INTRODUÇÃO: O objetivo do estudo foi avaliar o perfil de marcadores imuno-histoquímicos relacionados às células NK em biópsias de aloenxertos renais com diagnóstico anatomopatológico de rejeição aguda (mediadas por células T ou anticorpos) e estabelecer relações desses marcadores com parâmetros morfológicos de lesão à microcirculação e sobrevida do enxerto. MÉTODOS: Estudo retrospectivo histórico que revisou 74 biópsias realizadas entre janeiro de 2009 e dezembro de 2012, de pacientes com rejeição aguda mediada por células T (n=36), rejeição aguda mediada por anticorpos com expressão positiva (n=19) ou negativa (n=19) para o marcador C4d, juntamente com levantamento de dados clínicos e laboratoriais pertinentes ao estudo. Foram realizadas reações imuno-histoquímicas, para os marcadores CD56, CD57, CD16, CD68, CD3, CD8 e CD4 com ênfase para os marcadores CD56 e CD16. Foi feita análise das células positivas em toda a cortical da biópsia nos compartimento intersticial, glomerular e vascular. Testes estatísticos foram aplicados conforme os pressupostos definidos no objetivo da pesquisa. RESULTADOS: No compartimento intersticial, células CD56+ (P = 0,004) e CD57+ (P < 0,001) foram expressas em maior quantidade em biópsias negativas para dosagem sérica de anticorpos específicos anti-doador (DSA) com diagnóstico de rejeição aguda mediada por células T. CD56 intersticial foi associado estatisticamente com presença de glomerulite (g >= 1) (P = 0,02) e ausência / leve capilarite peritubular (ptc <= 1) (P = 0,003). Células intersticiais positivas para o marcador CD56 com média superior a 0,56 céls/mm2 tiveram uma pior sobrevida do enxerto renal (P = 0,028). Biópsias com contagem inferior ou igual a 0,56 cél/mm2 tiveram associação estatisticamente significante para ausência ou leve capilarite peritubular (P = 0,012) e com contagem superior a 0,56 céls/mm2, foram associadas à presença de glomerulite (P = 0,002). Foi observado maior número de células positivas para o marcador CD16 no compartimento glomerular em biópsias positivas para dosagem sérica de DSA com diagnóstico de rejeição aguda mediada por anticorpos (P = 0,03) e em biópsias com presença de glomerulite (P = 0,009). Presença de maior número de células CD16+ no compartimento intersticial associou-se com capilarite peritubular (P = 0,0001). CONCLUSÕES: Maior expressão de células CD56 positivas no compartimento intersticial das biópsias foi significantemente associada com escores relacionados à lesão na microcirculação, especialmente glomerulite, com rejeição aguda mediada por células T e pior sobrevida do enxerto renal. Células CD16 positivas, no compartimento glomerular foram associadas com rejeição aguda mediada por anticorpos e glomerulite. As variações na expressão dos marcadores de células NK nos diferentes compartimentos da biópsia renal podem sugerir presença de envolvimento das células NK em diferentes vias do sistema imune nas rejeições agudas de aloenxertos renais / INTRODUCTION: The aim of this study was to investigate the immunohistochemical profile of markers related to NK cells from renal allograft biopsies with morphological diagnosis of acute rejection (T-cells or antibodies mediated rejection) and to study associations of those markers with types of rejection, microcirculation injury morphological parameters and graft survival. METHODOLOGY: Historical retrospective study that reviewed 74 biopsies performed between January 2009 and December 2012 in patients with acute T-cell-mediated rejection (n=36) and acute antibody-mediated rejection with (n=19) or without evident C4d deposition (n=19). The study was performed with relevant clinical and laboratory data. Immunohistochemical reactions were performed for CD56, CD57, CD16, CD68, CD3, CD8 and CD4 markers with highlights for CD56 and CD16. Counting of positive cells throughout cortical biopsy was performed in glomerular, interstitial and vascular compartments. Statistical tests were applied according to assumptions set out the goal of the study.RESULTS: DSA-negative biopsies-from patients with acute T-cell mediated rejection (aTCMR) had an increased expression of CD56+ and CD57+ cells (P = 0.004 and P < 0.001) in the interstitial compartment in comparison with donor-specific antibodies ( DSA)-positive biopsies from patients acute antibody-mediated rejection with and without C4d deposition. Interstitial CD56+ cells had an increased expression for presence of glomerulitis (g >= 1) (P = 0.02) and peritubular capillaritis (ptc >= 2) (P = 0.003). Interstitial CD56 + cells with mean superior to 0.56cells/mm2 had worse allograft survival (P = 0.028). CD56+ cells in the interstitial compartment with mean inferior or equal to 0.56cells/mm2 associated with absence or mild peritubular capillaritis (P = 0.012) and mean superior to 0.56cells/mm2 was associated with presence of glomerulitis (P = 0.002). CD16+ cells was increased in the glomerular compartment in DSA-positive biopsies (P = 0.03) and in the presence of glomerulitis (P = 0.009). Interstitial CD16+ cells associated with peritubular capillaritis (P = 0.0001).CONCLUSION: CD56+ cell infiltrates in the interstitial compartment were significantly associated with microcirculation injury scores, especially glomerulitis, acute T-cell mediated rejection and clinical outcomes. CD16+ cell infiltrates in glomerular compartment was associated with acute antibody-mediated rejection and glomerulitis. Our findings showed variations in expression of NK cells markers in renal biopsy different compartments which might suggest the involvement of NK cells in different immune system pathways in acute renal allograft rejection

OBJETIVOS: Comparar a expressão placentária de células natural killer deciduais (dNK), e a expressão sérica e placentária de suas citocinas reguladoras em gestações gemelares com pré-eclâmpsia (grupo pré-eclâmpsia, GPE) e sem comorbidades (grupo-controle, GC). MÉTODOS: Estudo transversal do tipo caso-controle, desenvolvido na Clínica Obstétrica do HC-FMUSP no período de julho de 2015 a junho de 2017. Foram obtidas amostras das regiões deciduais placentárias, para avaliação, por meio de técnica de imuno-histoquímica, da expressão de células dNK e suas interleucinas (IL) 10, 12 e 15, em pacientes que contemplaram os critérios de inclusão e concordaram em participar do estudo. Além disso, estas pacientes tiveram amostra sérica colhida no terceiro trimestre para dosagem de IL-10, IL-12 e IL-15 - por meio de kit comercial Milliplex®, que utiliza a tecnologia Luminex® xMAP®, da EMDMillipore (Merck Millipore Co., Alemanha) - e de fatores relacionados à angiogênese, como soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) e