Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Ebastine is a second generation antihistaminic clinically used for the treatment of allergic rhinitis and chronic urticaria. Pseudoephedrine hydrochloride is a direct- and indirectacting sympathomimetic, commonly combined with other drugs for their decongestant effect. In Brazil, this drugs association is available in capsules. In the literature, as well as in the official compendium, there are no methods for simultaneous analysis of ebastine and pseudoephedrine hydrochloride in pharmaceutical formulations. In the present work, liquid chromatography (HPLC) and derivative spectrophotometry (UVD) methods were developed and validated for quantification of this drugs association, in capsules. The HPLC analysis were performed on a C18 column, using a mobile phase composed of methanol: acetonitrile: ammonium acetate buffer pH 6.8 (85:5:15, v/v), run at a flow rate of 1,0 mL.min-1, with UV detection at 254 nm. In the UVD method, ebastine was quantified in the first derivative (dA/dλ), at 263.5 and 252.8 nm, respectively. All of them were validated in the following parameters: linearity, precision and accuracy. The specificity was evaluated in the HPLC assay by stress testing. The methods showed good linarity (r>0.99), precision (RSD<2%) and accuracy; the results, statistically compared, did not show significant difference (p>0,05). / A ebastina é um fármaco anti-histamínico de segunda geração utilizado clinicamente no tratamento da rinite alérgica e urticária crônica. O cloridrato de pseudoefedrina é um agente simpaticomimético de ação direta e indireta, muito utilizado em associação com outros fármacos pelo seu efeito descongestionante. No mercado brasileiro, encontra-se a associação desses dois fármacos disponível na forma de cápsulas. Na literatura, bem como em compêndios oficiais, não são descritos métodos para análise simultânea de ebastina e cloridrato de pseudoefedrina em formulações farmacêuticas. No presente trabalho, métodos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e por espectrofotometria derivada (UVD) foram desenvolvidos e validados para quantificação simultânea desses fármacos, em cápsulas. As análises por CLAE foram realizadas em coluna C18, utilizando fase móvel composta de metanol: acetonitrila: tampão acetato de amônio pH 6,8 (80:5:15, v/v), eluída isocraticamente a 1,0 mL.min-1, com detecção UV em 254 nm. No método por UVD, a ebastina e o cloridrato de pseudoefedrina foram quantificados na primeira derivada (dA/dλ), em 263,5 e 252,8 nm, respectivamente. Ambos os métodos foram validados frente aos parâmetros de linearidade, precisão e exatidão. A especificidade do método por CLAE foi avaliada através do teste de estresse. Os métodos mostraram boa linearidade (r>0,99), precisão (DPR<2%) e exatidão. Os resultados obtidos por CLAE e UVD foram comparados estatisticamente e não apresentaram diferença significativa (p>0,05).

The imbalance between the oxidant species formation and the activity of antioxidants is known as oxidative stress and it is directly related to the etiology and/or the progression of chronic diseases such as chronic renal failure (CRF), atherosclerosis and cardiovascular diseases. The CRF can be the result of variety renal injuries that lead to toxic substances accumulation and metabolic disturbances in the organism. Patients with chronic renal disease on hemodialysis treatment, whose main cause of morbi-mortality is the cardiovascular diseases, are constantly under oxidative stress by the uremic condition, but overall by the hemodialysis treatment, which leads to an increase of reactive species and decrease of antioxidant defenses. Moreover, these patients also present nutritional problems and presence of other comorbity diseases as anemia, hypertension and diabetes that can contribute to increase the oxidative stress state, accented for the hyperhomocysteinemia. However, the influence of the therapeutical treatment on the oxidative stress has still several controversies. Thus, oxidative stress studies and its relationship with medicaments are very important. The aim of this study was to determine which oxidative stress markers were altered in hemodialysis patients, as well as the influence of erythropoietin, iron, vitamin B12 and folic acid on these markers and in the hematologic parameters and hyperhomocisteinemia. Plasmatic TBARS, erythrocytic GSH, ALA-D enzyme activity, methemoglobin (MHb), homocysteine (Hcy), hemoglobin (Hb) and hematocrit (Ht) of 36 hemodialysis patients (HP) and 20 controls (C) were determined with a prior consent of all subjects. The personal information of each patient was used for additional data as medicaments treatment. The results found in HP in comparison with the C had significant increase (p<0,05) for TBARS, erythrocytic GSH, MHb, and Hcy, as well as significant decrease (p<0,05) of ALA-D activity, Hb and Ht. So, it was evident the oxidative stress occur, alterations in antioxidants defense, hyperhomocysteinemia and anemia. However, significant differences in the oxidative stress markers had not been found when they were related to the use of medicaments, co-morbidities presence, life style, time of hemodialysis and accomplishment of simple activities. Thus, this work demonstrated that beyond alterations in oxidative stress markers as TBARS and GSH, it was also found alterations in the ALA-D enzyme activity and in the MHb. Moreover, it was possible to observe that some medicaments as erythropoietin, vitamin B12 and folic acid can be involved in the increase of GSH levels. / O desequilíbrio entre a formação de espécies oxidantes e a atividade dos antioxidantes é denominado estresse oxidativo e está diretamente relacionado à etiologia e/ou progressão de diversas patologias crônicas, dentre as quais a insuficiência renal crônica, aterosclerose e as doenças cardiovasculares. A insuficiência renal crônica pode ser decorrente de uma série de afecções renais que culminam em perda de funcionalidade dos rins, provocando acúmulo de várias substâncias tóxicas no organismo e diversos distúrbios metabólicos. Pacientes com doença renal crônica submetidos à hemodiálise, cuja principal causa de morbi-mortalidade são as doenças cardiovasculares, estão constantemente