Objetivo: Comparar as características inflamatórias da superfície ocular de pacientes com ceratocone (CE) às de pacientes com alergia ocular (AO). Métodos: Realizou-se um estudo transversal, envolvendo 134 participantes, divididos em três grupos: alergia ocular (AO)(n=55), ceratocone com ou sem alergia ocular associada (CE) (n=61) e controle (CO) (n=18). Os participantes do estudo foram recrutados e avaliados em clínica privada na cidade de Chapecó-SC, no período de polinização, em dezembro de 2013 e de outubro de 2014 a janeiro de 2015. Para análise dos grupos, todos os pacientes foram avaliados clinicamente por especialistas em alergia e oftalmologia e submetidos a exame de tomografia de córnea com tecnologia de Scheimpflug (Pentacam HRR), medida da osmolaridade da lágrima por impedanciometria (TearLabR) em ambos os olhos e preenchimento de questionários padronizados para alergia ocular (QA) e para doença de superfície ocular (OSDI). Em 107 de 134 pacientes (CE=50, AO=42, CO=15) foram dosadas as citocinas IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-31, IL-33, IL-17 A, IL-23, TNF-alfa, TNF-beta e INF-gama na lágrima, por meio de tecnologia multiplex com beads magnéticas. A coleta das amostras de lágrimas (5 microlitros no mínimo) foi realizada por meio de aspiração no menisco lacrimal temporal inferior, com capilares de vidro em um único olho. As amostras foram congeladas imediatamente após coleta e mantidas a -80 oC, até o momento da dosagem e análise em agosto de 2016. Resultados: Constatou-se alta prevalência de alergia no grupo com ceratocone 68,85% (42/61), sendo que 42,62% (26/61) dos pacientes desse grupo apresentaram alergia ocular. A intensidade do prurido ocular foi maior nos pacientes AO e no grupo CE, do que no grupo controle (p < 0,001 e p=0,047) e maior no grupo AO do que no CE (p < 0,001). As citocinas INF-gama, IL-13, IL-15, IL-17A, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-31, TNF-beta foram estatisticamente mais elevadas no grupo AO, quando comparadas ao grupo CE. No grupo controle, houve correlação direta da diferença absoluta da osmolaridade (delta osmol) com o nível encontrado para todas as citocinas dosadas. Observou-se, ainda, correlação direta entre níveis de IL-1beta, IL-6 e TNF-alfa com OSDI (p=0,044, p=0,010 e p=0,047) no grupo CE. A osmolaridade foi maior no grupo CE, quando comparado ao AO (p=0,043). Conclusões: Pacientes com ceratocone apresentaram alterações inflamatórias na superfície ocular, tais como: correlação direta do índice OSDI com IL-1beta, IL-6 e TNF-alfa na lágrima; intensidade de prurido mais elevada que no grupo controle e osmolaridade maior que no grupo com AO. No grupo AO, observou-se índices OSDI maiores que no grupo controle e aumento de várias citocinas dosadas, quando comparadas ao grupo CE. Nos pacientes controle, a instabilidade no filme lacrimal (delta osmol), correlacionou-se diretamente com a inflamação ocular (citocinas dosadas). Observou-se alta prevalência de formas leves de alergia ocular no grupo CE (40,98%) e apenas um caso de alergia ocular grave (ceratoconjuntivite atópica [1,3%]), esses dados estão em desacordo com a maior parte da literatura disponível sobre o assunto. Em conjunto, os achados do presente estudo podem estar relacionados a características específicas da região estudada / Purpose: To compare the inflammatory profile of the ocular surface of patients with keratoconus with that of patients with ocular allergy. Methods: A cross sectional study was carried out and involved 134 participants, divided into three groups: ocular allergy group (OA) (N=55), keratoconus with or without ocular allergy (KC) (N=61) and a control group (CO) (N=18). The study participants were recruited and evaluated in a private clinic in the city of Chapecó-SC, during the pollination period in 2013 (December) and from 2014 to 2015 (October to January). In order to analyze the three groups, all patients were evaluated clinically by allergy and ophthalmology specialists, submitted to a corneal tomography exam with Scheimpflug technology (Pentacam HRR), to impedanciociometry to assess tear osmolarity (Tear LabR) of both eyes and to standardized questionnaire rates for ocular allergy (AQ) and for ocular surface disease index (OSDI). Cytokines (IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-31, IL-33, IL-17 A, IL-23, TNF-alfa, TNF-beta and INF-gama) levels were assessed in 107 out of 134 patients using multiplex technology with magnetic beads. Tear collection of at least 5 microliters was carried out on a single eye by suction in the inferior temporal lacrimal meniscus with glass capillaries. The samples were frozen at -800C, immediately after collection to the time of dosing and analysis in August 2016. Results: The prevalence of allergy in the keratoconus group was 68.85% (42/61), within the same group 42.62% (26/61) of the patients had ocular allergy. Ocular pruritus intensity was higher in the OA group and in the KC group than in the control group (p < 0,001 e p=0,047), and higher in the OA group than in the KC group (p < 0,001). Cytokines INF-gama, IL-13, IL-15, IL-17A, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-31, TNF-beta were statiscally higher in the OA group in comparision to the KC group. In the control group, there was a