Made available in DSpace on 2015-05-15T13:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 215.pdf: 2592111 bytes, checksum: 804f8cb6e33b01bf63dd4d4e6914d708 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Dentre os diversos problemas associados à leishmaniose tegumentar americana (LTA), a dificuldade para a obtenção do diagnóstico exerce destaque pelos vários métodos associados para que se obtenha sua definição. A coleta do material biológico tem papel fundamental neste processo, tendo em vista a severidade das lesões aliada às comuns infecções secundárias observadas. O método de coleta empregado no serviço de saúde baseia-se no raspado da lesão e na obtenção de biópsia do local lesionado, caracterizado por promover riscos aos pacientes O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do método de coleta de amostra biológica através do swab para ao diagnóstico molecular da LTA. Entre os meses de março de 2011 a junho de 2012 foram selecionados 88 pacientes, dos quais foram coletadas amostras de biópsia, exsudatos cutâneos através do swab e raspado cutâneo. As amostras de biópsia e exsudatos foram avaliadas através da reação em cadeia da polimerase tendo como alvo o minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA) de Leishmania. As amostras de raspado cutâneo foram avaliadas através da pesquisa direta microscópica do parasito. O perfil epidemiológico dos pacientes revelou a predominância da doença em indivíduos do sexo masculino (57,8 por cento) e as faixas etárias acometidas com predominância foram a jovem e adulto, sendo 40,36 anos a média das idades. A maioria dos pacientes foi procedente do município de Moreno, região metropolitana do Recife (70/ 79,54 por cento). Foram observadas majoritariamente lesões ulceradas com presença de exsudato (90,9 por cento) e estas se concentraram nos membros inferiores (71,6 por cento). Ao comparar o resultado do diagnóstico molecular entre as amostras analisadas, obteve-se a convergência de 86,36 por cento, sendo este valor estatisticamente significativo (p-value 0,001). Os resultados obtidos sugerem que o método de coleta de amostra biológica através do swab para o diagnóstico molecular da LTA apresenta excelente eficácia quando comparado com o método de biópsia e pode ser implantado em caráter auxiliar no serviço de saúde haja vista sua simplicidade e facilidade de execução, não oferecendo riscos secundários ao paciente

Made available in DSpace on 2015-06-01T19:28:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 539.pdf: 8577507 bytes, checksum: 8b2c270d079647e954ed0cf6eed5e17f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Estudos que buscam entender o porque de pacientes com dengue apresentarem diferentes prognósticos são de grande importância para a Saúde Pública. Baseado na teoria de que a resposta do sistema imune do hospedeiro frente a infecções pelo DENV tem influência no prognóstico da infecção, foram analisados e quantificados a expressão de genes em pacientes com diferentes formas clínicas da dengue. Essa tese apresenta seus resultados nos três artigos publicados. Nesse estudo, dentre os seis genes - relacionados com a resposta immune inata-, analisados, três deles (MYD88, PDCD4, FCGR3B) apresentaram potencial para serem utilizados como classificadores dos pacientes com dengue. No segundo artigo, 28 pacientes (15 DF e 13 DHF) tiveram a expressão de 12 genes - relacionados com a via de indução da resposta imune inata antiviral, principalmente interferon - individualmente quantificados. Foi utilizado o método de inteligencia computacional de predição Vetor de Suporte de Máquina para a classificação dos pacientes em DF e DHF. Os resultados destacaram MYD88 e TLR7 como os mais importantes (acurácia de 89 por cento) para a classificação entre DF e DHF; TLR9, RIG-I, IRF7, IFN- , IFN- mostraram efeito negativo