sob estresse oxidativo em virtude da própria condição patológica, mas, sobretudo, pelo tratamento hemodialítico, que provoca aumento na formação de espécies reativas e diminuição dos níveis de antioxidantes. Além disso, estes pacientes também apresentam problemas nutricionais e a presença de outras doenças co-mórbidas como a anemia, hipertensão e diabetes que podem contribuir para o elevado estresse oxidativo, acentuado ainda mais pela hiper-homocisteinemia. Contudo, a influência do tratamento terapêutico sobre o estresse oxidativo permanece controversa. Sendo assim, estudos do estresse oxidativo e sua interrelação com a terapia medicamentosa são muito importantes. O objetivo deste estudo foi determinar quais marcadores do estresse encontram-se alterados nos hemodialisados, bem como a influência de medicamentos como eritropoetina, ferro, vitamina B12 e ácido fólico sobre estes marcadores, sobre os parâmetros hematológicos e hiper-homocisteinemia. Para tal, foram determinadas as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) plasmáticas, glutationa reduzida (GSH) intra-eritrocitária, atividade sangüínea da enzima ácido δ-aminolevulínico desidratase (ALA-D), metemoglobina (MHb), homocisteína (Hcy), hemoglobina (Hb) e hematócrito (Ht) de 36 pacientes hemodialisados (PH) e 20 indivíduos saudáveis (IS), mediante prévio consentimento. Os prontuários médicos de cada paciente foram utilizados para levantamento de dados adicionais como o tratamento medicamentoso. Os resultados encontrados em PH em relação aos IS demonstraram aumento estatisticamente significativo (p<0,05) de TBARS plasmático, GSH intra-eritrocitária, MHb sangüínea e de Hcy plasmática, assim como diminuição significativa (p<0,05) da atividade da enzima ALA-D sangüínea, de Hb e Ht. Dessa forma, ficou evidente a ocorrência de estresse oxidativo, alterações no sistema antioxidante, hiper-homocisteinemia e anemia. Todavia, não foram encontradas diferenças significativas nos marcadores do estresse oxidativo analisados quando relacionados ao uso de medicamentos, presença de co-morbidades, hábitos de vida, tempo de hemodiálise e capacidade de realização de atividades simples. Dessa forma, este trabalho demonstrou que, além de alterações em marcadores do estresse oxidativo como TBARS e GSH, também foram encontradas alterações na atividade da enzima ALA-D e na MHb. Ainda, pôde-se supor que alguns medicamentos como eritropoetina, vitamina B12 e ácido fólico podem estar envolvidos no aumento das concentrações de GSH.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Human interferon-α2a (hIFN-α2a) is a natural protein produced by the cells of the immune system with antiviral, antiproliferative and immunomodulatory properties. A size exclusion liquid chromatography (SE-LC) method was validated for the determination of recombinant interferon-α2a (rhIFN-α2a) in pharmaceutical formulations without human serum albumin. The SE-LC method was carried out on a BioSep-SEC-S 2000 column (300 mm x 7.8 mm i.d.) maintained at 25°C. The mobile phase consisted of 0.001 M monobasic potassium phosphate, 0.008 M sodium phosphate dibasic and 0.2 M sodium chloride buffer, pH 7.4, run at a gradiente flow rate and using photodiode array (PDA) detection at 214 nm. The chromatographic separation was achieved with retention time of 17.2 min, and was linear over the concentration range of 0.5-50 MUI/mL (r2 = 0.9996). The accuracy was 101.39% with bias lower than 1.67%. The limits of detection and quantitation were 0.22 and 0.5 MIU/mL, respectively, and the method validation demonstrated acceptable results for precision and robustness. The proposed method was applied for the analysis of rhIFN-α2a in pharmaceutical dosage forms, and the content/potencies correlated to the previously validated reversed-phase (RP-LC), and the in vitro bioassay. The pharmaceutical samples were analyzed by the chromatographic methods and compared to the bioassay, showing mean differences between the estimated potency of 1.50% higher for SE-LC, and 2.45% lower for the RP-LC. The alternative methods studies contribute to improve the quality control, assuring the therapeutic efficacy of the biological medicine. Moreover, the pharmacokinetic parameters of the formulations A and B were evaluated by subcutaneous injection in rats, showing comparable profiles with Cmax of 7924.60 and 8698.68 pg/mL, respectively, and Tmax= 60 min. / O interferon-α2a humano (hIFN-α2a) é uma proteína produzida pelas células do sistema imune com propriedades imunomoduladora, antiviral e antiproliferativa. No presente trabalho, foi validado método por cromatografia líquida por exclusão molecular (CL-EM), para determinação de interferon-α2a recombinante (rhIFN-α2a) em formulações farmacêuticas sem albumina. O método CL-EM foi validado empregando coluna BioSep-SEC-2000 S (300 mm x 7,8 mm d.i.) mantida a temperatura de 25°C. A fase móvel foi composta de tampão fosfato de potássio monobásico 0,001 M, fosfato de sódio dibásico 0,008 M e cloreto de sódio 0,2 M, pH 7,4, eluída em gradiente de fluxo e utilizando arranjo de diodos (DAD) com detecção em 214 nm. A separação cromatográfica foi alcançada com o tempo de retenção de 17,2 min e o método foi linear no intervalo de concentração de 0,5-50 MUI/mL (r2 = 0,9996). A exatidão média foi de 101,39%, com erro calculado inferior a 1,67%. Os limites de detecção e quantificação foram de 0,22 e 0,5 MUI/mL, respectivamente e a validação demonstrou parâmetros aceitáveis de precisão e robustez. O método proposto foi aplicado para análise de formulação farmacêutica de rhINF-α2a e os teores/potências correlacionados com aqueles fornecidos pelos métodos previamente validados por CL-FR e bioensaio in vitro. Estabeleceu-se correlação entre os métodos, demonstrando que os biofármacos comerciais apresentaram diferenças entre as médias 1,5% maiores para o CL-EM, e 2,45% menores para CL-FR, em relação ao bioensaio. Assim, contribuiu-se para estabelecer alternativas que aprimoram o controle de qualidade, assegurando a eficácia terapêutica do produto biológico. Além disso, avaliaram-se os parâmetros farmacocinéticos das formulações A e B após injeção subcutânea em ratos, demonstrando perfis comparáveis com Cmax de 7924,60 e 8698,68 pg/mL, respectivamente, e Tmax= 60 min.

