Orientador : Maria do Carmo Alberto-Rincon / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T02:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vidsiunas_AlexKors_M.pdf: 4579118 bytes, checksum: 9afb82105a9c090fb9520d36d766a70a (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientador: Aparecida Machado de Moraes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T14:55:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Velho_PauloEduardoNevesFerreira_D.pdf: 2446406 bytes, checksum: e4ccb38baf8e0f3a32785ac7193d12f9 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: As bartoneloses humanas são um grupo de doenças cuja patogênese é pouco conhecida. A Bartonella henselae é uma das mais estudadas bactérias deste gênero. Ainda assim, pouco se sabe sobre sua virulência e sua relação com o hospedeiro. O objetivo deste estudo foi observar se passagens desses microorganismos in vivo determinariam alterações ultra-estruturais nas mesmas. Para isso foram selecionados camundongos isogênicos fêmeas, de 4 a 7 semanas de vida, que foram inoculados com cepa padrão de B. henselae (I). Estas foram recuperadas inicialmente de animais geneticamente imunodeficientes (II) e então inoculadas em imunocompetentes. Colônias de bactérias obtidas desta última passagem (III) foram comparadas com colônias I e II à microscopia eletrônica de transmissão. Perda de fímbrias e abundante formação de blebs foram as alterações morfológicas mais encontradas nas colônias III. Também, no sexto dia após as inoculações, os animais foram sacrificados e as principais alterações histológicas encontradas foram proliferação endotelial, observada nos animais imunodeficientes, e reação granulomatosa incipiente, observada em um dos camundongos imunocompetentes inoculados. Estes achados são concordantes com aqueles observados clínica e histologicamente nas doenças humanas causadas por bactérias deste gênero. São discutidos, também, outros achados ultra-estruturais e da microscopia de luz do fígado e do baço dos camundongos, além das observações bacteriológicas e do exame direto do sangue dos camundongos. Este estudo demonstrou que passagens in vivo da B. henselae induziram-na a alterações morfológicas. Estas alterações poderiam explicar a maior virulência das bactérias das colônias III, sugerida pelos resultados encontrados. A maioria destes achados não foi previamente descrita, assim, novos estudos sobre a patogênese da infecção pelas bartonelas deverão considerar as informações ora apresentadas / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Ana Maria Aparecida Guaraldo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T21:54:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Britto_MariaHelenaSeabraSoaresde_D.pdf: 1915996 bytes, checksum: 263b368c6fc66874e6b4cc046dda0817 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O gênero Cryptosporidium compreende atualmente 16 espécies, que já foram encontradas parasitando mais de 150 espécies animais, incluindo o homem, no qual já foram referidas infecções causadas por sete delas. O Cryptosporidium parvum é o mais estudado porque é responsabilizado pelo caráter zoonótico da infecção. A espécie responsável pelo caráter antroponótico da criptosporidiose é o Cryptosporidium hominis. Embora já tenha sido descoberto há cem anos e mesmo com o avanço da genômica e biologia molecular, ainda existem muitas dúvidas sobre sua taxonomia, biologia e relação com seus variados hospedeiros. Dados na literatura apontam para a necessidade urgente da definição de modelos experimentais para cultivo de linhagens do parasito ¿in vivo¿ e ¿in vitro¿. As pesquisas ¿in vivo¿ esbarram na dificuldade da utilização de grande número de animais certificados do ponto de vista genético e sanitário e mantidos em ambientes controlados. Por outro lado, os métodos de cultivo ¿in vitro¿ têm-se mostrado de difícil reprodutibilidade, pois a grande variabilidade de linhagens celulares, com diferentes origens, cultivadas em diferentes meios, em condições ambientais diversas, tornam bastante controversos os resultados obtidos nessa área. Neste trabalho apresentamos o cultivo de uma cepa de origem humana de Cryptosporidium sp, de um único paciente portador de HIV/aids, com criptosporidiose, denominada de MMC/Uni, mantida pela infecção por tubagem intra-gástrica de 105 oocistos em camundongos neonatos livres de patógenos específicos (SPF) de linhagens, heterogênicas e isogênicas imunocompetentes e imunodeficientes , mantidos durante todo o experimento em isolador de PVC flexível. Oocistos da cepa MMC/Uni de Cryptosporidium sp foram purificados mediante gradiente de sacarose. Após excistação, foram cultivados em monocamadas da linhagem celular MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney). A presença de merontes foi constatada após 90 horas de cultivo. A cepa MMC/Uni de Cryptosporidium sp, de origem humana, permaneceu infectante após 16 meses, sob refrigeração a 4°C, em solução de Dicromato de Potássio a 2,5% e manteve a infectividade de camundongos após 10 meses de congelamento em DMSO a - 70ºC / Abstract: Cryptosporidium covers actually 16 species, that have been found infecting more then 150 animal species, including humans, in wich have already been reported infections caused by seven of them. Cryptosporidium parvum is the most studied, due to be responsible by the zoonotic character of the infection. The specie responsible by the anthroponotic character of the criptosporidiosis is Cryptosporidium hominis. Although it has been discovered a hundred years ago, and even with the advances in genomics and molecular biology, still persists many doubts about its taxonomy, biology and the relations with its many different hosts. Data in literature point toward the urgent need in the definition of experimental models to cultivate strains of the parasite ¿in vivo¿ and ¿in vitro¿. The research ¿in vivo¿ faces the difficulty in the use of a great number of certificated animals, in the point of genetic and sanitary view, kept in controlled environment. In the other hand, ¿in vitro¿ culture methods have shown to be of difficult reproductibility, for the great variability of the cellular strains, with different origins, kept in different breeding media, in diverse environmental conditions, turn out of great controversy the results found in this area. Here we present a strain of Cryptosporidium sp, from human origin, taken from an unique HIV/aids patient with criptosporidiosis, named as MMC/Uni, kept by a intragastric tubage infection of 105 oocysts in Specific Pathogen-Free (SPF) neonates from outbred and inbred immunocompetent or immunodeficient mice strains, kept during the entire experiment in an isolator of flexible PVC. Oocists of MMC/Uni strain of Cryptosporidium sp were purified by sucrose gradient. After excistation, they were cultivated in MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney) cells monolayers. The presence of meronts was observed after 90 hours of cultivation. The strain MMC/Uni of Cryptosporidium sp, from human origin, remained infectant after 16 months, under refrigeration at 4°C, in a 2.5% solution of Potassium Dichromate, and maintened infectiveness in mouse, after 10 months of freezing in DMSO at -70ºC / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Orientadores : Sergio Furtado dos Reis, Leandro Rabello Monteiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T13:43:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nicola_PatriciaAvello_M.pdf: 2453187 bytes, checksum: 388df01d6201e003016887f2c148fce6 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O crânio de uma linhagem monofilética dentro do gênero Trinomys, que inclui a espécie T. yonenagae, é tratado neste estudo sob o paradigma das estruturas morfológicas complexas, cuja forma final resulta da interação de vários componentes distintos e pode ser modelada, no nível morfogenético, pela variação localizada em diferentes escalas geométricas. A variação da forma craniana entre as cinco espécies de Trinomys, para as vistas dorsal, ventral e lateral, foi investigada comparativamente usando o formalismo geométrico das funções de thin-plate splines, para descrever a organização da forma craniana em termos da escala geométrica da localização das diferenças na forma. Os resultados demostraram que o conteúdo de informação da forma craniana na linhagem monofilética dentro do gênero Trinomys, que inclui a espécie T. yonenagae, pode variar em relação à estrutura filo genética molecular nos diferentes níveis de complexidade de organização representados pelas vistas dorsal, ventral e lateral, bem como revelaram que existe uma escala natural de variação da forma craniana comensurável com a variação hierárquica molecular do gene mitocondrial citocromo b. A