Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2015. / Submitted by Patrícia Nunes da Silva (patricia@bce.unb.br) on 2015-11-19T12:14:54Z No. of bitstreams: 1 2015_ClaudinerPereiradeOliveira_Parcial.pdf: 2443702 bytes, checksum: 27ecb94c6a87d4d9866d7a765425ee6f (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2015-11-19T12:27:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_ClaudinerPereiradeOliveira_Parcial.pdf: 2443702 bytes, checksum: 27ecb94c6a87d4d9866d7a765425ee6f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T12:27:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_ClaudinerPereiradeOliveira_Parcial.pdf: 2443702 bytes, checksum: 27ecb94c6a87d4d9866d7a765425ee6f (MD5) / Uma das malformações mais comuns do sistema nervoso é a agenesia do corpo caloso (ACC) completa ou parcial que faz parte de um grupo de malformações cerebrais complexas que, normalmente, podem resultar em atraso no desenvolvimento neuropsicomotor (ADNPM), deficiência intelectual (DI) e estar ou não associada com dismorfias e malformações congênitas múltiplas. A etiologia da ACC é heterogênea e, na maioria das vezes, envolve alterações cromossômicas que não são identificadas por citogenética convencional. A análise cromossômica por microarranjos (CMA) permitiu ampliar o alcance e a sensibilidade na detecção de deleções e duplicações submicroscópicas para a compreensão de seus papéis nos processos patogênicos e tem revelado inúmeras alterações associadas à ACC. O principal objetivo deste estudo foi investigar a presença de rearranjos cromossômicos em pacientes com ACC associada à ADNPM e/ou DI e/ou malformações congênitas. Foram selecionados 54 pacientes com ACC total ou parcial, associada à ADNPM e/ou DI e sem diagnóstico de síndrome genética definida. Em todos eles foi realizada uma investigação de alterações cromossômicas submicroscópicas por meio da CMA utilizando a plataforma Affymetrix CytoScan®750k (Affymetrix, EUA). Dos 54 pacientes investigados, 32% apresentaram apenas alterações submicroscópicas não descritas no DGV (Database of Genomic Variants) que foram analisadas quanto à herança e seu potencial patogênico. A CMA realizada nos genitores identificou que em 50% destes indivíduos as alterações eram de novo e em 64% dos casos as CNVs envolviam microduplicações e/ou microdeleções que não poderiam ser detectadas pelas técnicas tradicionais de cariótipo. Não foram identificadas alterações recorrentes na amostra corroborando a grande heterogeneidade genética das malformações do CC. Além disso, identificou-se também que as alterações fenotípicas provocadas por treze CNVs distintas afetam um total de treze genes e quatro regiões citogenômicas críticas para o neurodesenvolvimento que exerceriam impacto direto ou indireto nas malformações do corpo caloso. Com isso, reafirma-se a importância da CMA como instrumento inicial no diagnóstico de quadros sindrômicos em que a etiologia é desconhecida. ___________________________________________________________________________ ABSTRACT / Agenesis of the corpus callosum (ACC) is among the most frequent human brain malformations and encompasses either total absence (complete ACC) or absence from birth of at least one, but not all, of the anatomically defined regions of the corpus callosum (partial ACC). It is a heterogeneous condition, for which several different genetic causes are known and it is part of complex brain malformations that typically result in developmental delays (DD ), intellectual disability (ID) and whether or not associated with dysmorphisms and multiple congenital malformations. ACC frequently involves chromosomal changes that are not identified by standard cytogenetics. Chromosomal Microarray Analysis (CMA) allowed extending the range and sensitivity in detection of submicroscopic deletions or duplications. And to investigate the presence of chromosomal rearrangements in patients with ACC linked to DD and others congenital malformations. We selected 54 patients with total or partial ACC, associated with DD and congenital malformations without knowned genetic syndrome. In all patients was carried out an investigation of submicroscopic chromosomal changes through the CMA using the Affymetrix 750k CytoScan® arrays. In cases that Copy Number Variations (CNVs) did not found in the DGV database, the parents were also investigated. CMA results demonstrate that 32% of CNVs analysed had not been described in DGV. In these cases, 50% of the CNVs were de novo and 72% were microduplications or microdeletions that could not be detected by G-banding karyotype. All CNVs found were not recurrent, consequence of remarkable genetic heterogeneity in ACC. Furthermore, CMA also demonstrated that CNVs were associated with neurodevelopmental disorders. After analysis of the results we propose thirteen new genes and four critic genomic regions identified there could be impact in corpus callosum anomalies corroborating the importance of CMA as first tier-test in cases of idiopathic syndromic ACC.