positive correlation of the difference measurement of osmolarity (osmol delta) between the eyes with all cytokines dosed. In the KC group, IL-1beta, IL-6 e TNF-alfa correlated positively with OSDI (p=0,044, p=0,010 e p=0,047). Tear osmolarity was higher in the KC group than in the OA group (p=0,043). Conclusions: Patients with keratoconus had inflammatory changes in the ocular surface, such as: direct correlation between OSDI and tear IL-1beta, IL-6 and TNF-alpha levels; higher pruritus intensity than the control group and higher osmolarity than the OA group. In the OA group, OSDI levels were higher than in the control group and some cytokines had higher levels than the KC group. In the control patients, tear film instability (delta osmol) was direct correlated to ocular inflammation (dosed cytokines). In the KC group, there was a high prevalence of mild forms of ocular allergy (40.98%) and only one case of severe ocular allergy (atopic keratoconjunctivitis [1.3%]). However, most studies avaiable have associated keratoconus with severe forms of ocular allergy. Together, these findings may be related to specific characteristics of the region of study

O endotélio da córnea realiza a função importante na manutenção da transparência da mesma e regulação da hidratação do estroma. É composto por uma monocamada de células poligonais, achatadas e interligadas que recobrem a superfície posterior da córnea. Dentre as técnicas utilizadas para avaliação do endotélio, o vermelho de alizarina é uma técnica in vitro de baixo custo, de rápida e fácil execução. Objetivou-se avaliar as células do endotélio da córnea de suínos adultos em suas diferentes regiões, utilizando a coloração por vermelho de alizarina e microscopia óptica. Para esse estudo, foram utilizados 24 bulbos oculares de 12 suínos abatidos, 120 dias de idade, da raça Large White, adultos, machos ou fêmeas. As córneas foram removidas, e o endotélio corado com vermelho de alizarina dissolvido previamente em solução isotônica (0,2 g/100 ml), com pH ajustado para 4,2 com ácido clorídrico e avaliadas no microscópio óptico. Foram feitas fotografias das regiões central, inferior, lateral, medial e superior do endotélio da córnea e, após, foi realizado o estudo do formato de 100 células. Para análise estatística, foi utilizado o teste de variância (ANOVA por medidas repetidas). A percentagem média de células hexagonais na região central do globo ocular direito foi de 82,75%± 6,355, na região inferior 84,83% ± 4,108, na lateral 86,0%± 4,090, na região medial 83,50%± 2,447 e na região superior 83,17%± 4,345. No globo ocular esquerdo, a percentagem média de células hexagonais na região central foi de 81,92 % ±2,539, na região inferior foi de 83,67% ± 3,339, na região lateral de 84,00% ±3,618, na região medial 84,17%± 3,010 e na região superior 82,83% ± 4,064. Não houve diferença estatística significativa com relação à morfologia entre as diferentes regiões da córnea e entre os globos oculares direito e esquerdo. A coloração com vermelho de alizarina e a microscopia óptica foram eficazes para avaliação do formato das células do endotélio da córnea de suínos. Os valores obtidos, com relação ao formato das células da região central da córnea, representam todo o mosaico endotelial, podendo ser extrapolados para as regiões periféricas. / The corneal endothelium perform are important function in maintaing corneal transparency and regulating stromal hydration. It consists of monolayer polygonal cells, fattened and joined, covering of the posterior surface of the cornea. Among the technique used for evaluating the endothelium, Alizarin red vital dye is a in vitro technique for low coast, fast and easy perform. This study aimed to evaluated the endothelial cells from adult pigs cornea in its different regions used the coloration by Alizarin red and, optical microscopy. For this study we used 24 eye bulbs of 12 slaughtered pigs, 120 day of age, of Large White breed, adults, male or female. The cornea was removed and the endothelium stained with Alizarin red, previously dissolved in isotonic solution (0,2g/100 ml), pH adjusted to 4,2 with hydrochloric acid, and evaluated in optical microscope. Photographs were taken of the central regions, lateral, medial and upper corneal endothelium. After the study was performed of 100 cells format. For statistical analysis we used the analysis of variance (ANOVA for repeated measures). The average percentage of hexagonal cells in the central region in the right eye was 82,75%±6,355, in the lower 84,83% ± 4,108, on lateral 86,0%± 4,090, in the medial region 83,50%± 2,447 and the upper region 83,17%± 4,345. In the left eye, the percentage of hexagonal cells in the central region was 81,92 % ±2,539, in lower 83,67% ± 3,339, in lateral 84,00% ±3,618, in medial 84,17%± 3,010 and in upper region 82,83%± 4,064. There was no statistically significant difference in the relation morphology between the different regions of the cornea and between the right and left eyeballs. Staining with Alizarin red and optical microscopy were effective for evaluating the shape of the endothelial cells of the pig cornea. The values obtained in relation of the shape of the central cornea cells, represent the entire endothelial mosaic and can be extrapolated to the peripheral regions.

