O carcinoma epidermóide cutâneo de tronco e extremidades (CECTE) é doença localizada e tratável na maioria dos casos, com alta prevalência tanto em nosso meio como mundialmente. Apesar disto, pode cursar com progressão local, metastatização regional e distante, com morbidade e mortalidade. Fatores prognósticos relacionados a doença localmente avançada são pouco conhecidos e pesquisados. Este estudo objetiva conhecer a expressão de marcadores moleculares da família HER (EGFR, HER-2, HER-3, HER-4), E-caderina e podoplanina além de fatores clínicos, anatomopatológicos e dos próprios marcadores moleculares relacionados a metástases linfonodais e prognóstico em portadores de CECTE localmente avançado. A análise realizada foi retrospectiva com 63 pacientes de duas instituições Hospital de Câncer de Barretos e Amaral Carvalho de Jaú, portadores de CECTE localmente avançado (T3 e T4), através de pesquisa em prontuário dos pacientes, revisão dos blocos de parafina e lâminas para análise de dados anatomopatológicos e confecção de Tissue Micro Array para análise por técnica de imunohistoquímica da expressão dos marcadores da família HER, E-caderina e podoplanina nos tumores primários e nas metástases linfonodais quando presentes. Como resultados, tivemos no tumor primário EGFR com expressão aumentada (positiva) em 25,5% dos casos, HER-2 negativa em todos, HER-3 positiva em 87,3% e HER-4 em 47,3%, E-caderina positiva na membrana em 47,3% e citoplasma em 29,1%, podoplanina positiva em 29,1%. Nas metástases linfonodais EGFR teve expressão positiva em 40,0%, HER-2 negativa em todos, HER-3 positiva em 84%, HER-4 positiva em 44,0%, E-caderina positiva na xvii membrana em 28,0% e 3,6% no citoplasma, e a podoplanina em 40,0%. O infiltrado linfocitário intratumoral foi o único fator associado a presença de metástases linfonodais (53,3% contra 16,4%; p=0,046). Pacientes com tumores T3 tiveram maior taxa de sobrevida específica por câncer em cinco anos que os T4 (62,5% contra 26,8%; p=0,012) e pacientes sem metástases linfonodais tiveram maior taxa de sobrevida que pacientes com metástases durante o seguimento e metástases à apresentação (79,4% contra 39,6% contra 20,6%; p=0,021). Pacientes com tumores indiferenciados tiveram menor taxa de sobrevida (23,8% contra 82,2%; p=0,010), assim como aqueles portadores de tumores com expressão aumentada de podoplanina (23,5% contra 71,9%; p=0,018). A diferença de sobrevida dos fatores acima relacionados manteve-se na análise multivariada. Nas metástases linfonodais a maior expressão de HER-4 foi relacionada a menor taxa de sobrevida (37,5% contra 53,3%; p=0,038). Como conclusão determinou-se a expressão dos marcadores da família HER, E-caderina e podoplanina no CECTE localmente avançado; O infiltrado linfocitário intratumoral foi associado ao surgimento de metástases linfonodais; portadores de tumores T3, baixo grau histológico, N0 e podoplanina negativos tiveram maiores taxas de sobrevida. Os pacientes com metástases linfonodais HER-4 positivas apresentaram menor taxa de sobrevida. / Cutaneous squamous cell carcinoma of trunk and extremities is a local and easily treatable disease in most of cases, with high prevalence in our community and worldwide. Despite of this, it can present local progression, regional (lymph node) and distant metastasis with morbidity and mortality. Prognostic factors related to locally advanced disease are not well established being reported in few studies. The aim of this study is to determine the expression of molecular markers as HER family (EGFR, HER- 2,HER-3, HER-4), E-cadherin, podoplanin, and clinical and histopathological factors related to lymph node metastasis and prognosis in patients with locally advanced cutaneous squamous cell carcinoma of trunk and extremities (CSCCTE). There were 63 patients studied from two institutions: Hospital Amaral Carvalho de Jaú and Hospital de Câncer de Barretos with locally advanced CSCCTE (T3 and T4), retrospectively analyzed through review of medical records and tumor paraffin blocks and slides, and construction of a Tissue Micro Array for immunohistochemical analysis of molecular markers expression in the primary tumors and lymph node metastasis. The results showed in the primary tumor, EGFR positive (hyperexpression) in 25,5%, HER-2 negative in all, HER-3 positive in 87,3% and HER-4 in 47,3%. E-cadherin was positive in the membrane in 47,3% and in the cytoplasm in 29,1% and podoplanin was positive in 29,1%. Lymph node metastasis expression: EGFR was positive in 40,0%, HER-2 negative in all, HER-3 positive in 84%, HER-4 positive in 44,0%. E-cadherin was positive in the membrane in 28,0% and 3,6% in the cytoplasm. Podoplanin was positive in 40,0%. Intratumoral lymphocytic infiltrate was the only factor related to lymph node metastasis (53,3% contra 16,4%; p=0,046). Patients xix with T3 tumors presented higher cancer specific 5-years survival rate than T4 ones (62,5% contra 26,8%; p=0,012) and patients without lymph node metastasis presented higher cancer survival rate than those presenting initially and during follow-up (79,4% contra 39,6% contra 20,6%; p=0,021). Patients with undifferentiated tumors presented lower survival rate (23,8 % contra 82,2%; p=0,010), as well as patients with podoplanin hyperexpression (23,5% contra 71,9%; p=0,018). All these differences in survival rates were sustained in multivariate analysis. Considering patients with lymph node metastasis, those with HER-4 hyperexpression presented lower survival rate (37,5% contra 53,3%; p=0,038). In conclusion, the expression of HER family, E-cadherin and podoplanin were determinate in this specific patient setting; Intratumoral lymphocytic infiltrate was the only factor related to lymph node metastasis; Patients with T3 tumors, low histological grade, N0 and negative primary tumor expression of podoplanin presented higher survival rates. Metastatic patients to the lymph nodes with metastasis positivity to HER-4 presented lower survival rate.