na classificação, já TLR3, MDA5, IRF3, CLEC5A, IFN- separadamente não influenciaram na classificação, no entanto, quando analisados juntamente com MYD88 e TLR7 aumentaram a acurácia de classificação para 96 por cento. Destacando assim que os genes exercem influencia entre si e dessa forma se tornam os melhores elementos para classificação dos pacientes. Finalizando a tese, o terceiro artigo apresenta a análise baseada nos dados do segundo artigo, de como cada genes poderia estar sendo influenciado pela infecção do vírus nos pacientes. Observamos que o DENV influencia mais de uma via intracelular na indução do IFN; não apenas através do TLRs, mas também genes citoplasmáticos como MDA5 e RIG-I. O presente trabalho buscou identificar genes com potencial de relevancia no prognóstico da infecção por DENV e através de suas relações contribuir para o esclarecimento a cerca do prognóstico da dengue

Made available in DSpace on 2015-06-08T13:58:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 539.pdf: 8577507 bytes, checksum: 8b2c270d079647e954ed0cf6eed5e17f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Estudos que buscam entender o porque de pacientes com dengue apresentarem diferentes prognósticos são de grande importância para a Saúde Pública. Baseado na teoria de que a resposta do sistema imune do hospedeiro frente a infecções pelo DENV tem influência no prognóstico da infecção, foram analisados e quantificados a expressão de genes em pacientes com diferentes formas clínicas da dengue. Essa tese apresenta seus resultados nos três artigos publicados. Nesse estudo, dentre os seis genes - relacionados com a resposta immune inata-, analisados, três deles (MYD88, PDCD4, FCGR3B) apresentaram potencial para serem utilizados como classificadores dos pacientes com dengue. No segundo artigo, 28 pacientes (15 DF e 13 DHF) tiveram a expressão de 12 genes - relacionados com a via de indução da resposta imune inata antiviral, principalmente interferon - individualmente quantificados. Foi utilizado o método de inteligencia computacional de predição Vetor de Suporte de Máquina para a classificação dos pacientes em DF e DHF. Os resultados destacaram MYD88 e TLR7 como os mais importantes (acurácia de 89 por cento) para a classificação entre DF e DHF; TLR9, RIG-I, IRF7, IFN- , IFN- mostraram efeito negativo na classificação, já TLR3, MDA5, IRF3, CLEC5A, IFN- separadamente não influenciaram na classificação, no entanto, quando analisados juntamente com MYD88 e TLR7 aumentaram a acurácia de classificação para 96 por cento. Destacando assim que os genes exercem influencia entre si e dessa forma se tornam os melhores elementos para classificação dos pacientes. Finalizando a tese, o terceiro artigo apresenta a análise baseada nos dados do segundo artigo, de como cada genes poderia estar sendo influenciado pela infecção do vírus nos pacientes. Observamos que o DENV influencia mais de uma via intracelular na indução do IFN; não apenas através do TLRs, mas também genes citoplasmáticos como MDA5 e RIG-I. O presente trabalho buscou identificar genes com potencial de relevancia no prognóstico da infecção por DENV e através de suas relações contribuir para o esclarecimento a cerca do prognóstico da dengue

Made available in DSpace on 2015-07-08T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 38.pdf: 779592 bytes, checksum: bb7860a5216579fd5bbccc4e3c3d8a6d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / As hortaliças como a alface (Lactuca sativa) têm sido associadas a diversos surtos de doenças de origem alimentar. Dentre os patógenos envolvidos, os norovírus (NoV) são reconhecidos como os principais agentes etiológicos de gastrenterite, sendo as estirpes do genogrupo II (GII) mais prevalentes. Dessa forma, muito esforço tem sido realizado no desenvolvimento de métodos para detecção desses vírus em