Diversos corantes vitais vêm sendo estudados e utilizados para a facilitação da capsulotomia curvilínea contínua (CCC) nas cirurgias de catarata no homem e nos animais. Além de corar adequadamente a cápsula anterior da lente e favorecer um melhor desempenho do cirurgião durante a realização da CCC, os corantes vitais devem ser seguros quanto aos seus efeitos sobre as estruturas oculares, em especial ao endotélio corneano, quando empregados com esta finalidade. O azul brilhante é um corante vital já empregado em cirurgias oculares do segmento posterior para coloração da retina e atualmente estudado sobre seu potencial de utilização em cirurgias de catarata para coloração da cápsula anterior da lente. Com o objetivo de avaliar os efeitos do uso intracameral do azul brilhante 0,05% na ultra-estrutura do endotélio corneano de suínos, vinte córneas de suínos foram avaliadas divididas em dois grupos: córneas dos bulbos oculares direitos (grupo controle) e esquerdos (grupo experimental). Todos os bulbos oculares foram previamente avaliados por microscopia especular. No grupo experimental foi realizada injeção intracameral de 0,2ml do corante azul brilhante 0,05% (OPTH-blue®) que permaneceu por um minuto antes de ser removido pela aplicação de solução salina balanceada. As córneas de ambos os grupos foram excisadas e avaliadas por microscopia eletrônica de varredura. Não houve diferença entre as imagens endoteliais obtidas em ambos os grupos. O uso intracameral do azul brilhante 0,05% não causou efeitos deletérios ao endotélio corneano dos suínos e pode, portanto, ser considerado uma escolha segura para a coloração da cápsula anterior da lente para cirurgias de catarata. / Several vital dyes have been studied and used to help the continuous curvilinear capsulotomy (CCC) in cataract surgery in men and animals. Besides staining the anterior capsule of the lens properly and providing the surgeons a better performance in the CCC, the vital dyes must be safe for their effects on ocular structures, particularly the corneal endothelium when used for this purpose. The brilliant blue is a vital dye already employed in the posterior segment eye surgeries for retinal staining and currently studied about its potential use in cataract surgeries to stain the anterior capsule of the lens. In order to evaluate the effects of the use of 0.05% intra-cameral brilliant blue in the ultra-structure of the corneal endothelium of pigs, twenty swine corneas were evaluated in two groups: right eye bulb corneas (control group) and left eye bulb corneas (experimental group). All eye bulbs were previously evaluated by specular microscopy. In the experimental group, a 0.2 ml intra-cameral injection of 0.05% brilliant blue dye (blue-OPTH ®) was given, which remained for a minute before being removed by the application of balanced salt solution. The corneas of both groups were excised and evaluated by scanning electron microscopy. There was no difference between the endothelial images obtained in both groups. The use of 0.05% intra-cameral brilliant blue caused no detrimental effects to the corneal endothelium of pigs and can therefore be considered a safe choice for staining the anterior capsule of the lens for cataract surgery.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-04T16:22:18Z No. of bitstreams: 1 Sergio Alves do Nascimento.pdf: 768542 bytes, checksum: b909fa47d18e5a1f4cc1dfdb90c42f7d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-04T16:22:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sergio Alves do Nascimento.pdf: 768542 bytes, checksum: b909fa47d18e5a1f4cc1dfdb90c42f7d (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / Cells which grow in vitro culture is divided into three categories: primary, secondary or crop finite line and continuous line, that can be grown indefinitely. These tumors derived from transformed cells or artificially or naturally. This work describes a cell line of fetal goat cornea (CorFC) and its growth in media supplemented with low FBS aimed at producing virus antigens caprine arthritis-encephalitis for antibodies by agar gel immunodiffusion. The cell line has CorFC fibroblastic appearance and has been cultivated for more than two years, more than 40 passages without noticeable change in the morphology or the rate of cell multiplication. Of the 163 serum samples tested by micro-AGID with antigen (Ag) commercial (Biovetech, Brazil), 29 (17.79%) were positive, of these, 28 were also positive for micro-AGID-MEM with Ag and Ag -DMEM/12 Ag and 29 with RPMI-1640. We observed excellent agreement adjusted kappa (k) between the micro-AGID tests employing the commercial Ag, Ag-MEM and Ag-DMEM/F12 (k = 0.98) between the antigen and perfect commercial and Ag-RPMI 1640 (k = 1,00). Due to their growth characteristics of cells CorFC have behaved as a continuous lineage, which can only be definitively confirmed with continued passages. The studied cell culture media (MEM, DMEM/F12 and RPMI 1640) showed to be adequate to nourish the cell lineage CorFC. However, considering jointly the medium RPMI 1640 was the most recommended for cultivation, in supplementation of 2% FBS for scheduling and 0.1% to manutenção.As CorFC cell line grown in MEM, and DMEM/F12 RPMI 1640 proved to be highly permissive to CAEV replication of the virus in medium with low FBS, with production of higher quality antigens, reducing input costs and simplify the processes of purification of proteins, especially when the RPMI 1640 is used. / As células que crescem em cultivo in vitro estão divididas em três classes: primárias, de linhagem finita ou cultivos secundários e de linhagem contínua, que podem ser multiplicadas indefinidamente. Estas derivam de tumores ou células transformadas artificial ou naturalmente. Neste trabalho é descrita uma linhagem de células de córnea de feto caprino (CorFC) e seu cultivo em meios suplementados com