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Ativação de macrófagos de frango através da interaçao entre os receptores CD80 e CD86 com proteina CD28 recombinanteIngberman, Max January 2015 (has links)
Orientador : Prof. Dr. Silvio Marques Zanata / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 14/08/2015 / Inclui referências : f. 81-95 / Área de concentração / Resumo: Em um ramo novo da ciência como a imunologia, poucos modelos são capazes de resistir por tanto tempo quanto o modelo de sinalização dupla, proposto por Bretcher e Cohn em 1970. Atualmente, entende-se que a dupla sinalização atua de forma sinérgica para a ativação dos linfócitos T e que a via do CD28 é apenas uma parte de uma grande rede de controle incluindo diversas outras vias que atuam em conjunto para controlar a ativação de linfócitos. Tanto do ponto de vista funcional, assim como do ponto de vista estrutural, a abordagem da via de CD28-CD80/86 na maioria dos casos tem um enfoque sobre a via de ativação de linfócitos, a qual é bastante descrita enquanto as APCs aparecem apenas como coadjuvantes nessa interação. Essa perspectiva começou a mudar em 2004 quando foi descrito que células dendríticas de camundongo, quando estimuladas com LPS e CD28 sofrem uma ativação e iniciam a secreção de interleucinas. Num contexto no qual o efeito das vias de sinalização sobre os APCs começa a ser compreendido, torna-se importante o estabelecimento de modelos adequados a esse estudo. Frangos são um modelo clássico para o estudo em imunologia, desde o início do desenvolvimento desse campo de conhecimento. Não foi descrita na literatura, até o momento, a sinalização CD28-CD80/86 em macrófagos de aves, as quais podem apresentar diferenças fisiológicas e funcionais quando comparadas às de mamíferos. Desta forma, este estudo pretende estabelecer se os mecanismos de sinalização reversa presentes em mamíferos e aves foi conservado durante a evolução, avaliando ainda a hipótese de que macrófagos possam ser artífices da sinalização reversa, fato observado apenas para células dendríticas. Este trabalho tem como objetivo avaliar a ativação de macrófagos de frango frente ao estímulo com CD28 recombinante. Às células previamente estimuladas com LPS, foram adicionados meios de cultivo com LPS, CD28 e CD28 deletada (com uma deleção em seu sítio MYPPPY de ligação com CD80/86) e os estímulos mensurados através de qPCR para diversas citocinas em diferentes tempos experimentais. Para o primeiro estimulo com LPS, houve uma redução na produção de IL-4, IL-2 e IFN-? e uma alteração sugerida para a expressão reduzida de IL-6, IL-12, IL-1? e aumentada de TNF?. Na segunda estimulação apenas com LPS, pode-se concluir que o ambiente resultante é pró-inflamatório, uma vez que a expressão das interleucinas com características anti-inflamatórias, IL-4 e IL-10, está diminuída ou ausente, enquanto IL-2, IL-18 e IL-12 estão aumentadas. Sugere-se que o estimulo com CD28 produz uma ativação de macrófagos que tem característica pró-inflamatória, porém sem direcionamento M1 ou M2. Essa polarização provavelmente advém de uma interação com os outros atores do sistema imune por diversos mecanismos de troca de informação, como citocinas, quimiocinas e outras moléculas sinalizadoras. Este trabalho mostrou pela primeira vez o mecanismo de sinalização reversa mediado por células apresentadoras de antígeno profissionais em macrófagos de aves. Palavras-chave: imunologia; aves; gallus; macrófago; CD28; sinalização reversa; citocinas. / Abstract: In a new branch of science such as immunology, just a few models are able to resist for as long as the dual signaling model proposed by Bretcher and Cohn in 1970. Currently, it is known that the double signaling acts synergistically to activate T lymphocytes and that the path of CD28 is only one part of a large network control including several other ways that work together to control the activation of lymphocytes. In a functional point of view as well as from a structural point of view, the approach of CD28-CD80 / 86 in most cases has a focus on the activation pathway of lymphocytes, which is detailed described as the APCs appear only with a secondary role in this interaction. This perspective started to change in 2004 when it was reported that mouse dendritic cells when stimulated with LPS and CD28 undergoes activation and start to secrete interleukins. In a context that the effect of signaling pathways on APCs begins to be understood, it is important to establish suitable models in this study. Chickens are a classic model for the study in immunology, since the beginning of development of this field of knowledge. It has not been described in so far, CD28-CD80/86 signaling in avian macrophage, which may have physiological and functional differences compared to mammal ones. Thus, this study aims to establish if the mechanisms of reverse signaling present in mammals has been conserved during evolution and is similar in birds, also evaluating the hypothesis that macrophages can be passive of reverse signaling, which was observed only for dendritic cells. This project aims to evaluate the activation of chicken macrophages front of the stimulation with recombinant CD28. The cells previously stimulated with LPS, received culture media containing LPS, CD28 and deleted CD28 (with a deletion on the MYPPY CD80/86 binding site) the stimuli was measured by qPCR for different cytokines under different experimental times. For the first stimulation with LPS, there was a reduction in the production of IL4, IL2 and IFN-? and a modification on the expression was suggested with an increase for IL6, IL12, IL-1? and decreased for TNF. In the second stimulation with LPS, one may conclude that the resulting environment was pro-inflammatory, since the expression of interleukins with anti-inflammatory characteristics, IL-4 and IL-10, is decreased or absent, while IL-2 IL-18 and IL-12 are increased. It is suggested that CD28 stimulation generate an activation of macrophages that has pro-inflammatory characteristic but without polarization M1 or M2. This bias probably comes from an interaction with other actors of the immune system through several mechanisms of signaling such as cytokines, chemokines, and other signaling molecules. This study showed for the first time the reverse signaling mechanism mediated by professional antigen presenting cells in avian macrophage. Key words: immunology; birds; gallus; macrophage; CD28; reverse signaling; cytokines.
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Produção de citocinas pró- e anti-inflamatórias por macrófagos estimulados in vitro com própolis, alecrim-do-campo, capim-limão e cravo-da índiaBachiega, Tatiana Fernanda [UNESP] 18 February 2011 (has links) (PDF)
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bachiega_tf_me_botfm.pdf: 459615 bytes, checksum: ade6efe273ffa9cabd596ec413f8732b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Nosso grupo tem se dedicado à investigação das ações biológicas da própolis, alecrim-do-campo, capim-limão e cravo-da-Índia. A própolis tem despertado a atenção dos pesquisadores em virtude de suas inúmeras propriedades biológicas, e o alecrim-do-campo é uma das principais fontes deste apiterápico em nossa região. Já o capim-limão e o cravo-da-Índia têm sido pouco avaliados no tocante à sua ação imunomoduladora. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito imunomodulador do extrato e respectivos compostos isolados da: própolis (ácidos cumárico e cinâmico), do alecrim-do campo (ácido cafeico), do cravo-da-Índia (eugenol) e do capim-limão (citral) sobre a produção de citocinas (IL-1, IL-6 e IL-10) por macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c. Em protocolos com LPS, macrófagos foram incubados ora com os produtos naturais supracitados em diferentes concentrações e posteriormente desafiados com LPS; ora desafiados com LPS e posteriormente incubados com os produtos naturais. A dosagem das citocinas foi realizada através da técnica de ELISA. A própolis exerceu ação moduladora sobre a resposta imune e inflamatória, e os ácidos cinâmico e cumárico podem estar envolvidos em sua ação imunomoduladora. O alecrim-do-campo e o ácido cafeico também demonstraram efeito imunomodulador quanto à produção de citocinas. O capim-limão exerceu efeito inibitório sobre a produção de citocinas, sendo este efeito mais pronunciado em ensaios com o citral. Resultados semelhantes foram observados com o cravo-da-Índia e o eugenol. Nossos resultados sugerem que o potencial imunomodulador dos produtos naturais merece ser melhor explorado em futuras investigações, avaliando sua eficiência em doenças inflamatórias / Our group has been investigating the biological action of propolis, “alecrim-do-campo”, lemongrass and clove. Propolis has attracted the researchers’ attention due to its several biological properties, and “alecrim-do-campo” is its main vegetal source in our region. However, little is known concerning lemongrass and clove immunomodulatory action. The goal of this work was to evaluate the immunomodulatory effect of the following extracts and isolated compounds: propolis (coumaric and cinnamic acids), “alecrim-do-campo” (caffeic acid), clove (eugenol) and lemongrass (citral) on cytokines production (IL-1, IL-6 and IL-10) by peritoneal macrophages of BALB/c mice. In LPS protocols, macrophages were incubated either with natural products in different concentrations and then challenged with LPS; or with LPS and then incubated with the natural products. Cytokine concentrations were measured by ELISA. Propolis exerted a modulatory action on the immune and inflammatory response and cinnamic and coumaric acids may be involved in its immunomodulatory action. “Alecrim-do-campo” and caffeic acid also exerted an immunomodulatory action on cytokines production. Lemongrass showed an inhibitory action on cytokines production, mainly in the assays with citral. Similar results were found using clove and eugenol. Our results suggest that the immunomodulatory potential of the natural products should be investigated in further studies, evaluating their efficacy in inflammatory diseases
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Efeito de desnutrição e das citocinas pró-inflamatórias na infecção experimental em camundongos Balb/c infectados com Trypanosoma cruziGoto, Renata Leme [UNESP] 16 August 2012 (has links) (PDF)
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goto_rl_me_botfm.pdf: 753340 bytes, checksum: 36ca648feea8785034d94b3a1806eb56 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, é uma doença infecciosa crônica negligenciada. Apresenta grande incidência no Brasil e, nos últimos anos, passou a ser uma endemia de centros urbanos. É acompanhada por alterações no sistema imune com variações nos níveis séricos das citocinas pró-inflamatórias. O tratamento disponível no Brasil é o benzonidazol, com baixa eficácia na fase crônica e efeitos colaterais importantes. Não há estudos que relacionem o tratamento, a resposta imune e a desnutrição na doença de Chagas. Sabe-se que a desnutrição é um fator de imunossupressão e que poderia interferir na evolução das doenças infecciosas e parasitárias. Portanto, o objetivo foi avaliar a desnutrição associada com o tratamento anti-parasitário e com as citocinas pró-inflamatórias, em camundongos Balb/c infectados. Foram utilizados 90 animais, divididos em seis grupos: G1-controle, G2-infectado com dieta normal, G3-infectado com dieta normal e