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / Schizophrenia is considered a neurodevelopmental psychiatric disorder severe that usually affects the individual in the young stage. For this reason, prevention and early diagnosis become a goal to improve the long-term results. The omega 3 fatty acids (ω-3) have demonstrated efficacy for preventing the conversion of schizophrenia in a population of ultra high risk. The present study aimed to evaluate the effect of supplementation of ω-3 through behavioral and biochemical parameters in an animal model of schizophrenia induced by ketamine. The research used 144 male Wistar rats 30 days old that were separated into two groups for administration of ω-3 or vehicle for 15 days. Subsequently, these groups were subdivided into four groups of 12 mice for intervention with ketamine or saline for 7 days. The locomotor activity, social interaction test and memory tests were evaluated at day 52 of life of the animals. The blood was collected minutes before the animals were killed and serum obtained after 24 hours to evaluate the levels of brain-derived neurotrophic factor (BDNF). The animals were sacrificed after the behavioral tests and striatum, prefrontal cortex and hippocampus extracted for mRNA BDNF expression analysis. The results showed, for the times of 5, 10 and 15 minutes, there was an increase in locomotor activity in the ketamine group compared to control. It was observed in group ω-3 plus ketamine that hyperlocomotion caused by ketamine was prevented at 10 and 15 minutes upon administration of ω-3. Regarding the social interaction test, it was found that animals treated with ketamine did not show difference in latency to the start of the test compared to the control group. However, showed less contacts with each other, as well as a lower total time of interaction when compared to the control. The group ω-3 plus ketamine did not show impaired social interaction. This study showed that there was significant impairment of immediate memory, short and long term in the ketamine treated group compared to control. In group ω-3 plus ketamine, memories immediate, short and long term have been preserved. Serum levels of BDNF were significantly higher in ω-3 plus ketamine group compared to control, ω-3 and ketamine group. The results of the expression mRNA BDNF showed no significant difference among the four groups analyzed in different brain regions. These findings prove that the administration of ω-3 prevents the positive symptoms, negative and cognitive impairment in an animal model of schizophrenia induced by ketamine in the prodromal phase, providing thus, important evidence for future clinical trials in confirming the use of ω-3 to prevent this disorder. It also reinforces the beneficial role of fatty acids in brain protection of individuals at ultra high risk for psychosis. / The estimated new cancer cases worldwide in 2007 were 12 million, with 5.4 million cases diagnosed in developed and 6.7 millions in developing countries. The number of cancer-related deaths was 7.6 million, 2.9 million in developed and 4.7 million in developing countries. Malignant neoplasm ranks second (12.5%) as causes of death worldwide, surpassed by cardiovascular causes (19.6%). Gastric Cancer (GC) ranks fourth as the most frequent cause of cancer worldwide, with one million new cases in 2007, behind lung, breast and colon and rectum. 70% of new cases occur in developing countries. Currently, GC is the second most common cause of cancer deaths, accounting for 800,000 deaths annually. In Brazil, estimates for 2010 point to the occurrence of 489,270 new cases of cancer, and the GC occupying fifth place in attendance with 21,500 new cases. The acquisition of the migratory behavior of cancer cells is a prerequisite to break up organized tissue structures, invade and metastasize. Recently, the expression of proteins that block actin has been associated with the invasive behavior of tumors. The Cofilin is an actin-blocking protein, which regulates the actin cytoskeleton to maintain and depolymerize actin filaments. The interest for cofilin and its cascade have increased because of its relationship with tumor invasion, metastasis and be a potential prognostic factor in cancer. We conducted a retrospective study, observational, descriptive and analytical. We used all the pathological reports of patients undergoing gastrectomy for adenocarcinoma between June 2002 and June 2009, totaling 130 cases. Of these, 44 cases were selected randomly. The average age of patients was 68 years, with 63.6% of male sex. In assessing the depth of invasion, advanced lesions with involvement beyond the submucosa corresponded with 72.7% of cases. The diffuse type in Lauren's classification was the most prevalent with 68.1%. The bacterium H. pylori was positive in 72.7% of carcinomas. Lymph nodes involvement accounted for 70.4% of cases. At the end of the study 56.8% of patients were alive. When applied statistical tests to assess the relationship of cofilin with the other independent variables, only the depth of tumor invasion and the presence of positive lymph node were statistically significant. In conclusion, despite the cofilin is present in locally advanced tumors and lymph node metastases, and the small number of patients in the sample, we cannot conclude that it can be used as a prognostic factor.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do extremo Sul Catarinense, UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / A fenilcetonúria (PKU) é um erro inato do metabolismo de herança autossômica recessiva caracterizado bioquimicamente pelo acúmulo do aminoácido fenilalanina (Phe) em tecidos e líquidos biológicos de pacientes. A PKU é causada pela deficiência da atividade da enzima fenilalanina hidroxilase, que catalisa a hidroxilação de Phe à tirosina. A prevalência dessa doença é estimada em 1:10.000 nascidos vivos e suas principais manifestações clínicas são neurológicas, incluindo deficiência intelectual, convulsão, microcefalia, desmielinização e alterações comportamentais. Até o presente momento, os mecanismos fisiopatológicos do dano cerebral encontrado em pacientes acometidos pela PKU não estão completamente estabelecidos. Nesse