hortaliças. Os estudos têm focado na padronização dos métodos e otimização das etapas de extração, concentração e detecção do ácido nucléico viral. O uso de outros vírus como controle interno também tem sido estudado, para identificação de falhas durante a análise e evitar resultados falso-negativos. O presente estudo teve como objetivo investigar a contaminação de NoV GII pelo método de concentração por filtração em membrana negativa seguida de semi-nested PCR e PCR em tempo real e avaliar a qualidade microbiológica (pesquisa de Salmonella e enumeração de coliformes) de 90 amostras de alface (30 in natura, 30 minimamente processadas e 30 de serviços de alimentação) no Estado do Rio de Janeiro.O bacteriófago PP7 foi utilizado como controle interno e uma otimização do método comparando a solução salina fosfatada tamponada (PBS) e o tampão glicina (TG) foi realizada. Nenhuma amostra apresentou contaminação por NoV GII e Salmonella. As amostras in natura apresentaram qualidade microbiológica satisfatória de acordo com a legislação. Uma amostra minimamente processada (3,3%) e seis de serviços de alimentação (20%) apresentaram condições higiênico-sanitárias insatisfatórias devido ao número de coliformes termotolerantes acima do permitido, indicando que os procedimentos de higienização realizados nos serviços de alimentação não foram eficazes para eliminação dos micro-organismos ou que a contaminação pode ocorrer, por parte dos manipuladores. / Green leafy vegetables, as lettuce (Lactuca sativa) have been linked to diverse foodborne outbreaks worldwide. Among several pathogens involved, norovirus (NoV) are recognized as one of the most important etiological agent associated with gastroenteritis, being genotype II (GII) the most prevalent. In this manner, efforts have been made to develop methods to detect these viruses in green leafy vegetables. Researches have focused on standardizing methods and optimize stages of extraction, concentration and detection of viral nucleic acid. The use of others viruses as internal control has also been studied, to identifying possible errors during analysis and avoid false-negatives results. This study aimed to verify the contamination by NoV GII through concentration methodology by negative-membrane filtration followed by detection by semi-nested PCR and quantification by Real Time PCR and microbiological quality evaluation (Salmonella research and enumeration of total and thermo tolerant coliform) of 90 samples of lettuce (30 in natura, 30 minimally processed and 30 from food services) in the state of Rio de Janeiro. Bacteriophage PP7 was utilized as internal control and a method optimization comparing phosphate buffered saline (PBS) and Glycine buffer (GB) was carried out. No sample showed contamination by NoV GII and Salmonella. Samples of in natura lettuce exhibited satisfactory microbiology quality according Brazilian resolution. One minimally processed sample (3.3%) and six (20%) from food service showed unsatisfactory hygienic-sanitary conditions because of the number of thermotolerant coliforms above of allowed, indicating that hygienic proceedings in restaurants were not effective for eliminating those microorganisms or that the contamination may occur by employers. PP7 bacteriophage was detected in 40, 86.7 and 76.7% of in natura, minimally processed and food service, respectively. Using GB increased PP7 bacteriophage recovery (p = 0.029), but did not demonstrate significant difference in NoV GII recovery (p = 0.57), and increased sensitivity of semi nested PCR technique for detecting NoV GII in samples artificially contaminated. This last one exhibited lower sensitivity than Real Time PCR for NoV GII detection. Results point out that GB is an elution buffer more efficient and that PP7 bacteriophage is applicable as an internal control of this method.

Made available in DSpace on 2015-07-08T12:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 14.pdf: 2053160 bytes, checksum: 6a9f2af0a7daaa1f0f06673bc00622fc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A doença meningocócica (DM) é uma enfermidade aguda, grave, de evolução rápida com taxas de mortalidade de 15 a 20% e que atinge principalmente as faixas etárias mais jovens, considerada um grave problema de saúde pública mesmo em países desenvolvidos. A DM está associada à colonização da nasofaringe de humanos, único hospedeiro, por uma bactéria Gram negativa, Neisseria meningitidis. O método considerado padrão ouro para a tipificação molecular da Neisseria meningitidis é o MLST, que consiste no sequenciamento de 7 genes Housekeeping , o MLST é uma técnica complexa que exige uma demanda de custo e tempo, tornando-se inviável sua implementação em laboratórios públicos que recebem amostras de Nm, uma estratégia que poderá contornar este obstáculo seria a PCR em tempo real que com poucas reações e em poucos dias fornecerá o perfil de MLST de isolados com alta porcentagem de confiabilidade. O objetivo do estudo é detectar os complexos clonais do MLST causadores dos grandes surtos de DM através de sondas específicas pela PCR em Tempo Real Qualitativa. A análise pelo MLST de 98 isolados estudados caracterizou todos os 15 isolados do sorogrupo B como integrantes do complexo clonal ST-32/ET-5 além de outras 11 cepas do sorogrupo C. O ST-103 foi o complexo clonal predominante entre as cepas do sorogrupo C com 43 isolados, outros STs foram encontrados para o sorogrupo C,ST-11 (n=11), ST-41/44 (n=2), ST-8/4A (n=9), ST-35 (n=1), ST-269 (n=1) e outros 5 isolados não foram associados a nenhum complexo clonal. A análise pela PCR em Tempo Real forneceu dados importantes como a caracterização de grande número dos isolados com 100% de certeza e de outros isolados com probabilidade acima de 75%. A PCR em Tempo Real qualitativa mostrou ser uma ferramenta rápida e sensível no auxílio a estudos epidemiológicos para controle de surtos regionais quando há a necessidade de ações rápidas por parte das autoridades de saúde pública. / Meningococcal disease (MD) is an acute illness, severe, rapidly evolving with mortality rates of 15 to 20% and that primarily affects younger age groups, considered a serious public health problem in developed countries. DM is associated with colonization of the nasopharynx of human host by Gram negative bacteria, Neisseria meningitidis (Nm). The method considered the "gold standard" for molecular typing of Neisseria meningitidis is the MLST, which consists in sequencing of 7 genes "Housekeeping", the MLST is a complex technique that requires a time and cost consuming, making it impractical implementation in public laboratories that receive Nm samples, a strategy that could circumvent this obstacle would be the real-time PCR with few reactions in a few days coud provide the MLST profile of isolates with a high percentage of reliability. The objective in this study is to detect the MLST clonal complexes causing major outbreaks of DM through specific probes for Real Time PCR Qualitative method. The analysis by MLST of 98 isolates studied featured all 15 isolates of serogroup B as clonal complex ST-32/ET-5 plus 11 other strains of serogroup C. The ST-103 was the predominant clonal complex among strains of serogroup C isolates with 43. Others STs were found for serogroup C, ST-11 (n=11), ST-41/44 (n=2), ST-8/4A (n=9), ST-35 (n=1), ST-269 (n=1) and other five isolates were not associated with any clonal complex. The analysis by Real Time PCR provided important data such as the characterization of large numbers of isolates with 100% certainty and other isolates with probability above 75%. The Real-Time PCR using the qualitative method proved to be a highly useful tool to aid in rapid and epidemiological studies for outbreak control is necessary when regional rapid actions of public health authorities.

Made available in DSpace on 2015-11-18T13:13:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 153.pdf: 1182479 bytes, checksum: 572ca8cb379e9adc3ceb185ab244a3eb (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A dengue é uma arbovirose causada pelo vírus Dengue (DENV), cujos principais vetores são os mosquitos Aedes aegypti e Aedes albopictus. A. aegypti é o único vetor de DENV em Cabo Verde, país que teve a sua primeira epidemia da dengue registrada em 2009. Contudo, pouco se sabe acerca da variação no nível de competência vetorial das populações do vetor aos diferentes sorotipos de DENV. O estudo teve como objetivo avaliar a competência vetorial de A. aegypti da ilha de Santiago, Cabo Verde, a quatro sorotipos de DENV. Para isso, os mosquitos foram alimentados artificialmente com sangue contendo diferentes sorotipos de DENV, e em seguida dissecados ao 7º, 14º e 21º dia após infecção (dpi) para verificar a presença do vírus no intestino, cabeça e glândulas salivares usando a técnica de RT-PCR. Adicionalmente, o número de cópias de RNA viral presente nas glândulas salivares foi determinado por qRT-PCR. Foram observadas altas taxas de infecção das glândulas salivares para DENV-2 e DENV-3 (65 e 75 por cento respectivamente), enquanto que para DENV-1, o RNA viral só foi detectado no intestino e cabeça, não chegando a infectar as glândulas salivares. DENV-4 não disseminou para cabeça e glândulas salivares, mantendo a infecção apenas no intestino (9 por cento). O número de cópias de RNA viral nas glândulas salivares não variou significativamente entre DENV-2 e DENV-3 e nem entre os diferentes períodos de incubação do vírus e títulos de DENV testados. Conclui-se, que a população de Aedes aegypti da ilha de Santiago, Cabo Verde, possui alta competência vetorial para as cepas de DENV-2 e DENV-3 e são pouco susceptíveis para as de DENV-1 e DENV-4. As cópias de RNA viral nas glândulas salivares mantêm-se relativamente constante por 21 dias após a infecção, o que pode potencializar a capacidade vetorial de mosquito A. aegypti e sugere alguma forma de modulação da replicação do vírus nesse órgão

Made available in DSpace on 2015-12-29T16:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 raquel_barbieri_ini_mest_2013.pdf: 1834473 bytes, checksum: 1e591eb91c0a6e3d12d71fd1c53d6769 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-10-29 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Introdução: Apesar do recente declínio dos coeficientes de detecção de casos novos, a hanseníase permanece endêmica no Brasil e em outros países do mundo. O diagnóstico da doença se baseia nos aspectos clínicos, embora o índice baciloscópico e a histopatologia sejam usados como suporte para o diagnóstico. Nas formas paucibacilares, bacilos são raramente detectados e o exame histopatológico pode ser inconclusivo. Neste estudo, analisamos os aspectos clínicos e histopatológicos de pacientes com suspeita de hanseníase paucibacilar e estabelecemos a contribuição do PCR no manejo clínico destes casos. Pacientes e Métodos: Foram estudados 66 pacientes com lesão cutânea única em placa, atendidos no Ambulatório Souza Araújo (ASA) da Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil, no período de janeiro de 2008 a dezembro de 2011. Dois patologistas independentes, que não tinham informações sobre a história clínica dos pacientes, realizaram a reanálise histopatológica. Os pacientes foram classificados como Alta (A), Média (M) e Baixa (B) probabilidade do diagnóstico de hanseníase ou outras dermatoses (O). O DNA foi extraído de fragmentos de biópsias de pele e os níveis de M. leprae Ag85B e 16S rDNA foram estimados usando a amplificação por PCR quantitativo (qPCR) Resultados: O qPCR foi positivo em 46/66 (69.7%) das amostras de pele. Dos 66 pacientes, 57 (86.3%) tinham recebido tratamento com poliquimioterapia (PQT) baseado nos aspectos clínicos e histopatológicos. A associação entre o resultado do PCR e a variável tratamento mostrou que entre os 19 pacientes classificados como L+O, 2 pacientes com PCR positivo não tinham recebido tratamento e 6 pacientes com PCR negativo tinham sido tratados com PQT por 6 meses. Conclusão: Concluímos que o qPCR é uma ferramenta útil para o diagnóstico e o manejo clínico dos pacientes com suspeita de hanseníase paucibacilar, nos casos em que a histopatologia não é conclusiva / Background: Despite recent decline in detection rates, leprosy remains endemic in Brazil and in others countries around the world. Frequently, the disease diagnosis is based only on clinical aspects, although the bacteriological index in skin smears and histopathological examination are used to support conclusions. In paucibacillary forms, ba cilli are rarely detected, and histopathological examination may not be conclusive. In this study, we analised the clinics and histopathological aspects of patients suspected of paucibacillary leprosy and try to establish the contribution of PCR to the clinical management of these cases. Methods: We evaluated 66 patients with single - plaque skin lesions who attended the Leprosy Outpatient Unit of Oswaldo Cruz Foundation, Rio de Janeiro, Brazil, between 2008 and 2011. Two independent pathologists who were blinded to the patients’ clinical details performed pathological reanalysis of slides. Patients were classified as High (H), Medium (M), and Low probability (L) for the diagnosis of leprosy or another dermatosis (O). DNA was extracted from the fragmen ts of skin biopsies, and the levels of M. leprae Ag85B and 16S rDNA were estimated using qPCR amplification . Findings: The qPCR was positive in 46/66 (69.7%) of skin samples. Out of 66 patients, 57 (86.3%) received multidrug therapy (MDT) based on clinical and histopathological examination. The association between previous treatment and qPCR results showed that among 19 patients classified as L+O, 2 qPCR - positive patients were not treated, whereas 6 patients with negative qPCR results were treated with MDT for 6 months. Conclusion: In conclusion, qPCR is a useful tool to diagnosis and clinical management in suspected cases of paucibacilary leprosy in cases with inconclusive histopathology.

Made available in DSpace on 2015-12-29T16:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 christiane_azevedo_ini_mest_2013.pdf: 9571573 bytes, checksum: 1cc8de622d03d6edb3f71cea551625ee (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-11-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A toxoplasmose é uma zoonose endêmica em todo o mundo causada pelo Toxoplasma gondii. Embora a maioria das infecções sejam subclínicas e assintomáticas, tem uma grande importância em hospedeiros imunocomprometidos e em recém-nascidos com infecção congênita. A infecção causada pelo Toxoplasma gondii durante a gestação pode causar graves lesões ao feto. A realização de exames laboratoriais para investigação diagnóstica da toxoplasmose congênita durante o prenatal é imprescindível para o tratamento correto da gestante e melhor prognóstico das crianças infectadas.O grande avanço no diagnóstico prenatal da infecção fetal pelo Toxoplasma gondii foi o uso da reação em cadeia da polimerase (PCR) no líquido amniótico. O objetivo da investigação é avaliar o desempenho diagnóstico da PCR para identificação da toxoplasmose fetal em gestantes com diagnóstico sorológico de toxoplasmose recente, através de uma revisão sistemática da literatura. Nessa revisão a sensibilidade global do teste da PCR foi de 77% e a especificidade de 98,3%, alcançando sensibilidade de 87% e especificidade de 99% quando realizado até cinco semanas após o diagnóstico materno. No entanto o desempenho do teste pode variar de acordo com o trimestre da gravidez. Pode ser recomendado para uso nas primeiras cinco semanas após o diagnóstico materno quando há suspeita de toxoplasmose fetal

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 janaina_felix_ioc_mest_2014.pdf: 2510072 bytes, checksum: f69b1e65e5e80f13661ea75612387326 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Vírus Linfotrópico de Células T Humanas (HTLV) foi o primeiro retrovírus identificado em humanos e posteriormente associado à leucemia/linfoma de células T do adulto (LTA). Podem-se encontrar quatro tipos: HTLV-1, HTLV-2, HTLV-3 e HTLV-4, sendo os dois primeiros de maior prevalência. Estima-se que cerca de 10 milhões de pessoas no mundo e 2,5 milhões no Brasil, estejam infectadas pelo HTLV. O HTLV-1 possui sete subtipos e o HTLV-2, quatro. Recentemente, foi identificado o subtipo HTLV-1b no estado do Rio de Janeiro, sendo anteriormente encontrado somente na África Central. A análise dos subtipos é importante em estudos sobre a origem geográfica e disseminação dos isolados virais. O presente estudo teve como principal objetivo caracterizar as variantes genotípicas do HTLV em um grupo de pacientes acompanhados no Hospital Universitário Pedro Ernesto \2013 UERJ. Objetivou também caracterizar o grupo quanto aos possíveis fatores de risco para infecção pelo HTLV, descrever a ocorrência de doenças associadas com HTLV, caracterizar o grupo quanto aos subtipos de HTLV, descrevendo-os de acordo com a naturalidade dos pacientes e caracterizar os casos de pacientes com sorologia de WB indeterminado utilizando técnicas de biologia molecular. Foram estudados pacientes com a infecção pelo HTLV, sintomática ou assintomática, com sorologia positiva ou indeterminada. As amostras foram submetidas ao teste confirmatório pela PCR A infecção foi confirmada em 31 dos 33 participantes do estudo. Dentre os positivos, 28 foram HTLV-1a e os demais HTLV-2b. O gênero mais frequente foi o feminino. Pacientes adultos, casados e pardos foram os mais frequentes dentro das variáveis de faixa etária, estado civil e grupo étnico, respectivamente. A maioria dos pacientes relatou não saber se manteve contato sexual com portador de HTLV, não fazer uso de drogas injetáveis ou já ter realizado transfusão de sangue. Dentre as co-infecções detectadas, estiveram HIV e HCV. Apenas 9,7% dos pacientes apresentou sintomatologia, sendo todos os casos de mielopatia associada ao HTLV-1. Apenas 29% dos pacientes informaram ter amamentado. Dos seis pacientes com WB indeterminado, cinco foram confirmados para HTLV-1 e um para HTLV-2. O único paciente usuário de drogas injetáveis era portador de HTLV-2b. Recomenda-se novos estudos com populações abertas do Rio de Janeiro, com maior número de participantes, afim de determinar mais precisamente a prevalência do HTLV e seus subtipos na região / The Human T - Cell Lymphotropic Virus (HTLV) was the first human retrovirus identified and associated to leukemia/lymphoma, adult T - cells (ATL). Can be found four types: HTLV - 1, HTLV - 2, HTLV - 3 and HTLV - 4. The first two are the most prevalent. About 10 million people around the world and 2.5 million in Brazil, are infected with HTLV. The HTLV - 1 type is subdivided into seven subtypes and HTLV - 2 in four. Recently, HTLV - 1b was identified in t he state of Rio de Janeiro. This subtype it was found only in Central Africa. The analysis of subtypes is important in studies of geographical origin and dissemination of viral isolates. The present study aimed to characterize the genotypic variants of HTLV in a group of patients treated at University Hospital Pedro Ernesto - UERJ. Aimed to characterize the group as to the possible risk factors for HTLV infection, describing the occurrence of diseases associated with HTLV, characterized the group as to the HTLV subtypes; correlations between subtypes and local of infection; assess risk factors and confirm or exclude cases of patients with indeterminate or not typed serology. This study char acterized the group as to the possible risk factors for HTLV infection, describing the occurrence of diseases associated with HTLV, characterized the group as the subtypes of HTLV, describing them according to the naturalness of patients and characterize t he cases of patients with serology indeterminate WB using molecular biology techniques. Patients were studied with HTLV, symptomatic or asymptomatic, with positive or indeterminate WB serology. The specimens were subjected to confirmatory testing by PCR. T he infection was confirmed in 31 of 33 study participants. Among posit i v e s, 28 were HTLV - 1a and other HTLV - 2b. The most frequent was the female gender. Adult patients, married and browns were the most frequent within the variables of age, marital status and e t h nic group, respectively. Most patients reported not knowing remained sexual contact with HTLV carrier , do not use intravenous drugs or have already done blood transfusion. T he co - infections detected were HIV and HCV. Only 9.7% of patients had symptoms , and all cases of myelopathy associated with HTLV - 1. Only 29% of patients rep orted having breastfed. Of the six patients with indeterminate WB five were confirmed HTLV - 1 and HTLV - 2. The only patient injecting drug user was infected by HTLV - 2b. We recommen d further studies with open populations of Rio de Janeiro, with the largest number of participants in order to more precisely determine the prevalence of HTLV and its subtypes in the region.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:40:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 vanessa_neves_ioc_mest_2010.pdf: 3872823 bytes, checksum: 90bf38dc504d5226b7598ef2772eb07c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A automatização da Reação em Cadeia da Polimerase (PRC) abriu uma nova perspectiva no diagnóstico do Trypanossoma Cruzi tanto em amostras clínicas humanas, como na identificação do parasita em seus vetores e reservatórios. Para a realização da PCR é necessária a realização da extração do DNA (pré-etapa da amplificação), onde o ácido nucléico é liberado e purificado a partir da amostra biológica, tendo como condição ideal a obtenção de um DNA puro e em altas concentrações. Este trabalho visou avaliar o desempenho de protocolos de extração de DNA descritos na literatura científica, através dos seguintes parâmetros: concentração de DNA, grau de pureza, PCR (ampliação de uma seqüência de DNA específica), reprodutibilidade, praticidade e custo. Foram testados 12 protocolos, cujos critérios de seleção foram \201Cmétodos de extração de DNA in house de espécimes do Filo Arthropoda\201D e \201Ckits e/ou preparados comerciais mais citados na literatura científica no período de janeiro de 2002 a julho de 2009\201D. A extração foi realizada em exemplares da espécie Rhodnius brethesi infectados através de experimentos de reconstituição (infecção artificial) com 3 concentrações distintas de T. cruzi (1, 10 e 100 parasitas por amostra extraída). Os melhores resultados nos parâmetros concentração de DNA, grau de pureza e PCR, foram apresentados pelos protocolos 08 (in house) e 09 (QIAamp DNA Stool Mini Kit, Marca Qiagen, nº de cat 51504), tendo o protocolo 08 mostrado maior concentração estimada de DNA total e um maior número de amostras com valores dentro da faixa de pureza, em relação ao protocolo 09 e a todos os outros protocolos testados Atribuímos essa melhor performance a uma associação eficiente entre número de etapas de purificação e os componentes do tampão de lise. Em relação aos parâmetros custo e praticidade, o protocolo 09 (kit) revelou ser o mais econômico e demandar menos tempo na sua execução total, comparado ao protocolo 08. Dentro do questionário de opinião, que apontou grau de pureza como parâmetro mais importante, o protocolo mais indicado para extração de amostras a partir de triatomíneos foi o protocolo 08. Assim, dois protocolos podem ser indicados: o 08 e o 09. Dos seis parâmetros analisados, os valores de estimativa de concentração de DNA, obtidos como método da espectrofotometria, apresentaram-se discrepantes; devido a isso não indicamos esse método para avaliar o parâmetro concentração. / The Polymerase Chain Reaction (PCR) enabled a new diagnosis of Trypanosoma cruzi in human vertebrate samples such as the parasite identification in its vectors and reservoirs. PCR demands a pure and high concentrated DNA; therefore DNA extraction is an important step that must be well performed. Considering this, we have evaluated specific parameters – concentration and purity of the DNA, PCR (specific DNA sequence ampli ficat ion), reproducibility, practicality and cost – in order to assess the performance of extraction protocols. Twelve protocols were selected according to two criteria: 1 -in house methods used to extract DNA from specimens belonging to the Phylum Arthropo da; 2 -kits and/or commercial preparations most often cited in scientific papers from january 2002 to july 2009. Extraction was carried out on specimens of Rhodnius brethesi artificially infected with three different concentrations of T. cruzi (1, 10 and 10 0 parasites per sample extracted). Protocols 08 (in house CTAB based) and 09 (QIAamp DNA Stool Mini Kit, Qiagen, Cat number 51504) revealed the best concentration and purity of the DNA results in addition to the higher number of amplified samples. Comparat ively, protocol 08 was even better than 09 on these parameters, presumabily for the efficient association between number of purification steps and components of the lysis buffer. On the other hand, protocol 09 was less costly than protocol 08, besides fast er to execute. Participants of a survey designated DNA purity as the most important parameter regarding a DNA extraction protocol leading us to indicate protocol 08 for the extraction of samples taken from triatomine. Besides protocol 08, the kit represent ed by protocol 09 can also be indicated because of its lower cost and fastness. The discrepancy in the results obtained for DNA concentration lead us to discourage the uso of spectrophotometry to estimate DNA concentration