En aquesta Tesi Doctoral s'ha desenvolupat la tècnica de Síntesi intermatricial (IMS), com a una metodologia factible per la modificació de matrius reactives amb nanopartícules (NPs) basada en les propietats d'intercanvi iònic de la superfície que es vol modificar; com ara: resines intercanviadores iòniques i la innovació en la modificació de nanofilms polimèrics funcionalitzats, nanotubs de carboni (CNTs) i nanodiamantes (NDs). L’efecte dels materials nanoestructutrats sobre el medi ambient és un dels temes més importants a la tecnologia en els darrers anys. A causa del seu alt grau de desenvolupament, producció, difusió i aplicació, les majors preocupacions associades als Nanomaterials (NMs) inclouen: a) l'elevada reactivitat i toxicitat de molts NMs en comparació dels seus anàlegs macroscòpics, b) l'absència de tècniques analítiques òptimes per a la seva determinació en el medi ambient i c) l'absència d'una legislació efectiva que regularitzi els nivells permesos de diversos NMs en sòl, aigua i aire. Per això és primordial la seguretat i estabilitat dels NMs a través de la seva incorporació en els Nanocomposites bifuncionals (BFNCs) La bifuncionalitat dels BFNCs és determinada per les propietats pròpies de la matriu en la qual les NPs metàl·liques (MNPs) són sintetitzades (per exemple polímers d'intercanvi iònic) i per les propietats respectives de les MNPs (magnetisme, activitat bactericida, nanocatlizadores). La modificació superficial de les matrius reactives amb MNPs es porta a terme a través de la IMS acoblada a l'Efecte d'exclusió de Donnan (DEE). D'aquesta manera, els BFNCs preparats amb valor afegit són caracteritzats, les seves propietats són avaluades i es comprova l'estabilitat i la distribució favorable de les MNPs principalment en la superfície dels BFNCs. La IMS inclou diferents possibilitats per a la preparació de MNPs i BFNCs. En una primera etapa es realitza un intercanvi iònic sobre la matriu per fixar els precursors de les NPs. Posteriorment la IMS pot incloure: a) Reducció dels ions a l'utilitzar un agent reductor com NaBH4 o b) precipitació de NMs com quantum dots (QDs) o òxids metàl·lics a l'afegir el contraió respectiu. Sigui quina sigui la ruta que s'empri, els grups funcionals d'intercanvi iònic propis de la matriu són regenerats; de manera que els cicles de IMS poden repetir-se per augmentar el gruix de les MNPs o bé per produir MNPs bimetàl·liques tipus core-shell. Una versió estesa de la IMS és presentada a l'utilitzar el desplaçament galvànic com a precursor per Au- MNPs i AgAu-MNPs a matrius catiòniques, utilitzant MNPs sintetitzades inicialment com nanoplantilles per a la cristal·lització de les noves MNPs mono- o bi- metàl·liques. Un avantatge molt important que aporta la tècnica IMS és la seva gran versatilitat, possibilitant la síntesi de BFNCs amb les propietats desitjades per a les diferents aplicacions: activitat bactericida, magnetisme, catàlisi heterogènia i electroquímica, entre d'altres. / En esta Tesis Doctoral se ha desarrollado la técnica de Síntesis Intermatricial (IMS), como una metodología factible para la modificación de matrices reactivas con Nanoparticulas(NPs) basada en las propiedades de intercambio iónico de la superficie que se desea modificar; tales como: como resinas intercambiadoras iónicas y la innovación en la modificación de nanofilms poliméricos funcionalizados, nanotubos de carbono (CNTs) y nanodiamantes (NDs). El efecto de los materiales nanoestructurados sobre el medio ambiente es uno de los temas más importantes de la tecnología en los últimos años. Dado su alto grado de desarrollo, producción, difusión y aplicación, las mayores preocupaciones asociadas a los Nanomateriales (NMs) incluyen: a) la elevada reactividad y toxicidad de muchos NMs en comparación con sus análogos macroscópicos, b) la ausencia de técnicas analíticas adecuadas para su determinación en el medio ambiente y c) la ausencia de una legislación efectiva que regularice los niveles permitidos de varios NMs en suelo, agua y aire. Por ello es primordial la seguridad y estabilidad de los NMs a través de su incorporación en los Nanocomposites Bifuncionales (BFNCs) La bifuncionalidad de los BFNCs es determinada por las propiedades propias de la matriz en la que las NPs metálicas (MNPs) son sintetizadas (por ejemplo polímeros de intercambio iónicos) y por las propiedades respectivas de las MNPs (magnetismo, actividad bactericida, nanocatlizadores). La modificación superficial de las matrices reactivas con las MNPs se lleva a cabo a través de la IMS acoplada al Efecto de Exclusión de Donnan (DEE). De esta manera, los BFNCs preparados con valor añadido son caracterizados, sus propiedades son evaluadas y se comprueba la estabilidad y la distribución favorable de las MNPs principalmente en la superficie de los BFNCs. La IMS incluye diferentes posibilidades para la preparación de MNPs en BFNCs. En una primera etapa se realiza un intercambio iónico sobre la matriz para fijar los precursores de las NPs. Posteriormente la IMS puede incluir: a) Reducción de los iones al utilizar un agente reductor como NaBH4 o b) precipitación de NMs como quantum dots (QDs) u óxidos metálicos al agregar el contraión respectivo. Sea cual sea la ruta que se siga, los grupos funcionales de intercambio iónico propios de la matriz son regenerados; por lo que los ciclos de IMS pueden repetirse para aumentar el grosor de las MNPs o bien para producir MNPs bimetálicas tipo core-shell. Una versión extendida de la IMS es presentada al utilizar el desplazamiento galvánico como precursor para Au- MNPs y AgAu-MNPs en matrices catiónicas, utilizando MNPs sintetizadas inicialmente como nanoplantillas para la cristalización de las nuevas MNPs mono o bimetálicas. Una ventaja muy importante que aporta la técnica IMS es su gran versatilidad, posibilitando la síntesis de BFNCs con las propiedades deseadas para las diferentes aplicaciones: actividad bactericida, magnetismo, catálisis heterogénea y electroquímica, entre otras. / In this Doctoral Thesis, the Intermatrix Synthesis (IMS) technique has been described as a feasible methodology for the modification of reactive matrices with Nanoparticles (NPs), which is based on the ion exchange properties of the NPs supporting surface, such as ion exchange resins and the innovation of the application of IMS on polymeric nanofilms, carbon nanotubes (CNTs) and nanodiamonds(NDs). The effects of nanostructured materials on the environment are one of the most important issues of technology in recent years. Given their high level of development, production, dissemination and application, the main concerns associated with nanomaterials (NMs) include: a) the high reactivity and toxicity of many NMs compared to their macroscopic analogues, b) the lack of appropriate analytical techniques for their determination in environment and c) the absence of effective legislation to regularize the convenient levels of various NMs in soil, water and air. Therefore, it is a must to ensure the security and stability of NMs through its incorporation into the Bifunctional Nanocomposites (BFNCs) The bifunctionality of BFNCs is determined by the specific properties of the matrix in which the metal NPs (MNPs) are synthesized (for example by ion exchange polymers) and by the respective properties of the MNPs (magnetism, bactericidal, nanocatlizadores). Surface modification of reactive matrices with MNPs is conducted through the IMS coupled to Donnan exclusion effect (DEE). Thus, the added value BFNCs prepared are characterized, their properties are evaluated and stability and the favourable distribution of the MNPs mainly on the surface of BFNCs is verified. The IMS includes different possibilities for the preparation of MNPs on BFNCs. In the first stage ion exchange is performed on the matrix to attach the NPs precursors. Subsequently, the IMS includes: a) Reduction of ions by using a reducing agent such as NaBH4 or b) precipitation of NMs as quantum dots (QDs) or metal oxides by adding the respective counterion. Whichever route is followed, the ion exchange functional groups of the matrix are regenerated; so IMS cycles can be repeated to increase the thickness of the MNPs or to produce bimetallic core-shell type MNPs. An extended version of the IMS is presented as using galvanic replacement for the preparation of Au- MNPs and AgAu-MNPs in cationic matrices using MNPs initially synthesized as nano-templates for crystallization of new mono or bimetallic MNPs. An important advantage provided by the IMS technique is its versatility, allowing the synthesis of BFNCs with the desired properties for different applications: bactericidal activity, magnetism, electrochemistry and heterogeneous catalysis, among others.