Introdução: A comissura anterior constitui-se em área de infiltração do câncer glótico, mesmo em estádio precoce. Objetivo: Avaliar o acometimento por tumor da cartilagem da comissura anterior em espécimes de laringectomia frontolateral. Métodos: Foram incluídos 48 pacientes submetidos à laringectomia frontolateral por carcinoma espinocelular T1b/T2. Aspectos epidemiológicos, clínicos e análise morfológica histopatológica foram avaliados. Resultados: Quarenta e dois pacientes (87,5%) tinham lesões T1b e seis (12,5%), T2. Trinta e quatro casos (70,8%) apresentaram tecido sadio entre o tumor e a cartilagem tireoidea, 10 casos (20,8%) tinham tumor contíguo à cartilagem e, em quatro casos (8,3%), houve invasão da cartilagem. Não houve maior risco de desfecho adverso nos grupos com infiltração ou tumor adjacente à cartilagem. Grau de diferenciação, índice mitótico, irregularidade nuclear, presença de nucléolo e necrose tumoral não tiveram relação com invasão da cartilagem. Conclusão: A infiltração da cartilagem tireoidea ocorreu em 8,3% dos tumores e não mudou o desfecho em pacientes submetidos à laringectomia fronto-lateral. As características morfológicas não apresentaram significado estatístico / Introduction: The anterior commissure is an area of glottic cancer infiltration, even in early stages. Objective: To evaluate the involvement of cartilage by the tumor of the anterior commissure in surgical specimens of frontolateral laryngectomy. Methods: 48 patients who had undergone frontolateral laryngectomy for T1b/T2 squamous cell carcinoma were included. Epidemiological and clinical aspects as well as morphological histopathological analysis were evaluated. Results: 42 patients (87,5%) had T1b lesions and 6 (12,5%) had T2. Thirty-four cases (70,8%) showed healthy tissue between the tumor and thyroid cartilage, 10 cases (20,8%) had a tumor contiguous with cartilage; and in 4 cases (8,3%) there was cartilage invasion. There was no major risk of adverse closure in the groups with the infiltration or tumor adjacent to cartilage. Grade of cellular differentiation, mitotic index, nuclear irregularity, the presence of nucleolus and tumoral necrosis were not related to cartilage invasion. Conclusion: the infiltration of thyroid cartilage occurred in 8,3% of tumors and did not change the outcome in patients submitted to partial frontolateral laryngectomy. The morphological characteristics did not show any statistical significance

INTRODUÇÃO: Osteopontina (OPN) é uma glicoproteína presente em tecidos e fluidos orgânicos e envolvida em vários processos patológicos que incluem inflamação, proliferação celular, invasão da matriz extracelular, progressão tumoral e metástase. Em pacientes (pts) portadores de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECCP), OPN tem sido associada a uma maior agressividade tumoral e empregada como marcador prognóstico. Nós investigamos o valor prognóstico e preditivo da OPN sérica em pacientes portadores de CECCP tratados de forma uniforme. MÉTODOS: Estudo longitudinal prospectivo de 47 pts portadores de CECCP localmente avançado e irressecável submetidos à quimioterapia e radioterapia. OPN sérica foi determinada pelo método ELISA (kit 1 com17 pts e kit 2 com 30 pts) com coleta realizada antes e após o término do tratamento e estudada a relação entre OPN, categorizada como alta ou baixa em relação ao valor mediano, e as características clínico-patológicas, resposta ao tratamento, sobrevida global (SG) e sobrevida livre de progressão (SLP). RESULTADOS: A OPN sérica mediana dos pacientes determinada pelo kit 1 (em ng/ml) foi de 2,1 e 1,9 pré e pós-tratamento, respectivamente; no kit 2 (em ng/ml) foi de 69,5 e 87,9 pré e pós-tratamento, respectivamente. Pacientes portadores de tumores de orofaringe foram mais freqüentemente associados a baixos níveis séricos de OPN pós-tratamento, em comparação com outros sub-sítios (p=0,03). Observada tendência à associação entre os valores séricos baixos de osteopontina pós-tratamento e a resposta tratamento (p=0,06). Houve associação entre os valores elevados da osteopontina pós-tratamento e menor SLP (p=0,09, log rank), com medianas de 11,9 meses e 14,5 meses, conforme valores séricos de OPN pós-tratamento altos e baixos, respectivamente. Não houve associação dos valores séricos de OPN pré e pós-tratamento e a SG (p=0,19 e p= 0,10, respectivamente). CONCLUSÃO: Neste grupo de pacientes portadores de CECCP, sugere-se que OPN sérica baixa após a quimioradioterapia associa-se à resposta ao tratamento e melhor SLP. / INTRODUCTION: Osteopontin (OPN) is a glycoprotein present in tissues and body fluids involved in several pathological processes that include inflammation, cell proliferation, invasion of the extracellular matrix, tumor progression and metastasis. In head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) patients, OPN has been associated with greater tumor aggressiveness and used as a prognostic marker. We investigated the prognostic and predictive value of plasma OPN in homogeneously treated (HNSCC) patients. METHODS: Longitudinal prospective study of 47 patients with locally advanced and inoperable HNSCC treated with exclusive platin based concomitant chemoradiotherapy. Plasma OPN was determined by ELISA (n=14 kit I, n=32 kit II) pre and postreatment and correlated with tumor response, overall survival (OS) and progression-free survival (PFS). RESULTS: Median OPN levels in ng/ml were 2,1 and 1,9 pre and postreatment, respectively, by kit I and 69,5 and 87,9 by kit II. Patients were categorized as OPN low or high, using the median as a cut-off point. Patients with oropharynx tumors, as compared to other subsites, were more frequently categorized as low OPN (p = 0,03). A low postreatment OPN level was associated with tumor response (p = 0,06) and a high postreatment OPN level was associated with poor PFS, 11.9 vs. 14.5 months (p=0.09, log rank). Mean OS was 16.2 and 13.7 months in low and high postreatment OPN pts, respectively (p=0.10, log rank). CONCLUSIONS: In this group of HNSCC patients, it is suggested that a low plasma OPN after chemoradiotherapy is associated with a lower response rate and a worse PFS.

