Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-09-19T14:46:16Z No. of bitstreams: 1 Marilia Gabriela de Santana Costa.pdf: 1426412 bytes, checksum: c3c7baa96284c5f7b4c52bec2911ec26 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T14:46:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marilia Gabriela de Santana Costa.pdf: 1426412 bytes, checksum: c3c7baa96284c5f7b4c52bec2911ec26 (MD5) Previous issue date: 2013-07-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Helinonia L. (family Heliconiaceae) comprises about 207 species, mostly of Neotropical origin, with elevated ornamental interest. Their identification is performed with difficulty and several species are recognized as synonyms. This study aimed to characterize cytogenetically 10 genotypes of Heliconia, using fluorochrome staining with DAPI and CMA and FISH with rDNA 45S and 5S probes. The karyotypes were symmetric, with 2n = 2x = 24 chromosomes for diploid species, with average length ranging from 0.88 to 3.35 μm. In relation to CMA/DAPI staining and FISH, CMA+/DAPI0/rDNA 5S proximal sites were observed in two and three small chromosomes in diploid and triploid genotypes, respectively. For CMA++/DAPI-/rDNA 45S sites, two or four sites per genotype were observed. For H. psittacorum diploid populations, two subterminal sites with distended satellite were found, and, for H. spathocircinata, four terminal sites without satellite were found. Heliconia psittacorum x H. spathocircinata hybrids (‘Golden Torch Adrian’ e ‘Golden Torch’), as expected, showed three labeled chromosomes, two similar to H. spathocircinata and one to H. psittacorum. For 'Suriname Sassy' and 'Sassy', three terminal sites with satellite similar to diploid H. psittacorum were observed. Heliconia bihai had two chromosomes with proximal sites. Similarly, H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii hybrid showed two proximal sites CMA++/DAPI-/DNAr 45S, but with size and morphology chromosome heteromorphism. The distribution of 5S and 45S rDNA sites, both CMA positive, corroborated the triploid origin for 'Sassy Suriname' and 'Sassy' genotypes from diploid genotypes H. psittacorum as well as the hybrids H. psittacorum x H. spathocircinata ('Golden Torch' and 'Golden Torch Adrian') and H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii from their respective parents. / O gênero Heliconia L. (família Heliconiaceae) possui cerca de 207 espécies, principalmente de origem neotropical, com elevado interesse ornamental. Sua identificação é realizada com dificuldade e diversas espécies são reconhecidas como sinonímias. O presente trabalho teve por objetivo a caracterização citogenética de 10 genótipos de Heliconia mediante as técnicas de coloração com fluorocromos CMA e DAPI e FISH para sítios de DNAr 45S e 5S. Os cariótipos foram simétricos, com número cromossômico para as espécies diploides de 2n = 2x = 24 e comprimento médio dos cromossomos de 0,88 a 3,35 μm. Em relação à coloração CMA/DAPI e FISH, observou-se marcação proximal CMA+/DAPI0/DNAr 5S em dois e três cromossomos pequenos, nos genótipos diploides e triploides, respectivamente. Para as marcações CMA++/DAPI-/DNAr 45S, por sua vez, observou-se de dois a quatro sítios por genótipo. Nas populações diploides de H. psittacorum observados dois cromossomos com marcação subterminal e satélite distendido e para H. spathocircinata foram encontrados quatro cromossomos com marcação terminal e ausência de satélite. Os híbridos de H. psittacorum x H. spathocircinata (‘Golden Torch Adrian’ e ‘Golden Torch’) como esperado exibiram três cromossomos com marcação, dois semelhantes aos H. spathocircinata e outro ao de H. psittacorum. Nos genótipos triploides ‘Sassy’ e ‘Suriname Sassy’, foram observados três cromossomos com marcação subterminal e presença de satélite semelhante ao encontrado para H. psittacorum. Para H. bihai, destacaram-se dois cromossomos com marcação proximal. O híbrido H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii também apresentou dois cromossomos portadores sítios de CMA++/DAPI-/DNAr 45S proximal, porém heteromórficos para tamanho e morfologia. A distribuição dos sítios de DNAr 5S e 45S, ambos CMA positivos, corroborou a origem dos genótipos triploides ‘Sassy’ e ‘Suriname Sassy’ a partir de genótipos diploides de H. psittacorum bem como de híbridos H. psittacorum x H. spathocircinata (‘Golden Torch’ e ‘Golden Torch Adrian’) e H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii a partir de seus respectivos parentais.

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-07-13T13:52:13Z No. of bitstreams: 1 textocompleto.pdf: 2171202 bytes, checksum: 8ee4b87c53963f5cf29e48d7a21d81a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T13:52:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 textocompleto.pdf: 2171202 bytes, checksum: 8ee4b87c53963f5cf29e48d7a21d81a4 (MD5) Previous issue date: 2017-03-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / No Brasil, a macaúba é considerada a palmeira de maior dispersão geográfica, ocorrendo naturalmente em grande parte do território nacional, principalmente nos biomas do Cerrado, Caatinga, Mata Atlântica e Campos de Altitude. A sua ampla distribuição relaciona-se à sua diversidade genética e variabilidade fenotípica. Portanto o objetivo deste trabalho é determinar a diversidade morfofisiológica, anatômica e genética entre populações de macaúba procedentes de diferentes biomas, em plantas depositadas no BAG-macaúba. Avaliar as respostas ecofisiológicas e a existência de níveis de sesceptibilidade das populações de diferentes procedências relacionadas à escassez hídrica, bem como os possíveis mecanismos de resistência ao estresse hídrico. A transpiração (E) foi a única variável das trocas gasosas que diferiu estatisticamente das demais, sendo significativa tanto na comparação entre populações quanto entre as épocas. Os maiores e menores valores de E foram registrados para as populações do Oeste de Minas Gerais e do Centro de Minas Gerais, respectivamente. Os Valores de α, aliados a A postiva e manutenção dos valores de Ci/Ca, quando em queda de gs e E, evidenciam uma fotossíntese robusta do ponto de vista bioquímico. Sob progressão de déficit hídrico no solo e no ambiente, o limbo foliar da macaúba é capaz de manter a fotossíntese em valores positivos. Os elevados valores de EUA durante a progressão da estiagem também são evidencia da eficiência hídrica da macaúba em manter a fotossíntese em condições de reduzida disponibilidade hídrica ambiental. A competência hídrica observada em macaúba capacita as populações a se estabelecerem na natureza, ocupando ambientes, cuja disponibilidade hídrica são diferentes, o que pode determinar sua dispersão ao longo do território brasileiro. As diferentes estratégias de controle da fotossíntese frente a escassez hídrica, observada entre as populações da Floresta Atlantica e Cerrado, indicam diferenciação intraespecífica, com a existência de fenótipos fisiológicos distintos. A variação fisiológica intraespecífica observada pode ser matéria prima para o programa de melhoramento genético da macaúba, permitindo satisfazer as constantes exigências agrícolas, em consonância às condições ambientais. / In Brazil, macaúba is considered the palmo f the greatest geographic dispersion, occuring naturally in mosto f the national territory, mainly in the Cerrado, Caatinga, Atlantic Forest and Altitude Fields biomes. Its wide distribution is related to its genetic diversity and phenotypic variability. Therefore, the objective of this work is to determine the morphophysiological, anatômical and genetic diversity among populations of macaúba from different biomes and deposited in BAG-macaúba. To evaluate the ecophysiological responses and the existence of levels of susceptibility of the populations of different sources related to water scarcity, as well as the possible mechanisms of resistance to water stress. Transpiration (E) was the only variable of the gas exchange that differed statistically from the others, being significant both in the comparison between populations and between seasons. The highest and lowest values of E were recorded for the populations of the West of Minas Gerais and the Center of Minas Gerais, respectively. The values of α, allied to A positive and maintenance of the Ci/Ca values, when falling from gs and E, show a robust biochemical photosynthesis. Under progression of water déficit in soil and in the environment, the macaúba leaf blade is able to maintain photosynthesis at positive values. The high WUE values during drought progression are also evidence of water efficiency of macaúba in maintaining photosynthesis under conditions of reduced environmental water availability. The water competency observed in macaúba enables populations to settle in nature, occupying environments whose water availability is different strategies of photosynthesis control in relation to water scarcity, observed defferentiation, with the existence of deferente physiological phenotypes. The intraspecific physiological variation observed may be a raw material for the macaúba genetics improvement program, allowing to meet the constant agricultural requirements, in line with environmental conditions

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:05:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo7547_1.pdf: 2738409 bytes, checksum: 5486a3099bbcbfcd76e0a19a1921ae4e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os genes de RNA ribossomal apresentam várias peculiaridades, destacando-se o fato de serem bem conservados entre as espécies e ocorrerem em arranjos em tandem com centenas a milhares de cópias. Essas características permitiram que esses genes fossem localizados por meio da FISH nos cromossomos metafásicos de um grande número de espécies. Alguns estudos prévios sugeriram que esses sítios teriam localização preferencial no cromossomo. O presente trabalho teve por objetivo analisar a distribuição desses genes nos cromossomos de uma ampla amostra de cariótipos, verificar se existe alguma tendência à distribuição não - casual, e avaliar se determinadas características cromossômicas ou cariotípicas poderiam influenciar esses padrões. Para isso, foi construída uma base de dados a partir da literatura, contendo informações de 1002 cariótipos de 53 famílias de angiospermas e quatro de gimnospermas. Entre as características analisadas estão a posição e o número de sítios de DNAr 5S e 45S, e diversas características do cariótipo, tais como morfologia e tamanho cromossômico. Nos cariótipos de angiospermas o número mais frequente de sítios de DNAr 5S e 45S foi um por complemento haploide, sendo que o número médio foi maior para o DNAr 45S. A análise da posição desses sítios revelou uma frequência de sítios no braço curto maior que a esperada. Além disso, os sítios de DNAr 45S foram observados preferencialmente em regiões cromossômicas terminais. Curiosamente, os sítios de DNAr 45S que ocorreram nos cromossomos acrocêntricos geralmente ocuparam todo o braço curto, sugerindo que seu surgimento poderia estar relacionado ao menos em parte, a rearranjos cromossômicos que geram acrocêntricos. A posição terminal dos sítios de DNAr 45S pode ser vantajosa por evitar rearranjos deletérios causados por recombinação entre sítios de diferentes cromossomos ou relacionada à organização cromossômica em intérfase. Por outro lado, o DNAr 5S ocupa geralmente a posição proximal, especialmente em cariótipos com sítios únicos, e ocorrem tanto na região proximal como na terminal para cariótipos com sítios múltiplos. Essa distribuição é similar à de DNA satélites organizados em tandem que ocorrem preferencialmente na região proximal e subtelomérica. A análise da variação intra-específica entre diplóides revelou que a posição dos sítios de DNAr 5S e 45S varia menos que o número de sítios e uma análise entre diplóides e poliplóides mostrou que há uma tendência à conservação do número de sítios de DNAr 5S e 45S por complemento monoploide. Entretanto, comparando-se cariótipos do mesmo gênero, observa-se nos poliplóides uma tendência a apresentarem um número menor que o esperado de sítios de DNAr 45S com base nos diploides. Essa redução pode estar relacionada ao processo de diploidização comum em poliploides. Por último, embora em muitos gêneros sejam encontradas espécies que apresentam os dois sítios (5S, 45S) no mesmo cromossomo, foi observado que a frequência desse arranjo não difere do esperado. Portanto, o presente trabalho revela que os padrões de distribuição dessas duas sequências repetidas em tandem são diferentes, tendo o DNAr 45S maiores restrições em relação a sua posição e maior facilidade de dispersão

Orientador: Shirlei Maria Recco Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T19:35:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_KleliaAparecida_M.pdf: 5095277 bytes, checksum: d39b0879e4a22b528220f0642206dc20 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A família Hylidae possui quatro subfamílias, sendo Hylinae constituída por 27 gêneros, dentre eles o gênero Hyla que possui muitas espécies alocadas em grupos relacionados entre si. O grupo de Hyla albomarginata, também conhecido por "hylas verdes" é subdividido em três complexos: "albomarginata", "albosignata" e "albofrenata".O gênero Aplastodiscus está envolvido em discussão taxonômica desde sua descrição, tendo sido sinonimizado e retirado de Hyla mais de uma vez. Como há grande semelhança morfológica e comportamental entre as espécies do grupo de H albomarginata e as espécies de Aplastodiscus (A Lutz in B. Lutz, 1950), o relacionamento filogenético e taxonômico entre esses gêneros ainda é bastante discutido. No presente trabalho foi realizado um estudo citogenético das duas espécies de Aplastodiscus (A. perviridis e A. cochranae), de três populações de H albomarginata (complexo "albomarginata"), H albosignata e H leucopygia (complexo "albosignata") e H albofrenata, H arildae, H ehrhardti e Hyla eugenioi (complexo "albofrenata"), além de H faber, uma espécie proximamente relacionada não pertencente ao grupo, com o objetivo de contribuir para a sistemática desse grupo e para o entendimento da problemática em questão envolvendo os relacionamentos intra e intergenérico de Aplastodiscus. As metáfases mitóticas e meióticas foram obtidas por suspensão de células de epitélio intestinal e testículos e submetidas aos métodos de coloração com Giemsa, bandamento C, impregnação pela prata e hibridação in situ com sondas de DNA ribossomal e de seqüência telomérica. O número diplóide de 2n=24 foi encontrado nas duas espécies de Aplastodiscus, Hyla albomarginata e Hyla faber, enquanto Hyla albosignata apresentou 2n=20 e Hyla leucopygia 2n=18. As quatro espécies do complexo "albofrenata" apresentaram 2n=22 cromossomos. As duas espécies de Aplastodiscus apresentaram o mesmo padrão de heterocromatina entre si, mas diferiram das espécies de Hyla. A região organizadora do nuc1éolo (NOR) foi localizada no telômero do par 12 em ambas as espécies de Aplastodiscus, do par 09 em H albosignata e H leucopygia e do par 11 em H. faber, e intersticialmente no braço curto do par 02, com heteromorfismo de tamanho, em H albomarginata. Em dois dos oito indivíduos de Hyla albofrenata, a NOR está presente na região te1omérica do braço longo no par 07 e em seis desses indivíduos foi encontrado uma interessante variante em que a NOR está presente nos pares 01 e 07, mas em apenas um dos homólogos de cada par. Em H. ehrhardti, a técnica de Ag-NOR marcou os pares 06 e 10, mas apenas a do par 06 foi confirmada por hibridação in situo Em H arildae, a NOR foi localizada no par 10 e em Hyla eugenioi no par 07, também nos telômeros. Em H albofrenata e H arildae foram observados anéis multivalentes na prófase I da meiose, constituídos de quatro a seis bivalentes, com a participação dos