análise de componentes principais das deformações parciais mostrou que, somente para a vista lateral do crânio e para os componentes localizados de forma em pequena escala (a = -1), o padrão de diferenciação morfológica é comensurável com a hipótese filo genética independente inferida das seqüências do gene mitocondrial citocromo b para a linhagem de Trinomys que inclui T. yonenagae / Abstract: The skull of a monophyletic lineage of the genus Trinomys that includes the species T. yonenagae is viewed in this study under the paradigm of complex morphological structures whose final shape results from the interaction of several component parts. Under this paradigm, shape can be modeled at the morphogenetic level as localized variation at different geometric scales. Skull shape variation among the five species of Trinomys, for the dorsal, ventral, and lateral views of the skull, was investigated comparatively using the geometric formalism of the thin-plate spline functions to describe the organization of skull shape in terms of the geometric scale of shape differences. The results demonstrated that the information content of skull shape in the lineage that includes T. yonenagae can vary with respect to the molecular phylogenetic structure in the different levels of organizational complexity represented by the dorsal, ventral, and lateral views of the skull. The results also showed that there is a natural scale of variation in skull shape, which is commensurate with the molecular hierarchical variation of mitochondrial cytochrome b gene. Principal component analysis of the partial warps showed that, only for the lateral view of the skul1 and for the localized components of shape at small geometric scales (a = -1), the patter of morphological differentiation is commensurate with the independent phylogenetic hypothesis inferred from the sequences of the cytochrome b gene for the lineage of Trinomys that includes T. yonenagae / Mestrado / Mestre em Ecologia

Orientador : Sergio de Albuquerque / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T23:08:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Burgos_ValdeliceOliveira_M.pdf: 11459665 bytes, checksum: 9acb93c0b764a639f8b47c37f73bb667 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Nas pesquisas clínicas a respeito da fisiopatologia da doença de Chagas, cada vez mais vem ganhando corpo a idéia de que os portadores desta moléstia apresentam o que poderia definir-se como uma dificuldade do organismo doente em manter a homeostase através da regulação de suas funções, quer sejam motoras, secretoras ou metabólicas. Uma das principais causas, relacionadas à diversidade de alterações anatomopatológicas que o parasito T. cruzi promove no hospedeiro está diretamente ligada às características morfológicas da cepa, que podem apresentar um tropismo tecidual diferenciado. As formas largas de T. cruzi apresentam miotropismo e tropismo glandular. Os parâmetros foram avaliados em ambos os sexos na fase aguda, analisando comparativamente a parasitemia, a histopatologia, a morfometria (cariometria e análise de superfície) do pâncreas. O modelo experimental utilizado foi o camundongo albino (Mus musculus) da linhagem Swiss, machos e fêmeas. O inóculo empregado foi de 2 x 104 formas tripomastigotas sanguícolas da cepa RAL, e em dias pré-determinados 3º, 6º, 8º, 10º, 12º, 14º e 16º dias experimentos, os animais foram sacrificados e retirados o sangue e amostras do pâncreas, para as dosagens da glicemia e das enzimas lipase e amilase (total). O pico parasitemico ocorre em dias diferentes, no 12Q (pico parasitemico para as fêmeas), e 14Q (pico parasitemico para os machos), com um aumento apreciável do número de parasitas para os machos. Ao comparar as iIhotas pancreáticas dos grupos infectados com os grupos controles de ambos os sexos, houve uma atrofia nas células a e hipertrofia nas células ß das iIhotas pancreáticas de ambos os sexos dos grupos infectados. Entretanto, os ácinos pancreáticos das fêmeas infectadas demonstraram uma maior hipertrofia , já em relação a glicêmica houve uma redução significativa em relações a ambos os sexos. Houve redução do peso nos grupos infectados em relação ao grupo controle, entretanto mais significativa no grupo macho infectado. Contudo, a amilase não apresentou variações significativas entre os grupos infectadas machos e fêmeas, mas quanto ã lipase houve