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2018-02-08T16:59:29Z No. of bitstreams: 1 nayarafernandespedro_dissert.pdf: 4222502 bytes, checksum: 54d2642c2adb8a61ed1b790de37706e3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-08T16:59:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nayarafernandespedro_dissert.pdf: 4222502 bytes, checksum: 54d2642c2adb8a61ed1b790de37706e3 (MD5) Previous issue date: 2016-10-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction: Susceptibility for head and neck cancer is modulated by environmental and genetics factors. About 90% of these tumors are classified as head and neck squamous cells carcinoma which develops in the mucosal surface of the upper aero digestive tract. Alteration of the biotransformation mechanism of exogenous compounds can result in production of damaging substances and predispose to malignant cell development. Reactive oxygen species (ROS) are the result of biotransformation metabolism performed by antioxidant enzymes. Alteration of the expression or activity of these enzymes can lead to the increase of intra and extracellular ROS, which are able to promote oxidative damage in the cell, DNA mutation and disequilibrium of the cellular homeostasis which converge in pathological conditions such as cancer. Objectives: The present study evaluated the expression of genes involved in Phase II metabolism of exogenous compounds in oral squamous cells carcinoma (OSCC). Casuistic and Methods: Eight samples of OSCC and adjacent non tumor tissues were analyzed. The relative quantification of 84 genes involved in the antioxidant system was performed by quantitative real time Polymerase Chain Reaction in Real Time using the TaqMan Array Human Antioxidant Mechanisms (Applied Biosystems). Statistical analyses were performed using D'Agostino & Pearson omnibus normality test, One-sample T test, Wilcoxon signed rank test, Two-sample T Test and Mann-Whitney test. Results: Twenty-one genes presented differential expression in OSCC (P<0.05). Four genes exhibited high expression (ATOX1, PRDX4, PRNP and SOD2) and seventeen genes presented reduced expression (ALOX12, CAT, CSDE1, DHCR24, DUOX1, DUOX2, EPHX2, GLRX2, GPX3, GSR, GSTZ1, MGST3, PRDX1, OXR1, OXSR1, SOD1 and SOD3). The differential expressed genes are related to biological processes involved in carcinogenesis, such as inflammation, angiogenesis, apoptosis, genomic instability, invasion, survival and cell proliferation. Gene expression was not associated to clinic and pathologic parameters of the tumors. Conclusion: Genes encoding enzymes involved in the antioxidant metabolism of exogenous compounds present differential expression in OSCC. Alteration in the expression of these genes can modulate biological processes related to detoxification of toxic compound and predispose to malignant cell growth in the oral cavity. / Introdução: A suscetibilidade ao câncer de cabeça e pescoço é modulada por fatores ambientais e genéticos. Cerca de 90% destes tumores são classificados como carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço, que se desenvolve nas superfícies mucosas do trato aéreo digestivo superior. Alterações no mecanismo de biotransformação de compostos exógenos podem resultar na geração de substâncias nocivas e predispor à malignização celular. Espécies reativas de oxigênio (EROs) resultam do metabolismo biotransformativo realizado por enzimas antioxidantes. Alterações na expressão ou na atividade dessas enzimas podem levar ao aumento de EROs intra e extracelular, que são capazes de promover danos oxidativos à célula, mutações no DNA e desequilíbrio na homeostase celular, que convergem em estados patológicos como o câncer. Objetivo: O presente estudo avaliou a expressão de genes envolvidos no metabolismo antioxidante (Fase II) de compostos exógenos em carcinoma espinocelular de cavidade oral (CEC oral). Casuística e Métodos: Foram analisadas oito amostras de CEC oral e oito tecidos não tumorais adjacentes. A quantificação da expressão de 84 genes envolvidos no sistema de antioxidação foi realizada por Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa em tempo real utilizando o kit TaqMan Array Human Antioxidant Mechanisms (Applied Biosystems). As análises estatísticas foram realizadas por D'Agostino & Pearson omnibus normality test, Onesample T test, Wilcoxon signed rank test, Two-sample T Test e Mann-Whitney test. Resultados: Vinte e um genes apresentaram expressão diferencial em CEC oral (P<0,05). Quatro genes exibiram expressão elevada (ATOX1, PRDX4, PRNP e SOD2) e dezessete expressão reduzida (ALOX12, CAT, CSDE1, DHCR24, DUOX1, DUOX2, EPHX2, GLRX2, GPX3, GSR, GSTZ1, MGST3, PRDX1, OXR1, OXSR1, SOD1 e SOD3). Os genes diferencialmente expressos estão relacionados a processos biológicos envolvidos na carcinogênese, tais como inflamação, angiogênese, apoptose, instabilidade genômica, invasão, sobrevivência e proliferação celular, e podem contribuir para o desenvolvimento do carcinoma espinocelular de cavidade oral. A expressão gênica não apresentou associação com os parâmetros clínicos e histopatológicos dos tumores. Conclusão: Genes que codificam enzimas envolvidas no metabolismo de antioxidação de compostos exógenos apresentam expressão diferencial em CEC oral. Alterações na expressão desses genes podem modular processos biológicos relacionados à detoxificação de compostos tóxicos à célula e predispor à malignização celular na cavidade oral.