cromossomos portadores da NOR. Eventos de translocação durante a evolução das espécies H albofrenata e H arildae podem ser responsáveis pela formação desses anéis na meiose. O envolvimento dos cromossomos portadores da NOR pode ter facilitado a ocorrência do polimorfismo observado em H albofrenata. A sonda de seqüências teloméricas marcou os telômeros em todas as espécies e também as regiões centroméricas dos cromossomos de H albofrenata e H arildae, coincidente com a heterocromatina centromérica. Em anfíbios, seqüências localizadas fora dos te1ômeros tinham sido detectadas apenas em regiões intersticiais. A presença dessas seqüências no centrômero pode ter origem em amplificação de seqüências (TTAGGG)n relacionada com a amplificação de regiões de heterocromatina. Os dados do presente trabalho permitiram concluir que A. perviridis e A. cochranae não podem ser diferenciadas cito geneticamente. O par 09, portador da NOR, de H albosignata e H leucopygia é muito semelhante na morfologia (metacêntricos) e na localização (região te1omérica) da NOR, ao par 12 das espécies de Aplastodiscus e ao par 11 de H faber, sugerindo serem esses cromossomos homeólogos. Embora Hyla albomarginata diferencie-se das demais espécies analisadas pela localização da NOR no par 2, apresentou o mesmo número diplóide e a morfologia dos cromossomos semelhante a Aplastodiscus. A morfologia cromossômica conservada, principalmente dos sete primeiros pares, entre as espécies dos complexos "albofrenata" (presente trabalho) "albosignata" e "albomarginata" e de Aplastodiscus, sugere que um cariótipo ancestral comum deve ter originado todas essas espécies atuais e que rearranjos cromossômicos levaram à diferenciação desses cariótipos, com mudança de número diplóide, envolvendo principalmente o grupo de cromossomos menores, e dispersão de NOR e de heterocromatina / Abstract: The Hylidae family includes four subfamilies, with Hylinae comprising 27 genera. The Hyla genus has many species divided into related groups. The Hyla albomarginata group, as known as "green Hylas" is subdivided into 3 complexes: "albomarginata","albosignata" and "albofrenata". The Aplastodiscus genus has been the object oftaxonomic discussion since its description, having been synonymyzed to and removed from Hyla more than once. Since there are great morphological and behavioral similarities between the species of the H albomarginata group and the species of Aplastodiscus, the phylogenetic and taxonomic relationships of these genera are still under discussion. In the present research, a cytogenetic study was carried out evaluating two species of Aplastodiscus (A.perviridis and A. cochranae), three populations of H albomarginata ("albomarginata" complex), H albosignata and H leucopygia ("albosignata" complex) and H albofrenata, H arildae, H ehrhardti and Hyla eugenioi ("albofrenata" complex), as well as H faber, a very closely related species not pertaining to the group. The aim of this research was to contribute to the systematics of this group and to the understanding of the intra- and intergeneric relationships of Aplastodiscus. Mitotic and meiotic metaphases were obtained from suspension of intestinal epithelial cells, stained with Giemsa and submitted to the techniques of C-banding, silver impregnation and in situ hybridization with probes of ribosomal DNA and telomeric sequence. The diploid number of 2n=24 was found in the two species of Aplastodiscus, Hyla albomarginata and Hyla faber, while Hyla albosignata had 2n=20 and Hyla leucopygia had 2n=18. The four species of the complex "albofrenata" had 2n=22 chromosomes. The two species of Aplastodiscus had the same heterochromatin pattern, but they differ from the Hyla species. The nucleolus organizing region (NOR) was located on the telomeric regions or pair 12 in both species of Aplastodiscus, in pair 09 of H albosignata and H leucopygia, in pair 11 in H faber, and intersticially on the short arms of pair 02, with size heteromorphism in H albomarginata. In two of the eight individuals of Hyla albofrenata, the NOR was present in the telomeric region on the long arm in pair 07 and, in six of these individuals, a interesting pattern for Anura was found. The NOR was found in the pairs 01 and 07, but in only one of the homologues of each pair. In H ehrhardti, the Ag-NOR technique marked the pairs 06 and 10, but only that on pair 06 was confirmed by in situ hybridization. In H arildae, the NOR was located in the 10 pair and in Hyla eugenioi in the pair 07, also in the telomeric regions. In H albofrenata and H arildae multivalent rings were observed in the prophase I of meiosis, constituted of 4 to 6 bivalents, being one of them the NOR-bearing chromosomes. Translocation events during the evolution of H albofrenata and H arildae could be responsible for the ring formation in meiosis. The participation of the NOR bearing chromosomes in the multivalente rings could have facilitated the occurrence of polymorphism of NOR, as observed in H albofrenata. The telomeric sequence probe marked the telomeric region in all species studied as well as the centromeric regions of the chromosomes of H albofrenata and H arildae, at the centromeric heterochromatin. In amphibians, telomeric sequences located outside the telomeric regions had only been detected in interstitial regions. The presence of these sequences in centromeric regions may have been originated by the amplification of the (TTAGGG)n sequences related to heterochromatic amplification. The data of the present work a11ow the conc1usion that A. perviridis and A. cochranae could not be differentiated. The NOR bearing chromosomes 9 of H leucopygia and H albosignata are very similar in size, morphology (metacentric) and NOR localization (telomeric region) to the pair 12 of the species Aplastodiscus and also to the pair 11 of H faber, suggesting that these are homologous chromosomes. Although Hyla albomarginata differs from all species analyzed for NOR localization on pair 2, it presented the same diploid number and chromosome morphology of Aplastodiscus. The conserved chromosomal morphology, mainly in the first seven pairs, between the species of "alboftenata" (present work), "albosignata" and "albomarginata" complexes and Aplastodiscus, suggests that one ancestral karyotype in common must have originated all these current species. The chromosomal rearrangements could lead to the differentiation of these karyotypes, with changes in diploid number, involving mainly the short chromosome group and the dispersion of heterochromatin and NOR / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T10:17:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Medeiros_LilianRicco_D.pdf: 1840995 bytes, checksum: 62f07c7258ee38a9d84632b39e51a61c (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: No presente estudo caracterizamos e comparamos citogeneticamente populações de sete espécies de Dendropsophus (Hylinae) proximamente relacionadas e que apresentam morfologia externa semelhante: D. nanus (Botucatu, SP; Bodoquena, MS; Telêmaco Borba, PR; Bacabal, MA), D. walfordi (entre Rio Madeira e Pacaás, RO), D. sanborni (Torres, RS), D. jimi (Uberlândia, MG), D. rubicundulus (Uberlândia, MG), D. elianeae (Botucatu, SP; Nova Itapirema, SP; Bodoquena, MS) e D. minutus (Vitória Brasil, SP; Bodoquena, MG). As metáfases foram obtidas a partir de suspensões de células do epitélio intestinal e de testículo. As lâminas foram coradas com solução de Giemsa 10% ou submetidas às técnicas de banda C e de impregnação por prata (Ag-NOR) e hibridação in situ fluorescente. Os dados citogenéticos revelaram a presença de 2n=30 cromossomos em todas espécies, exceto em alguns indivíduos de D. nanus, que apresentaram até três cromossomos B pequenos, todos telocêntricos e univalentes na meiose. Todas as espécies apresentaram pequena quantidade de heterocromatina, localizada somente na região centromérica. No entanto, alguns