Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2016. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-01-18T15:46:10Z No. of bitstreams: 1 TESE_AvaliaçãoTratamentoBenidazol.pdf: 2072475 bytes, checksum: e8946c895e79f2cec92bd67935900399 (MD5) / Approved for entry into archive by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2016-01-18T16:19:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE_AvaliaçãoTratamentoBenidazol.pdf: 2072475 bytes, checksum: e8946c895e79f2cec92bd67935900399 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-18T16:34:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_AvaliaçãoTratamentoBenidazol.pdf: 2072475 bytes, checksum: e8946c895e79f2cec92bd67935900399 (MD5) Previous issue date: 2016 / Estima-se que 7 a 8 milhões de indivíduos estejam infectados pelo Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas (DC) (W.H.O., 2014), em especial na América Latina, onde essa doença é endêmica (Schofield e Dias, 1999). Desde a descoberta da DC, em 1909 por Carlos Chagas, a heterogeneidade do parasito foi considerada um fator relacionado às diferentes formas clínicas da doença. A classificação dos subtipos do T. cruzi foi determinada conforme as características biológicas, parasitismo tecidual, morfologia, virulência e patogenicidade do parasito na infecção murina (Brener, 1973; Andrade, 1974). Sendo o T. cruzi foi agrupado em três fenótipos, denominados como Biodemas I, II e III (Andrade e Magalhães, 1997). De modo geral, o Biodema I, correspondente ao Zimodema Z2b, foi caracterizado por apresentar cepas predominantemente de forma fina e macrofagotrópica na fase inicial da infecção, com alta virulência com 100% de mortalidade em 12 dias, e pico de parasitemia e mortalidade entre o 7º e o 11º dia pós-infecção (d.p.i.). O Biodema II, correspondente ao Zimodema Z2, apresenta cepas de forma predominantemente larga, miotrópica, com tropismo pelo músculo cardíaco e taxa de multiplicação lenta, cujo pico de parasitemia ocorre de maneira irregular entre o 12º e o 20º d.p.i. Cepas pertencentes a este tipo de Biodema podem apresentar diferentes níveis de virulência. Já o Biodema III, correspondente ao Zimodema Z1, exibe cepas de forma predominantemente larga e miotrópica, com envolvimento de músculo esquelético, pico de parasitemia tardio entre o 25º e o 30º d.p.i. e baixa mortalidade aos 30 dias (Andrade e Magalhães, 1997). Posteriormente, o parasito foi agrupado em dois grupos principais denominados como T. cruzi I e T. cruzi II, que anteriormente se encaixavam na classificação como Biodema III (Zimodema Z1) e Biodema II (Zimodema Z2), respectivamente. As cepas híbridas e com caracterização incerta foram denominadas apenas como T. cruzi até a realização de novos estudos (Anonymous, 1999). Recentemente, as populações de T. cruzi foram reagrupadas, conforme a expressão fenotípica e as características moleculares, em unidade de tipagem (do inglês “Discrete Typing Units” - DTU), denominadas TcI, TcII, TcIII, TcIV, TcV e TcVI, as quais foram caracterizadas por marcadores genéticos (Zingales et al., 2009). Estudos geográficos e epidemiológicos apontam distribuições distintas dessas DTUs, sendo os TcI e TcII mais abrangentes, visto que o TcI é prevalente na América Central e na região norte do Brasil, e o TcII é encontrado predominantemente na América do Sul (Zingales et al., 2009). Essas distintas DTUs, aparentemente, apresentam diferentes padrões de tropismo e parasitismo tecidual (Vago et al., 2000). O padrão do parasitismo tecidual e o grau de resistência ao tratamento por sua vez tem relação com as propriedades biológicas do parasito, uma vez que de modo geral a infecção com o T. cruzi I e o T. cruzi II estão relacionadas com casos de cardiomiopatia chagásica crônica (CCC). Ainda, a DTU I foi considerada resistente frente ao único fármaco disponível comercialmente no Brasilpara o tratamento da DC, o Benznidazol (Bz). Por outro lado, o T. cruzi II foi considerado macrofagotrópico e parcialmente susceptível ao tratamento com Bz (Filardi e Brener, 1987; Toledo et al., 2003; Toledo et al., 2004). Em estudos clínicos randomizados, o tratamento com Bz na fase aguda favorece a redução da carga parasitária e sororeversão dos pacientes tratados (de Andrade et al., 1996; Coura et al., 1997; Sosa-Estani et al., 1998). Sugere-se que o tratamento etiológico com Bz deva ser iniciado nos estágios iniciais da DC, pois quando iniciado na fase aguda pode alcançar níveis de 70% de cura (Rodrigues Coura e de Castro, 2002). Outros trabalhos tem revelado que a intervenção com o tratamento de pacientes na forma indeterminada melhora o prognóstico da doença (Lana et al., 1992; Macchado-de-Assis et al., 2013). O Bz ativa a resposta imune inata com aumento dos níveis de monócitos, todavia com diminuição dos monócitos TNF-γ + e IL-12+ (Sathler-Avelar et al., 2009). Na resposta imune adaptativa, o tratamento com Bz favorece mecanismos imunomoduladores mediados por IL-10 produzido por linfócitos T CD4 e B, além de aumentar o número de células NK ativas no sangue periférico, que tem participação na produção e citocinas pró-inflamatórias e moduladoras (Sathler-Avelar et al., 2006). Isto demonstra a importância da inter-relação entre a resposta imune inata e adaptativa no controle da resposta imune exacerbada, que poderá acarretar na lesão tecidual (Sathler-Avelar et al., 2009). Por outro lado, os casos de falha terapêutica, aparentemente, dependem de mecanismos que interferem na expressão de genes relacionados à resistência de algumas cepas do parasito (Campos et al., 2014). Apesar de estar elucidado que o Bz alcança níveis de cura importantes nos pacientes tratados na fase aguda da DC, ainda se faz necessário compreender a participação das diferentes DTUs de T. cruzi na patogênese da doença, bem como elucidar as alterações imunológicas e histopatológicas cardíacas frente ao tratamento na infecção com cepas do T. cruzi que apresentam diferentes graus de susceptibilidade ao tratamento com Benznidazol. Portanto, neste trabalho avaliamos a infecção com duas cepas de DTUs distintas, a cepa Y, caracterizada como TcII e considerada parcialmente resistente ao tratamento com Bz no modelo murino e susceptível no modelo canino, e a cepa Colombiana, classificada como TcI e resistente à terapia com Bz nos modelos murino e canino (Filardi e Brener, 1987; Veloso et al., 2001; Guedes et al., 2002). _________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Trypanosoma cruzi infection may be caused by different strains of distinct discrete typing units (DTUs), characterized by different biological and genetic patterns, which result in variable clinical forms of chronic Chagas disease. These biological differences of the parasite are apparently related to the distinct patterns of resistance to the Benznidazole treatment, the only drug available for Chagas disease treatment in Brazil. In randomized clinical trials, Benznidazole treatment presents a higher cure rate in the acute phase, with reduction of the parasite load and negative seroreversion of treated and cured patients, but there are still questions about the immunopathological changes resulting from this treatment. This study evaluates the immune response and cardiac lesions in dogs experimentally infected with different strains of distincts T. cruzi DTUs that showing different degrees of susceptibility to treatment with Benznidazole, namely Y and Colombian from TcI and TcII DTU, respectively. For this, mongrel dogs were experimentally infected with 2000 Y or Colombian T. cruzi trypomastigotes and undergoing Benznidazole treatment at oral dose of 7 mg/kg, divised in two by day, for 45 days. The infection with the Y strain led to increased levels of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase, leucopoenia, thrombopoenia, inversion of the ratio of CD4+/CD8+ T-lymphocytes and alterations in monocyte number. In addition, Y strain infection stimulated the production of IFN-γ by CD4+ and CD8+ T-lymphocytes and IL-4 by CD8+ T-cells. In the chronic phase, significant heart inflammation and fibrosis were observed. During infection with the Colombian strain, increased levels of alanine aminotransferase, erythrocytes, haematocrit and haemoglobin were observed. In addition, CD8+ T-lymphocytes isolated from the peripheral blood produced higher levels of IL-4. The latter results suggests that during the acute phase, infection with the Colombian strain may remain unnoticed by circulating mononuclear cells. In the chronic phase, a significant increase in the number of inflammatory cells was detected in the right atrium, demonstrating that strains of different DTUs interact differently with the host. When was evaluated the Benznidazole treatment of dogs infected with the Y strain it was observed increase levels of alanine aminotransferase, urea and hemoglobin, lymphopenia, neutropenia, monocytopenia and inversion of the ratio of CD4+/CD8+ T-lymphocytes. The infection with the Y strain and Benznidazole treatment stimulated the production of IFN-γ and IL-4 by CD4+ T-lymphocytes. In dogs infected with the Colombian strain and Benznidazole treatment, it was observed increase of alanine aminotransferase and hemoglobin, and decrease the monocyte number. So the treatment in Colombian infection controlled the increased amount of red blood cells. Moreover, in chronic phase, dogs with Y and with Colombian strains infection and Benznidazole treatment do not showed significant difference in the number of inflammatory cells and collagen area in the right atrium compared to the not infected and treated group. Therefore, the Benznidazole treatment despite having changed some cell populations in peripheral blood, had significant participation for decrease the IgG level and the inflammation and cardiac fibrosis. So, in this work, the Y strain was apparently first recognized by the immune system, while the Colombian strain escaped from the immune response in the acute phase of Chagas disease, which would impact the progression of cardiomyopathy in the chronic phase. Moreover, the Benznidazole treatment in acute experimental infection controlled the cardiac damage in chronic phase.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T12:36:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 210227.pdf: 843615 bytes, checksum: 07c918de573264ba089f2ab656de136a (MD5) / O desequilíbrio entre os mecanismos que causam condições oxidativas e as defesas antioxidantes provoca uma variedade de mudanças fisiológicas, chamadas coletivamente de estresse oxidativo. A cardiopatia chagásica é uma patologia com características de inflamação crônica muito próxima a uma doença auto-imune que tem mecanismo de ação ainda obscuro. O objetivo deste trabalho foi analisar as enzimas antioxidantes nos eritrócitos de pacientes cardiopatas chagásicos crônicos puros, classificados em 4 grupos nomeados de I à IV (cada grupo contendo n=10), variando entre estes grupos o grau de comprometimento cardíaco, segundo classificação de Los Andes modificada. Cada um dos quatro grupos chagásicos foi igualado a indivíduos saudáveis pela idade, formando 4 grupos-controle, e ainda, um grupo V formado por 10 pacientes não chagásicos com insuficiência cardíaca de etiologia orovalvar com sobrecarga de pressão e volume, perfazendo um total de 90 pacientes. Foram examinadas as enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx), glutationa redutase (GR), glutationa S-transferase (GST) e ainda os tióis não proteicos (GSH), (GT) e (GSSG). As atividades da SOD, CAT, GR e os níveis de GT e GSSG essencialmente não apresentaram diferenças entre os grupos chagásicos. A concentração de GSH diminui com a progressão da doença e apresentou aumento em relação aos controles nos grupos I, II e III. As atividades da GST e GPx estiveram aumentadas no grupo III e diminuídas no grupo II e IV, indicando uma diminuição destes antioxidantes com a progressão da doença. O grupo V, exceção às atividades da SOD e da CAT que foram semelhantes, mostrou aumentos das enzimas em relação ao grupo IV, constituindo um comportamento diferenciado neste sentido. Esses resultados sugerem a existência de um quadro de estresse oxidativo com o aumento das condições oxidativas paralelamente à evolução da doença, ou seja, pacientes com grau mais elevado de acometimento cardíaco têm uma capacidade antioxidante diminuída, o que sugere uma perda grande das defesas antioxidantes. Os dados do presente trabalho têm grande importância quanto ao sistema antioxidante relacionado com os mecanismos de agressão do parasita nesta patologia crônica.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde. 2011. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-05-15T12:51:21Z No. of bitstreams: 1 2011_DaniellaBarretoSantana.pdf: 3986139 bytes, checksum: 8201a80a7497e3f87638051fcfee595e (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-15T13:47:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_DaniellaBarretoSantana.pdf: 3986139 bytes, checksum: 8201a80a7497e3f87638051fcfee595e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-15T13:47:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_DaniellaBarretoSantana.pdf: 3986139 bytes, checksum: 8201a80a7497e3f87638051fcfee595e (MD5) / Trypanosoma rangeli é um protozoário hemoflagelado parasita de triatomíneos e mamíferos, com a distribuição geográfica em vários países latino-americanos. Neste trabalho abordamos de três formas o estudo sobre o T. rangeli nas diferentes espécies de Rhodnius. Na primeira abordagem, estudamos a suscetibilidade e a competência vetorial das diferentes espécies de Rhodnius à cepa SC-58 de T. rangeli (genótipo KP1-), testando a hipótese de que essas espécies poderiam apresentar diferente susceptibilidade à cepa SC-58 devido a um mecanismo hipotético de co-evolução parasito-vetor; na segunda, analisamos o processo de penetração e adesão do T. rangeli nas glândulas salivares e morfogênese do T. rangeli em R. robustus; e na terceira, analisamos a influência da infecção por T. rangeli na biologia de algumas espécies de Rhodnius, testando a hipótese de que há diferença no ciclo biológico e comportamento alimentar dos espécimes infectados, quando comparados com os insetos não infectados. Na primeira abordagem, analisando-se a evolução da infecção por T. rangeli em 4 espécies de Rhodnius (R. neglectus, R. pictipes, R. robustus, R. nasutus), observou-se que a suscetibilidade (desenvolvimento no intestino, hemolinfa e glândula salivar) e o processo de transmissão deste protozoário foram maiores e mais eficientes em R. pictipes, reforçando a evidência relatada de que esses triatomíneos podem atuar como filtros biológicos na transmissão de populações geneticamente diferentes de T. rangeli. Na segunda abordagem, através das observações realizadas com Microscopia Eletrônica de Varredura e de Transmissão, observou-se que o fenômeno inicial de penetração e invasão nas glândulas salivares se daria por formas tripomastigotas e/ou epimastigotas. As micrografias mostraram várias formas de flagelados nas glândulas salivares – epimastigotas e tripomastigotas espalhadas na luz glandular. Finalmente, na terceira abordagem, comparando-se a duração do ciclo de vida, a taxa de mortalidade e o comportamento alimentar de R. neglectus, R. pictipes e R. robustus, observou-se que alguns parâmetros do comportamento alimentar como número de picadas, detecção do hospedeiro, número de interrupções e dejeções dos triatomíneos infectados foram modificados quando comparados com os espécimes não infectados. / Trypanosoma rangeli is a hemoflagellated protozoan, triatomine and mammals parasite, present in many Latin American countries. In this work we approach the study about T. rangeli and the different species of Rhodnius in three forms. On the first approach, we study the susceptibility and vector competence of different species of Rhodnius to the strain SC-58 of T. rangeli (KP1- genotype), testing the hypothesis that these species could present different susceptibility due to a hypothetical mechanism of co-evolution parasite-vector; on the second approach, we analyze the invasion process (attachment, adhesion) in salivary glands and morphogenesis of T. rangeli in R. robustus; and on the third, we analyze the influence of the infection by T. rangeli in biology of some species of Rhodnius, testing the hypothesis that there are differences on biological cycle and feeding behavior on the infected species, when compared to uninfected insects. On the first approach, analyzing the evolution of the infection by T. rangeli in species of Rhodnius (R. neglectus, R. pictipes, R. robustus, R. nasutus), we observed that susceptibility (thorough the intestine, haemolymph and salivary glands development) and the transmission process of this protozoan were larger and more efficient in R. pictipes, reinforcing the reported evidence that these triatomines may act as biological filters in transmission of genetically different populations of T. rangeli. On the second approach, from observations carry out with Transmission and Scanning Electronic Microscopy, it was observed that the initial phenomenon of attachment and invasion into salivary glands occurred by trypomastigote and/or epimastigote forms. The micrographics showed several forms of flagellated in salivary glands – epimastigotes and trypomastigotes spread on the gland lumen. Finally, on the third approach, comparing the duration of life cycle, mortality rate and feeding behavior of R. neglectus, R. pictipes and R. robustus, it was observed that some parameters of feeding behavior as number of bites, source host detection, number of interruptions and dejecting in the infected triatomines were modified when compared with those uninfected control individuals.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-07-29T13:45:26Z No. of bitstreams: 1 2013_DeboraTorresAlvesFigueiredo.pdf: 6275777 bytes, checksum: 517b44576fd1e1f2de64e008db5d0083 (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2013-08-06T20:23:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_DeboraTorresAlvesFigueiredo.pdf: 6275777 bytes, checksum: 517b44576fd1e1f2de64e008db5d0083 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T20:23:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_DeboraTorresAlvesFigueiredo.pdf: 6275777 bytes, checksum: 517b44576fd1e1f2de64e008db5d0083 (MD5) / A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanozoma cruzi, é um problema de saúde pública, principalmente na América Latina, e os tratamento; disponíveis são muitas vezes ineficazes, além de causar efeitos colaterais graves. O nosso grupo de pesquisadores tem como objetivo identificar e caracterizar proteases do parasito para a identificação de potenciais novos alvos terapêuticos. Neste trabalho, apresentamos um estudo preliminar sobre a função dos genes da dipepdil-peptidase 8 (dpp8tc) e da otubaina (otutc), uma serino e uma cisteíno protease de T. cruzi, respectivamente. A DPP8 é uma protease da família DPPIV, que é conhecida pela sua importante função de clivar ligações peptídicas com prolina na segunda posição. Estas peptidases são importantes no processamento e degradação de peptideos como hormônios e neuropeptídeos. A OTU pertence a família das enzimas deubiquitinantes, importantes na regulação de alguns genes relatados em vários processos biológicos, como ativação da resposta imune. A DPP8 e a OTU são expressos em T. cruzi e se apresentam em cópia única no genoma deste parasito, o que nos permitiu realizar o estudo, por meio de nocaute físico, da função dessas proteínas na viabilidade e no processo de infecção do protozoário. Assim, cassetes para a realização do nocaute foram construídos com o gene de neomicina-fosfotransferase (neo) flanqueado pelas regiões 5`UTR. e 3`UTR do gene dpp8tc ou otutc. Esses cassetes foram transfectados em parasitos epimastigotas da cepa CL-Brener, produzindo parasitos resistentes a G418. Algumas PC Rs foram realizadas a fim de se verificar a presença dos genes dpp8tc, otutc e neo no genoma dos parasitos nocauteados, assim como no genoma dos parasitos controle não transformados (selvagens), que confirmaram a presença de uma outra cópia no genoma. Além disso, outras PCRs confirmaram a correta inserção do cassete no local do gene de interesse, indicando a ocorrência de nocaute simples (de um único alelo), o que demonstrou a eficácia do protocolo. O efeito do nocaute simples dos genes foi analisado por meio da observação do crescimento in vitro, em que os parasitos simples mutantes para otutc cresceram a uma taxa 22,5% inferior que o selvagem, ao passo que essa taxa nos mutantes simples para dpp8tc foi 25% superior a do selvagem Os parasitos nocauteados foram ainda capazes de se diferenciar em tripomastigotas e desafiados a infectar células L6 de mioblastos de camundongos. Os mutantes para otutc foram capazes de infectar 1.65 e 3 vezes mais células em 3 e 24 horas de infecção, respectivamente, comparado ao selvagem, enquanto nos mutantes para dpp8tc este aumento foi de 1,76 e 1,65 a mais que o selvagem. O teste enzimático in vitro para DPP8 no substrato Gly-Pro-AMC demonstrou haver atividade enzimática de 165% nos mutantes para o gene dessa enzima, sendo esse valor superior ao apresentado pelo selvagem (100%). Os resultados obtidos no presente estudo são preliminares e apontam estratégias futuras de pesquisa, tal como a análise do nocaute duplo (em ambos os alelos) paia os genes dpp8tc e otutc e a infecção in vivo de forma a contribuir com o entendimento da função dessas proteínas no parasito. / Chagas disease, caused by the protozoan Tripanosoma cruzi. is a public health burden, mainly in Latin America since available treatments are often ineffective and cause severe side effects. The aim of our research team is to study parasite proteases as potential new therapeutic targets. In this work. we present a preliminary functional study of dipeptidyl-peptidase 8-like (dpp8tc) and otubain (otutc), a serine and a cysteine protease of T. cruzi. respectively. DPPs are prolyl oligopeptidase family members involved in hormone processing or inactivation in mammalians. Otu belong to the deubiquitylating enzymes (DUBs) family, important in gene regulation and reported in several biological processes such as immune response activation The dpp8tc and otutc are expressed in T. cruzi and is present as a single copy gene in the genome, which allows us to study the genes by knockout (KO), the role of these proteins in the parasite viability and infection process. The KO cassettes were constructed with neomycin phosphotransferase gene (neo) flanked by 5’UTR and 3’UTR of dpp8tc or otutc. They were transfected into epimastigotes (CL-Brener strain) producing G418-resistant parasites. Several PCRs were carried out to verify the presence of dpp8tc otutc. and neo in the KO and wild type (WT) parasite genome. In addition, other PCR confirmed the correct insertion of the cassette in place of the target gene, in a single-allele knockout, demonstrating the efficacy of the protocol. The effect of the single-allele knockout was analyzed by observation of in vitro growth, in which the single mutants for otutc grew at a rate 22.5% lower than the WT, whereas the rate for the dpp8tc single mutants was 25% higher than WT. The mutants could differentiate into trypomastigotes and when challenged to infect L6 cells of mice myoblasts, the otutc mutants were able to infect 165% and 290.57% of cells. 3 and 24 hours after infection, respectively, while WT was able to infect 100%. These values for the dpp8tc mutants were 176.89% and 165.21%. 3 and 24 hours after infection, respectively. The in vitro enzymatic test for DPP8 on the substrate Gly-Pro-AMC demonstrated enzymatic activity of 165% in the mutants for the gene of this enzyme, when compared to wild type, this value being higher than drat presented by the WT (100%). The results obtained in this study are preliminary and suggest future research strategies, such as the analysis of double-allele knockout for the genes dpp8tc and otutc as well as in vivo mice infection in order to contribute to the understanding of the hole of these proteins in T. cruzi.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2016. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Foram disponibilizados Resumo, Discussão e Referências bibliográficas. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-12T15:47:07Z No. of bitstreams: 1 2016_DivaBernardesVargas_Parcial.pdf: 1843805 bytes, checksum: 2be8f425194b61734dac608dc29fcd76 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-11-07T18:20:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_DivaBernardesVargas_Parcial.pdf: 1843805 bytes, checksum: 2be8f425194b61734dac608dc29fcd76 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-07T18:20:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_DivaBernardesVargas_Parcial.pdf: 1843805 bytes, checksum: 2be8f425194b61734dac608dc29fcd76 (MD5) / Introdução: Investigou-se possível desenervação parassimpática ocular na doença de Chagas crônica. Sabe-se que muitas manifestações da doença de Chagas são por danos ao sistema nervoso parassimpático cardíaco e mioentérico. Considerando que a inervação efetora pupilar é feita pelo sistema nervoso simpático e parassimpático e que a pressão intraocular é em parte influenciada por eles, realizaram-se medidas pupilares e da pressão intraocular para investigar danos ao sistema colinérgico ocular em pacientes com doença de Chagas. Métodos: Foram constituídos 02 grupos, sendo um grupo com 80 pacientes chagásicos e um grupo comparativo com 76 participantes saudáveis. Realizou-se pupilometria, teste de hipersensibilidade a pilocarpina 0,125% e medida da pressão intraocular (PIO). Mediu-se o diâmetro basal da pupila (DBP), a amplitude de constrição pupilar absoluta (ACA) e relativa (ACR) e o diâmetro pupilar após pilocarpina 0,125%. Pesquisou-se anisocoria e analisou-se a associação dos parâmetros com o tempo de diagnóstico e com a realização ou não do tratamento específico. Resultados: A prevalência de anisocoria foi significativamente (p < 0,01) maior em pacientes chagásicos do que em não chagásicos. Não houve associação entre as medidas pupilares e o tempo de diagnóstico ou realização de tratamento específico. Os pacientes chagásicos apresentaram valor médio do DBP (p < 0,01), valor médio do diâmetro fotópico (p = 0,02) e valor médio da ACA (p < 0,01) significativamente menores do que os não chagásicos. A ACR não difere significativamente nos chagásicos dos não chagásicos (p = 0,39). A hipersensibilidade ocorreu em 10% dos chagásicos no olho direito e em 2,5% no olho esquerdo. O valor médio da PIO teve significância marginal (p = 0,06) entre os pacientes chagásicos e o grupo comparativo. Conclusão: Os dados sugerem que a análise pupilométrica e o teste de sensibilidade à pilocarpina podem ser um marcador para distinguir os pacientes com doença de Chagas com disfunção colinérgica. Tais medidas indicam que danos parassimpáticos em pacientes com doença de Chagas podem ocorrer no coração, no intestino, mas também no olho. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: We investigated possible ocular parasympathetic denervation in chronic Chagas disease. It is known that many Chagas' disease manifestations are due to damage to heart and myenteric parasympathetic nervous system. Whereas the efferent innervation of the pupil is made by sympathetic and parasympathetic, the nervous system and intraocular pressure is largely influenced by this system, we performed pupillary and intraocular pressure measurements to check possible damage to the ocular cholinergic system in Chagas' disease. Methods: We formed 02 groups, one group of 80 patients with Chagas disease and 01 comparison group of 76 healthy participants. Thus, we performed pupillometry, proceeded the hypersensitivity test to pilocarpine 0.125% and measurement of intraocular pressure (IOP) in individuals with and without Chagas' disease. We measured the scotopic pupil diameter (BPD), the absolute (ACA) and relative (ACR) pupillary constriction amplitude, pupil diameter after pilocarpine 0.125% and IOP. We searched for anisocoria and analyzed the association of the parameters with time from diagnosis and the realization or not of specific treatment. Results: The prevalence of anisocoria was significantly (p < 0.01) higher in patients with Chagas' disease than in non-chagasic. There was no association between pupillary measures and disease time from diagnose or anti-trypanosoma treatment duration. Chagasic patients had mean value of BPD (p < 0.01), mean value of photopic diameter (p = 0.02) and ACA mean value (p < 0.01) significantly lower than the non-chagasic individuals. The ACR does not differ significantly from chagasic to non-Chagas (p = 0,39). Hypersensitivity occurred in 10% of Chagas disease in the right eye and 2.5% in the left eye. The mean IOP had marginal significance (p = 0,06) between patients with Chagas disease and the comparative group. Conclusion: pupillometric analysis and pilocarpine hypersensitivity test may be a marker for distinguishing chagasic patients with cholinergic dysfunction. Such measurements indicate that parasympathetic damage in patients with Chagas' disease can occur not only in the heart, in the intestine and peripheral nervous system, but also in the eye.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Medicina Especializada, Núcleo de Medicina Tropical e Nutrição, 1983. / Submitted by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-11-19T14:09:21Z No. of bitstreams: 1 1983_MariaDasDoresMedina-Lopes.pdf: 3019387 bytes, checksum: ed2ef11b3ed2a1f1a5d8487e3b35b683 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2015-11-25T13:40:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 1983_MariaDasDoresMedina-Lopes.pdf: 3019387 bytes, checksum: ed2ef11b3ed2a1f1a5d8487e3b35b683 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-25T13:40:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1983_MariaDasDoresMedina-Lopes.pdf: 3019387 bytes, checksum: ed2ef11b3ed2a1f1a5d8487e3b35b683 (MD5) / O objetivo desta tese é estudar a transmissão materno-infantil da Doença de Chagas no Distrito Federal. O trabalho foi dividido em duas partes: A- Estudo clínico epidemiológico e B- Estudo experimental. A - O estudo clinico epidemiológico, realizado no Hospital Regional da Asa Sul, constou de: a) inquérito sorológico, b) exame de mulheres chagásicas, c) exame de crianças de mães chagásicas, d) exame de natimortos e neomortos, e) exame de placentas e f) acompanhamento de chagásica na fase aguda. a) Inquérito sorológico através da reação de Machado Guerreiro em 1737 gestantes, dentre 306 8 atendidas no período de um ano, com 5,9% de reações positivas. b) Cento e quinze gestantes, com três reações sorológicas positivas para Doença de Chagas, foram acompanhadas e inquiridas sobre a evolução de suas 437 gestações anteriores (média de 4,8 por mulher). A frequência de abortamento (12,-7%), partos prematuros (6,4%) e natimortalidade (22,58:1000) neste grupo foi igual a da população em geral. Entretanto, a Doença de Chagas Congênita foi causa de nati mortalidade, prematuridade e baixo peso ao nascer. Três mulheres transmitiram congenitamente a infecção: duas aos conceptos e outra â placenta. c) De 243 filhos resultantes de 552 gestações das 115 chagásicas, 105 foram pesquisadas parasitologicamente através do xenodiagnóstico e/ou do método de Strout modificado, dentro dos cinco primeiros dias de vida. Foi diagnosticada a Doença de Chagas Congênita em apenas um recém-nascido (1%). Em 83 que se encontravam em acompanhamento aos dois meses de idade foi detectada a fase aguda da Doença de Chagas em uma delas (1,2%). Esta criança tinha tido pesquisa negativa para T.cruzi ao nascer, através do método de Strout e pelo xenodiagnóstico. Sua placenta teve xenodiagnóstico negativo e exame histológico normal. Com um mês de vida a criança era clinicamente normal, morava em casa livre de triatomíneo, na periferia do Distrito Federal e, só se alimentava de leite materno. Sua mãe já havia transmitido a infecção em gestação anterior há dois anos. Foram realizadas reações sorológicas nos 105 e em outros 135 filhos das 115 mulheres chagásicas crônicas. Ao nascimento havia anticorpos específicos para Doença de Chagas em títulos semelhantes aos maternos, com variação máxima de duas diluições, exceto aquele com a Doença de Chagas Congênita, que apresentavam títulos de 1/40 na hemaglutinação e na imunofluorescência indireta enquanto em sua mãe esses títulos eram de 1:320. Após os quatro meses de idade havia 10(5,7%) dos filhos com reaçóes positivas. Um deles, aos oi to e meio meses de idade, amamentado ao seio até aos oito meses, nunca tinha saído do Distrito Federal e ao nascer tinha Strout e xenodiagnóstico negativos. Também nos outros nove, maiores de um ano de idade não pudemos determinar o modo de aquisição da infecção, apesar de cinco deles já terem ido a áreas endêmicas para Doença de Chagas. d) Dois natimortos e dois neomortos foram estudados histopatologicamente. Três deles eram portadores de Doença de Chagas Congênita e em um outro, natimorto, foi diagnosticada infecção bacteriana as cendente. e) Quarenta e nove placentas puderam ser estudadas histopatologicamente e formas amastigotas do T.cruzi foram encontradas em uma delas. f) Uma gestantes na fase aguda da Doença de Chagas adquirida no 89 mês foi acompanhada durante cinco meses. As pesquisas parasitológicas na criança até os quatro meses foram negativas. O xenodiagnóstico e o exame histopatológico de placenta evidenciaram o T.cruzi. Foram inoculados em camundongos, a urina, a saliva, o colostro e o leite materno e, o líquido amniótico e o sangue do cordão do recém-nascido. Os animais inoculados com colostro e o leite no 39 e 79 dias após o parto se infectaram. B - No estudo experimental, foram inoculados 80 camundongos fêmeas da linhagem Charles River, cepa CDl, com a cepa NS do T.cruzi, isolado de criança com a forma congênita da Doença de Chagas. Estas fêmeas foram posteriormente acasaladas e apenas 30 (37,7%) delas engravidaram. Vinte e uma foram cesareadas e as 157 crias resultantes e as placentas, foram estudadas histopatologicamente. Sessenta e uma crias das nove fêmeas que pariram naturalmente foram submetidas a xenodiagnóstico e em 41 também foram feitos estudos histopatológicos. Nenhuma cria mostrou-se positiva para T. cruzi. Em uma das 157 placentas foram encontradas amastigotas do T.cruzi na decídua. Pela primeira vez foi descrita a presença de metafisite associada â Doença de Chagas Congênita, observada nos dois recém-nascidos infectados intra-útero. Também a transmissão da infecção através da amamentação ao seio de toma chagásica na fase crônica indeterminada da doença e a presença do T.cruzi no colostro humano. E, ainda, a infecção pelo T.cruzi no estroma vilositário, estando o concepto livre de infecção. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / The objective of this thesis is to study the maternal transmission to the infant of Chagas' disease in the Federal District. The work was devided into two parts:(A) an clinico-epidemiological study and (B) an experimental study. A. The clinico-epidemiological study was done in the regional hospital of the South wing of Brasilia. It consisted of a) a serological survey; b) examination of chagasic mothers; c) examination of children of chagasic mothers; d) examination of neonates dying at or shortly after birth; e) examination of the placenta; f) follow up of an acute phase Chagas'disease patient. a) The complement fixation test (Machado Guerreito) in 1737 pregnant women, among the 3068 seen during a year, was positive in 5,9%. b) One hundred and fifteen pregnant women, with three positive serological reactions for Chagas'disease, were accompanied or their records studied relating to their 437 previous pregnances (mean 4.8 pregnancies). The frequency of miscarriage (12.7%) premature births (6.4%) and death in the neonatal period (22.58:1000) was equal to the general population. However congenital Chagas'disease was a cause of neonatal death, prematurity and low birth weight. The women trasmitted the infection congenitally two the foetus and one to the placenta. c) Of 243 children the result of 552 pregnancies in 115 chagasics,105 were examined parasitologically by xenodiagnosis and/or a modified Strout method during the first five of life. Congenital Chagas'disease was diagnosed in only one neonate (1%). In 83 infants followed up for two months after birth the acute phase of Chagas'disease was detected in one (1.2%). This child was negative for T.cruzi infection at birth on xenodiagnosis and by the method of Strout. The placenta was negative on xenodiagnosis and its histology normal. At one month of age the child was clinically normal, lived in a house free of triatomine bugs on the periphery or the Federal District and was only fed on maternal milk. The monther had already transmitted the infection in a previous pregnancy two years before. Serological tests were done in 105 plus a further 135 children of the 115 mothers with chronic Chagas'disease. At birth they had titres similar to the mother with a maximum variation of two dilutions, with the exception of the congenital Chagas'disease case. Here the baby had a 1/40 positive titre for haemogglutination and indirect immunofluorescence while the mother had titres of 1:320. After four months of age 10(5.7%) of the children had positive serology. One of these at 81/2 months of age, fed on the breast until 8 months of age, had never the Federal District and at birth had a negative Strout and xenodiagnosis. Also in the other nine, one to twenty years of age, we could not determine the mode of acquistion of infection, although five of them had been in endemic areas of Chagas'disease. d) The two still births and the two neonatal deaths were studied histologically. Three were carriers of congenital Chagas'disease while the other death was associated with an ascending bacterial infection. e) Forty-nine placentas were studied histopathologically and amastigotes of T.cruzi found in one of them. f) A pregnant woman acquired acute Chagas'disease in the 8th. month of her pregnancy and was followed for five months. Until the fourth month of age parasito¬logical examinations of the child were negative. Xenodiagnosis and histological examination of the placenta showed T.cruzi. Samples of urine, saliva, colostrum, maternal milk, amniotic fluid and cord blood were innoculated into mice. Further samples of colostrum and milk were innoculated on day 3 and day 7 after parturition. T.cruzi was isolated in mice receiving colostrum. B. In the experimental study 80 female mice of the CDI Charles river strain were innoculated with T.cruzi strain NS isolated from the Child with congenital Chagas'disease. These females were exposed to males afterward and 30(37.7%) became pregnant. Twenty-one were examined by ceasarian section and 157 progeny and their placentas examined histologically. Sixty-one progeny of nine females born naturally were examined by xenodiagnosis and in 41 histopathological studies were done. No foetus or neonate was positive for T.cruzi. In one of the 157 placentas amastigotes of T.cruzi were found in the decidua. For the first time we record metaphysitis associated with congenital Chagas'disease in two neonates infected in utero. Also the transmission of infection by breast freeding in a chagasic in the chronic indeterminate phase and the presence of T.cruzi in colostrum. Also T.cruzi in the villous stroma when the live conceptus was free of infection.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-02-12T12:31:39Z No. of bitstreams: 1 2015_LennineRodriguesMelo.pdf: 5653985 bytes, checksum: d46fb13724a4ad1d5c6b390a9529fab8 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-02-22T21:56:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LennineRodriguesMelo.pdf: 5653985 bytes, checksum: d46fb13724a4ad1d5c6b390a9529fab8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-22T21:56:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LennineRodriguesMelo.pdf: 5653985 bytes, checksum: d46fb13724a4ad1d5c6b390a9529fab8 (MD5) / A busca por compostos que apresentem atividade luminescente (fluorescência) é de extrema importância em razão da alta sensibilidade de detecção desses em técnicas analíticas. Porém, a técnica de espectroscopia de fluorescência molecular não é muito utilizada em decorrência do número limitado de sistemas químicos que atuem com atividade luminescente apreciável. Nessa perspectiva foram sintetizadas e avaliadas onze estruturas de chalconas, partindo-se do 4-(dimetilamino)benzaldeído e do 3,4,5-trimetoxibenzaldeído, já amplamente discutidos na literatura por ser um cromóforo e pela atividade biológica, respectivamente. Os compostos foram devidamente caracterizados e tiveram suas estruturas determinadas por difração de raios-X, quando possível. Suas propriedades fotofísicas e comportamentos solvatocrômicos foram investigados. Observado o amplo espectro de atuação da classe de compostos avaliada, estudos de docagem molecular e testes in vitro foram realizados para a doença de Chagas, reconhecida pela OMS como negligenciada. Visando uma importante aplicação tecnológica, foram produzidas microfibras do acervo sintetizado a partir do polímero polivinilpirrolidona e as caracterizações se deram por MEV. / The search for compounds having luminescent activity (fluorescence) have extreme importance because high sensitivity detection of these in analytical techniques. However, the technique of molecular fluorescence spectroscopy is not widely used due to the limited number of chemical systems which operate with considerable luminescent activity. In this perspective were synthesized and evaluated eleven chalcones structures, starting from the 4-(dimethylamino)benzaldehyde and 3,4,5-trimethoxybenzaldehyde, as well discussed in the literature to be a chromophore and for the biological activity, respectively. The compounds were characterized and have their structures determined by X-ray diffraction, when possible. Their photophysical properties and solvatochromic behaviors were investigated. Noted the broad spectrum of compounds class performance were also evaluated molecular docking studies and in vitro tests were conducted to Chagas disease, by WHO recognized as neglected. Searching for better possibility in technological application were produced microfibers with the polyvinylpyrrolidone polymer and these were characterized for SEM analysis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-02-18T16:55:17Z No. of bitstreams: 1 2015_CamilaAlvesSantana.pdf: 1674794 bytes, checksum: 8759cdf852cfc0b2c3ae27292328abdf (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-02-28T11:11:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_CamilaAlvesSantana.pdf: 1674794 bytes, checksum: 8759cdf852cfc0b2c3ae27292328abdf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-28T11:11:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_CamilaAlvesSantana.pdf: 1674794 bytes, checksum: 8759cdf852cfc0b2c3ae27292328abdf (MD5) / A doença de Chagas é uma das principais doenças parasitárias na América Latina, atingindo cerca de oito milhões de pessoas. As manifestações da doença afetam o coração, intestinos e sistema nervoso. Seu tratamento é considerado ineficiente, não existindo medicamentos ou vacinas capazes de prevenir o desenvolvimento da patologia. Dessa forma, a maneira mais efetiva de se combater a doença de Chagas é realizando seu diagnóstico precoce e atuando sobre suas diversas vias de transmissão. Este estudo teve como objetivo avaliar a relação entre via de transmissão do Trypanosoma cruzi, o estabelecimento da carga parasitária e produção de anticorpos específicos, parâmetros avaliados para se estabelecer o diagnóstico da infecção. Camundongos BALB/c foram infectados com 103 formas tripomastigotas de T. cruzi pelas vias intraperitoneal, oral e ocular. Infecções pelas vias sexual e congênita ocorreram de maneira natural. As avaliações foram realizadas durante a fase crônica da infecção. A qPCR revelou uma maior carga parasitária em camundongos infectados pela via intraperitoneal, o que também foi acompanhado por uma maior produção de anticorpos. As vias oral e ocular apresentaram mínima carga parasitária e não obtiveram títulos de anticorpos reagentes. O aumento da concentração de T. cruzi inoculada por essas duas vias promoveu um aumento da carga parasitária com consequente produção de anticorpos específicos. As vias sexual e congênita mostraram baixa, porém relevante, carga parasitária, o que as tornou reagentes nos testes sorológicos. Destaca-se que 54,6% dos camundongos infectados pela via congênita apresentaram diagnóstico molecular positivo com testes sorológicos negativos. O desafio desses animais com formas tripomastigotas de T. cruzi resultou em soroconversão em apenas 41,6% dos animais, sugerindo que os demais podem ter sido tolerizados aos antígenos parasitários. A demonstração de que a rota de aquisição do T. cruzi influencia na determinação da carga parasitária de camundongos na fase crônica da doença, bem como no perfil de produção de anticorpos, auxiliará na compreensão da epidemiologia da doença de Chagas em diferentes ecossistemas, onde predominam diferentes vias de transmissão. / Chagas disease is a major parasitic disease in Latin America, affecting about eight million people. The clinical manifestations affect the heart, intestines and nervous system. The treatment is considered ineffective, with no drugs or vaccines able to prevent disease development. The most effective way to fight Chagas disease is thus conducting early diagnosis and acting on its various routes of transmission. This study aimed to evaluate the relationship between T. cruzi transmission route, the establishment of parasite load and specific antibodies production, parameters evaluated to establish the diagnosis of the infection. BALB /c mice were infected with 103 T. cruzi trypomastigotes by intraperitoneal, oral and ocular routes. Sexual and congenital transmissions occurred naturally. Analyses were conducted during Chagas disease chronic phase. qPCR revealed a higher parasite load in mice infected by intraperitoneal route, which was also accompanied by an increased production of antibodies. Oral and ocular pathways had minimal parasite burden and did not obtain positive antibodies titers. A higher concentration of T. cruzi inoculums in these two pathways promoted an increase in parasite load and antibodies production. Sexual and congenital routes showed low but significant parasite load, which made them positive in serological tests. It is noteworthy that 54.6% of congenital infected mice tested positive in qPCR and negative in serological tests. The challenge of these animals with T. cruzi trypomastigotes resulted in serum conversion in only 41.6% animals, suggesting tolerization to parasite antigens. The demonstration T. cruzi acquisition route influences in parasite load of mice in the chronic phase of the disease and antibody production profile will assist in the understanding of Chagas disease epidemiology in different ecosystems.

Banca: Mario Tsunezi Shimizu / Banca: Olga Fichman / Banca: Esther Birman / Banca: Luiz Jacinto da Silva / Banca: Terezinha de Oliveira Nogueira / Resumo: Anticorpos naturais para antígenos próprios e exógenos foram analisados pela técnica de ELISA, em 60 soros de pacientes cronicamente infectados pelo T. cruzi e, em 40 soros de indivíduos sofrendo de uma micose profunda, freqüentemente encontrada na América Latina (Paracoccidioimicose). Cerca de 80% dos indivíduos do primeiro grupo tinham níveis significativamente elevados de anticorpos antilaminina (M=4,75, DP±1,88) quando comparados com os controles saudáveis e, diferentes especificidades de anticorpos estavam associadas com antilaminina nos soros chagásicos. Foram observados anticorpos reativos com as proteínas do citoesqueleto, especialmente com a banda 3 e seus peptídeos, como o de 62 kDa. Por meio de cromatografia, em Proteína-A - Sepharose, mostramos que uma parte significante do antiGal natural pode estar ligada por sua região Fab a outra molécula de imunoglobulina e/ou a sítios alternativos de ligação na Proteína A. O achado de lgG antiGal nos imunocomplexos reforçam a primeira hipótese. Todavia, é possível que algumas lgG aniiGal pertençam ao subgrupo VH111 de imunoglobulinas. Entre os 40 soros de PCM examinados, a maioria tinha níveis normais de anticorpos naturais. Todavia, 30% dos pacientes crônicos apresentavam aumentos de pelo menos uma especificidade de anticorpo natural, tal como antiactina, antimiosina e antiGal. Na forma juvenil os anticorpos antiactina estavam aumentados de 2,4 vezes (1,9 a 5,3 vezes), sugerindo uma associação com a doença disseminada. lmunocomplexos foram pesquisados nos soros de PCM utilizando a técnica de precipitação com polietileno glicol 6000. Nos imunocomplexos Isolados foram encontrados principalmente anticorpos específicos para antígenos solúveis de P. brasiliensis / Abstract: Using ELISA technique, natural antibodies against self and non self antigens were determined in 80 patients chronically intected by T. cruzi and 40 individuals suffering from a deep mycosis frequentely found in Latin Amarica (Paracoccidioidomycosis - PCM). Two forms of PCM were investigated: adult forms and juvenil type of disease. Eighty percent (80%) of the former group had significantly elevated anti-laminin antibody levels (M=4.7,SD±1.8) compared with healthy controls and different specificities of antibody were associated with anti-laminin in pathological sera. A notable binding to cytoskeletal proteins was observed, specially with band 3 and their peptides derivates, such as 62 kDa peptide. By means of Protein A chromatography we were able to show that natural anti-Gal antibodies may be bound by their Fab region to other immunoglobulins and/or to Protein A by alternative sites of binding. The finding of lgG anti-Gal antibodies in circulating immune complexes isolated from chagasic sera supported the first alternative. However, it is possible that some of lgG anti-Gal antibodies, belong to VH111 subgroup of immunoglobulins, that bind directly to Protein A. Among the 40 sera from PCM examined, the majority was considered as not exhibiting a signilicantly higher binding than normal sera to antigens tested. However thirty percent (30%) of the chronic patients had an increased levels of natural antibodies at least for one specificity such as actyn, myosin and Gala1,3Gal epitopes. ln juvenil type of PCM the mean value found for actyn was also increased 2,42 (range 1,0 to 5,3). Utilizing the polyethylene glicol precipitation the presence of circulating immune complexes was investigated in PCM sera. Specific antibodies for soluble antigens from P. brasiliensis and natural antibodies against myoglobin, myosin and Gala1,3 Gal epitopes were characterized

Triatomíneos (Hemiptera: Reduviidae) conhecidos no Brasil como “barbeiros” são os vetores do flagelado Trypanosoma cruzi, o parasita causador da doença de Chagas, uma das mais importantes doenças parasitárias no continente americano. O estudo da microbiota intestinal dos triatomíneos tem ganhado relevância nos últimos anos dado seu papel potencial em modular a competência vetorial, além do uso de bactérias modificadas geneticamente para inibir o desenvolvimento do inseto ou do parasita. Porém, para um uso prospectivo em estratégias de controle, se requer um bom conhecimento da interação vetor-microbiota-parasita, incluindo a composição da microbiota, rotas de transmissão e a resposta a infecção com T. cruzi. Para responder estas perguntas, neste trabalho foi amostrada a microbiota intestinal de insetos criados em colônias de laboratório de seis espécies representativas dos gêneros Triatoma, Rhodnius e Panstrongylus, usando sequenciamento em larga escala de um fragmento do gene ribossomal 16S. Nosso estudo compara insetos desafiados experimentalmente contra T. cruzi e controles não desafiados, bem como amostras obtidas de intestino e gônadas. Nossos resultados demostram que a microbiota intestinal de triatomíneos tem uma baixa diversidade dentro de indivíduos, pode ser transmitida horizontal ou tanto vertical como horizontalmente, e é altamente variável na sua composição taxonômica dentro de uma mesma espécie de hospedeiro. No entanto, as espécies bacterianas da microbiota padrão são principalmente restritas a Enterobacteriales e Corynebacteriales. Nossos resultados sugerem que desafio com T. cruzi influencia a composição da microbiota de acordo com a susceptibilidade do vetor: nas espécies com infecção não detectável, ela é variável entre os grupo desafiado e o controle, mas nas espécies com infecção detectável, ela permanece em sua maioria sem mudanças. Nossas observações são discutidas à luz do nosso conhecimento sobre a resposta imune do inseto e sobre a capacidade do parasita de modulá-la. Nós consideramos que, embora a diversidade da microbiota ser altamente variável entre espécies e indivíduos, grupos taxonômicos-chave definem a microbiota padrão intestinal dos triatomíneos, permitindo-nos explorar o papel dos simbiontes na nutrição e defesa do hospedeiro. Finalmente, nós sugerimos caminhos através dos quais novas pesquisas sobre a regulação fisiológica dos triatomíneos pela microbiota intestinal podem ser realizados a fim de avaliar a sua resposta posterior contra T. cruzi e ser usada como indicador de susceptibilidade dos insetos à infecção pelo o parasita. / Triatomine bugs (Hemiptera: Reduviidae) known in Brazil as “barbeiros” are the vectors of flagellate Trypanosoma cruzi, the causative agent of the Chagas disease, one of the most important parasitic diseases in the American continent. The study of triatomine gut microbiota has gained relevance in the last years given its potential role to modulate vector competence, besides the use of genetically modified bacteria to inhibit the development of either insects or parasites. However, for a prospective use in control strategies, a good understanding of the vector-microbiota-parasite interactions is required, including microbiota composition, its transmission routes, and its responses to T. cruzi infection. To answer these questions, we sampled the gut microbiota of colony-reared insects of six representative species of the genera Triatoma, Rhodnius and Panstrongylus, using high throughput sequencing of a fragment of the ribosomal gene 16S. Our study compares experimental T. cruzi-challenged and non-challenged control individuals, as well as samples obtained from guts and gonads. Our results demonstrate that the triatomine gut microbiota has a low intra-individual diversity, is either horizontally or both horizontally and vertically transmissible, and is highly variable in its taxonomic composition within the same host species. Nevertheless, bacterial species of the core microbiota are mostly restricted to Enterobacteriales and Corynebacteriales. T. cruzi-challenge seems to influence microbiota composition according to vector susceptibility: in species with non-detectable infection, it is variable between experimentally challenged and non-challenged vectors, while in species with detectable infection, the microbiota remains mostly undisturbed. This latter observation is discussed in the light of insect immune responses and the parasite capacity of modulating it. We consider that, although the microbiota diversity is highly variable between species and individuals, key taxonomic groups define the core triatomine gut microbiota, allowing us to explore their symbiotic role in host nutrition and defense. Finally, we suggest avenues through which new research on triatomine physiological regulation of gut microbiota could be conducted in order to evaluate its subsequent response to T. cruzi and be used as indicator of infection susceptibility to the parasite.