecção das lâminas para coloração de hematoxilina-eosina (HE) e posterior reação imunoistoquímica (IQ) para receptores de estrógeno α (RE), progesterona (RP) e citoqueratina 5 (CK5). Foram consideradas positivas as marcações das células neoplásicas acima de 1% para RE e RP, e acima de 10% para CK5. Pela coloração de HE houve 100% de concordância no diagnóstico das neoplasias entre técnica de citoinclusão e análise histopatológica. A imunoistoquímica apresentou sensibilidade de 85,71%, 95,45% e 100% e índice Kappa de Cohen de 0,78, 0,84, e 0,95 para o RE, RP e CK5 respectivamente, e 100% de especificidade e p<0,01 para os três marcadores. Portando, a citoinclusão trata-se de um método acessível, rápido e de baixo custo, que oferece alta sensibilidade no diagnóstico citomorfológico e imunoistoquímico de carcinoma mamário em cadelas / Abstract: Breast carcinoma in a dog is a disease relatively frequent in bitches of 10 years old, displays important morbidity and evolve to death. The cell block for the diagnosis of injury in women is the method of choice in the investigation, because it provides subsidies to provide for response to therapy. However, for the dog is unknown the application of this technique, therefore, this study aimed to correlate the morphological patterns of canine mammary tumors between cell block technique and surgical specimen and compare the immunohistochemical marking of ER, PR and CK5 between the two methods in 25 samples. The cell block and surgical specimens were submitted to histological processing, preparation of slides for HE and subsequent immunohistochemistry (IQ) for estrogen receptor α (ER), progesterone (PR) and cytokeratin 5 (CK5). Were considered positive for ER and PR cases where there was marking on more than 1% of neoplastic cells and for CK5 the cases where there was marking on more than 10% of neoplastic cells. The level of agreement between the cell block and the surgical specimen was 86.9% for CK5 and 82.6% for the RE. For the HE staining was 100% agreement for the diagnosis of cancer between the techniques. Immunohistochemistry showed a sensitivity of 85.71%, 95.45% and 100% and Cohen's Kappa index of 0.78, 0.84, and 0.95 for ER, PR and CK5 respectively, and 100% specificity and p <0.01 for all three markers. Therefore the citoinclusão it is an affordable method, fast and low cost, which offers high sensitivity in immunohistochemical marker and in cytomorphological diagnosis of mammary carcinoma in female dogs / Mestre