placental growth factor (PlGF) - por meio de ensaio com imunoanalisador COBAS e411 (Roche Diagnostics, Alemanha). Os valores obtidos para as análises placentárias e séricas foram comparados entre o GPE e o GC, e a significância estatística estabelecida foi p < 0,05. RESULTADOS: Foram selecionadas 30 pacientes, sendo 20 no GC e 10 no GPE. Não se observaram diferenças significativas com relação às características maternas, gestacionais e de desfechos perinatais entre os dois grupos, exceto pela idade gestacional de início do pré-natal, menor no GPE (12,5 vs. 20,0 semanas, p = 0,015). Quanto à avaliação placentária, houve maior expressão de IL-15 no GPE (p = 0,001), e não houve diferença entre os grupos quanto à expressão placentária local de células dNK (p = 0,999), IL-10 (p = 0,063) e IL-12 (p = 0,135). Com relação às interleucinas séricas maternas, demonstrou-se aumento significativo nos níveis de IL-10 (22,7 vs. 11,9 pg/mL, p = 0,024) e IL-15 (15,9 vs. 7,4 pg/mL, p = 0,024) no GPE com relação ao GC, sem diferença entre os grupos para IL-12 (102,5 vs. 61,5 pg/mL, p = 0,373). A dosagem dos fatores relacionados à angiogênese demonstrou maiores níveis séricos maternos de sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0,009) e da razão sFlt-1/PlGF (88,71 vs. 24,63, p = 0,002), e menores valores de PlGF (193,0 vs. 340,6 pg/mL, p = 0,036) no GPE. CONCLUSÃO: Observou-se maior concentração sérica materna tanto de fatores pró quanto anti-inflamatórios no GPE, quando comparado ao GC. Entretanto, não foram observadas diferenças entre os grupos quanto à expressão placentária de IL-10, importante fator anti-inflamatório. Estes achados podem sugerir que a tentativa sérica materna de equilibrar estas interleucinas não alcançou resposta localmente na placenta, contribuindo para o desenvolvimento da doença no GPE / OBJECTIVES: To compare the placental expression of decidual natural killer cells (dNK) and serum and placental expression of their regulatory cytokines in twin pregnancies with preeclampsia (preeclampsia group, PEG) and uncomplicated twin pregnancies (control group, CG). METHODS: This was a case-control study, developed in a tertiary referral center, from July 2015 to June 2017. Samples of the placental decidual region were obtained and analyzed by immunohistochemistry technique for the expression of dNK cells and interleukins (IL) 10, 12 and 15, in patients who met the inclusion criteria. In addition, maternal serum sample was collected in the third trimester for the dosage of IL-10, IL-12 and IL-15 - by means of a commercial Milliplex® kit using Luminex® xMAP® technology from EMDMillipore (Merck Millipore Co., Germany) - and angiogenesis factors, such as soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) and placental growth factor (PlGF) - by COBAS e411 immunoassay (Roche Diagnostics, Germany). The values obtained for the placental analyzes and maternal circulating factors were compared between PEG and CG and the statistical significance was set at p < 0.05. RESULTS: Thirty patients were selected, 20 in CG and 10 in PEG. There were no significant differences in maternal, gestational and perinatal outcomes between the two groups, except for the gestational age at the onset of prenatal care, which was lower in PEG (12.5 vs. 20.0 weeks, p = 0.015). PEG showed strong immunostaining for IL-15 (p = 0.001) when compared to CG, with no difference between the groups concerning the placental expression of dNK (p = 0.999), IL-10 (p = 0.063), and IL -12 (p = 0.135). Relating to maternal circulating interleukins, a significant increase in IL-10 (22.7 vs. 11.9 pg/mL, p = 0.024) and IL-15 (15.9 vs. 7.4 pg/mL, p = 0.024) was observed in PEG, with no difference between the groups for IL-12 (102.5 vs 61.5 pg/mL, p = 0.373). We also demonstrated higher maternal levels of sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0.009) and sFlt-1/PlGF ratio (88.71 vs. 24.63, p = 0.002) and lower levels of PlGF (193 vs. 340.6 pg/mL, p = 0.036) in PEG. CONCLUSION: A higher maternal serum concentration of both pro- and anti-inflammatory factors was observed in the PEG. However, no difference was found between the groups regarding the placental expression of IL-10, an important anti-inflammatory factor. These findings may suggest that the maternal serum attempt to balance these interleukins did not reach local placental response, which contribute to the development of the disease in the PEG

OBJETIVOS: Comparar a expressão placentária de células natural killer deciduais (dNK), e a expressão sérica e placentária de suas citocinas reguladoras em gestações gemelares com pré-eclâmpsia (grupo pré-eclâmpsia, GPE) e sem comorbidades (grupo-controle, GC). MÉTODOS: Estudo transversal do tipo caso-controle, desenvolvido na Clínica Obstétrica do HC-FMUSP no período de julho de 2015 a junho de 2017. Foram obtidas amostras das regiões deciduais placentárias, para avaliação, por meio de técnica de imuno-histoquímica, da expressão de células dNK e suas interleucinas (IL) 10, 12 e 15, em pacientes que contemplaram os critérios de inclusão e concordaram em participar do estudo. Além disso, estas pacientes tiveram amostra sérica colhida no terceiro trimestre para dosagem de IL-10, IL-12 e IL-15 - por meio de kit comercial Milliplex®, que utiliza a tecnologia Luminex® xMAP®, da EMDMillipore (Merck Millipore Co., Alemanha) - e de fatores relacionados à angiogênese, como soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) e placental growth factor (PlGF) - por meio de ensaio com imunoanalisador COBAS e411 (Roche Diagnostics, Alemanha). Os valores obtidos para as análises placentárias e séricas foram comparados entre o GPE e o GC, e a significância estatística estabelecida foi p < 0,05. RESULTADOS: Foram selecionadas 30 pacientes, sendo 20 no GC e 10 no GPE. Não se observaram diferenças significativas com relação às características maternas, gestacionais e de desfechos perinatais entre os dois grupos, exceto pela idade gestacional de início do pré-natal, menor no GPE (12,5 vs. 20,0 semanas, p = 0,015). Quanto à avaliação placentária, houve maior expressão de IL-15 no GPE (p = 0,001), e não houve diferença entre os grupos quanto à expressão placentária local de células dNK (p = 0,999), IL-10 (p = 0,063) e IL-12 (p = 0,135). Com relação às interleucinas séricas maternas, demonstrou-se aumento significativo nos níveis de IL-10 (22,7 vs. 11,9 pg/mL, p = 0,024) e IL-15 (15,9 vs. 7,4 pg/mL, p = 0,024) no GPE com relação ao GC, sem diferença entre os grupos para IL-12 (102,5 vs. 61,5 pg/mL, p = 0,373). A dosagem dos fatores relacionados à angiogênese demonstrou maiores níveis séricos maternos de sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0,009) e da razão sFlt-1/PlGF (88,71 vs. 24,63, p = 0,002), e menores valores de PlGF (193,0 vs. 340,6 pg/mL, p = 0,036) no GPE. CONCLUSÃO: Observou-se maior concentração sérica materna tanto de fatores pró quanto anti-inflamatórios no GPE, quando comparado ao GC. Entretanto, não foram observadas diferenças entre os grupos quanto à expressão placentária de IL-10, importante fator anti-inflamatório. Estes achados podem sugerir que a tentativa sérica materna de equilibrar estas interleucinas não alcançou resposta localmente na placenta, contribuindo para o desenvolvimento da doença no GPE / OBJECTIVES: To compare the placental expression of decidual natural killer cells (dNK) and serum and placental expression of their regulatory cytokines in twin pregnancies with preeclampsia (preeclampsia group, PEG) and uncomplicated twin pregnancies (control group, CG). METHODS: This was a case-control study, developed in a tertiary referral center, from July 2015 to June 2017. Samples of the placental decidual region were obtained and analyzed by immunohistochemistry technique for the expression of dNK cells and interleukins (IL) 10, 12 and 15, in patients who met the inclusion criteria. In addition, maternal serum sample was collected in the third trimester for the dosage of IL-10, IL-12 and IL-15 - by means of a commercial Milliplex® kit using Luminex® xMAP® technology from EMDMillipore (Merck Millipore Co., Germany) - and angiogenesis factors, such as soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) and placental growth factor (PlGF) - by COBAS e411 immunoassay (Roche Diagnostics, Germany). The values obtained for the placental analyzes and maternal circulating factors were compared between PEG and CG and the statistical significance was set at p < 0.05. RESULTS: Thirty patients were selected, 20 in CG and 10 in PEG. There were no significant differences in maternal, gestational and perinatal outcomes between the two groups, except for the gestational age at the onset of prenatal care, which was lower in PEG (12.5 vs. 20.0 weeks, p = 0.015). PEG showed strong immunostaining for IL-15 (p = 0.001) when compared to CG, with no difference between the groups concerning the placental expression of dNK (p = 0.999), IL-10 (p = 0.063), and IL -12 (p = 0.135). Relating to maternal circulating interleukins, a significant increase in IL-10 (22.7 vs. 11.9 pg/mL, p = 0.024) and IL-15 (15.9 vs. 7.4 pg/mL, p = 0.024) was observed in PEG, with no difference between the groups for IL-12 (102.5 vs 61.5 pg/mL, p = 0.373). We also demonstrated higher maternal levels of sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0.009) and sFlt-1/PlGF ratio (88.71 vs. 24.63, p = 0.002) and lower levels of PlGF (193 vs. 340.6 pg/mL, p = 0.036) in PEG. CONCLUSION: A higher maternal serum concentration of both pro- and anti-inflammatory factors was observed in the PEG. However, no difference was found between the groups regarding the placental expression of IL-10, an important anti-inflammatory factor. These findings may suggest that the maternal serum attempt to balance these interleukins did not reach local placental response, which contribute to the development of the disease in the PEG

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As células Natural Killer (NK) fazem parte da resposta imune inata, sendo a primeira linha de defesa do organismo contra vírus, bactérias, tumores e microorganismos. Estas células induzem a morte da célula-alvo quando não há o reconhecimento das moléculas de antígenos leucocitários humanos (HLA) de classe I, através de seus receptores, chamados Killer cell Immunoglobulin-like Receptor (KIR). Vários estudos demonstram o envolvimento dos genes KIR na patogênese das doenças auto-imunes. Acredita-se que combinações desses genes possam ser favoráveis para o desenvolvimento da esclerose sistêmica (ES). Portanto, o conhecimento destes genes relacionados às células NK poderiam ser úteis para o entendimento da patogênese da ES. O objetivo deste estudo é investigar o polimorfismo dos genes KIR em um grupo de pacientes com ES, incluindo a forma difusa e limitada da doença. A freqüência do receptor inibidor KIR2DL2 foi significantemente menor nos pacientes comparada com a do grupo controle (28,7% versus 65,2%; P<0,001; OR=0,21; IC95% 0,11–0,38). Quando analisamos a combinação do receptor inibidor 2DL2, com a presença do ativador 2DS2 (KI2DS2+/KIR2DL2-), encontramos uma maior freqüência nos pacientes (26,1% versus 1,7%; P<0,001; OR=19,94; IC95% 4,7–175,1). Por outro lado, a presença de ambos KIR2DL2 e KIR2DS2 foi mais freqüente no grupo controle (26,9% versus 57,3%; P<0,001; OR=0,27; 95%CI 0,1–0,4). Nenhuma diferença estatística no polimorfismo dos genes KIR foi encontrada entre a forma difusa e a forma limitada. A combinação KIR2DS2+/KIR2DL2– parece ser um fator de risco para o desenvolvimento da ES enquanto a alta freqüência do gene inibidor KIR2DL2 no grupo controle parece ter uma função protetora. Estes resultados indicam um potencial papel dos genes KIR na patogênese da ES. / Natural killer (NK) cells have an important role in the early responses to viral infections. They kill diverse target cells with decreased or absent expression of major histocompatibility complex (MHC) class I molecules through the Killer Cell Immunoglobulin-Like Receptors (KIR). Many studies have reported association of KIR genes with autoimmune diseases. The objective of this study is to investigate possible associations of KIR polymorphisms with systemic sclerosis (SSc), including the limited (lSSc) and diffuse (dSSc) forms of the disease. The frequency of inhibitory KIR2DL2 was significantly decreased among patients with SSc compared with healthy controls (28.7% versus 65.2; P<0.001, odds ratio [OR] 0.21, 95% confidence interval [95% CI] 0.11–0.38). When activatory and inhibitory KIR genes were analyzed in combination, the concomitant presence of KIR2DS2 and absence of KIR2DL2 (KI2DS2+/KIR2DL2-) phenotype was more frequent in SSc patients than in the control group (26.08% versus 1.75%; P<0.001, OR=19.94, 95%CI [4.78–175.10]). On the other hand, the presence of both KIR2DS2 and KIR2DL2 was more frequent in the control group (26.96% versus 57.39%; P=0.000005, OR=0.27, 95%CI [0.15–0.49]). No significant difference in KIR genes polymorphisms was found between lSSc and dSSc disease subsets. The combination of KIR2DS2+/KIR2DL2– may be a risk factor for development of SSc while the higher frequency of the inhibitory KIR2DL2 gene in the control group suggest to a protective effect. These results indicate a potential role of KIR genes in the SSc pathogenesis.