tratado, G4-controle desnutrido, G5-desnutrido e infectado e G6 desnutrido, infectado e tratado. Foram avaliados em cinco momentos: M1-1°dia, M2-3°dia, M3-5°dia, M4-7°dia e M5-9°dia. Para infecção foi utilizada a cepa aguda Y, com pico de parasitemia no sétimo dia (M4). Realizou-se a eutanásia de três animais de cada grupo, em cada momento. Para determinação das citocinas foi utilizado o ELISA e, para análise histopatológica, amostras do coração, intestino e fígado. O medicamento foi dado na dosagem de 100 mg/kg/dia. A análise estatística foi realizada pelo Grupo de Apoio à Pesquisa da Faculdade de Medicina de Botucatu. Observou-se que nos animais desnutridos houve redução significativa do peso no M4, mostrando que a desnutrição agravou a infecção. O coração foi o órgão que apresentou maior diminuição do seu peso, tanto nos animais com dieta... / Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, is a neglected infectious chronic disease. It is highly incident in Brazil and, in the last few years, it has become endemic in certain urban centers. It is accompanied by alterations in the immune system with variations in the serum levels of pro-inflammatory cytokines. The treatment available in Brazil is benznidazole with low efficacy in the chronic phase and important side effects. No studies have related treatment, immune response and malnutrition in Chagas disease. It is known that malnutrition is an immunodepression factor and that it could interfere with the development of infectious and parasitic diseases. Therefore, this study aimed at evaluating malnutrition associated with anti-parasitical treatment and pro-inflammatory cytokines in infected Balb/c mice. Ninety animals were used, and they were divided into six groups: G1-control, G2-infected mice with a normal diet, G3-infected mice with a normal diet and treated, G4-malnourished control, G5-malnourished and infected and G6-Malnourished, infected and treated. The animals were evaluated at five moments: M1-1st day, M2-3rd day, M3-5th day, M4-7th day and M5-9th day. The acute Y strain, with a parasitemia peak on the seventh day (M4), was used for infection. Three animals from each group were euthanized at each moment. ELISA was used for cytokine determination, and heart and liver samples were used for histological analysis. The drug was used at a dosage of 100 mg/kg/day. Statistical analysis was performed by the Research Support Group of the Botucatu School of Medicine. Significant weight loss at M4 was observed in malnourished animals, thus showing that malnutrition aggravated infection. The heart was the organ that showed the largest weight reduction, both in animals under a normal diet and in malnourished... (Complete abstract click electronic access below)
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Infecção pela Leishmania chagasi: papel dos receptores Toll-like 2 e 4 alterações genotóxicas em camundongos BALB/cCezário, Glaucia Aparecida Gomes [UNESP] 21 February 2011 (has links) (PDF)
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cezario_gag_me_botfm.pdf: 488938 bytes, checksum: 0f674e5f7e12d7ce0a1eabedb5c6a4bb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Toll-like receptors (TLRs) present in innate immune cells recognize pathogen molecules and influence on immunity to control the host-parasite interaction. Our objective was to evaluate the mRNA expression of TLR-2 and 4, expression and production of IL-12, IFN-γ, TNF-α, IL-17, IL-10 and TGF-β and NO production during infection with Leishmania chagasi and correlate TLR2 and 4 expressions with cytokines production and NO. Infection resulted in increased TLR2, TLR4, IL-17, TNF-α and TGF-β expression at the beginning of infection, with a decrease at the final phase in according the parasitic load; IFN- γ and IL-12 decreased at the peak of parasitemia and increased at the final phase; IL-10 increased during the whole period under analysis. With respect to cytokines and NO production, TGF-β, TNF-α and IL-17 showed high rates at the initial phase, and IFN-γ and IL-12 showed high rates at the final phase; IL-10 and NO showed increasing production during the infection period evaluated. There was a positive correlation of TLR2 and 4 with TNF-α, IL-17, NO, IL-10 and TGF-β at the beginning of infection, and with TNF-α, IL-17 and TGF-β at the end. Our data suggest that L. chagasi was in contact with host’s cells via TLR2 and 4, which resulted in cytokine modulation. This interaction could be considered as pathogenic mechanism in visceral leishmaniasis
