Os antagonistas adrenérgicos dos receptores ?, tais como o nebivolol, podem reduzir a mortalidade dos pacientes na fase crônica da doença de Chagas causada pelo Trypanossoma cruzi. O nebivolol está disponível na clínica como mistura racêmica dos isómeros d e l com duplo mecanismo de ação. O d-nebivolol é antagonista do receptor adrenérgico ?1, enquanto o l-nebivolol é responsável pelas propriedades vasodilatadoras do fármaco. O nebivolol é metabolizado principalmente por glicuronidação e metabolismo oxidativo dependente do CYP2D6, formando os glicuronídeos do nebivolol e os metabólitos hidroxilados do nebivolol, os quais contribuem para o antagonismo do receptor ?1 adrenérgico. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da doença de Chagas na farmacocinética-farmacodinâmica dos isômeros do nebivolol e seus metabólitos em pacientes idosos metabolizadores rápidos para o CYP2D6. Foram investigados pacientes idosos portadores da doença de Chagas (n = 11) e idosos hipertensos (n = 11) previamente fenotipados como metabolizadores extensivos (EM) ou metabolizadores lentos (PM) para o CYP2D6, usando o metoprolol como fármaco marcador (21 EM e 1 PM). As coletas seriadas de sangue foram realizadas até 48 h após a administração de dose única oral de 10 mg de nebivolol racêmico. As concentrações plasmáticas dos isômeros individuais do nebivolol e glicuronídeos do nebivolol foram avaliadas por LC-MS/MS. O método mostrou linearidade nas concentrações de 15-3000 pg de cada isômero do nebivolol/mL de plasma e de 0,2-125 ng de cada isômero do glicuronídeo do nebivolol/mL de plasma. Os parâmetros farmacocinéticos foram avaliados usando o programa Phoenix (WinNonlin) e expressos em mediana, média e intervalo de confiança 95%. Os testes estatísticos foram utilizados para comparar os parâmetros farmacocinéticos entre os isômeros (teste de Wilcoxon) e entre os grupos (teste de Mann-Whithey); p < 0,05. A farmacocinética do nebivolol é estereosseletiva em pacientes idosos hipertensos portadores (9,7 vs.. 6,1 ng.h/mL) ou não (10,1 vs.. 5,4 ng.h/mL) da doença de Chagas forma crônica fenotipados como metabolizadores rápidos, com observação de maiores valores de AUC para o isômero l-nebivolol. A glicuronidação do nebivolol também é estereosseletiva em pacientes idosos hipertensos portadores (72,9 vs.. 311,6 ng.h/mL) ou não (65,3 vs.. 335,2 ng.h/mL) da doença de Chagas forma crônica fenotipados como metabolizadores rápidos, com observação de maiores valores de AUC para o isômero d-glicuronídeo. A doença de Chagas forma crônica não altera a farmacocinética e a capacidade de glicuronidação de ambos os isômeros do nebivolol em pacientes fenotipados como metabolizadores rápidos. Os valores de clearance do l-nebivolol (48,6 vs.. 14,3 L/h) e do d-nebivolol (48,4 vs.. 20,4 L/h) estimados pelo modelo populacional foram menores para os indivíduos fenotipados como metabolizadores lentos quando comparados com os ii metabolizadores rápidos do CYP2D6. O cálculo da biodisponibilidade dos isômeros individuais do nebivolol para os indivíduos metabolizadores rápidos (9% para o l-nebivolol e 5% para o d-nebivolol) e metabolizadores lentos (42% para o l-nebivolol e 29% para o d-nebivolol) do CYP2D6 permitiu inferir que o clearance não difere entre os isômeros na administração oral. As concentrações plasmáticas de nebivolol obtidas no presente estudo seguindo a administração de dose única oral de 10 mg de nebivolol racêmico a pacientes idosos hipertensos portadores ou não doença de Chagas não foram suficientes para detectar alterações nos intervalos PR, RR e QT, oriundos dos eletrocardiogramas, realizados nos mesmos tempos de colheita das amostras de sangue. Em conclusão, a doença de Chagas na forma crônica não alterou a farmacocinética e a farmacodinâmica dos isômeros do nebivolol nos idosos investigados. / Adrenergic antagonists in ? receptors, such as nebivolol may reduce mortality of patients in the chronic phase of Chagas disease caused by Trypanosoma cruzi. Nebivolol is available as a racemic mixture of d and l isomers with dual mechanism of action. The d isomer is a ?1 adrenergic receptor antagonist, while the l isomer is responsible for the drug vasodilatory properties. Nebivolol is primarily metabolised by glucuronidation and oxidative metabolism dependent on CYP2D6 to form glucuronide and hydroxylated metabolites of nebivolol, which contribute to the antagonism of adrenergic receptor ?1. This study aims to evaluate the effect of Chagas disease on the pharmacokinetics-pharmacodynamics of nebivolol isomers and its metabolites in CYP2D6 extensive metabolisers elderly patients. Hypertensive elderly patients with (n = 11) and without Chagas disease (n = 11) were previously phenotyped as extensive metabolizers (EM) or poor metabolizers (PM) for CYP2D6, applying metoprolol as a probe drug (21 EM and 1 PM). Serial blood samples were collected within 48 hours after a single oral dose administration of 10 mg racemic nebivolol. Plasma concentrations of nebivolol individual isomers and its glucuronides were measured by LC-MS/MS. The assay was linear over the rage of 15-3000 pg of each isomer of nebivolol/mL plasma and 0.2 to 125 ng of each isomer of nebivolol glucuronide/mL plasma. Pharmacokinetic parameters were evaluated applying Phoenix (WinNonlin) software and expressed as median, mean and 95% confidence interval. Statistical tests compared the pharmacokinetic parameters between isomers (Wilcoxon test) and between groups (Mann-Whithey test); p < 0.05. Pharmacokinetics of nebivolol is stereoselective in hypertensive elderly patients with (9.7 vs. 6.1 ng.h/mL) and without (10.1 vs 5.4 ng·h/mL) the chronic form of Chagas disease and phenotyped as extensive metabolisers, with higher AUC values for l-nebivolol. Nebivolol glucuronidation is also stereoselective in hypertensive elderly patients with (311.6 vs 72.9 ng.h/mL) and without (335.2 vs 65.3 ng.h/mL) the chronic form of Chagas disease and phenotyped as extensive metabolisers, with higher AUC values for d-glucuronide. The chronic form of Chagas disease does not alter the pharmacokinetics and glucuronidation capacity of either nebivolol isomers in patients phenotyped as extensive metabolizers. Clearance values for l-nebivolol (48.6 vs 14.3 L/h) and d-nebivolol (48.4 vs 20.4 L/h) estimated by the population model were lower for individuals phenotyped as CYP2D6 poor metabolisers compared to extensive metabolizers. Bioavailability calculation of individual nebivolol isomers for CYP2D6 extensive metabolisers (l-nebivolol 9%, d-nebivolol 5%) and poor metabolizers (l-nebivolol 42%, d-nebivolol 29%) made it possible to infer that clearance does not differ between the isomers in oral administration. Plasma concentrations of nebivolol observed in the present study following a single oral dose of 10 mg of racemic nebivolol to hypertensive elderly patients with and without Chagas disease were not sufficient to detect alterations in the PR, RR, and QT intervals in the electrocardiograms performed at the same iv times of blood sampling. In conclusion, Chagas disease in the chronic form did not alter the pharmacokinetics or pharmacodynamics of nebivolol isomers in the investigated elderly patients.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A doença de Chagas é uma doença tropical infecciosa e negligenciada responsável por um grande número de pessoas infectadas e em risco de infecção, principalmente nas regiões pobres da América Latina. No momento, apenas duas drogas, Benzonidazol e Nifurtimox, estão disponíveis para o tratamento da doença de Chagas, mas são ineficazes por apresentarem baixa taxa de cura. O Megazol é um importante representante da classe dos nitroimidazóis e é uma alternativa promissora devido ao seu potencial tripanocida com um perfil superior de ação quando comparado ao tratamento disponível. No entanto, o Megazol não é utilizado clinicamente uma vez que possui atividade mutagênica e carcinogênica relatada. O Instituto de Tecnologia em Fármacos (Farmanguinhos) desenvolveu três análogos do Megazol: PTAL 05-02 (3-amino-5-(1-metil-5-nitro-1H-imidazol-2-il)-1H-1,2,4-triazol), PAMT 09 (2-amino-N-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-5-(trifluorometil)-1H-1,2,4-triazol) e PTAL 04-09 (1-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-1H-pirazol). O objetivo deste trabalho é apresentar novas moléculas análogas do Megazol com atividade tripanocida, desenvolvidas a partir de estratégias racionais de desenvolvimento de substâncias bioativas ao manter o perfil farmacodinâmico do Megazol enquanto tenta diminuir ou remover o efeito genotóxico. Testes genotóxicos na avaliação segura de novas substâncias bioativas foram utilizados, de acordo com as diretrizes da OECD. O teste da Salmonella/microssoma foi utilizado na avaliação mutagênica e citotóxica, utilizando linhagens de Salmonella enterica sorovar Typhimurium, deficientes e supercompetentes na síntese de enzimas nitroredutase e acetiltransferase. O análogo PAMT 09 não foi mutagênico em nenhuma concentração e linhagem utilizada. Os análogos PTAL 05-02 e PTAL 04-09 foram mutagênicos, na ausência de S9 mix, para a linhagem TA98/1,8-DNP6. Na avaliação de citotoxicidade, os três análogos foram citotóxicos, independente de metabolização exógena S9 mix. O teste do micronúcleo, utilizando células de macrófago de rato, foi realizado para a avaliação genotóxica dos análogos do Megazol. Os três análogos foram capazes de induzir a formação de micronúcleos e apresentaram efeito citotóxico. / Chagas disease is an infectious neglected tropical disease responsible for a large number of infected people and at risk for infection, mainly in poor areas of Latin America. At the moment, there are just two drugs, Benzonidazol and Nifurtimox, available for the Chagas disease treatment, but they are ineffective since they have low cure rates. Megazol is an important representative of nitroimidazole class and it is a promising alternative because of its trypanocidal activity with a superior profile of action compared to the available treatment for Chagas disease. However, Megazol is not used clinically since its mutagenic and carcinogenic activity was reported. The Institute of Pharmaceutical Technology (Farmanguinhos) has designed 3 analogues from Megazol: PTAL 05-02 (2-amine-5-(1-methyl-5-nitro-1H-imidazole-2-yl)-1H-1,2,4-triazole), PAMT 09 (2-amine-N-(1-methyl-4-nitro-1H-imidazole-5-yl)-5-(trifluoromethyl)-1H-1,2,4-triazole) and PTAL 04-09 (1-(1-methyl-4-nitro-1H-imidazole-5-yl)-1H-pirazole). The aim of this work is to present new Megazol analogous molecules with trypanocidal activity, similar pharmacodynamic profile and less or none genotoxic effect developed using strategies of rational drug design. Genotoxic Tests for the safe evaluation of new bioactive substances were used, according to OECD guidelines. The Salmonella/microssoma test was used in the mutagenic and citotoxic evaluation using Salmonella enterica serovar Typhimurium strains lacking and overproducing nitroreductases and acetyltransferases enzymes. The PAMT 09 analogue was not mutagenic in any concentration and strain used. The PTAL 05-02 and PTAL 04-09 analogues was mutagenic, in the absence of S9 mix, to the TA98/1,8-DNP6 strain. In the citotoxic evaluation, the three analogues were citotoxic, with and without S9 mix. The micronucleus test using rat macrophage cells was used in the genotoxic evaluation of Megazol analogous. The three analogues were capable of induce the micronuclei formation and showed citotoxic effect.

O Trypanosoma cruzi, parasita causador da doença de Chagas, apresenta isolados virulentos e de baixa virulência. Exploramos o envolvimento do sistema imune nos baixos níveis de parasitemia de camundongos infectados com parasitas de baixa virulência Sylvio X10/4. Camundongos C57Bl/6 WT não apresentam parasitemia patente após 24 horas da infecção, e a análise da carga parasitária revelou que a maioria dos parasitas vão para o fígado e baço. O envolvimento dos anticorpos naturais foi descartado, e uma pequena participação do sistema complemento sugerida. Já camundongos IFN-<font face=\"Symbol\">gKO infectados apresentaram parasitemia intermitente nas primeiras semanas, e isto não pôde ser atribuído à deficiência na produção de proteínas de fase aguda. Anticorpos específicos parecem cruciais para o controle do parasita; além disso, animais que apresentam apenas IgM são resistentes à infecção. Assim, sugerimos que a rápida saída que segue a inoculação do Sylvio X10/4 é um processo de remoção ativa e, em longo prazo, não somente a IgG, mas a IgM tem um papel importante na proteção. / Trypanosoma cruzi, the parasite responsible for Chagas´ disease, displays virulent isolates and low-virulence ones. We explored the involvement of the immune system in the low level parasitemia of mice infected with low-virulence Sylvio X10/4 parasites. C57BL/6 WT mice do not show patent parasitemias after 24 hours after infection and the parasite load revealed that most parasites go to the liver and spleen. The involvement of natural antibodies was discarded and a small participation of the complement system was suggested. However, infected IFN-<font face=\"Symbol\">gKO mice showed intermittent patent parasitemias in the first weeks of infection and this can not be attributed to deficiency in the production of acute phase proteins. Parasite-specific antibodies seem crucial for parasite control, in addition, animals that have only IgM are resistant to infection. Thus, we suggest that the rapid clearance that follows Sylvio X10/4 inoculation is an active removal process and, at the long run, not only IgG, but also IgM play an important role in protection.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:25:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Arminda C de A Leite.pdf: 1276473 bytes, checksum: 523ec1cf9ec873a814b205b4cce56e0e (MD5) Previous issue date: 2012-02-02 / Chagas disease remains as an important public health challenge in South America. The Chagas colopathy is considered the second clinical digestive manifestation most common of the disease and constipation chronic, its main symptom. The general objective was to investigate the presence of achalasia, through electromanometry of the internal anal sphincter, in constipated chagasic patients with and without megacolon. This study evaluated clinical and electromanometry parameters of 64 patients with symptoms of constipation, attended on the service of coloproctologya on a university hospital in Brazil, central region. The achalasia was present in 91.3% (IC95% 74.13 to 98.52) of patients with megacolon and/or megarecto (Group 1), in 47.29% (IC95% 27.29 to 68.57) without megacolon and/or megarecto (Group2), and was not present in patients of the control group (Group 3). The rectal capacity was 309.1, 159.2 and 150.1 ml in the groups 1, 2 and 3 respectively. In conclusion the electromanometry detects achalasia of the internal anal sphincter in almost totality of patients with megacolon and/or megarecto. The megacolon presence in constipated patients with Chagas Disease alert to the possibility of occurrence of achalasia on the internal anal sphincter. In chronically constipated patients with positive serology for Chagas Disease, without megacolon the a finding of absence of the recto anal inhibitory reflex, by electromanometry, can definitively prove the Chagas colopathy, while the presence of reflection departs, at the time, this diagnosis, should these patients be followed and treated like other patients with constipation due to other causes The comparison of clinical manifestations in the three groups not evidenced differences that could distinguish patients with Chagas colopathy those with functional constipation, reaffirming the importance of holding the electromanometry in Chagasic and constipated patients. / A doença de Chagas permanece um importante desafio para a saúde pública no continente sul americano. A colopatia chagásica é considerada a segunda manifestação clínica digestiva mais comum da doença e a obstipação intestinal crônica, seu principal sintoma. O objetivo geral foi investigar a presença de acalásia, por meio da eletromanometria do esfíncter anal interno, em pacientes chagásicos obstipados com e sem megacolo. O presente estudo avaliou parâmetros clínicos e eletromanométricos de 64 pacientes com sintoma de obstipação intestinal, atendidos no serviço de coloproctologia de um hospital universitário da região central do Brasil HC/UFG. A acalásia esteve presente em 91,3% dos pacientes com megacolo e/ou megarreto (Grupo 1), em 47,29% dos sem megacolo e/ou megarreto (Grupo 2) e em nenhum dos pacientes do grupo controle (Grupo 3). A capacidade retal foi de 309,1, 159,2 e 150,1 mL nos Grupos 1, 2 e 3 respectivamente. O presente estudo concluiu que a presença de megacolo em pacientes obstipados chagásicos alerta para a possibilidade de ocorrência de acalásia do esfincter anal interno, uma vez que foi detctada na grande maioria dos pacientes. Em pacientes obstipados crônicos, com sorologia positiva para doença de Chagas, sem megacolo a constatação da ausência do reflexo inibitório retoanal, pela eletromanometria, pode de forma definitiva comprovar a colopatia chagásica. Por outro lado, a presença do reflexo afastaria, naquele momento, esse diagnóstico, devendo esses pacientes serem seguidos e tratados como os demais portadores de obstipação por outras causas. A comparação das manifestações clínicas nos três grupos não evidenciou diferenças que pudessem distinguir pacientes com colopatia chagásica daqueles com obstipação funcional, reafirmando a importância da realização da eletromanometria em pacientes chagásicos e obstipados. Todo paciente portador de obstipação intestinal, com sorologia positiva para doença de Chagas no qual o enema opaco não revele megacolo e/ou megarreto, deverá ser submetido à eletromanometria para pesquisa de acalásia do esfíncter interno do ânus, para a conclusão do diagnóstico e condução do tratamento.

Neste trabalho foi desenvolvido um Dot-ELISA capaz de detectar anticorpos anti-Plasmodium vivax, anti-Plasmodium falciparum, anti-Trypanosoma cruzi e anti-Treponema pallidum, simultaneamente. O teste foi padronizado e aplicado em amostras de pacientes com malária, doença de Chagas e sífilis e comparado com testes de referência. Foi utilizado no estudo 52 amostras de pacientes com doença de Chagas, 43 pacientes com sífilis, 103 indivíduos com infecção presente (primo-infectado e não primo-infectados) ou passada de malária, indivíduos com anticorpos heterólogos, 30 indivíduos com leishmaniose 100 indivíduos saudáveis. O Dot-ELISA-Multi apresentou 100% de especificidade para todos os antígenos nas amostras de indivíduos saudáveis e com anticorpos heterólogos, com exceção do antígeno TESA que obteve 99%. A sensibilidade obtida foi de 100% em indivíduos chagásicos e 88% em pacientes com sífilis. Em indivíduos com malária a sensibilidade obtida foi de 90% para PvMSP119 (antígeno de P. vivax) e 47% para Pf-Zw (antígeno de P. falciparum). A positividade do teste em indivíduos não parasitados com histórico de malária foi de 92%. Nas amostras de malária observou-se que em indivíduos que tinham tido ultimo episódio de P. vivax, associação negativa foi observada entre o tempo passado desde o último episódio e reatividade de Dot-ELISAMulti PvMSP119, e associação positiva entre o número de episódios de malária e reatividade de Dot-ELISA-Multi Pf-Zw. Indivíduos cujo o último episódio foi por P. falciparum, o Dot-ELISA-Multi Pf-Zw apresentou associação positiva com o número de episódios ocorridos. O comparado com os testes de referência utilizados apresentou um nível muito bom de concordância para TESA, EAE, PvMSP119 e um nível bom de concordância para Pf-Zw / In the present study, a Dot-ELISA was assembled to test antibodies against Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum, Trypanosoma cruzi and Treponema pallidum and was standardized and evaluated in serum samples from patients with malaria, Chagas disease and syphilis, in comparison with reference tests. The study was carried out on serum samples from 52 patients with chronic Chagas disease, 103 individuals with current (parasitemic) or past malaria (aparasitemic), 43 patients with syphilis, 30 with leishmaniosis, 21 individuals with heterologous antibodies and 100 blood donors. The diagnostic performance of Dot-ELISA-Multi for serum samples from patients with heterologous antibodies and from healthy blood donors, an overall 100% specificity was obtained for all antigens but TESA. A 100% sensitivity was observed in serum specimens from chronic-chagasic patients and 88% in serum specimens from syphilis patients. For malaria samples, the positivity was 90% for PvMSP119 and 47% for Pf-Zw antigen. In past malaria individuals, positivity was 92%. Sera from subjects who had had a P. vivax-malaria last episode presented negative association between time elapsed since their last malaria episode and results from Dot-ELISA-Multi PvMSP119; while positive association was observed between number of malaria episodes and results from Dot-ELISA-Multi Pf-Zw. For individuals who had had a P. falciparum-malaria last episode, Dot-ELISAMulti Pf-Zw results showed positive association with number of malaria episodes only. Altogether, concerning the reactivity of the five antigens of the Dot-ELISAMulti, as compared with their respective reference tests, we have observed a very good level of concordance for TESA, EAE, PvMSP119 and for Tp-Zw and a good level for Pf-Zw

A doença de Chagas é decorrente de uma infecção parasitária produzida pelo protozoário Trypanosoma cruzi, que se reproduz no organismo humano. A associação de comprometimento psicológico à doença de Chagas e a sua influência no comportamento e na vida dos portadores já foram reconhecidas, embora pouco estudadas. Objetivou-se avaliar o funcionamento cognitivo, a memória, a qualidade de vida, a presença de indicadores de transtorno orgânico cerebral e de problemas com o uso de álcool, por meio de testes psicológicos específicos, em um grupo de soropositivos para doença de Chagas, em comparação a um grupo de soronegativos para doença de Chagas, residentes na mesma comunidade, visando analisar o impacto psicossocial da doença na vida dos portadores. Para tal, foram avaliados, 80 participantes, distribuídos em dois grupos G1-sorologia positiva e G2-sorologia negativa balanceados por idade, sexo e escolaridade, excluindo aqueles com deficiências sensoriais e problemas psiquiátricos previamente diagnosticados. Procedeu-se a avaliação individual dos participantes, atendo-se a um critério duplo cego quanto à alocação nos grupos, por meio dos seguintes instrumentos: Inventário de Inteligência Não Verbal - INV, Memória Auditiva e Visual - da Bateria CEPA, Escala de Avaliação da Qualidade de Vida - WHOQOL-bref, Teste Gestáltico Visomotor de Bender e do Teste de screening de alcoolismo - CAGE. Os dados foram tratados por procedimentos estatísticos procedendo-se a comparação dos grupos, e destes aos dados normativos. (p<0,05). Observou-se na comparação dos grupos, com significância estatística, maior prejuízo cognitivo para o grupo com doença de Chagas. Quanto à memória visual, auditiva, indicadores de transtorno orgânico cerebral e de problemas com o uso de álcool os grupos não apresentaram diferença com significância estatística. Em comparação aos dados normativos ambos os grupos apresentaram com significância estatística, maior prejuízo cognitivo geral e específico, menor qualidade de vida nos domínios físico e psicológico e mais indicadores de problemas com o uso de álcool. Dentre as variáveis avaliadas o nível intelectual foi o que apresentou maior significância estatística e melhor poder discriminativo na comparação dos grupos, apontando que os participantes com doença de Chagas tendem a ter valores inferiores na avaliação cognitiva. Ao se comparar grupos de uma mesma comunidade, constatou-se que o impacto da doença de Chagas na vida dos portadores expresso em prejuízos de ordem cognitiva e na qualidade de vida é relativo, evidenciando que as condições de precariedade de recursos a que ambos estão expostos os diferencia negativamente dos parâmetros normativos, apontando para a necessidade de políticas públicas que instrumentem práticas de saúde favorecedoras do desenvolvimento psicossocial em comunidades carentes de recursos. / Chagas disease (American trypanosomiasis) is a protozoan infection caused by the flagellate Trypanosoma cruzi, which multiplies in the human body. Even though investigations on this subject are scarce, the relationship between psychological impairment and Chagas disease and its effect on the life and behavior of human reservoirs have already been acknowledged. By using specific psychological tests, this study aims to evaluate the cognitive performance, memory, quality of life, evidences of organic cerebral disorder and problems related to the use of alcohol in a chronically chagasic group compared to a non-chagasic group - both living in the same community -, and thus to analyze the psychosocial impact of Chagas disease on the reservoirs? lives. The 80 participants were divided into two groups: G1-positive serology and G2-negative serology, paired according to age, sex and schooling, excluding those who had any sensorial handicap as well as any previously diagnosed psychiatric disorders. All the participants were individually evaluated obeying a double blind criteria and using the following instruments: Non-Verbal Intelligence Test (INV), Audio and Visual Memory Test (CEPA ? Center for Applied Psychology), World Health Organization Quality of Life (WHOQOL-bref), the Bender Visual Motor Gestalt Test, and the CAGE screening for Alcoholism. Data were submitted to statistical analysis and the two groups were compared; and then, compared to normative (p<0.05). By comparing the two groups, a greater cognitive impairment (with statistical significance) was detected in the chagasic group. As to visual and audio memories, evidences of organic cerebral disorder, and problems related to the use of alcohol, there was no statistically significant difference between the two groups. As in relation to the normative data, minding the statistical significance, both groups showed greater cognitive impairment - general as well as specific -, as well as poorer quality of life in the physical and in the psychological level, and greater evidence of problems related to the use of alcohol. Among the variables under examination, the intellectual level was the one with greater statistical significance and better discriminative power, when comparing the two groups - thus indicating that the chagasic participants tend to show inferior achievement when cognitive aspects are under evaluation. Upon comparing groups who live in the same community, it was observed that the impact of Chagas disease over the infected subjects - when expressed in terms of cognitive impairment and poorer quality of life -, is relative, demonstrating that the nearly absolute lack of resources both groups suffer from keep them far, in an adverse way, from the normative parameters; this reveals the need for public policies that can effectively implement health practices which favor psychosocial developments in needy communities

Introdução: O pênfigo foliáceo endêmico (PFE) ou Fogo Selvagem (FS) é uma dermatose bolhosa autoimune com auto-anticorpos IgG patogênicos, principalmente da subclasse IgG4, direcionados contra epítopos da desmogleína 1 (Dsg1), uma glicoproteína desmossômica que desempenha papel na adesão celular da epiderme. Os auto-anticorpos ligam-se a domínios específicos da Dsg1, gerando acantólise (perda da adesão celular) através de mecanismos diversos, tais como sinalização intracelular de moléculas e impedimento estérico. A etiopatogenia do FS é multifatorial, apresentando interações entre fatores imunológicos, genéticos e ambientais. Em algumas regiões do Brasil, detectou-se alta prevalência de FS (3%), sugerindo importante participação de fatores ambientais como desencadeantes da resposta autoimune. Indivíduos saudáveis de áreas endêmicas de FS reconhecem epítopos não-patogênicos da Dsg1, e exposição a insetos hematófagos é um fator de risco para FS. FS e doença de Chagas compartilham algumas regiões geográficas, e anticorpos anti- Dsg1 foram detectados em doentes de Chagas. Na reserva indígena Terena (Limão Verde), onde a prevalência de FS é alta, a população está exposta a picadas de simulídeos, cimecídeos e reduvídeos. Estes insetos podem atuar como vetores de doenças, bem como na imunomodulação do processo autoimune do FS. Objetivos: Nosso estudo teve como objetivos: 1- avaliar a frequência de anticorpos anti-Trypanosoma cruzi em doentes de FS e na população saudável da área de alto risco para FS, habitantes da aldeia indígena de Limão Verde, Mato Grosso do Sul, Brasil; 2- avaliar a reatividade concomitante contra Dsg1 e T. cruzi nessa população de alto risco para FS. Métodos: Realizamos ensaio sorológico de ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) para reatividade contra Dsg1 e contra T. cruzi em 40 doentes de FS e em 150 indivíduos saudáveis da reserva indígena Terena. Adicionalmente, todos os soros foram analisados através da técnica de imunofluorescência indireta (IFI) para doença de Chagas. Nas reações positivas por ELISA e IFI para Chagas, TESA (trypomastigoste extracted/secreted antigens) immunobloting foi realizado como teste confirmatório para doença de Chagas. Resultados: A forma indeterminada da doença de Chagas foi identificada através da reação contra o T. cruzi por ELISA, IFI e TESA-BLOT em cinco indivíduos de Limão Verde, que não apresentavam FS. Nenhum doente de FS da região estudada apresentou reatividade contra T. cruzi. O perfil de anticorpos anti-Dsg1 evidenciou resultado positivo em 15 dos 40 doentes de FS e em 33 dos 150 soros de indivíduos saudáveis da região endêmica de FS. Não se observou reação cruzada entre doença de Chagas e FS. Conclusões: 1-Nosso estudo revelou pela primeira vez a ocorrência de doença de Chagas, forma indeterminada, em uma população ameríndia Terena da aldeia de Limão Verde, uma área endêmica de fogo selvagem; 2-Nenhum doente de fogo selvagem da reserva indígena Terena de Limão Verde, Aquidauana (MS) apresentou reatividade contra o Trypanosoma cruzi; 3-A resposta antidesmogleína 1 nos doentes de fogo selvagem foi encontrada em 37,5% (15/40) dos pacientes. Auto-anticorpos anti-desmogleína 1 nos indivíduos sadios (sem fogo selvagem) foram encontrados em 22% (33/150) dos casos. 4-Não houve concomitância de doença de Chagas e fogo selvagem na amostra populacional estudada de Limão Verde / Introduction: Endemic pemphigus foliaceus (EPF) or Fogo Selvagem (FS) is an autoimmune blistering disorder with pathogenic IgG autoantibodies, mainly of the IgG4 subclass, that recognize desmoglein 1 (Dsg1), a desmossomal glycoprotein that plays a role in epidermal cell adhesion. Autoantibodies binding to specific domains of Dsg1 lead to acantholysis through different mechanisms, such as intracellular molecular signaling and steric hindrance. Etiopathogenesis of FS is multifactorial, with the interaction of immunological, genetic and environmental factors. In certain settlements of Brazil, a high prevalence of FS (3%) is reported, suggesting an important role for environmental factors as triggers of the autoimmune response. Healthy individuals from endemic areas recognize non-pathogenic epitopes of Dsg1, and exposure to hematophagous insects is a risk factor for FS. Interestingly, FS and Chagas disease share some geographic sites, and anti- Dsg1 has been detected in Chagas patients. In the Terena reservation of Limao Verde, where FS prevalence is high, the population is prone to insect bites (Simulium, Cimex and Triatoma). Those insects may play a role as disease vectors or exert modulation of the autoimmune process in FS. Aims: Our study aimed: 1-To evaluate the frequency of antibodies anti- Trypanosoma cruzi in FS patients and in a healthy population living in a highrisk area for FS, a native Brazilian reservation of Limão Verde, Mato Grosso, Brazil; 2-.To analyze the concomitant reactivity against Dsg1 and T. cruzi in a high-risk population for FS. Methods: We performed ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) for Dsg1 and T. cruzi in forty FS patients and 150 healthy individuals living in the Terena reservation. All sera were also analyzed by indirect immunofluorescence (IIF) for Chagas disease. In those seropositive reactions for T. cruzi, TESA (trypomastigoste extracted/secreted antigens) immunoblotting was performed as a confirmatory test for Chagas disease. Results: Indeterminate Chagas disease was identified utilizing ELISA, IIF and TESA-BLOT for T. cruzi in five non-FS individuals from Limão Verde. In counterpart, none of the FS patients living in the same geographic region showed reactivity against Trypanosoma cruzi. Anti-Dsg1 antibodies were present in 15 out of 40 FS sera and in 33 out of 150 sera from healthy individuals from endemic FS site. No cross-reactivity between Chagas disease and FS was observed. Conclusions: 1- Our study revealed, for the first time, the occurrence of indetermined Chagas disease in an Amerindian Terena population of Limão Verde, Aquidauana, an endemic area of Fogo Selvagem; 2-None of the FS patients from the present endemic focus of Limao Verde, Aquidauana (MS) showed reactivity against Trypanosoma cruzi; 3-The anti-Dsg1 response in FS patients of this focus was detected in 37.5% (15/40) of the patients. In non-FS controls, autoantibodies anti-Dsg 1 were detected in 22% (33/150) of the sera; 4-There was no concomitance of Chagas disease and fogo selvagem in the analyzed population of Limão Verde

Submitted by Natalie Mendes (nataliermendes@gmail.com) on 2015-07-28T00:17:52Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o - C?ssio Santana.pdf: 10345998 bytes, checksum: 41cc3a308f7a72f1c4e10cc1ee2fe345 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-28T00:17:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o - C?ssio Santana.pdf: 10345998 bytes, checksum: 41cc3a308f7a72f1c4e10cc1ee2fe345 (MD5) Previous issue date: 2014-02-05 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado da Bahia - FAPEB / Chagas disease is a zoonosis caused by the hemoflagellate protozoan Trypanosoma cruzi, which affects millions of people in Latin America. Disease treatment is based on the use of two drugs, benznidazole and nifurtimox, which present low cure rates in the chronic phase of the disease as well as generating a number of adverse side effects. In this context, the development of new therapies for a better treatment of Chagas disease is necessary. In this study we investigated the anti-T.cruzi potential of physalins and betulinic acid, plant-based isolated steroids, in addition to synthetic derivatives from the latter, in in vitro assays. Our results demonstrate a high trypanocidal activity of physalins B and F and of the derivative BA5 against trypomastigote forms and on the processes of invasion and development of these on peritoneal macrophages. Electron microscopy revealed that physalin B or BA5 derivative treatment resulted in ultrastructural changes in the plasma membrane, Golgi apparatus, kinetoplast and endoplasmic reticulum of trypomastigotes forms. Additionally, these compounds contributed to the formation of atypical vacuoles in the appearance of myelin figures, which were labeled with MDC to confirm their identity as autophagic vacuoles. Flow cytometry analysis revealed that parasite death occurred mainly by necrosis. When combined with benznidazole, physalin B, physalin F or BA5 derivative, resulted in a higher anti-T. cruzi activity against amastigotes when compared to the compounds tested alone. These results indicate that steroids, such as physalins B and F and the derivative BA5, are potential candidates for an alternative treatment of Chagas disease. / A doen?a de Chagas ? uma zoonose causada pelo protozo?rio hemoflagelado Trypanosoma cruzi, que afeta milh?es de pessoas na Am?rica Latina. O tratamento dessa enfermidade se baseia na utiliza??o de dois f?rmacos, o benzonidazol e o nifurtimox, que possuem baixa taxa de cura na fase cr?nica da doen?a, al?m de gerarem uma s?rie de efeitos colaterais. Nesse contexto, o surgimento de novos medicamentos para uma quimioterapia mais adequada da doen?a de Chagas torna-se necess?rio. Neste estudo investigamos o potencial anti-T. cruzi de esteroides isolados de plantas, fisalinas e ?cido betul?nico, assim como de derivados sint?ticos deste ?ltimo, em ensaios in vitro. Nossos resultados demonstram uma elevada atividade tripanocida das fisalinas B e F e do derivado BA5 contra formas tripomastigotas e sobre os processos de invas?o e desenvolvimento destas em macr?fagos peritoneais. Atrav?s de ensaios de microscopia eletr?nica foi poss?vel observar que o tratamento com a fisalina B ou com o derivado BA5 causa altera??es ultraestruturais na membrana plasm?tica, complexo de Golgi, cinetoplasto e ret?culo endoplasm?tico das formas tripomastigotas, al?m da forma??o de vac?olos at?picos e o aparecimento de figuras miel?nicas, que foram marcadas com MDC para confirmar a sua identidade como vac?olos autof?gicos. An?lises por citometria de fluxo revelaram que a morte parasit?ria ocorre principalmente por necrose. A combina??o da fisalina B, da fisalina F ou do derivado BA5 com o benzonidazol resultou em uma maior atividade anti-T. cruzi frente a formas amastigotas quando comparados aos compostos testados de forma isolada. Estes resultados indicam que esteroides, tais como as fisalinas B e F e o derivado BA5, s?o potencias candidatos para o tratamento alternativo da doen?a de Chagas.

A doença de Chagas é decorrente de uma infecção parasitária produzida pelo protozoário Trypanosoma cruzi, que se reproduz no organismo humano. A associação de comprometimento psicológico à doença de Chagas e a sua influência no comportamento e na vida dos portadores já foram reconhecidas, embora pouco estudadas. Objetivou-se avaliar o funcionamento cognitivo, a memória, a qualidade de vida, a presença de indicadores de transtorno orgânico cerebral e de problemas com o uso de álcool, por meio de testes psicológicos específicos, em um grupo de soropositivos para doença de Chagas, em comparação a um grupo de soronegativos para doença de Chagas, residentes na mesma comunidade, visando analisar o impacto psicossocial da doença na vida dos portadores. Para tal, foram avaliados, 80 participantes, distribuídos em dois grupos G1-sorologia positiva e G2-sorologia negativa balanceados por idade, sexo e escolaridade, excluindo aqueles com deficiências sensoriais e problemas psiquiátricos previamente diagnosticados. Procedeu-se a avaliação individual dos participantes, atendo-se a um critério duplo cego quanto à alocação nos grupos, por meio dos seguintes instrumentos: Inventário de Inteligência Não Verbal - INV, Memória Auditiva e Visual - da Bateria CEPA, Escala de Avaliação da Qualidade de Vida - WHOQOL-bref, Teste Gestáltico Visomotor de Bender e do Teste de screening de alcoolismo - CAGE. Os dados foram tratados por procedimentos estatísticos procedendo-se a comparação dos grupos, e destes aos dados normativos. (p<0,05). Observou-se na comparação dos grupos, com significância estatística, maior prejuízo cognitivo para o grupo com doença de Chagas. Quanto à memória visual, auditiva, indicadores de transtorno orgânico cerebral e de problemas com o uso de álcool os grupos não apresentaram diferença com significância estatística. Em comparação aos dados normativos ambos os grupos apresentaram com significância estatística, maior prejuízo cognitivo geral e específico, menor qualidade de vida nos domínios físico e psicológico e mais indicadores de problemas com o uso de álcool. Dentre as variáveis avaliadas o nível intelectual foi o que apresentou maior significância estatística e melhor poder discriminativo na comparação dos grupos, apontando que os participantes com doença de Chagas tendem a ter valores inferiores na avaliação cognitiva. Ao se comparar grupos de uma mesma comunidade, constatou-se que o impacto da doença de Chagas na vida dos portadores expresso em prejuízos de ordem cognitiva e na qualidade de vida é relativo, evidenciando que as condições de precariedade de recursos a que ambos estão expostos os diferencia negativamente dos parâmetros normativos, apontando para a necessidade de políticas públicas que instrumentem práticas de saúde favorecedoras do desenvolvimento psicossocial em comunidades carentes de recursos. / Chagas disease (American trypanosomiasis) is a protozoan infection caused by the flagellate Trypanosoma cruzi, which multiplies in the human body. Even though investigations on this subject are scarce, the relationship between psychological impairment and Chagas disease and its effect on the life and behavior of human reservoirs have already been acknowledged. By using specific psychological tests, this study aims to evaluate the cognitive performance, memory, quality of life, evidences of organic cerebral disorder and problems related to the use of alcohol in a chronically chagasic group compared to a non-chagasic group - both living in the same community -, and thus to analyze the psychosocial impact of Chagas disease on the reservoirs? lives. The 80 participants were divided into two groups: G1-positive serology and G2-negative serology, paired according to age, sex and schooling, excluding those who had any sensorial handicap as well as any previously diagnosed psychiatric disorders. All the participants were individually evaluated obeying a double blind criteria and using the following instruments: Non-Verbal Intelligence Test (INV), Audio and Visual Memory Test (CEPA ? Center for Applied Psychology), World Health Organization Quality of Life (WHOQOL-bref), the Bender Visual Motor Gestalt Test, and the CAGE screening for Alcoholism. Data were submitted to statistical analysis and the two groups were compared; and then, compared to normative (p<0.05). By comparing the two groups, a greater cognitive impairment (with statistical significance) was detected in the chagasic group. As to visual and audio memories, evidences of organic cerebral disorder, and problems related to the use of alcohol, there was no statistically significant difference between the two groups. As in relation to the normative data, minding the statistical significance, both groups showed greater cognitive impairment - general as well as specific -, as well as poorer quality of life in the physical and in the psychological level, and greater evidence of problems related to the use of alcohol. Among the variables under examination, the intellectual level was the one with greater statistical significance and better discriminative power, when comparing the two groups - thus indicating that the chagasic participants tend to show inferior achievement when cognitive aspects are under evaluation. Upon comparing groups who live in the same community, it was observed that the impact of Chagas disease over the infected subjects - when expressed in terms of cognitive impairment and poorer quality of life -, is relative, demonstrating that the nearly absolute lack of resources both groups suffer from keep them far, in an adverse way, from the normative parameters; this reveals the need for public policies that can effectively implement health practices which favor psychosocial developments in needy communities

Pênfigo é uma dermatose bolhosa autoimune, endêmica em algumas áreas, como no nordeste do estado de São Paulo, Brasil, caracterizada pela produção de autoanticorpos contra desmogleínas (Dsg) - proteínas de adesão dos queratinócitos. O pênfigo vulgar (PV) acomete mucosas e pele, pela produção de anti-Dsg 3 e 1, respectivamente. O pênfigo foliáceo (PF) apresenta lesões exclusivamente na pele, pela produção de anti-Dgs1. Esta região também é endêmica para a Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA), cujo principal fator etiológico é Leishmania (Viannia) braziliensis. Objetivos: Relacionar fatores imunogenéticos dos pênfigos com aqueles da LTA, investigando, em pacientes com pênfigos, LTA e em controles: a resposta humoral às Dsg 1 e 3 e contra Chagas; a resposta humoral e celular aos antígenos de leishmania; e a associação dos alelos HLA de classe II -DR e -DQ no grupo LTA com aqueles de suscetibilidade e de resistência descritos nos pênfigos. Métodos: A resposta humoral foi investigada por: (i) ELISA para determinação dos anticorpos anti-Dsg 1 e 3, anti-L. V. braziliensis e contra T. cruzi; (ii) imunoblotting (IB) com extrato proteico de epiderme e com extrato proteico de L. (V.) braziliensis; (iii) imunofluorescência indireta (IFI) com substrato de pele humana e soro de pacientes com LTA. A resposta celular foi realizada por teste intradérmico de Montenegro (TIM). A tipificação dos alelos HLA -DR e -DQ foi realizada por PCR-SSOP. Resultados: A resposta humoral às Dsg confirmou o esperado - anti-Dsg1: 84,6% no grupo PF e 54,8% no grupo PV; e antiDsg3: 83,9% no PV; não havendo diferença significativa entre os grupos LTA e controles - anti-Dsg1: 16% nos familiares de PF (FPF); 5,2% no grupo LTA; 4,2% no grupo FPV; e 2,7% nos controles vizinhos; e anti-Dsg3: 12% no grupo FPF; 6,4% no grupo PF e 5,2% no grupo LTA. Houve reconhecimento dos peptídeos de 130kDa (corresponde ao PM da Dsg3), 145kDa, 150kDa (Dsg2), 160kDa (Dsg1), 230kDa (BP230), 250kDa, 290kDa, 350kDa, 410kDa, 425kDa e 460kDa da epiderme humana por soro de pacientes com LTA. A IFI resultou positiva para anti-IgG em 2/6 pacientes com LTA. Em um deles, houve reconhecimento de peptídeos intercelulares da epiderme, guardando semelhança aos pênfigos; e, no outro, de antígenos da zona da membrana basal, guardando semelhança ao penfigoide bolhoso. A resposta humoral a L. (V.) braziliensis resultou mais elevada no grupo LTA (73% para LTAc e 62% para LTAm) em relação aos demais grupos, sem diferença significativa entre os grupos pênfigos (1,3% no grupo PF e 1,6% no PV) e os controles (10,8% nos controles vizinhos e 4% no grupo FPF, FPV e controles Banco de Sangue). Pacientes com pênfigos apresentaram títulos sorológicos para T. cruzi semelhantes aos controles. Houve reconhecimento de peptídeos de L. (V.) braziliensis pelo soro dos pacientes com pênfigo (45kDa, 95kDa, 100kDa, 120kDa, 125kDa, 145kDa, 150kDa, 305kDa, 330kDa, 410kDa e >500kDa). O TIM foi negativo nos 6 pacientes com PF ou PV avaliados. Os alelos DRB1*01:02 e DQA1*01 mostraram associação de resistência para LTA e suscetibilidade para PF; o alelo DRB1*04:02 de resistência para LTA e suscetibilidade para PV; os alelos DRB1*07:01 e *11:01 de suscetibilidade para LTA e resistência para PF; e o DQA1*01:02 mostrou associação de suscetibilidade a ambos LTA e PF. Conclusões: os pacientes com LTA têm resposta humoral às Dsg 1 e 3, e os pacientes com pênfigo, aos antígenos de L. (V.) braziliensis e de T. cruzi semelhante aos controles. Os soros de pacientes com pênfigos reconhecem peptídeos da epiderme e da zona da membrana basal por IB e IFI. Os demais peptídeos reconhecidos pelos pacientes com LTA ao extrato epidérmico, assim como dos pacientes com pênfigos ao extrato de L. (V.) braziliensis necessitam sequenciamento. As associações de suscetibilidade ou resistência dos alelos HLA de classe II -DR e -DQ são opostas para LTA e pênfigo. Os resultados confirmam a não participação do parasito L. (V.) braziliensis na patogênese dos pênfigos, assim como corroboram a observação clínica da ausência da associação de ambas as doenças na região do estudo / Pemphigus is an autoimmune bullous dermatosis, endemic in some areas, such as in the northeastern of São Paulo state, characterized by the production of autoantibodies against desmoglein (Dsg) - keratinocytes adhesion proteins. Pemphigus vulgaris (PV) affects mucous membranes and skin, by the production of anti-Dsg 3 and 1, respectively. Pemphigus foliaceus (PF) affects only the skin, by the production of anti-Dsg 1. This region is also endemic for American Cutaneous Leishmaniasis (ACL), whose main etiological factor is Leishmania (V.) braziliensis. Objectives: To relate immunogenetic factors of pemphigus with those of ACL, investigating, in patients with pemphigus, ACL and controls: the humoral response to Dsg 1 and 3; the humoral and cellular responses to Leishmania antigens; and the association of class II -DR and -DQ HLA alleles in ACL group with those of susceptibility and resistance described in pemphigus. Methods: The humoral response was investigated by (i) ELISA for determination of anti-Dsg1 and anti-Dsg3 antibodies and anti-antibodies from T. cruzi and L. braziliensis; (ii) immunoblotting (IB) with protein extract of the epidermis and protein extract of L. braziliensis; (iii) indirect immunofluorescence (IIF) with human skin substrate and serum of ACL patients. The cellular response was carried out by intradermal test Montenegro (ITM). The typing of HLA-DQ and -DR alleles was performed by PCR-SSOP. Results: The humoral response to Dsg confirmed expected in groups of PV and PF (anti-Dsg1: 84.6% in the PF group and 54.8% in the PV group, and anti-Dsg3: 83.9% in PV), with no significant difference between the ACL and control groups [anti-Dsg1: 16% in relatives of PF (RPF), 5.2% in the ACL, 4.2% in relatives of PV (RPV) and 2.7% of controls neighbors; anti-Dsg3: 12% in RPF, 6.4% in the PF group and 5.2% in ACL)]. There has been recognition of peptides 130kDa, 145 kDa, 150kDa, 160kDa, 230 kDa, 250 kDa, 290 kDa, 350 kDa, 410 kDa, 425 kDa and 460 kDa of human epidermis by serum of ACL patients. The IFI was positive in 1/6 ACL patients evaluated. The humoral response to L. braziliensis resulted higher in ACL group (73% to ACLc and 62% to ACLm) compared to the other groups, with no significant difference between pemphigus groups (1.3% in the PF group and 1.6% the group PV) and controls (10.8% in neighboring controls and 4% in FPF, in FPV and BS controls). Patients with pemphigus have serological titers to T. cruzi similar to controls. There was L. braziliensis recognition of peptides by the patients with pemphigus (45 kDa, 95 kDa, 100 kDa, 120 kDa, 125 kDa, 145 kDa, 150 kDa, 305 kDa, 330 kDa, 410 kDa and> 500 kDa). The ITM was negative in 06 patients with PF or PV evaluated. The DRB1*01:02 and DQA1*01 showed resistance association for LTA and susceptibility to PF; allele DRB1*04:02 resistance to ACL and susceptibility to PV; the DRB1*07: 01 and *11:01 susceptibility to ACL and resistance to PF; and DQA1*01:02 showed susceptibility association with both ACL and PF. Conclusions: Patients with ACL have humoral response to Dsg 1 and 3, and pemphigus patients to L. braziliensis and T. cruzi antigens similar to controls. The peptides recognized by patients with pemphigus to L. braziliensis extract require sequencing. The susceptibility or resistance associations of class II -DR and -DQ HLA alleles are opposed to ACL and pemphigus. The results confirm the non-participation of the parasite L. (V.) braziliensis in the pathogenesis of pemphigus, as well as support the clinical observation of the absence of both diseases association