indivíduos de D. nanus de Telêmaco Borba (PR) e de D. rubicundulus de Uberlândia (MG) apresentaram um pequeno bloco de heterocromatina intersticial no par 3 e no par 12, respectivamente, caracterizando uma variação intrapopulacional. A região organizadora do nucléolo (NOR) foi detectada em um único par cromossômico nas diferentes espécies. Um indivíduo de D. sanborni apresentou um heteromorfismo no par 12 devido a uma duplicação da NOR em um dos homólogos. As populações de D. nanus provenientes de Telêmaco Borba (PR), Bacabal (MA) e Serra da Bodoquena (MS) e a de D. walfordi coletada entre os rios Madeira e Pacaás (RO) apresentaram cariótipos idênticos, com 2n=30 e NF=52. Um espécime de D. nanus da Serra da Bodoquena, apresentou NF=51 devido a um heteromorfismo no par 6, em que um dos homólogos é metacêntrico e o outro telocêntrico, provavelmente devido a uma inversão do tipo pericêntrica. Em todos os espécimes, a NOR foi localizada no par metacêntrico 13. Dendropsophus sanborni proveniente de Botucatu (SP) e Torres (RS) e D. jimi de Uberlândia (MG) também apresentaram cariótipos idênticos, com 2n=30 e NF=50, diferindo das outras duas espécies pela presença de cinco telocêntricos em vez de quatro, com a NOR localizada no par telocêntrico 12. Não foram observadas diferenças citogenéticas entre as populações de D. nanus e entre as de D. sanborni, e nem destas com as outras populações já descritas na literatura. Os cromossomos B presentes em duas populações de D. nanus não apresentaram heterocromatina e nem genes ribossomais. Dendropsophus elianeae apresentou três pares de telocêntricos e a NOR no par 11, enquanto D. rubicundulus apresentou apenas dois telocêntricos e a NOR no par 5. As duas populações de D. minutus apresentaram o mesmo cariótipo já descrito para outras populações, com ausência de cromossomo do tipo telocêntrico. A NOR nessa espécie foi detectada no par 9. Os dados citogenéticos do presente trabalho não permitiram distinguir D. nanus de D. walfordi, nem D. sanborni de D. jimi, sugerindo que são espécies muito intimamente relacionadas. Dendropsophus elianeae e D. rubicundulus foram até pouco tempo consideradas como uma única espécie e D. rubicundulus foi por muito tempo erroneamente denominada de D. elongata. Essas espécies foram facilmente diferenciadas pelo número de telocêntricos e pela localização da NOR. Diferem também de D. elongata, descrita na literatura, que possui apenas um par de telocêntricos. Nenhuma diferença siginificativa foi detectada entre os cariótipos das três populações de D. elianeae. Portanto, os dados citogenéticos corroboraram o status taxonômico atual de D. elianeae e D. rubicundulus. Rearranjos do tipo inversão e translocação devem ter ocorrido durante a diferenciação das espécies de Dendropsophus, levando a modificação na morfologia dos cromossomos e à migração da NOR no genoma, sem alterar o número de cromossomos / Abstract: In the present study we characterized and compared cytogenetically populations of seven closely related Dendropsophus (Hylinae), a group of 30 chromosomes species, that show similar external morphology: D. nanus (Botucatu, SP; Bodoquena, MS; Telêmaco Borba, PR; Bacabal, MA), D. walfordi (between Rio Madeira and Pacaás, RO), D. sanborni (Torres, RS), D. jimi (Uberlândia, MG), D. rubicundulus (Uberlândia, MG), D. elianeae (Botucatu, SP; Nova Itapirema, SP; Bodoquena, MS) e D. minutus (Vitória Brasil, SP; Bodoquena, MG). The metaphases were obtained from intestinal epithelium and testis cell suspensions. The slides were stained with 10% Giemsa solution or submitted to the C-band (King, 1980), silver staining (Ag-NOR) and in situ fluorescence hybridization techniques. All species had 2n=30 chromosomes, except some individuals of D. nanus, which showed up to three little B-chromosomes, all telocentrics. These chromosomes were univalent in meiosis. All the species presented a little amount of heterochromatin, located only in the centromeric region. However, some individuals of D. nanus from Telêmaco Borba (PR) and of D. rubicundulus from Uberlândia (MG) had a little block of interstitial heterochromatin in the pair 3 (D. nanus) and in the pair 12 (D. rubicundulus), characterizing an intra-populational variation. The nucleolar organizing region (NOR) was detected in only one chromosomal pair in all species. An individual of D. sanborni had one heteromorphism due to a duplication of the NOR in one of the homologues of the pair 12. Dendropsophus nanus from Telêmaco Borba (PR), Bacabal (MA) and Serra da Bodoquena (MS) and of D. walfordi collected between the Madeira and Pacaás rivers (RO) showed identical karyotypes, with 2n=30 and NF=52. A specimen of D. nanus from Serra da Bodoquena presented NF=51 due to an heteromorphism in the pair 6, in which one of the homologues is metacentric and the other is telocentric, probably because of a pericentric inversion. In all the specimens, the NOR was located in the metacentric pair 13. Dendropsophus sanborni from Botucatu (SP) and Torres (RS), and D. jimi from Uberlândia (MG) also had identical karyotypes, with 2n=30 e NF=50, differing from the other two species by the presence of five telocentrics instead of four, with the NOR located in the telocentric pair 12. We did not observe citogenetic differences between the populations of D. nanus and of D. sanborni, neither differences among these populations and others already described in the literature. The B-chromosomes found in two populations of D. nanus did not showed heterochromatin neither ribosomal genes. Dendropsophus elianeae had three pairs of telocentric and the NOR in the pair 11. In contrast, D. rubicundulus presented only two telocentrics and the NOR in the pair 5. The two populations of D. minutus had the same karyotype already described for other populations, with absence of telocentric chromosome. The NOR was detected in the pair 9. The cytogenetic data presented here did not permit to distinguish D. nanus from D. walfordi, neither D. sanborni from D. jimi, suggesting that these species are very closely related. Dendropsophus elianeae and D. rubicundulus were until recently considered as a unique species, and for a long time D. rubicundulus was erroneously denominated as D. elongata. These species were easily distinguished from each other by the number of telocentrics and location of the NOR. They also differ from the D. elongata, described in the literature, which has only one pair of telocentric. No significant difference was detected among the karyotypes of the three populations of D. elianeae. Hence, the cytogenetic data confirm the current taxonomic status of D. elianeae and of D. rubicundulus. Rearrangements, such as inversion and translocation, should have occurred during the differentiation of these species, driving the changes in the chromosome morphology and the migration of the NOR in the genome, without modifying the chromosomal number / Doutorado / Biologia Celular / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T18:27:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lourenco_LucianaBolsoni_M.pdf: 5059026 bytes, checksum: 948a2fa57b0e7f0d6ab3080a3ff34b34 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Foram analisados citogeneticamente sessenta e um espécimes de Physalaemus petersi e sete de Edalorhina perezi (Leptodactylidae, Anura), provenientes do Estado do Acre, Brasil, com o intuito de contribuir para as investigações sobre possíveis relações filogenéticas entre esses dois gêneros neotropicais. As preparações cromossômicas foram obtidas de suspensões de células intestinais e de testículo e foram coradas convencionalmente com Giemsa ou submetidas aos métodos Ag-NOR e de bandamento C. A análise morfométrica dos cromossomos de vinte e nove metáfases mitóticas, obtidas dos sete espécimes de Edalorhina perezi coletados (duas fêmeas e cinco machos), mostrou que todos esses indivíduos apresentam 2n=22. Os onze pares cromossômicos