As células Natural Killer (NK) fazem parte da resposta imune inata, sendo a primeira linha de defesa do organismo contra vírus, bactérias, tumores e microorganismos. Estas células induzem a morte da célula-alvo quando não há o reconhecimento das moléculas de antígenos leucocitários humanos (HLA) de classe I, através de seus receptores, chamados Killer cell Immunoglobulin-like Receptor (KIR). Vários estudos demonstram o envolvimento dos genes KIR na patogênese das doenças auto-imunes. Acredita-se que combinações desses genes possam ser favoráveis para o desenvolvimento da esclerose sistêmica (ES). Portanto, o conhecimento destes genes relacionados às células NK poderiam ser úteis para o entendimento da patogênese da ES. O objetivo deste estudo é investigar o polimorfismo dos genes KIR em um grupo de pacientes com ES, incluindo a forma difusa e limitada da doença. A freqüência do receptor inibidor KIR2DL2 foi significantemente menor nos pacientes comparada com a do grupo controle (28,7% versus 65,2%; P<0,001; OR=0,21; IC95% 0,11–0,38). Quando analisamos a combinação do receptor inibidor 2DL2, com a presença do ativador 2DS2 (KI2DS2+/KIR2DL2-), encontramos uma maior freqüência nos pacientes (26,1% versus 1,7%; P<0,001; OR=19,94; IC95% 4,7–175,1). Por outro lado, a presença de ambos KIR2DL2 e KIR2DS2 foi mais freqüente no grupo controle (26,9% versus 57,3%; P<0,001; OR=0,27; 95%CI 0,1–0,4). Nenhuma diferença estatística no polimorfismo dos genes KIR foi encontrada entre a forma difusa e a forma limitada. A combinação KIR2DS2+/KIR2DL2– parece ser um fator de risco para o desenvolvimento da ES enquanto a alta freqüência do gene inibidor KIR2DL2 no grupo controle parece ter uma função protetora. Estes resultados indicam um potencial papel dos genes KIR na patogênese da ES. / Natural killer (NK) cells have an important role in the early responses to viral infections. They kill diverse target cells with decreased or absent expression of major histocompatibility complex (MHC) class I molecules through the Killer Cell Immunoglobulin-Like Receptors (KIR). Many studies have reported association of KIR genes with autoimmune diseases. The objective of this study is to investigate possible associations of KIR polymorphisms with systemic sclerosis (SSc), including the limited (lSSc) and diffuse (dSSc) forms of the disease. The frequency of inhibitory KIR2DL2 was significantly decreased among patients with SSc compared with healthy controls (28.7% versus 65.2; P<0.001, odds ratio [OR] 0.21, 95% confidence interval [95% CI] 0.11–0.38). When activatory and inhibitory KIR genes were analyzed in combination, the concomitant presence of KIR2DS2 and absence of KIR2DL2 (KI2DS2+/KIR2DL2-) phenotype was more frequent in SSc patients than in the control group (26.08% versus 1.75%; P<0.001, OR=19.94, 95%CI [4.78–175.10]). On the other hand, the presence of both KIR2DS2 and KIR2DL2 was more frequent in the control group (26.96% versus 57.39%; P=0.000005, OR=0.27, 95%CI [0.15–0.49]). No significant difference in KIR genes polymorphisms was found between lSSc and dSSc disease subsets. The combination of KIR2DS2+/KIR2DL2– may be a risk factor for development of SSc while the higher frequency of the inhibitory KIR2DL2 gene in the control group suggest to a protective effect. These results indicate a potential role of KIR genes in the SSc pathogenesis.