uma variação significativa entre os grupos machos e fêmeas, mas não significativas entre grupos infectados e controles do mesmo sexo. Observando todos os aspectos avaliados, verificou-se que no presente trabalho ocorreram alterações bioquímicas e histológicas do pâncreas de animais infectados com a cepa RAL de T. cruzi. A cepa RAL de T. cruzi apresenta um comportamento atípico em relação às outras cepas estudadas e descritas na literatura, promovendo alterações pancreáticas mais intensas nos animais fêmeas que nos machos / Abstract: Searching the physiopatology of Chagas' disease in clinical researches, the idea that the bearers of this disease present what could be defined as a difficulty of the sick organism in maintaining the homeostasis through the regulation of their functions as motive, secretors or metabolic. One of the main causes related to the diversity of anatomopathological alterations that the parasite T.cruzi promotes in the host is direct/y linked to the morphologic characteristics of strains the that can show a tissular differentiated tropism. The parameters were evaluated in both sexes were in the acute phase, analyzing the comparative parasitemia, histopathology, and morfometry (cariometric and surface analysis) of the pancreas. The experimental model used was the both sexes of albino mouse (Mus musculus) of the lineage Swiss. RAL strain of T .cruzi was used with the inoculum of 2 x 104 blood trypomastigotes forms. In pre-determined days the animals were killed being pancreas and blood collected for the evaluation of glycemy, enzymes lipase and amylase (total). The high parasitemy happens in different days, being in the 12° for the females, and the 14° for the males with an appreciable increasing of the parasites number for the males. When comparing the pancreatic islets of the infected groups with the control groups of both sexes, there was an atrophy in a-cells and hypertrophy in ß-cells of the pancreatic islets of both sexes of the infected groups, however, the pancreatic acids of infected females demonstrated a larger hypertrophy, and a glycemic reduction only accentuated in relation to the infected males. Amylases didn't show significant variations among the groups infected (males and females), but the lipases had a significant variation among the male and female groups, but no significant between infected groups and controls of the same sex. Observing all the appraised aspects in the present work we noted biochemical alterations and histological destruction of the pancreatic gland of animals infected with the T.cruzi RAL strain. The T .cruzi RAI,. strain presents an atypical behavior in relation to the other studied strains- described in the literature, promoting more intense pancreatic alterations in the female animals that in males / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Orientador : Gerson Eduardo Rocha Campos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T21:31:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Augusto_Valeria_M.pdf: 2569219 bytes, checksum: 3cca2138f23d30d8f259dee2551a4f88 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Os músculos dos camundongos da linhagem C57BL6J são pouco conhecidos, principalmente no que diz respeito às fibras híbridas. Assim sendo, procurou-se, no presente trabalho, delinear a composição do músculo sóleo (SOL), extensor longo dos dedos (EDL), tibial anterior (TA) e gastrocnêmio (GAS) desses animais em camundongos da linhagem C57BL6J. Utilizou-se a técnica histoquímica da mATPase para determinação dos tipos de fibras musculares em conjunto com a técnica bioquímica de eletroforese para identificação das isoformas de mio sina. O músculo SOL apresentou fibras do tipo I (38.42%), IIA (37.90%), IIAD (18.72%) e IID (4.94%). No EDL observou-se fibras do tipo I (0.67%), IC/IIC (2.98%), IIA (0.64%), IIAD (8.03%), IID (1.07%), IIDB (24.83%) e IIB (61.74%). O TA mostrou predominância de fibras dos tipos IIB (58.54%) e IIDB (31.26%), seguido de fibras dos tipos IIAD (4.86%), IID (2.44%), lIA (1.71%), I (0.71%) e IC/IIC (0.46%). No GAS foram delineadas fibras dos tipos IIE (55.08%), IIDB (18.41%), TID (2.78%), IIAD (12.36%), lIA (5.56%), ICIIC (0.05%) e I (5.74%). Concluiu-se neste trabalho que o músculo SOL de camundongos da linhagem C57BL6J apresenta predominância de fibras dos tipos I e lIA, devido à sua função de músculo postural. Nos