Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T17:37:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Elisabete Conceição.pdf: 567171 bytes, checksum: 1955730634dbe5b3fb43878595214d3b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T17:37:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Elisabete Conceição.pdf: 567171 bytes, checksum: 1955730634dbe5b3fb43878595214d3b (MD5) / FAPESB; CAPES / Introdução: O fato de apenas 10% das pessoas infectadas com M. tuberculosis desenvolverem a doença clínica sugere que fatores genéticos podem desempenhar um papel importante na patogênese da TB. Polimorfismos em genes de citocinas têm sido associados com susceptibilidade, gravidade e variação na resposta clínica em várias doenças, incluindo doenças infecciosas. Para combater a doença, a única vacina licenciada para uso contra a tuberculose é o Bacilo de Calmette-Guérin (BCG). A proteção induzida pela vacinação contra o M. tuberculosis é mediada pela geração de células T específicas e produção aumentada de IFN-γ. Objetivo: Avaliar a associação entre o polimorfismo de genes de citocinas e receptores em voluntários sadios revacinados com BCG ao perfil de resposta in vitro a antígenos micobacterianos. Metodologia: 25 voluntários com resultados negativos ao teste tuberculínico em dupla testagem (que fizeram parte de um estudo de revacinação com Bacilo de Calmette-Guérin, cepa Moreau), foram recrutados para o estudo. As citocinas IFN-γ, TNF, IL-10, IL-6 e IL-1β foram avaliadas no sobrenadante das culturas de sangue total estimuladas com antígenos do M. tuberculosis. Os polimorfismos de interesse IFNG +874T>A, IL10- 592C>A, IL1B-35C>T, TLR2 G753A (Arg753Gln) e TLR4 C399T (Thr399Ile) foram amplificadas por reação em cadeia da polimerase (PCR) e a análise dos polimorfismos foram identificados por tamanho dos fragmentos de restrição (PCR-RFLP) ou Amplificação pelo Sistema de Mutação Refratária (ARMS-PCR). Resultados: Não houve diferença significativa na produção das citocinas IFN-γ, IL-10, TNF, IL-6 e IL-1β antes ou após a revacinação com BCG entre os diferentes genótipos dos polimorfismos estudados. Discussão e Conclusão: No presente estudo, foi observado que o aumento da produção de IFN-γ (estudo de revacinação com Bacilo de Calmette-Guérin, cepa Moreau) após a revacinação de indivíduos saudáveis com BCG não foi influenciada por polimorfismos previamente associados com resistência e/ou susceptibilidade ao desenvolvimento da tuberculose em outras populações. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-14T20:57:37Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Leonardo Nascimento Santos.pdf: 1769409 bytes, checksum: 84530b31d51dfec9bf3c5617b8fb1217 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-14T20:57:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Leonardo Nascimento Santos.pdf: 1769409 bytes, checksum: 84530b31d51dfec9bf3c5617b8fb1217 (MD5) / CAPES; FAPESB / Estudos epidemiológicos e experimentais indicam que helmintos regulam respostas imunes a aeroalérgenos através da estimulação de uma rede de regulatória. Tem sido relatado que infecção por T. trichiura e outros trichuroides levam à proteção contra atopia, doenças alergicas e autoimunes. O objetivo deste estudo foi identificar frações do extrato somático de T. trichiura (TtEFs) com atividade imunomodulatória, avaliando seus efeitos sobre a produção de citocinas por células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de doadores saudáveis. Quatorze TtEFs (TtEF1 a TtEF14) foram obtidos pelo fracionamento do extrato somático de T. trichiura por cromatografia líquida de troca iônica. Para avaliar o efeito estimulatório das TtEFs sobre a produção de citocinas (IL-10, IL-12 p40, TNF-α, IL-5 e IL-13) por CMSP, essas células foram obtidas de doadores saudáveis e cultivados na presença das TtEFs (50 ug de proteína/mL). Efeitos inibitórios foram avaliados por incubação das células com as TtEFs e: (a) uma concentração subótima de LPS (4 UE/mL), para IL-10 e TNF-α, (b) LPS e interferon (IFN) γ (100 ηg/mL), para IL-12 p40, e (c) fitohemaglutinina (5 μg/mL), para IL-5 e IL-13. As citocinas foram quantificados por ELISA de captura. Oito das frações (TtEF6, TtEF8 a TtEF14), bem como o extrato somático de T. Trichiura, induziram a produção de IL-10, TNF-α e, em menor quantidade, IL-12 p40. Três das frações (TtEF8, TtEF9 e TtEF10) não induziram significantemente a produção de IL-12 p40. Nenhuma das frações estimulou a produção de IL-13. Estas oito frações que estimularam a produção de IL-10 foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de dodecilsulfato de sódio e para a atividade inibitória sobre a produção de citocinas por CMSP estimuladas. Todas as frações inibiram a produção de pelo menos uma citocina, mas nenhuma delas inibiu a produção de IL-10. Apenas uma das frações (TtEF9) inibiu significativamente a produção de todas as outras citocinas analisadas. TtEF10 inibiu a produção de TNF-α, IL-5 e IL-13; TtEF11 reduziu a produção de ambos TNF-α e IL-12 p40; três frações (TtEF6, TtEF12 e TtEF13) inibiram apenas a produção de TNF- α e duas frações (TtEF8 e TtEF14) inibiram significativamente apenas a produção de IL-5. Os resultados obtidos indicam que T. trichiura produz mais de uma molécula com atividade imunomodulatórias. TtEF9, que, além de estimular a produção de IL-10, sub-regula a produção de todas as outras citocinas estudadas, é o melhor candidato para conter uma molécula imunoregulatória que deve ser caracterizada e purificada à homogeneidade, a fim de investigar a sua utilização como um agente terapêutico para doenças imunomediadas. / Salvador

FONSECA, F. R. M. Influência da carga parasitária e do sítio de inoculação na imunopatogênese da leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis em hamster. 2016. 90 f. Dissertação (mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T13:12:30Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T13:12:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-18T13:12:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Leishmania braziliensis is the main causative agent of cutaneous leishmaniasis in Brazil and despite its importance for public health, there is a lack of an experimental model that can be used for testing new therapies and vaccines. The aim of this study was to investigate the influence of parasite burden and the inoculation site in the immunopathogenesis of cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis in hamsters using ear dermis infection model. Groups of animals (n = 48) were infected intradermally in the ear (n = 24) or paw (n = 24) with 105 promastigotes of L. braziliensis. Afterwards, other groups of animals (n=32) were infected intradermally in the ear with 105 (n=16) or 106 (n=16) promastigotes. The lesions were measured every 5 days for 60 days. The animals were euthanized at 30, 45 and 60 d.p.i., and had their infected ears and paws, as well as lymph nodes (retromaxilar or popliteal), livers and spleens collected for evaluation of parasite burden and expression of inflammatory mediators, and analysis of histopathological changes. The lesions arose at 20 d.p.i. both paw and ear. The ear lesions ulcerated and were bigger (p< 0.0001) in contrast to paw lesions that presented themselves as small nodules without ulcers. It was observed significant parasitic burden in the ear after 30, 40 and 60 d.p.i. at the lesion and in the lymph node, with parasite burden being always bigger at the lesion. Regardless of the route of inoculation, neither liver and spleen were enlarged nor had lumps or parasites. In the retromaxillary lymph node, it was observed a greater expression of inflammatory cytokines IFN- ɣ, TNF- α and IL -6 and the enzyme arginase, 30 and 60 d.p.i., and it was corroborated by histological changes observed in the ear, intenser inflammatory process and chronicity of the disease. On the contrary, the popliteal lymph node (paw) presented a combination of pro and anti-inflammatory cytokines indicating a precocious regulation of immune and inflammatory response. It was also observed that the bigger the inoculum, the more intense the inflammatory response and bigger the lesions, however, without parasite dissemination to the liver and spleen, indicating lesser systemic commitment and increased survival time of the animal. In short, the data indicates that the inoculum of 105 parasites through the ear dermis infection model could make easier the visualization of a possible protective effect of new drugs or vaccine candidates. / Leishmania braziliensis é o principal agente causador de leishmaniose cutânea no Brasil, e apesar de sua importância para a Saúde Pública, há carência de um modelo experimental que possa ser usado para testar novas terapias e vacinas. O objetivo deste estudo foi investigar a influência da carga parasitária e do sítio de inoculação na imunopatogênese da leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis em hamster no modelo de infecção na derme da orelha. Grupos de animais (n=48) foram infectados por via intradérmica, na orelha (n=24) ou na pata (n=24), com 105 promastigotas de L. braziliensis. Em seguida, outros grupos de animais (n=32) foram infectados por via intradérmica na orelha, com 105 (n=16) ou 106 (n=16) promastigotas. As lesões foram medidas a cada 5 dias por 60 dias. Os animais foram eutanasiados com 30, 45 e 60d.p.i, e coletados a orelha e pata infectada, linfonodos (retromaxilar ou poplíteo), fígado e baço, para a avaliação da carga parasitária, expressão de mediadores inflamatórios e análise das alterações histopatológicas. As lesões surgiram com 20d.p.i., tanto na pata como na orelha. As lesões na orelha ulceraram e foram maiores (p<0,0001) ao contrário das lesões da pata, que se apresentaram como pequenos nódulos, sem úlceras. Na orelha foi observada significante carga parasitária após 30, 40 e 60d.p.i., tanto na lesão como no linfonodo, sendo a carga parasitária sempre maior na lesão. Independente da via de inoculação, o fígado e baço não estavam aumentados, não apresentavam nódulos e nem parasitos. No linfonodo retromaxilar, observou-se uma maior expressão das citocinas inflamatórias IFN-ɣ, TNF-α e IL-6 e da enzima arginase, com 30 e 60d.p.i., e isso foi corroborado com as alterações histológicas observadas na orelha, processo inflamatório mais intenso e cronicidade da doença. Ao contrário, no linfonodo poplíteo (pata), apresentou um misto de citocinas inflamatórias e anti-inflamatórias, sugerindo uma regulação bem precoce da resposta imunológica e inflamatória. Observou-se também que quanto maior o inóculo, mais intensa a resposta inflamatória e maiores as lesões, entretanto, sem disseminação do parasito para fígado e baço, sugerindo menor comprometimento sistêmico e maior tempo de sobrevida para o animal. Em suma, os dados indicam que o inóculo de 105 parasitos no modelo de infecção na orelha poderia facilitar a visualização de um possível efeito protetor de novos fármacos ou candidatos vacinais.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / A leptospirose constitui uma importante zoonose, encontrada em regiões de clima tropical, ocorrendo principalmente em épocas chuvosas. O controle da infecção depende do adequado reconhecimento do microorganismo pelos receptores de reconhecimento de padrão de patógenos, os TLRs, presentes nas células do sistema imune inato do hospedeiro. A ativação dos TLRs é fundamental para o desencadeamento da resposta inflamatória, mediadora da resposta de proteção e de lesão no processo infeccioso. Objetivos: Avaliar a expressão dos receptores TLR2, TLR4 e CD14 na superfície de monócitos e a resposta in vitro aos estímulos LipL32 (extraído de Leptospira sp.), MALP-2 (antígeno sintético de Mycoplasma fermentans) e LPS (antígeno extraído de Salmonella abortus equi) ligantes dos TLRs, medida pela produção de citocinas, em pacientes com leptospirose. Métodos: Foram incluídos 07 pacientes com quadro clínico e laboratorial de leptospirose e 07 voluntários sadios, utilizados como controle. As células mononucleares do sangue periférico (CMSP) foram separadas utilizando ficoll-paque, congeladas e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelamento, verificação da viabilidade e acerto da concentração de células para 1x106 células/mL foi mensurada a expressão de TLR2, TLR4 e CD14 na superfície de monócitos. O restante da suspensão de células foi incubada por 6 horas com os estímulos de 1000ng/mL de LipL32, 0,4U/mL de MALP-2 ou 100ng/mL de LPS. Após a primeira hora de incubação foi adicionado monensina para bloqueio da secreção de citocina. Em seguida, as CMSP foram marcadas com CD14, fixadas, permeabilizadas e expostas aos anticorpos anti-IL-6 e anti-TNF-α para detecção intracelular da produção destas citocinas inflamatórias nos monócitos. Foram adquiridos 10.000 eventos combinado-se morfologia e positividade para CD14 em citometria de fluxo. Resultados: Não foi observada diferença significativa na resposta inflamatória entre pacientes com leptospirose e voluntários sadios quando CMSP foram estimuladas in vitro com MALP-2 e LipL32 para indução da produção de citocinas inflamatórias (IL-6 e TNF-α) em monócitos. Todavia, a produção de TNF-α foi menor após estímulo com LPS (p=0,035), o que não ocorreu com a produção de IL-6. Em relação à expressão de receptores de superfície, foi observado aumento da expressão de TLR2 (p=0,025) na superfície de monócitos dos pacientes, porém não houve diferença na expressão de TLR4 e CD14. Conclusões: Neste estudo demonstramos que a capacidade de reconhecimento de antígenos pelos monócitos do sangue periférico de pacientes com leptospirose está preservada ou aumentada. Além disso, observamos que a produção de citocinas inflamatórias frente a antígeno da própria Leptospira (LipL32) e outro antígeno agonista de TLR2 (MALP-2) está mantida. Entretanto, a produção de citocina inflamatória frente ao LPS (agonista de TLR4) mostrou-se complexa podendo estar influenciada pela tolerância cruzada. / The Leptospirosis is one of the world's most important zoonoses, found in regions of tropical climate, occurring mainly in rainy seasons. The control of infection depends on the proper recognition of the microorganism by receptors for recognition of patterns of pathogens, the TLRs present in the cells of the innate immune system of the host. The activation of TLRs is crucial for triggering the inflammatory response, mediator of the response of protection in case of injury and infection. Objectives: To evaluate the expression of receptors TLR2, TLR4 and CD14 on the monocytes surface in vitro and response to stimuli LipL32 (extracted from Lestospira sp.), MALP-2 (synthetic antigen of Mycoplasma fermentans) and LPS (antigen extracted from bacteria-gram negative) binders of TLRs, as measured by production of cytokines in patients with leptospirosis. Methods: 07 patients with clinical and laboratory of leptospirosis were included and 07 healthy volunteers, used as controls. The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were separated using ficoll-paque, frozen and stored in liquid nitrogen. After thawing, checking the feasibility and wisdom of the concentration of cells to 1x106 células/mL was measured the expression of TLR2, TLR4 and CD14 on the monocytes surface. The rest of the cell suspension was incubated for 6 hours with the stimuli of 1000ng/mL of LipL32, 0.4 U / mL of MALP-2 or 100ng/mL of LPS. After the first hour of incubation was added monensin for blocking the secretion of cytokine. Then the PBMC were stained with CD14, set, permeabilizaded and exposed to anti-IL-6 and anti-TNF-α for detection of intracellular production of inflammatory cytokines in monocytes. They were acquired 10,000 events combined to morphology and positive for CD14 in flow cytometry. Results: There was no significant difference in the inflammatory response among patients with leptospirosis and healthy volunteers when PBMC were stimulated in vitro with MALP-2 and LipL32 to induce the production of inflammatory cytokines (IL-6 and TNF-α) in monocytes. However, the production of intracellular of TNF-α was lower after stimulation with LPS (p = 0035), which did not occur to the production of IL-6. Regarding the expression of surface receptors, it was observed increased expression of TLR2 (p = 0025) on the monocytes surface of patients, but there was no difference in the expression of TLR4 and CD14. Conclusions: This study demonstrated that the ability of recognition of antigens by peripheral blood monocytes of patients with leptospirosis is preserved or increased. Also, we observed that the production of inflammatory cytokines in front of the Leptospira antigen (LipL32) and another antigen agonist of TLR2 (MALP-2) is maintained. Meanwhile, the production of inflammatory cytokine front of LPS (agonist of TLR4) proved to be complex may be influenced by cross tolerance. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-25 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudos demonstram que a privação de sono (PS) provoca alterações cognitivas, como o prejuízo de memória. A PS pode ainda alterar a concentração de mediadores inflamatórios, como por exemplo as citocinas, que, por sua vez, estão relacionadas ao funcionamento cognitivo. Apesar das evidências, a relação das citocinas com este efeito da PS ainda precisa ser esclarecida. Dessa maneira, o presente trabalho teve como objetivo estudar o envolvimento destes mediadores inflamatórios no prejuízo de memória de ratos privados de sono. Ratos machos Wistar de 3 meses de idade foram privados de sono pelo método das plataformas múltiplas modificado durante 96 horas, enquanto que seus respectivos controles permaneceram nas gaiolas-moradia. Para a avaliação de memória após a PS, todos os animais foram submetidos ao treino, e, 24 horas depois, ao teste da tarefa de esquiva inibitória. O peso dos animais foi registrado diariamente. No primeiro experimento os animais receberam uma administração aguda de lipopolissacarídeo (LPS) nas doses 50 ou 75 Qg/Kg (i.p.), 3 horas antes do treino de esquiva inibitória, para induzir a produção de mediadores inflamatórios. Dadas as evidências do envolvimento da citocina interleucina-6 (IL-6) nos efeitos da PS, realizou-se também o bloqueio agudo e crônico desta citocina através da administração de um anticorpo (Ac) anti-IL-6 na dose 2 Qg/Kg (i.p.). A administração aguda também ocorreu 3 horas antes do treino de esquiva inibitória, enquanto que no tratamento crônico as administrações foram realizadas em todos os dias do período de PS. No tratamento com LPS, apenas a dose de 75 Qg/Kg resultou em um efeito significativo nas avaliações de memória: houve atenuação do prejuízo de memória dos animais privados de sono. Com relação ao peso corporal observou-se que o LPS reduziu significativamente o peso dos grupos controle e privado de sono 24 horas após a administração. Nos tratamentos com o Ac anti-IL-6, não foram observadas alterações no desempenho cognitivo, no entanto, o Ac atenuou a perda de peso nos animais privados de sono. Dessa maneira, os resultados sugerem o envolvimento de mediadores inflamatórios na modulação do prejuízo de memória e redução de peso observados em ratos privados de sono. / FAPESP: 08/51656-5 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: avaliar a resposta inflamatória sérica, tecidual tardia e realizar uma análise morfométrica do colágeno depositado nos reparos cirúrgicos com telas de alta densidade de polipropileno e de baixa densidade de polipropileno + poliglactina e popipropileno + titânio. Métodos: trinta ratos Wistar, albinos, nascidos no mesmo dia, nos quais se retirou fragmento de musculatura anterior do abdômen, foram alocados em grupos de 10. No grupo A, foi posicionada tela de polipropileno de alta densidade. Nos grupos B e C foram usadas implantes de baixa densidade, em associação com poliglactina e titânio, respectivamente. No pré-operatório imediato e nos dias 1 e 3 de pós-operatório (DPO) foram dosados através do método Luminex as seguintes citocinas pró-inflamatórias séricas: VEGF (fator de crescimento endotelial vascular), IL1β (interleucina 1 beta), IL6 (interleucina 6) e TNFα (fator de necrose tumoral alfa). No 40º dia realizou-se eutanásia e biópsia de fragmento central no sítio de inserção da tela. Usaram-se as colorações hematoxilina-eosina (HE) e tricromo de Masson na análise histológica das reações inflamatórias. Para avaliação objetiva dos resultados, empregou-se uma escala com pontuações atribuídas aos seguintes itens: camadas de células na periferia dos granulomas, reação inflamatória no tecido do hospedeiro, resposta inflamatória na superfície da tela, maturação tecidual, presença de células gigantes e invasão inflamatória na musculatura do animal adjacente à tela. No estudo morfométrico do colágeno usou-se o pricrosirius sob luz polarizada com leitura de dados pelo programa de computador Image Tool. O teste não paramétrico de Kruskal Wallis foi a ferramenta estatística para avaliação da reação inflamatória (HE e Masson). ANOVA foi usada na estatística dos dados resultantes da análise do colágeno e das citocinas. Resultados: Não houve diferenças estatisticamente significantes nas dosagens de citocinas no período de estudo (P>0,05). Com relação à Histologia, no grupo A houve menor número de granulomas e de camadas de células na periferia dos mesmos, menos células gigantes, com maior fibrose, maturação tecidual e síntese de colágeno (P<0,01). No grupo B, foram encontrados maior número de granulomas e de camadas de células nos mesmos, mais células gigantes, com intensa reação inflamatória do tipo corpo estranho. Houve menor fibrose, maturação tecidual e deposição de colágeno (P<0,01). O grupo C apresentou valores intermediários entre os grupos B e A, exceto pelo menor processo inflamatório na superfície da tela. Conclusões: Não houve diferenças significativas nos níveis de citocinas entre os grupos estudados. Nos animais onde foi implantada a tela de polipropileno + poliglactina, houve processo inflamatório mais intenso tardio, com menor maturação tecidual e deposição de colágeno no 40°DPO. A tela de polipropileno apresentou menor processo inflamatório tardio, com maior maturação tecidual e deposição de colágeno. A tela de polipropileno+titânio apresentou valores intermediários entre as anteriores. / Purpose: Incisional hernia occurs in approximately 11% of all laparotomies. Changes in collagen have been closely implicated in its pathogenesis. The high recurrence rate (45 to 54%) after primary suture has stimulated the development of meshes. Currently, meshes are the biomaterials implant group most used in medicine. This study aims to compare the serum and tissue inflammatory responses and collagen deposition caused by meshes made of polypropylene, polypropylene + polyglactin and polypropylene + titanium. Methods: Thirty Wistar rats were divided into three groups. In group A, a high-density polypropylene mesh was positioned on the abdominal wall. In groups B and C, lowdensity meshes were used in associations with polyglactin and titanium, respectively. Immediately before the operation and on the first, third and fortieth postoperative days, pro-inflammatory cytokines were assayed. On the 40th postoperative day, the region of the inserted prosthesis was biopsied. Hematoxylin-eosin and Masson’s trichrome colorations were used to value the tissue inflammatory reaction with a scale for objective scoring. The scale had six itens: cellular layers in granulomas periphery, inflammatory response in host tissue, inflammatory response in the mesh surface, tissue ingrowth, granulomas and muscular invasion by the inflammatory reaction. For collagen, picrosirius was used with data reading using the Image Tool computer software. Statistics tools: Kruskal Wallis and Dunn tests (HE e Masson) and ANOVA with Bonferroni test (collagen and cytokines). Results: Cytokines: there were no statistically significant differences between the groups. Histology: on the 40th postoperative day in group A, there were fewer inflammatory tissue response and greater collagen deposition (P<0.01). In group B, there were greater inflammatory tissue response and less collagen deposition (P<0.01). Group C presented intermediate values between groups A and B. Conclusions: There were no significant differences in cytokine levels between the groups in the present study. In the animals with the polypropylene + polyglactin mesh implant there was the most intense inflammatory process with lower tissue maturation and collagen deposition on the 40th postoperative day. The polypropylene mesh presented a less severe late inflammatory process, with greater tissue maturation and collagen deposition. The polypropylene + titanium mesh presented intermediate values between the others. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: Avaliar a modulação de citocinas pró-inflamatórias (interleucina-6, IL-6; fator de necrose tumoral-, TNF- e interferon-, INF-) e anti-inflamatórias (fator de transformação do crescimento-1, TGF-1) nos processos flogísticos in vivo sob ação do laser de baixa intensidade. Métodos: Cinquenta camundongos isogênicos foram distribuídos aleatoriamente em três grupos: controle (sem procedimento cirúrgico, n = 10); sham (procedimento cirúrgico com três incisões cutâneas padronizadas, seguida de incisão no músculo reto abdominal e posterior sutura, n = 20) e laser (mesmo procedimento seguido de aplicação de laser, n = 20). O grupo sham foi dividido em três subgrupos: sham I (eutanásia e avaliação 36 horas após procedimento cirúrgico); sham II (eutanásia e avaliação 60 horas após cirurgia) e sham III (eutanásia e avaliação 84 horas após procedimento cirúrgico). O grupo laser também foi dividido em três subgrupos: laser I (uma única sessão de laser 12 horas após cirurgia); laser II (duas sessões de laser, 12 e 36 horas após cirurgia) e laser III (três sessões de laser, 12, 36 e 60 horas após cirurgia). Os animais do grupo laser receberam três pontos por sessão de laser infravermelho contínuo (comprimento de onda de 780 nm, potência de 20 mW, fluência de 10 Jcm2, tempo de 20 segundos por ponto e energia de 0,4 J). Após a eutanásia dos animais, as células mononucleares do baço foram isoladas e cultivadas por 48 horas. As concentrações de IL-6, TNF-, IFN- e TGF-1 foram obtidas por Enzyme linked immunosorbent assay method (ELISA). Resultados: Na análise dos grupos sham e laser em relação ao controle, foi encontrada maior concentração de IL-6 e TNF- nas avaliações de 60 e 84 horas pós-operatória (p < 0,05), exceto para o grupo laser II na análise de TNF- (p > 0,05). Na análise de IFN-, foi encontrada maior concentração apenas no grupo sham II quando comparado ao controle (p < 0,05). Desta forma, houve efeito modulador da concentração de TNF- e IFN- pelo grupo laser, principalmente na avaliação de 60 horas pós-operatória. Para as análises de TGF-1 não houve diferença significativa entre os grupos controle, sham e laser (p > 0.05). Conclusão: O laser de baixa intensidade apresentou efeito modulador in vivo de citocinas pró-inflamatórias, principalmente após duas sessões de aplicação pela diminuição da liberação de TNF- e IFN- pelas células mononucleares do baço em camundongos. Entretanto, não houve modulação da liberação de IL-6 e TGF-1. / Purpose: To evaluate the modulation of pro-inflammatory (interleukin-6, IL-6; tumor necrosis factor-, TNF-; and interferon-, IFN-) and anti-inflammatory cytokines (transforming growth factor-1, TGF-1) in the inflammation processes in vivo with lowlevel laser action. Methods: Fifty isogenic mice were randomly distributed in three groups: control (no surgical procedure, n = 10), sham (surgical procedure with three standard cutaneous incisions, followed by an abdominal muscle incision and suture, n = 20) and laser (same procedure followed by laser exposure, n = 20). The sham group was divided into three subgroups: sham I (euthanasia and evaluation, 36 hours after surgical procedure), sham II (euthanasia and evaluation, 60 hours after surgical procedure), and sham III (euthanasia and evaluation, 84 hours after surgical procedure). The laser group was also divided in three subgroups: laser I (a single laser session, 12 hours after surgery), laser II (two laser sessions, 12 and 36 hours after surgery), and laser III (three laser sessions, 12, 36 and 60 hours after surgery). All animals in the laser group received three points per session of continuous infrared laser (wavelength of 780 nm, power of 20 mW, fluency of 10 Jcm2, exposure time of 20 seconds per point, and energy of 0.4 J). After euthanasia, spleen mononuclear cells were isolated and cultured for 48 hours. Concentrations of IL-6, TNF-, IFN- and TGF-1 were obtained by enzyme-linked immunosorbent assay method (ELISA). Results: There was significant difference of the IL-6 and TNF- concentrations in the 60 and 84 hour evaluations when the laser and sham groups were compared to the control group (p < 0.05), except for laser II in the TNF- analysis (p > 0.05). The IFN- concentration analysis showed a significant difference only in sham II when compared to the control group (p < 0.05). Thus, there was a modulatory effect of the TNF- and IFN- in the laser group, particularly in the 60-hour postoperative evaluation. There was no significant difference between the laser, sham, and control groups for TGF-ß1 analysis (p > 0.05). Conclusion: The low-level laser showed a modulatory effect in vivo of pro-inflammatory cytokines, especially after two exposure sessions by decreasing the TNF- and IFN- release of spleen mononuclear cells in mice. However, there was no modulation of the IL-6 and TGF-1 release. / FAPESP: 2007/04479-8 / TEDE

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:28Z : No. of bitstreams: 1 Publico-345a.pdf: 1816571 bytes, checksum: 3cd8170b13b85dc5e511b312040bc45b (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:28Z : No. of bitstreams: 2 Publico-345a.pdf: 1816571 bytes, checksum: 3cd8170b13b85dc5e511b312040bc45b (MD5) Publico-345b.pdf: 1901908 bytes, checksum: 3ac1cf59ef395016dc0b44813e1d9c3f (MD5) / Introducao: Os fatores envolvidos no desenvolvimento e maturacao folicular, assim como no desenvolvimento embrionario podem ser determinantes das causas da infertilidade. A qualidade do oocito e grau de maturacao sao diretamente dependentes do microambiente folicular, e afetam as etapas subsequentes desde a fertilizacao ate o desenvolvimento embrionario. A avaliacao dos componentes do fluido folicular (FF), e sua relacao com os resultados dos ciclos de fertilizacao in vitro (FIV) podem elucidar fatores envolvidos nas falhas e sucessos deste processo. Materiais e Metodos: Este estudo avaliou 132 amostras de FF e soro de pacientes submetidas a ciclos de injecao intracitoplasmatica de espermatozoide (ICSI), as quais foram analisadas para as concentracoes de IL ]8, IL ]1ƒÀ, IL ]6, IL ]10, TNF, IL ]12p70, LIF, VEGF, FSH, estradiol, progesterona, inibina ]B e hormonio anti ]mulleriano (AMH). Estes fatores foram correlacionados com a resposta ao estimulo ovariano controlado (EOC), resultados laboratoriais e clinicos dos ciclos de ICSI. As analises foram realizadas por metodo de regressao linear ou logistica multipla, e ajustados para as variaveis intervenientes. Resultados: Observamos que a presenca de IL ]1ƒÀ serica teve um efeito positivo nas taxas de implantacao e aumentou 15 vezes as chances de gestacao. Ja as concentracoes intrafoliculares de citocinas foram correlacionadas com a qualidade dos oocitos e embrioes correspondentes as amostras de FF. A presenca de IL ]12 intrafolicular foi preditiva da falha de fertilizacao, enquanto as concentracoes de IL ]8 e LIF afetaram negativamente a qualidade embrionaria. Conclusoes: Desta forma, os resultados obtidos neste estudo permitem concluir que a composicao do FF em pacientes submetidas ao EOC afeta a qualidade de oocitos e embrioes e subsequentes resultados clinicos dos ciclos de ICSI. Outros estudos sao necessarios para complementar os achados aqui apresentados e, elucidar os complexos mecanismos associados ao ambiente folicular e o potencial de desenvolvimento de oocitos e embrioes. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:51:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327934.pdf: 2235046 bytes, checksum: 0d7156695211029239113810c4ad8cbd (MD5) Previous issue date: 2014 / Introdução: Muitos aspectos da etiopatogênese da doença óssea de Paget ainda estão por ser elucidados, incluindo seus fatores causais, os motivos de acometer alguns ossos e poupar outros e os fatores determinantes da variabilidade de sua distribuição geográfica. Métodos: Portadores de doença óssea de Paget foram comparado com controles portadores de osteoartrite para avaliar diferenças nas concentrações séricas das citocinas: TNFa, IL1B, IL-6 e IL-17. Em outro protocolo, portadores de doença óssea de Paget foram comparados com controles portadores de osteoartrite para avaliar diferenças nas concentrações séricas dos biomarcadores de metabolismo ósseo: RANKL, osteoprotegerina, DKK-1, sFRP-1 e osteopontina. Para avaliar a presença de mutações genéticas associadas à doença óssea de Paget, portadores de doença óssea de Paget foram avaliados quanto à presença de polimorfismos genéticos dos genes: sequestossomo 1 (SQSTM1), VCP, TNFRSF11B e TNFRSF11A. A qualidade de vida e seus fatores determinantes foram avaliadas com as os questionários de qualidade de vida SF-36 e WHOQOL-bref. Resultados: Portadores de doença óssea de Paget apresentaram concentrações séricas aumentadas de IL-6 (p<0,05) e concentrações séricas reduzidas de IL-17 (p<0,05) quando comparados com o grupo controle. Os pacientes apresentaram concentrações séricas mais elevadas de osteopontina em comparação aos controles (p<0,05). Além disso, as concentrações de osteopontina e fosfatase alcalina óssea se correlacionaram à atividade e à extensão da doença (p<0,05). Quinze sujeitos (20,8%) apresentavam mutações no exon 8 do gene SQSTM1, oito (11,1%) apresentaram a mutação Pro392Leu, e os restantes apresentavam uma mutação ainda não descrita na literatura, Thr430Pro. Os únicos parâmetros significativamente associados à pior qualidade de vida foram: dor óssea, deformidades e estado civil (p<0,05). Conclusão: O presente estudo demonstrou pela primeira vez concentrações reduzidas de IL-17 e aumento das concentrações de osteopontina em portadores de doença óssea de Paget. Além disso, foi encontrada uma mutação do gene SQSTM1 até então inédita na literatura médica.<br> / Abstract : Many aspects of Paget's Disease of Bone (PDB) are still unknown, including its cause, the reasons for its bone distribution and the what determines is geographic distribution. Methods: Patients with PDB were compared with controls with primary osteoarthritis to evaluate possible differences in levels of pro-inflammatory cytokines: TNFa, IL1B, IL-6 and IL-17. In another protocol, patients with PDB were compared with controls with primary osteoarthritis to evaluate possible differences in levels of RANKL, osteoprotegerin, DKK-1, sFRP-1, osteopontin. Polymorphism of the following genes: SQSTM1, VCP, TNFRSF11B and TNFRSF11A were evaluated in PDB patients. To evaluate quality of life and determinant parameters, PDB patients answered to Brazilian versions of SF-36 and WHOQOL questionnaires. Results: Patients with PDB presented higher levels of IL-6 (p<0.05) and lower levels of IL-17 (p<0.05) in comparison to controls. PDB patients presented higher levels of osteopontin in comparison to controls (p<0.05). Moreover, osteopontin and BAP were correlated to disease activity and extension (p<0.05). Fifteen subjects (20.8%) carried mutations in exon 8 of ths SQSTM1 gene, eight (11.1%) carried the Pro392Leu mutation, while the remainders presented a previously undescribed mutation, Thr439Pro. The only parameters significantly associated to quality of life were: bone pain, deformities and marital status (p<0.05). Conclusion: The present study has demonstrated lfor the first time low levels of IL-17 and high levels of osteopontin in PDB patients. Besides, a previously not described mutation of the SQSTM1 gene were found.

Submitted by Luis Guilherme Macena (guilhermelg2004@gmail.com) on 2013-04-04T17:18:28Z No. of bitstreams: 1 Tese Juliana versão final.pdf: 2723014 bytes, checksum: f642b941dbb148220456d3a6c0aa894d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-04T17:18:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Juliana versão final.pdf: 2723014 bytes, checksum: f642b941dbb148220456d3a6c0aa894d (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Fernandes Figueira. Departamento de Ensino. Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e da Mulher. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A mortalidade infantil tem sofrido um declínio principalmente no componente pós-neonatal, que é mais susceptível às ações preventivas, como campanhas de vacinação, estímulo ao aleitamento materno e controle da doença diarreica. A mortalidade neonatal, por outro lado, resulta de uma estreita e complexa relação entre variáveis biológicas, imunológicas, sociais e de assistência à saúde, o que faz com que a redução seja mais difícil e lenta. Avanços recentes em estudos genômicos vêm buscando identificar a correlação entre polimorfismos genéticos de base única (SNPs) em genes reguladores da resposta inflamatória sistêmica e a suscetibilidade à sepse. Neste estudo, foram avaliados os polimorfismos de base única nas posições TNF- 308 G>A ;TNF-863 ; IL-6-174; LTA+252 ; MIF-173; IL-10- 819 em relação à gravidade de evolução clínica na sepse na população neonatal. Trata-se de um estudo retrospectivo com 58 crianças nascidas na maternidade no IFF, gravemente enfermas admitidas em UTI Pediátrica (UPG) e história pregressa de internação em UTI Neonatal (BAR e Neocirúrgica IFF/Fiocruz) com ou sem diagnóstico de sepse no período neonatal. A genotipagem de todos foi disponibilizada em banco de dados existente e resultados foram comparados com dados da evolução clínica desses pacientes no período neonatal através de medidas de associação regressão logística, sendo ajustadas covariáveis. Foi observada diferença estatisticamente significativa na distribuição de sepse neonatal entre crianças nascidas a termo e pré termo, o predomínio de sepse neonatal no grupo de menor peso ao nascer e a presença de fatores nosocomiais como necessidade de acesso profundo, uso de nutrição parenteral e permanência em ventilação mecânica invasiva apresentaram associação estatisticamente significativa entre tais fatores e o desenvolvimento de sepse neonatal . Não foi observada associação estatisticamente significativa na análise dos genótipos, alelos e carreadores dos polimorfismos nas posições TNF-308 G>A , LTA+252, IL-6-174, TNF-863, IL-10-819 e MIF-173 e o desenvolvimento de sepse neonatal na população estudada, nem na população estratificada por prematuridade. A dificuldade em identificar uma associação entre o desfecho e polimorfismos nessas citocinas é compatível com os resultados da literatura especializada, revistos em detalhe a partir de uma revisão sistemática do assunto. Juntos, os nossos dados indicam que as análises dessas associações já podem ser feitas em nossa instituição, mas que ainda não é possível definir um painel de biomarcadores que possa ser implementado rotineiramente como ferramenta prognóstica para a sepse neonatal. / Infant mortality is decreasing, especially in the post-neonatal age group, which is more amenable to preventive measures, such as vaccination, stimulation of breastfeeding and control of diarrheal disease transmission. Neonatal mortality, by contrast, results from a close and complex relationship between biological, immunological, social and health care factors, which makes the efforts to achieve reduction in disease both timeand labour-intensive. Recent progress in genomic studies have focussed on the correlation between single nucleotide polymorphisms (SNP) affecting genes relevant to the systemic inflammatory response and susceptibility to sepsis. In this study, we evaluated SNP in the positions TNF-α-308; TNF-α -863; IL-6 - 174; LTA +252; MIF -173; and IL-10 -819, for their impact on the risk of sepsis and clinical evolution of sepsis in neonates. Ours is a retrospective study of 58 children born in Instituto Fernandes Figueira, which due to serious disease were admitted in the Pediatric Intensive Care Unit of the same institute, and who had a history of admission in Neonatal Intensive Care Units of the same institution. All children could be classified as either having presented neonatal sepsis or having excluded neonatal sepsis as a diagnosis during their passage in the neonatal ICU. Genotypic data were obtained from the pediatric ICU data bank, and the results were compared with data from the clinical evolution of these patients in the neonatal period through measures of logistic regression, after adjustment for co-variables. We observed statistically significant differences in the distribution of neonatal sepsis between term and preterm newborns; a predominance of neonatal sepsis in the group of low birth weight newborns; and the influence of nosocomial factors, including the need for deep venous access, use of parenteral nutrition, and length of invasive mechanical ventilation, which were significantly associated with with neonatal sepsis. By contrast, we did not observe statistically significant association between genotypes, alleles or carriers of polymorphisms in positions TNF-308 G>A, LTA +252, IL-6 -174, TNF -863, IL-10 -819 and MIF -173 and the development of neonatal sepsis in our study population, even after stratification into term and preterm infants. Our difficulty in identifying an association between the outcome of interest and polymorphisms in these cytokine genes is consistent with results from the specialized literature, which were reviewed in detail on the basis of a systematic review of publications up to January 2012. Together, our results from reviewing published studies and patient data show that genomic association studies can be carried out in our institution, but it is not yet possible to define a panel of SNP that can be routinely applied as a prognostic tool in neonatal sepsis.