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Efeito da pré-eclâmpsia nos níveis de citocinas do leite materno / Effect of preeclampsia on human milk cytokine levelsFreitas, Natália Alves de [UNESP] 21 January 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-01-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Na fisiopatologia da pré-eclâmpsia (PE) há importante participação de mediadores inflamatórios, cujas concentrações encontram-se alteradas tanto na placenta como no sangue materno. Entretanto, o efeito da pré-eclâmpsia nos imunocomponentes do leite materno ainda é pouco conhecido. Objetivo: Investigar se a PE altera os níveis de citocinas no leite materno. Método: Estudo prospectivo longitudinal de corte transversal, envolvendo puérperas cujo parto foi realizado na Maternidade da Faculdade de Medicina de Botucatu – UNESP, em 2014-2016. Critério de inclusão: diagnóstico de PE, gestação única, sorologias negativas, ausência de diabetes e de corioamnionite, sem uso de drogas ilícitas e/ou álcool, recém-nascido sem malformação congênita múltipla. Critério de exclusão: não obtenção da quantidade necessária de colostro, diagnóstico de mastite, uso contínuo de medicamento pela puérpera. Foram estudadas 228 puérperas, divididas em 2 grupos: PE (n=114) e Normotensas (controle, n=114), pareados pela idade gestacional, o grupo PE foi subdividido em PE de início precoce e tardia. O colostro foi coletado entre 24-72 horas pós-nascimento e o leite maduro no final do primeiro mês. Foram dosadas as citocinas (IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 e TNF-α) por citometria de fluxo. Teste Qui-quadrado ou Exato de Fisher, teste t Student ou Mann-Whitney, bem como um modelo linear generalizado com distribuição gama foram utilizados para analisar as diferenças entre grupos e as alterações dependentes do tempo. Resultados: A maioria das puérperas teve PE tardia (≥ 34 semanas) e a idade gestacional média foi de 36 semanas. No colostro de mães com PE foram detectados níveis aumentados de IL-1 e IL-6, e menores níveis de IL-12 em comparação ao grupo controle. Alterações ocorreram durante a lactação e menores níveis e IL-6 e IL-8 foram encontrados no leite maduro de mães com PE. A PE de início precoce associou-se a valores aumentados de IL-6 no colostro e no leite maduro. Conclusão: A pré-eclâmpsia está associada com aumento dos níveis de citocinas inflamatórias no colostro e menores níveis de IL-6 e IL-8 no leite maduro. Os níveis de IL-6 no leite materno são maiores na pré-eclâmpsia precoce em comparação à tardia. / Introduction: IInflammatory mediators have an important role In the pathophysiology of preeclampsia (PE), and increased levels of these mediators have been found in the placenta and maternal circulation. However, the effect of preeclampsia on immune-components of breast milk is still unknown. Objective: To investigate whether PE affects breast milk cytokines levels. Method: Prospective longitudinal cross-sectional study involving nursing mothers whith childbirth at Maternity of the Botucatu Medical School - UNESP, during 2014-2016. Inclusion criteria: diagnosis of PE, single gestation, negative serologies, no history of diabetes, chorioamnionitis, drug use or alcohol consumption, and newborn without multiple congenital anomalies. Exclusion criteria: Insufficient volume of colostrum, mastitis, continuous use of medication by the mother. A total of 228 mothers were included and divided into 2 groups: PE (n = 114) and Normotensive (control, n = 114). Groups were matched by gestational age and PE was further divided into early and late PE. Colostrum was collected between 24-72 hours postpartum and mature milk at the end of the first month. IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 and TNF-α were measured by flow cytometry. Chi-square or Fisher's Exact test, Student t-test or Mann-Whitney, and a general linear model with Gama distribution were used to analyse diffrences between groups and changes dependet on time. Results: Most preeclamptic women had late onset PE (≥ 34 weeks) and the mean gestational age was 36 weeks. In colostrum of PE mothers the levels of IL-1 and IL-6 were significantly increased, whereas IL-12 was decreased, compared to control group. Changes occured during lactation and lower concentrations of IL-6 and IL-8 were found in mature milk of PE mothers. Early-onset PE was associated with increased IL-6 values in colostrum and mature milk. Conclusion: Preeclampsia was associated with higher levels of pro-nflammatory cytokines in colostrum and lower levels of IL-6 and IL-8 in mature milk. The levels of IL-6 in breast milk are increased in early onset PE. / FAPESP: 2014/12784-9
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Avaliação do perfil de citocinas no plasma de pacientes submetidos a cirurgia sob anestesia inalatória com sevofluranoOrosz, José Eduardo Bagnara [UNESP] 23 February 2011 (has links) (PDF)
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orosz_jeb_me_botfm.pdf: 359813 bytes, checksum: 9cd4812427bf03537ef0978642281b62 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Indivíduos submetidos ao ato anestésico-cirúrgico apresentam estresse reacional, caracterizado por resposta inflamatória, devido não apenas ao trauma da cirurgia, mas também ao emprego dos anestésicos. Pesquisas recentes têm dado atenção especial às citocinas envolvidas na resposta inflamatória, mas ainda não há consenso quanto a influência do sevoflurano (SVF) no perfil de citocinas. Esse estudo analisou as citocinas IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, TNF- e INF- durante a anestesia com SVF em pacientes com estado físico ASA I, submetidos a cirurgias de pequeno porte, e idade de 18 a 55 anos. Os indivíduos foram distribuídos em dois grupos de 15, sendo os do grupo SVF pacientes submetidos a cirurgia de timpanoplastia ou septoplastia com duração de pelo menos 120 minutos, sob anestesia geral com SVF em 1,0 a 1,5 concentração alveolar mínima (CAM). As amostras de sangue foram coletadas antes da indução anestésica (M1-pré-cirurgia), após indução anestésica e imediatamente antes do início da cirurgia (M2), 120 minutos após o início da anestesia inalatória (M3), e no 1º dia do pósoperatório (M4). Outros 15 indivíduos constituíram o grupo controle, voluntáriosdos quais foi obtida uma única amostra de sangue venoso. A análise dascitocinas foi feita pelo método da citometria de fluxo utilizando o kit BD Cytometric Bead Array. Observou-se diferença significativa em relação a IL-4 (p=0,02), maior entre os pacientes, e IL-5 (p<0,001), maior entre os voluntários. No grupo de pacientes, houve aumento significativo de IL-5 em M3 em relação a M1 (p=0,03), e de IL-6 no momento M4 em relação aos momentos M1 e M2 (p<0,001). Em conclusão, em pacientes adultos com estado físico ASA I submetidos a cirurgias de timpanoplastia ou septoplastia, a anestesia com sevoflurano, com exceção de aumento de IL-5 no intraoperatório... / Patients have stress when submitted to anaesthesia and surgery, characterized by inflammatory response because of the surgery trauma, and possibly due to the anaesthetics. Literature shows controversial data as most studies have been designed using large surgery models. Using minor surgical procedures, in order to reduce tissue injury influence on inflammatory response, this study aimed to evaluate the effects of anaesthesia with sevoflurane (SVF) on plasma cytokine profile from 15 ASA I patients of both genders, aged from 18 to 55, scheduled for tympanoplasty or septoplasty lasting, at least, 120 minutes, with 1.0 to 1.5 minimum alveolar concentration of SVF. Blood samples were drawn at 4 time points: before anaesthesia induction (T1 - baseline), before surgery (T2), at 120 minutes after anaesthesia induction (T3), and on the postoperative first day (T4). The study also included 15 healthy volunteers, not submitted to anaesthesia and surgery, as controls (C) to T1, and from whom blood sample was collected a single time. Plasma IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL- 8, IL-10, IL-12, TNF- e INF-) were assessed in plasma from patients and volunteers by flow cytometry, using the BD® Cytometric Bead Array kit.IL-4 (p=0,02) and IL-5 (p<0,001) differed between groups at T1. In the patient group there were differences on IL-5 (p=0,03) and IL-6 (p<0,001) levels, with peakvalues at M3 and M4, respectively. In conclusion, data showed that with exception to IL-5 and IL-6, adult ASA I patients submitted to minor othorhinolaryngological surgical procedures, under inhalation anesthesia with SVF, have no changes on plasma cytokines profile
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Correlação entre fibromialgia e desordens temporomandibulares :avaliação dos níveis salivares de IL‐1betaCé, Patricia dos Santos January 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015 / This study examined the association between fibromyalgia and temporomandibular disorders (TMD). The relationship between these disorders has been investigated by analysis of the pro-inflammatory cytokine, interleukin-1β (IL-1β) in the saliva of patients with temporomandibular disorders (TMD); fibromyalgia; Fibromyalgia + temporomandibular disorder; individuals without any of the two conditions (control group), correlating the levels of IL-1β with the clinical findings. All the participants of the study were female, aged from 20 to 84 years. The Group A consisted of 14 healthy patients; the Group B consisted of 17 patients with TMD; the Group C consisted of 11 patients with fibromyalgia; and the Group D consisted of 7 patients with TMD and fibromyalgia associated. The research was conducted in the clinical disciplines of Occlusion and Surgery, at the Dental School, and the Rheumatology Service of Hospital São Lucas, of the Pontifical Catholic University of Rio Grande do Sul (PUCRS). The clinical data collection was performed through anamnesis and clinical examination of all groups was performed using the Research Diagnostic Criteria (RDC) for evaluation of TMD, axis I and II for groups B and D; RDC axis I for groups A and D. Saliva samples were collected in a single session, after signing the free and informed consent. After collection, the samples were stored in a freezer at -20 ° C. The concentrations of the inflammatory cytokine IL-1β were evaluated by enzyme assay (ELISA).Data was submitted to descriptive and statistical analyzes. In the four groups the white race was prevalent. Regarding the medical history of the patients in the Group A, bruxism and allergic rhinitis were the most frequent diseases; in the Group B beyond DTM, osteoarthritis and hypertension (HA) were the most prevalent; in the Group C, in addition to fibromyalgia, HA prevailed; in the group D, besides FM and TMD, the pathologies presented were different, without homogeneity. The drugs most used by the participants of the study were: contraceptives for Group A; antihypertensive drugs, antidepressants, and muscle relaxants for Group B; analgesics, anti-inflammatory drugs, antihypertensive agents and antidepressants for the Group C; antidepressants and analgesics for the Group D. The results revealed that there were no differences among the mouth opening degree throughout the four groups, and in all prevailed mouth opening ≥ 35 mm, which is considered satisfactory. The levels of IL-1β were significantly higher in the Groups B, C and D, when compared to the Group A. When analyzed individually, the use of contraceptives may also have influenced the levels of IL-1β. The other variables did not show any influence on IL-1β levels. The completion of this study shows: (i) the existence of a relationship between the investigated diseases and the increase in salivary concentrations of IL-1β; (ii) there was no correlation between the increase in IL-1β and mouth opening; (iii) other studies need to be carried out by increasing the experimental sample and by evaluating IL-1β levels in patients without fibromyalgia or TMD, aged between 40 and 60 years. / O presente estudo avaliou a associação entre fibromialgia e desordens temporomandibulares (DTM). A relação entre estas duas patologias foi investigada por meio da análise da citocina pró-inflamatória, interleucina-1β (IL-1β), na saliva de pacientes apresentando disfunção temporomandibular (DTM); fibromialgia; fibromialgia + disfunção temporomandibular; indivíduos sem nenhuma das duas condições (grupo controle), correlacionando os níveis encontrados com os achados clínicos. Todos os participantes deste estudo eram do sexo feminino, com idade entre 20-84 anos. O Grupo A foi composto por 14 pacientes saudáveis; O grupo B foi composto por 17 pacientes apresentando DTM; O grupo C foi composto por 11 pacientes apresentando fibromialgia; e o grupo D foi composto por sete pacientes apresentando DTM e fibromialgia associadas. A pesquisa foi desenvolvida nas clínicas das disciplinas de Oclusão e Cirurgia da Faculdade de Odontologia da Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul (PUCRS) e no ambulatório de Reumatologia do Hospital São Lucas da PUCRS. A coleta de dados clínicos foi realizada por meio de anamnese e exame clínico de todos os grupos, com aplicação do Research Diagnostic Criteria (RDC) para avaliação de DTM, eixo I e II para os grupos B e D; eixo I do RDC para os grupos A e D. As amostras de saliva foram coletadas em sessão única, após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido. Após a coleta, as amostras foram armazenadas em freezer sob temperatura de -20°C. As concentrações da citocina inflamatória (IL-1β) foram avaliadas por meio de ensaio enzimático (ELISA).Os dados obtidos foram submetidos às análises descritivas e estatísticas. Nos quatro grupos prevaleceu a raça branca. Em relação à história médica das pacientes, no grupo A, bruxismo e rinite alérgica foram as doenças mais encontradas; no grupo B além da DTM, prevaleceram artrose e hipertensão arterial (HA); no grupo C, além da fibromialgia, prevaleceu HA; e no grupo D, além de fibromialgia e DTM, as patologias apresentadas foram distintas, não havendo homogeneidade. Os medicamentos mais utilizados pelas participantes do estudo foram: anticoncepcionais para o grupo A; anti-hipertensivos, antidepressivos, e relaxantes musculares para o grupo B; analgésicos, anti-inflamatórios, anti-hipertensivos e antidepressivos para o grupo C; antidepressivos e analgésicos para o grupo D. Os resultados clínicos revelaram que não houveram diferenças entre o grau de abertura bucal entre os quatro grupos, sendo que em todos, prevaleceu abertura bucal ≥ 35 mm, considerada satisfatória. Já, os resultados da avaliação da citocina pró-inflamatória IL-1β mostraram que as amostras dos grupos caso apresentaram uma concentração significativamente maior dos níveis de IL-1β salivar, em relação ao grupo C; no entanto, entre os grupos caso não houve diferença significante. Quando analisado individualmente, o uso de anticoncepcionais também pode ter influenciado a dosagem de IL-1β. As demais variáveis não parecem ter influência sobre os níveis de IL-1β. A realização do presente estudo permite concluir que: (i) a existência de relação entre as doenças investigadas e o aumento no nível de concentração salivar de IL-1β; (ii) não houve correlação entre o aumento de IL-1β e abertura bucal; (iii) outros estudos precisam ser realizados aumentando a amostra utilizada em todos os grupos e, avaliando os níveis de IL-1β em pacientes sem fibromialgia ou DTM, com idade entre 40 e 60 anos.
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Efeito da silibinina sobre o metabolismo oxidativo e produção de citocinas por monócitos em gestantes portadores de pré-eclâmpsia /Cristofalo, Renata. January 2009 (has links)
Orientador: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Resumo: O aumento da atividade dos radicais livres e da produção de citocinas pró-inflamatórias por monócitos pode estar envolvido na patogênese da pré-eclâmpsia. A silibinina é o componente mais ativo da silimarina (Silybum marianum), um flavonóide polifenólico que possui efeitos anti-oxidante e anti-inflamatório. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da silibinina sobre a produção de citocinas pró e anti-inflamatórias, bem como sobre a liberação de ânion superóxido (O2 -) por monócitos de gestantes com pré-eclâmpsia.Foram selecionadas 30 gestantes com préeclâmpsia (PE), 30 gestantes normais (GN) e 30 mulheres normais nãográvidas (NG). Monócitos de sangue periférico foram incubados na presença ou ausência de silibinina nas concentrações de 5 e 50 g/mL por 60min e, estimulados ou não com ester de forbol (PMA) para determinação de O2 -. Estes monócitos também foram estimulados ou não com lipopolissacáride (LPS) por 18h e, no sobrenadante das culturas foram determinadas, pela técnica de ELISA, as seguintes citocinas: fator de necrose tumoral-alfa (TNF- ), Interleucinas (IL-) IL-6, IL-10, IL-12, IL-15, fator estimulador de colônias de granulócitos e monócitos (GM-CSF) e fator de crescimento e transformação (TGF- . A atividade da enzima superóxido dismutase (SOD) foi avaliada em hemolisado de eritrócitos dos três grupos estudados.Níveis significativamente maiores de O2 - foram liberados por monócitos de gestantes com PE quando comparados com GN e NG, confirmando o estado ativado dessas células. A atividade da SOD foi significativamente maior no grupo de gestantes com PE. Os níveis endógenos de TNFforam significativamente mais elevados nas pacientes com PE, quando comparados com os grupos GN e NG, enquanto os níveis de IL-10 foram significativamente menores nas gestantes com PE. A capacidade de produção de citocinas pelos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Increased free radical activity and high proinflammatory cytokine production by monocytes may be implicated in the pathogenesis of preeclampsia. Silibinin is a major active component of silymarin (Silybum marianum), a polyphenolic plant flavonoid that has antioxidant and anti-inflammatory effects. This study investigated the in vitro effect of silibinin on monocyte production of pro- and anti-inflammatory cytokines, as well as on superoxide anion (O2-) release in pregnant women with preeclampsia.Thirty preeclamptic (PE), 30 healthy pregnant (HP) and 30 healthy non-pregnant (NP) women were included. Peripheral blood monocytes were incubated with or without silibinin at 5 and 50ug/mL for 60 min, and stimulated with or without phorbol myristate acetate (PMA) for the assessment of O2-. These cells were also cultured with or without lipopolysaccharide (LPS) for 18h and tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), interleukin (IL)-6, IL-10, IL-12p40, IL-15, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and transforming growth factor-beta1 (TGF- 1) in monocyte culture supernatants were determined by ELISA. The activity of the enzyme superoxide dismutase (SOD) was evaluated in erythrocyte lisates of the three groups studied.Monocytes of preeclamptic patients release significantly higher levels of O2 - in comparison to HP and NP women confirming the activation state of these cells. SOD activity in erythrocytes was significantly higher in preeclamptic patients. The endogenous levels of TNFwere significantly higher in PE patients than in HP and NP groups, while IL-10 production was significantly lower in PE women. The levels of IL-6, IL-12 and GM-CSF spontaneously produced by monocytes were higher in HP and PE groups than in NP women. The capacity of cytokine production by LPS-stimulated monocytes was preserved in all the three groups studied... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Parâmetros ecocardiográficos e variabilidade da frequência cardíaca em fêmeas caninas com sepse de ocorrência natural devido à piometra e suas correlações com valores séricos de TNF-alfa, IL-1 beta, IL-6, IL-10 e proteína C reativa /Pereira, Evandro Zacché. January 2015 (has links)
Orientador: Aparecido Antonio Camacho / Banca: Marlos Gonçalves Sousa / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Daniel Paulino Júnior / Banca: Wagner Luís Ferreira / Resumo: Com o objetivo de avaliar a função miocárdica e autonômica de cães com sepse, foram estudadas 17 cadelas com diagnóstico de piometra e critérios de positividade para síndrome da resposta inflamatória sistêmica. Esses animais foram submetidos à avaliação ecocardiográfica e variabilidade da frequência cardíaca, além de avaliação hematológica, bioquímica sérica, dosagem das concentrações de TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 e proteína C reativa, no momento do diagnóstico (T-0) e 15 (T-15) e 30 (T-30) dias após a histerectomia. Dentre os parâmetros ecocardiográficos, foi observada diminuição do tempo de desaceleração da onde E do fluxo mitral em T-0 em relação ao T-30 (68,0 ± 49,1 e 111,0 ± 63,8; p=0,035) e tempo de relaxamento isovolumétrico também em T-0 em relação ao T-30 (61,5 ± 15,6 e 70,0 ± 13,6; p=0,0002). Foi observada também correlação negativa significativa entre os índices de função sistólica, fração de encurtamento e fração de ejeção, e a concentração sérica de proteína C reativa (r=-0,324, p=0,02 e r=-0,332, p=0,01, respectivamente). Em relação à avaliação do sistema autonômico, foi observada redução de todos os parâmetros da variabilidade da frequência cardíaca em T-0 em relação aos demais momentos, com p<0,0001 para todos os índices. Assim, nas condições do presente estudo foi possível concluir que fêmeas caninas com sepse de ocorrência natural apresentam disfunção autonômica, refletido pela diminuição de todos os parâmetros da variabilidade da frequência cardíaca e que a proteína C reativa pode desempenhar um papel na patogênese da progressão do comprometimento cardíaco / Abstract: In order to assess myocardial and autonomic function in dogs with sepsis were studied 17 bitches diagnosed with pyometra and positive criteria for systemic inflammatory response syndrome. These animals underwent echocardiographic and heart rate variability tests, and also hematological evaluation, serum biochemistry, and serum TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 and C-reactive protein, at diagnosis (T-0) and 15 (T-15) and 30 (T-30) days after hysterectomy. Among the echocardiographic parameters were observed decrease in E mitral flow deceleration time in T-0 relative to the T-30 (68.0 ± 49.1 and 111.0 ± 63.8; p = 0.035) and isovolumetric relaxation time in relation to T-0 and T-30 (61.5 ± 15.6 and 70.0 ± 13.6, p = 0.0002). It was also observed a significant negative correlation between indexes of systolic function, fractional shortening and ejection fraction, and the serum concentration of C-reactive protein (r = -0.324, p = 0.02 and r = -0.332, p = 0.01, respectively). Regarding the assessment of the autonomic system, there was a reduction of all parameters of heart rate variability in T-0 compared to other moments, with p <0.0001 for all indexes. Thus, under the circumstances of the present study, it was possible to conclude that female dogs with naturally occurring sepsis present autonomic dysfunction, reflected by the reduction of all parameters of heart rate variability, and C-reactive protein may play a pathogenic role in the progression of cardiac involvement / Doutor
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Papel do inflamassoma NLRP3 em modelo de infecção sistêmica por Sporothrix schenckii /Gonçalves, Amanda Costa. January 2016 (has links)
Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Fernanda Freitas Anibal / Banca: Luciana Simon Pereira Crott / Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Cleni Mara Marzocchi Machado / Resumo: A esporotricose é uma infecção fúngica causada pelas espécies do complexo Sporothrix, incluindo Sporothrix schenckii sensu stricto. Os receptores de reconhecimento padrão (PRRs), pertencentes às células da resposta imune inata, reconhecem os padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs). Uma classe de PRRs que tem sido associada ao reconhecimento de fungos é a dos receptores Nod-like (NLR). Após o reconhecimento de PAMPs, os receptores NLR family pyrin domain-containing 3 (NLRP3), em conjunto com a molécula adaptadora Apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain (ASC) e com a caspase-1, formam o inflamassoma NLRP3. Quando ativado, este complexo protéico promove a maturação das citocinas pró-inflamatórias IL-1β e IL-18, que influenciam no desenvolvimento das respostas imune Th17 e Th1, respectivamente. O inflamassoma NLRP3 também é responsável pela piroptose, uma morte celular inflamatória regulada por caspase-1. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel do inflamassoma NLRP3 em modelo de infecção sistêmica por S. schenckii, utilizando um camundongo selvagem (WT) e três diferentes camundongos knockout (KO): NLRP3-/-, ASC-/- e Casp-1-/-. Todos os animais KO foram mais suscetíveis que os WT na infecção por S. schenckii. A ativação do inflamassoma NLRP3 foi essencial para a liberação ex vivo de NO, IL-1β, IL-17, IL-18, mas não para IFN-γ. Além disso, S. schenckii desencadeou maior expressão de caspase-1 ativa e maior porc... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is a mycosis caused by fungi from the Sporothrix schenckii species complex, whose prototypical member is Sporothrix schenckii sensu stricto. Pattern recognition receptors (PRRs) recognize and respond to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and shape the following adaptive immune response. A family of PRRs most frequently associated to fungal recognition is the nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor (NLR). After recognition of a PAMP, NLR family pyrin domain-containing 3 (NLRP3) binds to apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain (ASC) and caspase-1 to form the NLRP3 inflammasome. When activated, this complex promotes maturation of the pro-inflammatory cytokines interleukin (IL)-1β and IL-18 that influence the development of the Th17 and Th1 immune responses, respectively. In addition, the NLRP3 inflammassome is responsible for pyroptosis, a highly inflammatory cell death regulated by caspase-1. In this work, we aimed to evaluate the role of the NLRP3 inflammasome to the outcome of the S. schenckii infection using a wild-type mice (WT) and three different knockout mice (KO): NLRP3-/-, ASC-/-, and Casp-1 -/- . All the KO mice were more susceptible to the infection than the WT during the S. schenckii infection. Furthermore, the NLRP3 inflammasome seems to be critical to the ex vivo release of NO, IL-1β, IL-18, and IL-17, but not IFN-γ. The S. schenckii infection led to increased activation of caspase-1 and cell death by pyroptosis in WT mice. Also, a role for the inflammasome in shaping the adaptive immune response was suggested by lower frequencies of type 17 helper T (Th17) and Th1/Th17 cells in S. schenckii-infected KO mice. On the other hand, absence of any of the inflammasome components resulted in increased frequency of cytotoxic T cells in this infection... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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