Orientador: Éder Ricardo Biazolla / Banca: Marcos Martins Curi / Banca: Luiz Paulo Kowalski / Banca: Eurípedes de Oliveira Marinho / Banca: Lúcio Murilo dos Santos / Resumo: Neste estudo foram avaliados 264 casos de carcinoma espinocelular de gengiva inferior, tratados no Centro de Tratamento e Pesquisa-Hospital do Câncer- A . C. Camargo no período de 1954 a 1995. Em relação aos dados clínicos, houve predomínio do sexo masculino, raça branca e idade entre 46 e 64 anos. Apenas 32 casos (12,16%) foram diagnosticados nos estádios clínicos I e II. O consumo de tabaco, foi encontrado em 77,56% dos casos e 59,69% dos pacientes faziam uso de bebida alcoólica. Na análise univariada de sobrevida global, encontrou-se melhor prognóstico associado aos estádios iniciais, ausência de metástase cervical, sexo feminino e submetidos a tratamento cirúrgico. Na análise multivariada, as variáveis relacionadas ao aumento no risco de óbito, foram sexo masculino e aspecto clínico úlcero-infiltrativo. / Abstract: In the present study 264 cases of squamous cell carcinoma of lower gingiva treated at Centro de Tratamento e Pesquisa-Hospital do Cancer- A . C. Camargo between 1954 to 1995 were evaluated. Concerning the clinical features, there was a predominance of male, white people age 46 to 65 years. Only 32 cases (12,16%) were diagnosed at clinical stage I and II. 77,56% of the cases were tobacco consumers and 59,69% were alcohol drinkers. In the univariate survival rate, a better prognostic was found related to early clinical stage diagnostic, absence of nodal involvement, female cases, and patients treated by surgery. The features related to a higher risk of death with the multivariate analysis were male patients and infiltractive clinical aspect. / Doutor

Orientador: Ana Maria Pires Soubhia / Resumo: Realizamos um estudo clínico, histopatológico e histoquímico utilizando a técnica de coloração pela prata, para evidenciação das regiões organizadoras de nucléolos (Agnor). Foram analisados 81 casos de biópsias incisionais de carcinoma espinocelular de boca de regiões diferentes, ou seja, lábio, língua, assoalho, palato e retromolar. Foram observados e analisados os dados com relação a sexo, cor, idade, grau de diferenciação, estadiamento e hábitos de fumar e beber. Esses dados analisados entre si revelaram que a maior incidência de carcinoma espinoceluar em nossos estudos foi de carcinoma de assoalho bucal em torno de 30% contrariando a literatura que se refere à língua como local de maior freqüência; os outros dados analisados foram todos concordantes com a literatura de vários autores. A análise quantitativa e morfométrica das Nors foram realizadas por um sistema computadorizado, Imagelab 2000 que analisa as imagens capturadas de um microscópio por uma câmera e transfere para o sistema computadorizado, onde são analisadas. Usando esse sistema analisamos lâminas coradas pela técnica Agnor para verificação do número de Nors, área das Nors, número de Núcleos e área dos Núcleos das células presentes em tecidos removidos por biópsia incisional de boca, em áreas diferentes. Pelos resultados obtidos na análise histoquímica podemos verificar que existe uma diferença significativa na proporção do número de Nors/Núcleo para as diferentes áreas analisadas, mas que são coerentes com a literatura em carcionoma bem diferenciado e moderadamente diferenciado. Notamos ainda diferenças significativas entre as áreas das Nors, área dos Núcleos e números dos Núcleos entre as regiões diferentes analisadas e não conclusiva, portanto necessitando de outros estudos com a técnica de Agnor para aprimoramento da mesma, elucidação de resultados e uso mais freqüente em laboratórios de Anatomia Patológica. / Abstract: We have carried out a clinical, histopathological and histochemical study using silver staining technique, to evidence the nucleolar organizing regions (Agnor). Eighty-one cases of incisional biopsies of oral squamous cell carcinoma from different regions of de mouth (lip, tongue, floor, palate and retromolar) have been observed and analyzed with regard to sex, race, age, degree of differentiation, staging and habit to smoke and to drink. The compared analyses of the data in our study indicated a greater incidence of oral floor cell carcinoma (about 30%) in disagreement with the current literature with mentions the tongue as the local of greater occurrence. The other analyzed data were all in agreement with the literature. The quantitative and morphometric analyses of the Nors have been carried out by a computerized system, Imagelab 2000 that analyzes the captured images of a microscope for a camera