são homomórficos, sendo seis metacêntricos (pares 1, 5, 6, 9, 10 e 11), quatro submetacêntricos (pares 2, 4, 7 e 8) e um subacrocêntrico (par 3). Foi detectado apenas um par de NOR por genoma diplóide, localizado no braço longo dos cromossomos do par 8, nas preparações cromossômicas de seis indivíduos, tratadas pelo método Ag-NOR. A técnica de bandamento C, aplicada ao material referente a dois desses indivíduos, evidenciou que essa NOR é circundada por blocos de heterocromatina constitutiva, também presentes no centrômero de todos os cromossomos. Bandas heterocromáticas menos nítidas foram detectadas no braço curto dos cromossomos do par 1 e no braço longo dos cromossomos do par 2. A análise da meiose de dois machos detectou cadeias de bivalentes interligados em espermatócitos I, aparentemente formadas por três grandes pares cromossômicos, sugerindo a presença de translocações heterozigotas múltiplas. Embora todos os espécimes de Physalaemus petersi estudados apresentem 2n=22, dois cariótipos distintos foram encontrados dentre eles, o que sugere uma reavaliação desse táxon. O cariótipo mais comum é formado por quatro pares cromossômicos metacêntricos (1, 5, 6 e 10), quatro submetacêntricos (2, 4, 7 e 9), dois subacrocêntricos (3 e 8) e um par de cromossomos sexuais XXIXY, como mostrou a análise morfométrica de vinte e seis metáfases de dez indivíduos. Dentre o grupo de indivíduos portadores desse cariótipo foi observada grande variabilidade interindividual no padrão de distribuição de NOR e de segmentos heterocromáticos. A análise de bivalentes de espermatócitos na primeira divisão da meiose mostrou que pares cromossômicos heterozigotos para segmentos heterocromáticos nãocentroméricos não apresentam quiasma nessas regiões cromossômicas. O outro cariótipo foi observado em apenas 3 machos da Reserva Extrativista do Alto Juruá, cujo canto também difere daquele apresentado pelos demais exemplares de Physalaemus petersi. Esse cariótipo é composto por seis pares cromossômicos metacêntricos (2, 3, 4, 7, 8 e 10), dois submetacêntricos (5 e 9), dois subacrocêntricos (1 e 6) e um par heteromórfico, formado por um cromossomo submetacêntrico e um metacêntrico. A relação desse par heteromórfico com a determinação do sexo não pode ser elucidado, visto que nenhuma fêmea com esse cariótipo foi analisada. O método Ag-NOR permitiu observar dois padrões de distribuição de NOR, que envolvem dois pares cromossômicos (8 e 9). O bandamento C realizado no material obtido de um desses espécimes evidenciou a presença de heterocromatina constitutiva em todos os centrômeros desse cariótipo e nos telômeros dos cromossomos dos pares 4 e 8 e em um dos telômeros de um cromossomo 9. Configurações meióticas multivalentes foram observadas em exemplares de P. petersi dos dois grupos cariotípicos encontrados, sugerindo a participação de translocações na evolução desses cariótipos. Esse tipo de rearranjo pode estar envolvido, inclusive, na formação dos diferentes padrões de distribuição de NORs e bandas heterocromáticas / Abstract: Sixty one specimens of Physalaemus petersi and seven of Edalorhina perezi (Leptodactylidae, Anura) from Acre State, Brazil, were studied, to contribute to phylogenetic relationship studies between these two neotropical genera. Chromosome preparations were obtained from cellular suspensions of testis and intestinal epithelium. These cytological preparations were conventionally stained by Giemsa or submitted to Ag-NOR and C-banding techniques. Morphometric analyses of twenty nine mitotic metaphases chromosomes from the specimens of E. perezi (two females and five males), showed that ali these individuais present 2n=22. The eleven chromosome pairs of this karyotype are homomorphic, being six metacentric (pairs 1, 5, 6, 9, 10 and 11), four submetacentric (pairs 2, 4, 7 and 8) and one subacrocentric (pair 3). Only one pair of NOR per diploid genome of chromosome preparations obtained from six specimens was detected and this was located interstitially in the long arm of pair 8. The C-banding techniques, applied to cells from two of these specimens, showed that this NOR is surrounded by constitutive heterochromatin blocks, also present at the centromere of ali the chromosomes. Gray heterochromatic bands were detected in the short arm of chromosome pair 1 and in the long arm of pair 2. Analyses of meiotic chromosomes of two males detected multivalent chains in spermatocytes I, apparently formed by three long chromosome pairs, indicating the ocurrence of heterozygous translocations in this karyotype. Ali the specimens of P. petersi studied present 2n=22, but two distinct karyotypes were detected among them. These findings suggest a re-evaluation of the taxon P. petersi. The most commom karyotype presents four metacentric (1, 5, 6 and 10), four submetacentric (2, 4, 7 and 9), two subacrocentric chromosome pair (3 and 8) and one pair of sex chromosomes xx/XY. Among the groups of specimens with this kind of karyotype, a big interindividual variability of NOR and heterochromatic band patterns was observed. The analysis of spermatocytes I bivalents showed that chromosome pairs which are heterozygous to non-centromeric heterochromatic bands do not present chiasma at these chromosome regions. The other karyotype was observed in only three males, whose call also differs from that of most commom specimens of P. petersi. This karyotype is formed by six metacentric (2, 3, 4, 7, 8 and 10), two submetacentric (5 and 9), two subacrocentric (1 and 6) and one heteromorphic chromosome pairo The relation of this pair with sex determination could not be elucidated, because no female with this karyotype was found. The Ag-NOR method showed two patterns of NOR distribution, which involve two chromosome pairs (8 and 9). The Cbanding technique applied to material obtained from one of these specimens showed the presence of constitutive heterochromatin at ali the centromeres of this karyotype, in the telomeres of the chromosomes of the pairs 4 and 8 and at one of the telomeres of one pair 9 chromosomes. Multivalent configurations were observed in meiotic prophase I of both karyological groups of P. petersi, suggesting the involvement of translocations in the evolution of these karyotypes. This kind of rearrangement can be involved in the origin of different NOR patterns and heterochromatic band distribution / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Luciana Bolsoni Lourenço Morandini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T04:27:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Targueta_CintiaPelegrineti_M.pdf: 5224061 bytes, checksum: 8bdf78a0b206d3bdf666436bc2d077b5 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O anuro Engystomops petersi está amplamente distribuído na bacia Amazônia, compreendendo países como o Brasil, Equador, Peru e Bolívia. Estudos prévios já descreveram variações no canto e também variações genéticas nesse anuro. Nós apresentamos aqui uma análise citogenética da população de Puyo (Equador), um sítio que inclui a região descrita como sendo a localidade-tipo dessa espécie, duas outras populações Equatorianas que apresentam isolamento pré-zigótico (Yasuní e La Selva), e uma população Brasileira do Estado do Acre. Todos os espécimes analisados citogeneticamente foram também incluídos em estudos filogenéticos utilizando seqüências de DNA mitocondrial. A sequência de parte de um gene nuclear (rodopsina) também foi utilizada neste trabalho. Uma enorme variação citogenética foi encontrada e muitos padrões cariotípicos puderam ser observados, mesmo entre populações que não apresentam isolamento pré-zigótico. Este resultado nos permite sugerir que dados cariotípicos podem ter participado no processo de especiação de Engystomops. Populações de Puyo e do Acre apresentaram cromossomos sexuais heteromórficos compondo o sistema XX/XY, o que não foi identificado nas outras populações Equatorianas. Já que as