músculos, EDL, TA e GAS, a maioria de fibras são do tipo IIE. A possível explicação para a maior ocorrência de fibras IIE, de contração rápida no EDL TA e GAS, deve-se ao reduzido tamanho desses animais, o que permite, e em algumas situações exige, movimentos rápidos. Por isso há predominância de fibras de contração rápida nestes músculos / Abstract: The muscles of C57BL6J mice are little known, especially with respect to hybrid fibers. Thus, in the present study we present the composition of the (SOL), extensor digitorum longus (EDL), tibialis anterior (TA) and gastrocnemius (GAS) muscles of these animals.. The mATPase histochemical analysis was used for typing muscle fibers, and the biochemical e1ectophoresis technique for myosin heavy chain isoforms identification. The SOL muscles presented fibers of types I (38.42%), IIA (37.9%), IIAD (18.72%) and 1m (4.95%) and the EDL presented fibers of types I (0.59%), IC/IIC (2.63%), IIA (0.57%), IIAD (7.09%), IID (0.96%), 1mB (21.92%), and 1m (66.23%). The TA musc1e showed a predominance of fibers of types 1m (58.54%) and 1mB (31.26%), followed by fibers of types IIAD (4.86%), 1m (2.44%), IIA (1.71%), I (0.71%), and IC/IIC (0.46%). The GAS musc1e showed fibers of types 1m (55.08%), 1mB (18.41%), IID (2.78%), IIAD (12.36%), IIA (5.56%), IC/IIC (0.05%), and I (5.74%). Nevertheless, in the present study we conclude that the SOL muscle of C57BL6J mice had predomination of I e IIA type fibers. In EDL, TA and GAS muscle, the great number of fiber are classified as type 1m. The explanation for major type 1m fast fiber in EDL, TA and GAS muscle, is the little size of mice, that have fast movements / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Ana Maria Aparecida Guaraldo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:33:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Col_EduardoBugelli_M.pdf: 5733240 bytes, checksum: aee05491cef3869657ed5102019bd7bc (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: No século XX, com o surgimento da ciência de animais de laboratório, tomouse inegável que a qualidade do animal de experimentação exerce influência direta sobre a qualidade da pesquisa. A saúde do modelo é uma das variáveis que mais diretamente define a qualidade do mesmo. Cabe ao pesquisador validar os resultados de sua pesquisa e para tanto é preciso que tenha pleno conhecimento dos parasitos que acometem as colônias de animais de laboratório, para fins de monitoramento e controle, minimizando as interferências nos resultados experimentais.O presente trabalho produziu uma compilação de dados sobre os principais parasitos de camundongos de laboratório visando a criação de uma fonte de consulta e estudo para pesquisadores, técnicos em bioterismo e estudantes de graduação e pósgraduação.Reconhecendo que o ensino de Parasitologia tradicional confere algumas dificuldades específicas da disciplina ao aluno e professor, exigindo momentos de abstração de ambas as partes, o presente projeto trata do desenvolvimento de um software que funciona como ferramenta auxiliar ao professor, de onde é possível trazer ao aluno uma visão global e articulada dos fenômenos dinâmicos estudados.Foram criadas animações gráficas em ambiente tridimensional ilustrando o ciclo de vida e/ou morfologia dos parasitos: Cryptosporidium spp, Giardia muris, Tritrichomonas muris, Spironucleus muris, Myocoptes musculinus, Myobia musculi e Syphacia obvelata. Um menu interativo disponibiliza textos e imagens estáticas. A descrição do software criado, sua avaliação e perspectivas do uso na educação são aqui apresentadas / Abstract: In the 20th century, with the sprouting of laboratory animal science, it became undeniable that the quality of the experimentation animal exerts direct influence on the research quality. The model' s health is one of the variables that more direct1y defines its quality. It's up to the researcher to validate the results of his work and for that it is necessary to have full knowledge about the parasites that could affect the laboratory animal colonies, with the purpose of vigilance and control, minimizing the interferences in the experimental results.The present work produced a data compilation on the main parasites of laboratory mice, aiming at the creation of a study source for researchers, technicians and students.Recognizing that the traditional teaching in Parasitology confers