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Avalia??o da express?o de miRNAs exossomais na toxicidade hep?tica induzida pelo clopidogrel em c?lulas HepG2Freitas, Renata Caroline Costa de 16 June 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-06-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / O clopidogrel ? um f?rmaco utilizado na terapia para preven??o de trombose e aterosclerose. Contudo, a hepatotoxicidade induzida por clopidogrel ? um potencial efeito adverso relacionado com les?es hep?ticas e resposta antiplaquet?ria. Considerando a falta de diagn?stico precoce para esse efeito adverso, miRNAs derivados de exossomos podem ser ?teis para contribuir para o monitoramento da resposta antiplaquet?ria e na predi??o do risco de hepatotoxicidade. Portanto, primeiramente objetivamos investigar as intera??es miRNA-mRNA com a toxicidade do f?rmaco in silico utilizando dados de microarrays dispon?veis e software Ingenuity Pathways Analysis 6 (IPA). Em seguida, o perfil de express?o exossomal dos miR-26a-5p, miR-145-5p, miR-15b-5p e miR-4701-3p, bem como os mRNAs alvos (PLOD2, SENP5, EIF4G2, HMGA2, STRADB e TLK1) derivados de c?lulas foram avaliadas in vitro, uma vez que estes foram os alvos moleculares principalmente associados ao efeito adverso. Assim, c?lulas HepG2 foram incubadas com clopidogrel a 6,25, 12,5, 25, 50 e 100 ?M durante 24 e 48 h. A citotoxicidade foi avaliada por citometria de fluxo pela an?lise da fragmenta??o do DNA e do ciclo celular. A express?o de miRNA derivados de exossomos e de mRNA derivados de c?lulas foi avaliado pela RT-qPCR. As c?lulas tratadas com concentra??es mais elevadas de 50 e 100 ?M causaram maior fragmenta??o do DNA ap?s 24 e 48 h sugerindo ser uma concentra??o t?xica. A express?o do miR-26a-5p foi elevada e a express?o do miR-15b-5p foi diminu?da na concentra??o t?xica 100 ?M em rela??o ao controle em 24 e 48 h. HMGA2, EIF4G2, STRADB e SENP5 alvos do miR-26a-5p foram pouco expressos nas concentra??es t?xicas em 24 h e o HMGA2 se manteve pouco expresso depois de 48 h de tratamento, em rela??o ao controle. TLK1, alvo do miR-15b-5p, teve express?o diminu?da em 24 h na concentra??o t?xica. Os resultados sugerem que concentra??es t?xicas de clopidogrel podem modular a express?o de miR-26a-5p e miR-15b-5p e seus alvos de mRNA. Al?m disso, o miR-26a pode representar um marcador importante para prever a hepatotoxicidade induzida por clopidogrel / Clopidogrel is an essential therapy for prevention of thrombosis and atherosclerosis. However, clopidogrel-induced hepatotoxicity is a potential adverse effect related to liver damage and antiplatelet response. Considering the lack of diagnostic for this adverse effect, new exosomes-derived miRNAs may be useful for improve the monitoring of response and hepatotoxicity risk. Therefore, we first aimed to investigate the miRNA-mRNA interactions with drug toxicity by in silico using available microarray data and Ingenuity Pathways Analysis 6 (IPA) software. After, the exosomal-expression profile of miR-26a-5p, miR-145-5p, miR-15b-5p and miR-4701-3p, as well as the cell-derived mRNAs target PLOD2, SENP5, EIF4G2, HMGA2, STRADB and TLK1 were evaluated in vitro, once they were the molecular targets mainly associated with the adverse effect. Thus, HepG2 cells were incubated with clopidogrel at 6.25, 12.5, 25, 50, and 100 ?M for 24 and 48 h. The cytotoxicity was evaluated by flow cytometry to analyze DNA fragmentation and cell cycle. Profile expression of exosomes-derived miRNAs obtained by column methods and cell-derived mRNAs was evaluated by RT-qPCR. Cells treated with higher concentrations of 50 and 100 ?M caused an increased DNA fragmentation after 24 and 48 h suggesting a toxic concentration for the cells. The miR-26a-5p upregulation in toxic concentration of 100 ?M of clopidogrel and a downregulation of miR-15b-5p in comparison to control were observed in both period of 24 and 48 h. HMGA2, EIF4G2, STRADB and SNP5 targets of miR-26a-5p were downregulated in toxic concentrations at 24 h and HMGA2 remains downregulated after 48 h of clopidogrel treatment. TLK1, a target of miR-15b-5p, was downregulated at 24 h in toxic concentration. The results are suggestive that toxic concentrations of clopidogrel may modulate the miR-26a-5p and miR-15b-5p expression and their mRNA targets. Moreover, miR-26a may represent an important marker to predict clopidogrel-induced hepatotoxicity.