and transfers to the computerized system, where are analyzed. Using this system we have analyzed slides stained by the Agnor technique for verification of the number of Nors, area of the Nors, number of nuclei and area of the nuclei of the cells present in tissue removed by incisional biopsy of mouth in different areas. By the results gotten in the histochemical analysis we can verify that there is a significant difference in the ratio of the number of Nors/Nuclei for the different analyzed areas, but they are coherent with the literature for well differentiated and moderately differentiated carcinoma. We notice too significant differences between the areas of the Nors, area and de numbers of the nuclei among the different regions analyzed and not conclusive, therefore needing other studies with the Agnor technique for better interpretation of the results. / Doutor

Resumo: O papilomavirus humano (HPV) tem sido associado ao desenvolvimento do cancer de cabeca e pescoco. Entretanto, seu papel na carcinogenese bucal nao e bem definido. O proposito deste estudo foi investigar a prevalencia do HPV em carcinoma epidermoide de assoalho bucal e correlaciona-la com variaveis clinico-patologicas e fatores de risco, bem como verificar sua influencia na sobrevida dos pacientes estudados. A presenca do HPV foi avaliada atraves da nested PCR (nPCR) (GP5+/GP6+ e MY11/MY09) em 29 amostras parafinadas de carcinoma epidermoide de assoalho bucal. O virus foi detectado em 17.2% (5 de 29) das amostras estudadas, tendo maior prevalencia em lesoes de pacientes naotabagistas com mais de 60 anos de idade. Das amostras positivas para o HPV, 100% apresentaram-se em pacientes do sexo masculino com lesoes classificadas clinicamente em estagio III ou IV, geralmente com o diagnostico histologico de carcinoma epidermoide moderadamente diferenciado. No entanto, nao houve significancia estatistica entre as variaveis analisadas, incluindo a sobrevida. A baixa prevalencia do HPV sugere que esse virus nao participa isoladamente no desenvolvimento dos carcinomas epidermoides de assoalho bucal. / Abstract: The human papillomavirus (HPV) has been associated with the development of head and neck cancers. However, its role in oral carcinogenesis is not well defined. The aim of this study was to investigate the prevalence of HPV in mouth floor squamous cell carcinoma and correlate its presence with clinicopathologic variables and risk factors, as well as to verify its influence in the patients'survival. The HPV presence was evaluated by nested PCR (nPCR) (GP5+/GP6+ and MY11/MY09) in 29 paraffin-embedded specimens of mouth floor squamous cell carcinoma. HPV DNA was detected in 17.2% (5 of 29) of the specimens and its higher prevalence was higher in nonsmoking patients over the age of 60 years. From the HPV-DNA-positive specimens, 100% were detected in men and tumors clinically classified as stage III and IV lesions, being most of them moderately differentiated. However, no statistically significant difference was observed among the analyzed variables, including patients' survival. The low incidence of HPV DNA suggests that this virus does not participate isolatedly in the development of mouth floor squamous cell carcinoma. / Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: José Fernando Garcia / Banca: Marília Heffer Cantisano / Banca: Fábio Daumas Nunes / Mestre

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-03-01T16:46:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) PDF - Fernando Antônio Portela da Cunha Filho.pdf: 2695056 bytes, checksum: a131200985526e00580ae8e119325801 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-04-12T17:26:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) PDF - Fernando Antônio Portela da Cunha Filho.pdf: 2695056 bytes, checksum: a131200985526e00580ae8e119325801 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-12T17:29:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) PDF - Fernando Antônio Portela da Cunha Filho.pdf: 2695056 bytes, checksum: a131200985526e00580ae8e119325801 (MD5) Previous issue date: 2015-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The squamous cell carcinoma (SCC) of lower lip is one of the most common malignancies of the head and neck region. Nevertheless, several aspects related to the progression of this lesion remain incompletely understood. Evidence shows that regulatory T cells (Tregs) play a major role in the suppression of the activity of various immune system cells, they may be involved in tumor progression and associated with the most aggressive biological behavior of various tumors. Despite these findings, there are few studies about the presence of these cell types in the SCC of lower lip. The objective of this study was to evaluate, through immunohistochemistry, the amount of Tregs cells (FoxP3+) in the microenvironment of SCCs of the lower lip and to relate this with clinicopathological parameters (tumor size / extent, regional nodal metastasis, distant metastasis, clinical stage and histopathological grade of malignancy). The sample consisted of 50 cases of SCC of the lower lip. Clinical data were obtained from medical records of patients and the histopathological grade of malignancy of the lesion was evaluated in the invasive front, according to the system proposed by Bryne et al. (1992). For the immunohistochemical study, lymphocytes exhibiting nuclear positivity for