populações Equatorianas estão localizadas em um clado separado das populações do Acre, nós sugerimos a hipótese de que a presença dos cromossomos sexuais X e Y seja um caráter plesiomórfico neste grupo. A análise do gene nuclear permitiu ainda identificar seis SNPs (Polimorfismos de simples nucleotídeos) e alguns espécimes heterozigotos para esses sítios. As variações cariotípicos e moleculares aqui apresentados, em conjunto com os dados previamente descritos, corroboram a hipótese de que Engystomops petersi seja um complexo de espécies e sugerem que eventos de hibridação e introgressão possam ter ocorrido entre as populações desse grupo. / Abstract: The frog Engystomops petersi is widely distributed in the Amazon basin. Genetic divergence and speciation mechanisms of E. petersi populations have been inferred mainly from mitochondria DNA (mtDNA) and microsatellite polymorphisms, male advertisement call and sexual selection. In spite of the significant progress resulting from these studies, many cytogenetic, taxonomic and evolutionary aspects of E. petersi populations remain unclear. In the present study, cytogenetic analysis and nucleotide divergence in mtDNA and in the rhodopsin nuclear gene of E. petersi populations are described in an attempt to contribute to the understanding of this anuran. High cytogenetic variation distinguished karyotypic patterns, which included two populations with no prezygotic isolation. The Puyo and Acre populations showed heteromorphic sexual chromosomes (XX/XY), which were not identified in the other Equatorial populations. Since all the Equatorial populations were placed in a clade separated from the Acre populations, we hypothesize that the sex chromosomes X and Y is a plesiomorphic condition in this group. The results from mtDNA found here were very similar to those found in previous studies. In the rhodopsine nucleotide sequences, 6 SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) were identified and various specimens were heterozygous for these nucleotide sites. The karyotypic and molecular data presented herein, in conjunction with previously reported data, corroborate the hypothesis that Engystomops petersi is a complex of distinct species and suggested hybridization and introgression events between populations. Moreover, tha data indicated that karyotypic evolution patterns may have played a substantial role in the Engystomops speciation. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-11-10T16:56:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hugo Henrique Pádua de Oliveira- 2012.pdf: 1742065 bytes, checksum: 7bac69420ca8a041766ecff769ec955c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-11-10T20:01:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hugo Henrique Pádua de Oliveira- 2012.pdf: 1742065 bytes, checksum: 7bac69420ca8a041766ecff769ec955c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-10T20:01:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hugo Henrique Pádua de Oliveira- 2012.pdf: 1742065 bytes, checksum: 7bac69420ca8a041766ecff769ec955c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-06-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The anurans are a group of vertebrates with wide geographical distribution that obtained highly evolutionary success, being part of a lineage descendant of early tetrapods, the first vertebrates to conquer the terrestrial environment. Anurans are divided into two suborders: Archaeobatrachia and Neobatrachia. Within the suborder Neobatrachia there is Bufonoidea superfamily, which includes the three families of higher abundance in the neotropical region: Leptodactylidae, Bufonidae and Hylidae. The aim of this study was to analyze cytogenetically species of the family Hylidae of areas of the Cerrado of Goiás, by the technique of conventional cytogenetics and by silver nitrate staining. The metaphases were obtained directly from cell suspensions of spleen, liver and bone marrow. The slides were stained with Giemsa at 8%, to determine the diploid number and chromosome morphology. The species Hypsiboas multifasciatu and Hypsiboas raniceps presented the diploid number 2n=24 and fundamental number FN=48 with positive marks for NORs in chromosomes 8 and 10 respectively. The species Hypsiboas lundii presented diploid number 2n=24 and fundamental number FN=46 due to the presence of acrocentric chromosome in pair 6. The RONs for this species were identified in pericentromeric regions of short arms of chromosome 5 and in telomeric regions of short arms of chromosome 8. Within the genus Hypsiboas, only the species Hypsiboas albopunctatus presented diploid number 2n=22 and fundamental number FN = 44, and by silver staining technique we identified the presence of NORs on the short arms of the telomeric regions of chromosome pair 8. The species Pseudis bolbodactyla presented diploid number 2n=24 and FN=46 evidenced by the acrocentric pair 4. The species Scinax similis and Scinax constrictus showed different karyotypic notations. The species Scinax similis presented karyotype 2n=24 and FN=48 with methacentric and submethacentric chromosomes. We found for the species Scinax constrictus the karyotype notation 2n=22 and FN=44. Differences in the morphology of chromosomes with respect to literature data can be explained by the different criteria used for classification of the chromosomes. The morphology of some of the chromosomes found in this study differs from their representatives described in the literature, and such differences may be explained by adopting different criteria for the classification of chromosomes. / Os anuros são um grupo de vertebrados de ampla distribuição geográfica que obtiveram um grande sucesso evolutivo, fazendo parte de uma linhagem descendente dos primeiros tetrápodes, os primeiros vertebrados a conquistarem o ambiente terrestre. Os anuros encontram-se divididos em duas subordens: Archaeobatrachia e Neobatrachia. Dentro da subordem Neobatrachia há a superfamília Bufonoidea, que inclui as três famílias de maior abundância na região neotropical: Leptodactylidae, Bufonidae e Hylidae. O objetivo desse estudo foi analisar citogeneticamente espécies da família Hylidae de áreas do cerrado goiano, pela técnica de citogenética convencional e pela coloração por nitrato de prata. As metáfases foram obtidas diretamente a partir de suspensões celulares de baço, fígado e medula óssea. As lâminas foram coradas com Giemsa a 8%, para determinação do número diplóide e morfologia cromossômica. As espécies Hypsiboas multifasciatus e Hypsiboas raniceps apresentaram o número diplóide 2n=24 e número fundamental NF=48 com marcações positivas para as RONs nos pares cromossômicos 8 e 10 respectivamente. Já a espécie Hypsiboas lundii apresentou número diplóide 2n=24 e número fundamental NF=46 devido a presença do cromossomo acrocêntrico no par 6. As RONs para esta espécie foram identificadas em regiões pericentroméricas dos braços curtos do cromossomo 5 e em regiões teloméricas dos braços curtos do cromossomo 8. Dentro do gênero Hypsiboas, apenas a espécie Hypsiboas albopunctatus apresentou número diplóide 2n=22 e o número fundamental NF = 44, sendo que a técnica de coloração por prata identificou a presença de RONs nos braços curtos das regiões teloméricas do par cromossômico 8. A espécie Pseudis bolbodactyla apresentou número diplóide 2n=24 e NF=46 evidenciado pelo par acrocêntrico 4. As espécies do gênero Scinax apresentaram diferentes notações cariotípicas. Scinax similis apresentou cariótipo 2n=24 e NF=48 com os cromossomos metacêntricos e submetacêntricos, enquanto que Scinax constrictus apresentou notação cariotípica 2n=22 e NF=44. A morfologia de alguns dos cromossomos encontrados no presente estudo difere de seus representantes descritos na literatura. As diferenças observadas podem ser explicadas através da adoção de diferentes critérios utilizados para a classificação dos cromossomos.