Changes in recent decades in morbidity and mortality of prostate cancer (CAP) is making if a public health problem in several countries, including Brazil. Several studies provide evidence that inflammatory processes and oxidative stress are considered important mechanisms involved in the pathogenesis and progression of CAP, as they induce aberrant cell growth, proliferation and neoplastic transformation of cells. Considering the interaction of these different mechanisms to the CAP, the objective of this study was to evaluate the levels of C-reactive protein (CRP), considered a biomarker of inflammation, as well as the assessment of ischemia modified albumin (IMA) and the ability reduction of iron in plasma (FRAP), novel biomarkers of oxidative stress in patients with CAP. This study included 30 healthy subjects and 25 patients with CAP, which had measured CRP levels, IMA, FRAP, glucose, total cholesterol, HDL cholesterol, LDL cholesterol, triglycerides, uric acid, creatinine, albumin, aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), adenosine deaminase (ADA), prostate specific antigen total (tPSA), free prostate specific antigen (fPSA) and fraction of free PSA (fPSA%). The concentrations of tPSA, PCR and IMA were significantly higher in patients with CAP, whereas the concentrations of FRAP and fPSA%, were significantly lower in these same patients. It was also possible to observe significant correlations between% fPSA and CRP (r = -0.5059, P <0.001) and tPSA and CRP (r = 0.5104, P <0.001). These results suggest that oxidative and inflammatory processes are increased in prostate cancer, and there is a reduction in the antioxidant defenses in this pathology. / As mudanças nas últimas décadas no perfil de morbi-mortalidade do câncer de próstata (CAP) vem se tornando um problema de saúde pública em vários países, inclusive no Brasil. Vários estudos apresentam evidências de que os processos inflamatórios e o estresse oxidativo são considerados importantes mecanismos envolvidos na patogênese e progressão do CAP, pois induzem o crescimento celular aberrante, a proliferação e a transformação neoplásica das células. Considerando a interação destes diferentes mecanismos com o CAP, o objetivo deste estudo foi avaliar os níveis de proteína C-reativa (PCR), considerado um biomarcador de processo inflamatório, assim como avaliar os níveis de albumina modificada pela isquemia (IMA) e da capacidade de redução do ferro no plasma (FRAP), novos biomarcadores de estresse oxidativo, em pacientes com CAP. Este estudo incluiu 30 indivíduos saudáveis e 25 pacientes com CAP, que tiveram dosados os níveis de PCR, IMA, FRAP, glicose, colesterol total, HDL colesterol, LDL colesterol, triglicérides, ácido úrico, creatinina, albumina, aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), adenosina desaminase (ADA), antígeno prostático específico total (tPSA), antígeno prostático específico livre (fPSA) e fração livre do PSA (fPSA%). As concentrações de tPSA, PCR e IMA foram significativamente maiores em pacientes com CAP, enquanto que as concentrações de FRAP e fPSA%, foram significativamente menores nestes mesmos pacientes. Também foi possível observar correlações significativas entre fPSA% e PCR (r = - 0,5059, P < 0,001) e tPSA e PCR (r = 0,5104, P < 0,001). Estes resultados sugerem que os processos inflamatórios e oxidativos estão aumentados no câncer da próstata, assim como há uma redução das defesas antioxidantes nesta patologia.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cancer represents one of the leading causes of death worldwide and efforts to discover more effective anticancer therapies have led to the synthesis of a wide diversity of molecular species. Furthermore, the increase of the bacterial resistance has motivated the screening of new antimicrobial agents. Notably, triazenes are a class of compounds with great pharmacological versatility, presenting considerable antitumor and antibacterial activities. Similarly, complexes of gold(I) and copper(II) have been widely targeted as potential therapeutic agents due to the promising results found in several research studies. Thereby, in this work we describe the in vitro antileukemic and antibacterial activity of the 1-(4-amidophenyl)-3-(4-acetylphenyl)triazene and related complex [1-(4-amidophenyl)-3-(4-acetylphenyl)triazenido-N3](triphenylfosphine-P)gold(I) as well as of 1,2,3-benzotriazin-4(3H)-one and three related triazenide complexes of copper(II). The antiproliferative effects on bone marrow cells of the patients with hematological malignancies and of the patients without cancer were evaluated using the bioassay of the reduction of 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5diphenyltetrazolium bromide - MTT). Mononuclear cells were incubated with different concentrations of compounds (100 50 12.5 μmol mL-1) during 24 h. Antibacterial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria by the microdilution technique in Mueller Hinton broth was also evaluated. The results revealed that the sensitivity of tumor cells to the complexes was higher than to the free ligands. The best results in terms of in vitro antileukemic activity were achieved with copper(II) complexes, and, among them, the compound named Bis{[1,2,3-benzotriazenide-4-one)-N3](phenanthroline-N1,N10)(μ2-[1,2,3-benzotriazenide-4-one]-N2, N3)}copper(II) was found to be the most efficient. Moreover, this compound had a remarkable activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria. The complex [1-(4-amidophenyl)-3-(4-acetylphenyl)triazenido-N3](triphenylfosphine-P)gold(I) exhibited expressive antiproliferative effects, especially on cells from patient with myelodysplastic syndrome (IC50 = 7.72 μmol mL-1). In particular, its cytotoxic activity was significantly higher against tumor cells than against normal cells. In addition, this compound showed pronounced activity against Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Enterococcus faecalis ATCC 29212 and E. faecalis ATCC 51288 (MIC = 8 μg mL-1). Thus, these results suggest that both triazenide complex including the [(triphenylphosphine)gold(I)]-fragment as the triazenide complex of copper(II) with 1,10-phenanthroline provide a strategy for the architecture of new anticancer drugs and antibacterial agents. / As neoplasias representam uma das principais causas de óbito no mundo e esforços para descobrir terapias antineoplásicas mais eficazes têm conduzido à síntese de inúmeras moléculas. Além disso, o aumento da resistência bacteriana tem motivado a pesquisa por novos agentes antimicrobianos. Notoriamente, os triazenos representam uma classe de compostos com ampla versatilidade farmacológica, apresentando atividades antitumorais e antibacterianas consideráveis. Da mesma forma, em razão dos promissores resultados obtidos em diversos estudos, complexos de ouro(I) e cobre(II) vêm sendo amplamente visados como potenciais agentes terapêuticos. Desse modo, neste trabalho descreveu-se a atividade antileucêmica e antibacteriana in vitro de 1-(4-amidofenil)-3-(4- acetilfenil)triazeno e do complexo relacionado [1-(4-amidofenil)-3-(4-acetilfenil)triazenido](trifenilfosfina)ouro(I), assim como, de 1,2,3-benzotriazina-4(3H)-ona e três complexos triazenidos de cobre(II) relacionados. Os efeitos antiproliferativos sobre as células da medula óssea de pacientes com neoplasias hematológicas e de pacientes não acometidos por câncer foram avaliados por meio do ensaio colorimétrico com brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT). As células mononucleares foram incubadas com diferentes concentrações dos compostos (100 50 12,5 μmol mL-1) durante 24 h. Além disso, foi determinada a atividade antibacteriana destes compostos frente a bactérias gram positivas e gram negativas utilizando-se o método de microdiluição em caldo Mueller Hinton. Os resultados revelaram que a sensibilidade das células tumorais aos complexos foi superior a dos ligantes livres. Os melhores resultados, em termos de atividade antileucêmica in vitro, foram obtidos para os complexos de cobre (II), e, entre eles, o composto denominado Bis{[1,2,3-benzotriazenido-4-ona)-N3](fenantrolina-N1,N10)(μ2-[1,2,3-benzotriazenido-4-ona]-N2,N3)}cobre(II) mostrou-se o mais eficiente. Além disso, este composto apresentou uma notável atividade contra bactérias gram positivas e gram negativas. O complexo [1-(4-amidofenil)-3-(4-acetilfenil)triazenido](trifenilfosfina)ouro(I) exibiu efeitos antiproliferativos expressivos, especialmente em células de paciente com síndrome mielodisplásica (CI50 = 7,72 μmol mL-1). Em particular, a sua atividade citotóxica foi significativamente mais elevada contra células tumorais do que contra células normais. Este composto também apresentou atividade pronunciada contra as bactérias Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Enterococcus faecalis ATCC 29212 e E. faecalis ATCC 51288 (CIM = 8 μg mL-1). Assim, estes resultados sugerem que tanto o complexo triazenido contendo (trifenilfosfina)ouro(I) quanto o complexo triazenido de cobre(II) contendo 1,10-fenantrolina representam uma estratégia alternativa na concepção de novos metalofármacos com propriedades antitumorais e/ou antibacterianas.

Acute Lymphocitic Leukemia (ALL) is the most common cause of childhood cancer and occurs in adults in 20%. Lymphoblasts accumulation is a characteristic of the disease since the leukemic cells retain some multiplication ability without differentiation. The chemotherapy treatment for ALL has been proven effectiveness leading 95% cases to remission however, some patients may have recurrence disease. An accurate diagnosis is critical for the correct treatment and therefore longer survival. Molecular biology techniques have contributed to the early detection of recurrence, mainly by PCR method. Considering the high frequency of clonal rearrangements in leukemia (about 90 to 95%) the analysis of clonal immunoglobulin (Ig) or T-cell receptor (TCR) rearrangements by PCR has been shown to be useful for treatment monitoring the minimal residual disease. This study aimed to standardize the PCR for Ig and TCR rearrangements technique and characterize the pacients at the University Hospital of Santa Maria, through these analysis. After adjustments the technique was considered a reliable procedure and relatively easy to perform. The higher frequency of rearrangements were detected in IgH gene (82.76%) by the DH7 sequences (14 samples), Vg1 (10 samples), VH3 and V2D3 (9 cases). IgK rearrangements occurred in frequency of 31.03, TCRG and TCRD rearrangements to 41.37%, and Sil-Tal to 3.45%. / A Leucemia Linfoide Aguda (LLA) é a causa mais comum de câncer infantil e ocorre em 20% dos adultos. Tem como característica o acúmulo de linfoblastos, células leucêmicas que mantêm capacidade de multiplicação, porém, sem diferenciação. O tratamento quimioterápico para LLA tem se mostrado eficaz e levado à remissão em 95% dos casos, no entanto, alguns pacientes podem apresentar recidiva da doença. O diagnóstico preciso é fundamental para o tratamento correto do paciente e, consequentemente, elevar a sobrevida. Metodologias de biologia molecular têm contribuído para a detecção precoce de recidivas, principalmente por técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR). Tendo em vista que nas LLA os rearranjos clonais de imunoglobulinas (Ig) ou de receptores de células T (TCR) ocorrem em 90 a 95% dos casos, as análises destes por PCR tem-se mostrado método útil para o acompanhamento do tratamento, detecção de doença residual mínima. O presente estudo teve como objetivo padronizar a técnica de pesquisa de rearranjos de Ig e TCR, e caracterizar a sua frequência na população de pacientes com LLA do Hospital Universitário de Santa Maria. A técnica para pesquisa da prevalência de rearranjos gênicos mostrou-se, depois de ajustadas os devidos detalhes, um procedimento de reprodutibilidade confiável e relativamente fácil execução. A maior frequência de rearranjos foi detectada no gene IgH (82,76%), sendo representada por amplificações nas sequências DH7 (14 amostras), Vg1 (10 amostras), VH3 e V2D3 (9 amostras). Rearranjos de IgK ocorreram em frequência de 31,03%, rearranjos TCRG e TCRD com 41,37% e Sil-Tal em 3,45%.