L’espermatozoide és una cèl•lula molt especialitzada amb una estructura de la cromatina única formada per dos dominis principals: el domini nucli-protamínic on la gran majoria del DNA es troba empaquetat per protamines en toroides molt compactes, i el domini nucli-histònic on una petita proporció del DNA roman empaquetat per histones, d’una manera més accessible. Cada vegada són més les evidències que suggereixen que l’espermatozoide madur presenta una funció més enllà de la simple transmissió del material genètic patern a la següent generació. La hipòtesi principal d’aqueta tesi consisteix en que aquesta contribució paterna no és solament basada en la transmissió de patrons de metilació de DNA o modificacions d’histones concretes, si no que també es troba influïda per l’estat de la cromatina espermàtica i, en especial, per la seva composició proteica. Per aquest motiu, en aquesta tesi doctoral s’ha caracteritzat detalladament el contingut proteic del nucli de l’espermatozoide humà normal mitjançant dues estratègies diferents. Per una banda, les proteïnes majoritàries del nucli espermàtic, les protamines, han sigut analitzades per extraccions i electroforesis àcides per tal d’estudiar la seva implicació en la conservació de la cromatina. S’ha observat una relació negativa significativa entre la quantitat de protamines i el dany al DNA espermàtic (mesurat per la tècnica COMET) en pacients infèrtils que cursen tècniques de reproducció assistida. Aquests resultats han suggerit una funció de les protamines referent a la protecció del material genètic patern. A més a més, mitjançant tècniques basades en espectrometria de masses (Top-down proteomics), s’ha observat com les protamines podrien contenir modificacions post-traduccionals en la seva seqüència (fosforilacions, acetilacions, metilacions), el que suggeriria també una funció reguladora per aquestes proteïnes espermàtiques. En segon lloc, mitjançant espectrometria de masses també s’han caracteritzat la resta de proteïnes presents en el nucli del gàmeta masculí madur. S’han arribat a identificar centenars de proteïnes, la meitat de les quals corresponen a histones, variants d’histones, modificadors d’histones, factors de transcripció, proteïnes addicionals associades a la cromatina i proteïnes modificadores de la cromatina espermàtica. D’aquesta manera, mitjançant anàlisis bioinformàtics es pot observar com el nucli de l’espermatozoide humà madur es trobaria enriquit en proteïnes involucrades en processos reguladors com la modificació de la cromatina, modificació d’histones, expressió gènica i transcripció. Aquestes tendències també es trobarien presents en altres espècies de mamífers, com per exemple el ratolí, la rata o el macaco. La presència d’aquests grups de proteïnes intactes en una cèl•lula considerada transcripcionalment inerta ha suggerit una funció epigenètica/reguladora durant els primers estadis del desenvolupament embrionari. Addicionalment, en aquesta tesi doctoral s’ha observat que les proteïnes espermàtiques nuclears es poden diferenciar en dos grups diferents segons la seva afinitat per la cromatina espermàtica. D’aquesta manera, les proteïnes unides més fortament al DNA es trobarien majoritàriament implicades en funcions estructurals, mentre que les proteïnes unides al DNA d’una forma més feble es trobarien relacionades amb processos reguladors o epigenètics. Aquesta observació, juntament amb el fet conegut de que la regió més accessible de la cromatina espermàtica (associada a les histones) es troba especialment enriquida en promotors i gens del desenvolupament, suggeriria que part de les proteïnes nuclears espermàtiques podrien estar relacionades amb la regulació de la transcripció d’aquests gens, a més a més d’altres processos com la remodelació de la cromatina en el pronucli masculí. Per tant, mitjançant la caracterització del contingut proteic del nucli de l’espermatozoide humà, s’ha augmentat el coneixement d’aquesta cèl•lula i de la seva funcionalitat, recolzant la hipòtesi de que a més a més del propi material genètic patern, l’espermatozoide contribueix en la fertilització amb informació epigenètica, la qual inclou una composició proteica específica de la cromatina. / The mammalian spermatozoon is a very specialized cell with a unique chromatin structure: while the vast majority of the DNA is condensed by high compact toroids (avoiding any transcriptional and translational activity), a small part of the DNA remains packaged by nucleosomes. An increasing body of evidence is showing that, in addition to the transmission of the paternal genetic message to the next generation, the sperm cell is also involved in the transmission of epigenetic information. The main hypothesis of the present doctoral thesis is that, in addition to histone modifications, DNA methylation patterns and RNA content; protein composition of the sperm chromatin is also essential in epigenetic inheritance. Therefore, the protein content of the human sperm nucleus has been characterized using proteomic techniques. Firstly, by acid extraction and electrophoresis, it has been shown a negative relationship between protamine quantities and DNA damage in infertile patients who undergo assisted reproduction techniques, confirming an involvement of those proteins in the protection of the paternal DNA. In addition, by top-down proteomics, it has been detected several post-translational modifications in protamine sequences, which have suggested a potential regulatory role for those major sperm nuclear proteins. Secondly, it has been described the human sperm nuclear proteome using mass spectrometry techniques. A rich network of histones, histone variants, histone modifiers, transcription factors, chromatin-associated proteins and chromatin modifying proteins has been identified in the human sperm nucleus. In addition, based in Gene Ontology information, the human sperm nucleus seemed to be enriched in processes as chromatin remodelling, histone modification, transcription and gene expression. Furthermore, proteomic dissection of the sperm chromatin results in two groups of proteins differing in chromatin affinity. Higher-affinity sperm chromatin proteins seemed to be mainly involved in structural roles, while proteins with potential regulatory/epigenetic roles were identified with a lower sperm chromatin affinity. Altogether, the results obtained in this doctoral thesis have contributed in the knowledge of the nucleus of the male gamete and have suggested an involvement of the sperm nuclear proteins in post-fertilization events, as the chromatin remodelling in the male pronucleus or the transcription regulation of histone-bound paternal developmental genes.