cenário, o objetivo do presente estudo foi investigar os níveis plasmáticos de marcadores de neurodegeneração em pacientes fenilcetonúricos. Para tanto, amostras de sangue periférico de 14 indivíduos saudáveis (grupo controle) e 24 indivíduos diagnosticados com PKU sob dieta terapêutica (restrição da ingestão de Phe e suplementação de aminoácidos essenciais) pareados por idade e gênero foram coletadas e processadas para obtenção de plasma. Foram avaliados os níveis plasmáticos de Phe, do fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), de catepsina D, de mieloperoxidase (MPO), do inibidor do ativador de plasminogênio tecidual-1 (PAI-1), dos fatores de crescimento derivados de plaquetas dos tipos AA (PDGF-AA) e AB/BB (PDGF-AB/BB), da quimiocina regulada sob ativação e secreção de células T (RANTES) e das moléculas de adesão celular neuronal (NCAM), intracelular-1 (ICAM-1) e vascular-1 (VCAM-1). Entre os pacientes com PKU, dois apresentavam microcefalia, quatro apresentavam déficit no desenvolvimento neuropsicomotor e dois apresentavam distúrbio comportamental. Observou-se que os pacientes fenilcetonúricos, mesmo sob tratamento, apresentavam níveis plasmáticos de Phe aumentados quando comparados aos indivíduos do grupo controle. Por outro lado, níveis significativamente reduzidos de BDNF, neurotrofina importante para plasticidade sináptica, sobrevivência celular e processos de memória e aprendizagem, foram observados em plasma de pacientes. Adicionalmente, as concentrações de PDGF-AA e PDGF-AB/BB, fatores de crescimento importantes para a oligodendrogênese e, consequentemente, para a mielinização, também encontraram-se diminuídas no grupo de pacientes em comparação aos indivíduos saudáveis. Não foi observada nenhuma diferença estatisticamente significativa entre os grupos nos níveis plasmáticos de catepsina D, MPO, PAI-1, RANTES, NCAM, ICAM-1 e VCAM-1. Tomados em conjunto, os resultados apresentados neste trabalho sugerem que alterações na sobrevivência e plasticidade neuronal e prejuízo na oligodendrogênese possam estar envolvidos no dano cognitivo e na hipomielinização apresentados por pacientes acometidos pela PKU.

Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, como requisito parcial para obtenção do título de Doutor em Ciências da Saúde. / Meningite neonatal é uma doença caracterizada pela inflamação das meninges, ocorrendo geralmente nos primeiros 28 dias de vida. Infecções por Streptococcuspneumoniae, meningite e/ou sepse, em recém-nascidos está associada com a ruptura prolongada de membranas, doença materna e prematuridade. Apresenta alta taxa de mortalidade e 50% dos sobreviventes apresentam algum tipo de deficiência. O ambiente enriquecido pode ser utilizado na tentativa de minimizar o dano cognitivo, já que é uma abordagem não farmacológica e tem sido demonstrando sua ação na plasticidade cerebral, neurogênese e aumento da expressão do fator neurotrófico, bem como proteção contra os efeitos de lesões cerebrais. O objetivo deste trabalho foi avaliar os mediadores inflamatórios, integridade da barreira hematoencefálica e parâmetros comportamentais em ratos Wistar neonatos submetidos ao ambiente enriquecido após indução da meningite porStreptococcuspneumoniae. Os níveis de citocinas tiveram um aumento antes da ruptura da barreira hematoencefálica, que ocorreu no hipocampo em 18horas e no córtex em 12horas após a indução da meningite pneumocócica. Os níveis de TBARS aumentaram em 12 h e 24 h no córtex sem ocorrer alteração no hipocampo. A carbonilação de proteínas foi aumentada em 24 h e 48 h no hipocampo, sem ocorrer alteração no córtex. Houve aumento na atividade da SOD no hipocampo em 12 h e 48 h. Ocorreu aumento da Catalase em 48 h no hipocampo e no córtex. Os níveis de atividade da Mieloperoxidase não alteraram no hipocampo e no córtex após a indução da meningite. Nos testes comportamentais, 60 dias após a indução da meningite, o grupo meningite não mostrou diferença no desempenho entreas sessões treino e teste na atividade de campo aberto, sugerindo prejuízo da memória de habituação. No grupo meningite/ambiente enriquecido, o desempenho foi significativamente diferente, mostrando preservação da memória de habituação. Natarefa de esquiva inibitória, não houve diferença comportamental entre as sessões treino e teste no grupo meningite, demonstrando comprometimento da memória aversiva. Por outro lado, ocorreram diferenças no desempenho do grupo meningite/ambiente enriquecido, demonstrando preservação da memória aversiva. Tanto no grupo meningite, quanto no meningite/ambiente enriquecido, os níveis de fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF),interleucina-4 (IL-4) e IL-10 foram aumentados no hipocampo e no liquido cefalorraquidiano (LCR). Os dados sugerem que o ambiente enriquecido é uma terapia não invasiva, que permite a recuperação dedéficits de memória causados por meningite neonatal.