some specific difficulties to the student and to the teacher, demanding abstraction moments of both parts, the present work deals with the development of a software that functions as auxiliary tool to the teacher, from which it is possible to bring to the student a global and articulated vision of the studied dynamic phenomena. Graphical animations in three-dimensional environment have been created, illustrating the life cyc1e or morphology of the parasites: Cryptosporidium parvum and C. muris, Giardia muris, Tritrichomonas muris, Spironucleus muris, Syphacia obvelata, Myocoptes musculinus and Myobia musculi.The description of the created software, its evaluation and use perspectives arepresented here / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Lea Rodrigues Simioni, Stephen Hyslo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:34:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DalBelo_CharistonAndre_D.pdf: 2559941 bytes, checksum: cef748cf80569cf363755443847527ff (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O veneno da serpente elapídica Micrurus dumerilii carinicauda apresenta uma ação neurotóxica caracterizada por bloqueio da resposta contrátil em preparação de ave e mamíferos in vitro (SERAFIM et al., 2002). Através de cromatografia em HPLC de coluna fase reversa o veneno foi fracionado e dentre os 22 picos obtidos foram caracterizados bioquímica e farmacologicamente somente aqueles que exibiram atividade neurotóxica do tipo bloqueadora neuromuscular. Assim, os picos que exibiram atividade neurotóxica foram a PLA2 MiDCAI correspondente ao pico 16 e duas isoformas (as subfrações F6 e F7) correspondentes aos picos 6 e 7 e que determinaram bloqueio neuromuscular em preparações de camundongo. A PLA2 MiDCAI, que possui massa molecular de 15.552 Da e um pI de 7.8 compartilha uma alta homologia com outras PLA2 neurotóxicas MICNI A (77,68%) e B (73,12%) do veneno da serpente (Naja nigricollis). Em preparação músculo biventer cevicis de pintainho MiDCAI (2.4 µM) induziu 50% bloqueio em 30 ± 5 min inibindo completamente a resposta contrátil a estímulos indiretos em 120 min de observação. Além disso, as contraturas determinadas pelo carbacol (8 mM) e KCl (20 mM) em preparação biventer cervicis de pintainho permaneceram inalteradas na vigência do bloqueio neuromuscular completo, sugerindo uma ação do tipo pré-sináptica. Na preparação nervo frênico-diafragma de camundongo MiDCAI (0.6, 1.2, 2.4 µM) induziu alteração trifásica na resposta contrátil. Além disso, o registro intracelular dos potenciais de placa terminal em miniatura (PPTM) e potenciais de placa terminal (PPT) mostrou também que a MiDCAI causou uma alteração trifásica na freqüência dos PPTM além de aumentar o conteúdo quântico do controle para 386 ± 12% aos 10 min de incubação (n=14, p<0.05). O registro extracelular do potencial de ação composto do nervo ciático de camundongo mostrou que esta neurotoxina induz um aumento na amplitude desses potenciais (30 ± 9%, 0.6 µM, p<0.05) semelhante ao induzido pela 3,4-diaminopiridina (3,4-DAP) 10 µM. Também ficou claro que o efeito facilitador induzido por esta PLA2 esteja relacionado ao bloqueio de canais de potássio como demonstrado pelo bloqueio de 31 ± 1% (2.4 µM, p<0.05) das correntes de potássio evocadas em neurônios do gânglio da raiz dorsal usando-se a técnica de patch-clamp. Já as subfrações ativas F6 e F7 possuem um peso molecular de aproximadamente 14 kDa como ficou demonstrado pela eletroforese em gel de poliacrilamida a 12,5 %. Em preparações neuromusculares de camundongo estas duas isoformas induziram bloqueio neuromuscular irreversível a estímulos elétricos indiretos. Assim, um bloqueio de 50% da resposta contrátil foi obtido em aproximadamente 18 min quando estas toxinas foram ensaiadas a 5 µg/ml promovendo bloqueio completo em aproximadamente 55 min. Sucessivas lavagens da preparação e a adição de neostigmina (6 µM) e 3,4-DAP (10 µM) foram ineficazes em reverter o bloqueio neuromuscular instalado. Também não houve alteração da resposta aos estímulos diretos nem redução da polaridade da membrana da fibra muscular quando estas toxinas foram ensaiadas na concentração de 5 mg/ml. Em conclusão, a PLA2 MiDCAI é uma nova neurotoxina pré-sináptica que induz alteração trifásica em preparações neuromusculares de camundongo promovendo uma facilitação inicial e fugaz possivelmente causada pelo bloqueio de canais de potássio no terminal nervoso motor. Já, as características bioquímicas assim como os efeitos neuromusculares desencadeados pelas subfrações F6 e F7 sugerem se tratar de duas isoformas curaremiméticas ou do tipo a-neurotoxinas, como demonstrado para outros venenos elapídicos / Abstract: We have isolated a new PLA2 (MiDCAI) and two curaremimetic isoforms (F6 and F7) from the venom of Micrurus dumerilii carinicauda. With a molecular mass of 15.552 Da, MiDCA1 shared high sequence homology with MICNI A and B from Naja nigricollis venom showing a sequential and structural homology of 77.68 and 73.12%, respectively. Pharmacological tests showed a concentration dependent effect on nerve evoked twitches in both mammal and avian preparations. On mouse phrenic-nerve diaphragm preparation MiDCAI (2.4 mM; n=6) caused triphasic changes in twitch tension. On chick preparations complete blockade of the twitches occurred after 120 min (2.4 mM; n=6, p<0.05), while contractures elicited by exogenous applied carbachol (8 mM) and KCl (20 mM) remained unaltered. Intracellular recordings of endplate potentials (EPPs) and miniature endplate potentials (MEPPs) from mouse diaphragm preparations revealed that MiDCAI increased quantal content to 386 ± 12% of control after 10 min, (n=14; p<0.05) and caused a triphasic change in the frequency of MEPPs. Extracellular recordings of mouse sciatic-nerve compound action potentials revealed that MiDCAI increased the amplitude of compound action potentials (30 ± 9%, 0.6 µM, p<0.05). Potassium currents elicited in freshly dissociated DRG neurones were significantly blocked by 31 ± 1% (p<0.05) of control by the addition of 2.4 µM into the recording chamber. In addition, isoforms F6 and F7 exhibit a molecular mass of aproximatelly14 kDa demonstrated by polyacrilamide gel electrophoresis. These isoforms (5 µg/ml) induced 50% blockade of indirect stimulation in phrenic nerve-diaphragm preparation, in approximately 18 min and complete blockade in 55 min. Nor successive washes nor neostigmine (6 mM) or 3,4-DAP (10 µM) were able to reverse the blockade. In addition, there is no depolarisation of muscle fibber when these isoforms were assayed at 5 µg/ml. In conclusion, MiDCAI is a new presynaptic PLA2 that produce triphasic alterations in mammal neuromuscular preparations and the falicitatory actions are possibly caused by blockade of an as yet unknown class of nerve-terminal potassium channels. The two isoforms F6 and F7 need further evaluation but the biochemical and pharmacological results obtained suggest certain similarity with other curariform neurotoxins or a-neurotoxins / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientadores: Valeria Helena Alves Cagnon Quitete, Sebastião Roberto Taboga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:17:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_DanieleLisboa_M.pdf: 6838619 bytes, checksum: 757bd71480f7f088eab489e2b5b53c9f (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O diabetes é uma doença de grande importância social, devido à alta incidência populacional e ao considerável índice de mortalidade. A deficiência de insulina pode levar à complicações em diversos sistemas do corpo, dentre eles, o sistema reprodutivo, envolvendo glândulas acessórias e gônadas. Estudos revelaram que a insulina atua simultaneamente à testosterona durante o processo de manutenção do estado funcional prostático, entretanto não há informações sobre a ação da insulina no tecido estromal. O presente trabalho objetivou caracterizar histoquímica e ultra-estruturalmente o estroma prostático de camundongos espontaneamente diabéticos. Três grupos experimentais foram considerados: Grupo l-animais controles, Grupo U - animais NOD diabéticos negativos e Grupo III - animais NOD diabéticos positivos. A glicemia foi determinada através de fita reagente colocada em contato com a urina dos animais. Após 12 dias da constatação do diabetes no grupo lU, a próstata ventral foi removida fixada em Karnovsky e processada para histoquímica e microscopia eletrônica de transmissão associadas à estereologia. Os resultados mostraram atrofia celular no epitélio secretor dos animais diabéticos, o que pode prejudicar o processo reprodutivo dos mesmos. O estado diabético promoveu alterações no microambiente prostático, tais como, desenvolvimento de neoplasias intraepiteliais, modificações no fenótipo da célula muscular e remodelação dos elementos fibrilares da matriz extracelular. Pode- se concluir que essas alterações afetam as interações epitélio-estromais, podendo favorecer o desenvolvimento de patologias prostáticas / Abstract: The diabetes causes alterations in various organic systems, encompassing the male accessory sex glands. The prostate is very important in the male reproductive process and it is a frequent target of malignant changes. The aim of this work was to demonstrate the histochemistry and ultrastructural alterations in the prostate of the animals submitted to experimental diabetes. It was attempted to associate this results to cellular events involved in prostatic diseases. Three groups of animals were utilized: control, non-obese diabetic positive mice (NOD+) and non-obese diabetic negative mice (NOD-). The diabetic status was characterized using Bio Bras reagents strips. Twelve days after the characterization of diabetic status the ventral lobe was collected, fixed in kamovsky solution and paraformaldehyde and processed for histochemistry and TEM associated to stereology. The results showed reduction of the epithelial and luminal areas and increasing of the stromal area with muscular layer hypertrophy and collagen and reticular fibers in the prostatic gland. Also, it was characterized development of prostatic intraepithelial neoplasia, inflammatory process and dilation of the organelles involved in the secretory process. Then, it was conc1uded that the diabetes besides damaging the reproductive process, affect the glandular homeostasis favoring the development of prostatic pathologies / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Julia Keiko Sakurada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T17:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_DelmaPegolo_M.pdf: 2384507 bytes, checksum: c51a6c07f4248e1558d20662c49bc7f1 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Experimentos realizados por ASSIS (1997), com camundongos scm mostraram que, a susceptibilidade desse animal ao Trypanosoma cruzi, era revertida através da repopulação com as células esplênicas da linhagem congênica BALB/c, e que os anticorpos anti- T cruzi transferidos passivamente, controlavam apenas a parasitemia, demonstrando a importância desse modelo experimental, nos estudos das funções dos linfócitos isoladamente na infecção pelo Trypanosoma cruzi. No presente trabalho procuramos investigar, nos camundongos scm o mecanismo de indução da resistência ao parasita, utilizando-se o método de repopulação com os linfócitos T e de suas subpopulações, com o sentido de elucidar o papel dos linfócitos T e de ambas subpopulações, na regulação da infecção. Os resultados revelaram que, a susceptibilidade dos camundongos scm à infeçcão pelo Trypanosoma cruzi não está correlacionada com a inibição da produção de IFN-y e de NO, apontando a participação dos macrófagos e das células NK na fase inicial da infecção. A análise do papel dos linfócitos B e T na fase aguda da infecção provaram que, apenas os linfócitos T foram efetivos, na indução da resistência à infecção. Os estudos realizados com as subpopulações de linfócitos T evideciaram que, os linfócitos T CD4+ controlam a parasitemia com maior eficiência do que os linfócitos T CD8+. Quanto a evolução dos parasitas circulantes, as duas subpopulações apresentaram cinéticas e mecanismos distintos de controle intracelular do parasita. A eficiência no controle da infecção foi observada, quando as duas subpopulações foram associadas. A estimulação "in vitro" das células esplênicas com o Trypanosoma cruzi, demonstrou que os linfócitos T CD4+ apresentaram resposta proliferativa, enquanto que os linfócitos T CD8+ não foram estimulados. No 14° dia após a infecção, houve inibição da resposta proliferativa dos linfócitos T CD4+ e resposta proliferativa dos linfócitos T CD8+. Essas células estimuladas foram capazes de produzir IFN-y. Esses resultados indicam que, os linfócitos T CD4+ foram ativados policlonalmente, enquanto os linfócitos T CD8+ foram ativados especificamente. As citocinas liberadas pelas células T CD4+ são importantes na regulação da função efetora dos linfócitos T CD8+ e dos macrófagos, sugerindo ainda que os linfócitos T CD8+ inibem a ativação policlonal dos linfócitos T CD4+ / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas