Orientador: Antonio Carlos Corsini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T21:11:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_OdeteLimaPimentade_M.pdf: 8042024 bytes, checksum: 2b2f255ad0a7822fdfcb4286336ff6df (MD5) Previous issue date: 1982 / Resumo: O presente trabalho compreende o estudo das alterações morfológicas e funcionais desenvolvidas principalmente no sistema imune dos camundongos (CBA/H x 'C IND. 57¿B1/10)F1 durante a fase aguda e crônica da infecção pelo T. cruzi, cepa Y. Seu objetivo principal foi o de conhecer pelo menos em parte, o comportamento imunbiológico destes animais em ambas as fases da infecção, uma vez que eles apresentam longa sobravida, e estabelecer um modelo experimental que possibilite a investigação dos mecanismos básicos, que uma vez desencadeados ocasionam a doença. Os resultados obtidos permitem concluir: 1- As raças de camundongo 'C IND. 3¿H/HeJ, CBA/H, 'C IND. 57¿B1/10 e (CBA/H x 'C IND. 57¿B1/10)F1 apresentam,em ordem decrescente, diferentes graus de susceptibilidade à infecção pelo T. cruzi. 2- A resistência dos camundongos híbridos é dependente do número de parasitas inoculados. Os animais são susceptíveis à inóculos contnedo ¿10 POT. 4¿ ou mais tripomastigotas. Inóculos menores, embora causem profundas alterações no sistema imune destes camundongos, não são fatais, pois estas regridem em um mês de infecção. 3- Na fase inicial da infecção ocorre m aumento da resposta imune humoral primária à hemácia de carneiro (HC), medida pelo número de células formadoras de placas (CFP) seguida de posterios supressão desta resposta, a partir do 2 dia de infacção ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores : Antonio Carlos Corsini, Marcos Garcia Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T23:11:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SteliniJunior_Arnaldo_M.pdf: 2547726 bytes, checksum: 723e203abc6eb2c0675a0e5058f15ea3 (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Resumo: A imunidade celular é imprescindível na modulação da resposta primária de murinos, diante de uma infecção por T. cruzi. 2. A imunidade humoral não restaura em camundongos exauridos de linfócitos T 'F IND. 1'B) a resistência de seus originadores 'F IND. 1', em que pese o eficiente controle da parasitemia durante a fase aguda da infecção. 3. A memória imunológica, na infecção chagásica experimental em camundongos, está relacionada aos linfócitos tímicos dependentes. 4. A imunidade celular é fator determinante da resistência de camundongos infectados por T. cruzi, durante a fase aguda, além de sua possível participação na anticorpogênese / Abstract: Not informed. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Se estima que la enfermedad de Chagas, producida por Trypanosoma cruzi, afecta a más de ocho millones de personas en la actualidad, principalmente en Latinoamérica. En Chile, el área endémica se extiende desde la Región de Arica hasta la Región de O’Higgins, resaltando la Región de Coquimbo por un alto reporte de triatominos. El parásito infecta a mamíferos, destacándose como reservorio doméstico el perro (Canis lupus familiaris). En Chile existen pocos estudios recientes sobre prevalencia en perros y ninguno en carga parasitaria, por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar la infección por T. cruzi en perros de sectores rurales de la Región de Coquimbo, Chile, utilizando PCR en tiempo real para su cuantificación. Se dispuso de 380 muestras de sangre de perros muestreados en el año 2015 de ocho poblados rurales de la Región de Coquimbo. El parásito fue detectado en 29 de las 380 muestras (7,6% de infección) y dentro de las muestras positivas, todas tuvieron menos de 1 parásito equivalente/mL. Si bien las cargas parasitarias fueron bajas, el nivel de positividad en los perros indica que T. cruzi circula en sectores rurales cercanos al hombre. No se encontraron diferencias según edad, condición corporal, provincia o sexo respecto al estatus de infección. Respecto a las cargas parasitarias se encontró lo mismo, a excepción del sexo donde si hubo diferencias indicando que las cargas parasitarias en hembras fueron mayores. Los perros de este estudio fueron infectados después de la interrupción vectorial declarada en 1999, y existe cierto riesgo de que la transmisión haya sido vectorial. Es por esto, que se recomienda mantener a los perros dentro o fuera del hogar, pero no en ambos espacios. / It is estimated that Chagas disease, produced by Trypanosoma cruzi, affects more than eight million people today, mainly in Latin America. In Chile, the endemic area extends from the Arica Region to the O'Higgins Region, highlighting the Coquimbo Region due to a high report of triatomines. The parasite infects mammals, with the dog (Canis lupus familiaris) standing out as a domestic reservoir. In Chile there are few recent studies on prevalence in dogs and none in parasite load, therefore, the objective of this study was to evaluate T. cruzi infection in dogs from rural areas of the Region of Coquimbo, Chile, using real time PCR for its quantification. There were 380 blood samples of canines sampled in 2015 from eight rural villages in the Coquimbo Region. Of the 380 samples, the parasite was detected in 29 (7.6% of infection) and within the positive samples, all had less than 1 equivalent parasite / mL. Although parasitic loads were low, the level of positivity in dogs indicates that T. cruzi circulates in rural areas near human settlements. No differences were found according to age, body condition, province or sex concerning the infection status. Regarding parasitic loads, the same was found, except for sex where there were differences indicating that parasitic loads in females were higher. The dogs in this study were infected after the vectorial interruption declared in 1999, and there is some risk that the transmission has been vectorial. This is why it is recommended to keep dogs inside or outside the home, but not in both spaces. / CONICYT-FONDECYT 1140650, 1180940, 3170799

Shelter dog populations in the United States are poorly quantified and characterized, but may be effective targets for measuring the occurrence of select diseases affecting animal and human health. Dogs in this population may have increased risk for disease due to intrinsic and extrinsic risk factors. Accurate estimates of disease in this population require sound sampling strategies within a comprehensive sampling frame. Knowledge of the prevalence of disease in the Mississippi shelter dog population is important for diagnostic test interpretation, shelter allocation of resources, and public health risk assessment. A serum bank provides a valuable resource to investigate both zoonotic diseases in which dogs are the primary reservoir, such as canine brucellosis, and for diseases where dogs may be effective sentinels for exposure risk, such as American trypanosomiasis. Implications of this research extend beyond Mississippi through the frequent movement of shelter dogs to adoption centers across the United States.

Chagas disease is one of the most serious parasitic diseases in Latin America, with social and economic impact that far outweigh the combined effects of other parasitic diseases such as malaria, leishmaniasis and schistosomiasis. Chagas´ disease has two well-defined phases: acute and chronic phase. The acute phase lasts approximately two to three months. After this phase, the individual enters an asymptomatic state, which characterizes the early chronic phase. In the chronic phase of the disease, the destruction of enteric nervous system (ENS) components leads to the development of megacolon. The megacolon is characterized by colon dilatation associated with an inflammatory infiltrate which is the main cause of enteric neurons destruction. These neurons, when suffer some aggression, may exhibit a regeneration process. Knowing the existence of various types of enteric neurons with different functions, this study aimed to evaluate the detailed regeneration process of ENS neuronal subclasses from chagasic patients with megacolon and non-infected individuals. For this, we used a marker of neuronal regeneration (GAP-43) associated with a pan-neuronal marker (Peripherin) and various neuropeptides markers (cChat, substance P, neuropeptide Y, VIP and NOS). Thus, to assess the ability of various subclasses of neuronal regeneration, we verified that the levels of regeneration cChat, substance P and neuropeptide Y are similar in Chagas´ patients and non-infected individuals. However, VIP and NOS neuronal regeneration levels are increased in chagasic patients when compared to non-infected individuals. We believe that the increase in regeneration rate of these neurons may be a consequence of the selective neuronal destruction, representing an attempt to replenish neuronal classes most affected. / A doença de Chagas é uma das doenças parasitárias mais graves da América Latina, com impacto social e econômico que muito superam os efeitos combinados de outras doenças parasitárias, como malária, leishmaniose e esquistossomose. A doença de Chagas apresenta duas fases bem definidas: a fase aguda e a fase crônica. A fase aguda tem duração de aproximadamente dois ou três meses. Após esta fase, o individuo entra em um estado assintomático, o que caracteriza o início da fase crônica. Na fase crônica da doença, a destruição de componentes do sistema nervoso entérico (SNE) leva ao desenvolvimento do megacólon. O megacólon é caracterizado pela dilatação do cólon associada a um infiltrado inflamatório que é a principal causa da destruição de neurônios entéricos. Estes neurônios, quando sofrem alguma agressão, podem apresentar um processo de regeneração. Sabendo da existência de vários tipos de neurônios entéricos com diferentes funções, este trabalho teve como objetivo a avaliação detalhada do processo de regeneração das subclasses neuronais do SNE de pacientes chagásicos portadores de megacólon e de indivíduos não infectados. Para isso, utilizamos um marcador de regeneração de neurônios e terminações nervosas (GAP-43) associado com um marcador pan-neuronal (Peripherina) e com marcadores de vários neuropeptídeos (cChat, substância P, neuropeptídeo Y, VIP e NOS). Desta forma, ao avaliar a capacidade de regeneração das várias subclasses neuronais, aferimos que os níveis de regeneração de cChat, substância P e neuropeptídeo Y são semelhantes em pacientes chagásicos e indivíduos não infectados. No entanto, a regeneração de neurônios positivos para VIP e NOS estão aumentados em pacientes chagásicos em comparação com indivíduos não infectados. Acreditamos que o aumento na taxa de regeneração desses neurônios seja consequência da destruição seletiva desses tipos neuronais, representando uma tentativa do organismo de repor classes neuronais mais lesadas. / Mestre em Ciências da Saúde

Introdução: A DCh (doença de Chagas) é uma doença negligenciada, com evolução para formas graves em 30% dos casos. No passado, era restrita à América Latina, entretanto, nas últimas décadas, o fenômeno migratório modificou o perfil epidemiológico, globalizando a doença. Inegáveis avanços aconteceram no Brasil, nas últimas décadas, mesmo assim, restam aproximadamente 3 milhões de pacientes. Desigualdades regionais são encontradas, com indicadores desfavoráveis na região Nordeste, relacionados não só ao predomínio de casos em crianças, identificados por avaliação sorológica, mas também pelo número de mortes relacionado à doença. Na fase crônica, amplo espectro de apresentações pode ser encontrado, variando desde a forma indeterminada, com favorável evolução, até pacientes com grave envolvimento cardíaco e alta mortalidade. Diante da apresentação heterogênea, a predição do risco de evolução e morte na DCH continua sendo um grande desafio. Maior ainda é a identificação de fatores determinantes, sobretudo do tipo de acometimento cardíaco. Assim, é possível que marcadores genéticos possam contribuir efetivamente, nesse cenário. O valor dos polimorfismos nos genes do fator de necrose tumoral (TNF) e da enzima conversora da angiotensina (ECA) na doença de Chagas é controverso. Objetivo: avaliar se os polimorfismos da I/D da ECA e do TNF-308 são marcadores de risco para a ocorrência de Insuficiência cardíaca na cardiopatia chagásica crônica (CCC), em população do Nordeste brasileiro. Material e métodos: realizado estudo tipo caso-controle. Foram analisados 201 pacientes portadores de T. cruzi + classificados em estágios, de acordo com a Diretriz Latino Americana para Cardiopatia Chagásica - Sociedade Brasileira de Cardiologia. Foram incluídos 99 pacientes em estágio C com presença de disfunção ventricular, definida por fração de ejeção do ventrículo esquerdo menor que 50% e sintomas prévios ou atuais de IC e 102 em estágio A, pacientes assintomáticos, com eletrocardiograma e ecocardiograma normais. Foram excluídos portadores de manifestação digestiva. Analisaram-se os polimorfismos da I/D da ECA e do TNF-308. Resultados: o perfil geral da população estudada apresenta pacientes naturais de estados do Nordeste brasileiro, com 81,1% do estado de Pernambuco, com baixos indicadores de escolaridade (frequência à escola de até 4 anos: 52,7% e renda familiar de até 1 salário mínimo: 64,7%). Há predominância feminina (64%), com igualdade entre grupos (p=0,3). Idade média de 55 anos, sendo mais jovens no estágio A (idade média: 51 anos) (p=0,001). A hipertensão arterial sistêmica esteve presente em 40% da população, com discreto predomínio entre pacientes do estágio C (p=0,05), e a Diabetes esteve presente em 8%, sem diferença entre os grupos (p=0,5). A fração de ejeção do ventrículo esquerdo média do estágio C foi 38±9% e de 67±5% no estágio A. Na avaliação de associação entre os genótipos dos polimorfismos TNF-308 e I/D do gene da ECA e as distintas formas clínicas na DCh foi encontrada associação entre o genótipo II no polimorfismo da ECA e a permanência no estágio A. O padrão não permaneceu quando a avaliação do OR foi ajustada para sexo, idade e uso de benznidazol e também no estudo por alelos, evidenciando ausência de associação entre todos os polimorfismos estudados. Conclusão: os polimorfismos TNF-308 e I/D do gene da ECA pesquisados não se constituíram em marcadores de risco para o desenvolvimento de CCC grave / Intoduction: Chagas disease (CD) is a neglected disease, with progression to severe forms in 30% of cases. In the past, it was restricted to Latin America. However, in recent decades, the phenomenon of migration has led to its epidemiological profile having changed and the disease is now a global one. Despite undeniable advances having taken place in Brazil in recent decades, there remain close to 3 million cases. Regional inequalities are found including unfavorable indicators in the Northeast which are not only about the predominance of cases in children, identified by serological evaluation, but also the number of deaths related to CD. In the chronic phase, a broad spectrum of presentations can be found, ranging from the indeterminate form, with favorable evolution, to patients with severe cardiac involvement and high mortality. Given the heterogeneous presentation, predictions on the risk of progression and death due to CD remain very challenging. Greater still is the identification of their determining factors, particularly as to the type of cardiac involvement. Thus, it is possible that genetic markers may contribute effectively, given this situation. The value of polymorphisms in the genes of the tumor necrosis factor (TNF), and of the angiotensin converting enzyme (ACE) in Chagas\' disease is controversial. Objective: To assess whether the I/D polymorphisms of ACE and TNF-308 are risk factors for the occurrence of heart failure (HF) in chronic Chagas cardiomyopathy (CCC), in the population of Northeast Brazil. Materials and methods: A case-control study was conducted. 201 patients with T. cruzi + classified in stages, in accordance with the Latin American guideline for Chagas cardiopathy - Brazilian Society of Cardiology, were analyzed. These included 99 patients in stage C (presence of ventricular dysfunction (defined as the ejection fraction of the left ventricle being less than 50%) and previous or current symptoms of HF and 102 patients in stage A (asymptomatic patients) whose electrocardiograms and echocardiograms were normal. Those with digestive manifestation were excluded. The I/D polymorphisms of ACE and TNF-308 were analyzed. Results: The general profile of the population studied presents patients from states in the Northeast of Brazil of whom 81.6% are from the State of Pernambuco, and whose education indicators are low (4 years of elementary schooling: 52.7%) and whose family income is up to 1 minimum wage: 64.7%. Females predominate (64%), with equality between groups (p=0.3). Average age is 55 years and younger in Stage A (mean age: 51 years) (p=0.001). Systemic arterial hypertension was present in 40% of the population, with a slight predominance among patients in Stage C (p=0.05), and 8% had Diabetes, with no difference between groups (p=0.5). The mean ejection fraction of the left ventricular of Stage C patients was 38±9% and 67±5% in stage A patients. On evaluating the association between the genotypes of the I/D polymorphisms of TNF-308 and the ACE gene and the distinct clinical forms in CD, an association was found between genotype A in the polymorphism of ACE and permanence in Stage A. The pattern did not remain when the evaluation of OR was adjusted for sex, age and use of benznidazole, nor did it in the study by alleles, thus showing evidence of the absence of association between all of the polymorphisms studied. Conclusion: The TNF-308 polymorphisms and the I/D of the ACE gene surveyed were not found to be risk factors for the development of serious CCC

Introdução: A DCh (doença de Chagas) é uma doença negligenciada, com evolução para formas graves em 30% dos casos. No passado, era restrita à América Latina, entretanto, nas últimas décadas, o fenômeno migratório modificou o perfil epidemiológico, globalizando a doença. Inegáveis avanços aconteceram no Brasil, nas últimas décadas, mesmo assim, restam aproximadamente 3 milhões de pacientes. Desigualdades regionais são encontradas, com indicadores desfavoráveis na região Nordeste, relacionados não só ao predomínio de casos em crianças, identificados por avaliação sorológica, mas também pelo número de mortes relacionado à doença. Na fase crônica, amplo espectro de apresentações pode ser encontrado, variando desde a forma indeterminada, com favorável evolução, até pacientes com grave envolvimento cardíaco e alta mortalidade. Diante da apresentação heterogênea, a predição do risco de evolução e morte na DCH continua sendo um grande desafio. Maior ainda é a identificação de fatores determinantes, sobretudo do tipo de acometimento cardíaco. Assim, é possível que marcadores genéticos possam contribuir efetivamente, nesse cenário. O valor dos polimorfismos nos genes do fator de necrose tumoral (TNF) e da enzima conversora da angiotensina (ECA) na doença de Chagas é controverso. Objetivo: avaliar se os polimorfismos da I/D da ECA e do TNF-308 são marcadores de risco para a ocorrência de Insuficiência cardíaca na cardiopatia chagásica crônica (CCC), em população do Nordeste brasileiro. Material e métodos: realizado estudo tipo caso-controle. Foram analisados 201 pacientes portadores de T. cruzi + classificados em estágios, de acordo com a Diretriz Latino Americana para Cardiopatia Chagásica - Sociedade Brasileira de Cardiologia. Foram incluídos 99 pacientes em estágio C com presença de disfunção ventricular, definida por fração de ejeção do ventrículo esquerdo menor que 50% e sintomas prévios ou atuais de IC e 102 em estágio A, pacientes assintomáticos, com eletrocardiograma e ecocardiograma normais. Foram excluídos portadores de manifestação digestiva. Analisaram-se os polimorfismos da I/D da ECA e do TNF-308. Resultados: o perfil geral da população estudada apresenta pacientes naturais de estados do Nordeste brasileiro, com 81,1% do estado de Pernambuco, com baixos indicadores de escolaridade (frequência à escola de até 4 anos: 52,7% e renda familiar de até 1 salário mínimo: 64,7%). Há predominância feminina (64%), com igualdade entre