baixo teor de SFB visando à produção de antígenos do vírus da artrite-encefalite caprina para pesquisa de anticorpos pela imunodifusão em gel de Agar. A linhagem celular CorFC apresenta aparência fibroblástica e vem sendo cultivada há mais de 2 anos, por mais de 40 passagens, sem alteração perceptível na morfologia ou na taxa de multiplicação celular. Das 163 amostras de soros testados pela micro-IDGA, com antígeno (Ag) comercial (Biovetech, Brasil), 29 (17,79%) apresentaram resultado positivo; dessas, 28 também foram positivas à micro-IDGA com Ag-MEM e Ag-DMEM/12 e 29 com o Ag-RPMI 1640. Foi observada ótima concordância ajustada de kappa (k) entre os testes de micro-IDGA empregando-se o Ag comercial, Ag-MEM e Ag-DMEM/F12 (k = 0,98) e perfeita entre o antígeno comercial e Ag-RPMI 1640 (k = 1,00). Devido às suas características de crescimento as células CorFC têm se comportado como de linhagem contínua, o que só poderá ser definitivamente comprovado com a continuação das passagens. Os meios de cultivo celular estudados (MEM, DMEM/F12 e RPMI 1640) demonstraram-se adequados para nutrir as células de linhagem CorFC. Entretanto, considerando em conjunto, o meio RPMI 1640 seria o mais recomendado para seu cultivo, nas suplementações de 2% de SFB para escalonamento e de 0,1% para manutenção.As células da linhagem CorFC cultivadas em MEM, DMEM/F12 e RPMI 1640 mostraram-se altamente permissíveis à replicação do vírus CAEV em meio com baixo teor de SFB, com produção de antígenos de melhor qualidade, redução de custos com insumos e simplificação no processos de purificação de proteínas, sobretudo quando o meio RPMI 1640 é usado.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-06-06T12:33:44Z No. of bitstreams: 2 Tese - Leonardo Mariano Reis - 2016.pdf: 3509741 bytes, checksum: e1f5a9a506233e87a4136a0c0016ae8e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-06-06T15:32:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Leonardo Mariano Reis - 2016.pdf: 3509741 bytes, checksum: e1f5a9a506233e87a4136a0c0016ae8e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T15:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Leonardo Mariano Reis - 2016.pdf: 3509741 bytes, checksum: e1f5a9a506233e87a4136a0c0016ae8e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Keratoconus is a non-inflammatory ocular dysfunction characterized by thinning, protrusion and conical shape of the cornea. The progression of this dysfunction leads to significant decrease in visual acuity and occasionally, in more severe cases, to corneal transplantation. The etiology of keratoconus is complex and the genetic component is among the main factors associated with the development of this disease. The objective of this study was to evaluate the occurrence of mutation in candidate genetic loci and its relation with keratoconus in patients attended in Brazil compared to healthy volunteers, through analysis of single nucleotide polymorphism in the gene DOCK9. In this clinical study, 108 participants were evaluated: 46 keratoconus patients and 62 healthy volunteers (controls). DNA samples were extracted from collected blood from keratoconus patients and controls. The genotyping of the single nucleotide polymorphism rs7995432 in the gene DOCK9 was determined through realtime polymerase chain reaction (qPCR). Single nucleotide polymorphism mutations were observed in both patients and controls. There were no significant differences on the frequency and discrimination of the mutant and wild alleles between patients and controls. The frequency of the mutant allele (C) was 4.8% in patients and 7.6% in controls. For the wild allele (T), the frequencies were 95.2% in patients and 92.4% in controls. The heterozygous genotype was present in 9.5% of patients and 11% of controls, while the homozygous genotype for the wild allele (TT) was found in 90.5% and 87% for patients and controls, respectively. Thus, these results confirm no association of these mutations and the occurrence of keratoconus for this population. / O ceratocone é uma disfunção ocular não-inflamatória caracterizada por afinamento, protrusão e formato cônico da córnea. A progressão desta disfunção ocular induz a diminuição significativa da acuidade visual em pacientes e ocasionalmente, nos casos mais avançados, ao transplante de córnea. A etiologia do ceratocone é complexa e o componente genético está entre os principais fatores associados ao seu desenvolvimento. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de mutação em loci gênicos candidatos e sua relação com ceratocone em pacientes atendidos no Brasil comparados a voluntários saudáveis, através da análise de polimorfismo de nucleotídeo único no gene DOCK9. Neste estudo clínico foram avaliados 108 indivíduos, sendo 46 pacientes com ceratocone e 62 voluntários saudáveis (controles). Amostras de DNA foram obtidas do sangue coletado de pacientes com ceratocone e controles para a realização de análise de genotipagem. O genótipo do polimorfismo de nucleotídeo único rs7995432 no gene DOCK9 foi determinado através de reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR). As mutações de polimorfismos de nucleotídeo único foram observadas em pacientes e controles. Não foram observadas diferenças significativas na frequência e discriminação dos alelos mutante e selvagem entre os pacientes com ceratocone e os controles. A frequência do alelo mutante (C) foi de 4,8% para os pacientes e 7,6% para os controles. Para o alelo selvagem (T), as frequências foram de 95,2% para os pacientes e 92,4% para os controles. O genótipo heterozigótico esteve presente em 9,5% dos pacientes e 11% dos controles, enquanto o genótipo homozigótico para o alelo selvagem (TT) foi encontrado em 90,5% e 87% para os pacientes e controles, respectivamente. Assim, não foi possível fazer uma associação destas mutações com a ocorrência do ceratocone para esta população.

A administração tópica de colírios é a maneira mais conveniente de se tratar doenças oculares. O grande desafio para a tecnologia farmacêutica é garantir que o fármaco administrado nessa forma farmacêutica chegue ao local de ação em concentrações adequadas, com efeitos adversos reduzidos, tempo de ação prolongado e dose única. Para tanto, o desenvolvimento de sistemas de liberação e de estratégias adequadas de administração tornam-se necessários. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da iontoforese na penetração ocular de dendrímeros de poliamidoamina (PAMAM) de geração 4, com diferentes grupos superficiais (PAMAM G4, catiônico e PAMAM G3.5, aniônico), preparar complexos desses dendrímeros com um anti-inflamatório modelo, a dexametasona (Dexa), e avaliar a influência da associação de dendrímeros e iontoforese na penetração corneal da Dexa em modelos ex vivo e in vivo. Complexos Dexa-PAMAM foram obtidos e caracterizados por espectroscopia de infravermelho e ressonância magnética nuclear (H1-RMN, 13C-RMN e DOSY), espalhamento dinâmico de luz e espectroscopia UV/vis para avaliar a formação dos complexos, seu tamanho e potencial zeta, além de alterações na solubilidade da Dexa. A velocidade de liberação da Dexa dos complexos foi verificada por estudos de liberação in vitro utilizando membrana sintética. A penetração e distribuição dos PAMAMs na córnea e sua influência na penetração da Dexa foi avaliada ex vivo utilizando córnea de porco, microscopia confocal de varredura a laser (MCVL) e cromatografia de ultra performance aliada a um detector de massas para quantificação do fármaco permeado. A citotoxicidade dos PAMAMs foi avaliada em cultura de células epiteliais da retina e células epiteliais da córnea. Por fim, verificou-se in vivo a influência da iontoforese e dos PAMAMs sobre a quantidade de Dexa no humor aquoso de olhos de coelhos. Os estudos de caracterização indicaram que a Dexa foi incorporada aos PAMAMs e que esses complexos apresentaram cerca de 50 nm de tamanho médio pela técnica de NTA, com a presença de partículas pequenas e agregadas quando dispersos em meio fisiológico e potencial zeta de + 6,4 mV e -18,5 mV para Dexa-PAMAM G4 e Dexa-PAMAM G3.5, respectivamente. A solubilidade aparente da Dexa aumentou 3,9 e 10,3 vezes nos complexos com PAMAM G4 e PAMAM G3.5, respectivamente. O PAMAM G3.5 e PAMAM G4 diminuiram 82 e 1,7 vezes, respectivamente, o coeficiente de difusão da Dexa. Os estudos ex vivo indicaram que a iontoforese foi capaz de direcionar os dendrímeros para dentro da córnea, além de aumentar 2,9, 5,6 e 3,0 vezes a quantidade de Dexa permeada a partir das formulações que continham Dexa livre, Dexa-PAMAM G4 e Dexa-PAMAM G3.5, respectivamente. Aumentou também a quantidade de Dexa retida na córnea em aproximadamente 2 vezes para todas as formulações. Os experimentos de citotoxicidade evidenciaram a maior toxicidade do PAMAM G4 e sua dependência da concentração e tempo de incubação. Por fim, os experimentos in vivo mostraram que a iontoforese aumentou a concentração de Dexa no humor aquoso cerca de 2, 2,5 e 6,6 para a Dexa livre, Dexa-PAMAM G4 e Dexa-PAMAM G3.5, respectivamente. Portanto, a associação de dendrímeros PAMAM com a iontoforese representa uma estratégia promissora para a administração tópica direcionada e sustentada de fármacos na córnea. / Topical administration of eye drops is the most convenient way for treatment of eye diseases. The challenge for the pharmaceutical technology is to ensure that the drug administered in the eye drops reaches the site of action in appropriate concentrations with reduced side effects, prolonged effect and single dose. Therefore, the development of drug delivery systems and appropriate strategies become necessary. The objective of this work was to evaluate the influence of iontophoresis in the ocular penetration of generation 4 polyamidoamine dendrimers (PAMAM) with different surface groups (PAMAM G4, cationic, and PAMAM G3.5, anionic), prepare complexes of these dendrimers with an anti-inflammatory drug model, dexamethasone (Dexa), and evaluate the influence of dendrimers and iontophoresis association on Dexa cornea penetration using ex vivo and in vivo models. Dexa-PAMAM complexes were obtained and characterized by infrared spectroscopy, nuclear magnetic resonance (H1-NMR, 13C-NMR and DOSY), dynamic light scattering and UV/VIS spectroscopy to evaluate the formation of the complexes, their size and zeta potential, as well as changes in drug solubility. Dexa release rate from complexes was determined from the in vitro release studies using synthetic membrane. The penetration and distribution of PAMAMs into the cornea and their influence in the ex vivo Dexa penetration was assessed using pig\'s cornea, confocal scanning laser microscopy (CSLM) and ultra performance chromatography coupled to a mass spectrometer for quantification of the drug permeated. PAMAMs cytotoxicity was assessed in culture of retina epithelial cells and cornea epithelial cells. Finally, the influence of iontophoresis and PAMAMs on Dexa concentration in the aqueous humor of rabbit eyes was evaluated in vivo. The characterization results showed that Dexa was incorporated to PAMAMs and that these complexes had an average size of approximately 50 nm using the NTA technique, with the distribution of small particles and aggregates when dispersed in physiological medium. The zeta potential of Dexa-PAMAM G4 and Dexa PAMAM G3.5 complexes were +6.4 mV and -18.5 mV, respectively. PAMAM G4 and G3.5 PAMAM enhanced Dexa solubility by 3.9 and 10.3-fold, respectively. PAMAM G3.5 and PAMAM G4 decreased by 82 and 1.7-fold Dexa diffusion coefficient. The ex vivo studies indicated that iontophoresis directed dendrimers into the cornea, increasing the amount of Dexa permeated by 2.9, 5.6 and 3.0-fold for the formulations containing free Dexa, Dexa-PAMAM G4 and Dexa-PAMAM G3.5, respectively. Iontophoresis also increased approximately 2-fold the amount of drug retained into the cornea for all formulations. The cytotoxicity experiments revealed that PAMAM G4 toxicity was dependent on the concentration and incubation time. Finally, the in vivo experiments showed that iontophoresis increased Dexa concentration in the aqueous humor by 2, 2.5 and 6.6-fold for free Dexa, Dexa-PAMAM G4 and Dexa-PAMAM-G3.5, respectively. Therefore, the combination of iontophoresis with PAMAM dendrimers represents a promising strategy for targeted and sustained topical drug delivery to the cornea.