O osteossarcoma (OS) é o tumor ósseo maligno mais freqüente da infância e adolescência com uma taxa de sobrevida livre de eventos de 50 70% após 3 anos.. O pico de incidência ocorre na segunda década da vida, característica que sugere uma relação entre o rápido crescimento ósseo da adolescência e o desenvolvimento da neoplasia. Ainda, o conhecimento das bases genéticas é insuficiente. Estudos de citogenética clássica têm demonstrado que o OS caracteriza-se por exibir alta heterogeneidade cariotípica, incluindo altos graus de aneuploidia e rearranjos estruturais complexos. A técnica de CGH constitui uma ferramenta valiosa na analise do perfil genômico de tumores sólidos, e tem confirmado a complexidade das alterações cariotípicas em OS, descrita pela citogenética convencional. Não obstante, os estudos existentes são divergentes, e poucos têm estudado as informações obtidas por CGH em relação com a progressão tumoral. O objetivo do presente estudo foi identificar a presença de desequilíbrios cromossômicos em amostras de OS por meio da técnica de CGH. Os experimentos de CGH foram realizados de acordo com o descrito por Kallioniemi et al (1994). Foram analisadas nove amostras (3 biópsias, 5 ixressecções após quimioterapia e 1 metástase). O CGH detectou desequilíbrios cromossômicos em todas as amostras. Os ganhos foram mais freqüentes que as perdas. Muitas alterações cromossômicas foram observadas, especialmente ganhos nos cromossomos 1q, 2, 3p, 4, 5p, 6, 7, 8, 11p, 14q, 16, 21q e X; e perdas nos cromossomos 1p, 2q, 3q, 5q, 9q, 11q e 17q. As regiões mínimas de sobreposição mais freqüentes foram ganhos de 2p13-p14, 2q36-q37, 4q21 e 8p22, e perdas de 1p34.2, 3q22-q23 e 3q24. Três pacientes apresentaram amostras pareadas, e as alterações cromossômicas detectadas foram muito variadas, refletindo a heterogeneidade cromossômica intratumoral em cada caso. A mais alta divergência clonal entre as amostras pareadas foi observada entre a amostra de ressecção e a amostra metastática correspondente, mostrando a complexidade cromossômica adquirida durante a progressão e metastatização no caso descrito. Ainda são necessárias investigações adicionais, que contribuíam para a caracterização completa dos genes localizados nessas regiões. / Osteosarcoma (OS) is the most frequent aggressive bone malignancy affecting children and young adults with an event-free survival of 50-70% after 3 years. The incidence peak occurs during the second decade of life, suggesting a relationship between rapid bone growth and the development of this tumor. The knowledge of the genetic basis behind tumor progression is still limited. Conventional cytogenetic studies have demonstrated that OS exhibits high cariotipic heterogeneity, with different degrees of aneuploidy and complex structural rearrangements. The CGH is an important tool for studying the genomic profiles of solid tumors, and has confirmed the complexity of cariotipic alterations in OS. However, previous studies have shown divergent results and few have correlated them with tumor progression. The objective of present study was to identify chromosome unbalances in nine samples of OS by CGH. 3 biopsies, 5 resections before quimioterapy and 1 metastasis were analyzed. The experiments were performed accordingly with Kallioniemi et al (1994). CGH detected chromosomal imbalances in all samples. Gains were more frequent than losses. Many chromosomal alterations were observed, especially gains at 1q, xi2, 3p, 4, 5p, 6, 7, 8, 11p, 14q, 16, 21q and X; and losses at 1p, 2q, 3q, 5q, 9q, 11q and 17q. The minimal regions of superposition were gains of 2p13-p14, 2q36-q37, 4q21 and 8p22, and losses of 1p43.2, 3q22-q23 and 3q24. Three patients had consecutive samples, and the chromosomal alterations varied, reflecting the chromosomal heterogeneity for each case. The highest clonal divergence among the consecutive samples was observed between resection and the corresponding metastatic sample, showing the chromosomal complexity acquired during the progression and dissemination in this case. Additional investigations for the characterization of genes at these regions are necessary.

Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T09:25:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SiqueiraJunior_Sergio_D.pdf: 45553042 bytes, checksum: e8a175ee3eabcc8492c6fdbca5adf69a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Terrarana é atualmente o maior táxon da ordem Anura, possuindo cerca de 900 espécies. Recentemente, esse grupo de anuros foi alvo de uma série de modificações taxonômicas. Primeiramente essas espécies foram removidas da família Leptodactylidae e colocadas na sinonímia de Brachycephalidae, e mais tarde alocadas em um novo táxon chamado Terrarana. Atualmente as espécies deste grupo estão distribuídas nas famílias, Eleutherodactylidae, Craugastoridae, Strabomantidae e Brachycephalidae. Embora tenha sido bastante estudado, alguns dos relacionamentos inter- e intragenéricos permanecem não esclarecidos. Devido ao baixo número de espécies amostradas nos estudos filogenéticos, os clados da América do Sul, Strabomantidae e Brachycephalidae, são os grupos que têm as relações filogenéticas menos desvendadas. Neste trabalho foram realizados estudos citogenéticos e da ultra-estrutura dos espermatozóides de algumas espécies de Terrarana dos gêneros, Pristimantis, Ischnocnema, Barycholos, Haddadus e Brachycephalus. As metáfases foram obtidas por suspensão do epitélio intestinal e coradas com Giemsa ou submetidas a técnicas de impregnação por prata (Ag-NOR) e hibridação in situ (FISH) para a detecção das regiões organizadoras do nucléolo e bndamento-C, para a localização da heterocromatina. Os dados da ultra-estrutura dos espermatozóides foram analisados ao microscópio eletrônico de transmissão. As espécies estudadas foram Pristimantis fenestratus (Borba e Manaus, Reserva Florestal Adolfo Ducke, Amazonas e Rio Branco, Acre), P. dundeei (Chapada dos Guimarães, Rondonópolis e Aripuanã, Mato Grosso), P. crepitans (Chapada dos Guimarães e São Vicente, Cuiabá, Mato Grosso), Ischnocnema paulodutrai (Ilhéus, Bahia); I. juipoca (Atibaia e Campos do Jordão, São Paulo), I. guentheri e I. parva (Mogi das Cruzes, São Paulo), Brachycephalus ephippium (Mogi das Cruzes e Atibaia, São Paulo, Barycholos ternetzi (Uberlândia, Minas Gerais e Porto Nacional, Tocantins), e Haddadus binotatus (Mogi das Cruzes e Ilhabela, São Paulo). Os dados citogenéticos foram importantes na caracterização cromossômica das espécies P. fenestratus 2n=34 cromossomos, P. crepitans 2n=22, P. dundeei 2n=28 e I. paulodutrai 2n=30 e ainda B. ternetzi e I. juipoca 2n=22. Os dados citogenéticos revelaram diferenças no bandamento-C e Ag-NOR, sugerindo a existência de espécies ainda não descritas de Pristimantis nas localidades de Manaus, Rio Branco, e Aripuanã, e de Barycholos (Tocantins) identificadas incorretamente como P. fenestratus, P. dundeei e B. ternetzi. A análise citogenética indicou ainda que o baixo número cromossômico em P. crepitans é único dentro do gênero e sugere que esta a mesma não seja proximamente relacionada a espécies congenéricas. As similaridades cariotípicas entre I. paulodutrai e P. dundeei indicam que estas espécies podem ser proximamente relacionadas. Além disso, foi encontrado um caso incomum de variação intra-individual cromossômica no número fundamental de células somáticas de P. fenestratus, que pode estar relacionada com a segregação anômala de cromatides irmãs durante a mitose. A ultra-estrutura dos espermatozóides das espécies brasileiras de P. fenestratus, P. dundeei, P. crepitans, B. ternetzi, B. ephippiun, I. guentheri, I. parva, I. juipoca e H. binotatus revealaram diferenças na estrutura básica do acrossomo, peça intermediária e flagelo, apresentando características distintas dentro da família Brachycephalidae e subfamília trabomantinae, assim como dentro do gênero Pristimantis. Como característica marcante da ultra estrutura dos espermatozóides, observou-se a presença de um bastão paraxonemal em H. binotatus, B. ephippium, B. ternetzi e P. crepitans e a ausência desta estrutura em P. fenestratus, P. dundeei e todos os Ischnocnema amostrados. A divergência ultra-estrutural no bastão paraxonemal é coerente com dados recentes de filogenia molecular, que suportam transferência de H. binotatus do gênero Ischnocnema para um novo táxon e também agrupa as espécies I. guentheri, I. parva e I. juipoca em um mesmo clado. Além disso, a ultra-estructura dos espermatozóides indicou que B. ephippium não é proximamente relacionado as espécies de Ischnocnema, e que a taxonomia das espécie de Brachycephalidae deve ser reexaminada. As análises da ultra-estructura dos espermatozóides também corroboram os dados cromossômicos que indicam que P. crepitans estão erroneamente alocados no gênero Pristimantis e que as espécies I. paulodutrai e P. dundeei são proximamente relacionadas. Apesar do pequeno número de espécies amostradas, os dados citogenéticos e da ultra-estrutura dos espermatozóides de espécies das três famílias dos Terrarana do Brazil, apresentaram características inter- e intragenéricas não conservadas, levantamento de novos questionamentos e fortes evitências da existência de novas espécies. / Abstract: The Terrarana is the largest taxon of the Anura order, comprising 900 species. Recently this anuran group has undergone a series of taxonomical rearrangements. At first, these species were removed from the Leptodactylidae family and transferred to the synonymy of Brachycephalidae, and lately they were placed into a new taxon named Terrarana. Currently, the Terrarana species are distributed in the families, Eleutherodactylidae, Craugastoridae, Strabomantidae and Brachycephalidae. Despite being intensively studied, many aspects of their inter- and intrageneric relationships remain unclear. The South American Strabomantidae and Brachycephalidae are the least known clades regarding molecular phylogeny. In the present work, Brazilian Terrarana species of Pristimantis, Ischnocnema, Barycholos, Haddadus and Brachycephalus were studied by means of cytogenetical and sperm ultrastructural characteristics. Metaphases obtained from suspensions of intestinal epithelium were stained with Giemsa or submitted to silver staining (Ag- NOR) and fluorescence in situ hybridization (FISH) techniques, in order to detect the nucleolus organizing region, and to C-banding for heterochromatin localization. Sperm ultrastructure was analyzed by transmission electron microscopy. The studied species were P. fenestratus (Borba and Manaus at Reserva Florestal Adolfo Ducke, Amazonas, and Rio Branco, Acre), P. dundeei (Chapada dos Guimarães, Rondonópolis, and Aripuanã, Mato Grosso), P. crepitans (Chapada dos Guimarães and São Vicente, Cuiabá, Mato Grosso), Ischnocnema paulodutrai (Ilhéus, Bahia), I. juipoca (Atibaia and Campos do Jordão, São Paulo), I. guentheri and I. parva (Mogi das Cruzes, São Paulo), B. ephippium (Mogi das Cruzes and Atibaia, São Paulo), Barycholos ternetzi (Uberlândia, Minas Gerais, and Porto Nacional, Tocantins), and Haddadus binotatus (Mogi das Cruzes and Ilhabela, São Paulo). The cytogenetical analyses allowed chromosomal characterization of the species P. fenestratus 2n=34 chromosomes, P. crepitans 2n=22, P. dundeei 2n=28 and I. paulodutrai 2n=30, which have not been previously analyzed in phylogenetical studies, in addition to B. ternetzi and I. juipoca 2n=22. The data revealed differences in C-banding and Ag-NOR, which indicated the existence of not yet described Pristimantis species in the Manaus, Rio Branco, and Aripuanã localities, and of Barycholos (from Tocantins) uncorrectly identified as P. fenestratus, P. dundeei and B. ternetzi. The cytogenetical analysis also indicates that the low chromosome number in P. crepitans is unique within this genus and suggests that this species is not closely related to its congeneric species. The karyotypical similarities between I. paulodutrai and P. dundeei indicate that these species could be close relatives. Moreover, an unusual case of intra-individual chromosomal variation in the fundamental number of several somatic cells was found in the P. fenestratus species, which may be a consequence of anomalous segregation of sister chromatids during mitosis. The sperm ultrastructure of the Brazilian species P. fenestratus, P. dundeei, P. crepitans, B. ternetzi, B. ephippiun, I. guentheri, I. parva, I. juipoca and H. binotatus revealed differences in the basic structures of the acrosome, midpiece and flagellum, showing distinct characteristics within the family Brachycephalidae and subfamily Strabomantinae, as well as within the genus Pristimantis. The most remarkable sperm characteristic was an axonemal fiber in H. binotatus, B. ephippium, B. ternetzi and P. crepitans, which has not been observed in P. fenestratus, P. dundeei and in all of the analyzed Ischnocnema specimens. The ultrastructural divergence in the axonemal fiber is in accordance with recent molecular data, which supported the transfer of H. binotatus from the Ischnocnema genus to a new taxon and also grouped the species I. guentheri, I. parva and I. juipoca in a same clade. In addition, the sperm ultrastructure showed that B. ephippium is not closely related to the Ischnocnema species, and that the taxonomy of the Brachycephalidae species should be reexamined. Furthermore, the sperm ultrastructure analysis corroborated chromosomal data indicating that P. crepitans is misallocated in the Pristimantis genus and that the I. paulodutrai and P. dundeei species are close relatives. Despite the small number of studied species, the cytogenetical and ultrastructural data on sperm ultrastructure of the three Brazilian Terrarana families revealed inter- and intrageneric non-conservative characteristics that generate new taxonomic questions within this anuran group and provide strong evidence of the existence of undescribed species in this taxon. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural