Introdução: A síndrome vasoplégica no pós-operatório de cirurgias cardíacas é uma entidade freqüente e com significativa morbimortalidade. A droga vasoativa classicamente utilizada para o seu tratamento é a noradrenalina, a partir de evidências extraídas de outros contextos clínicos. Revisão sistemática de Eggi e cols em 2007 foi inconclusiva. A partir de diferentes mecanismos, porém com sólidas bases fisiopatológicas, foi aventado o potencial vasopressor do azul de metileno e da vasopressina para o tratamento do choque vasoplégico. Objetivo: Definir qual a melhor droga vasoativa para a síndrome vasoplégica. Métodos: Conduzimos uma revisão sistemática com metanálise de múltiplos tratamentos, envolvendo quatro tratamentos: placebo, noradrenalina, azul de metileno e vasopressina. As quatro intervenções foram comparadas entre si, direta ou indiretamente. A busca na literatura incluiu MEDLINE, Embase, Cochrane, Lilacs, Scopus, CINAHL, Google Scholar, Web of Science e IPA, de janeiro de 1980 a novembro de 2013. A partir de 796 registros encontrados, foram incluídos na revisão final 10 ensaios clínicos, perfazendo 503 pacientes. Considerou-se para análise final os desfechos de morte e pressão arterial média. Optou-se pelo modelo Mixed Treat Comparison, com efeito fixo, de modo a comparar simultaneamente todos os pares de tratamento e gerar um ranking de desempenho. Resultados: Da comparação de azul de metileno com placebo, obteve-se um RR de 0,11 para morte (CrI 95% de 0,01 a 0,97). Vasopressina, comparada a placebo, mostrou uma tendência nãosignificativa de redução de mortalidade. Da comparação de vasopressina com placebo, resultou uma diferença de médias de 5,67 (CrI 95% de 3,86-7,34) para o aumento da pressão arterial média. Além disso, foi observada uma diferença de médias de 6 (CrI 95% de 1,20 a 10,94) na comparação de vasopressina e noradrenalina para o aumento de PAM. O azul de metileno não obteve nenhuma diferença significativa nas comparações no que tange à PAM. Dessa forma, o azul de metileno foi a melhor opção, considerando o desfecho morte. A vasopressina foi consistentemente a droga vasoativa que obteve o melhor desempenho, considerando o incremento na pressão arterial média. Conclusão: Com base nestes achados, recomendamos que o azul de metileno e a vasopressina sejam terapias de primeira linha no tratamento do choque vasoplégico no pós-operatório de cirurgias cardíacas. / Background: Vasoplegic syndrome (VS) after cardiac surgery is a frequently condition, with high morbidity and mortality. Norepinephrine traditionally is the vasoactive agent used to treat this complication, based on studies with not exactly the same clinical scenario. A previous systematic review from Eggi et al was inconclusive. Considering distinct mechanisms and consistent physiopathological basis, a therapeutic role was proposed to blue methylene blue and vasopressin to treat vasoplegic shock. Objective: Our purpose was to define the best vasopressor agent to vasoplegia in cardiac postoperative patients. Methods: We have accomplished a bayesian mixed treatment comparison (MTC), including studies with four treatments: placebo, norepinephrine, methylene blue and vasopressin. We performed direct and indirect comparisons of the four previously mentioned vasopressors. Search strategy considered MEDLINE, Embase, Cochrane, Lilacs, Scopus, CINAHL, Google Scholar, Web of Science and IPA, from 1980 january to 2013 november. From 796 records, we have included ten clinical trials to final analysis, gathering 503 patients. Mortality and mean arterial pressure were the mains outcomes analyzed. A Mixed Treated Comparison was used, with fixed-effects model, in order to combine direct and indirect evidence and generate a performance ranking. Results: From the comparison of methylene blue to placebo, relative risk (RR) was 0,11 for death (CrI: 0,01-0,97). Compared to placebo, vasopressin presented a non-significant death reduction and showed a significant increase in mean arterial pressure (Mean difference: 5,67; CrI: 3,86-7,34). Furthermore, the only significant comparison, between two active treatments, has resulted from the pair vasopressin vs norepinephrine. Vasopressin has increased mean arterial pressure, as compared to norepinephrine (RR: 6; CrI: 1,20-10,94). Thus, from the perspective of mortality, the best option was methylene blue, compared to placebo. This resulted from direct comparison evidence. Vasopressin had the best performance, against placebo and norepinephrine, regarding mean arterial pressure. Conclusion: Based on the findings above, we consider methylene blue and vasopressin first line options in the treatment of cardiac postoperative’s vasoplegic syndrome.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-05T12:20:31Z No. of bitstreams: 2 tese de GILBERTO.pdf: 3876286 bytes, checksum: c9b70d1bd20ff6b045bfbfc2f82e26ed (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T12:20:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 tese de GILBERTO.pdf: 3876286 bytes, checksum: c9b70d1bd20ff6b045bfbfc2f82e26ed (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-03-12 / O tratamento eficaz do choque hemorrágico através da reanimação volêmica deve restabelecer a perfusão tecidual e minimizar os efeitos da hipóxia celular. A reposição de líquidos hidrossalinos e hemoderivados se baseia, fundamentalmente, nas alterações dos parâmetros hemodinâmicos e padrão dos gases sanguíneos. Estes podem apresentar variações na dependência do tipo de trauma, sítio da injúria ou continuidade do sangramento. Objetivo: Avaliar e comparar as respostas cardiocirculatórias e acidobásicas, em suínos tratados por três terapias diferentes após indução de choque hemorrágico. Métodos: Trinta e cinco suínos Dalland foram divididos em quatro grupos: Controle; Sangria; Salina; Salina + Concentrado de hemácias. As variáveis cardiocirculatórias avaliadas foram: frequência cardíaca (FC), pressão arterial média (PAM) e pressão venosa central (PVC). As variáveis acidobásicas avaliadas foram: bicarbonato padrão ([HCO3-]), diferença de bases (DB) e lactato (lact-). O choque hemorrágico foi induzido, retirando-se (624,25±64,55 ml), (619,30±44,94 ml) e (664,23±39,96 ml) do volume sanguíneo, respectivamente, para os grupos Sangria, Salina e Salina + Concentrado de hemácias. Terapias adotadas: Grupo Sangria - sem reposição volêmica; Grupo Salina - reposição com 676 ml de solução salina a 0,9%; Grupo Salina + Concentrado de hemácias - reposição com 440 ml de solução salina a 0,9% mais 291 ml de concentrado de hemácias. A avaliação do tratamento foi realizada aos 10 (T3), 30 (T4), 45 (T5) e 60 minutos (T6), a partir da remoção completa dos volumes programados. A análise estatística foi realizada através do teste de Bonferroni, aplicada a diferença média das variáveis verificadas, durante o período de execução dos métodos terapêuticos, com uma margem de segurança de 95%. Resultados: FC; Os grupos terapêuticos apresentaram valores significativamente maiores que o grupo Controle; Controle e Sangria [p=0,016], Controle e Salina [p=0,048] e Controle e Salina + Concentrado de Hemácias [p=0,005]. Não houve diferença significativa entre os grupos Sangria e Salina [p=1,000]; Sangria e Salina + Concentrado de hemácias [p=1,000]; Salina e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,721]. PAM; Houve diferença significativa entre todos os grupos: Controle e Sangria [p=0,000], Controle e Salina [p=0,000] Controle e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,002], Sangria e Salina [p=0,000], Sangria e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,000], Salina e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,003]. PVC; Não houve diferença significativa entre os grupos estudados. [HCO3-] padrão; Houve diferença significativa entre os grupos Controle e Sangria [p=0,000], Controle e Salina [p=0,000], Controle e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,000], Sangria e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,022], Salina e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,012]. Não houve diferença significativa entre os grupos Sangria e Salina [p=1,000]. DB; Houve diferença significativa entre os grupos Controle e Sangria [p=0,000], Controle e Salina [p=0,000], Controle e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,000], Sangria e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,018], Salina e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,007]. Não houve diferença significativa entre os grupos Sangria e Salina [p=1,000]. LACTATO; Houve diferença significativa entre os grupos Controle e Sangria [p=0,001], Controle e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,012], Sangria e Salina [p=0,008]. Não houve diferença significativa entre os grupos Controle e Salina [p=0,448], Sangria e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,257], Salina e Salina + Concentrado de hemácias [p=0,244]. Conclusões: No choque hemorrágico profundo, quando a fonte de sangramento está inativa, a reposição isovolêmica exclusiva, com solução salina a 0,9% ou associada a concentrado de hemácias, determina elevação da PAM, entretanto, não induz alterações significativas das demais variáveis cardiovasculares e no balanço acidobásico, quando comparada à evolução natural sem reposição.

Orientador: Wang Binseng / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Campinas / Made available in DSpace on 2018-07-15T12:42:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gewehr_PedroMiguel_M.pdf: 3961621 bytes, checksum: a31b35e18259d460aca003eab5c82246 (MD5) Previous issue date: 1983 / Resumo: Situações de riscos elétricos podem ocorrer em ambientes médico-hospitalares, devido à utilização crescente de equipamentos eletro-eletrônicos, principalmente aqueles que usam métodos invasivos, tornando possível a fibrilação ventricular mesmo para correntes de intensidades bastante reduzidas. Há mais de 10 anos, nos paises mais desenvolvidos, esses riscos são minimizados através de um rigoroso controle de qualidade industrial, de legislação e fiscalização do governo e de programas de segurança elétrica efetuados pelos hospitais em conjunto com a manutenção preventiva. No Brasil, os riscos são ainda aumentados pela carência de normas técnicas, pela dificuldade de prover manutenção adequada aos equipamentos e às instalações, e pela falta de conscientização do problema por parte de hospitais, órgãos públicos e profissionais. Após uma análise dos efeitos fisiológicos provocados pela eletricidade e de tipos de riscos elétricos, são apresentadas classificações, detalhes de projeto e de construção, quanto à proteção elétrica, de equipamentos e instalações com base em normas internacionais. Um conjunto de testes, também baseado em normas, é proposto para verificar a proteção elétrica proporcionada pelos equipamentos e instalações, sendo realizados alguns desses testes em 2 hospitais. Considerando-se a realidade nacional, são discutidas propostas que poderiam reduzir os riscos existentes. / Abstract: Electrical shock hazards are present in medical establishments due to ever increasing utilization of electrical and electronic equipment, particularly those employing invasive methods, as they enable ventricular fibrillation at very low current levels. For more than a decade, these hazards are being minimized in more developed countries through rigorous control of industrial quality, government regulation and fiscalization, and electrical safety programs implemented in hospitals together with preventive maintenance. In Brazil, the hazards are heightened by the lack of technical standards, by the difficulties in providing adequate maintenance for equipment and installation, and by the lack of awareness in hospitals, government and among health professionals. Following an analysis of the physiological effects produced by electricity and a description of different kinds of electrical hazards, classifications and design and construction details for equipment and installation with regard to electrical protection are presented based on international standards. A set of testes derived from the standards is proposed to ensure electrical safety of equipment and power distribution system. Some of these tests were performed in two hospitals. In order to reduce the exis­tent hazards, some feasible recommendations are made and discussed. / Mestrado / Mestre em Engenharia Elétrica

Este trabalho trata do modelamento e simulação de escoamentos que apresentam elevados gradientes de propriedades, tais como ondas de choque e superfícies de contato, em que o fluído é considerado uma mistura reativa de gases perfeitos. Serão estudados diversos problemas representativos desta classe de escoamentos, para comparação com resultados disponíveis na literatura especializada. O presente estudo considerará a solução numérica das equações de Euler acopladas a um modelo de cinética química. A parte do equacionamento correspondente aos termos convectivos será discretizada por diferenças finitas utilizando para integração o algorítmo TVD explícito de Harten. Os termos de variação de concentração de espécies, devido às reaçõesquímicas, serão integrados no tempo por um esquema multipasso explícito, de passo ajustável, do tipo Adams-Bashforth. A fim de se conseguir maior robustez no processo numérico são utilizadas médias de Roe, aplicadas às soluções de Riemann para o cálculo de propriedades médias, assim como operadores de ordem de precisão espacial reduzida para o cálculo de pontos adjacentes às fronteiras. As condições de contorno são implementadas usando-se, quando possível, o conceito de relações características unidimensionais, inclusive para paredes. Os resultados obtidos demostram a potencialidade do método numérico para aplicações em escoamentos com grandes gradientes de propriedades. A robustez do esquema unidimensional é preservada no esquema bidimensional com uma diminuição aceitável do número de CFL. A introdução do integrador químico no esquema numérico aumentou significativamente o tempo de processamento por ponto da malha por iteração, contudo as propriedades relevantes ao processo de combustão são calculadas e se mostram comparáveis com os resultados da bibliografia especializada.

Resumo não disponível.

Made available in DSpace on 2014-06-12T17:39:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo568_1.pdf: 1340440 bytes, checksum: 6541793396446101ebf85e692b2086ce (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / O mercado empresarial está cada vez mais competitivo, demandando qualidade, disponibilidade e baixos preços dos produtos. Para atender a tais requisitos, as atividades de manutenção vêm se tornando um diferencial para as empresas, contribuindo de forma direta ou indireta. Uma questão importante no gerenciamento de gastos com manutenção diz respeito às políticas de substituição de equipamentos, portanto, é necessário definir o melhor momento para substituir um sistema reparável. Entretanto, em alguns tipos de empresas como, por exemplo, as pertencentes ao setor de serviços, não se pode definir uma política de substituição baseada unicamente no custo de manutenção. Quando esse erro é cometido, outros aspectos importantes são comprometidos, tais como: a disponibilidade, o tempo de operação efetivo, a freqüência de interrupções e até a satisfação do cliente. Neste trabalho, é lançada uma proposta de uma política de substituição que leve em consideração mais de um critério, tentando encontrar uma alternativa que satisfaça da melhor maneira possível a todos os aspectos, de acordo com as necessidades do mercado. Os sistemas a serem tratados são considerados como sendo deteriorantes. Para modelar tais sistemas, é utilizado um modelo de choques, pois o mesmo tem vasta aplicabilidade e fácil manipulação. Para auxiliar no processo decisório de substituição, recorre-se ao método de apoio à decisão multicritério PROMETHEE II. Finalizando, as políticas de substituição monocritério (baseada exclusivamente no custo) e multicritério são comparadas

Submitted by LAURA CRISTINA DUARTE null (laura.duarte.ara@gmail.com) on 2017-03-21T21:29:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_LAURA.pdf: 3201182 bytes, checksum: 4fd5c5a9c49a4055a594a72085bdd8a0 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-03-22T19:19:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 duarte_lc_me_guara.pdf: 3201182 bytes, checksum: 4fd5c5a9c49a4055a594a72085bdd8a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T19:19:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 duarte_lc_me_guara.pdf: 3201182 bytes, checksum: 4fd5c5a9c49a4055a594a72085bdd8a0 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os espinores ELKO propostos por Ahluwalia e Grumiller, são autoespinores do operador de conjugação de carga, , com autovalor positivo (autoconjugado) e negativo (anti-autoconjugado). São objetos de dimensão canônica de massa um e portanto, seus acoplamentos com as partículas do Modelo Padrão são extremamente restritos. Nesse trabalho estudou-se o acoplamento do ELKO com o tensor eletromagnético, ℒ = ¬ ()[ , ]()(), uma das possíveis interações do ELKO com as partículas do Modelo Padrão. Foi realizada uma análise fenomenológica na busca por uma região de massa e constante de acoplamento, , associada com um fóton no estado final. Para trabalhar com essa classe de espinores dentro do programa Madgraph foi necessário introduzir as funções de onda para os campos fermiônicos ELKO nesse programa. Além disso, as regras de Feynman para esses espinores foram obtidas, e um algoritmo foi desenvolvido para obter a seção de choque de um processo de espalhamento de dois ELKOs, de onde foi possível retirar informações sobre a unitariedade da teoria envolvendo a interação estudada. / The ELKO spinors proposed by Ahluwalia and Grumiller, are eingenspinors of the charge conjugation operator, , that can take positive (self-conjugated) and negative (anti-self-conjugated) eigenvalues. They are objects of canonical dimension of mass one and, therefore, their couplings with the Standard Model particles are extremely restricted. In this work the coupling of the ELKO with the electromagnetic tensor, ℒ = ¬ ()[ , ]()(), was studied. This is one of the possible ELKO interactions with particles of the Standard Model. A phenomenological analysis was performed in the search for a region of mass and coupling constant,, associated with a photon in the final state. To work with this class of spinors within the program Madgraph it was necessary introduce the wave functions for the ELKO fermionic fields in this program. In addition, the Feynman rules for these spinors were obtained, and an algorithm was developed to obtain the cross section of a scattering process of two ELKOs, from which it was possible to gather information about the unitarity of the theory involving the interaction studied.

Orientador: José Reinaldo Cerqueira Braz / Resumo: A detecção da hipovolemia insidiosa no intra-operatório é difícil devido a pouca especificidade dos sinais clínicos e hemodinâmicos. Estudos introduziram um novo método para avaliação da pré-carga, baseados na análise da variação da pressão sistólica (VPS) durante a ventilação mecânica. O presente estudo tem por objetivo avaliar se a VPS e sua derivada delta down (ddown) são indicadoras precoces de hipovolemia e guias de reposição volêmica com solução hiperosmótica e hiperoncótica no cão anestesiado submetido a hipovolemia. Doze cães sem raça definida, anestesiados com propofol, fentanil, rocurônio e isoflurano, e esplenectomizados, foram submetidos a sangramentos parciais de 5% da volemia até se atingir a retirada total de 20% da volemia (14 ml.kg-1). Após cada momento foram realizadas análises hemodinâmicas, respiratórias e sangüíneas. Em seguida, os cães foram submetidos à reposição volêmica com solução de NaCl a 7,5% em dextran 70 a 3,75% (4 ml.kg-1) em 10 minutos e novas análises foram realizadas aos 5 e 30 minutos após a reposição volêmica. A freqüência cardíaca não apresentou alteração... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The insidious hypovolemia detection in the intraoperative is difficult due to little specificity of clinical and hemodynamic signs. Studies introduced a new method for preload evaluation, based on systolic pressure variation analysis (SPV) during mechanical ventilation. The present study aims to evaluate if SPV and its derived delta down (ddown) are early indicator of hypovolemia, and guides of volemic replacement with hyperosmotic and hyperoncotic solution in anesthetized dogs submitted to hypovolemia. Twelve mogrel dogs, anesthetized with propofol, fentanyl, rocuronium and isoflurane, were submitted to graded haemorrhage of 5% of its volemia to reach the total of 20% of volemia (14 ml.kg-1). After every haemorrhage period, hemodynamic, ventilatory and blood atributes were studied. Imediately after, the dogs were submitted to volemic replacement with 7.5% NaCl solution in 3,75% dextran 70 (4 ml.kg-1) in 10 minutes, and the atributes were studied after 5 and 30 minutes following the volemic replacement. Heart rate was not changed significantly. Mean arterial pressure decreased significantly during haemorrhage, and increased... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Resumo não disponível

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:07:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Paracoccidioides brasiliensis é o fungo dimórfico responsável pela paracoccidioidomicose (PCM). A diferenciação celular do P. brasiliensis de micélio para levedura nos pulmões é essencial para a ocorrência da PCM e é dependente de temperatura. Parte das alterações sofridas pelo fungo está provavelmente relacionada com a expressão de proteínas de estresse (Hsp), pouco conhecidas no P. brasiliensis. Em nosso laboratório foram clonados os genes de P. brasiliensis homólogos aos de duas proteínas mitocondriais de choque térmico: o PbLON, da proteinase Lon, e a porção 5’ do PbMDJ1, da chaperone Hsp40/Mdj1. Estes genes estão ligados por uma região 5’ intergênica comum (ML), o que pode ser relevante em relação à regulação transcricional não apenas porque ambos respondem ao estresse, mas também pela relação funcional. Mdj1p é o membro da família DnaJ localizado na matriz mitocondrial, o qual é essencial na digestão de proteínas desnaturadas pela Lon. Neste trabalho o gene PbMDJ1 de P. brasiliensis foi totalmente caracterizado. Sua sequência apresenta uma ORF de 1659pb, organizada em três exons interrompidos por dois introns. PbMdj1 apresenta 551 aminoácidos com alta similaridade com as homólogas de Blastomyces dermatitidis, Histoplasma capsulatum e Coccidioides immitis. O alinhamento destas sequências permitiu mapear todos os domínios que caracterizam a família da DnaJ, a saber, um domínio J, um domínio rico em G/F e um domínio ligante de zinco organizado em quatro repetições de CXXCXGXG. Para a expressão de PbMdj1 recombinante em bactéria, um fragmento de cDNA de 757pb da região 5´ foi subclonado no vetor pHIS3. A proteína PbMdj1r foi purificada e utilizada na obtenção de anticorpos policlonais de coelho. Em microscopia eletrônica e confocal, os anticorpos anti-PbMdj1r localizaram a molécula na mitocôndria de leveduras de P. brasiliensis Pb18, mas também abundantemente na parede celular e região de brotamento. Em ensaios de “imunoblotting”, os anticorpos revelaram uma proteína nativa de 55 kDa tanto em extratos mitocondriais, com significativo aumento da expressão em condições de estresse térmico, como em uma fração de parede. Sua localização extramitocondrial foi confirmada ainda por citometria de fluxo (FACS). Alguns soros de pacientes com PCM reagiram com a PbMdj1r em “immunoblotting”, sugerindo que os pacientes reconhecem essa proteína durante a infecção. Obervamos que locus cromossômico dos genes MDJ1/LON é comum entre fungos dimórficos e Aspergillus. Na região intergênica 5’ compartilhada pelos genes MDJ1/LON de P. brasiliensis Pb18 e Pb3 foram mapeados e validados 4 elementos de transcrição usando o ensaio de proteção contra DNase I “footprinting” e em experimentos de retardo da mobilidade eletroforética (EMSA). Essas regiões abrigam um elemento de choque térmico convencional, dois não-convencionais e outro ligante de AP-1 (ARE), associado ao estresse oxidativo. Foram encontrados motivos similares nos locus correspondente de B. dermatitidis e H. capsulatum. O Pb3, que pertence a uma espécie críptica filogeneticamente distinta, apresentou polimorfismo na região ML. As análises comparativas entre Pb18 e Pb3 mostraram diferenças no número de elementos de transcrição no padrão da regulação transcripcional de PbLON e PbMDJ1 durante a transição de fase. Em Pb18, PbMDJ1 parece ser preferencialmente expresso na fase leveduriforme. Ambos os genes apresentaram aumento nos níveis de transcrição após choque térmico a 42 ºC, porém em Pb3 esse efeito foi mais lento. Este é o primeiro trabalho que detecta elementos de trancrição em P. brasiliensis e pode contribuir significativamente para entendimento da regulação de genes de estresse em fungos dimórficos. As diferenças detectadas em Pb18 e Pb3 quanto à regulação transcricional dos genes aqui estudados e eventualmente outros poderá explicar a distinta relação parasitahospedeiro que os isolados apresentam em camundongos B10.A. / Paracoccidioides brasiliensis is the dimorphic fungus responsible for paracoccidioidomycosis in man, who is infected by inhalation of conidia. The cellular differentiation of P. brasiliensis from mycelium (M) to yeast (Y) in the lungs is essential for infection to occur. J-domain (DnaJ) proteins, of the Hsp40 family, are essential cofactors of their cognate Hsp70 chaperones, besides acting as independent chaperones. In the present study, we have cloned and sequenced the heat shock gene PbMDJ1, which encodes an Mdj1 homologue that is a mitocondrial DnaJ in yeasts. The gene sequence consists of an ORF of 1719bp interrupted by three introns and translates 551 amino acid residues. PbMdj1 is organized in modules consisting of a J domain, followed by a glycine/phenylalanine-rich segment and four CXXCXGXG (zinc finger) domains. The C-terminal is not conserved. We expressed a His-tagged N-terminal region of PbMdj1 and used the recombinant protein to immunize rabbits to obtain anti-PbMdj1r serum. Immune-localization was performed using confocal and electron microscopy, and also flow cytometry. We demonstrated the presence of PbMdj1 not only in the mitochondria, where it is apparently sorted, but also in the cell wall of P. brasiliensis. Labeling was abundant throughout the cell wall and especially in the budding regions; however, anti-PbMdj1r did not affect fungal growth in the concentrations tested in vitro, possibly due to the poor access of the antibodies to their target in growing cells. Labeled mitochondria stood preferentially close to the plasma membrane and gold particles were detected in the thin space between them, towards the cell surface. The anti-rPbMdj1 antibodies used in the reactions specifically recognized a single 55 kDa mitochondrial and cell wall (alkaline β-mercaptoethanol extract) component, compatible with the predicted size of the protein devoid of its matrix peptidetargeting signal. This is the first time a DnaJ member has been observed on the cell surface, where its function is speculative. In the present work we show that Mdj1 and the mitochondrial proteinase Lon homologues are heat shock proteins in the P. brasiliensis and that their gene organization is conserved among thermodimorphic fungi and Aspergillus, where the genes are adjacent and have a common 5´region. We mapped and validaded transcription elements in the 5´-shared intergenic (ML) region of MDJ1/LON from P. brasiliensis using both DNAse I protection footprinting and mobility shift assays. Three of them were similar to canonical and nonconventional heat shock elements and one is a putative AP-1 binding domain (ARE), related to oxidative stress. Similar motifs were detected in the correspondent locus of B. dermatitidis and H. capsulatum. Our studies compared P. brasiliensis Pb18 with genetically distinct Pb3, where the ML region is polymorphic outside mapped motifs. In these isolates, different numbers of elements were detected and the pattern of mRNA accumulation of the genes was distinct during phase transition. In Pb18, PbMDJ1 was preferentially expressed in the yeast phase. This is the first study of transcription elements in P. brasiliensis that might help to understand regulation of stress-related genes involved in fungal adaptation to the host. / BV UNIFESP: Teses e dissertações