grupos (p=0,3). Idade média de 55 anos, sendo mais jovens no estágio A (idade média: 51 anos) (p=0,001). A hipertensão arterial sistêmica esteve presente em 40% da população, com discreto predomínio entre pacientes do estágio C (p=0,05), e a Diabetes esteve presente em 8%, sem diferença entre os grupos (p=0,5). A fração de ejeção do ventrículo esquerdo média do estágio C foi 38±9% e de 67±5% no estágio A. Na avaliação de associação entre os genótipos dos polimorfismos TNF-308 e I/D do gene da ECA e as distintas formas clínicas na DCh foi encontrada associação entre o genótipo II no polimorfismo da ECA e a permanência no estágio A. O padrão não permaneceu quando a avaliação do OR foi ajustada para sexo, idade e uso de benznidazol e também no estudo por alelos, evidenciando ausência de associação entre todos os polimorfismos estudados. Conclusão: os polimorfismos TNF-308 e I/D do gene da ECA pesquisados não se constituíram em marcadores de risco para o desenvolvimento de CCC grave / Intoduction: Chagas disease (CD) is a neglected disease, with progression to severe forms in 30% of cases. In the past, it was restricted to Latin America. However, in recent decades, the phenomenon of migration has led to its epidemiological profile having changed and the disease is now a global one. Despite undeniable advances having taken place in Brazil in recent decades, there remain close to 3 million cases. Regional inequalities are found including unfavorable indicators in the Northeast which are not only about the predominance of cases in children, identified by serological evaluation, but also the number of deaths related to CD. In the chronic phase, a broad spectrum of presentations can be found, ranging from the indeterminate form, with favorable evolution, to patients with severe cardiac involvement and high mortality. Given the heterogeneous presentation, predictions on the risk of progression and death due to CD remain very challenging. Greater still is the identification of their determining factors, particularly as to the type of cardiac involvement. Thus, it is possible that genetic markers may contribute effectively, given this situation. The value of polymorphisms in the genes of the tumor necrosis factor (TNF), and of the angiotensin converting enzyme (ACE) in Chagas\' disease is controversial. Objective: To assess whether the I/D polymorphisms of ACE and TNF-308 are risk factors for the occurrence of heart failure (HF) in chronic Chagas cardiomyopathy (CCC), in the population of Northeast Brazil. Materials and methods: A case-control study was conducted. 201 patients with T. cruzi + classified in stages, in accordance with the Latin American guideline for Chagas cardiopathy - Brazilian Society of Cardiology, were analyzed. These included 99 patients in stage C (presence of ventricular dysfunction (defined as the ejection fraction of the left ventricle being less than 50%) and previous or current symptoms of HF and 102 patients in stage A (asymptomatic patients) whose electrocardiograms and echocardiograms were normal. Those with digestive manifestation were excluded. The I/D polymorphisms of ACE and TNF-308 were analyzed. Results: The general profile of the population studied presents patients from states in the Northeast of Brazil of whom 81.6% are from the State of Pernambuco, and whose education indicators are low (4 years of elementary schooling: 52.7%) and whose family income is up to 1 minimum wage: 64.7%. Females predominate (64%), with equality between groups (p=0.3). Average age is 55 years and younger in Stage A (mean age: 51 years) (p=0.001). Systemic arterial hypertension was present in 40% of the population, with a slight predominance among patients in Stage C (p=0.05), and 8% had Diabetes, with no difference between groups (p=0.5). The mean ejection fraction of the left ventricular of Stage C patients was 38±9% and 67±5% in stage A patients. On evaluating the association between the genotypes of the I/D polymorphisms of TNF-308 and the ACE gene and the distinct clinical forms in CD, an association was found between genotype A in the polymorphism of ACE and permanence in Stage A. The pattern did not remain when the evaluation of OR was adjusted for sex, age and use of benznidazole, nor did it in the study by alleles, thus showing evidence of the absence of association between all of the polymorphisms studied. Conclusion: The TNF-308 polymorphisms and the I/D of the ACE gene surveyed were not found to be risk factors for the development of serious CCC

A doença de Chagas é uma doença crônica causada pela infecção pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T.cruzi). A sua principal consequência clínica é o desenvolvimento da cardiomiopatia chagásica crônica (CCC), que acomete 30% dos pacientes. Não foi determinado um indicador de evolução para a CCC ou permanência na forma indeterminada assintomática da doença de Chagas. Diversos trabalhos têm mostrado alterações no perfil de expressão gênica e proteômica ocorridas na fase aguda e crônica da doença de Chagas experimental e humana. Tais alterações advêm da regulação estabelecida em diversos estágios da expressão gênica e podem ser fatores relevantes no prognóstico da doença. Neste contexto, os microRNAs (miRs), podem exercer uma importante função reguladora. Sua ação se dá pela associação a um RNA mensageiro (RNAm) alvo, inibindo sua tradução ou degradando este transcrito. Assim, a hipótese deste trabalho é a de que a infecção aguda por T. cruzi modula a expressão de miRs no miocárdio de camundongos. Foi avaliado por qRT-PCR o perfil de expressão de miRs 15, 30 e 45 dias após a infecção. O perfil de expressão de miRs resultante foi suficiente para segregar os grupos de acordo com o tempo da infecção. O número de miRs diferencialmente expressos aumentou com a progressão da infecção. Além disso, seis miRs tiveram sua expressão correlacionada à piora na parasitemia e intervalo QTc dos animais: miR-142-3p miR-142-5p, miR-145, miR-146b, miR-149 e miR-21. Análises de correlação realizadas com todos os miRs avaliados ressaltaram este mesmo grupo de miRs entre os mais significativamente correlacionados, além de outros 73 correlacionados com a parasitemia, 67 com o intervalo QTc e 16 com ambos os parâmetros simultaneamente. Nas análises in silico, TNF-alfa e ciclina-D1 foram moléculas nodais recorrentes nas redes criadas com alvos dos miRs diferencialmente expressos em todos os tempos avaliados. Na única rede criada com os miRs correlacionados às alterações na parasitemia e intervalo QTc, TNF-alfa, TGF-beta, Rac1 e Src foram as moléculas nodais. Este trabalho apresenta de maneira inédita o envolvimento dos miRs durante a infecção aguda por T. cruzi, proporcionando novas perspectivas em relação a potenciais ferramentas terapêuticas e prognósticas / Chagas disease is a chronic illness caused by infection with the protozoan Trypanosoma cruzi (T. cruzi). Its main clinical outcome is the development of chronic Chagas cardiomyopathy (CCC), which affects 30% of the patients. The factors that define the progression to CCC or maintenance in the asymptomatic indeterminate form of the disease are still poorly understood. Several studies have presented changes occurred in the gene and proteomic expression profiles in both acute and chronic phases of experimental and human Chagas disease. Such changes result from regulation established at different stages of gene expression and may be relevant for the disease prognosis. In this context, microRNAs (miRs) may play an important regulatory function. miRs act by association to a target messenger RNA (mRNA), inhibiting translation or degrading the transcript. Thus, our hypothesis is that acute infection by T. cruzi modulates the expression of microRNAs in the myocardium of mice. The miR expression profile was evaluated by qRT-PCR 15, 30 or 45 days after the infection. This profile was sufficient to segregate the samples according to the time of infection. The number of differentially expressed miRs was higher as the infection progressed. Moreover, six miRs had their expression correlated with worsening of parasitaemia and QTc interval: miR-142-3p miR-142- 5p, miR-145, miR-146b, miR-149 and miR-21. Secondary unbiased correlation analyses showed this cluster of miRs among the most significant and other 73 miRs correlated with parasitaemia, 67 with QTc and 16 with both parameters simultaneously. In silico target prediction analyses showed TNF-alfa and cyclin-D1 as recurrent nodal molecules of the networks created with miRs targets from all time points. The network generated with miRs correlated to changes in parasitaemia and QTc interval showed TNF-alfa, TGF-beta, Rac1 and Src as nodal molecules. This work points out for the first time the involvement of miRs in the acute infection by T. cruzi, providing new insights about potential diagnostic and prognostic tools

INTRODUÇÃO: A doença de Chagas tem uma alta prevalência no Brasil e América Latina. Dentre as miocardiopatias (MCP), é a que evolui com pior prognóstico. A identificação precoce de disfunção sistólica de uma MCP é fundamental para o início do tratamento, assim como sua definição etiológica, sendo o ecocardiograma um dos métodos diagnósticos mais importantes na prática clínica. No entanto, mesmo que a análise da função sistólica global do ventrículo esquerdo (VE) demonstre fração de ejeção preservada, é possível já estar ocorrendo alguma anormalidade contrátil, não detectada pelos exames de rotina. A nova ferramenta ecocardiográfica denominada speckle tracking permite a análise de múltiplos parâmetros que compõem a dinâmica de contração do VE (deslocamento, velocidade de deslocamento, strain, strain rate, rotação e torção), caracterizando de forma integral a função sistólica. Trata-se de um método sensível com potencial para se detectar lesão miocárdica incipiente e auxiliar na definição etiológica de uma MCP dilatada. Um estudo detalhado da mecânica de contração do VE em doença de Chagas, ao longo de toda sua evolução, nunca foi realizado antes. OBJETIVO: Comparar os múltiplos parâmetros obtidos por speckle tracking da dinâmica de contração do VE com controles, desde a forma indeterminada da doença de Chagas até as fases mais avançadas da disfunção sistólica. MÉTODO: No período de janeiro de 2010 a agosto de 2013 estudamos pacientes chagásicos divididos em 04 grupos: Ch1A, forma indeterminada; Ch1B, fração de ejeção normal (FE >= 0,55), mas com alteração no eletrocardiograma; Ch2, MCP chagásica com disfunção sistólica discreta a moderada (FEVE 0,55- 0,30) e Ch3, MCP com disfunção importante (FEVE < 0,30). Indivíduos normais e pacientes com MCP de outras etiologias também foram estudados para compor o grupo controle, sendo pareados pela FEVE. Todos os pacientes foram submetidos ao ecocardiograma convencional com aquisição de imagens para speckle tracking. As imagens foram avaliadas para determinação de parâmetros da dinâmica ventricular por observador experiente usando software específico. RESULTADOS: Um total de 131 pacientes foram incluídos, 47 (36%) deles alocados em grupos de chagásicos. Dezesseis indivíduos chagásicos eram homens (34%). A média de idade variou de 54 a 56 anos para os grupos chagásicos e 37 a 50 anos para os controles. A exequibilidade global para análise por técnica de speckle tracking foi de 97%. Foi encontrada diferença significativa na análise de velocidade longitudinal global com menores valores no grupo Ch1A em relação aos controles normais, C1 (Ch1A, 3,33 ± 0,44 cm/s vs C1, 4,44 ± 0,78 cm/s; p < 0,001). Foram observadas reduções de todos os parâmetros da mecânica de contração do VE em paralelo ao comprometimento sistólico, tanto para as análises globais, quanto para segmento-a-segmento, em pacientes chagásicos e com MCP de outras etiologias. Foi observado um aumento paradoxal do deslocamento longitudinal global no grupo com disfunção sistólica importante (Ch3, 6,48 ± 1,57 mm vs C3, 4,63 ± 1,60 mm; p = 0,01). Essa tendência foi acompanhada pelas observações de maiores valores de deslocamento radial global apical (Ch3, 2,49 ± 0,83 mm vs C3, 1,54 ± 1,18 mm; p = 0,04). Na análise segmentar, foram evidenciados piores valores de deslocamento radial, strain e strain rate radiais em segmentos classicamente acometidos pela doença de Chagas (paredes inferior e inferolateral) e paradoxal aumento de valores destes parâmetros em outros segmentos, como nas paredes septal e anterior. CONCLUSÃO: A técnica de ecocardiografia com speckle tracking demonstrou redução dos parâmetros da dinâmica ventricular de pacientes chagásicos e não chagásicos em paralelo com a redução da fração de ejeção do ventrículo esquerdo. Em comparação com pacientes com MCP não chagásica, os pacientes com doença de Chagas apresentaram redução de deslocamento longitudinal e radial, strain e strain rate radiais em segmentos das paredes inferior e inferolateral com aumento paradoxal de outros (septal e anterior), caracterizando uma dinâmica de contração vicariante peculiar a esta MCP. Por fim, pacientes chagásicos na forma indeterminada apresentaram menor velocidade de contração longitudinal em comparação aos controles normais, o que pode ser indício de uma lesão miocárdica incipiente / INTRODUCTION: Chagas disease has a high prevalence in Brazil and Latin America. Among the cardiomyopathies (CMP), it evolves with the worst prognosis. Early identification of a CMP systolic impairment is critical to treatment initiation as well as its etiologic definition, and echocardiogram is one of the most important diagnostic methods in clinical practice. However, even if global analysis of left ventricle (LV) systolic function discloses a preserved ejection fraction, an ongoing contractile abnormality is already possible, not detected by routine tests. A new echocardiographic tool called speckle tracking allows an analysis of multiple parameters that comprise LV contraction dynamics (displacement, displacement velocity, strain and strain rate, rotation and twist), fully characterizing LV systolic function. It is a sensitive method with the potential to detect incipient myocardial injury and help to define the etiology of a dilated CMP. A detailed study of LV contraction mechanics in Chagas disease, throughout its evolution, has never been done before. OBJECTIVE: To compare multiple parameters of LV dynamics contraction obtained by speckle tracking with controls, since the indeterminate form of Chagas disease until later stages of systolic dysfunction. METHODS: From January 2010 to August 2013, we studied patients with Chagas disease divided into 04 groups: Ch1A, indeterminate form; Ch1B, normal ejection fraction (EF >= 0.55), but with electrocardiogram abnormalities; Ch2, chagasic CMP with mild to moderate systolic dysfunction (LVEF 0.55-0.30) and Ch3, CMP with severe dysfunction (LVEF < 0.30). Normal individuals and patients with other etiologies of CMP were also studied to compose the control group, and were matched by LVEF. All patients underwent echocardiography with conventional imaging added with speckle tracking imaging acquisition. Images were assessed to determine the parameters of dynamic ventricular by an experienced observer using specific software. RESULTS: A total of 131 patients were included, 47 (36 %) of them allocated in groups of Chagas disease. Sixteen chagasic individuals were men (34 %). The mean age ranged from 54 to 56 years for chagasic groups and 37 to 50 years for controls. The overall feasibility for analysis by speckle tracking technique was 97%. Significant difference was found in the analysis of global longitudinal velocity with lower values in group Ch1A compared with normal controls, C1 (Ch1A, 3.33 ± 0.44 cm/s vs C1, 4.44 ± 0.78 cm/s; p < 0.001). We observed a reduction of all parameters of LV contraction mechanics parallel to systolic impairment, both for global as for segment-to-segment analyses, in chagasic patients and in CMP with other etiologies. We also observed a paradoxical increase in global longitudinal displacement in the group with severe systolic dysfunction (Ch3, 6.48 ± 1.57 mm vs C3, 4.63 ± 1.60 mm; p = 0.01). This trend was followed by observations of higher values of apical global radial displacement (Ch3, 2.49 ± 0.83 mm vs C3, 1.54 ± 1.18 mm; p = 0.04). In segmental analysis, we observed worse values of radial displacement as well as radial strain and strain rate in segments classically affected by Chagas disease (inferior and inferolateral walls) and paradoxical increase of values of these parameters in other segments, such as in septal and anterior wall. CONCLUSION: The technique of echocardiography with speckle tracking disclosed a decrease in ventricular chagasic and non-chagasic dynamic parameters in parallel with the reduction in the ejection fraction of the left ventricle. Compared with patients with non-chagasic CMP, patients with Chagas disease had reduced longitudinal and radial displacement, radial strain and strain rate of segments into inferior and inferolateral walls with paradoxical increase in others (septal and anterior), comprising a dynamic vicarious contraction peculiar to this CMP. Finally, chagasic patients in the indeterminate form had a lower longitudinal velocity compared with normal controls, which may indicate an incipient myocardial injury

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Chagas disease, an American trypanosomiasis caused by Trypanosoma cruzi, was discovered by Carlos Chagas in 1909, and presents a broad spectrum of clinical manifestations, including the acute and chronic phases. The latter is divided into three main forms: digestive, cardiac and indeterminate. The purposes of this study were to evaluate the immunoreactivity profile of recombinant peptides selected against purified human IgG from chronic chagas disease patients by Phage Display, to assess differential recognition patterns in the immune response among disease clinical forms, and to select mimotopes with potential use in diagnostics. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was conducted with all 50 clones obtained after four rounds of selection. The trials were performed with phages supernatant. In order to evaluate the specific antibody response, plaque reduction tests were performed with clones that showed better performance in ELISAs. ELISA tests showed that the immune profile of some clones suggested the tendency of patients with the indeterminate form to develop cardiac or digestive form. Phage display approach has generated specific mimotopes that present differential recognition patterns of the immune response between the cardiac and digestive clinical forms of Chagas disease, and these mimotopes may become potential targets for vaccine development and for differential diagnostics of clinical forms. / A doença de Chagas foi descoberta e descrita por Carlos Chagas em 1909, e representa uma importante doença parasitária crônica causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. Depois de adquirida, a tripanossomíase americana pode apresentar-se sob duas fases: aguda e crônica, sendo esta dividida em três formas principais: indeterminada, digestiva e cardíaca. Objetivamos avaliar o perfil imunorreativo de peptídeos recombinantes selecionados contra IgG humana purificada de pacientes com as formas cardíaca, digestiva e indeterminada da fase crônica da doença de Chagas por Phage Display, a fim de avaliar a possibilidade de um padrão diferenciado de resposta imunológica entre as três formas da doença e buscar clones com potencial diagnóstico. Os ELISAs foram realizados com todos os 50 clones distintos obtidos pelos quatro ciclos de seleção, utilizando-se sobrenadante dos fagos como antígenos no sistema de captura. Além disso, foi realizado teste de redução em placas com os clones com melhor desempenho de reatividade nos ELISAs, a fim de demonstrar a especificidade de ligação dos anticorpos com esses epítopos. Os testes realizados demonstraram que o perfil imunorreativo de alguns clones sugere a propensão de indivíduos portadores da forma indeterminada a evoluírem para a forma cardíaca ou digestiva da doença, além de demonstrarem clones potenciais para o diagnóstico diferencial entre as formas cardíaca e digestiva, bem como epítopos para detecção geral da doença de Chagas. / Mestre em Ciências da Saúde