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / The Central Nervous System (CNS) infections remain a major cause of morbidity and mortality worldwide, especially in infants and children. The neonatal bacterial meningitis occurs between birth and twenty-eighth day of track and is characterized by intense inflammation affecting piamater, the arachnoid and the subarachnoid space, thereby generating complex brain that cause cognitive and neuropsychological impairments through an inflammatory reaction and apoptotic regardless of the pathogenic microorganism. The aim of this study was to evaluate aversive memory and memory of habituation, and brain-derived neurotrophic factor levels (BDNF) in the hippocampus of adult rats submitted to pneumococcal meningitis in the neonatal period. Streptococcus pneumoniae was grown overnight in 10 ml of Todd-Hewitt broth, diluted in fresh medium and obtained growth to logarithmic phase. The culture was centrifuged for 10 minutes at 5000 × g and resuspended in sterile saline until the desired concentration of 1x106 CFU/mL. Animals, newborn rats (3-4 days old) were subjected to puncture the cisterna magna with a needle number 23. The needle position was verified by free flow of CSF brain. The animals were divided into two groups receiving 10 μL of sterile saline (sham group n = 12) or equivalent volume of the suspension of S. pneumoniae (meningitis group n = 19). After inoculation, all animals received fluid replacement. The confirmation of meningitis was made at 16 hours after induction by quantitative culture of 5 μL of cerebral spinal fluid (CSF) obtained by puncture of the cisterna magna, followed by the start of antimicrobial treatment in both groups (Ceftriaxone 100 mg/kg) for 7 days. The mortality in the sham group was 16.6% and in 47.3% meningitis group. Sixty days after the induction the animals were subjected to two behavioral tests: habituation to the open field and inhibitory avoidance task, immediately after the behavioral tests the animals were killed and the hippocampus was removed and stored at -80°C. The BDNF levels in the hippocampus were quantified using enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and standard protocols. In the habituation to the open field task there was no difference between training and testing sessions in the number of crossing and rearings in meningitis group (p = 0.0612 and p = 0.0692 respectively). The sham group showed a significant difference between training and test session in the number of crossing and rearings (p = 0.0001). In the inhibitory avoidance task, the sham group showed significant differences in latency time between training and testing (p = 0.001), as meningitis group there was no difference between the lag time in training and testing (p = 0,077). There was a decrease in the BDNF levels in the hippocampus of rats with meningitis compared to the sham group. Our results indicated a decreased hippocampal BDNF levels can be related to memory impairment of adult rats subjected to neonatal meningitis. This study is a useful model for studying long-term behavioral deficits resulting from meningitis in the neonatal period. / As infecções do SNC continuam sendo uma importante causa de mortalidade e morbidade no mundo todo, especialmente em recém-nascidos e crianças. A meningite bacteriana neonatal ocorre entre o nascimento e o vigésimo oitavo dia de vida, sendo caracterizada por uma intensa inflamação, afetando a piamáter, a aracnóide e o espaço subaracnóideo, gerando desta forma, complexos cerebrais que causam prejuízos neuropsicológicos e cognitivos através de uma reação inflamatória e apoptótica, independente do microrganismo patogênico. O objetivo deste estudo foi avaliar a memória aversiva, a memória de habituação e os níveis do fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) no hipocampo de ratos Wistar adultos submetidos à meningite pneumocócica no período neonatal. Streptococcus pneumoniae foi cultivado durante a noite em 10 mL de caldo de Todd-Hewitt, diluído em meio a fresco e obtido crescimento até a fase logarítmica de crescimento. A cultura foi centrifugada por 10 minutos a 5000 × g e ressuspensa em salina estéril até a concentração desejada de 1x106 UFCol/mL. Os animais, ratos Wistar recém nascidos (3-4 dias de vida), foram submetidos à punção na cisterna magna com uma agulha calibre 23. A posição da agulha foi verificada pelo fluxo livre do LCR cerebral. Os animais foram divididos em dois grupos que receberam 10 μL de salina estéril (grupo sham n=12) ou volume equivalente da suspensão de S. pneumoniae (grupo meningite n=19). Após a inoculação, todos os animais receberam reposição de líquidos. A confirmação da meningite foi feita em 16 h após a indução por cultura quantitativa de 5 μL de LCR obtidos por punção da cisterna magna, seguido do início do tratamento com antimicrobiano em ambos os grupos (ceftriaxona, 100 mg/kg) por 7 dias. A mortalidade no grupo sham foi de 16,6% e no grupo meningite 47,3%. Sessenta dias após a indução, os animais foram submetidos a dois testes comportamentais: habituação ao campo aberto e esquiva inibitória. Imediatamente após os testes comportamentais, os animais foram mortos e o hipocampo foi removido e armazenado a -80°C. Os níveis de BDNF no hipocampo foram quantificados utilizando ensaio imunoenzimático (ELISA) e protocolos padrão. Na tarefa de habituação ao campo aberto não houve diferença entre as sessões treino e teste no número de crossing e rearings no grupo meningite (p=0.0612 e p=0.0692 respectivamente). O grupo sham apresentou diferença significativa entre as sessões treino e teste no número de crossing e rearings (p=0.0001). Na tarefa de esquiva inibitória, o grupo sham apresentou significativas diferenças no tempo de latência entre treino e teste (p=0.001), já no grupo meningite não houve diferença entre o tempo de latência no treino e teste (p=0.077). Houve uma diminuição nos níveis de BDNF no hipocampo de ratos submetidos à meningite em relação ao grupo sham. Nossos resultados indicam que a diminuição dos níveis de BDNF hipocampal está relacionada ao prejuízo na memória de habituação neste modelo animal utilizando ratos adultos submetidos à meningite neonatal. Este estudo pode ser uma ferramenta útil para avaliar os déficits comportamentais futuros decorrentes da meningite no período neonatal.

Orientador : Valéria Valente / Banca: Enilza Maria Espreafico / Banca: Cleslei Fernando Zanelli / Resumo: O glioblastoma multiforme (GBM) é o tumor cerebral primário mais comum e letal, e na maioria dos casos leva o paciente à morte em aproximadamente 14 meses após o diagnóstico. O tratamento é realizado com remoção cirúrgica da massa tumoral, seguida de radioterapia e quimioterapia. Entretanto, devido à alta resistência das células tumorais, frequentemente o tumor cresce novamente poucas semanas após a cirurgia. Recentemente demonstramos que HJURP (Holliday Junction-Recognizing Protein), uma nova proteína envolvida em reparo de DNA, está altamente superexpressa em células de glioblastoma. Esta proteína está também superexpressa em outros tipos tumorais, como câncer de pulmão e mama, sendo que maiores níveis de expressão de HJURP correlacionam-se com piores prognósticos de sobrevida em ambos os casos, assim como observamos para os pacientes com GBM. Neste trabalho vimos que os níveis de mRNA de HJURP estão aumentados nas linhagens celulares de GBM T98G, U138MG, U251MG e U343MG, porém não na linhagem U87MG que expressa níveis similares ao de fibroblastos não tumorais. Por análises de western blot, observamos uma redução nos níveis de HJURP após tratamento das células com radiação ionizante, sendo a redução mais proeminente na linhagem U251MG. Vimos ainda que o reparo de quebras na dupla-fita de DNA, induzidas pela radiação ionizante, ocorre de modo similar nas células de GBM U138MG, U251MG e U343MG silenciadas ou não para HJURP. Vimos também que células com silenciamento de HJURP foram mais sensíveis à radiação, apresentando maiores taxas de apoptose e morte celular em relação às células não silenciadas. Além disso, observamos que o silenciamento de HJURP promove senescência precoce na linhagem de GBM U87MG, enquanto que este efeito não é observado na linhagem T98G e em células RO, que são fibroblastos não tumorais. Conjuntamente, estes dados... / Abstract:Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common and lethal type of primary brain tumor, and usually leads the patient to death in approximately 14 months after diagnosis. The treatment consists of surgical removal of the tumor, followed by radiotherapy and chemotherapy. However, due to the high resistance of tumor cells, frequently the tumor grows again a few weeks after surgery. We recently demonstrated that HJURP (Holliday Junction Recognizing Protein), a novel protein involved in DNA repair, is highly overexpressed in glioblastoma cells. This protein is also overexpressed in other tumor types, such as lung and breast cancer, in which higher expression levels are correlated with a poorer survival prognosis, as we also observed for GBM patients. In this study we found that HJURP mRNA levels are increased in the GBM cell lines T98G, U138MG, U251MG e U343MG, while in U87MG cells HJURP levels are similar to that of non-tumoral fibrobalsts. We have also observed that the repair of DNA double-stranded breaks, induced by ionizing radiation, occurs similarly in GBM cells U138MG, U251MG and U343MG when HJURP is silenced or not. We also saw that U87MG and T98G cells were more sensitive to radiation when HJURP is knocked down, presenting higher rates of apoptosis and cell death. Moreover, we observed that HJURP silencing promotes premature senescence in the U87MG cell line, whereas T98G cells and non-tumoral fibroblasts are not significantly affected. Altogether, these data suggests that HJURP is related with the control of DNA repair activity and is required for the maintenance of GBM cells viability. / Mestre

Orientador: Euclides Timóteo da Rocha / Banca: Marco Antonio Zanini / Banca: Cristovam Scapulatempo Neto / Resumo: Avaliar a densidade microvascular (DMV) em astrocitomas de baixo grau (ABG), astrocitomas anaplásicos (AA) e glioblastoma multiforme (GBM) por imuno-histoquímica, correlacionando com índices de captação pela SPECT com SESTAMIBI (MIBI). Estudo transversal com coleta retrospectiva que avaliou 48 pacientes, com faixa etária de 20 a 73 anos, com o diagnóstico de tumores cerebrais ditos ABG (somente os difusos), AA e GBM admitidos no Hospital de Câncer da Fundação Pio XII de Barretos. As SPECT-MIBI foram classificadas como alteradas ou normais inicialmente pela análise visual. Também foram analisadas de forma semiquantitativa através do desenho de regiões de interesse (RI) com a obtenção de um índice para correlacionar com os parâmetros da DMV. Esta foi determinada com o emprego de anticorpo anti-CD34. Os GBM, AA e ABG representaram 50%, 16,7% e 33,3% da amostra, respectivamente. Treze exames foram visualmente normais, e 35 considerados alterados. A DMV média teve diferença significativa entre os AA e ABG (p=0,040), mas não entre as SPECT-MIBI normais e alteradas. Os índices de contagem média obtidos através da análise semiquantitativa das SPECT-MIBI não apresentaram correlação com a DMV. Entre os GBM não foi encontrada nenhuma significância, exceto pela maior probabilidade de encontrar-se exames alterados neste tipo histológico. A DMV demonstrou relação com o grau histológico entre os AA e ABG, mas os índices de captação das SPECT-MIBI não apresentaram correlação com a DMV / Abstract: To evaluate the microvascular density (MVD) in low-grade astrocytomas (LGA), anaplastic astrocytomas (AA) and glioblastoma multiforme (GBM) by immunohistochemistry technique using anti-CD34, correlated with SPECT-MIBI uptake parameters. This is a cross-sectional study with retrospective assessment data which evaluated 48 subjects, ages ranging from 20 to 73 years, all with diagnosis of brain tumors known as LGA (only diffuse type), AA and GBM who were admitted to the Hospital de Cancer da Fundação Pio XII de Barretos. The SPECT-MIBI images were initially classified as normal or altered by visual analysis. Then they were also considered for semiquantitative analysis through drawing of anatomical regions of interest (ROI) resulting in an index to correlate with the MVD parameters. DMV was determined with the use of monoclonal antibody anti-CD34. GBM, AA and LGA represented 50%, 16.7% and 33.3% of the sample, respectively. Thirteen images were visually normal, while 35 were considered abnormal. There were significant differences in MVD between AA and LGA (p = 0.04), but not between the normal and abnormal SPECT-MIBI. The mean counts obtained by semiquantitative analysis from SPECT-MIBI showed no correlation with MVD. Among GBM subjects it was not seen any significance, except for being most likely to find this histological test as abnormal. MVD had relationship with the histological grade between AA and LGA, but there was no correlation with SPECT-MIBI / Mestre

Made available in DSpace on 2016-11-30T14:53:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 110923_Drielly.pdf: 1423856 bytes, checksum: 49d3213badf69244142db38f9743998d (MD5) license.txt: 214 bytes, checksum: a5b8d016460874115603ed481bad9c47 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introducao: A sepse e uma importante complicacao infecciosa na area da saude, tanto para sua incidencia e severidade, bem como para o seu potencial de progressao a morte. Estrategias futuras de tratamento podem se concentrar no equilibrio entre as acoes imunes e antiinflamatorias em tempo habil. Objetivo: Avaliar a influencia da administracao de lipolissacarideo (LPS) no periodo neonatal sobre a disfuncao cerebral em ratos submetidos a sepse polimicrobiana severa na idade adulta. Metodos: Ratos Wistar machos com idade de 14 dias foram tratados com LPS (100 ¿Êg/kg) ou salina, intraperitoneal. Completando 60 dias de idade, foram submetidos ao modelo de sepse por ligacao e perfuracao cecal (CLP). Os grupos foram divididos em salina+sham, LPS+sham, salina+CLP e LPS+CLP, 24 horas apos CLP, foi avaliado no liquido cefalorraquidiano (LCR), as citocinas (TNF-¿¿, IL-1¿À e IL-6) os niveis de nitrito e nitrato (N/N). No hipocampo e cortex pre-frontal foi avaliado a mieloperoxidase (MPO), dano oxidativo em lipidios (TBARS), proteinas carboniladas,grupamentos sulfidrilas (SH), atividade da catalase (CAT), superoxido dismutase (SOD) e a permeabilidade da barreira hematoencefalica (BHE). Resultados: Demonstrou-se que os niveis de citocinas e de N/N estao aumentados no grupo CLP e o LPS foi eficaz em reduzir somente os niveis de citocinas. Na MPO e grupamentos SH, nao foram observados resultados significativos. No dano em lipidios e proteinas encontrou-se no pre-frontal um aumento dos niveis no grupo CLP, em ratos pre-imunizados com LPS houve uma diminuicao desses niveis. Na atividade das enzimas antioxidantes, houve uma diminuicao dos niveis somente na CAT, no hipocampo, no grupo imunizado. Para a quebra da BHE, houve um aumento nos grupos CLP, o grupo imunizado diminuiu seus niveis, no pre-frontal. Conclusao: O pre-tratamento com LPS preveniu o dano de marcadores ligados a inflamacao e ao estresse oxidativo, e diminuiu a permeabilidade da BHE apos a sepse na idade adulta. / Introduction: The sepsis is an important infectious complication in the health area, both for its incidence and severity, and for its potential of progression to death. Future strategies of treatment can concentrate on the balance among the immune and anti-inflammatory actions in time. Aim: Evaluate the influence of the administration of lipopolysaccharide (LPS) in the neonatal period over the brain dysfunction in rats submitted to severe polymicrobial sepsis at adult age. Methods: Male Wistar rats at 14 days of age treated with LPS (100 ìg/kg) or saline, intraperitoneal. At 60 days of age, the rats were submitted to the sepsis model by cecal ligation puncture (CLP). The groups were divided in saline+sham, LPS+sham, saline+CLP and LPS+CLP, 24 hours after CLP, the cerebrospinal fluid (CSF) was evaluated, besides the cytokines (TNF-á, IL-1â e IL-6) and the levels of nitrite and nitrate (N/N). On hippocampus and prefrontal cortex was evaluated the myeloperoxidase (MPO), oxidative damage to lipids (TBARS), carbonyl proteins, sulfhydryl groups (SH), catalase activity (CAT), superoxide dismutase (SOD) and the permeability of the blood-brain barrier (BBB). Results: We have demonstrated that the cytokine levels and N/N are increasing in the group CLP and LPS was effective in reduce only the cytokine levels. In MPO and SH groups, we have not observed significant results. In the damage to lipids and proteins, we have found in the prefrontal an increase of the levels in the group CLP and in rats preimmunized with LPS there was a decrease of these levels. In the activity of the antioxidant enzymes there was a reversal of the levels only in CAT, in the hippocampus, in the immunized group. For the breaking of BHE, there was an increase in the groups CLP, the immunized group decreased its levels, in the prefrontal. Conclusion: The pretreatment with LPS prevented the damage of markers connected to inflammation and oxidative stress, and decreased the permeability of BBB after the sepsis at adult age.

Introduction: Obesity is a public health problem that has reached epidemic proportions in the world. Seeks to complement the studies to clarify aspects of the pathophysiology of obesity recognizing their involvement in the impairment of cognitive functions. To evaluate inflammatory and oxidative stress parameters hippocampus, striatum and prefrontal cortex of mice subjected to obesity induced by high fat diet in order to assess the impact of obesity on cognition related structures. Methods: Swiss male mice aged 40 days, were divided into two matched groups, that received the high-fat diet control group (normolipídica diet) were subjected to 10 weeks of experiment. It was estimated body weight, visceral fat, cytokines (IL-1β, IL-10, TNF-α), oxidative damage levels in lipid and protein carbonylation and activity of superoxide dismutase and catalase in the hippocampus, striatum and prefrontal cortex. Results: In this study we identified increase in IL-1β levels in the hippocampus, striatum and prefrontal and TNF-α levels only in the striatum and hippocampus of animals when compared to the control. As the striatum there was an increase in IL-10 levels. In parameters of oxidative stress, the assessment of damage to lipids showed an increase in the hippocampus of obese animals and carbonylation proteins present in the hippocampus and striatum of obese animals. SOD activity did not occur difference and catalase activity was observed increase in prefrontal and inhibiting its activity in the hippocampus. Conclusion: We suggest that the central inflammation when installed in the hippocampus, cortex and striatum may contribute to obesity-related cognitive impairment. / Submitted by Alexandre Pedron Martins (alexandre.martins8@unisul.br) on 2017-05-05T18:02:45Z No. of bitstreams: 2 Dissertação de Ciências da Saúde - Luana da Rosa Souza.pdf: 1014227 bytes, checksum: b8dc6b4ccd72c5c382218e65bb285d89 (MD5) Contrato de cessão de direitos autorais - Luana da Rosa Souza.pdf: 599472 bytes, checksum: e0e9c252c2e07f54fd52301f008ec6fa (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Pedron Martins (alexandre.martins8@unisul.br) on 2017-05-05T18:03:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação de Ciências da Saúde - Luana da Rosa Souza.pdf: 1014227 bytes, checksum: b8dc6b4ccd72c5c382218e65bb285d89 (MD5) Contrato de cessão de direitos autorais - Luana da Rosa Souza.pdf: 599472 bytes, checksum: e0e9c252c2e07f54fd52301f008ec6fa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T18:03:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação de Ciências da Saúde - Luana da Rosa Souza.pdf: 1014227 bytes, checksum: b8dc6b4ccd72c5c382218e65bb285d89 (MD5) Contrato de cessão de direitos autorais - Luana da Rosa Souza.pdf: 599472 bytes, checksum: e0e9c252c2e07f54fd52301f008ec6fa (MD5) Previous issue date: 2016-06-29 / Introdução: A obesidade é um problema de saúde pública que vem alcançando proporções epidêmicas no mundo. Busca-se complementar os estudos para o esclarecimento de aspectos relacionados a fisiopatologia da obesidade reconhecendo seu envolvimento no comprometimento de funções cognitivas. Objetivo: Avaliar parâmetros inflamatórios e de estresse oxidativo no hipocampo, no estriado e no córtex pré-frontal de camundongos submetidos à obesidade induzida por dieta hiperlipídica, a fim de avaliar o impacto da obesidade sobre estruturas relacionadas a cognição. Métodos: Camundongos Swiss machos com idade de 40 dias, foram pareados e divididos em dois grupos, os que receberam dieta hiperlipídica e controles (dieta normolipídica), submetidos a 10 semanas de experimento. Foi avaliado peso corporal, gordura visceral, níveis de citocinas (IL-1β, IL-10, TNF-α), níveis de dano oxidativo em lipídeos e de carbonilação de proteínas e atividade da superóxido dismutase e da catalase no hipocampo, estriado e no córtex pré-frontal. Resultados: Neste trabalho foi identificado aumento nos níveis de IL-1β, no hipocampo, estriado e no pré-frontal e nos níveis de TNF-α apenas no estriado e no hipocampo dos animais, quando comparado ao controle. Apenas no estriado ocorreu aumento nos níveis de IL-10. Nos parâmetros de estresse oxidativo, a avaliação de dano a lipídeos apresentou aumento no hipocampo dos animais obesos e a carbonilação de proteínas presente no hipocampo e no estriado dos animais obesos. A atividade de SOD não ocorreu diferença e a atividade da catalase, foi observado aumento no pré-frontal e inibição da sua atividade no hipocampo. Conclusão: Podemos sugerir, que a inflamação central quando instalada em no hipocampo, córtex e estriado pode contribuir para danos cognitivos relacionado a obesidade.

The neurological manifestations in patients with acute sepsis as well as cognitive impairment in survivors of sepsis are associated with decreased quality of life and increased mortality and certain aspects of these changes result from pathophysiological mechanisms as oxidative stress. In this context, studies show that antioxidants may play a role in attenuating mechanisms associated with brain dysfunction such as oxidative stress and mitochondrial dysfunction energy. Thus, the literature provides us with important information about the antioxidant role of selenium compounds in the central nervous system, we intend to evaluate the effects of ebselen and diphenyl diselenide in early and late brain dysfunction in rats submitted to an animal model of sepsis. Male Wistar rats were subjected to sepsis by cecal ligation and puncture (CLP), which after treated with oral doses of EB (50 mg / kg), DD (50 mg / kg) or vehicle (oil). Twelve and 24 h after CLP, the rats were sacrificed and samples of brain structures (hippocampus, striatum, cerebellum, and prefrontal cortex) were obtained and analyzed under the parameters of oxidative damage assessment techniques in lipid damage by measuring the formation of thiobarbituric acid reactive substances, protein damage by the formation of carbonyl groups and evaluation of mitochondrial respiratory chain complexes besides the activity of the enzyme creatine kinase. Our results observed in the reduction of oxidative damage to lipids and proteins in the different cerebral structures studied times with the administration of DD, however EB seems to exert the same effect. Such changes are reflected in the assessment of mitochondrial respiratory chain complexes by reversing the decreased activity of the complex caused by the model of CLP. However, for the activity of creatine kinase in 24 hours only positive results found with increased activity through the administration of DD. In this sense, our results suggest that DD may be an important therapeutic target for brain dysfunction associated with sepsis by reversing oxidative damage, dysfunction and energy creatine kinase activity being more effective than EB. / Submitted by Rogele Pinheiro (rogele.pinheiro@unisul.br) on 2018-01-17T16:26:38Z No. of bitstreams: 1 107682_Fernanda.pdf: 978564 bytes, checksum: ab0776573c37e4bd7bf86c12155e9cd4 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Barreiros (ana.barreiros@unisul.br) on 2018-01-17T17:16:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 107682_Fernanda.pdf: 978564 bytes, checksum: ab0776573c37e4bd7bf86c12155e9cd4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-17T17:16:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 107682_Fernanda.pdf: 978564 bytes, checksum: ab0776573c37e4bd7bf86c12155e9cd4 (MD5) Previous issue date: 2013 / As manifestações neurológicas agudas em pacientes com sepse estão associadas à diminuição da qualidade de vida e aumento de mortalidade e certos aspectos dessas alterações resultam de mecanismos fisiopatológicos como o estresse oxidativo. Nesse contexto, estudos mostram que substâncias antioxidantes podem exercer um papel importante na atenuação de mecanismos associados à disfunção cerebral tais como o estresse oxidativo e disfunção energética mitocondrial. Assim, visto que a literatura nos fornece informações importantes sobre o papel antioxidante de compostos de selênio como o disseleneto de difenila (DD) e o ebselen (EB) no Sistema Nervoso Central, avaliamos os efeitos desses compostos na disfunção cerebral em ratos submetidos ao modelo animal de sepse. Foram utilizados ratos Wistar machos submetidos à sepse por ligação e perfuração cecal (CLP), que logo após foram tratados com doses via oral de EB (50 mg/kg), DD (50 mg/kg) ou veículo (óleo). Doze e 24h após CLP os ratos foram sacrificados e amostras de estruturas cerebrais (hipocampo, estriado, cerebelo, córtex pré-frontal e córtex) foram obtidas e analisadas sob parâmetros de danos oxidativos pelas técnicas de avaliação de dano em lipídios através da mensuração da formação das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, dano em proteínas pela formação de grupamentos carbonilas e avaliação dos complexos da cadeia respiratória mitocondrial além da atividade da enzima creatina quinase. Observamos em nossos resultados a diminuição do dano oxidativo em lipídios e proteínas em diferentes estruturas cerebrais nos tempos estudados com a administração de DD, no entanto EB parece não exercer o mesmo efeito. Tais alterações se refletem na avaliação dos complexos da cadeia respiratória mitocondrial através da reversão da diminuição da atividade dos complexos causada pelo modelo de CLP. No entanto, para a atividade de creatina quinase, somente em 24 horas encontramos resultados positivos com o aumento da atividade através da administração de DD. Nesse sentido, nossos resultados sugerem que DD pode ser um importante alvo terapêutico para a disfunção cerebral associada a sepse por reverter o dano oxidativo, a disfunção energética e a atividade da creatina quinase mostrando-se mais eficaz que EB.