FoxP3 were counted in 10 microscopic fields at the tumor invasive front and the mean value was calculated for each case. Comparisons of the medians of Tregs cells according to clinicopathological parameters were performed using the nonparametric Mann-Whitney test. Possible associations between histopathological grade of malignancy and clinical parameters were analyzed by Fisher's exact test. The level of significance was set at 5% (p < 0.05). Most SCCs of the lower lip without regional nodal metastasis (n = 17; 81.0%) were classified as lowgrade malignancy (p < 0.001). In turn, the majority of patients in stages III and IV (n = 22; 84.6%) had high-grade tumors (p < 0.001). FoxP3+ lymphocytes were observed in all cases evaluated, with a tendency for higher amounts of these cell types, although not statistically significant, in lesions of small size, without regional nodal metastasis, and in early clinical stages (p > 0.05). Low-grade malignancy lesions revealed higher amount of FoxP3+ lymphocytes in comparison with high-grade tumors (p = 0.019), with medians of 16.00 and 6.60, respectively. Tumors with intense inflammatory infiltrate exhibited higher median of FoxP3+ lymphocytes (p = 0.035). Similarly, SCCs of the lower lip with well-delineated infiltrating borders or arranged in solid cords, bands and/ or strands showed greater median of FoxP3+ lymphocytes compared to tumors arranged in small groups (p = 0.003). No statistically significant differences were observed in the amount of FoxP3+ lymphocytes in relation to the degree of keratinization (p = 0.525) and the degree of nuclear pleomorphism (p = 0.343) in the lesions. The results of this study suggest the involvement of Treg cells in the modulation of immune and inflammatory responses in the microenvironment of SCCs of the lower lip. The role of these cells may be more important in the initial stages than in the advanced stages of lip carcinogenesis. / O carcinoma de células escamosas (CCE) de lábio inferior é uma das neoplasias malignas mais comuns da região de cabeça e pescoço. Apesar disso, vários aspectos relacionados à progressão dessa lesão permanecem incompletamente compreendidos. Evidências mostram que as células T regulatórias (Tregs), por desempenharem importante papel na supressão da atividade de diversas células do sistema imune, podem estar envolvidas na progressão tumoral e associadas ao comportamento biológico mais agressivo em várias neoplasias. A despeito desses achados, investigações a respeito da presença desses tipos celulares nos CCEs de lábio inferior são escassas. O objetivo deste estudo foi avaliar, por meio de imunoistoquímica, a quantidade de células Tregs (FoxP3+) no microambiente de CCEs de lábio inferior e relacioná-la com parâmetros clínico-patológicos (tamanho/ extensão do tumor, metástase em nodos regionais, metástase à distância, estádio clínico e grau histopatológico de malignidade). A amostra foi constituída por 50 casos de CCE de lábio inferior. Os dados clínicos foram obtidos a partir dos prontuários médicos dos pacientes e o grau histopatológico de malignidade da lesão foi avaliado no front de invasão tumoral, de acordo com o sistema proposto por Bryne et al. (1992). Para o estudo imunoistoquímico, foram quantificados, em 10 campos microscópicos ao longo do front de invasão tumoral, os linfócitos exibindo positividade nuclear para o FoxP3 e, em seguida, determinada a média de células Tregs para cada caso. As comparações das medianas das células Tregs em relação aos parâmetros clínico-patológicos foram realizadas por meio do teste não paramétrico de Mann-Whitney. Possíveis associações do grau histopatológico de malignidade das lesões com os parâmetros clínicos foram avaliadas por meio do teste exato de Fisher. O nível de significância foi estabelecido em 5% (p < 0,05). A maioria dos CCEs de lábio inferior sem metástase nodal regional (n = 17; 81,0%) foram classificados como de baixo grau de malignidade (p < 0,001). Por sua vez, a maioria dos pacientes nos estágios III e IV (n = 22; 84,6%) apresentaram tumores de alto grau de malignidade (p < 0,001). Foram observados linfócitos FoxP3+ em todos os casos avaliados, com uma tendência a uma maior quantidade destes tipos celulares, sem diferenças estatisticamente significativas, em lesões de menor tamanho, sem metástase nodal regional e em estádios clínicos iniciais (p > 0,05). Lesões de baixo grau de malignidade revelaram maior quantidade de linfócitos FoxP3+ em comparação com as de alto grau (p = 0,019), com medianas de 16,00 e 6,60, respectivamente. Tumores com intenso infiltrado inflamatório exibiram maior mediana de linfócitos FoxP3+ (p = 0,035). De forma similar, CCEs de lábio inferior com bordas infiltrativas bem delimitadas ou arranjados em cordões, bandas e/ ou trabéculas sólidas revelaram maior mediana de linfócitos FoxP3+ em comparação com tumores arranjados em pequenos grupos celulares (p = 0,003). Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas na quantidade de linfócitos FoxP3+ em relação ao grau de ceratinização (p = 0,525) e ao grau de pleomorfismo nuclear (p = 0,343) nas lesões. Os resultados do presente estudo sugerem a participação das células Tregs na modulação das respostas imunes e inflamatórias no microambiente dos CCEs de lábio inferior. O papel desempenhado por estas células pode ser mais importante em estágios iniciais do que em estágios avançados da carcinogênese labial.