The fexofenadina is an antihistamine non sedative that acts as antagonistic selective in the outlying receivers H1 of the histamine, being used in the symptomatic treatment of allergic manifestations as medication of first choice. The project in subject has the objective of to determine and to validate methods physical-chemistries, for the evaluation of fexofenadine hydrochloride in covered tablets, for liquid chromatographic of high efficiency and zone capillary electrophoresis, both with detection for diodo array detector, for ends of to accomplish dissolution studies and to compare the quantitative methods. The two quantitative methods presented linearity, accurate, precision, specificity and robust.Dissolution of tablets of 120 and 180 mg was realize utilizing distillate water, HCl 0.1 M, buffer phosphate pH 4.5 and buffer phosphate pH 6,8 with dissolution medium, using apparatus II. The dissolution profiles obtained of each medium were compared through the comparison factors: f1, f2 and ED. Different resultes were obted of the likeness the formulation.The method based on the application of ANOVA in the use of the dissolution efficiency (ED) it is more discriminative than the f-factors. If we used the factor f2 as comparison parameter, all the means don't present difference in the formulations, but only in the medium of HCl 0,1 M, the formulations showed similarity for the parameters f1, f2 and ED, allowing to affirm that the two formulations are similar and with same performance in alive. The described methods, HPLC and CEZ, availability for variance analysis, presented equivalence for quantification of fexofenadine hydrochloride. / A fexofenadina é um anti-histamínico não sedativo que age como antagonista seletivo nos receptores periféricos H1 da histamina, sendo usada no tratamento sintomático de manifestações alérgicas como medicamento de primeira escolha. O trabalho em questão tem o objetivo de determinar e validar metodologias físico-químicas, para a avaliação de cloridrato de fexofenadina em comprimidos revestidos por cromatografia líquida de alta eficiência e eletroforese capilar de zona, ambas com detecção por DAD, para fins de realizar estudos de dissolução e comparar as metodologias quantitativas. Os dois métodos quantitativos apresentaram-se lineares, específicos, exatos, precisos e robustos. A dissolução dos comprimidos de 120 e 180 mg foi realizada nos meios de água destilada, HCL 0,1 M, tampões fosfato pH 4,5 e pH 6,8, utilizando o métodos das pás. Os perfis de dissolução obtido para as formulações em cada meio foram comparados pelos fatores de comparação: f1, f2 e ED, apresentando resultados diferentes quanto à semelhança das formulações. O método baseado na aplicação de ANOVA na utilização da eficiência de dissolução (ED) é mais discriminativo que os f-fatores. Quando usamos o fator f2 como parâmetro de comparação, os meios não apresentaram diferença nas formulações, mas somente no meio de HCl 0,1 M, as formulações mostraram similaridade para os parâmetros f1, f2 e ED, podendo apresentar o mesmo desempenho in vivo. Possibilitando a realizado de estudo de biodisponibilidade apenas com a formulação de maior dosagem.Os métodos, CLAE eECZ, avaliados por análise de variância, apresentaram-se equivalentes para quantificação de cloridrato de fexofenadina.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use of organic solvents in the work environment represents a significant risk to workers health. The painters composed, among others, a group of individuals who are in direct contact with solvents through the respiratory and dermal route. The biological monitoring, through biological exposure index (BEI) determination, can ensure the emergence of chronic occupational diseases, even in a long-term exposure. Thus, it was aimed to optimize and validate a methodology using high performance liquid chromatography with ultraviolet detector (HPLC-UV), for the simultaneous quantification of the following BEI: hippuric acid (HA), 3-methylhippuric acid (3mHA), mandelic acid (MA) and phenylglyoxylic acid (PGA) in urine to the solvents toluene, xylene, styrene (MA and PGA) and ethylbenzene (MA) respectively. In addition, there are reports that organic solvents, among other agents, cause imbalance in pro - and antioxidant defenses of the body, causing damage to the health of workers due to the oxidative stress. So, we quantified some blood biomarkers of oxidative stress, and its possible relationship to the levels of BEI in painters (n = 50) of an industry in Caxias do Sul, Brazil, and compared with non-exposed subjects. Thus, the biomarkers analyzed were: endogenous antioxidants such as reduced glutathione (GSH), the enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx); exogenous antioxidants such as vitamins C and E; in addition we determined two biomarkers of oxidation, in lipid peroxidation, we evaluate the levels of malondialdehyde (MDA) and in oxidation of proteins, we analysed protein carbonyl (PCO). The analytical parameters evaluated were linearity, accuracy, recovery and limits of detection (LOD) and quantification (LOQ). For all the analysed BEI, the linear regression coefficient > 0.99; CV% < 6 %; bias% < ± 10; recovery > 95%; LOD between 0.001 to 0.009 g.L-1 and LOQ between 0.04 to 0.02 g.L-1. In the application of the method, in exposed group (n=50), everyone had urinary concentration of HA; 2.5% of those were above the reference values (RV) and only 8% of these, had values above the biological exposure limit (BEL). Methylhippuric acid was found in 96%, PGA in 30%, and MA in 26% of the samples analyzed, those values, were all below the BEL. Among non-exposed ones, only urinary HA has been found, the values were 0.058 to 0.23 g / g creatinine. In relation to the oxidative stress biomarkers, the levels of plasma MDA and serum PCO were significantly increased compared to controls (p <0.01). The levels of erythrocyte GSH (p<0.05); blood SOD, CAT and GPx (p<0.001) were also significantly increased, showing an increase in antioxidant system in response to the deleterious effects of exposure to paints. The levels of exogenous antioxidants, such as vitamin C and vitamin E were significantly reduced in these subjects (p<0.05) compared to control. Moreover, it was observed a correlation between the biomarkers of oxidative stress and some BEI. The urinary mandelic acid, biological exposure index for styrene and ethylbenzene, showed a positive correlation with the enzymes SOD and CAT, and the MDA (p<0.01) and a negative correlation with vitamin E (p<0. 05). The hippuric acid found in urine samples showed a positive correlation with the blood levels of GPx (p<0.001). Furthermore, a positive correlation was found between MDA and PCO (p<0.001), and negative correlation between PCO with GPx, with vitamin C and with E (p <0.05). The results of the validation methodology showed linearity, precision and accuracy, allowing conclude that the method is reliable to quantify the biological exposure indices, HA, mHA, MA and PGA, simultaneously. Furthermore, the levels of these BEI showed to be within the biological exposure limits. The biomarkers of oxidative stress related to lipid peroxidation and the oxidation of proteins were significantly increased even with an increase in endogenous antioxidants analyzed, GSH, SOD, CAT and GPx. Moreover, there was a depletion of exogenous antioxidants, such as vitamins C and E. So with this work we can suggest that the biological exposure limit for the metabolites of toluene, xylene, styrene and ethylbenzene analyzed, failed to ensure the balance in antioxidant/oxidant status to exposed workers. / O uso de solventes orgânicos no meio ocupacional representa significativo risco à saúde do trabalhador. Os pintores compõem, dentre outros, um grupo de indivíduos ocupacionalmente expostos aos solventes, através da via respiratória e dérmica. A monitorização de indicadores biológicos de exposição (IBE) pode assegurar, em longo prazo, o não aparecimento de doenças crônicas ocupacionais. Desta forma, objetivou-se otimizar e validar uma metodologia utilizando cromatografia líquida de alta eficiência com detector ultravioleta (CLAE-UV), para a quantificação simultânea dos seguintes IBE: ácidos hipúrico (HA), 3-metilhipúrico (3mHA), mandélico (MA) e fenilglioxílico (PGA) em urina, dos solventes tolueno, xileno, estireno (MA e PGA) e etilbenzeno (MA) respectivamente. Além disso, existem relatos de que solventes orgânicos, dentre muitos outros agentes, ocasionam desequilíbrio nas defesas pró- e antioxidantes do organismo, ocasionando danos à saúde dos trabalhadores devido ao estresse oxidativo. Portanto, quantificou-se alguns biomarcadores sangüíneos do estresse oxidativo, verificando-se sua possível relação com os níveis dos indicadores biológicos em pintores (n=50) de uma indústria da cidade de Caxias do Sul, RS, comparando-os com os indivíduos não expostos ocupacionalmente. Assim, os biomarcadores analisados foram: antioxidantes endógenos como a glutationa reduzida (GSH), as enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx); antioxidantes exógenos como as vitaminas C e E; e os biomarcadores de oxidação, no caso da peroxidação lipídica, o malondialdeído (MDA), e da oxidação de proteínas, as proteínas carboniladas (PCO). Os parâmetros analíticos de validação foram linearidade, precisão, exatidão, recuperação e limites de detecção (LD) e quantificação (LQ). Para todos os IBE analisados, os coeficientes de regressão linear > 0.99; CV% < 6%; bias% < ±10; recuperação > 95%, LD entre 0,001 a 0,009 g.L-1 e LQ de 0,04 a 0,02 g.L-1. Na aplicação do método validado, das amostras de indivíduos expostos (n=50), todos apresentaram concentração urinária de HA; 2,5% destes, acima dos valores de referência (VR) e apenas 8% destes, apresentaram valores acima do índice biológico máximo permitido (IBMP). Foram encontrados mHA em 96%, PGA em 30%, e MA em 26% das amostras analisadas, sendo estes valores, todos abaixo do IBMP. Dentre os indivíduos não expostos (n=30), somente HA foi encontrado, os valores foram de 0,058 0,23 g/g de creatinina urinária. Quanto aos biomarcadores do estresse oxidativo, os níveis de MDA plasmático e de PCO sérica foram significativamente aumentados comparados aos controles (p<0,01). Os níveis de GSH eritrocitária (p<0,05); SOD, CAT e GPx (p<0,001) sangüíneas também foram significativamente aumentados, demonstrando um aumento no sistema antioxidante em resposta aos efeitos deletérios da exposição às tintas. Os níveis de antioxidantes exógenos, vitamina C e vitamina E estavam significativamente diminuídos nestes indivíduos (p<0,05) quando comparados aos controles. Além disso, foi observada correlação entre os biomarcadores do estresse oxidativo e os IBE. O ácido mandélico urinário, indicador de exposição ao estireno e ao etilbenzeno, apresentou correlação positiva com as enzimas SOD e CAT, e com o MDA (p<0,01), e uma correlação negativa com a vitamina E (p<0,05). O ácido hipúrico urinário apresentou correlação positiva com os níveis sangüíneos de GPx (p<0,001). Além disso, foi encontrada correlação positiva entre MDA e PCO (p<0,001); e correlação negativa das PCO com GPx, com vitamina C e E (p<0,05). Os resultados da validação metodológica demonstraram linearidade, precisão e exatidão, permitindo concluir que o método é confiável para quantificar os indicadores biológicos de exposição, HA, mHA, MA e PGA, simultaneamente. Além disso, os níveis dos IBE mostraram-se quase que na sua totalidade, dentro dos índices biológicos máximos permitidos. Os biomarcadores do estresse oxidativo relacionados com a peroxidação lipídica e com a oxidação de proteínas apresentaram-se significativamente aumentados mesmo com um aumento dos antioxidantes endógenos analisados, GSH, SOD, CAT e GPx. Por outro lado, observou-se uma depleção dos antioxidantes vitamínicos exógenos, como as vitaminas C e E. Assim, com este trabalho é possível sugerir que os IBMP, para os IBE dos solventes orgânicos tolueno, xileno, estireno e etilbenzeno analisados, não asseguram o equilíbrio antioxidante/oxidante nos trabalhadores expostos.

In Brazil, breast cancer (BC) is the most common malignant neoplasic diseases among women. The identification of markers that can predict the behavior of tumors is especially important, mainly due to variability in clinical disease progression. It has been a high number of new prognostic factors mentioned in literature in recent years. The inclusion of new predictors provides advances that lead to an even better selection of patients for adjuvant therapy primarily, being able to reach a better individualization of therapeutics. Many studies have shown an association between certain blood groups and different types of cancer, and have correlated the expression of antigens of the ABO blood groups in cancer cells, with more or less favorable prognosis. The purpose of this study was to evaluate the possibility of expression of antigens of the ABO blood system be applied as a marker of genetic susceptibility and / or prognosis for breast cancer and its association with other clinical prognostic factors, anatomopathological and immunohistochemical. First, through a case study (n = 127) and controls (n = 67), were analyzed the association between ABO blood type and the risk of developing breast cancer. The frequency of blood group A was significantly higher and frequency of group O significantly lower in patients with BC compared with controls. When the case study group was analyzed according to their blood group, there was a statistically significant increase in risk for BC in type A blood group patients. The results suggest that blood group type should be considered together with other factors to understand the individual risk of each patient and may be used as an independent risk marker for BC. In a second study, immunohistochemical were performed on a formalin-fixed paraffin sections of 80 tissue samples (29 benign lesions derived from breast and 51 breast carcinoma) to investigate the expression of the blood antigens A and B. There was a decrease in the tissue expression of antigen A in patients with BC, with statistical significance, assuming that the occurrence of decreased expression in malignant breast tissues can predict a more aggressive tumor behavior. No significant correlation was found between expression pattern of A and B tissue antigens in BC patients with clinical prognostic factors, anatomopathological and immunohistochemical characteristics. The distribution of the expression of antigens A and B in benign and malignant breast cells was not completely uniform. Most of the benign lesions showed maintenance of the expression of antigens, but some lost their expression, suggesting that the loss of ABO antigen expression in benign lesions may be an early marker for neoplastic transformation. / No Brasil, o câncer de mama (CM) é a neoplasia maligna mais freqüente entre as mulheres. A identificação de marcadores que possam predizer o comportamento dos tumores é especialmente importante, devido, sobretudo, à variabilidade na progressão clínica da doença. Tem sido elevado o número de novos fatores prognósticos mencionados na literatura mundial nos últimos anos. A inclusão de novos fatores preditivos proporciona avanços que conduzem a uma seleção ainda melhor dos pacientes principalmente para terapias adjuntivas, podendo-se chegar a uma melhor individualização da conduta terapêutica. Muitos trabalhos mostraram uma associação entre determinado grupo sanguíneo e diferentes tipos de câncer, e têm relacionado a expressão de antígenos do sistema sanguíneo ABO nas células neoplásicas, com prognóstico mais ou menos favorável. O objetivo do trabalho foi avaliar a possibilidade da expressão de antígenos do sistema sanguíneo ABO ser aplicada como marcador de susceptibilidade genética e/ou prognóstico para o câncer de mama, e sua associação com outros fatores prognósticos clínicos, anatomopatológicos e imuno-histoquímicos. Primeiramente, mediante um estudo de casos (n = 127) e controles (n = 67), analisou-se a relação entre tipo sanguíneo ABO e o risco de desenvolver câncer de mama. A freqüência do grupo sanguíneo A foi significativamente maior e a freqüência do grupo O significativamente menor nas pacientes com CM quando comparadas aos controles. Quando agrupadas as pacientes com câncer de mama segundo seu grupo sanguíneo, verificou-se um aumento estatisticamente significativo do risco para desenvolvimento de CM no tipo sanguíneo A. Os resultados sugerem que o tipo sanguíneo deva ser considerado, em conjunto com outros fatores, na compreensão do risco individual de cada paciente, podendo ser usado como um marcador de risco independente para o CM. Num segundo estudo, em um total de 80 amostras de tecidos (29 oriundas de lesões benignas da mama, e 51 de carcinoma mamário) foi realizada a pesquisa imuno-histoquímica da expressão dos antígenos sanguíneos A e B. Verificou-se uma diminuição, estatisticamente significativa, da expressão do antígeno sanguíneo A no câncer de mama, supondo-se que essa redução na expressão nos tecidos mamários malignos possa predizer um comportamento mais agressivo do tumor. Ao serem relacionados o padrão de expressão dos antígenos A e B, nas amostras de tecidos de pacientes com CM, com alguns fatores prognósticos clínicos, anatomapatológicos, e imunohistoquímicos já estabelecidos, nenhuma associação significativa foi encontrada. A distribuição da expressão dos antígenos A e B em células malignas e benignas da mama não foi totalmente uniforme. A maioria das lesões benignas demonstrou manutenção da expressão 8 dos antígenos, mas algumas perderam a expressão, sugerindo que a perda da expressão de antígenos ABO em lesões benignas possa ser um marcador prematuro para a transformação neoplásica.