S'estima que a Europa l'any 2005 es generaran 9,4 milions de tones de fangs de depuradora (EEA, 2001), fet que suposa un problema important de cara a la seva eliminació. A l'estat espanyol, al voltant del 46% de la producció de fangs de depuradora de residus urbans es recicla mitjançant aplicacions al sòl. Aquest tipus de pràctiques estan regulades segons la Directiva Europea 86/278/EEC que, únicament considera com a components de risc el contingut total de metalls pesants i nitrats. L'actual normativa està sent revisada (Working Document on Sludge, 3rd Draft, 2000, unpublished) i es preveu una major restricció i control dels residus orgànics, per a minimitzar el risc d'efectes negatius a la salut, el medi ambient i el deteriorament de la qualitat del sòl. Els problemes de salubritat associats a l'ús dels fangs frescs constitueixen un factor limitant per a la seva aplicació al sòl, i fan necessari investigar les possibilitats d'ús d'aquests residus un cop sotmesos a un procés d'higienització. A Catalunya, s'imposaran com a vies de post-tractament el compostatge i l'assecatge tèrmic. En aquesta tesi es pretén avaluar els efectes derivats de l'aplicació dels tres tipus de fang esmentats, emprats com a esmenes orgàniques, per a la rehabilitació de sòls forestals degradats. S'ha avaluat les avantatges i inconvenients de la fertilització orgànica amb fangs de depuradora en comparació a l'adobat mineral en una zona forestal. S'ha caracteritzat al laboratori la dinàmica i les transformacions que afecten la matèria orgànica de sòls tractats amb els tres tipus de fang i seguidament s'han estudiat els efectes d'aquests materials en condicions de camp, emprats com esmenes per a la rehabilitació de dos sòls forestals. Finalment, per tal de donar resposta a quina de les pràctiques de fertilització resulta la més adequada, i al mateix temps de quina manera podem ajudar en preses de decisions, relacionades amb aquesta problemàtica, es proposa la utilització d'eines d'anàlisi multicriteri. Dels resultats obtinguts es desprèn que els fangs poden actuar com a catalitzadors del restabliment de la biofuncionalitat de sòls degradats ja que incrementa l'activitat respiratòria i la biomassa microbiana del sòl. La millora de les propietats biològiques, físiques i nutritives del sòl estimula el creixement dels arbres i proporciona major recobriment del sòl, reduint d'aquesta manera el risc d'erosió superficial. La matèria orgànica dels fangs es mineralitza a un ritme força elevat, sent la del compostat la que presenta major estabilitat i uns efectes més perdurables. Els desavantatges més importants es relacionen amb problemes de pèrdues de nitrogen per lixiviació i certa inhibició observada en la germinació de les plantes en condicions controlades (especialment en el fang tèrmic). Una major disponibilitat de nutrients a l'inici provoca un increment del quocient metabòlic (qCO2). El descens dràstic del qCO2, major amb el fang tèrmic, es déu a la reducció de l'activitat microbiana causada probablement per l'esgotament del carboni orgànic làbil, però no podem descartar algun tipus d'estrès. A més, l'aplicació superficial de fangs, provoca una certa ruderalització i reducció de la riquesa florística de les àrees estudiades. Pel que fa a les diferències observades entre els diferents fangs, cal destacar que en el procés de post-tractament dels fangs es produeixen canvis en les propietats químiques que es revelen en modificacions de la matèria orgànica, l'eficiència microbiana i la mineralització del nitrogen.La utilització de les anàlisi multicriteri representen una valuosa aportació per a la presa de decisions en problemes que, com aquest, tenen un elevat grau d'incertesa i diferents objectius i en conflicte. Des del punt de vista aplicat, donats els indicis de toxicitat observats en l'aplicació de fang tèrmic i l'escàs coneixement actual que ens permeti fer una avaluació real dels efectes directes i indirectes que provoca aquest fang, es recomana no aplicar-lo de manera generalitzada mentre no es garanteixi la seva innoquïtat. / It is estimated that Europe will produce 9.4 million tons of sludge by 2005 (EEA 2001). The elimination of such sludge amounts poses important difficulties. In Spain, approximately 46% of the urban sewage sludge production is used in soil rehabilitation, as regulated by the UE Directive 86/278/EEC. Under this directive, only total heavy metal and nitrate contents are considered a risk. The present Directive is currently being revised (Working Document on Sludge, 3rd Draft, 2000, unpublished) and greater restrictions and control of organic wastes are expected, which will help to diminish the negative effects of sludge application on health, environment and soil quality. Environmental health problems associated with the use of digested sewage sludge hinder its application and make it necessary to investigate the possibility of using treated waste. Two types of sludge treatment, composting and thermal drying, are practiced in Catalonia. This PhD dissertation attempts to evaluate the effects of three types of sewage sludge (fresh, composted, thermal) used for forest soil rehabilitation. Advantages and disadvantages of sewage sludge amendment were compared to mineral fertilization in a project to transform a scrubland into a dehesa-system. Organic matter dynamics and transformation were characterized in the laboratory in soils treated with the different sludge types. Subsequently, the effects of sludge application were studied under field conditions. The study also proposes the use of multi-criteria analysis to identify the most suitable fertilization alternatives and to assist in the decision-making process of sludge recycling.The results show that sewage sludge use improves soil functionality, because it enhances respiration rates and microbial biomass. The improvement of soil physical, biological and fertilization properties stimulates tree growth and increases ground cover, thus reducing soil run-off. The organic matter of sewage sludge is quickly mineralized. In this study, composted sludge organic matter showed the greatest stability and longest-lasting effects. Experiments under controlled conditions showed that important disadvantages of sludge use were nitrate lixiviation and plant germination inhibition (especially with thermal sludge). Initial enhanced nutrient availability induced an increase of the metabolic quotient (qCO2). A subsequent fast reduction of qCO2, particularly in thermal sludge, was due to a decrease in microbial activity, probably caused by the depletion of labile organic carbon, although some type of stress could also be involved. Sewage sludge application above the soil surface caused the ruderalisation of the herbaceous community and the reduction of plant richness in the studied areas. In relation to the differences between different types of sewage sludge, it is possible to emphasize that in the composted and thermal processes changes in the chemical properties take place that are evidenced in the modification of the organic matter, microbial efficiency and nitrogen mineralization. Multi-criteria evaluation tools make a valuable contribution to decision-making processes concerning sewage sludge applications, because a high degree of uncertainty and conflictive objectives exist in these processes.Due to the observed signs of toxicity related to thermal sludge use and the scarce current knowledge to evaluate direct and indirect sewage sludge amendment effects, it is recommended to discontinue thermal sludge application in field conditions, until its innocuousness can be guaranteed.

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Objetivo: Investigar si el Trastorno Delirante es una entidad nosológica diferente a la Esquizofrenia analizando las diferencias entre las características clínicas y las neuropsicológicas. Metodología: Se realizaron dos estudios transversales. En el primer estudio, consta de 86 pacientes diagnosticados de Trastorno Delirante. El segundo estudio 115 pacientes con diagnóstico de Esquizofrenia. Estos eran pacientes de la red asistencial Parc Sanitari Sant Joan de Déu. Dentro de la zona de captación de esta red esta Cerdanyola, Ciutat Vella, Cornellá, Esplugues, Vilanova y la Geltru y el Prat de Llobregat, tiene una cobertura de población adulta de 513,500 personas residentes en la ciudad de Barcelona y cercanías y de origen socioeconómico diverso. Para valorar la psicopatología los pacientes fueron evaluados con la Escala de los Síndromes Positivo y Negativo (PANSS), un cuestionario socio demográfico que incluía la escala de Evaluación del Funcionamiento Global (GAF) así como una batería neuropsicológica que incorporaba las siguientes pruebas: MEC, Vocabulario, Clave de Números y Dígitos del WAIS-III, WCST, TMTa-b, STROOP, CPT, FAS y el TAVEC. Resultados: Diferencias significativas entre los grupos en género, habiendo más mujeres en la población de delirantes que en la de pacientes con esquizofrenia, edad de inicio, síntomas negativos, presentando los esquizofrénicos peor funcionamiento que los delirantes. En las pruebas neuropsicológicas; en memoria fue donde encontramos mayores diferencias entre los pacientes delirantes y con esquizofrenia, seguido de función ejecutiva y atención. Conclusiones: Encontramos que el Trastorno Delirante se puede diferenciar claramente de la esquizofrenia en función de variables sociodemográficas como la edad de inicio, menor sintomatología de primer grado, menor alteración en pruebas neuropsicológicas y mejor cociente intelectual pre mórbido que avalan las diferencias / Objectives: To investigate if Delusional Disorder (DD) is a different nosology entity from Schizophrenia, measuring the differences in clinical and neuropsychological variables Methods: Two cross sectional studies were used. The first study, with 86 DD patients. The second study with 115 patients with diagnosed with Schizophrenia. These were outpatients of the assistential network of the Parc Sanitari San Joan de Deu. It covers a population zone of 513,500 people with different socioeconomic situation of the Barcelona area and surrounding, (Cerdanyola del Valles, Ciutat Vella, Cornella, Esplugues, Vilanova y La Geltru and El Prat de Llobregat) . To evaluate psychopathology we used the Positive and Negative Symptom Scale (PANSS) a sociodemographic questionnaire, as well as the Global Assessment Functioning scale (GAF). For the neuropsychological evaluation, the MEC, WAIS III subtest (vocabulary, digits, and symbol search) as well as the TMT a-b, Verbal Fluency (FAS), STROOP, WCST, CPT and TAVEC. Results: Significant differences were found between the two diagnoses in gender, where women had a higher presence in DD than in Schizophrenia, age of illness onset, it was higher in DD patients tan in patients with schizophrenia, DD patients showed less negative symptoms and higher social functioning rates. I terms of cognitive areas, the most significant differences between the two groups were found in memory followed by executive function and attention, were the DD patients were less impair that the patients with schizophrenia. Conclusions: DD can be classified and stay as a different diagnosis from Schizophrenia, it can be clearly be distinguished by sociodemographic variables like its age of onset, less first Rank symptoms, less neuropsychological impairment, although it is not completely preserved, compare to control subjects and better premorbid IQ. All these variables support the differences between these two diagnoses.

La implicación de la salud oral en el rendimiento físico del deportista es un área que ha suscitado un interés creciente en los últimos años. Atendiendo a los factores etiológicos de las patologías orales y a las repercusiones que éstas pueden tener sobre el organismo, se plantean las siguientes hipótesis de trabajo: (i) los hábitos higiénicos y dietéticos de la población deportista los sitúan, a priori, en un grupo de riesgo para el desarrollo de caries y erosión dental; (ii) el ejercicio anaeróbico máximo podría inducir respuestas específicasa a nivel oral que determinaran una diferente experiencia de caries; (iii) la oclusión dental podría estar asociada a alteraciones en el equilibrio del sujeto, de especial trascendencia en especialidades con un alto componente técnico. Esta tesis doctoral se lleva a cabo a través de varios estudios con los siguientes objetivos: (i) analizar y comparar la experiencia de caries (índice CAOD) en atletas de disciplinas anaeróbicas en comparación con la población general; (ii) estudiar el efecto de la realización de ejercicio anaeróbico máximo en carrera (series interválicas de 300 metros) en el valor del pH salival. A la vez, valorar la posible correlación entre el valor de pH salival y el lactato sanguíneo; (iii) comprobar si realizando un ejercicio de carácter similar al descrito en el punto (ii) en condiciones de hipoxia (series de saltos con contramovimiento (CMJ)) se modifica el pH salival en comparación con el mismo protocolo de ejercicio realizado en normoxia. A la vez, valorar una posible correlación entre el valor de pH salival y la saturación arterial de oxígeno (SaO2); (iv) valorar la influencia de la oclusión dental en el control postural del sujeto bajo condiciones de estabilidad opuestas (estática vs dinámica) en plataforma inestable; y (v) determinar si la fatiga muscular resultante de la realización de ejercicio máximo (CMJ o circuito de fuerza general) altera el equilibrio y si la oclusión dental es un factor determinante en el control del equilibrio del sujeto después del ejercicio. Los resultados obtenidos aportan las siguientes conclusiones: (i) la población deportista especialista en disciplinas anaeróbicas manifiesta una menor experiencia de caries que la población general; (ii) la realización de ejercicio anaeróbico láctico provoca una alcalinización en el valor del pH salival. Sin embargo, pese a observar una tendencia incremental paralela en los valores de lactato sanguíneo y del pH salival, la correlación entre ambos valores es inconcluyente; (iii) cuando se realiza ejercicio anaeróbico máximo en condiciones de hipoxia normobárica se produce una mayor alcalinización del pH salival en comparación con normoxia. A la vez, parece existir una correlación estadísticamente significativa entre la SaO2 y el pH salival; (iv) la información aferente de la oclusión dental podría contribuir en mayor medida en el proceso de control postural en presencia de mayores condiciones de inestabilidad. Además, existen determinadas características de la oclusión dental que influyen negativamente en el control postural del sujeto: el resalte, la desviación de la línea media, la clase de Angle, la mordida abierta anterior, la mordida cruzada, y el apiñamiento; y (v) la fatiga muscular resultante de la realización de un ejercicio máximo no causa alteraciones inmediatas en el equilibrio. De manera global, se puede concluir que la práctica de ejercicio físico anaeróbico de alta intensidad produce una alcalinización en el pH salival. A la vez, la oclusión dental parece influir en el equilibrio de la población físicamente activa sólo en condiciones de alta inestabilidad. El ejercicio anaeróbico produce respuestas específicamente diferentes que el aeróbico en la fisiología oral y de la misma manera, el estado de salud bucodental puede influir de modo diferente en el rendimiento anaeróbico y aeróbico. / The influence of oral health on the sport performance is a matter of growing interest. Here we conduct several researches with the following aims: (i) to compare the DMFT index in athletes of anaerobic disciplines with general population; (ii) to determine if high intensity anaerobic exercise could affect the salivary pH response; (iii) to determine if high intensity exercise performed in hypoxia could affect the salivary pH response in comparison to normoxia; (iv) to assess a possible correlation between salivary pH values and blood lactate or SaO2; (v) to determine whether there are differences in balance between opposed dental occlusion (Intercuspal position (ICP)/Rest position (RP)) for two extreme levels of stability (stable/unstable); and (vi) to determine whether the muscle fatigue affects stability and if it differs according to the dental occlusion condition. Results allow us to obtain the following conclusions: (i) athletes of anaerobic disciplines has less dental decay experience than general population; (ii) performing anaerobic lactic acid-producing exercise has an effect on saliva alkalinization; (iii) exercise performed in normobaric hypoxia has stronger effects in saliva alkalinization than when performed under normoxia; (iv) significant negative correlation was found between salivary pH and SaO2 levels for the tests performed under hypoxia conditions, whereas correlation between salivary pH and blood lactate was inconclusive; (v) the stability index was significantly better when dental occlusion was set in RP than in ICP in unstable conditions; and (vi) the postural control was not affected after maximal exercise. These results suggest and important interactions of oral health status and the anaerobic performance that may differ from aerobic exercise. Specifically, conclusions indicate that (i) a salivary pH alkalinization may occur after performing maximal anaerobic exercise; and (ii) the sensory information linked to the dental occlusion for the balance control comes strongly into effect in unstable conditions.

En este trabajo de tesis se han desarrollado distintas estrategias para la inmovilización controlada de anticuerpos sobre la superficie sensora de dispositivos biosensores de Resonancia de Plasmón Superficial. Estos inmunosensores se han aplicado en la determinación de las hormonas hTSH y hGH, ambas de vital importancia en el desarrollo y crecimiento del individuo. El objetivo principal ha sido maximizar la eficiencia del proceso de inmovilización del anticuerpo, controlando la orientación y densidad del mismo sobre la superficie, para obtener un inmunosensor de alto rendimiento. El contenido de esta tesis se ha dividido en tres bloques distintos. En el primero de ellos se ha descrito el desarrollo de un método que presenta un gran potencial en el control de dopaje con hGHr, que es idéntica a la isoforma de la hGH de 22kDa, fracción de la hormona biológicamente activa. La relación entre los niveles de esta y de la isoforma de 20kDa es indicadora de la presencia de hGHr. Haciendo uso del sistema biotina/estreptavina para la inmovilización del anticuerpo se ha desarrollado un inmunoensayo para la detección simultánea de ambas isoformas, uno de los grandes retos en el desarrollo de tests antidoping, que por el momento requieren dos ensayos independientes. La segunda sección del trabajo se ha centrado en el desarrollo de un método novedoso para la inmovilización de anticuerpos, basado en el uso de una proteína de fusión. Se ha utilizado el par BSA/antiBSA como sistema modelo para optimizar las condiciones del método, y finalmente, este se ha empleado en un inmunoensayo para la determinación de la hGH de 22 kDa. Se ha demostrado la utilidad de la proteína para conseguir llevar a cabo una inmovilización orientada del anticuerpo, de una manera muy sencilla, y reduciendo al máximo el uso de material y tiempo empleado durante el inmunoensayo. Finalmente, en el tercer bloque se ha desarrollado un inmunosensor para el diagnóstico del Hipotiroidismo Congénito Neonatal (HCN). Se han explorado dos vías distintas en la funcionalización de la superficie sensora, una de ellas basada en la optimización de la metodología empleada en el desarrollo del inmunoensayo para la detección de las isoformas de la hGH. Como segunda estrategia se ha desarrollado un método inmovilización basado en el uso de la proteína G. Los inmunosensores desarrollados han permitido la detección en suero de niveles de 1,2 ng/mL en el caso de la hTSH, valor por debajo del nivel de corte para el diagnóstico de HCN, y de 0,9 ng/mL en el caso de la hGH de 22 y 20 kDa, valor inferior a los niveles basales de hGH 22K (~ 1,1 ng/mL) y superior a los de la hGH 20K (~ 0,11 ng/mL). Estos resultados indican que el inmunosensor desarrollado para la detección de hTSH tendría utilidad en el diagnóstico de HCN. Respecto al inmunosensor desarrollado para la detección de las isoformas de la hGH, aunque la aplicación del mismo en el análisis anti-doping estaría limitada por la reducción que experimenten los niveles circulantes de la hGH 20K tras la administración de la hormona (por un mecanismo de control por retroalimentación negativa), el inmunoensayo permite calcular la relación hGH 22K:hGH 20K, parámetro indicador de dopaje con hGHr. / This thesis focused on the development of different strategies for the site-directed immobilization of antibodies on the sensor surface of Surface Plasmon Resonance devices. These immunosensors were applied in the determination of the hTSH and hGH hormones, which play a crucial role in the human growth and development. The main goal was to maximize the efficiency of the antibody immobilization procedures, controlling its orientation and density on the sensor surface, in order to achieve high performance immunosensors. The content of this work is divided in three sections. In the first one, the development of a method with a great potential in the detection of doping with hGHr, which is identical to the hGH isoform of 22kDa, the biologically active isoform. The ratio between this variant and the one of 20 kDa, is a biomarker parameter of the hGH doping. By using the biotin/streptavidin system for the antibody immobilization, an immunoassay for the simultaneous determination of both isoforms were developed, one of biggest challenges in the development of tests antidoping, which at the moment require two assays. The second section of the work focused on the development of a novel method for the immobilization of antibodies, based on the use of a fusion protein. The pair BSA/anti-BSA was used as model system for the optimization of the method conditions, and finally, it had been employed in an immunoassay for the determination of the 22 kDa hGH isoform. The utility of this protein for the achievement of an oriented immobilization of the antibodies in a simple way whilst consuming only tiny amounts of reagents and time was demonstrated. Finally, in the third section an immunosensor for the diagnosis of Neonatal Congenital Hypothyroidism (CH) was developed. Two approaches have been explored for the functionalization of the sensor surface, one of them based on the optimization of the methodology used for the development of the hGH isoforms immunoassay. The second strategy employed was based in the use of the protein G. The immunosensors developed in this work allowed the detection in serum of 1.2 ng/mL of hTSH, below the cut-off value for the diagnosis of CH, and 0.9 ng/mL of 22 kDa hGH and 20 kDa hGH, below basal levels of the 22 kDa isoform (~ 1.1 ng/mL), and above basal levels of the 20 kDa (~ 0.11 ng/mL). These results demonstrate the potential clinical application of the immunosensor developed for the detection of hTSH. Regarding the immunosensor developed for the detection of the hGH isoforms, although its application in anti-doping analysis would be limited by reduction of the 20K isoform after hGH administration (due to a negative feedback mechanism), the immunoassay allows the calculation of the hGH 22K:hGH 20K ratio, biomarker parameter of hGH doping.

La gripe es un problema de salud pública en todo el mundo, siendo una de las enfermedades infecciosas más comunes y una patología de las vías aéreas altamente contagiosa. Desde abril de 2009, un nuevo virus de influenza A H1N1, con origen porcino dio lugar a la aparición de brotes en todo el mundo siendo declarada posteriormente como una situación de pandemia. Hoy en día el virus pdmH1N1 de 2009 continúa en circulación, generalmente provocando infecciones leves y autolimitadas. Sin embargo, un pequeño porcentaje de pacientes requieren hospitalización y atención especializada en la Unidad de Cuidados Intensivos (UCI). Es digno de mención comentar que se ha identificado un aumento en la producción de citoquinas proinflamatorias en pacientes de UCI. Esta observación sugiere la hipótesis de que la heterogeneidad en el resultado de la infección por virus de la gripe pdmH1N1 de 2009 podría ser debido no sólo a la diferencia entre fitness /virulencia de las diversas cepas de virus pandemico circulantes, sino también por el medio ambiente inmune del huésped que pueden contribuir a la patogénesis respiratoria grave, probablemente por una respuesta inmune exacerbada asociada a hipercitoquinemia. Para probar esta hipótesis el presente trabajo se divide en cuatro estudios que describen los experimentos realizados en ratones y hurones con los virus pdmH1N1 de 2009 aislados durante el brote de 2009 de pacientes que mostraron grados de enfermedad desde leve a severa con el fin de analizar las características patológicas de la infección. Los experimentos en los capítulos 5 y 6 se llevaron a cabo con el fin de evaluar si los altos niveles de citoquinas proinflamatorias y, en particular IL-6, podrían afectar a la respuesta inmune del huésped y al curso clínico de la infección. Los ratones fueron tratados con LPS o ratones que expresaron altos niveles de IL-6 fueron infectados con el virus pdmH1N1 de 2009 (CAT09) simultáneamente. En el caso de la exposición a LPS, los resultados mostraron que los signos clínicos y la pérdida de peso fueron directamente influenciadas por LPS en los animales infectados con CAT09. Sin embargo, no se detectaron diferencias en la carga viral de los pulmones de los ratones infectados con exposición de LPS, lo que indica que el tratamiento con LPS no estaba afectando a la replicación viral in vivo. La secreción de IL-6 después de la exposición a LPS correlacionó con pérdida de peso corporal a mayor grado de patología. El papel de la IL-6 en la infección por influenza se abordó mediante la inducción de IL-6 en ratones antes de ser infectados con CAT09. Una vez más, los niveles de IL-6 se correlacionaron con la pérdida de peso. Sorprendentemente, la replicación viral no fue afectada por altos niveles de IL-6 debido a que la carga viral no mostró diferencias significativas cuando se compararon los dos grupos infectados, aunque los animals infectados con alto nivel de IL-6 aclararon el virus antes que los animales infectados con CAT09. Se detectó una fuerte respuesta de anticuerpos en los animales infectados, siendo los ratones infectados sólo con CAT09 sin tratamiento con IL-6, los que obtuvieron los mayores títulos de inhibición de hemaglutinación. IL-10 correlacionó con los niveles de IL-6 en el suero y en los pulmones en los primeros días después de la infección. Finalmente, las lesiones histopatológicas fueron más graves en los ratones con altos niveles de IL-6 e infectados con CAT09. Desde el inicio de la pandemia de 2009, mutaciones de resistencia a oseltamivir (OsR) se han descrito en virus circulante pdmH1N1 de 2009. En el capítulo 7 estudios in vitro e in vivo en el que se compararon dos cepas (R6 y R7) de virus pandémico OsR. Hubo diferencias in vitro en la cinética de ambos virus que finalmente se reflejó en la patogénesis de la infección in vivo. Los resultados obtenidos en el análisis in vitro mostraron diferencias en el fitness en la replicación viral de los virus estudiados respecto a un virus sensible a oseltamivir (F), siendo F > R6 > R7. En el siguiente experimento in vivo, ambas cepas OsR produjeron un resultado fatal aunque en diferente magnitud y cinética; el grupo infectado con R6 experimentó un 40 % de letalidad y el grupo R7 un 20 % a los 4 dpi. Sin embargo, a 7 dpi el porcentaje de supervivencia fue de un 50 % para ambos grupos infectados con virus OsR. La replicación viral detectada en los pulmones de los grupos infectados con virus OsR obtuvo los valores no estadísticamente diferentes para R7 que para R6. Hubo una fuerte respuesta de anticuerpos a los 14 dpi en ambos grupos infectados para cada virus, pero no anticuerpos de reacción cruzada. Curiosamente, se detectaron altos niveles de IL-6 en el suero de los ratones R7 con diferencias significativas. Sorprendentemente, los niveles de IL-6 en los pulmones de R6, R7 y animales control fueron similares a todos los tiempos sin diferencias estadísticas. Niveles de IL-10 de suero y pulmón mostraron valores ligeramente más altos también en ratones R7 en comparación con los controles a los 3 y 5 dpi, respectivamente. Hallazgos histopatológicos mostraron lesiones más severas en ratones R7 a 5 dpi. Para analizar las posibles diferencias de virulencia, se infectaron hurones con dos virus pdmH1N1 de 2009 de dos pacientes sin condiciones comórbidas conocidas, uno con consecuencia fatal (F), mientras que el otro sólo mostró enfermedad respiratoria leve (M). Este estudio está comprendido en el capítulo 8. Los hurones desarrollaron diferente grado de severidad de signos clínicos que no se correlacionaron con el origen del virus utilizado en la infección, exhibiendo patología severa (S) o no severa (NS). Se detectó una disminución significativa en el peso corporal en los animales S en comparación con los animales NS a 4 a 7 dpi. La evolución clínica de la infección se relaciono directamente con los hallazgos histopatológicos. El análisis de las proteínas de fase aguda mostró que las concentraciones de haptoglobina (HP) y amiloide A sérico (SAA) incrementaron en ambos grupos después de 2 pi. Los títulos de virus en todos los tejidos fueron más altos en los hurones pertenecientes al grupo S en comparación con los hurones pertenecientes al grupo de NS a 4 dpi. Los animales infectados con ambos virus mostraron una fuerte inhibición de la hemaglutinina de la respuesta de anticuerpos en el suero de ambos virus a 10 y 14 dpi. Los hurones con un progreso severo de la infección clínica mostraron respuestas de anticuerpos ligeramente más altos y los títulos virales más altos después de la infección. / Influenza is a worldwide public health concern, being one of the most common infectious diseases and a highly contagious airborne pathology. From April 2009, a new influenza A H1N1 virus with swine origin gave rise to the emergence of worldwide outbreaks which was subsequently declared as a pandemic situation. Nowadays pdmH1N1 2009 virus continues on circulation and generally triggers mild and self-limiting infections. Nevertheless, a small percentage of the patients require hospitalization and specialized attention in Intensive Care Units (ICUs). Noteworthy, in ICU patients an increased proinflammatory cytokine production has been identified. This observation would suggest the hypothesis that the heterogeneity in the outcome of pdmH1N1 2009 influenza virus infection could be due not only to differential fitness/virulence of the diverse circulating pandemic virus strains but also to the host immune environment that may contribute to severe respiratory pathogenesis, probably by an exacerbated immune response associated to hypercytokinemia. To test such hypothesis the work was divided in four studies describing the experiments performed in mice and ferrets with pdmH1N1 2009 viruses isolated during the 2009 outbreak from patients that showed mild to severe disease in order to analyse pathological features of the infection. Experiments in chapters 5 and 6 were conducted in order to evaluate whether high levels of proinflammatory cytokines and in particular IL-6, might affect host immune responses and the clinical course of infection. Mice were treated with LPS or mice expressing with high levels of IL-6 were infected with pdmH1N1 2009 (CAT09) simultaneously. In the case of LPS exposure, results showed that clinical signs and weight loss were directly influenced by LPS in CAT09 infected. However, no differences in viral load of lungs from infected mice were detected upon LPS exposure, indicating that LPS treatment was not affecting viral replication in vivo. IL-6 secretion upon LPS exposure correlated with body weight loss and higher pathology. The role of IL-6 in influenza infection was addressed by inducing IL-6 in mice prior CAT09 infection. Again, IL-6 levels correlated with weight loss. Surprisingly, viral replication was not affected by high levels of IL-6 since viral load did not exhibit significant differences when both infected groups were compared, although high level of IL-6 in infected animals correlated with sooner viral clearance than the CAT09 infected animals. A strong antibody response was detected in infected animals, being only CAT09 infected mice without IL-6 treatment, the ones with the highest hemagglutinin inhibiting titers. IL-10 levels correlated with IL-6 levels in serum and lungs in the first days after infection. Finally, histopathological lesions were more severe in mice with high levels of IL-6 and CAT09 infected. From the onset of the 2009 pandemic, oseltamivir resistance (OsR) mutations have been described on circulating pdmH1N1 2009 viruses. In chapter 7, in vitro and in vivo experiments in which two strains (R6 and R7) of OsR pandemic virus were compared. There were kinetics differences in both virus in vitro that finally were reflected in the pathogenesis of infection in vivo. The results obtained in the in vitro analysis showed different fitness in viral replication in the virus studied in comparison with a oseltamivir sensitive virus (F), being F>R6>R7. On the following in vivo experiment, both OsR strains produced a fatal outcome although with different magnitude and kinetics, R6-infected group experimented a 40% of lethality and R7-group a 20% at 4 dpi. However, at 7 dpi the percentatge of survival was a 50% in both OsR-infected groups. Viral replication detected in lungs from OsR-infected groups had higher but not statistically different values for R7 than for R6. There was a strong antibody response at 14 dpi on both infected groups for each virus but no cross- reactive antibodies. Interestingly, high levels of IL-6 were detected in serum from R7-mice with significant differences. Surprisingly, levels of IL-6 in lungs of R6, R7 and control animals were similar at all time-point with no statistical differences. Serum and lung IL-10 had also slightly higher values in R7-mice when compared with controls at 3 and 5 dpi respectively. Histopahological findings showed more severe lesions on R7-mice at 5 dpi. To analyze possible virulence differences in viral fitmess, ferrets were infected with two contemporary pdmH1N1 2009 viruses from two patients without known co-morbid conditions, one that became fatal (F) while the other only showed mild (M) respiratory disease. These were studied in chapter 8. Ferrets developed different degree of clinical signs severity that did not correlate with the origin of the virus used in the infection, exhibiting severe (S) or non severe (NS) pathology. A significant decrease in body weight was detected in S animals compared to NS animals at 4 to 7 dpi. Clinical progress of the infection correlated directly with histopathological findings. The analysis of the acute phase proteins showed that the concentrations of haptoglobin (HP) and serum amyloid A (SAA) increased in both groups after 2 dpi. Virus titres in all tissues were higher in ferrets belonging to S group when compared to ferrets belonging to NS group at 4 dpi. Animals infected with both virus showed a strong hemagglutinin inhibiting antibody response in sera to both viruses at 10 and 14 dpi. Ferrets with a severe progress of the clinical infection showed slightly higher antibody responses and higher viral titers after infection.

Els sistemes de separació mitjançant membranes han guanyat importància com a tècniques de separació enantiomèrica. S'han investigat distintes configuracions de membranes.Per a la separació enantiomèrica de SR-propranolol, fàrmac usat per al tractament d'algunes anomalies cardiovasculars, s'han estudiat diferents transportadors selectius: N-alquil-hidroxiprolines i dialquil tartrats en membranes líquides, i el norbornadiè com a polímer quiral. Malgrat tots aquest sistemes mostraven resultats prometedors, cap d'ells ha estat investigat detalladament. La finalitat d'aquesta tesi ha consistit a desenvolupar i caracteritzar diferents sistemes de membrana per a la separació del fàrmac SR-propranolol. S'han investigat quatre sistemes distints de membranes: membranes líquides suportades (SLM), membranes compòsit activades (ACM), membranes activades quirals (CAM) i membranes basades en polisulfona quiral (CPS). En la majoria dels casos s'ha emprat com a transportador selectiu l'N-hexadecil-L-hidroxiprolina (HHP).L'estudi i la caracterització de cada sistema s'ha dut a terme mitjançant tècniques microscòpiques i experiments de transport usant quatre mòduls de membrana diferents: una cel·la de diàlisi, un mòdul micro espiral , un mòdul que permet el modelatge del transport i un mòdul de filtració frontal. L'estudi del sistema de SLM va permetre elucidar els dos mecanismes de transport implicats en aquest sistema de separació, així com discriminar els principals paràmetres que governen (en termes de flux i selectivitat) el comportament del sistema de membranes. En condicions òptimes de treball (fase de càrrega ajustada a pH 8 i concentració de transportador de C/A = 3) es va detectar un excés enantiomèric del 5.6%. Les membranes compòsit activades, formades per una capa porosa de polisulfona pel·liculada sobre un paper no teixit, i una capa densa superficial de poliamida, foren caracteritzades mitjançant distintes tècniques: microscòpia de força atòmica, transport de soluts, mesures d'angle de contacte, ressonància electrònica d'espí, i microscòpia electrònica d'escombratge. L'ús d'aquestes tècniques complementàries va permetre obtenir informació de la morfologia interna i superficial de les membranes, i alhora va confirmar la presència de transportador a l'interior de les membranes. Tot i així, al ser aplicades per a la separació enantiomèrica de propranolol no es va observar transport enantioselectiu. Les CAM, formades per un capa porosa de polisulfona pel·liculada sobre un paper no teixit, si que van permetre el transport enantioselectiu del fàrmac d'estudi. En aquest cas es va estudiar la influència sobre el sistema de la concentració de transportador selectiu en la membrana i del valor de pH de la solució receptora. L'estudi va revelar la relació entre el flux i la enantioselectivitat i va contribuir a proposar les preferències d'afinitat del transportador vers ambdós enantiòmers del fàrmac propranolol. Els bons resultats van esperonar el desenvolupament d'un nou sistema de membranes CAM emprant didodeciltartrat com a transportador selectiu. La comparació dels dos sistemes de CAM es va dur a terme mitjançant el modelatge del transport ambdós enantiòmers implicats. Els resultats mostraren que el segon sistema posseeix millors propietats per al transport enantioselectiu de propranolol.Per últim es van investigar les membranes basades en polisulfona quiral, que contenen el selector quiral enllaçat covalentment a la matriu polimèrica. La polisulfona fou derivatitzada seguint dues rutes sintètiques distintes, i van obtenir-se dos productes diferents: CPSA i CPSB. Ara bé, sols la CPSA va resultar adequada com a polímer. Les membranes obtingudes a partir de CPSA van ser caracteritzades. L'aplicació d'aquest tipus de membranes van donar lloc a resultats prometedors tan pel que fa al flux com a la enantioselectivitat, i van permetre confirmar la major afinitat del selector per a l'enantiòmer S-propranolol. En aquest cas, quan es va incorporant la quantitat més gran possible de transportador en la membrana es va obtenir un factor de separació de 1,1a les 96h d'experimentació. / Membrane systems have been gaining importance as enatioseparation techniques.Various membrane configurations, have been proposed to attain enantioseparation. Liquid membrane processes were firstly proposed, however they exhibit a rapid selectivity decrease with operating time and show low stability and short lifetime when tested under industrial separation conditions. Therefore, solid polymeric membranes have also been developed. For the case of SR-propranolol, a β-blocking drug used for treating certain cardiovascular anomalies different enantioselective carriers have been studied. N-n-alkyl-hydroxyprolines, and dialkyl tartrate were used in liquid membrane configurations, and norbornadiene was considered as chiral polymer. Although all these membrane systems showed promising results, none of them was investigated in detail. The purpose of the present work was the characterisation and development of membrane systems for the enantioselective separation of SR-propranolol. Four different membrane systems, based in supported liquid membranes (SLM), activated composite membranes (ACM), chiral activated membranes (CAM) and chiral polysulfone (CPS) membranes, have been investigated. In most of them, N-hexadecyl-L-hydroxyproline (HHP) was applied as chiral carrier.The study and characterization of each membrane type was carried out using microscopy techniques and transport experiments. The latest were conducted with four different membrane modules: a dialysis cell, a micro spiral module, a module capable of well-defining hydrodynamics conditions for transport modelling and a dead-end filtration module. The study of SLM, permitted the elucidation of the two transport mechanisms involved in these separation systems and allowed discriminating the principal parameters governing the performance of the membrane system, either in terms of flux as in terms of selectivity. Under operating conditions showing the best performance results (feed at pH 8, and carrier concentration up to C/A = 3) a 5.6% of enantiomeric excess was reached. Activated composite membranes (ACM) consisted of a porous polysulfone support casted on a none-woven fabric, with a top dense polyamide layer. ACM were characterized by different techniques, such as atomic force microscopy, solute transport, contact angle measurements, electron spin resonance, and scanning electron microscopy. The use of all these complementary techniques provided an extensive and concise description of ACM internal and surface morphology, together with the confirmation of the presence of the chiral carrier inside the membranes. However, when applied to the enantioseparation of propranolol enantioselectivity was not observed. CAM consisted in a porous polysulfone film, also casted on a non-woven fabric. This membrane type permitted the enantioselective transport of propranolol across the membranes. In that case, the influence of carrier concentration in the membrane as well as the striping phase pH were studied. These studies revealed the relationship between transport rate and enantioselectivity and contributed to propose the affinity preferences of the carrier by the two enantiomers. The good results obtained, motivated the development of another CAM system containing the chiral carrier didodecyltartrate. The comparison of the two equivalent systems was carried out by conveniently modelling the transport of both propranolol enantiomers. Results showed that the last system possesses better properties for the enantioseparation of propranolol.The last type of polymeric membranes assayed were based in chiral polysulfones CPS, containing the chiral carrier covalently bonded to the polysulfone polymeric structure. PS was chiraly derivatised following two different sysnthetic routes, and two corresponding chiral polysulfones were obtained, namely CPSA and CPSB. However when preparing the membranes, only CPSA was suitable as polymer. CPS membranes, obtained from CPSA were prepared and characterised. The application of these polymeric membranes showed promising results regarding both the transport rate and enantioselectivity, and confirmed the higher affinity of the carrier by the S-propranolol enantiomer. In that case, with membranes containing the highest CPSA amount, a separation factor of 1.1 was encountered at 96h of experiment.

El tema principal de esta tesis doctoral se centra en el análisis del proceso emprendedor de los jóvenes españoles, la diferenciación de su actividad emprendedora a nivel territorial, y en el estudio del aporte que estos jóvenes pueden hacer a la economía. Con respecto a las diferentes perspectivas con las que se puede abordar el estudio del emprendimiento, esta investigación utiliza tanto el enfoque psicológico, más exactamente la teoría de los rasgos de la personalidad del individuo como condicionante de su proceso para ser emprendedor; como también, el enfoque institucional, el cual propone que un individuo está determinado por el entorno socio-cultural. En especial, se analiza el impacto que la presencia de determinados factores socio-culturales tienen sobre la actividad emprendedora de los jóvenes en España. Del objetivo central de esta tesis se desprenden tres objetivos específicos; de esta manera, el contenido de este estudio se estructura en tres ensayos, uno por cada objetivo específico. Por otra parte, los resultados de esta investigación se obtuvieron a partir de una muestra tomada de GEM-España entre los años 2004 y 2009 y de algunos datos, demográficos y de la economía española, provenientes del Instituto Nacional de Estadística. Con relación a los resultados generales de esta tesis, se puede indicar lo siguiente: en el primer ensayo, a través un modelo logit ajustado para eventos extraños, se confirma para el ámbito español lo que la literatura académica indica con respecto a que los jóvenes son más emprendedores que los no-jóvenes. De igual forma, se corrobora que ciertos factores socio-culturales y la autoconfianza ayudan a explicar porque este segmento de la población puede ser más emprendedor que otros. Para el caso de España, el impacto positivo de la autoconfianza para ser emprendedor es mayor en la juventud que en los no-jóvenes; además, el impacto negativo del miedo al fracaso es menor en los jóvenes. Por otra parte, el segundo ensayo aplicando un modelo logit explica las diferencias de actividad emprendedora entre los jóvenes urbanos y rurales a través de factores tales como los modelos de referencia y el estigma social al fracaso. El primero, impacta positivamente más a los jóvenes urbanos; y con el segundo no se encontró diferencias significativas entre los jóvenes rurales y urbanos. Por último, el tercer de los ensayos desarrolló un modelo de datos de panel, a través del cual analizó si el emprendimiento contribuye en el desempeño económico regional en España y en éste cuál es la contribución de los jóvenes emprendedores. Este ensayo encontró que la actividad emprendedora de España si contribuye al crecimiento de su PIB per cápita, pero no son los jóvenes emprendedores los que más jalonan este desempeño económico, son los emprendedores no-jóvenes. Esto es explicado por medio de las diferencias regionales existentes en el impacto de factores tales como la autoconfianza, los modelos de referencia, y el estigma social al fracaso sobre los jóvenes y no-jóvenes emprendedores. Por consiguiente, el ensayo indica que el nivel de autoconfianza en las habilidades emprendedoras de la población de un territorio tanto como la proporción de modelos de referencia emprendedores aumentan positiva y significativamente los niveles de actividad emprendedora en ese territorio y consecuentemente contribuye al crecimiento del PIB per cápita. A diferencia del estigma social a fracaso que impacta negativamente a la actividad emprendedora de un territorio y por ende a su desempeño económico. / The main subject of this thesis is the analysis of the entrepreneurial process of Spanish youth. Within this subject the focus lies on the differentiation of their entrepreneurial activity at a territorial level and the study of their contribution to the economy. Having in mind the different approaches to the study of entrepreneurship, this research uses a psychological and institutional approach; according to the first, this thesis studies individual personality traits as a condition of their process becoming an entrepreneur. In accordance to the institutional approach the study proposes that this same entrepreneurial process is determined by the socio-cultural environment. In particular, the thesis analyses the impact of certain socio-cultural traits over youth´s entrepreneurial activity in Spain. The study is structured in three essays, each of whom focuses on one specific objective derived from the main subject. A sample was build using data from the GEM- Spain between 2004 and 2009 and some demographic and Spanish economy data from the National Institute of Statistics of Spain. The results indicate the following: in the first essay, through an adjusted model for rare events logit, the hypothesis found in the literature that in Spain young people are more entrepreneurial than non-young can be confirmed. Also, it was found that certain socio-cultural factors and self-confidence help explain why this segment of the population is more entrepreneurial than others. Thus, in the case of Spain, the positive impact of self-confidence on becoming an entrepreneur is higher in youth than in non-young, and the negative impact of fear of failure is lower in this population. Moreover, the second essay explains the differences in entrepreneurial activity between urban and rural youth. Appling a logit model the results show that role models have a more positive impact on urban youth than rural youth. In contrary the factor stigma of failure did not show any significant difference between rural and urban youth. Finally, the third essay develops a panel data model, which analyses whether entrepreneurship contributes to regional economic performance in Spain, and the contribution of young entrepreneurs within the same. The results indicate that entrepreneurial activity in Spain contributes to the growth of GDP per capita, but that the contribution of young entrepreneurs in the economy is less than the one of non-young entrepreneurs. This is explained by the existing regional differences in the impact of factors such as self-confidence, role models, and the social stigma of failure over the young and not-young entrepreneurs. Therefore, the essay indicates that the level of self-confidence and the proportion of entrepreneurial role models in a territory increases significantly the levels of entrepreneurial activity in the area, and consequently contributes to the growth of GDP per capita; unlike the social stigma of failure which impacts negatively on the entrepreneurial activity in a territory and thus their economic performance.