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Desenvolvimento e caraterização de nanopartículas poliméricas contendo grandisina / Development and Characterization of Polymeric nanoparticles containing grandisinSTECANELLA, Luciano Aparecido 23 December 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-12-23 / Grandisin, a tetrahydrofuranic lignan produced by Virola surinamensis seeds and leaves, is popularly used to treat erysipelas, colic and dyspepsia, and is active against Schistosoma mansoni, Plasmodium falciparum, Leishmania donovani and Trypanosoma cruzi. It also antinociceptive, anti-inflamatory and potential for protective (dose dependent) activities, preventing cyclophosphamide induced chromosomal fragmentation, being considered a potencial anti-cancer candidate. The encapsulation of grandisin in polymeric nanocapsules can increase its solubility in aqueous media, allowing drug administration by intravenous route. In the presente work, polymeric nanocapsules containing grandisin were produced by nanoprecipitation method (or interfacial pre-formed polymer deposition). The average diameter of these nanocapsules were around 160 nm, PdI < 0,2, zeta potential -15,73 mV and grandisin load of 6,54%, with encapsulation efficiency of (EE%) 98%. Stability study, comprising 30 days under refrigeration (4ºC ± 1ºC), showed that physicochemical characteristics of the formulation (color, bluish translucency, etc.) were the same as compared to the nanocapsules dispersion originally produced, so there were no alterations such as deposition of residues and/or crystals, lumps formation, creamming or supernatant oil, droplets adhered to the glass, flocculation or phase separation. Regarding encapsulated grandisin, during stability test, there was a reduction of 6,4% of the total encapsulated drug. Drug release study showed quick liberation in the first 48h (30,54%) and then kept slower, because only 52% after 21 days. Polymeric nanocapsules containing grandisin, obtained in this work, showed potential to be a drug release system to administration by intravenous route. / A grandisina, uma neolignana tetraidrofurânica obtida das sementes e folhas da planta Virola surinamensis, é popularmente utilizada no tratamento de erisipelas, cólicas e dispepsias, e possui ação comprovada contra Schistosoma mansoni, Plasmodium falciparum, Leishmania donovani e Trypanosoma cruzi. Apresenta também atividade antinociceptiva, anti-inflamatória e potencial ação quimioprotetora (dose dependente), prevenindo a fragmentação cromossômica induzida pela ciclofosfamida, sendo assim considerada potencial candidata a agente anti-câncer. A encapsulação da grandisina em nanocápsulas poliméricas pode aumentar sua solubilidade em meio aquoso, consequentemente, permitindo sua administração por via intravenosa. No presente trabalho foram produzidas nanocápsulas poliméricas contendo grandisina pelo método de nanoprecipitação (ou deposição interfacial de polímero pré-formado). Estas nanocápsulas apresentaram diâmetro médio em torno de 160 nm, PdI < 0,2, potencial zeta de 15,73 mV e carga de grandisina de 6,54%, com eficiência de encapsulação (EE%) de 98%. O estudo de estabilidade, realizado por um período de 30 dias sob refrigeração (4ºC ± 1ºC), mostrou que as características físicas da formulação (coloração, translucência azulada, etc.) foram mantidas em relação à dispersão de nanocápsulas originalmente produzida, não sendo observadas alterações como deposição de resíduos e/ou cristais, formação de grumos, cremagem ou nata sobrenadante, gotículas de óleo aderidas ao vidro, floculação ou separação de fases. Com relação à grandisina encapsulada, durante o estudo de estabilidade, foi verificada uma redução de 6,4% do total encapsulado. O estudo de liberação mostrou rápida liberação nas primeiras 48h (30,45%) e posteriormente manteve-se mais lenta, com 52% após 21 dias de ensaio. As nanocápsulas poliméricas contendo grandisina, obtidas neste trabalho, mostraram ser um potencial sistema de liberação para viabilizar uma forma de administração por via parenteral para esta substância.
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Classificação simultânea de fármacos contidos em comprimidos de analgésico por espectroscopia NIR e ferramentas quimiométricasMelo, Carlos Alan Dias 11 April 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-04-11 / The focus of this work was to build a chemometric algorithm for classifying samples
of tablets, the basis of dipyrone (300 mg), caffeine (50mg) and orphenadrine (35mg) using
NIR spectroscopy. The database has 300 spectra of samples taken from three tablets, twosided,
per lot, in 50 different lots belonging to four different manufacturers. The data were
processed in advance by selecting a spectral range from 1100 to 2499,5 nm, and then was
employed the filter Savitzky-Golay with first derivative, window 17 points and second-order
polynomial. The characterization of the tablets was done using chemometric models based on
Principal Component Analysis (PCA), Hierarchical Cluster Analysis (HCA), and Independent
Modeling of Class Analogy for Flexible (SIMCA) method and the K-th Nearest Neighbor
(KNN) , prepared for each group of samples tablets. For PCA and HCA, the formation of
clusters for each class of tablets was observed. For models SIMCA and KNN, the training set
was constructed using 20 and 40 spectral measures, while the test set made use of 10 and 20
spectra, both, of similar and reference drugs , respectively. All models achieved 100% correct
classification without errors type I or type II. Using this strategy it was possible to classify the
tablets rapidly and non-destructively without the need for multiple analytical determinations. / O foco deste trabalho foi construir um algoritmo quimiométrico para classificação de
amostras de comprimidos, a base de dipirona (300mg), cafeína (50mg) e orfenadrina (35mg),
com uso da espectroscopia NIR. O banco de dados conta com 300 espectros das amostras,
retirados a partir de três comprimidos, frente e verso, por lote, em 50 lotes distintos e
pertencentes a quatro fabricantes distintos. Os dados foram processados a priori, selecionando
um intervalo espectral de 1100 a 2499,5 nm, e, em seguida, empregou-se filtro SavitzkyGolay
com primeira derivada, janela de 17 pontos e polinômio de segunda ordem. A
caracterização dos comprimidos foi feita usando modelos quimiométricos baseados na
Análise de Componentes Principais (PCA), Análise de Agrupamentos Hierárquicos (HCA),
Modelagem Independente e Flexível por Analogia de Classe (SIMCA) e Método do K-ésimo
Vizinho mais Próximo (KNN), elaborados para cada grupo de amostras de comprimidos. Para
o PCA e HCA, a formação de agrupamentos para cada classe de comprimidos foi observada.
Para os modelos SIMCA e KNN, o conjunto de treinamento foi construído utilizando 20 e 40
espectros, enquanto o conjunto de teste fez uso de 10 e 20 espectros, ambos de medicamentos
similares e de referência, respectivamente. Todos os modelos obtiveram 100% de
classificação correta, sem erros de tipo I ou de tipo II. Usando esta estratégia, foi possível
classificar os comprimidos de modo rápido e não destrutivo sem a necessidade de várias
determinações analíticas.
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Desenvolvimento e caracterização de microemulsão antifúngica contendo derivado do tiofenoGuimarães, Geovani Pereira 03 May 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-05-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fungal infections have become an issue of great impact around the world, and the Candida
species and Cryptococcus neoformans are responsible for various clinical manifestations
mainly in immunocompromised patients. The antifungal therapy is actually based in a few
chemotherapeutic agents that present problems of efficacy and resistance. The thiophene
derivatives molecules are related to various biological properties including antifungal activity.
The 5CN05 molecule is a thiophene derivative which has in vitro antifungal activity and poor
water solubility. Currently, great emphasis has been given to the incorporation of this kind of
molecules in colloidal systems such as microemulsions (ME). The present study aimed to
incorporate the 5CN05 molecule in a ME as well as perform the physicochemical and
rheological characterization of the formulations and evaluate the antifungal activity against
Candida species and Cryptococcus neoformans. Were evaluated two methods to incorporate
the 5CN05. For morphology characterization of the MEs were used the methods of polarized
light microscopy (MLP), differential scanning calorimetry (DSC) and transmission electron
microscopy (TEM). The rheological studies evaluated the flow behavior (flow tests) and the
viscoelastic behavior (oscillatory tests) of the MEs. The minimum inhibitory concentration
(MIC) was determined using the microdilution method indicated by the Clinical and
Laboratory Standards Institute, using amphotericin B as a control. The developed formulation
consists of LAS® (35.3%), Plurol Oleique® (17.5%), isopropyl myristate (5.9%) and water
(41.2%). Using the techniques of MLP, DSC and TEM was possible to confirm the structure
of the ME system as oil in water (O/W) droplets. The incorporation method by ultrasonic
homogenization was effective. Rheologically, the ME-5CN05 was characterized as a
pseudoplastic non-newtonian fluid, showing viscoelasticity and elastic solid behavior. The
evaluated formulations exhibited physicochemical properties that allow its use by the topical
route. The 5CN05 showed moderate or weak antifungal activity against Candida species
(270-540 μg.mL-1) and good activity against C. neoformans (17 μg.mL-1). The Candida yeasts
showed sensitivity to the ME-5CN05 (70-140 μg.mL-1) and C. neoformans showed MIC of
2.2 μg.mL-1. The results of this work show to be promising since it may represent a
therapeutic alternative against C. neoformans. / As infecções fúngicas têm se tornado um problema de grande incidência em todo o mundo,
sendo as leveduras do gênero Candida e Cryptococcus neoformans responsáveis por diversas
manifestações clínicas principalmente em pacientes imunodeprimidos. A terapêutica
antifúngica baseia-se atualmente em poucos agentes quimioterápicos que apresentam
problemas de eficácia e resistência. Os compostos derivados do tiofeno estão relacionados a
várias propriedades biológicas, incluindo atividade antifúngica. A 5CN05 é uma molécula
derivada do tiofeno que apresenta atividade antifúngica in vitro e baixa solubilidade.
Atualmente, tem-se dado ênfase a incorporação deste tipo de moléculas em sistemas coloidais
como as microemulsões (ME). O presente trabalho teve por objetivo incorporar o 5CN05 em
ME, bem como realizar caracterização físico-química e reológica das formulações e avaliar a
atividade antifúngica contra espécies de Candida e Cryptococcus neoformans. Foram
avaliadas duas metodologias de incorporação do 5CN05. Para caraterização da estrutura foram
utilizados os métodos de microscopia de luz polarizada (MLP), calorimetria exploratória
diferencial (DSC) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). Os estudos reológicos
avaliaram o comportamento de escoamento (testes de escoamento), e o comportamento
viscoelástico (testes oscilatórios) dos sistemas ME. A concentração inibitória mínima (CIM)
foi determinada segundo o método da microdiluição indicado pelo Clinical and Laboratory
Standards Institute, usando a anfotericina B como controle. A formulação desenvolvida foi
constituída por LAS® (35,3%), Plurol Oleique® (17,5%), miristato de isopropila (5,9%) e água
(41,2%). Através das análises de MLP, DSC e MET foi possível confirmar a estruturação do
sistema como ME do tipo óleo em água (O/A). O método de incorporação do 5CN05 por
homogeneização em ultrassom mostrou-se eficiente. Reologicamente, a ME-5CN05 foi
caracterizada como um fluido não-newtoniano pseudoplástico, apresentando viscoelasticidade
e comportamento de sólido elástico. As formulações avaliadas apresentaram características
fisico-químicas que possibilitam o seu uso pela via tópica. O 5CN05 mostrou moderada ou
fraca atividade antifúngica contra espécies de Candida (270-540 μg.mL-1) e boa atividade
contra C. neoformans (17 μg.mL-1). As leveduras de Candida apresentaram sensibilidade ao
produto ME-5CN05 (70 140 μg.mL-1) e C. neoformans apresentou CIM de 2.2 μg.mL-1. Os
resultados do presente trabalho mostram-se promissores uma vez que o mesmo possa vir a
representar uma alternativa terapêutica contra C. neoformans.
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Avaliação comportamental e molecular em um modelo de epilepsia do lobo temporalPimentel, Luciana Cristina 09 February 2017 (has links)
Submitted by Marta Toyoda (1144061@mackenzie.br) on 2017-03-20T21:45:04Z
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Previous issue date: 2017-02-09 / The pilocarpine model of Temporal Lobe Epilepsy (TLE) reliably reproduces the
characteristics found in TLE in humans and provokes Attention-deficit/hyperactivity
disorder (ADHD)-like behaviors in rodents. However, it is not known if these behavioral
changes are associated with variations on genetic expression. The present study
aimed to investigate behavior patterns and molecular indicators of ADHD in the
pilocarpine model of TLE. Male Wistar rats at 25 day of age were submitted to animal
model of TLE by pilocarpine injection (350 mg/kg, ip) and a control group received
saline 0.9%. The behavioural tests (open field and operant conditioning box) started
from 28 days postnatal. Through Real-Time Polimerase Chain Reaction (RT-PCR),
were evaluated the expression of somatostatin, mGluR7 and dopaminergic receptors
subtype D1 and subtype D5, in the pre-frontal cortex and hippocampus. Behavioral
parameters were analysed using Mixed ANOVA, followed by Bonferroni for post-hoc
testing. For data analyses of gene expression, t-Student test was used. The data were
expressed as mean ± standard error and p-values of 0.05 or less were considered
significant. The analyses were effectuated using commercial program (Prism 5.03 for
windows). Results in open field for total locomotion revealed a significant difference
between groups (F[1,144]=9,32 p=0,0076) and between sessions (F[9,144]= 5,74
p<0,0001), nor effect of interaction between factors (F[9,144]=9,32 NS); and for central
locomotion, in percentage, was a significantly diferente between groups
(F[1,144]=5,54 p=0,031), effect of interaction between the factors (F[9,144]=3,41
p=0,0008), with no difference between sessions (F[9,144]=0,75 NS). In Skinner box,
no significant differences were found between the groups in experimental conditions
of this study. For RT-PCR there were observed no significant differences in the
expression relative of mRNA in the analyzed genes. We concluded that animals with
TLE exhibited elevated locomotor activity and reduced level of anxiety-related
behavior. There was observed no deficit of attention and impulsive-like behavior. There
were found no variations for somatostatin gene expression, mGluR7 and dopaminergic
receptors D1 and D5, in prefrontal cortex and in hippocampus. Behavioral alterations
observed in the model of TLE probably are not related to gene alterations of
somatostatin and these receptors. / O modelo de Epilepsia do Lobo Temporal (ELT), pela administração sistêmica de
pilocarpina, reproduz de forma fidedigna as características encontradas na ELT em
humanos e provoca alterações comportamentais em ratos semelhantes aos sintomas
do Transtorno de Déficit de Atenção e Hiperatividade (TDAH). Entretanto, não se sabe
se essas alterações comportamentais estão associadas a variações na expressão
gênica. O objetivo desse estudo foi descrever padrões comportamentais e indicadores
moleculares do TDAH no modelo de ELT induzido por pilocarpina. Ratos Wistar
machos com 25 dias pós-natal foram submetidos ao modelo de epilepsia pela
administração de pilocarpina (350 mg/kg, ip) e os controles receberam salina. Os
testes comportamentais (campo aberto e caixa de condicionamento operante)
começaram a partir de 28 dias pós-natal. Através da Reação em Cadeia de Polimerase
em Tempo Real (PCR-RT), avaliou-se a expressão de somatostatina, mGluR7 e dos
receptores dopaminérgicos subtipo D1 e subtipo D5, no córtex pré-frontal e no
hipocampo. Os parâmetros comportamentais foram analisados empregando-se a
ANOVA Mista, seguido pelo pós-teste de Bonferroni. Para a análise de dados da
expressão gênica, empregou-se teste t-Student. Os resultados foram expressos com
média ± erro padrão. As diferenças foram consideradas significantes para um valor de
p < 0,05. As análises foram efetuadas utilizando-se o Prism versão comercial 5.03
para Windows. Os resultados no campo aberto demonstraram diferenças
estatisticamente significantes para a locomoção total, entre os grupos (F[1,144]=9,32
p=0,0076) e entre as sessões (F[9,144]= 5,74 p<0,0001), sem efeito da interação entre
os fatores (F[9,144]=9,32 NS); e para atividade locomotora na zona central, em
percetagem, diferença significante entre os grupos (F[1,144]=5,54 p=0,031), com
efeito da interação entre os fatores (F[9,144]=3,41 p=0,0008), sem diferença entre as
sessões (F[9,144]=0,75 NS). Na caixa de condicionamento operante, não foram
encontradas diferenças significativas entre os grupos nas condições experimentais
desse estudo. Para a PCR-RT não foram observadas diferenças significantes na
expressão relativa de RNAm dos genes analisados. Em conclusão, os animais com
ELT apresentaram aumento da atividade locomotora e redução do comportamento
tipo-ansioso. Não foram observados déficit de atenção e comportamento tipoimpulsivo.
Não foram encontradas variações para a expressão gênica de
somatostatina, mGluR7 e dos receptores dopaminérgicos D1 e D5, no CPF e no
hipocampo. As alterações comportamentais observadas no modelo de ELT provavelmente não estão relacionadas a alterações gênicas da somatostatina e
desses receptores.
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Análise espacial da contagem de células somáticas e prevalência de patógenos contagiosos da mastite em rebanhos leiteiros em Minas Gerais, BrasilOliviera, Eduardo Ferreira de 05 July 2013 (has links)
Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-03-31T15:35:54Z
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Previous issue date: 2013-07-05 / A mastite continua a ser um grande desafio para cadeia do leite e causa grandes prejuízos como a perda de produção, o descarte precoce de animais, os custos de tratamento e interferência na qualidade do leite. Os patógenos contagiosos são causadores de grande parte deste problema, com isso, os índices de mastite subclínica aumentam, levando consequentemente, ao aumento da contagem de células somáticas (CCS). Os principais patógenos contagiosos são Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae. A CCS é utilizada em todo mundo como um indicador para avaliar e monitorar a saúde da glândula mamária e auxilia em programas de controle e prevenção de mastite. O conhecimento gerado a partir de estudos epidemiológicos específicos, sobre o padrão de infecção, prevalência de patógenos contagiosos da mastite em rebanhos bovinos leiteiros, distribuição temporal e espacial de agentes contagiosos da mastite e análise econômica de medidas sanitárias em nível de rebanho e região podem ser utilizados no aprimoramento dos programas de controle e prevenção da mastite. A epidemiologia espacial auxilia o entendimento da distribuição geográfica de dados ocorridos no tempo e espaço, e permite analisar de maneira abrangente a dinâmica de uma doença, indicando formas de atuações frente ao problema em nível de região. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre análise espacial da contagem de células somáticas e prevalência de patógenos contagiosos da mastite entre os rebanhos bovinos leiteiros. Em uma população de 112 rebanhos, foram coletadas amostras para isolamento de S. aureus e S. agalactiae e para realização de CCS. A dependência espacial para CCS foi avaliada por meio de semivariogramas e, quando identificada dependência espacial, por meio do método de Krigagem foi criado o mapa de isolinhas para a CCS. Rebanhos com isolamento de S. aureus e S. agalactiae tiveram 9,3 vezes mais chances de apresentar valores superiores a 400.000 células/mL. Foi observada alta prevalência (89,0 a 100,0%) e distribuição homogênea entre as regiões para o S. aureus, no entanto não foi observada distribuição homogênea para S. agalactiae, cuja prevalência variou de média a alta (16 a 93%) entre as regiões estudadas. Foi observada dependência espacial
moderada (GD=37,6; r2=0,31) para a CCS entre os rebanhos. Foi observada associação entre a prevalência de S. agalactiae e a CCS de acordo com as regiões avaliadas em função dos resultados da análise espacial. Rebanhos na área de CCS têm até 5,5 vezes mais chances de terem S. agalactiae isolado nas amostras de leite de tanque. A análise espacial da CCS de rebanhos pode ser uma ferramenta para auxiliar os envolvidos na tomada de decisão em nível de região no que se refere a adoção de medidas de controle e prevenção da mastite. / Mastitis continues to be a major challenge for the milk chain and cause great losses as loss of production, the early disposal of animals, treatment costs and interference in the quality of the milk. The contagious pathogens are causing much of the problem, with this, the contents of subclinical mastitis increases, therefore leading to increased somatic cell count (SCC). The main contagious pathogens are Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae. The SCC is used throughout the world as an indicator to evaluate and monitor the health of the mammary glands and assists control programs and prevention of mastitis. The knowledge generated from specific epidemiological studies, on the pattern of infection, prevalence of contagious pathogens of mastitis in dairy cattle herds, temporal and spatial distribution of contagious mastitis agents and economic analysis of sanitary and herd-level region can be used in the improvement of control and prevention of mastitis. Spatial epidemiology helps the understanding of the geographical distribution of data occurring in time and space, and allows comprehensively examine the dynamics of disease, indicating forms of the actuations problem region level. The objective of this study was to evaluate the relationship between spatial analysis of somatic cell counts and prevalence of contagious mastitis pathogens between dairy cattle herds. In a population of 112 herds, samples were collected for isolation of S. aureus and S. agalactiae and for SCC. Spatial dependence for SCC was evaluated by means of semivariograms and, when identified spatial dependency, using the Kriging method was created the map of isolines for SCC. Herds with isolation of S. aureus and S. agalactiae had 9.3 times more chances to present values above 400,000 cells/mL. High prevalence was observed (89.0 to 100.0%) and homogeneous distribution among the regions for S. aureus, however homogeneous distribution was not observed for S. agalactiae, whose prevalence ranged from medium to high (16 to 93%) among the regions studied. Moderate spatial dependence (GD = 37.6; r2= 0.31) was observed for SCC between herds. Association between the prevalence of S. agalactiae and SCC was observed in accordance with regions evaluated in accordance with the results of spatial analysis.
Herds in the area of SCC have up to 5.5 times more likely to have isolated S. agalactiae of tank milk samples. The spatial analysis of the SCC of herds can be a tool to assist those involved in decision-making at the level of the region as regards the adoption of control measures and prevention of mastitis.
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Viabilidade econômica da adoção do controle estratégico do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1887) em rebanhos bovinos leiteirosSouza, André Monteiro de 30 April 2012 (has links)
Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-02T19:47:59Z
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Previous issue date: 2012-04-30 / Este trabalho tem como objetivo avaliar a viabilidade econômica do programa de
controle estratégico do carrapato em bovinos leiteiros adotado pela Embrapa Gado
de Leite. O programa se fundamenta na racionalização do uso de carrapaticidas com
a realização de tratamentos no período em que a população de carrapatos encontrase
reduzida; na escolha do produto mais adequado para o combate da população de
carrapatos, por meio da realização de testes de sensibilidade dos carrapatos aos
carrapaticidas; e, pela utilização do carrapaticida na diluição recomendada e
quantidade suficiente para banhar todo o corpo do animal. O estudo foi realizado
junto a 104 produtores rurais, criadores de gado de leite, em 27 municípios da região
central e norte do estado de Minas Gerais. As informações foram coletadas por meio
de questionário, no período de setembro a novembro de 2010. Constatou-se que em
68% dos rebanhos, a infestação por TPB é a que mais afeta os animais. Por causa
desse e outros problemas, 79% dos consultados resolveram aderir ao Programa por
recomendação do técnico e outros 70% por causa das altas infestações nos animais.
Setenta e nove por cento aderiram e seguiram o Programa, de maneira correta.
Nessas fazendas, a maior parte da mão de obra é contratada (46%), o sistema de
exploração da atividade leiteira é o semi-intensivo (84%), o padrão racial do rebanho
é o cruzamento Girolando (95%) e em, 45%, a produção média diária de leite varia
entre 40 a 400 litros. Antes da adesão ao Programa, em 89% das propriedades, as
vacas lactantes eram as mais afetadas, seguidas de bezerros. Para escolher o
carrapaticida, 41% dos produtores baseavam a escolha na indicação do balconista.
Após a adesão ao Programa, 94% dos fazendeiros seguiram as orientações
repassadas pelos técnicos. O primeiro motivo citado (78%) para permanência com o
plano de controle foi a credibilidade no teste de sensibilidade dos carrapatos aos
acaricidas. Com isso, 90% notaram a diminuição dos ataques pelo parasito,
mudando a maneira de realizar os banhos (100% dos produtores). Houve a redução
de 57% dos gastos em reais com a compra de carrapaticidas por mês e de 33% da
quantidade de tratamentos por ano. Em relação à TPB, houve queda de 60% do
número médio de casos e 100% da média do número de mortes em bezerros.
Portanto, os resultados indicaram que a adoção do controle estratégico do carrapato
em bovinos leiteiros possibilitou a redução das despesas dos produtores com
aquisição de carrapaticidas químicos. Além disso, a adoção do controle estratégico
possibilitou a redução de prejuízos diretos e indiretos causados pelo carrapato, com
reflexos positivos sobre a produção e a qualidade do leite e derivados. / The objective of this work is to assess the economic viability of the Tick Strategic
Control Programme adopted by Embrapa Gado de Leite. The programme is based
on the rationalization of the use of tick killers besides treatments while the tick
population is reduced as well as the choice of the most suitable products against
them through sensitivity tests of ticks and tick killers. In addition, the use of tick killers
according to the correct quantity and solution sufficient to suffuse the whole animal
body. The study has been done with 104 dairy cattle breeders in 27 different
municipalities in the central and North region of the State of Minas Gerais. The data
were collected through a questionnaire, between september and november 2010. It
was detected that in 68% of the cattle, bovine babesiosis and anaplasmosis are the
most common infections among animals. Because of them and other problems, 79%
of farmers decided to join the Programme as a result of the tecnitian recommendation
and 70% because of the high rate of infestation. The program was joined and
followed correctly by 79% of farmers. In such farms, the majority of farmworkers is
hired (46%), the system of exploitation of the dairy activity is semi-intensive (84%),
the racial pattern is Girolando breed (95%) and in 45% the average daily production
vary between 40 to 400 litres. Before joining the programme, the dairy cows were the
most affected, followed by calfs, in 89% of farms. To choose the right tick killer, 41%
of farmers used to base their choice on the seller’s opinion. After joining the
programme, 94% of farmers followed the instructions provided by the technicians.
The first reason mentioned (78%) for the permanence of the control plan was the
credibility in the test on tick sensitivity to acaricides. Therefore, 90% of farmers
noticed a reduction of attacks by the parasite, changing the way of suffusing the
animals (100%). There was a decrease of 57% in expenses with tick killers per
month and 33% reduction of treatments per year. In relation to bovine babesiosis and
anaplasmosis, there was a decrease of 60% in the average number of cases and
100% in the average number of calf deaths. Thus, the results indicated that the
adoption of tick strategic control in dairy cattle allowed the reduction of farm
expenses related to chemical tick killers. Furthermore, the adoption of strategic
control also allowed the decrease in direct and indirect financial losses caused by
ticks, with positive effects on the production and quality of milk and dairy products as
well.
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Planejamento molecular, síntese e atividade esquistossomicida de chalconas e auronas inibidoras da enzima SmATPDase1 de Schistosoma mansoniPereira, Vinicius Rodrigues Durães 28 July 2016 (has links)
Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-09-20T12:48:01Z
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Previous issue date: 2016-07-28 / A esquistossomíase é uma das doenças parasitárias mais prevalentes em muitos países tropicais e subtropicais. Atualmente, o tratamento da esquistossomíase depende de um único fármaco disponível, o praziquantel (PZQ). Logo, necessitam-se novos fármacos alternativos. Neste sentido, os produtos naturais, especialmente chalconas e auronas, têm demonstrado significantes atividades esquistossomicidas in vitro. Assim, este trabalho descreve o planejamento molecular in silico, síntese e atividade esquistossomicida in vitro de análogos de chalconas e auronas. Adicionalmente, investigou-se a atividade inibitória dos compostos sobre a enzima Schistosoma mansoni ATPDase1 (SmATPDase1). Desenvolveu-se o planejamento molecular por técnicas de docking. Realizaram-se os ensaios esquistossomicidas in vitro com vermes adultos de S. mansoni, avaliou-se a viabilidade celular pelo método MTT e determinou-se a atividade inibitória da SmATPDase1 por espectrofotometria. Planejou-se e sintetizou-se um total de oito chalconas e três auronas. Os compostos VR1, VR2, VR8 e VR13 foram ativos frente a vermes adultos na concentração de 50 uM. Todos os compostos ativos provaram ser citotóxicos a 100 uM para células de mamíferos. Encontraram-se diferentes perfis de inibição para os compostos em ensaios preliminares de inibição da SmATPDase1. Estes resultados reforçam o potencial de chalconas e auronas como substâncias esquistossomicidas. Maiores estudos são necessários para correlacionar a atividade esquistossomicida apresentada pelos compostos com a inibição enzimática. / Schistosomiasis is one of the most prevalent parasitic diseases that occur in many tropical and subtropical countries. Currently, the treatment of schistosomiasis is dependent on a single available drug, praziquantel (PZQ). Thus, new drug choices are needed. In this regard, natural products, especially chalcone and aurone, have exhibited significant in vitro schistosomicidal activities. Therefore, this paper describes the in silico molecular design, synthesis and in vitro schistosomicidal activities of chalcones and aurones analogues. Also, the in vitro Schistosoma mansoni ATPDase1 (SmATPDase1) enzyme inhibitory activity of compounds was investigated. Molecular design was done by docking techniques. In vitro schistosomicidal assays were performed against S. mansoni adult worms, cell viability was measured by MTT assay, and the SmATPDase1 inhibitory activity was determined spectrophotometrically. A total of eight chalcone and three aurone analogues were successfully designed and synthesized. Compounds VR1, VR2, VR8 and VR13 were active at a concentration of 50 uM against adult schistosomes. All active compounds proved to be citotoxic at 100 uM to mamalian cells. Different inhibition profiles were found for the compounds in preliminary assays with SmATPDase1. These results reinforce the potential of chalcones and aurones as schistosomicidal substances. Further studies are needed to correlate the antischistosomal activities presented by the compounds with the enzyme inhibition.
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Caracterização farmacognóstica, físico-química e microbiológica das folhas de anani (Symphonia globulifera Linn. f., Clusiaceae) / Pharmacognostic characterization, physico-chemical and microbiological sheets anani (Symphonia globulifera Linn. f., Clusiaceae)SILVA, Eliane Moraes da 29 August 2011 (has links)
Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-06-05T11:08:00Z
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Previous issue date: 2011 / FAPESP - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Symphonia globulifera Linn. f., popularmente comumente conhecida como anani, citada em relatos de utilização popular em diferentes países, como Camarões, e em várias regiões do Brasil, principalmente na Amazônia, no tratamento de inflamações na pele, tônico geral e laxante para mulheres grávidas, além de sua seiva/látex ser empregada contra reumatismo e tumores. Embora alguns trabalhos tenham descrito o perfil fitoquímico de S. globulifera, não existem estudos, até o presente, avaliando as propriedades botânicas, químicas (análise térmica) e farmacêutica (spray dryer) desta planta. Assim, foram utilizadas metodologias clássicas contidas em farmacopéias e métodos analíticos mais modernos. Os resultados obtidos para a caracterização botânica são: as células epidérmicas de ambas as faces da folha são heterodimensionais. O complexo estomático é do tipo anomocítico encontrado apenas na face abaxial. O pecíolo apresenta-se plano-convexo revestido por células quadrangulares e espessa cutinização. A caracterização do pó são: a análise granulométrica classifica-o como sendo grosso. Na perda por dessecação foi de 9%; no teor de cinzas totais foi de 4,3%; com a análise térmica foi possível verificar em TG entre 31 a 100°C a primeira perda de massa de 7,8%, em DTA a 64°C um evento endotérmico e em DSC a 84°C um evento endotérmico de 169 J/g; o perfil espectroscópico na região do IV sugere a presença de compostos fenólicos. Enquanto os resultados para a tintura e extrato liofilizado são: densidade aparente de 0,97%g/mL; pH de 6; percentual de resíduo seco de 9%; na prospecção química verificou-se a presença de saponinas, açúcares redutores e fenóis e taninos para o extrato e algumas frações; na análise térmica em TG foi encontrado uma perda de massa de 6,55% entre 28 a 100°C, em DSC somente um evento exotérmico a 169°C; o perfil espectroscópico na região do IV apresentou bandas de absorção forte características de alcoóis e fenóis. No processo de secagem, os excipientes que apresentaram os melhores resultados foram aerosil 40% e celulose microcristalina mais aerosil na proporção de 35:5. O extrato apresentou características antioxidantes. A matéria-prima vegetal também foi
ii testada quanto a sua atividade antimicrobiana e antifúngica, fornecendo resultados positivos para algumas cepas testadas e apresentado atividade bactericida para frações acetato de etila e hexânica. O extrato e a fração hexânica apresentaram atividade fungistática,Todos esses resultados contribuem para futuros estudos com essa planta, aumentando assim seu valor agregado. / Symphonia globulifera Linn. f., commonly known as anani cited in reports of popular use in different countries such as Cameroon, and in several regions of Brazil, mainly in the Amazon, in the treatment of skin inflammations, general tonic and laxative for pregnant women, and its latex to be employed against rheumatism and tumors. Although some studies have described the phytochemical profile of S. globulifera, there are no studies to date, assessing the botanical properties, chemical properties (thermal analysis) and pharmaceuticals (spray dryer) of this plant. Thus, classic methodologies were used contained in pharmacopoeias and modern analytical methods. The results for the botanical characterization are: the epidermal cells of both sides of the sheet are heterodimensionais. The stomatal complex is anomocytic type found only on the abaxial surface. The petiole is presented coated plano-convex cells cutinização square and thick. The characterization of the powder are: particle size analysis classifies it as being rude. Loss on drying was 9% in total ash content was 4.3%, with the thermal analysis we observed in TG between 31 and 100°C at the first mass loss of 7.8% in the DTA 64°C and a DSC endothermic event at 84°C an endothermic event of 169 J/g, the spectroscopic profile in the region of the IV suggests the presence of phenolic compounds. While the results for the dye and dried extract are: bulk density of 0.97% g/mL, pH 6; percentage of dry weight of 9% in chemical prospecting verified the presence of saponins, reducing sugars and phenols and tannins to extract and some fractions, the thermal analysis TG was found in a mass loss of 6.55% from 28 to 100°C, only one event in DSC exotherm to 169°C, the spectroscopic profile in the region IV showed bands of strong absorption features of alcohols and phenols. In the study using a spray dryer, excipients that showed the best results were 40% aerosil more aerosil and microcrystalline cellulose in the proportion of 35:5. The extract showed antioxidant properties. The vegetable raw material was also tested for their antimicrobial and antifungal activity, providing positive results for some strains tested and shown bactericidal activity for fractions of
iv
ethyl acetate and hexane. The extract and the hexane fraction showed fungistatic activity, all these results contribute to future studies with this
Plant, thereby increasing their value.
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Estudo fitoquímico e atividade antiplasmódica em Plasmodium falciparum (W2) de Himatanthus articulatus (Vahl) Woodson (Apocynaceae) / Phytochemistryand antiplasmodial activity in P. falciparum (W2) of Himatanthus articulatus (Vahl) Woodson (Apocynaceae)VALE, Valdicley Vieira 15 October 2014 (has links)
Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-12-10T00:12:58Z
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Previous issue date: 2014 / O presente trabalho descreve a análise fitoquímica e avaliação da atividade antiplasmódica em Plasmodium falciparum (W2) de Himatanthus articulatus (Vahl) Woodson. O extrato etanólico (EEHS) obtido por percolação do pó das cascas, após concentração, forneceu um precipitado (EEHSP) e um resíduo pastoso que foi submetido a liofilização (EEHS). Fracionou-se este por: re-extração sob refluxo, partição ácido-base e coluna cromatográfica de sílica gel. Além disso, submeteu-se o pó das cascas a extração com ácido clorídrico 1 N para separação de alcalóides. A prospecção fitoquímica, em CCD, foi realizada com EEHS e EEHSP, enquanto que EEHS, frações (FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS e FrMeOH EEHS) e FAHS2 DCM foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a DAD (arranjo de diiodo-CLAE-DAD). FrAcOET EEHS foi fracioanda por coluna cromatográfica fornecendo uma substância isolada (S1). Analisou-se o EEHS, a fração majoritária obtida na coluna cromatográfica (F71), FAHS2 DCM e S1 por cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massas (CL-EM). O espectro no infravermelho foi obtido para F71 e S1. A estrutura química de S1 foi definida como sendo o plumierídeo por ressonância magnética nuclear. A avaliação de atividade antiplasmódica foi realizada com EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, FAHS1 DCM, FAHS2 DCM, FAEEHS, FNEEHS, FNHS DCM e S1 pelo método da lactato desidrogenase parasitária (pLDH). Na prospecção fitoquímica, EEHS e EEHSP apresentaram resultados positivos para polifenóis e taninos, saponinas, triterpenos e esteroides, alcaloides e geninas flavônicas. EEHS e frações analisadas por CLAE-DAD mostraram os picos mais intensos sugestivos de iridoides, comprovados por CL-EM de EEHS que mostrou como substância majoritária o iridóide plumierídeo, coerente com o espectro no IV de F71 e S1 que revelou absorções de grupos funcionais presentes em iridóides. Nas análises destas por CL-EM, observou-se um pico a m/z 471 (M+H), atribuído ao íon pseudomolecular do plumierídeo e/ou isoplumierídeo. S1 foi identificada como plumierídeo. Até o presente momento não foi relatada a presença de alcaloides para a espécie, porém nas frações alcaloídicas (FAHS1 DCM, FAHS2 DCM, FAEEHS) e de neutros (FNEEHS e FNHS DCM) em análise por CCD revelada com reagente Dragendorff observaram-se manchas sugestivas de alcalóides, coerente com análise por CLAE-DAD de FAHS2 DCM, a qual mostrou pico majoritário com cromóforo sugestivo de alcaloide β-carbolínico. Em análises por CL-EM de FAHS2 DCM observou-se pico majoritário sugestivo do alcalóide 10-hidroxi-antirina-N-óxido com massa molecular 328 u. Os ensaios de atividade antiplasmódica foram negativos para EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, S1, FAEEHS, FAHS1 DCM, FNEEHS, FNHS DCM e moderadamente ativo (CI50 22,89 μg/mL) para FAHS2 DCM. Estes resultados indicam que a atividade antiplasmódica da planta pode se atribuída aos alcaloides, cuja presença em H. articulatus é descrita pela primeira vez. / The present master thesis describes the phytochemical study and the antiplasmodial activity against Plasmodium falciparum (W2) of Himatanthus articulatus (Vahl) Woodson. The ethanol extract (EEHS) obtained by percolation of the bark powder, gave, after concentration, a precipitate (EEHSP) and a pasty residue that was submitted to lyophilization (EEHS). Fractionation of EEHS was carried out by successively re-extraction with DCM, AcOEt and MeOH under reflux, by acid-base partitioning for separation of alkaloids and by chromatography over silica gel column. Furthermore, the bark powder was extracted with 1 N HCl for the separation of alkaloids. TLC prospection of EEHS and EEHSP was carried out while EEHS, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS and FAHS2 DCM were also analyzed by HPLC - DAD. Column chromatography of FrAcOET EEHS afforded a substance (S1). EEHS, the major fraction obtained in its chromatographic column (F71), DCM FAHS2 and S1 were analysed by UPLC-PDA-MS/ESI. Spectroscopic analyses of S1 (IR, UV, MS/ESI, 1H and 13CNMR) allowed its identification as plumieride. Antiplasmodial activity against P. falciparum (W2) was evaluated for EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, FAHS1 DCM, DCM FAHS2, FAEEHS, FNEEHS, FNHS DCM and S1 by the parasite lactate dehydrogenase (pLDH) method. In the TLC prospection, EEHS and EEHSP showed positive results for polyphenols and tannins, saponins, triterpenes and steroids, alkaloids and flavonoids. EEHS fractions were analyzed by HPLC-DAD showing suggestive peaks of iridoids. Analyses by UPLC-PDA-MS/ESI showed that EEHS contains plumieride as the major substance whose psedomolecular peak was observed at m/z 471 (M + H). S1 was identified as plumeride. Until now it was not reported the presence of alkaloids for the species but spots suggestive of alkaloids were observed on TLC with Dragendorff reagent of FAHS1 DCM, DCM FAHS2, FAEEHS, FNEEHS and FNHS DCM were observed. UV spectra registered online by HPLC-DAD for FAHS2 showed that the major peak is suggestive of a β-carboline alkaloid. UPLC-PDA-MS/ESI analysis of FAHS2 DCM showed an intense peak corresondng to a pseudomolecular ion 329 u that could be possibly attributed to the alkaloid 10-hydroxy-antirine-N-oxide (MM 328 u). The antiplasmodial assays were negative for EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, S1, FAEEHS, FAHS1 DCM, FNEEHS, FNHS DCM and moderately active (CI50 22,89 μg/mL) for FAHS2 DCM. These results indicate that the antiplasmodial activity might be attributed to the plant alkaloids whose presence in H. articulatus is reported here by the firist time.
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