OBJETIVOS: 1) Avaliar os parâmetros de biomecânica ocular provenientes do Corvis ST (Oculus Corvis ST, Scheimpflug Technology; Wetzlar, Germany) obtidos de olhos saudáveis de uma população de pacientes brasileiros. 2) Correlacionar os parâmetros derivados do Corvis ST com a idade de pacientes jovens saudáveis. 3) Verificar se as técnicas de facoemulsificação (FC) e do laser de femtosegundo (LFS), empregadas na correção cirúrgica de catatara, influenciam os parâmetros de biomecânica ocular provenientes do Corvis ST. 4) Analisar as alterações da deformação da córnea observadas em um caso de ectasia pós LASIK com flap espesso. MÉTODOS: 1) Estudo clínico transversal conduzido em 90 pacientes (90 olhos saudáveis). Foram avaliados 11 parâmetros derivados do sistema de tonometria de não contato integrado com a câmera ultrarrápida de Scheimpflug (Oculus Corvis ST, Scheimpflug Technology; Wetzlar, Germany), a saber: deformidade de amplitude (DA); pressão intraocular; 1st A time; tempo de concavidade máxima; 2nd A time; 1st A Length (tempo da primeira aplanação); 2nd A Length (tempo da segunda aplanação); raio de curvatura de maior alcance; raio de curvatura normal; velocidade de entrada (Vin) e de saída (Vout). Estes parâmetros foram correlacionados com a espessura central corneana mensurada pela Tomografia de Córnea e Segmento Anterior (Pentacam® - Oculus, Wetzlar, Germany). 2) Estudo clínico observacional, retrospectivo, conduzido em 89 pacientes (89 olhos saudáveis). Os parâmetros derivados do Corvis ST foram correlacionados com a idade dos pacientes. 3) Estudo clínico prospectivo, envolvendo 151 olhos de 127 pacientes com diagnóstico de catarata nuclear. Setenta e cinco olhos de 65 pacientes foram submetidos à técnica do laser de femtosegundo (AlconLenSx, Aliso Viejo, USA) e 76 olhos de 62 pacientes à facoemulsificação convencional (Alcon Infinit, Fort Worth, USA). Foram avaliados os 11 parâmetros de biomecânica ocular derivados do Corvis ST antes (Pré) e após as cirurgias de catarata (D1, primeiro dia de pósoperatório). A densitometria do cristalino (scattering) foi realizada pelo PNS (Pentacam Nucleus Staging). 4) Avaliação com tomografia de coerência óptica de espessura dos flaps corneanos pós Lasik e análise dos parâmetros biomecânicos provenientes do Corvis ST em uma córnea com ectasia pós Lasik. RESULTADOS: 1) A média de idade dos pacientes foi de 35,80 ± 12,83 anos. A média do equivalente esférico foi de -3,29 ± 3,69 dioptrias. A média da espessura central corneana foi de 547,50 ± 32,00 ?m Os valores dos 11 parâmetros biomecânicos obtidos de olhos saudáveis, foram os seguintes: deformidade de amplitude 1,05 ± 0,08 mm; tempo de concavidade máxima 18,38 ± 0,93 ms; pressão intraocular 16,43 ± 2,15 mmHg; tempo da primeira aplanação (1st A time) 8,32 ± 0,33 ms; tempo da segunda aplanação 23,80 ± 0,44 ms; raio de curvatura de maior alcance 11,09 ± 2,06 mm; raio de curvatura normal 7,59 ± 0,67 mm; tempo da primeira aplanação (1st A Length) 2,07 ± 0,38 mm; tempo da segunda aplanação (2nd A Length) 2,37 ± 0,47 mm; velocidade de entrada (Vin) 0,21 ± 0,05 m/s e velocidade de saída (Vout) -0,33 ± 0,07 m/s. 2) A média de idade dos pacientes foi de 27,50 ± 6,30 anos. O tempo de concavidade máxima alcançada da córnea (HC-time) foi o único dos 11 parâmetros que apresentou correlação significativa com a idade (p=0,04, rs=0,18). 3) A média de idade dos pacientes dos grupos LFS (laser de femtosegundo) e FC (facoemulsificação convencional) foram, respectivamente, 67,6 ± 9,9 anos e 68,4 ± 11,8 anos. No grupo LFS, 9 dos 11 parâmetros foram estatisticamente significativos entre o Pré e D1; e no grupo FC, 7 dos 11 parâmetros foram estatisticamente significativos entre o Pré e D1. Entre os 11 parâmetros biomecânicos avaliados, somente o tempo de concavidade máxima da córnea (HC-time) foi significativamente diferente entre os dois grupos em D1 (p=0,0387). 4) Paciente do sexo feminino, 45 anos, submetida à Lasik em ambos os olhos. Com a utilização da tomografia de coerência óptica (OCT Rtvue, OptoVue, Fremont, CA,USA) foram identificados: um flap com espessura central de 392 ?m no OD e dois cortes, sendo um flap incompleto profundo e o outro mais fino superiormente, no OE. Os parâmetros derivados do Corvis ST como a deformidade de amplitude são diferentes em ambos os olhos. CONCLUSÕES: 1) Os valores de 8 dos 11 parâmetros derivados do Corvis ST foram influenciados pela espessura central da córnea, porém esta influência foi baixa. 2) Em olhos saudáveis de pacientes jovens foi obtida correlação significativa entre a idade e o tempo de concavidade máxima, que é o tempo do início de aplanação até a concavidade máxima alcançada da córnea. 3) O laser de femtosegundo para cirurgia de catarata e a técnica de facoemulsificação convencional induziram alterações nas propriedades biomecânicas da córnea no D1. Dos 11 parâmetros biomecânicos estudados apenas o tempo de concavidade máxima da córnea apresentou diferença significativa entre os grupos (LFS e FC) no D1. 4) A ectasia unilateral após LASIK pode ocorrer devido a flap espesso com falência biomecânica da córnea / PURPOSE: 1) To evaluate ocular biomechanical metrics given by the CorVis ST (Oculus, Inc., Berlin, Germany) in a population of healthy Brazilian patients. 2) To correlate parameters derived from corneal deformation resulting from non-contact tonometry integrated with an ultra-high-speed (UHS) Scheimpflug camera (Oculus Corvis ST, Scheimpflug Technology; Wetzlar, Germany) with age in normal eyes from young patients. 3) To evaluate the changes of corneal biomechanical after femtosecond laser - assisted cataract (FS) and to compare the parameters derived by Corvis ST between standard phacoemulsification (SP) and femtosecond laser - assisted in cataract surgery. 4) To report a case of post-LASIK corneal ectasia due to a thick flap, while the contralateral eye did not develop ectasia after an incomplete deep flap cut, followed by a thinner flap Lasik procedure. METHODS: 1) An observational and cross-sectional study involving 1 eye randomly selected from 90 healthy patients. Studied parameters (including deformation amplitude, first applanation time, highest concavity time, second applanation time, first applanation length, second applanation length, curvature radius highest concavity, curvature radius normal, velocity in, and velocity out) derived from the CorVis ST were correlated to central corneal thickness from the Pentacam (Oculus, Inc.). Differences between data on the basis of gender were evaluated. 2) Observational, retrospective study involving one eye randomly selected from study participants, totaling 89 healthy eyes. The Scheimpflug images were taken with an ultra-high-speed camera during each measurement by the Corvis ST. The deformation amplitude (DA) and other parameters (e.g., pachy apex, intraocular pressure, 1st A time, highest concavity-time, 2nd A time, 1st A Length, 2nd A Length, Wing-Dist, curvature radius highest concavity, curvature radius normal, Vin, Vout) measured by the corvis ST were correlated with age. 3) Prospective study: 151 eyes of 127 patients were underwent cataract surgery. 75 eyes of 65 patients were with femtosecond laser-assisted (FS)(Alcon Len Sx, Aliso Viejo,USA) and 76 eyes of 62 patients with standard phacoemulsification (SP) (Alcon Infinit, FortWorth, USA). 4) Case Report. RESULTS: 1) About the first study: Mean patient age was 35.80 ± 12.83 years (range: 21.07 to 78.84 years). Mean central corneal thickness was 547.50 ± 32.00 ?m (range: 490 to 647 ?m) and mean spherical equivalent refraction was -3.29 ± 3.69 diopters (range: -9.50 to +10.37 diopters). Mean deformation amplitude was 1.05 ± 0.08 mm (range: 0.91 to 1.26 mm). Highest concavity time was 18.38 ± 0.93 ms (range: 16.95 to 21.07 ms). Intraocular pressure was 16.43 ± 2.15 mm Hg (range: 11.50 to 21.0 mm Hg). First applanation time was 8.32 ± 0.33 ms (range: 7.53 to 9.12 ms) and second applanation time was 23.80 ± 0.44 ms (range: 22.76 to 24.95 ms). First applanation length (max) was 2.07 ± 0.38 mm (range: 1.20 to 3.10 mm) and second applanation length (max) was 2.37 ± 0.47 mm (range: 1.33 to 4.12 mm). Curvature radius highest concavity was 11.09 ± 2.06 mm (range: 7.58 to 15.98 mm) and curvature radius normal was 7.59 ± 0.67 mm (range: 6.82 to 11.02 mm). Velocity in was 0.21 ± 0.05 m/s (range: 0.16 to 0.72 m/s) and velocity out was -0.33 ± 0.07 m/s (range: - 0.72 to -0.20 m/s). Studied parameters were not associated with gender. 2) Mean patient age was 27.50 ± 6.30 years. The highest concavity-time was the only studied parameter statistically significantly correlated to age (i.e., p=0.04, rs=0.18). 3) In relation the surgery of cataract: In group of FS, 9 of 11 parameters derived from Corvis ST were statistically significant (ss). In group of SP, 7 of 11 parameters derived from Corvis ST were ss. Only the HC - time was statistically significant between two groups (FS;SP) with p = 0.0387. 4) Corneal OCT identified a deep meniscos-shaped Lasik flap, with a central thickness of a 392 ?m in the right eye, and a incomplete deep peripheral cut in the left eye with a thinner meniscos-shaped LASIK flap. CONCLUSIONS: 1) Eight of 11 ocular biomechanical metrics given by the CorVis ST were associated with central corneal thickness, but the influence of central corneal thickness on these measurements was low. 2) In healthy eyes, age and pressure or biomechanics as derived from the Corvis ST parameters were not associated with exception to highestconcavity-time, i.e., the time from starting until the highest concavity is reached. 3) The use of the femtosecond laser- assisted system for cataract surgery and standard phacoemulsification induzed changes of biomechanical properties of the cornea by Corvis ST. Only 1 of 11 parameters studied was different statistically in two groups. 4) Unilateral ectasia after LASIK may occur due to a thick flap which leads to biomechanical failure of the cornea

O conhecimento da morfologia endotelial nas diferentes regiões da córnea é de suma importância para avaliação de endotélios corneanos saudáveis e doentes e de suas respostas ao uso de medicações. O objetivo do presente estudo foi descrever a morfologia do endotélio nas regiões central e periférica superior da córnea saudável de equinos, medir a área média das células pentagonais, hexagonais e heptagonais presentes nas regiões avaliadas, calcular o polimegatismo de cada tipo celular e correlacionar estes parâmetros entre os diferentes formatos celulares. Foram estudados dez equinos, machos ou fêmeas, de diferentes idades, provenientes de um abatedouro licenciado. Imagens da superfície posterior do endotélio da córnea foram obtidas com uso de microscopia eletrônica de varredura. A morfologia do endotélio de diferentes regiões da córnea foi avaliada. Além disso, foi correlacionada a variabilidade do tamanho celular médio com a morfologia endotelial. A análise estatística foi conduzida usando o teste de análise de variância (ANOVA) seguido do teste de Tukey (Post-Hoc), com nível de significância de 5%. As amostras avaliadas foram compostas em