Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-02-09T11:29:30Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vanessa Neiva Guimarães - 2014.pdf: 1861965 bytes, checksum: b20503a402ca34d455345a46eb029d8c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-20T10:45:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vanessa Neiva Guimarães - 2014.pdf: 1861965 bytes, checksum: b20503a402ca34d455345a46eb029d8c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-20T10:45:33Z (GMT). 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Thus, the identification of circulating serotypes and also the characterization of the genomic variants have been considered important on disease surveillance, since the introduction of new variants can be a risk factor for severe dengue. In this context, the present study aimed to investigate the occurrence of DENV infection in individuals treated at health centers in Goiânia, Goiás in the epidemic period 2012-2013, using serological and molecular methods for determining the rate of positivity and identification of serotypes/genotypes in the circulating virus. For this, 278 samples from suspected individuals of DENV infection, which were submitted to the research of serological markers NS1, IgM and IgG using a commercial kit, as well as viral RNA detection and serotype identification by RT-PCR for region C-prM. The positivity for infection was 43.9%, with rates of 30.5%, 13.6% and 20.5% for NS1, IgM and RNA, respectively. Considering the RNA-positive samples, 31.5% were DENV1 and 68,5% were DENV4, which were subjected to nucleotide sequencing of the E/NS1 junction to characterize the viral genotype. Phylogenetic analysis classified the DENV1 samples as genotype V, that differentiated into two clades, which may reflect the occurrence of genetic variants with differences in evolutionary history. For DENV4 samples, classified as genotype II, was observed a phylogenetic proximity between the strains analyzed and others strains of the country and Latin America. These results demonstrate the effectiveness of the combination methods in the diagnosis of DENV infection. Still, the molecular evaluation has proven crucial to establish a complete data base to be used for surveillance studies, collaborating with investigations of the dynamics of the virus and the expected profile for future epidemics. / A dengue é um dos maiores desafios para a saúde pública no Brasil e no mundo. O vírus dengue (DENV) é um arbovírus da família Flaviviridae, gênero Flavivírus, classificado em quatro sorotipos antigenicamente distintos DENV1-4. Desde a introdução do DENV1 em Goiás, o cenário da dengue consistiu de epidemias sucessivas de dengue com alternância da predominância entre os sorotipos. Um dos fatores que têm sido associados à patogênese desta infecção, é a ocorrência de uma resposta imune sorotipo cruzada em infecções secundárias. Assim, a identificação dos sorotipos circulantes, bem como a caracterização das variantes genômicas, têm sido consideradas importantes na vigilância da doença, uma vez que a introdução de novas variantes pode constituir um fator de risco para a gravidade da doença. Nesse contexto, o presente estudo objetivou investigar a ocorrência de infecção pelo DENV em indivíduos atendidos em unidades de saúde no município de Goiânia, Goiás no período epidêmico de 2012-2013, utilizando métodos sorológicos e moleculares, para determinação do índice de positividade e identificação dos sorotipos/genótipos do vírus circulantes. Para isso, foram coletadas 278 amostras de indivíduos suspeitos de infecção pelo DENV, as quais foram submetidas à pesquisa dos marcadores sorológicos NS1, IgM e IgG utilizando kit comercial, bem como a detecção do RNA viral e identificação do sorotipo através de RT-PCR para a região C-prM. A positividade para a infecção foi de 43,9%, com índices de 30,5%, 13,6% e 20,5%, para os marcadores NS1, IgM e RNA, respectivamente. Das 57 amostras RNA positivas, 31,5% eram DENV-1 e 68,5% DENV-4, as quais foram submetidas ao seqüenciamento de nucleotídeos da região da junção E/NS1 para a caracterização do genótipo viral. As análises filogenéticas classificaram as amostras DENV1 como genótipo V, sendo observada a diferenciação em dois clados, podendo refletir a ocorrência de variantes genéticas com diferenças na história evolutiva. Para as amostras DENV4, classificadas como genótipo II, foi observada uma proximidade filogenética entre os isolados deste estudo e outros isolados do país e América Latina. Estes resultados demonstram a eficácia da combinação de metodologias no diagnóstico desta infecção. Ainda, a avaliação molecular mostra-se fundamental para estabelecer uma base de dados completa a ser utilizada para estudos de vigilância, colaborando com investigações da dinâmica do vírus e o padrão esperado para as epidemias futuras.

A busca por combustíveis renováveis tem se expandido cada vez mais no mundo moderno, devido à preocupação com a redução do volume de emissões de gases causadores do efeito estufa. No presente trabalho descreve-se a caracterização físico-quíca e espectroscópica de gramíneas com potencial para geração de Etanol 2G (Sorgo Biomassa, Capim Elefante, Capim Marandu, Capim Mombaça). As matrizes vegetais foram caracterizadas por diferentes técnicas, incluindo Análise Elementar, Ressonância Magnética Nuclear (RMN) de 13C, difração de raios X (DR-X), espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourrier (FTIR), microscopia eletrônica de varredura acoplada com detector de energia dispersiva (MEV-EDS). Os componentes extraídos foram avaliados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e por espectroscopia de absorção eletrônica (UV-VIS). O bagaço de cana apresentou maior teor de C com 45,0%, o colmo do Capim-Marandu apresentou maior concentração de O com 46,1%; a concentração de H para todos os materiais ficaram próximas dos 5%; as folhas do Capim-Marandu apresentaram 4,5% de teor de S; as folhas de Capim-Elefante e do Sorgo apresentaram maior concentração de N que tiveram como média 2%. As análises da composição lignocelulósica por via ácida diluída mostraram que os colmos possuem maior concentração de celulose, hemicelulose e lignina, enquanto as folhas apresentaram maiores teores de inorgânicos (cinzas). As análises por RMN dos materiais brutos mostraram as mesmas tendências de composição orgânica. A DR-X mostrou uma maior presença de celulose cristalina nos colmos, bem como a presença de materiais silicatados na folhas. As análises por FTIR indicaram nos colmos as maiores intensidades de sinal na região das bandas de polissacarídeos (1030-1100 cm-1). As folhas apresentaram um sinal peculiar de ligações C-O-C em carbonatos na forma fina e intensa (sharp) na região de 1380 cm-1. Também foi empregado o método de Van Soest para caracterização da composição geral da biomassa, sendo os resultados não comparáveis com os observados pelo método em via ácida, superestimando a quantidade de celulose e subestimando os valores de lignina. Com as imagens de MEV foi possível identificar estruturas internas dos materiais estudados, comprovando o ordenamento das fibras vegetais. Apesar das folhas possuirem menor teor de celulose, este polissacarídeo está mais amorfo, comparada com os colmos. No geral, os resutados mostraram que as diferentes gramíneas possuem muita similaridade química-estrutural, fato que deve possibilitar o uso de um mesmo processo de hidrólise, independentemente da fonte. / The search for renewable fuels has been increasing in the modern world, due to this worring about the reduction in the volume of emissions of greenhouse. In this study we describe the physical-chemical and spectroscopic characterization and the grass potential in generating 2G Ethanol (Sorgum, Marandu, Elephant and Mombaça). The plant matrices were characterized by different techniques, including Elemental Analysis, Nuclear Magnetic Resonance (NMR) 13C, X-ray diffraction (XRD), infrared spectroscopy with Fourier transform (FTIR), scanning electron microscopy coupled with energy dispersive detector (SEM-EDS). The extracted components were evaluated by high performance liquid chromatography (HPLC) and spectroscopy of electronic absorption (UV-VIS). Sugarcane bagasse showed higher C content with 45.0%, the stem Marandugrass had the higher O with 46.1%; H concentration for all materials were closer than 5%; the Marandugrass leaves showed 4.5% of the sulfur content; leaves Elephantgrass and sorghum showed higher N which had the average 2%. Analyses of lignocellulosic composition by acid way showed that stems contain higher concentrations of cellulose, hemicellulose and lignin, since leafs presented higher contents of inorganics (ash). NMR analyses of the raw materials showed the same tendence of organic composition. XRD showed higher content of cristaline cellulose in the stem, as well as, the presence of silicate materials in the leafs. FTIR indicated the major stems signal intensities of the bands in the region of polysaccharides (1030-1100 cm-1). The leaves had a peculiar C-O-C signal connection in the form of sharp carbonates in the region 1380 cm-1. It was also used the Van Soest melthod regaring to general characterization of the biomass, but the resultas were not comparable to the acid way method, because it overvalues the cellulose contents and undervalues the lignin ones. By the SEM images, they were identified internal structures of the studied materials, proving the system of the ordenated plant fibers. Despite leafs presented lower contents of cellulose, this polysacharide is amorfous, comparing to stems. In general, results showed that these different grasses have chemical-structural similarities, which probably makes possible the use of the same hydrolysis process, independently of the biomass source.

Quatorze amostras provenientes da Real Fábrica de Ferro Ipanema (RFFI) e do sitio arqueológico de Sardinha (SAS) foram investigadas, usando técnicas de caracterização microestrutural e de análise química, com o objetivo de identificar o processo de produção de cada artefato, assim como estabelecer uma assinatura microestrutural daqueles sítios, situados no entorno do morro de Araçoiaba, localizado em Sorocaba. Quatro destas amostras são não metálicas (duas de minério e duas de escória) e dez amostras são metálicas. Os resultados de difração de raios-x e de análise química das amostras de minério indicam que os mesmos são constituídos de aproximadamente 80% magnetita, 20% hematita e traços de Ti. A microanálise EDX (Energydispersive X-ray spectroscopy) das amostras de escória indicam que as mesmas são constituídas por SiO2, CaO e Al2O3, com presença adicional de TiO2. A análise microestrutural dos objetos metálicos mostrou que dois dos dez objetos metálicos possuem microestrutura de matriz ferrítica com veios de grafita, aqui classificados como ferro gusa. Os demais objetos metálicos mostram microestrutura típica de aço (sem precipitação de grafita). A análise de inclusões não metálicas destas amostras revelou que duas delas não possuem inclusões de escória (apenas inclusões do tipo sulfeto série fina). Estes artefatos foram possivelmente produzidos no século XX e foram descartados da investigação. Empregou-se a técnica de caracterização microestrutural associada à microanálise EDX para a análise das inclusões de escória dos seis objetos de aço (análise de 30 inclusões por amostra). Foram construídos gráficos mostrando as relações entre os principais constituintes destas inclusões (%FeO versus %SiO2 , %SiO2 versus %Al2O3, %Al2O3 versus %MgO e %CaO versus % K2O). Utilizou-se então a técnica de regressão linear para cada uma destas relações (com a reta passando e sem passar pela origem) para avaliar o coeficiente de determinação R2 e a existência de uma assinatura do sistema produtivo baseado numa hipótese proposta por P. Dillmann. Aplicou-se ainda o teste de t de Student para avaliar a hipótese de reta passando forçosamente pela origem, como proposto por Dillmann. A hipótese mostrou-se irrealista. Finalmente foi construído um gráfico multiparamétrico da relação P2O5 versus [(Al2O3 + MgO + K2O)/FeO] das amostras de aço, que permite distinguir dois campos, segundo proposição de Dillmann: o campo das peças produzidas por processo indireto (ferro gusa + refino) e o das peças produzidas por redução direta Os resultados sugerem que dois objetos metálicos provenientes da RFFI foram produzidos por redução direta e outro por redução indireta, enquanto as três amostras do SAS localizam-se no campo da redução direta. O trabalho mostrou a importância da microanálise química de inclusões de escória como ferramenta para estabelecer o processo produtivo dos artefatos ferrosos estudados. / Fourteen samples belonging to the Real Fábrica de Ferro Ipanema (RFFI) and the archaeological site of Sardinha (SAS) were investigated, using microstructural characterization and chemical analysis, in order to identify the production route of each ferrous artefact and well as establish a microstructural signature of those sites, located in the vicinity of the hill Araçoiaba, located in Sorocaba.. Four of these samples were non-metallic (two ore samples and two slag samples) and ten samples were metallic. X-ray diffraction and chemical analysis results of the ore samples indicated that they were composed of approximately 80% magnetite, 20% hematite and traces of Ti. Microanalysis EDX (Energy-dispersive X-ray spectroscopy) of slag samples indicated that they consisted of SiO2, CaO and Al2O3, with additional presence of TiO2. Microstructural analysis of the metallic objects showed for two samples a ferritic matrix with graphite flakes, here classified as pig iron. The remaining metallic objects showed microstructures typical of steel (ferrite and/or pearlite without graphite precipitation). The analysis of non-metallic inclusions for these eight samples revealed that two of them had no slag inclusions (only the presence of thin series sulphide-type inclusions). These two artefacts were possibly produced in the XX century and were, therefore, excluded from the present investigation. Microstructural characterization associated with EDX microanalysis was applied to investigate the slag inclusions of the remaining six steel objects (30 inclusions per sample). Graphs were constructed showing the relationships between the major components of these slag inclusions (%FeO versus %SiO2, %SiO2 versus %Al2O3, %Al2O3 versus %MgO and %CaO versus % K2O). Linear regression (forcing the line passing through the origin and without forcing it) was carried out for each one of these ratios in order to evaluate the value of the R2 coefficient and to investigate the possible existence of a signature of the RFFI productive system based on Dillmanns proposition. Additionally, Student\'s t-test was used to evaluate the strength of the assumption of having \"a line passing through the origin for each one of the component ratios, as proposed by Dillmann. This study could not establish or identify the signature of the RFFI productive system. Additionally, the assumption of having a line passing through the origin for each investigated component ratio was shown to be the rather unrealistic. Finally a %P2O5 versus [(%Al2O3+%MgO+%K2O )/FeO ] graph was constructed and its analysis allowed theorizing about the manufacturing process of these ferrous artefacts, second the Dillmann proposition. This graph showed two distinct composition fields: one field identifying the artefacts produced by the indirect process (pig iron followed by refining) and the other by direct reduction. Two RFFI artefacts were produced by direct reduction and one single RFF artefact by indirect reduction. Three SAS artefacts were produced by direct reduction. The present study showed the importance of slag inclusions EDX microanalysis as a tool to establish the manufacturing process of ferrous artefacts.

Soluções sólidas de CeO2:Gd2O3 foram obtidas a partir de três técnicas de síntese que se utilizam de matrizes poliméricas: técnica dos precursores poliméricos ou citratos, técnica do citrato amorfo e técnica do PVA. O principal objetivo deste trabalho é a obtenção de pós reativos e cerâmicas sinterizadas densas. Para a caracterização dos materiais, foram analisadas as resinas precursoras, o pó calcinado a duas temperaturas e os compactos sinterizados. Os principais resultados mostram que: as soluções sólidas podem ser obtidas a temperaturas relativamente baixas; os pós apresentam tamanho nanométrico de partículas; a densificação é dependente da técnica de síntese e do teor de dopante. A técnica do PVA deve ser utilizada com cuidado, principalmente quando há possibilidade de ocorrer auto-ignição durante a decomposição térmica da resina precursora. Utilizando-se a técnica dos precursores poliméricos, o teor de carbono residual foi mais elevado do que nas outras duas técnicas, como esperado. A técnica do citrato amorfo foi a que permitiu obter cerâmicas mais densas. A resistividade elétrica da cerâmica sinterizada é função do teor de dopante, do teor de pureza e da porosidade, como sugerido na literatura. / CeO2:Gd2O3 solid solutions have been prepared by the following techniques based on polymeric matrices: the citrate, the amorphous citrate and the PVA techniques. The main purpose was to obtain reactive powders for preparing highly dense sintered ceramic pieces. The precursor resin, calcined powders and sintered compacts were studied by several techniques for complete characterization. The main results show that solid solutions may be obtained at relatively low temperatures and that powder particles are in the nanosize range, whatever is the technique used for the synthesis of the solid solution. However, the densification of sintered compacts is found to be dependent on dopant content and synthesis technique. The PVA technique should be used with caution, mainly due to combustion that may occur during precursor decomposition. The residual carbon content was found to be higher for powder prepared by the citrate technique. Specimens with high densification were obtained following the amorphous citrate technique. Electrical resistivity results are in agreement with previous results that suggest a dependence of the porosity of the sintered compacts on the dopant content and also on the material chosen for precursor.

A esterilidade é um requisito indispensável para a maioria dos biomateriais. Devido à sensibilidade dos hidrogéis, a sua esterilização apresenta-se como um desafio, sobretudo quando estão em causa nanoestruturas ou a presença de fármacos. O objetivo deste trabalho foi estudar os principais efeitos de diversos métodos de esterilização nas propriedades de diferentes tipos de sistemas à base de hidrogel. Além dos métodos convencionais (calor húmido e radiação gama) foi aferida a aplicabilidade da esterilização por ozono, um processo que embora se revele recente e ainda em fase de desenvolvimento, não deixa, no entanto, de ser bastante promissor. Estudou-se uma formulação de hidrogel natural nanoparticulado à base de quitosano (nanogel), com um largo espectro de possíveis aplicações, e duas formulações de hidrogéis sintéticos para aplicações oftálmicas (modelos de lentes de contato convencional e da nova geração de silicone-hidrogel), com e sem fármacos incorporados. Avaliaram-se alterações nas principais propriedades vitais ao bom desempenho e integridade dos materiais. No caso do nanogel: tamanho médio de partícula, potencial zeta, índice de polidispersão, absorvância, morfologia, estrutura química e citotoxicidade. No caso dos hidrogéis sintéticos: intumescimento, propriedades ópticas, permeabilidade iónica, molhabilidade, morfologia e topografia, estrutura química, propriedades mecânicas, citotoxicidade e perfil de libertação dos fármacos. Para garantir a melhor eficácia dos métodos de esterilização, realizaram-se testes de esterilidade após a contaminação intencional das amostras com diferentes cargas dos respetivos indicadores biológicos. A esterilização por calor húmido revelou-se o método mais agressivo, no caso do nanogel, e o menos agressivo para os hidrogéis sintéticos, quer na presença quer na ausência de fármacos. Relativamente à irradiação gama, para o nanogel, verificou-se que a sua resistência à irradiação aumenta consideravelmente na presença de açucares protetores. Já os hidrogéis sintéticos mostram-se resistentes à técnica, apresentando sinais de degradação evidente apenas para a dose mais elevada (25 kGy). Na presença de fármacos, a irradiação gama mostrou-se inadequada devido à sensibilidade dos mesmos. Os resultados obtidos são promissores no que diz respeito à aplicabilidade da esterilização por ozono, tanto para o nanogel como para os hidrogéis sintéticos, sem fármacos incorporados. Os fármacos sofrem, na generalidade, degradação quando expostos a este agente oxidante. Em suma, face à evidente complexidade dos fatores envolvidos (e.g. natureza, composição e propriedades dos materiais, estabilidade dos fármacos, condições e parâmetros dos processos esterilização), torna-se difícil generalizar os efeitos e prever o resultado dos métodos de esterilização. A escolha do processo mais adequado deve, portanto, ser feita caso a caso. / Sterility is mandatory requirement for most biomaterials. Because of their known sensitivity, hydrogel sterilization poses as a challenge, particularly when it comes to nanostructures or when drugs are incorporated. The main goal of this work was to study the key effects of different sterilization methods on the properties of different types of hydrogel-based systems. In addition to the conventional methods (steam heat and gamma radiation) the applicability of a promising new ozone method was assessed. Two formulations of synthetic hydrogels for ophthalmic applications (representing conventional contact lenses and new generation silicone-hydrogel contact lens), unloaded and loaded with ophthalmic drugs, were studied; and a natural chitosan-based nanostructured hydrogel (nanogel), with a broad spectrum of possible applications. Changes in the essential properties were evaluated. For synthetic hydrogels: swelling, optical properties, ionic permeability, wettability, morphology and topography, chemical structure, mechanical properties, cytotoxicity and drug release profile. For the nanogel: average particle size, zeta potential, polydispersity index, absorbance, morphology, chemical structure and cytotoxicity. In order to ensure the effectiveness of the sterilization methods, sterility tests were carried out after purposely contaminating the samples with different loads of biological indicators. Seam heat sterilization proved to be the most aggressive method for the nanogel, while being the least aggressive for the synthetic hydrogels in the presence and absence of drugs. Regarding gamma irradiation, the nanogel resistance to irradiation increased considerably in the presence of protective sugars. The synthetic hydrogels were resistant to this technique, showing signs of severe degradation only at the highest dose (25 kGy). In the presence of drugs, gamma irradiation proved to be inadequate due to drug degradation. The obtained results were encouraging with regard to the applicability of ozone sterilization for both the nanogel and the unloaded synthetic hydrogels. The drugs generally undergo degradation when exposed to this oxidizing agent. In view of the evident complexity of the factors involved (e.g. nature, composition and properties of materials, drug stability, conditions and parameters of sterilization processes), it is difficult to generalize the effects and predict the outcome of the sterilization methods. The selection of the most suitable procedure must be made on a case-by-case basis.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Surfactantes nÃo iÃnicos sÃo sintetizados a partir de matÃrias-primas renovÃveis tais como Ãlcoois graxos e aÃÃcares. Exibem seguranÃa dermatolÃgica, biodegradabilidade e excelentes propriedades de superfÃcie ativa, tal como uma boa molhabilidade, boa produÃÃo de espuma e boa habilidade de limpeza. O presente trabalho trata da sÃntese e caracterizaÃÃo de surfactantes alquil poliglicosÃdicos cuja parte hidrofÃlica à constituÃda de oligossacarÃdeos derivados da degradaÃÃo da amilose e a parte hidrofÃbica à constituÃda de lipÃdios fenÃlicos que constituem o LÃquido da Castanha do Caju (LCC). A reaÃÃo de condensaÃÃo entre as partes hidrofÃlica e hidrofÃbica foi realizada atravÃs da reaÃÃo de KÃenig-Knorr com algumas modificaÃÃes. A caracterizaÃÃo estrutural dos surfactantes foi acompanhada por ressonÃncia magnÃtica nuclear (RMN) juntamente com a espectroscopia de absorÃÃo na regiÃo do infravermelho (IV). As duas tÃcnicas evidenciaram bandas caracterÃsticas de anÃis aromÃticos, anÃis glicosÃdicos, olefinas e parafinas (alifÃticos). Os picos cruzados do espectro NOESY mostraram que a conformaÃÃo preferida das unidades glicosÃdicas nos grupos cabeÃa à do tipo 4C1 com uma configuraÃÃo anomÃrica. O comportamento tÃrmico dos surfactantes bem como seu comportamento em soluÃÃo (auto-associaÃÃo) à fortemente dependente de suas caracterÃsticas estruturais (grupo cabeÃa e cauda hidrofÃbica). Medidas de tensÃo superficial mostraram que os valores da ConcentraÃÃo Micelar CrÃtica (CMC) para os surfactantes estudados sÃo comparÃveis aos valores citados na literatura para surfactantes nÃo iÃnicos. O estudo da isoterma de tensÃo superficial versus logaritmo natural da concentraÃÃo indicou que o comportamento de agregaÃÃo dos alquilfenil glicosÃdeos à dependente de suas caracterÃsticas estruturais. Os valores de Ãrea por molÃcula âAâ indicam que os cardil glicosÃdeos provavelmente formam agregados menores do que os cardanil e anacardil glicosÃdeos. ConsideraÃÃes teÃricas sobre os dados de parÃmetros crÃticos de empacotamento (PCE) indicam que os principais tipos de agregados sÃo do tipo vesÃculas e bicamadas, indicando a possibilidade da formaÃÃo de nanotubos por auto-associaÃÃo uma vez que estas estruturas sÃo intermediÃrias e que antecedem a formaÃÃo de nanoestruturas em soluÃÃo. / Nonionic surfactants are synthesised from renewable raw materials such as fat acids and sugars. They are dermatological safe, biodegradable and provide excellent surface active properties, such as good wettability, good foaming production and good cleaning ability. The present work deals with the synthesis and characterization of alkyl polyglycosides where the hydrophilic part is constituted of oligosaccharides derived from the degradation of amylose and the hydrophobic part is constituted from phenolics lipids which constitute the cashew nut shell liquid (CNSL). The condensation reaction between the hydrophilic and hydrophobic parts is the usual KÃenig-Knorr reaction with some modifications. The structural characterization of the surfactants was followed by nuclear magnetic ressonance (NMR) together with Fourier transform IR spectroscopy (FT-IR). The two techniques showed evidence of characteristics bands of aromatic rings, glycosides rings, olefin and paraffin. The cross-peak NOESY spectra demonstrated that the preferred conformation of the glycosidic units in the head groups was of 4C1 type with an anomeric  configuration. The thermal behaviour of the surfactants as well as their behaviour in solution (selfassembly) is strongly dependent of its structural characteristics (head group and hydrophobic tail). Measures of surface tension demonstrated that the Critical Micelle Concentration (CMC) values for the surfactants studied were comparable to the values cited for the nonionic surfactants in the literature. The isothermic study of surface tension versus the concentration natural logarithm indicates that the aggregation behaviour of the alkylphenyl glycosides is dependent of its structural characteristics. The values of the area per molecule âAâ indicate that cardyl glycosides probably form larger aggregates than cardanyl e anacardyl glycosides. Theoretical considerations about the critical packing parameters (CPP) data showed that the major kinds of aggregates are of vesicles and bilayer types indicating the possibility of nanotubes formation by self-assembly once these structures are intermediaries that anticipate the nanostructure formation in solution.

As doenças entéricas apresentam uma grande importância na saúde das aves. Astrovírus de galinha (CAstV), vírus da nefrite aviária (ANV) e parvovírus de galinha (ChPV) são vírus que foram relacionados com problemas entéricos em lotes comerciais de galinhas, sendo identificados em galinhas com sintomas de doença entérica. Existem poucas informações relacionadas a estes três vírus que estão sendo investigados como causadores de problemas entéricos, especialmente de diarreia, sintoma relacionado com a síndrome do nanismo e perda de ganho de peso nas granjas avícolas. Os objetivos do presente trabalho foram: a) realizar a caracterização molecular destes vírus; b) determinar a patogenicidade do ChPV, CAstV e ANV isolados de galinhas com doença entérica. As técnicas moleculares para a caracterização molecular dos vírus, para a detecção e quantificação das partículas virais foram utilizadas, e a análise histopatológica foi utilizada para a avaliação das lesões. Pintinhos SPF de um dia de idade foram divididos em quatro (04) grupos, cada grupo recebeu um dos três vírus isolados e o grupo restante foi usado como controle negativo. Os animais foram mantidos por 42 dias com água e ração ad libitum em isoladores individuais para cada grupo, a cada sete (07) diasforam obtidas amostras de intestino. Os três grupos infectados apresentaram após 12 horas da infecção, sinais de doença entérica, como: depressão, sonolência, penas eriçadas e principalmente diarreia. Após 10 dias da inoculação era evidente a desuniformidade no tamanho dos animais, com a presença de animais com nanismo. A avaliação macroscópica das aves mostrou a presença de intestinos distendidos, cheios de gás e liquido. O exame microscópico diferenciou o grupo infectado com ChPV dos demais, ocorrendo microabscessos de cripta, células em necrose com distribuição multifocal, e enterite linfoplasmocítica discreta. Os dois grupos restantes mostraram uma discreta hiperplasia de cripta e enterite linfoplasmocítica. Para cada um dos grupos de aves infectados foram estabelecidos ensaios de PCR em tempo real (qPCR), que detectaram que os três grupos de aves experimentais eram positivos (100%) para seu correspondente vírus com a maior carga viral aos sete dia de idade, diminuindo drasticamente após 21 dias de idade, no entanto, continuando presente até o 42° dia de idade. O grupo controle negativo não apresentou a presença de vírus, nenhum dos sintomas ou lesões. O peso dos animais em cada grupo infectado diminuiu levemente em comparação ao grupo controle negativo, mas sem diferença estatística significativa (p>0,05). A caracterização molecular e a análise filogenética dos vírus estudados determinou que a cepa de CAstV pertencia ao grupo I dos CAstV e se relaciona com as cepas que estão circulando nos USA. A cepa de ANV pertence ao grupo ANV-1 e apresentou maior porcentagem de similaridade com a cepa do Japão. A cepa do ChPV foi classificada no grupo do isolado da Hungria. Os resultados do presente trabalho caracterizaram o CAstV como parte do Grupo I, o ANV como um ANV-1 e o ChPV como parte do grupo do isolado da Hungria e mostraram que as cepas de ChPV, ANV e CAstV estudadas produzem doença entérica / Enteric diseases are of great importance in the health of birds. Chicken astrovirus (CAstV), avian nephritis virus (ANV) and chicken parvovirus (ChPV) are viruses that have been associated with enteric problems in chickens commercial flocks, being identified in chickens with symptoms of enteric disease. There is little information regarding these three viruses that are being investigated as the cause of enteric problems, especially diarrhea, symptoms related to runting stunting syndrome in poultry. This work aims to perform molecular characterization and determine the pathogenicity of ChPV, CAstV and ANV isolated from chickens with enteric disease. A multidisciplinary approach was used as molecular techniques for the molecular characterization of the viruses for the detection and quantification of the viral particles, histopathological analysis was used for evaluation of the lesions. Chicks SPF one day of age were divided into four (04) groups and each group received one of the three virus isolates and the remaining group was used as negative control, the animals were maintained for 42 days with water and food ad libitum in individual isolators for each group, every seven (07) days intestine samples were obtained. The three infected groups showed after 12 hours of infection, signs of enteric diseases, such as depression, drowsiness, ruffled feathers and mainly diarrhea. After 10 days of inoculation was evident non-uniformity in size of the animals, and the presence of animals with dwarfism. Macroscopic evaluation of the animals showed the presence of distended intestines filled with gas and liquid. Microscopic examination differentiated the group infected with ChPV the other two groups, showing abscess crypt cells in necrosis with multifocal distribution, and discreet linfoplasmocitic enteritis. The remaining two groups showed slight crypt hyperplasia and a discrete linfoplasmocít enteritis. For each of the infected groups real time PCR (qPCR) assays were established, showing the three experimental groups positive (100%) to its corresponding virus and most viral load to seven day old decreasing sharply after 21 days age, however this continuing until 42 days of age. The negative control group showed no viruses, no symptoms or injuries. The weight of the animals in each infected group dropped slightly compared to the negative control group, but without significant difference (p> 0.05). Molecular characterization and phylogenetic analysis of the studied viruses determined that the CAstV strain studied belong to group I of CAstV and is related to the strains that are circulating in the USA. The ANV strain belongs to ANV-1 group and showed a higher percentage of similarity with the Japanese strain. The ChPV strain belongs to group of isolated of Hungary. The results of this study characterized the CAstV as part of Group I, ANV as a ANV-1 and ChPV as a part of group of isolated of Hungary, showed that the strains of ChPV, ANV and CAstV studied produce enteric disease

A Laringotraqueíte Infecciosa (LTI) é uma doença respiratória altamente contagiosa, que acomete principalmente galinhas, é causada por um Gallid herpesvirus tipo 1. As aves infectam-se através do trato respiratório e por via ocular, sendo as aves com infecção clínica as principais transmissoras do vírus. Outras fontes de transmissão são as aves com infecções latentes, materiais de cama e fômites contaminados. Os sinais clínicos geralmente aparecem entre 6 a 12 dias da exposição natural e em infecções experimentais entre 4 a 7 dias pós infecção (p.i). Na forma subclínica pode-se observar uma leve traqueíte mucoide, sinusite, conjuntivite, com morbidade variável e baixa mortalidade. Na forma severa, as aves apresentam depressão, dispneia, espirros, corrimento nasal, conjuntivite, expectoração de secreção sanguinolenta. A taxa de morbidade é alta, comprometendo 100% do lote e a mortalidade pode ocorrer em até 70% do plantel, embora taxas de 10 a 20% sejam as mais frequentes. O agente causador desta doença pode ser propagado na membrana corio-alantóide (MCA) de embriões de frango em desenvolvimento e replicado em células de rim de frangos adultos, como também, em uma variedade de células epiteliais de embrião como do rim, do fígado e do pulmão. Existem vários procedimentos para o diagnóstico da LTI como: a observação de sinais clínicos, a observação de lesões macroscópicas e lesões histopatológicas e o uso de técnicas moleculares como: RFLP, PCR e PCR em tempo real. Como a PCR em tempo real apresenta uma maior sensibilidade quando comparada com outros métodos de diagnóstico, permite quantificar o número de cópias amplificadas do genoma viral, assim como, a diferenciação da doença na fase aguda ou crônica, reduzindo o número de possíveis falsos positivos, esta foi usada para a detecção deste vírus. O objetivo deste trabalho foi isolar o VLTI em ovos embrionados, descrever as lesões macroscópicas causadas pelo vírus, detectar o vírus pela reação de PCR em tempo real, usando como alvo da reação o gene ICP4, padronizar uma reação de PCR em Tempo Real usando a glicoproteína E como alvo da reação e propor o seu uso no diagnóstico de rotina. / The Infectious Laryngotracheitis (ILT) is a highly contagious respiratory disease that affects mainly chickens; caused by a Gallid herpesvirus type 1. Infect birds, by the respiratory tract and by the ocular route, the birds with clinical infection the main transmission of the virus. Other transmission sources are birds with latent infections, bedding materials and contaminated fomites. Clinical signs generally appear between 6 to 12 days exposure of the natural and in experimental infections between 4 and 7 days post infection (p.i). In subclinical form can observe a slight mucoid tracheitis, sinusitis, conjunctivitis, variable morbidity and low mortality. In the severe form, the birds present depression, dyspnea, sneezing, nasal discharge, conjunctivitis, expectoration of bloody discharge. The morbidity rate is high, impairing the lot 100% and mortality may occur in up to 70% of the flock, although 10 to 20% rates are the most frequent. The causative agent of this disease can be propagated in chorioallantoic membrane (CAM) of chicken embryos develop and replicated in adult chicken kidney cells as well as in a variety of epithelial-cell embryo as kidney, liver and lung. There are several procedures for the diagnosis of LTI as observation of clinical signs, observation of gross lesions and histopathological lesions, and the use of molecular techniques as RFLP, PCR and real time PCR. As the real-time PCR has greater sensitivity compared to other diagnostic methods to quantify the number of amplified copies of the viral genome, as well as the differentiation of the disease in the acute or chronic phase, reducing the number of potential false positives, this was used for detection of virus. The objective of this study was to isolate the VLTI in embryonated eggs, describe macroscopic lesions caused by the virus, detect the virus by PCR reaction in real time, using as a target of reaction the ICP4 gene, standardize a PCR reaction in real time using the glycoprotein E as a target of reaction and propose their use in routine diagnosis.

Muitas doenças parasitárias, consideradas negligenciadas devido à falta de investimentos para o desenvolvimento de novas estratégias de prevenção e tratamento por parte dos setores público e privado, constituem um grave problema de saúde pública mundial e um obstáculo ao desenvolvimento sócio-econômico de países pobres e emergentes. A esquistossomose, em especial, é uma parasitose causada por platelmintos trematódeos do gênero Schistosoma que afeta 78 países e aproximadamente 249 milhões de pessoas. No Brasil, o S. mansoni é o agente etiológico causador da esquistossomose, chega a atingir 19 estados e aproximadamente 6 milhões de indivíduos. Embora atualmente o fármaco praziquantel seja utilizado para o tratamento da esquistossomose, há a necessidade de busca por novas opções terapêuticas, uma vez que este possui eficácia restrita ao estágio adulto do parasita, efeitos colaterais que dificultam a adesão do paciente ao tratamento e, dada a massiva administração do medicamento, a resistência do parasita ao medicamento pode se tornar um sério problema de saúde pública. Dentro deste contexto, existe um grande interesse em buscar novos alvos macromoleculares e em particular investigar o potencial da enzima diidroorotato desidrogenase (DHODH) como possível alvo terapêutico para o desenvolvimento de terapias eficazes e seguras para o tratamento da esquistossomose. A enzima DHODH participa da quarta etapa enzimática da via de biossíntese de nucleotídeos pirimidínicos, e estudos recentes demonstram que a inibição específica desta enzima compromete a produção de nucleotídeos, e consequentemente a proliferação celular. Na verdade a enzima DHODH já é alvo validado para o tratamento de doenças como o câncer, a artrite reumatoide e doenças parasitárias como a malária. Como primeira etapa para a avaliação do potencial terapêutico da enzima DHODH no tratamento da esquistossomose, este projeto propõe a caracterização bioquímica e biofísica da DHODH de Schistosoma mansoni, bem como a identificação de inibidores para esta enzima. Os resultados obtidos até o presente momento consistem no desenvolvimento de um protocolo de expressão e purificação que permitiram a obtenção de proteína pura e com rendimento de 40 miligramas de proteína por litro de meio de cultura. Nossos estudos demonstraram que a proteína se mostra mais estável na presença de detergente, alta concentração de sal e glicerol. Ensaios de espalhamento dinâmico de luz realizados a partir de amostras de SmDHODH purificadas a partir da associação de cromatografia por afinidade com cromatografia por exclusão molecular foram utilizados para a caracterização de uma população homogênea de diâmetro aproximado de 90 Å. Ensaios de atividade enzimática e de inibição foram realizados para SmDHODH, como também para a proteína homóloga humana, HsDHODH, de forma a permitir estudos comparativos. Os resultados sugerem que o pH ótimo da reação para ambas as enzimas se encontra na faixa entre 8,0 e 8,5. O protocolo de caracterização cinética desenvolvido para estas enzimas permitiu a obtenção dos parâmetros KM e kcat, assim como dar início à realização de ensaios de inibição na presença de bancos de ligantes de origem sintética e natural. Os resultados cinéticos obtidos sugerem que a SmDHODH e a HsDHODH seguem o mecanismo ii Ping-Pong, de acordo com o que já foi descrito para as outras DHODHs, com os seguintes valores de KM e kcat: KDHO= 174 ± 18 ?M; KQo= 159 ± 18 ?M; e kcat= 27 ± 1 s-1 para a SmDHODH e KDHO= 286 ± 31 ?M; KQo= 354 ± 38 ?M; e kcat= 78 ± 4 s-1 para a HsDHODH. Foram identificados compostos químicos com potencial inibitório na faixa de 794 ? 3 ?M a 19,1 ? 0,1 nM para a SmDHODH e de 33,9 ? 0,1 ?M a 37,2 ? 0,1 nM para a HsDHODH. Os resultados deste trabalho aliado aos estudos estruturais em desenvolvimento pelo nosso laboratório serão utilizados não só para a completa caracterização da enzima, mas também para o futuro planejamento de ligantes específicos baseados na estrutura e função protéica, como uma importante ferramenta no combate à esquistossomose. / Many parasitic diseases, considered neglected due to lack of investment from the public and private sectors in the development of new strategies for prevention and treatment, are a serious global public health problem and a hindrance to the development of poor and emergent countries. Schistosomiasis, in particular, is a parasitic disease caused by trematode plathelmintes of the genus Schistosoma that affects 78 countries and approximately 249 million people. In Brazil, S. mansoni, the endemic etiologic agent of schistosomiasis, is found in 19 states and affects approximately 6 million people. Although the drug praziquantel is currently used for the treatment of schistosomiasis, this drug has limited effectiveness in the adult stage of the parasite, many side effects hamper the adherence to the patient´s treatment and, given the intense drug usage, resistant parasites can, very soon, become a serious public health problem. Thus, there is a real need for the search of new therapeutic options. Within this context, there is a great interest in the search for new macromolecular targets against Schistosoma mansoni and in particular, to investigate the enzyme dihydroorotate dehydrogenase (DHODH) as new therapeutic target for the treatment of schistosomiasis. DHODH catalyzes the conversion of dihydroorotate (DHO) to orotate (ORO) in the fourth step of the pyrimidine nucleotides pathway. Recent studies show that specific inhibition of this enzyme commits nucleotides biosynthesis and, consequently, cell proliferation. DHODH is, in fact, a validated target for the treatment of diseases such as cancer, rheumatoid arthritis and malaria. As a first step towards the evaluation of the therapeutic potential of DHODH from S. mansoni (SmDHODH) for the treatment of schistosomiasis, this project proposed the biochemical and biophysical characterization, as well as the identification of inhibitors for this enzyme. The results obtained so far included the development of an expression and purification protocol that allowed us to obtain pure protein with a good yield. In addition, our findings reveals that for SmDHODH stabilization the enzyme requires a buffer containing detergent, glycerol and high salt concentration. Dynamic light scattering studies performed with SmDHODH protein samples purified by a combination of both affinity chromatography and size exclusion chromatography allowed the characterization of a homogeneous population with approximately 90 Å diameter. In order to allow comparative studies, enzymatic and inhibitory assays were performed for SmDHODH as well as for the human homologous enzyme (HsDHODH). The results suggest that for both enzymes the optimum pH for the enzymatic reaction is found in the range of 8.0 and 8.5. The enzymatic assay developed for this class of enzymes allowed the characterization of the kinetic parameters KM and kcat for both enzymes, as well as the performance of inhibitory assays in the presence of synthetic and natural ligands. The inhibition tests allowed us the identification of chemical compounds that inhibit SmDHODH in the range of 794 ? 3 ?M to 19.1 ? 0.1 nM and HsDHODH in the range of 33.9 ? 0.1 ?M a 37.2 ? 0.1 nM. The results of this work, together with structural studies currently in progress in our laboratory will be exploited for the complete characterization of the iv enzyme, as well as for the development of specific inhibitors of SmDHODH, as an important tool in the fight against schistosomiasis.

O objetivo desse estudo é analisar e sistematizar os elementos necessários à modelagem da energia primária solar para geração fotovoltaica em escala. Metodologicamente, investigam-se os assuntos inerentes à solarimetria e a caracterização da radiação solar, desde a formação das equações que definem a incidência da radiação no topo da atmosfera, o desenvolvimento tecnológico de radiômetros, até as normas e critérios de classificação desses equipamentos. Também são elementos metodológicos a caracterização do irradiância solar, incluindo algoritmos de tratamento de dados de irradiância, os processos de estimativa de irradiação para a agricultura e análises probabilísticas de índices de transmitância atmosférica. Busca-se a aplicação das etapas de caracterização e a análise do recurso, definidas neste estudo, por meio da utilização dos dados fornecidos por duas estações solarimétricas: ESUPP e ESPEL. Como resultados são definidos a média diária parcial anual de disponibilidade do recurso para uma região no interior do estado de São Paulo (localização da ESUPP) em 5,29 kWh/m² e a média diária anual de disponibilidade do recurso para a região metropolitana da cidade de São Paulo (localização da ESPEL) em 4,41 kWh/m², além disso verifica-se que a relação entre as componentes global horizontal, difusa horizontal e direta vertical varia para os dados das duas estações solarimétricas, de modo que, parte significativa dos dados da ESPEL apresenta medições de irradiância global horizontal (IGH) entre 12% e 13% superiores à respectiva componente difusa horizontal (IDH) somada a parcela vertical da respectiva componente direta normal (IDNcos?z), enquanto que, essa mesma relação para os dados da ESUPP atendem à relação IGH=IDH+IDNcos?z dentro do intervalo aceitável de mais ou menos 10%. Verifica-se também caráter trimodal das curvas de densidade de probabilidade do índice de transmitância da irradiância global para os dados da ESPEL, enquanto os dados da ESUPP refletem em curva de caráter bimodal. Assim é possível constatar a necessidade de definição de um modelo universal de previsibilidade do recurso e verifica-se que os insumos mais relevantes para o modelo podem variar de região para região dada a caracterização geográfica e de microclima. Conclui-se, portanto, a indiscutível necessidade de dados radiométricos confiáveis medidos em solo para avanços científicos, tecnológicos e comerciais do aproveitamento do recurso solar como fonte energética diante do atual contexto da busca por fontes alternativas de energia limpa e evidencia-se o grande caminho a ser percorrido para a consolidação de uma rede confiável, monitorada e amplificada de medições solarimétricas no Brasil e no mundo. / The purpose of this study is to analyze and to systematize the elements required for modeling primary solar energy for photovoltaic generation in large scale. Solarimetric subjects and subjects related to solar irradiance flux characterization, from the formation of the equations that define the incidence of radiation at the top of the atmosphere, the technologic development of radiometers and the rules and criteria for the classification of these measurement instruments, are methodologically investigated. The characterization of the irradiance flux, including irradiance data treatment algorithms, the irradiance estimate processes for agriculture, and the probability analyses of atmosphere transmittance indexes are also methodological elements. The steps of characterization and resource analysis defined in this study are applied, using data provided for two solarimetric stations: ESUPP and ESPEL. Results showed that the partial annual daily average for resource availability in the countryside of São Paulo State (ESUPP location), is 5.9 kWh/m², and the annual daily average for resource availability in the metropolitan area of São Paulo City (ESPEL location) is 4.41 kWh/m². Moreover, it was observed that the relation between the global horizontal, diffuse horizontal and direct vertical components varies between both solarimetric stations, such that a significant part of the ESPEL data shows global horizontal irradiance (GHI) between 12% and 13% above the respective diffuse horizontal irradiance (DHI) plus the vertical portion of the respective direct normal component (DNIcos?z), while the same relation for the ESUPP data attend the GHI=DHI+DNIcos?z relation within the acceptable range of 10%, give or take. ESPEL data presented trimodal characteristics for the probability density curves of the transmittance index for global irradiation, while ESUPP data reflect on the same curve, with bimodal characteristics. Therefore, it is possible to verify the need of the determination of a universal predictability model of the resource and it is possible to affirm that the more relevant inputs to the model can vary from region to region, depending on the geographic character and microclimate. In conclusion, there is an unquestionable need for reliable radiometric data, measured in ground, for scientific, technologic and commercial advances to improve the use of solar resource as energy source, considering the current scenario, which demands alternative sources for clean energy. It is also evident that there is still a long path to be tracked in order to consolidate a reliable, monitored and amplified network for solarimetric measurements in Brazil and in the world.