As células Natural Killer (NK) fazem parte da resposta imune inata, sendo a primeira linha de defesa do organismo contra vírus, bactérias, tumores e microorganismos. Estas células induzem a morte da célula-alvo quando não há o reconhecimento das moléculas de antígenos leucocitários humanos (HLA) de classe I, através de seus receptores, chamados Killer cell Immunoglobulin-like Receptor (KIR). Vários estudos demonstram o envolvimento dos genes KIR na patogênese das doenças auto-imunes. Acredita-se que combinações desses genes possam ser favoráveis para o desenvolvimento da esclerose sistêmica (ES). Portanto, o conhecimento destes genes relacionados às células NK poderiam ser úteis para o entendimento da patogênese da ES. O objetivo deste estudo é investigar o polimorfismo dos genes KIR em um grupo de pacientes com ES, incluindo a forma difusa e limitada da doença. A freqüência do receptor inibidor KIR2DL2 foi significantemente menor nos pacientes comparada com a do grupo controle (28,7% versus 65,2%; P<0,001; OR=0,21; IC95% 0,11–0,38). Quando analisamos a combinação do receptor inibidor 2DL2, com a presença do ativador 2DS2 (KI2DS2+/KIR2DL2-), encontramos uma maior freqüência nos pacientes (26,1% versus 1,7%; P<0,001; OR=19,94; IC95% 4,7–175,1). Por outro lado, a presença de ambos KIR2DL2 e KIR2DS2 foi mais freqüente no grupo controle (26,9% versus 57,3%; P<0,001; OR=0,27; 95%CI 0,1–0,4). Nenhuma diferença estatística no polimorfismo dos genes KIR foi encontrada entre a forma difusa e a forma limitada. A combinação KIR2DS2+/KIR2DL2– parece ser um fator de risco para o desenvolvimento da ES enquanto a alta freqüência do gene inibidor KIR2DL2 no grupo controle parece ter uma função protetora. Estes resultados indicam um potencial papel dos genes KIR na patogênese da ES. / Natural killer (NK) cells have an important role in the early responses to viral infections. They kill diverse target cells with decreased or absent expression of major histocompatibility complex (MHC) class I molecules through the Killer Cell Immunoglobulin-Like Receptors (KIR). Many studies have reported association of KIR genes with autoimmune diseases. The objective of this study is to investigate possible associations of KIR polymorphisms with systemic sclerosis (SSc), including the limited (lSSc) and diffuse (dSSc) forms of the disease. The frequency of inhibitory KIR2DL2 was significantly decreased among patients with SSc compared with healthy controls (28.7% versus 65.2; P<0.001, odds ratio [OR] 0.21, 95% confidence interval [95% CI] 0.11–0.38). When activatory and inhibitory KIR genes were analyzed in combination, the concomitant presence of KIR2DS2 and absence of KIR2DL2 (KI2DS2+/KIR2DL2-) phenotype was more frequent in SSc patients than in the control group (26.08% versus 1.75%; P<0.001, OR=19.94, 95%CI [4.78–175.10]). On the other hand, the presence of both KIR2DS2 and KIR2DL2 was more frequent in the control group (26.96% versus 57.39%; P=0.000005, OR=0.27, 95%CI [0.15–0.49]). No significant difference in KIR genes polymorphisms was found between lSSc and dSSc disease subsets. The combination of KIR2DS2+/KIR2DL2– may be a risk factor for development of SSc while the higher frequency of the inhibitory KIR2DL2 gene in the control group suggest to a protective effect. These results indicate a potential role of KIR genes in the SSc pathogenesis.

Orientador: Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T22:06:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_PatriciaDanieleAzevedo_M.pdf: 2003445 bytes, checksum: 597310400704b8df5b1e07544bd6caca (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Durante a gestação em animais que possuem placentação hemocorial, a hipóxia no primeiro terço da prenhez é um dos fatores cruciais para indução da angiogênese e o adequado desenvolvimento da placenta. Contudo, esta hipóxia se contrapõe à intensa atividade das células que requerem elevado metabolismo, gerando um estresse fisiológico para estas células presentes na interface materno-fetal. Presume-se que estas células necessitem de mecanismos apropriados de citoproteção para sua sobrevida enquanto comprometidos ativamente no suporte funcional do útero gestante. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo investigar a expressão e a distribuição da proteína de choque térmico 70 (HSP70) na interface materno-fetal durante a gestação normal em camundongos e a sua possível variação em condição de estresse adicional induzido experimentalmente através da lesão embrionária. Sítios de desenvolvimento embrionário/fetal de camundongos prenhes do dia de gestação (dg) 6 ao 17 e, após 30 minutos, 1, 6 e 12 h dos animais submetidos à lesão cirúrgida do embrião (LCE) no dg 9 foram coletados para: - processamento histotécnico convencional de embebição em parafina destinados às análises citoquímicas (lectina DBA e reação de TUNEL) e imunocitoquímicas (anti-HSP72/73, anti-PCNA); - embebição em resina Lowilcryl- K4M para imunocitoquímica ultraestrutural (anti-HSP72/73); - obtenção de homogenados teciduais destinados à SDS-PAGE das frações protéicas e Westernblot (anti-HSP72/73) e, - extração de RNA de homogenados teciduais e de células uNK isoladas para análise de transcritos (HSP72 e 73) com amplificação pelo RTPCR. As análises imunocitoquímicas demonstraram que as células uNK eram as únicas células que expressavam de forma constante as isoformas HSP72/73 ao longo da gestação, sendo confirmada a expressão dos transcritos gênicos das isoformas HSP72/73 nas células uNK isoladas pelo RT-PCR. A imunomicroscopia eletrônica detectou marcação conspícua nas mitocôndrias das células uNK. A análise quantitativa demonstrou que a lesão do embrião reduz o número de células uNK positivas para HSP72/73 e, o SDS/PAGE/Western-blotting identificou as isoformas HSP72 e 73 presente nos homogenados teciduais do útero com uma perceptível redução na intensidade da banda correspondente ao HSP73 nas amostras de pós-lesão, sem afetar significativamente a isoforma HSP72. As análises realizadas com a dupla marcação de TUNEL e PCNA demonstrarm redução de células uNK PCNA positivas no útero submetido a lesão embrionária e aumento de núcleos marcadas positivamente pelo TUNEL. Estes resultados demonstram de forma inédita a expressão de HSP72/73 nas células uNK, sendo inédita também a constatação em leucócitos, sugerindo um papel citoprotetor para estas células importantes na manutenção da gestação. A redução de células uNK HSP72/73 positivas no útero gestante desencadeada pela lesão embrionária, consubstancia a hipótese da atuação da HSP 72/73 como chaperona citoprotetora nas células uNK sendo crítica a atuação da isoforma HSP73 presente na mitocôndria através da regulação negativa das vias de morte celular por apoptose nas células uNK / Resumo: Durante a gestação em animais que possuem placentação hemocorial, a hipóxia no primeiro terço da prenhez é um dos fatores cruciais para indução da angiogênese e o adequado desenvolvimento da placenta. Contudo, esta hipóxia se contrapõe à intensa atividade das células que requerem elevado metabolismo, gerando um estresse fisiológico para estas células presentes na interface materno-fetal. Presume-se que estas células necessitem de mecanismos apropriados de citoproteção para sua sobrevida enquanto comprometidos ativamente no suporte funcional do útero gestante. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo investigar a expressão e a distribuição da proteína de choque térmico 70 (HSP70) na interface materno-fetal durante a gestação normal em camundongos e a sua possível variação em condição de estresse adicional induzido experimentalmente através da lesão embrionária. Sítios de desenvolvimento embrionário/fetal de camundongos prenhes do dia de gestação (dg) 6 ao 17 e, após 30 minutos, 1, 6 e 12 h dos animais submetidos à lesão cirúrgida do embrião (LCE) no dg 9 foram coletados para: - processamento histotécnico convencional de embebição em parafina destinados às análises citoquímicas (lectina DBA e reação de TUNEL) e imunocitoquímicas (anti-HSP72/73, anti-PCNA); - embebição em resina Lowilcryl- K4M para imunocitoquímica ultraestrutural (anti-HSP72/73); - obtenção de homogenados teciduais destinados à SDS-PAGE das frações protéicas e Westernblot (anti-HSP72/73) e, - extração de RNA de homogenados teciduais e de células uNK isoladas para análise de transcritos (HSP72 e 73) com amplificação pelo RTPCR. As análises imunocitoquímicas demonstraram que as células uNK eram as únicas células que expressavam de forma constante as isoformas HSP72/73 ao longo da gestação, sendo confirmada a expressão dos transcritos gênicos das isoformas HSP72/73 nas células uNK isoladas pelo RT-PCR. A imunomicroscopia eletrônica detectou marcação conspícua nas mitocôndrias das células uNK. A análise quantitativa demonstrou que a lesão do embrião reduz o número de células uNK positivas para HSP72/73 e, o SDS/PAGE/Western-blotting identificou as isoformas HSP72 e 73 presente nos homogenados teciduais do útero com uma perceptível redução na intensidade da banda correspondente ao HSP73 nas amostras de pós-lesão, sem afetar significativamente a isoforma HSP72. As análises realizadas com a dupla marcação de TUNEL e PCNA demonstrarm redução de células uNK PCNA positivas no útero submetido a lesão embrionária e aumento de núcleos marcadas positivamente pelo TUNEL. Estes resultados demonstram de forma inédita a expressão de HSP72/73 nas células uNK, sendo inédita também a constatação em leucócitos, sugerindo um papel citoprotetor para estas células importantes na manutenção da gestação. A redução de células uNK HSP72/73 positivas no útero gestante desencadeada pela lesão embrionária, consubstancia a hipótese da atuação da HSP 72/73 como chaperona citoprotetora nas células uNK sendo crítica a atuação da isoforma HSP73 presente na mitocôndria através da regulação negativa das vias de morte celular por apoptose nas células uNK / Abstract: During the pregnancy of animals developing hemochorial placenta, the hypoxia in the first third of pregnancy is one of the crucial factor for induction of angiogenesis and adequate placental development. However, this hypoxia is contradictory to the great dynamism and metabolism of cells required in the pregnant uterus, conditioning a physiological stress for the cells present at the maternal-fetal interface. It is presumed these cells demand appropriate cytoprotective mechanism for their survival while are committed to actively support the pregnancy. In this way, the present work aimed to investigate the expression and distribution of the chapelone isoforms heat shock protein 72 and 73 (HSP72/73) at the maternal fetal-interface through the pregnancy in mice and its possible variations under additional stressing condition induced experimentally by embryo lesion. Embryo/fetus developing sites of pregnant mice from gestational days (gd) 6 to 17 and, after 30min, 1h and 6h of surgical embryo lesion (SEL) on gd 9 mice, were collected for: - conventional paraffin embedding for cytochemical (DBA lectin and TUNEL reaction) and immunocytochemical (anti-HSP72/73, anti-PCNA) analysis; - LR-white resin embedding for ultrastructural immunocytochemistry (anti- HSP72/73); - uterine tissue homogenates for SDS-PAGE of proteins fractions and Western-blot (anti-HSP7273) and; - RNA extratction form uterine tissue homogenates and isolated uNK cells for transcripts (HSP72 and 73) amplification by RT-PCR. The immunocytcchemical analysis showed the uNK cells as the only cell expressing constantly the HSP72/73 isoforms throughout the gestation, being confirmed the expression of both gene isoforms by RT-PCR in uNK cells. The immunoelectron microscopy detected conspicuous labeling in the mitochondria of uNK cells. The quantitative analysis demonstrated that embryo-lesion reduced the number of HSP72/73 positive uNK cells in the uterus and, SDS/PAGE and Westernblot identified the HSP72 and 73 isoforms present in the tissue homogenates with low reactive intensity of the band corresponding to HSP73 in the after-lesion samples, without affecting significantly the HSP72 isoform. The analysis of TUNEL and PCNA double labelling showed decreasing of PCNA positive-uNK cells in the uterus after embryo-lesion and increasing of TUNEL positive nuclei. These results confirms the expression of HSP72 and HSP73 isoforms in the uNK cells through the gestation and to date, this is also the first report showing HSP70 in leukocytes, suggesting a cytoptotective function to this cell while working actively as important cells supporting the pregnancy. The decreasing of HSP72/73 positive uNK cells in the pregnant uterus triggered by embryo lesion consubstantiate the hypothesis of HSP72/73 working as cytoprotective chaperone in the uNK cells, and the HSP73 isoform in the mitochondria seems to be critical on down-regulation of apoptotic cell depth pathway / Abstract: During the pregnancy of animals developing hemochorial placenta, the hypoxia in the first third of pregnancy is one of the crucial factor for induction of angiogenesis and adequate placental development. However, this hypoxia is contradictory to the great dynamism and metabolism of cells required in the pregnant uterus, conditioning a physiological stress for the cells present at the maternal-fetal interface. It is presumed these cells demand appropriate cytoprotective mechanism for their survival while are committed to actively support the pregnancy. In this way, the present work aimed to investigate the expression and distribution of the chapelone isoforms heat shock protein 72 and 73 (HSP72/73) at the maternal fetal-interface through the pregnancy in mice and its possible variations under additional stressing condition induced experimentally by embryo lesion. Embryo/fetus developing sites of pregnant mice from gestational days (gd) 6 to 17 and, after 30min, 1h and 6h of surgical embryo lesion (SEL) on gd 9 mice, were collected for: - conventional paraffin embedding for cytochemical (DBA lectin and TUNEL reaction) and immunocytochemical (anti-HSP72/73, anti-PCNA) analysis; - LR-white resin embedding for ultrastructural immunocytochemistry (anti- HSP72/73); - uterine tissue homogenates for SDS-PAGE of proteins fractions and Western-blot (anti-HSP7273) and; - RNA extratction form uterine tissue homogenates and isolated uNK cells for transcripts (HSP72 and 73) amplification by RT-PCR. The immunocytcchemical analysis showed the uNK cells as the only cell expressing constantly the HSP72/73 isoforms throughout the gestation, being confirmed the expression of both gene isoforms by RT-PCR in uNK cells. The immunoelectron microscopy detected conspicuous labeling in the mitochondria of uNK cells. The quantitative analysis demonstrated that embryo-lesion reduced the number of HSP72/73 positive uNK cells in the uterus and, SDS/PAGE and Westernblot identified the HSP72 and 73 isoforms present in the tissue homogenates with low reactive intensity of the band corresponding to HSP73 in the after-lesion samples, without affecting significantly the HSP72 isoform. The analysis of TUNEL and PCNA double labelling showed decreasing of PCNA positive-uNK cells in the uterus after embryo-lesion and increasing of TUNEL positive nuclei. These results confirms the expression of HSP72 and HSP73 isoforms in the uNK cells through the gestation and to date, this is also the first report showing HSP70 in leukocytes, suggesting a cytoptotective function to this cell while working actively as important cells supporting the pregnancy. The decreasing of HSP72/73 positive uNK cells in the pregnant uterus triggered by embryo lesion consubstantiate the hypothesis of HSP72/73 working as cytoprotective chaperone in the uNK cells, and the HSP73 isoform in the mitochondria seems to be critical on down-regulation of apoptotic cell depth pathway / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

INTRODUÇÃO: O objetivo do estudo foi avaliar o perfil de marcadores imuno-histoquímicos relacionados às células NK em biópsias de aloenxertos renais com diagnóstico anatomopatológico de rejeição aguda (mediadas por células T ou anticorpos) e estabelecer relações desses marcadores com parâmetros morfológicos de lesão à microcirculação e sobrevida do enxerto. MÉTODOS: Estudo retrospectivo histórico que revisou 74 biópsias realizadas entre janeiro de 2009 e dezembro de 2012, de pacientes com rejeição aguda mediada por células T (n=36), rejeição aguda mediada por anticorpos com expressão positiva (n=19) ou negativa (n=19) para o marcador C4d, juntamente com levantamento de dados clínicos e laboratoriais pertinentes ao estudo. Foram realizadas reações imuno-histoquímicas, para os marcadores CD56, CD57, CD16, CD68, CD3, CD8 e CD4 com ênfase para os marcadores CD56 e CD16. Foi feita análise das células positivas em toda a cortical da biópsia nos compartimento intersticial, glomerular e vascular. Testes estatísticos foram aplicados conforme os pressupostos definidos no objetivo da pesquisa. RESULTADOS: No compartimento intersticial, células CD56+ (P = 0,004) e CD57+ (P < 0,001) foram expressas em maior quantidade em biópsias negativas para dosagem sérica de anticorpos específicos anti-doador (DSA) com diagnóstico de rejeição aguda mediada por células T. CD56 intersticial foi associado estatisticamente com presença de glomerulite (g >= 1) (P = 0,02) e ausência / leve capilarite peritubular (ptc <= 1) (P = 0,003). Células intersticiais positivas para o marcador CD56 com média superior a 0,56 céls/mm2 tiveram uma pior sobrevida do enxerto renal (P = 0,028). Biópsias com contagem inferior ou igual a 0,56 cél/mm2 tiveram associação estatisticamente significante para ausência ou leve capilarite peritubular (P = 0,012) e com contagem superior a 0,56 céls/mm2, foram associadas à presença de glomerulite (P = 0,002). Foi observado maior número de células positivas para o marcador CD16 no compartimento glomerular em biópsias positivas para dosagem sérica de DSA com diagnóstico de rejeição aguda mediada por anticorpos (P = 0,03) e em biópsias com presença de glomerulite (P = 0,009). Presença de maior número de células CD16+ no compartimento intersticial associou-se com capilarite peritubular (P = 0,0001). CONCLUSÕES: Maior expressão de células CD56 positivas no compartimento intersticial das biópsias foi significantemente associada com escores relacionados à lesão na microcirculação, especialmente glomerulite, com rejeição aguda mediada por células T e pior sobrevida do enxerto renal. Células CD16 positivas, no compartimento glomerular foram associadas com rejeição aguda mediada por anticorpos e glomerulite. As variações na expressão dos marcadores de células NK nos diferentes compartimentos da biópsia renal podem sugerir presença de envolvimento das células NK em diferentes vias do sistema imune nas rejeições agudas de aloenxertos renais / INTRODUCTION: The aim of this study was to investigate the immunohistochemical profile of markers related to NK cells from renal allograft biopsies with morphological diagnosis of acute rejection (T-cells or antibodies mediated rejection) and to study associations of those markers with types of rejection, microcirculation injury morphological parameters and graft survival. METHODOLOGY: Historical retrospective study that reviewed 74 biopsies performed between January 2009 and December 2012 in patients with acute T-cell-mediated rejection (n=36) and acute antibody-mediated rejection with (n=19) or without evident C4d deposition (n=19). The study was performed with relevant clinical and laboratory data. Immunohistochemical reactions were performed for CD56, CD57, CD16, CD68, CD3, CD8 and CD4 markers with highlights for CD56 and CD16. Counting of positive cells throughout cortical biopsy was performed in glomerular, interstitial and vascular compartments. Statistical tests were applied according to assumptions set out the goal of the study.RESULTS: DSA-negative biopsies-from patients with acute T-cell mediated rejection (aTCMR) had an increased expression of CD56+ and CD57+ cells (P = 0.004 and P < 0.001) in the interstitial compartment in comparison with donor-specific antibodies ( DSA)-positive biopsies from patients acute antibody-mediated rejection with and without C4d deposition. Interstitial CD56+ cells had an increased expression for presence of glomerulitis (g >= 1) (P = 0.02) and peritubular capillaritis (ptc >= 2) (P = 0.003). Interstitial CD56 + cells with mean superior to 0.56cells/mm2 had worse allograft survival (P = 0.028). CD56+ cells in the interstitial compartment with mean inferior or equal to 0.56cells/mm2 associated with absence or mild peritubular capillaritis (P = 0.012) and mean superior to 0.56cells/mm2 was associated with presence of glomerulitis (P = 0.002). CD16+ cells was increased in the glomerular compartment in DSA-positive biopsies (P = 0.03) and in the presence of glomerulitis (P = 0.009). Interstitial CD16+ cells associated with peritubular capillaritis (P = 0.0001).CONCLUSION: CD56+ cell infiltrates in the interstitial compartment were significantly associated with microcirculation injury scores, especially glomerulitis, acute T-cell mediated rejection and clinical outcomes. CD16+ cell infiltrates in glomerular compartment was associated with acute antibody-mediated rejection and glomerulitis. Our findings showed variations in expression of NK cells markers in renal biopsy different compartments which might suggest the involvement of NK cells in different immune system pathways in acute renal allograft rejection

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Tese ( doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T11:14:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ramos_AlineLisie_D.pdf: 13996403 bytes, checksum: 20b3e94e609f9ce6fd4214680378bb52 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A Chlorella vulgaris (CV) é uma alga microscópica bastante rica em nutrientes. Além de alto valor nutritivo, a Chlorella tem demonstrado possuir importantes atividades terapêuticas. Vários trabalhos do nosso laboratório e outros demonstram os efeitos protetores desta alga contra infecções virais e bacterianas, tumores, entre outros. No presente trabalho avaliamos os efeitos do tratamento profilático/terapêutico com a dose de 50mg/Kg/dia de CV sobre a resposta imunohematopoética de animais normais e portadores de tumor ascítico de Ehrlich (TAE). O estudo dos mecanismos envolvidos na proteção produzida pela alga frente às alterações induzidas pelo TAE no sistema imuno-hematopoético, demonstrou aumentos significativos na atividade de células NK, na produção de citocinas com padrão Th1 (IL-2 e INF-g) e na liberação de TNF-a por células esplênicas, paralelamente a uma diminuição na produção de IL-10 (padrão Th2). Além disso, o tratamento com CV protegeu o hospedeiro da mielossupressão provocada pelo desenvolvimento tumoral, seja agindo diretamente na formação e manutenção do estroma medular, estimulando a atividade das células estromais, ou ainda estimulando a produção de citocinas reguladoras da hematopoese como a IL-6 e a IL-1a. Constatamos ainda que o tratamento com CV aumenta a atividade estimuladora de colônias (CSA) no soro de animais portadores de tumor e a capacidade proliferativa de células esplênicas. Outros resultados que merecem destaque são aqueles relacionados à ativação macrofágica. Nossos resultados demonstram que, em animais normais, o tratamento com CV promove aumento significativo nos níveis de TNF-a nos sobrenadantes das culturas de macrófagos peritoneais e esplênicos sem alterar a produção de IFN-g e IL-10. Além disso, o restabelecimento da produção normal de TNF-a, IFN-g e IL-10 por macrófagos peritoneais de animais portadores de TAE e reversão parcial dos efeitos produzidos pela presença do tumor na atividade dos macrófagos esplênicos, também foram observados. Outro efeito do CV sobre macrófagos peritoneais de animais portadores de TAE foi o estímulo da produção de H2O2 e NO2 -. Analisando nossos resultados podemos dizer que a CV além de possuir alto valor nutritivo, capacidade antioxidante e atividade anti-viral e antibacteriana, apresenta importante atividade imunomoduladora frente ao desenvolvimento tumoral, já que na presença do tumor o hospedeiro que vem recebendo Chlorella é capaz de reagir mais prontamente e com maior vigor na indução de mecanismos essenciais de defesa imunológica. Neste sentido, sugerimos que a alga Chlorella vulgaris pode ser um candidato a agente preventivo e complementar no tratamento do câncer. / Abstract: Chlorella vulgaris (CV) is a microscopic alga rich in nutrients. Besides the high nutritive value, this alga has shown important therapeutic properties. Many studies from our laboratory and others have shown the protective effects of CV against viral and bacterial infections, tumors, among others. In this work we evaluated the effects of the prophylactic/therapeutic treatment with a dose of 50 mg/Kg/day in normal and Ehrlich ascites tumor (EAT)-bearing mice. The study of the mechanisms involved in the protection produced by the CV against the EAT, induced alterations in the immune-hematopoietic system; demonstrating significant improvements in the NK cells activity, Th1 (IL-2 and INF-g) and TNF-a cytokines production by mononuclear spleen cells, concomitantly with the decrease of IL-10 (Th2) production. Moreover, treatment with CV protected the host of myelosuppression caused by tumor development, it is acting directly in the formation and maintenance of bone marrow stroma, by stimulating the activity of stromal cells, or stimulating the production of important hematopoiese regulatory cytokines like IL-6 and IL-1a. We are also certain that the treatment with CV increases the colony-stimulating activity (CSA) in the serum of tumor bearing mice and the proliferative capacity of spleen cells. Other results that deserve attention are those related to macrophage activation. Our results show that in normal mice, treatment with CV, promotes significant increase in the TNF-a levels in upernatants of the cultures of peritoneal and spleen macrophages without altering the production of IFN-g and IL-10. Moreover, restoration of the normal production of TNF-a, IFN-g and IL-10 by peritoneal macrophages from animal carriers of EAT and partial reversal of the effects produced by the presence of tumor in the splenic macrophages activity were also observed. Another effect of CV on peritoneal macrophages of tumor bearing mice was the stimulation in the production of NO2 - and H2O2. Looking at our results we can say that the alga Chorella vulgaris in addition to its high nutritional value, antioxidant capacity and antiviral and antibacterial activities, it also presents important immunomodulatory activity against tumor development, since that in the presence of the tumor, the host that has received Chlorella is able to react more promptly and with greater force in the induction of essential mechanisms of immune defense. Accordingly, we suggest that the alga Chlorella vulgaris can be a candidate for the preventive and complementary treatment of cancer by strengthening the immune system. / Doutorado / Farmacologia