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Introdução: O carcinoma de células escamosas da via aerodigestiva superior (VADS) geralmente é unifocal e advém da progressão das lesões pré-neoplásicas. O risco de segundos tumores primários é de 3 a 7% ao ano para pacientes tratados previamente de câncer da VADS, sendo importante avançar em estratégias de quimioprevenção. Nos estudos clínicos realizados, as drogas promissoras mostraramse ineficazes quando aplicadas em doses baixas para minimizar a toxicidade. Neste trabalho, ácidos graxos poliinsaturados ômega-3 (óleo de peixe) e pioglitazone, um agonista PPAR-?, foram utilizados com intenção quimiopreventiva, em modelo animal de carcinogênese da VADS, induzida com o uso de 4- nitroquinolina-1-óxido (4-NQO). Métodos: Camundongos Swiss foram submetidos à indução tumoral com 4-NQO nas doses: 25, 50 ou 100 g/ml diluído em água por 8 semanas. Quimioprevenção foi testada com óleo de peixe nas concentrações de 10% ou 5%. Também foi realizada, em outros grupos, quimioprevenção com pioglitazone nas concentrações de 300 ppm ou 100 ppm. A quimioprevenção foi realizada na iniciação e pós-iniciação tumorais (por 32 semanas) ou apenas na pós- iniciação (por 24 semanas). Resultados: As incidências de neoplasias oral e esofágica foram, respectivamente, similares entre os grupos 4-NQO 100 77,7% e 55,5% e 4-NQO 50 72,9% e 37,8%. O grupo 4-NQO 25, ao ser observado 24 semanas a mais, obteve 78,2% de neoplasia oral e 34,7% de esofágica. A mortalidade por câncer nas 24 semanas após o término do 4-NQO foi de 55,6% no grupo 4-NQO 100, de 11,6% no 4-NQO 50 e de 13,6% no 4-NQO 25; sendo significante na comparação entre os grupos 100 com 50 (p<0,01) e 100 com 25 (p<0,01). Assim, foi observado que 4- NQO 100 g/ml gerou uma mortalidade mais acelerada neste grupo. A maioria dos animais desenvolvia lesões invasoras em mais de um órgão ou a associação destas com pré-neoplásicas. A incidência de neoplasia oral foi similar na comparação entre o grupo 4-NQO 100 (77,7%) com óleo de peixe 10% (80%) p=1,00 e com o grupo pioglitazone 300 ppm (61,1%) p=0,27. Entre os grupos 4-NQO 50 com óleo de peixe 5% (controle - 72,9%, com óleo de peixe na pós- iniciação - 84,2% e com óleo de peixe na iniciação e pós- iniciação - 64,7%) p=0,34 e entre os grupos 4-NQO 50 com pioglitazone 100 ppm (controle - 72,9%, com pioglitazone na pós-iniciação - 76,1% e com pioglitazone na iniciação e pós-iniciação - 62,5%) p=0,63, a incidência de neoplasia oral foi semelhante na comparação entre os grupos. A presença de neoplasia esofágica não diferiu entre o grupo 4-NQO 100 (55,5%) com óleo de peixe 10% (50%) p=0,73 e com o grupo pioglitazone 300 ppm (50%) p=0,73; e foi também similar entre os grupos 4-NQO 50 com pioglitazone 100 ppm (controle - 37,8%, com pioglitazone na pós- iniciação - 57,1% e com pioglitazone na iniciação e pós- iniciação - 31,2%) - p=0,22; porém diferiu nos grupos 4-NQO 50 com óleo de peixe 5% (controle37,8%, com óleo de peixe na pós-iniciação68,4% e com óleo de peixe na iniciação e pós- iniciação29,4%), sendo estatisticamente significante - p=0,02. Interessante foi a observação de que o grupo que realizou quimioprevenção com pioglitazone desenvolveu câncer gástrico na mesma proporção dos demais grupos, porém apresentou uma doença mais agressiva, com disseminação metastática, fato não observado nos outros grupos. Considerando-se a sobrevida, não foi observada diferença estatística significante nas 24 semanas comparando-se os grupos 4-NQO 100 e entre os grupos 4-NQO 50 com ou sem quimioprevenção com óleo de peixe ou com pioglitazone. Conclusão: A indução tumoral com 4-NQO, independente da dose, foi obtida com sucesso em camundongos Swiss. Neste estudo, não foram observados efeitos de quimioprevenção do óleo de peixe e do pioglitazone nas diferentes fases da carcinogênese estudadas. O óleo de peixe na pós-iniciação pode ter potencializado a ação carcinogênica do 4-NQO no esôfago, assim como a associação do 4-NQO com o pioglitazone possa ter criado um novo modelo de carcinogênese gástrica, não vista nos grupos que não receberam esta associação. / Introduction: The squamous cell carcinoma of the upper aerodigestive tract (UADT) is generally unifocal and arises from the progression of premalignant lesions. Between 3% to 7% of patients with head and neck carcinoma will develop subsequent primary tumors of the UADT annually; therefore, the importance of advancing in new chemopreventive strategies is unquestionable. In clinical studies, promising drugs were ineffective when used at low doses to minimize toxicity. In the present study, the potential chemopreventive effects of polyunsaturated fatty acids omega-3 (fish oil) and of a PPAR-? ligand (pioglitazone) were tested in an animal model of UADT carcinogenesis induced by 4-nitroquinoline-1-oxide (4-NQO) in Swiss mice. Methods : The animals underwent tumor induction with 25, 50 or 100 g/ml of 4-NQO diluted in water for eight weeks. Chemoprevention was tested with 10% or 5% fish oil and with 300 ppm or 100 ppm pioglitazone in other groups. Chemoprevention was conducted on tumor initiation and postinitiation for 32 weeks or only on postinitiation for 24 weeks. Results : The incidence rates of oral and esophageal neoplasms were similar between groups 4-NQO 100 (77,7% and 55,5%, respectively) and 4-NQO 50 (72,9% and 37,8%, respectively). Group 4-NQO 25 was followed for 24 weeks longer than the others and showed incidence rates of 78,2% for oral neoplasia and 34,7% for esophageal neoplasia. Cancer-related mortality rates in the 24 weeks following the conclusion of the tumor induction phase were 55,6%, 11,6% and 13,6% in groups 4-NQO 100, 4-NQO 50 and 4-NQO 25, respectively. The differences were statistically significant when comparing groups 100 with 50 (p<0,01) and 100 with 25 (p<0,01). The dose of 100 g/ml 4-NQO led to faster mortality compared with 50 g/ml or 25 g/ml 4-NQO. Most animals developed invasive lesions in more than one site of the UADT or, more frequently, an association of premalignant and malignant lesions. The incidence of oral neoplasia was similar in the comparison of the control group 4-NQO 100 with 10% fish oil (77,7% vs 80%, p=1,00) or with 300 ppm pioglitazone (77,7% vs 61,1%, p=0,27). Results were also similar when comparing 4-NQO 50 groups with 5% fish oil (control72,9%, fish oil on postinitiation84,2%, and fish oil on initiation and postinitiation64,7%, p=0,34), and between 4-NQO 50 groups with 100 ppm pioglitazone (control72,9%, pioglitazone on postinitiation76,1%, and pioglitazone on initiation and postinitiation62,5%, p=0,63). The incidence of esophageal neoplasia reached no statistical difference either when 4-NQO 100 control group was compared with 10% fish oil (55,5% vs 50%, p=0,73) or with 300 ppm pioglitazone (55,5% vs 50%, p=0,73). The same was true between 4-NQO 50 groups with 100 ppm pioglitazone (control37,8%, pioglitazone on postinitiation57,1%, and pioglitazone on initiation and postinitiation31,2%, p=0,22). Statistically significant differences were found between 4-NQO 50 groups with 5% fish oil (control37,8%, fish oil on postinitiation68,4%, and fish oil on initiation and postinitiation29,4%, p=0,02). Interestingly, the group receiving chemoprevention with 300 ppm pioglitazone had a gastric cancer incidence rate comparable to that of other groups, but with more aggressive disease and metastatic dissemination, unlike the others. No statistically significant differences were found in the survival rates for the 24-week period after induction when comparing the control groups 4-NQO 100 and 4-NQO 50 with their respective experimental groups, which received chemoprevention with fish oil or pioglitazone. Conclusions : Tumor induction with 4-NQO was successfully achieved in Swiss mice, regardless of the dose. In this study, no chemopreventive effects of fish oil or pioglitazone were observed either on postinitiation or on initiation and postinitiation. The introduction of fish oil on the postinitiation phase may have potentialized the carcinogenic action of 4-NQO on the esophageal epithelium; the same can be said about the association of 4-NQO and pioglitazone, which may have created a new model of gastric carcinogenesis not seen in the groups that did not receive that combination of drugs.