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cyclophosphamide (CP) is an alkylating agent widely used in anticancer and immunosuppression therapy. Like other chemotherapies, this drug can induce damage in healthy tissues, generating multiple organ toxicity. The study of natural substances able to prevent or reduce the toxicity induced by the chemotherapy is very important. Pecan nut shell (Carya illinoensis) is a vegetal by-product with low cost and elevated antioxidant potential and therefore can be considered a promissory substance. The aim of this study was to verify whether the cited antioxidant protects against multiple tissue damage induced by CP. Wistar rats received water or pecan shell aqueous extract (AE - 5%) ad libitum in place of drinking water up to the end of the experiment. On day 30, half of each group received a single administration of vehicle or CP 200 mg/kg-ip. After 7 days, the animals were sacrificed by exsanguination. The blood was collected to obtain plasma and erythrocytes. Vital tissues as heart, liver, kidney, testis and bladder were removed. The occurrence of oxidative stress (OS) was observed through the determination of lipid peroxidation (LP), measured by the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) formation and reduced glutathione (GSH) in all removed tissues, the enzyme catalase (CAT) in the heart, liver, kidney and testis, the enzyme superoxide dismutase (SOD) in the testis and the plasmatic vitamin C (VIT C) levels. Furthermore, the testicular function was evaluated by the enzyme lactate deydrogenase (LDH) and the macroscopic and histopathological analysis of the bladder was carried out. Results demonstrated that the CP treatment increased TBARS and decreased GSH levels in all studied tissues. Moreover, the activities of SOD in the testis and CAT in the heart were increased. However, in the other organs, the activity of the latter was diminished. The testicular LDH and plasmatic VIT C levels were also decreased. Finally, the bladder of the CP treated rats showed dark color and various histological alterations, such as thickening of the lines, hemorrhage, edema, leukocyte infiltration and vascular proliferation. The co-treatment with AE was able to prevent the TBARS increase and GSH depletion in all tissues, except heart and plasma, respectively. The extract also prevented changes in the testicular SOD and CAT activity in all organs, except the kidney. Besides, the extract prevented alteration in plasmatic VIT C and testicular LDH as well as various visual and histological changes in the rat bladder. These findings provided important evidences of the protective effect of pecan shell AE against the general organic toxicity induced by CP. Therefore, this natural substance may be considered to minimize adverse effects related with this chemotherapy, improving the life quality of patients who need to use this type of drug. / A ciclofosfamida (CP) é um agente alquilante muito usado na terapia anticâncer e imunossupressora. Assim como outros quimioterápicos, este fármaco pode causar danos aos tecidos saudáveis, gerando toxicidade em múltiplos órgãos. Desta forma, o estudo de substâncias naturais capazes de prevenir ou minimizar a toxicidade decorrente do tratamento quimioterápico vem ganhando sua importância. A casca da noz pecã (Carya illinoensis), é um sub-produto de origem vegetal de baixo custo e com elevado potencial antioxidante, constituindo uma substância promissora. O objetivo deste estudo foi verificar se o extrato aquoso bruto do vegetal citado apresenta efeito protetor contra os danos teciduais múltiplos induzidos pela CP. Ratos Wistar receberam água potável ou extrato aquoso bruto (EAB 5%) da casca da noz pecã, ad libitum, no lugar da água de beber até o final do experimento. No trigésimo dia, a metade de cada grupo recebeu uma administração única de veículo ou CP 200 mg/kg-ip. Após 7 dias, os animais foram sacrificados por exsanguinação, para obtenção de plasma e eritrócitos, enquanto alguns tecidos como coração, fígado, rim, testículos e bexiga foram removidos. Parâmetros de estresse oxidativo (EO) foram avaliados através da peroxidação lipídica (LPO), medida por meio da formação de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e glutationa reduzida (GSH) em todos os tecidos avaliados, bem como a enzima catalase (CAT) no coração, fígado, rim e testículos. A enzima superóxido dismutase (SOD) testicular e os níveis plasmáticos de vitamina C (VIT C) também foram determinados. A função testicular foi determinada através dos níveis da enzima lactato desidrogenase (LDH). A bexiga foi submetida à avaliação macroscópica e histopatológica, já que é um tecido intensamente danificado pela CP. Os resultados obtidos demonstraram que o tratamento com CP aumentou os níveis de TBARS e diminuiu os níveis de GSH em todos os tecidos avaliados. A atividade da SOD testicular apresentou-se aumentada, bem como a atividade da CAT no coração. Nos demais órgãos, a atividade desta última enzima encontrou-se diminuída. Os níveis da enzima LDH testicular e os níveis plasmáticos de VIT C também se apresentaram reduzidos. Por último, as bexigas dos ratos tratados com CP mostraram coloração escura e diversas alterações histológicas, tais como: espessamento das camadas, hemorragia, edema, infiltração leucocitária e proliferação vascular. O co-tratamento com EAB foi capaz de prevenir o aumento do TBARS e diminuição do GSH em todos os tecidos, exceto coração e plasma, respectivamente. O extrato também preveniu modificações na atividade da SOD testicular e da CAT em todos os órgãos, exceto no rim. Além disso, o extrato também preveniu as alterações nos níveis de VIT C plasmática e LDH testicular, bem como as modificações macroscópicas e histopatológicas na bexiga dos ratos tratados com CP. Os resultados apresentados aqui evidenciam os efeitos protetores do EAB das casca da noz pecã sobre a toxicidade generalizada da CP. Deste modo, este sub-produto da indústria da noz pode ser considerado para minimizar os efeitos indesejáveis relacionados ao tratamento com CP, melhorando a qualidade de vida dos pacientes que necessitam deste quimioterápico.