sua maioria por células hexagonais (60,5%), pentagonais (21,4%) e heptagonais (16,9%), células com quatro, oito ou nove lados compuseram 1,3%. A área celular média das células pentagonais foi 203,58 μm², das hexagonais foi 223,84 μm² e nas heptagonais foi 270,54 μm². O polimegatismo encontrado foi de 16% nas células pentagonais e hexagonais e de 20% nas heptagonais. A morfologia das células endoteliais de equinos saudáveis não diferiu entre as regiões central e periférica superior da córnea, sugerindo que a região central é representativa da região periférica. As células com sete lados apresentaram polimegatismo maior em relação às células de seis e de cinco lados. / The knowledge of the endothelial morphology in the different regions of the cornea is important for the evaluation of healthy and sick corneal endothelium and its response to drugs. In order to describe the endothelial morphology in the central and superior peripheral regions of the equines’ cornea, evaluate area from pentagonal, hexagonal and heptagonal cells present in the evaluated regions, calculate the polimegathism and correlate these parameters, two healthy corneas were collected of ten equine, male or female, of different ages. Images of the posterior surface of the corneal endothelium were taken with scanning electron microscope. The endothelial morphology was studied in the different regions of the equines’ cornea. In addition, the polimegathism and morphology was also correlated. A statistical analysis was conducted using the Analysis of Variance (ANOVA) followed by Tukey's Test (Post-Hoc), with a 5% level of significance. In the central region, the endothelium consisted of 58.8% hexagonal cells, 22.6% pentagon, 17.1% heptagonal and 1.4% cells with either four, eight or nine sides. In the superior peripheral region, 62.1% of the cells were hexagonal, 20.2% pentagon, 16.6% heptagonal and 1.1% cells with four or eight sides. The average cell area of the pentagonal cells was 210.77 ± 31.53 μm² in the central region and 196.39 ± 34.35 μm² in the superior peripheral region; in hexagonal cells, the average cell area found in the central region was 216.12 ± 37.09 μm² and 231.56 ± 34.95 μm² in the superior peripheral region; and in cells with seven sides, the average cell area was 261.76 ± 55.29 μm² in the central region and in the superior peripheral region was found 279.32 ± 52.37μm². When not considering the corneal regions, the polymegathism found was 16% in the pentagonal and hexagonal cells and 20% in the heptagonal cells. The morphology results obtained did not differ between the central and peripheral regions of the cornea, suggesting that the central region is representative of the peripheral region. The highest coefficient of variation was seen in cells with seven sides.

Objetivo: Verificar resposta após debridamento epitelial de córneas humanas. Métodos: Córneas normais foram submetidas a debridamento antes da cirurgia de enucleação. Realizou-se histologia, TUNEL, Ki67, SMA e microscopia eletrônica. Resultados: Seis córneas foram debridadas e preservadas entre ½ e 65 horas, apresentando apoptose nos ceratócitos do estroma anterior. Células estromais em proliferação foram observadas apenas no tempo de 65 horas. Miofibroblastos não foram encontrados. Uma córnea serviu de controle. Conclusões: Os eventos observados em córneas humanas após debridamento epitelial, apoptose e proliferação dos ceratócitos, foram semelhantes aos descritos em animais de experimentação / Purpose: To examine the early wound healing response to epithelial scrape in human corneas. Methods: Normal corneas had epithelial scrape prior to enucleation. Histology, TUNEL assay, Ki67, SMA and transmission electron microscopy were performed. Results: Epithelial scrape was performed in six corneas from ½ to 65 hours prior to preservation. Keratocyte apoptosis was detected in the anterior stroma in all scraped corneas. Keratocyte proliferation was detected exclusively 65 hours after scrape. No myofibroblast was detected. One cornea was not scraped (control). Conclusion: Results obtained in human corneas (keratocyte apoptosis and proliferation) were similar to animal models

Objetivo: Verificar resposta após debridamento epitelial de córneas humanas. Métodos: Córneas normais foram submetidas a debridamento antes da cirurgia de enucleação. Realizou-se histologia, TUNEL, Ki67, SMA e microscopia eletrônica. Resultados: Seis córneas foram debridadas e preservadas entre ½ e 65 horas, apresentando apoptose nos ceratócitos do estroma anterior. Células estromais em proliferação foram observadas apenas no tempo de 65 horas. Miofibroblastos não foram encontrados. Uma córnea serviu de controle. Conclusões: Os eventos observados em córneas humanas após debridamento epitelial, apoptose e proliferação dos ceratócitos, foram semelhantes aos descritos em animais de experimentação / Purpose: To examine the early wound healing response to epithelial scrape in human corneas. Methods: Normal corneas had epithelial scrape prior to enucleation. Histology, TUNEL assay, Ki67, SMA and transmission electron microscopy were performed. Results: Epithelial scrape was performed in six corneas from ½ to 65 hours prior to preservation. Keratocyte apoptosis was detected in the anterior stroma in all scraped corneas. Keratocyte proliferation was detected exclusively 65 hours after scrape. No myofibroblast was detected. One cornea was not scraped (control). Conclusion: Results obtained in human corneas (keratocyte apoptosis and proliferation) were similar to animal models