Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3847.pdf: 8121609 bytes, checksum: d085371b9ccbfe0c2017a1ee27231b28 (MD5) Previous issue date: 2011-09-02 / Financiadora de Estudos e Projetos / Conventional and molecular cytogenetic analysis were performed on 15 species of the subfamily Hypostominae, comprising 12 species of the Hypostomini tribe, genus Hypostomus, and three of the Ancistrini tribe, genera Ancistrus and Hemiancistrus. The chromosome number of 2n=52 was observed for Ancistrus multispinis (14m+14sm+24st-a), A. brevipinnis (14m+14sm+24st-a) and Hemiancistrus punctulatus (14m+26sm+12st-a). The nucleolar organizer regions (Ag-NORs) and 18S rDNA sites are simple and terminal for species, A. brevipinnis, A. multispinis and H. punctulatus. In these species, it can be seen that the NORs are also CMA3+/DAPI-. As for the heterochromatin, H. punctulatus showed a small amount of this chromosome component, while A. multispinis and A. brevipinnis showed a larger amount, with large blocks on the long arm of some st-a pairs. In turn, the different species of Hypostomus showed a variation from 64 to 82 chromosomes, exhibiting differences in the karyotype formula between species. The NORs were multiple for most species analyzed, with different phenotypes observed in the number and position, which was also confirmed by FISH analysis, showing an interindividual and interspecific variability. In all species, the NORs were also CMA3+/DAPI _. The heterochromatin pattern distribution was different in each species, being another important chromosome marker. Cytogenetic, molecular, and morphometry analysis were performed in the species Hypostomus albopunctatus (Piracicaba river, SP) and H. heraldoi (Pirapitinga river, GO), including those morphologically similar samples present in the Mogi Guaçu river (SP). All individuals had 2n=74, whereas H. albopunctatus showed 10m+20sm+44st-a and H. heraldoi 8m+20sm+46st-a. These two karyotype formulae were found in the Mogi Guaçu river population. Distinct Ag-NOR phenotypes were observed among the three populations and confirmed by FISH. Regarding the heterochromatin pattern, H. albopunctatus presented terminal bands and an interstitial block. In H. heraldoi, the heterochromatin was found widely distributed in the terminal and interstitial regions of some st-a chromosomes. In these species, the NORs were also CMA3+/DAPI _. RAPD analysis and sequencing of the cytochrome oxidase subunit I (COI) gene were carried out in these two species, in the Mogi Guaçu population and in three more species, H. regani, H. margaritifer, and H. hermanni, obtaining the same dendrogram pattern. All species could be differentiated by their COI sequences, resulting in a total of 16 haplotypes. These analyses, combined with the morphometric data, showed that H. heraldoi and H. albopunctatus are two valid species and the specimens from the Mogi Guaçu river still retain some characteristics of H. albopunctatus, and were provisionally designated as Hypostomus aff. albopunctatus. Due to the large number of species currently included in the Hypostomus genus, along with both the intra and interspecific variability in morphology and color pattern, there are often problems in the taxonomy of this group, which can be assisted by cytogenetic data. This study provided new chromosomal data for Loricariidae, being a valuable cytotaxonomic tool for the Hypostomini tribe. The joint analysis of different characters, such as cytogenetic, molecular, and morphometric, allowed a more precise characterization of different populations of Hypostomus species, helping to clarify their validity as distinct evolutionary units. / Análises citogenéticas convencionais e moleculares foram realizadas em 15 espécies da subfamília Hypostominae, compreendendo 12 espécies da tribo Hypostomini, gênero Hypostomus e três da tribo Ancistrini, gêneros Ancistrus e Hemiancistrus. Foi observado 2n=52 para Ancistrus multispinis (14m+14sm+24st-a), A. brevipinnis (14m+14sm+24st-a) e Hemiancistrus punctulatus (14m+26sm+12st-a). As regiões organizadoras de nucléolos (Ag- RONs) e sítios de DNAr 18S são simples e terminais para as espécies A. brevipinnis, A. multispinis e H. punctulatus. Nestas epécies pode-se constatar que as RONs são também CMA3 +/DAPI-. Quanto à heterocromatina, H. punctulatus apresentou pouca quantidade desse componente cromossômico, enquanto que A. multispinis e A. brevipinnis evidenciaram uma maior quantidade, com grandes blocos no braço longo de alguns pares st-a. Por sua vez, as diferentes espécies de Hypostomus mostraram uma variação de 64 a 82 cromossomos, com diferença na fórmula cariotípica entre as espécies. As RONs foram múltiplas para a maioria das espécies analisadas, sendo observados diferentes fenótipos quanto ao número e posição, o que foi também confirmado pela análise de FISH, evidenciando uma variabilidade interindividual e interespecífica. Em todas as espécies as RONs mostraram-se também CMA3 +/DAPI _. O padrão de distribuição da heterocromatina foi diferente em cada espécie, sendo outro importante marcador cromossômico. Análises citogenéticas, moleculares e de morfometria foram realizadas nas espécies Hypostomus albopunctatus (rio Piracicaba, SP) e H. heraldoi (rio Pirapitinga, GO), assim como em exemplares morfologicamente semelhantes presentes no rio Mogi Guaçu (SP). Todos os indivíduos apresentaram 2n=74, sendo que, H. albopunctatus apresentou 10m+20sm+44st-a e H. heraldoi 8m+20sm+46st-a. As duas fórmulas cariotípicas foram encontradas na população do rio Mogi Guaçu. Fenótipos distintos de Ag-RONs foram observados entre as três populações, confirmadas pela FISH. Quanto ao padrão heterocromático, H. albopunctatus apresentou bandas terminais e um bloco intersticial. Em H. heraldoi, a heterocromatina encontrou-se mais amplamente distribuída, nas regiões terminais e intersticiais de alguns cromossomos st-a. Nessas espécies as RONs mostraram-se também CMA3 +/DAPI _. Análises de RAPD e sequenciamento do gene de Citocromo Oxidase subunidade I (COI) foram realizadas nessas duas espécies, na população do rio Mogi Guacu e em mais três espécies, H. regani, H. margaritifer e H. hermanni, obtendo-se o mesmo padrão de dendrograma. Todas as espécies puderam ser diferenciadas por suas sequências COI, resultando num total de 16 haplótipos. Estas análises, aliadas aos dados de morfometria, evidenciaram que H. heraldoi e H. albopunctatus são duas espécies válidas e que os exemplares do rio Mogi Guaçu ainda conservam algumas características de H. albopunctatus, sendo provisoriamente denominados como Hypostomus aff. albopunctatus. Devido ao elevado número de espécies atualmente incluídas no gênero Hypostomus, juntamente com a variabilidade na morfologia e padrão de coloração tanto intra quanto interespecífica, muitas vezes ocorrem problemas na taxonomia desse grupo, a qual pode ser auxiliada pelos dados citogenéticos. Este estudo forneceu novos dados cromossômicos para os Loricariidae, mostrando-se uma boa ferramenta citotaxonômica para a tribo Hypostomini. A análise conjunta de diferentes caracteres, como citogenéticos, moleculares e morfométricos, possibilitou uma caracterização mais precisa de diferentes populações de espécies de Hypostomus, contribuindo para esclarecer sua validade como unidades evolutivas distintas.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3975.pdf: 4250945 bytes, checksum: 40cecfa3a5e38f792b24e8eaa613b421 (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / Universidade Federal de Sao Carlos / At the beginnig of the 60 was concluded the building of the Furnas dam over the Rio Grande, wich belongs to Parana river watershed. When the gates of the hydroelectric were closed, a dike was built to contain the waters of the dam, in order to prevent the flooding of the city of Capitólio MG. However, this dike has dammed the river Piumhi, which, at that time, was an affluent of the Rio Grande. The Piumhi River was then diverted to São Francisco watershed. The present work aimed to characterizing, based on classic and molecular cytogenetic, some species of Siluriforms, actually found in the region of the transposition channel of the Piumhi River, to verify the occurrence of possible interrelationships between faunas of different watersheds, also realizing cytotaxonomic analysis. Were analysed the following species: Imparfinis schubarti with 18m + 34sm + 6st and RON simple interstitial, Cetopsorhamdia iheringi with 28m + 26sm + 4st and RON simple interstitial, Pimelodella vittata with 16m + 22sm + 8st and RON simple terminal, Rhamdia sp. A aff. R. quelen with 26m + 16sm + 14st + 2a and RON simple terminal, Rhamdia sp. B aff. R. quelen with 28m + 20sm + 10st and RON simple interstitial, Rhamdiopsis sp. cf. R. microcephala 12m + 30sm + 14st and RON simple interstitial, Trichomycterus brasiliensis with 34m + 18sm + 2sm and RON simple interstitial, Pimelodus pohli with 28m + 16sm + 10st +2a with RON simple terminal and Parauchenipterus galeatus with 26m + 16sm + 14st + 8a. Classical and molecular cytogenetic data (rDNA 18S e 5S) obtained to the species Imparfinis schubarti, Cetopsorhamdia iheringi, Pimelodella vittata, Rhamdia sp. A aff. R. quelen, Rhamdia sp. B aff. R. quelen and Rhamdiopsis sp. cf. R. microcephala, in comparative analysis with other results available in literature, corroborates with the traditional taxonomic literature of Heptapteridae family, including the formation of subclade Nemuroglanis. The results led to considerations about aspects of the taxonomic species, as well as possible relations of these with the transposition of the river Piumhi. / No início dos anos 60 foi concluída a construção da represa de Furnas sobre o rio Grande, bacia do rio Paraná. Quando as comportas da usina hidrelétrica foram fechadas, um dique foi construído para conter as águas da represa, a fim de evitar o alagamento da cidade de Capitólio (MG). Entretanto, esse dique represou as águas do rio Piumhi que, naquela época, era um dos afluentes do rio Grande. O rio Piumhi foi então desviado para a bacia do rio São Francisco. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar, com base na citogenética clássica e molecular, algumas espécies de Siluriformes atualmente encontradas na região do canal de transposição do rio Piumhi, com o intuito de verificar a ocorrência de possíveis inter-relações entre faunas de bacias distintas, além de realizar analises citotaxonômicas. Foram analisadas as espécies: Imparfinis schubarti com 18m + 34 sm + 6st e RON simples intersticial, Cetopsorhamdia iheringi com 28m + 26sm + 4st e RON simples intersticial, Pimelodella vittata com 16m + 22sm + 8st e RON simples terminal, Rhamdia sp. A aff. R. quelen com 26m + 16sm + 14st + 2a e RON simples terminal, Rhamdia sp. B aff. R. quelen com 28m + 20sm + 10st e RON simples intersticial, Rhamdiopsis sp. cf. R. microcephala 12m + 30sm + 14st e RON simples instersticial, Trichomycterus brasiliensis com 34m + 18sm + 2sm e RON simples instersticial , Pimelodus pohli com 28m + 16sm + 10st + 2a com RON simples terminal e Parauchenipterus galeatus com 26m + 16sm + 14st + 8a. Os dados citogenéticos clássicos e moleculares (rDNA 18S e 5S) obtidos para as espécies Imparfinis schubarti, Cetopsorhamdia iheringi, Pimelodella vittata, Rhamdia sp. A aff. R. quelen, Rhamdia sp. B aff. R. quelen e Rhamdiopsis sp. cf. R. microcephala, em análise comparativa com outras resultados disponíveis na literatura, corroboram com a literatura taxonômica tradicional da família Heptapteridae, inclusive com a formação do subclado Nemuroglanis. Os resultados obtidos permitiram tecer considerações sobre aspectos taxonômicos das espécies estudadas, bem como as possíveis relações destas com a transposição do rio Piumhi.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 638342 bytes, checksum: 8e72262147ec2f82c5e75db8ecf80969 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Somatic embryogenesis is an alternative technique of clonal micropropagation in Carica papaya, taking into account the problems generated by the conventional seed propagation and the absence of an effective method for early sex determination of this trioecious species. Considering the interest in large-scale seedlings production of papaya, liquid system and the use of immature zygotic embryos as explant source have proved to be more efficient for the somatic embryos generation in quickly way and in relatively high amount. However, tissue culture techniques are frequently associated with somaclonal variation ocorrence. Therefore, detection and selection of somaclones become necessary, and different methodologies have been employed for this purpose. In this perspective, this study adapted a protocol for mass production of somatic embryos in liquid medium and adopted cytometry and cytogenetics strategies for monitoring somaclonal variation in papaya. Firstly, immature zygotic embryos, which show a high embryogenic potential, were cultured in semi-solid médium, in the presence of 2,4-D, for friable embryogenic callus induction. The transfering of these callus to a liquid system, under the 2,4-D and BAP regulators action, allowed the increase of the cell aggregates proliferation. This auxin and cytokinin ratio was ideal for allowing only cell proliferation rather than differentiation of the suspensions in somatic embryos. These were converted and matured after inoculation of aggregates in liquid medium supplemented with ABA. In this condition, somatic embryos suspensions were obtained, in the early heart, torpedo, pre-cotyledonary and cotyledonary stages. Direct somatic embryogenesis, without callus formation, was also observed from the primary somatic embryos. Cotyledonary embryos were extracted and germinated on semi-solid medium containing GA3. About 80% of plantlets were regenerated and subjected to in vitro acclimatization. The potential of the flow cytometry technique could be demonstrated by verifying the ploidy level of regenerants and, thus, the evaluation of somaclonal variation occurrence. In this screening, diploid (88%), tetraploid (6%) and aneuploid (6%) seedlings were detected. For cytogenetic methodology, known diploid seedlings had their karyograms assembled, in which it did not observe any numerical or structural change. The association of flow cytometry and cytogenetics methodologies has proven effective for somaclonal variants characterization and the interest diploid seedlings selection for clonal propagation. Mainly, flow cytometry can be considered a viable technique for commercial purposes. / A embriogênese somática é uma técnica alternativa de micropropagação clonal em Carica papaya, tendo em vista os problemas gerados pela propagação convencional, via seminífera, e a ausência de um método eficaz para determinação sexual precoce dessa espécie trióica. Considerando o interesse pela produção em larga escala de plântulas do mamoeiro, o sistema líquido e o uso de embriões zigóticos imaturos como fonte de explante têm se mostrado mais eficientes para a geração de embriões somáticos de forma rápida e em quantidade relativamente elevada. Entretanto, técnicas de cultura de tecidos estão, frequentemente, associadas com a ocorrência de variação somaclonal. Portanto, a detecção e a eliminação de somaclones tornam-se necessárias, e diferentes metodologias têm sido empregadas para tal fim. Nesta perspectiva, este estudo adaptou um protocolo para produção em massa de embriões somáticos em meio líquido e adotou estratégias citométricas e citogenéticas para o monitoramento de variação somaclonal, em mamoeiro. Inicialmente, embriões zigóticos imaturos, que apresentam alto potencial embriogênico, foram cultivados em meio semi-sólido, na presença de 2,4-D, para indução de calos embriogênicos friáveis. A transferência desses calos para um sistema líquido, sob a ação dos reguladores 2,4-D e BAP, possibilitou a ampliação da proliferação de agregados celulares. Esta combinação de auxina e citocinina foi ideal por possibilitar somente a proliferação celular e não a diferenciação das suspensões em embriões somáticos. A conversão e a maturação destes ocorreram após a inoculação dos agregados em meio líquido suplementado com ABA. Nesta condição, foram obtidas suspensões de embriões somáticos, nos estágios cordiforme, torpedo, pré-cotiledonar e cotiledonar. Embriogênese somática direta, sem a formação de calos, também foi observada a partir dos embriões somáticos primários. Embriões no estágio cotiledonar foram extraídos e germinados em meio semi-sólido contendo GA3. Cerca de 80% de plântulas foram regeneradas e submetidas à aclimatização in vitro. A potencialidade da técnica de citometria de fluxo pôde ser demonstrada pela verificação do nível de ploidia dos regenerantes e, consequentemente, pela avaliação da ocorrência de variação somaclonal. Neste escaneamento, foram detectadas plântulas diplóides (88%), tetraplóides (6%) e aneuplóides (6%). Pela metodologia citogenética, plântulas conhecidamente diplóides tiveram seus cariogramas montados, nos quais não foi observada nenhuma alteração numérica ou estrutural. A associação de metodologias citométricas de fluxo e citogenéticas se mostrou eficaz para a caracterização de variantes somaclonais e para a seleção das plântulas diplóides de interesse para a propagação clonal. Principalmente, a citometria de fluxo pode ser considerada uma técnica viável para fins comerciais.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 852162 bytes, checksum: 18350a1fa68989163ff6494b7784f27a (MD5) Previous issue date: 2012-07-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Fragile X syndrome is the most common inherited cause of intellectual disability with an estimated prevalence of 1 in 3600 males and 1 in 4000 to 6000 females, where it causes moderate to severe intellectual and social impairment together with syndromic features including large ears and head, long face and macroorchidism. It is most often is caused by expansion of a CGG trinucleotide repeat array in the 5' UT region of the FMR-1 gene at Xq27.3. This locus corresponds to a fragile site which can be observed in the metaphase chromosome following selective culture conditions. In this study we analyze two brothers with clinical indicative of fragile X syndrome. Peripheral blood lymphocytes were studied after 96 hrs culture periods at 37°C in RPMI 1640 (supplemented with 5% fetal serum bovine, 20 mM HEPES, 2mM glutamine and 1% M-PHA), LymphoGrow® and PB-MAX®. Two bottles for each medium was prepared for cultures with antagonists, and in each one 0,25 μg/mL fluorodeoxyuridine (FUdR) or 8 μg/mL methotrexate (Mtx) were added 72 hrs after the start of culture. Cultures were harvested after 95 hrs and 45 minutes using standard methods following exposure to 0,1 μg/mL colcemid for 15 minutes. Slides were stained with Giemsa 5% for fra(X) screening and G banding was employed for confirmation of the Xq27.3 fragile site. Lymphocytes growing in RPMI 1640, LymphoGrow and PB-MAX responded equivalently to the addition of antagonists. According to the F test at the level of 5% probability, there were no significant differences between the average number of metaphases in the three mediums in combination with FUdR. Similarly, in the three mediums methotrexate treatment was very toxic and resulted in insufficient number of analyzable cells. No fra(X) were detected in the cultures with this treatment. A total of 208 metaphases for brother 1 and 205 for brother 2 were scanned of which 21% and 20%, respectively, were positive for fra(X). These results of fragile X expression in brothers are in agreement with the estimate expression in affected males ranging from 10-40% and corroborate those of other studies which reported that men of the same family tend to have similar frequencies of fra(X). The procedures for induction of fragile site and cytogenetic analysis showed to be adequate in order to identify the presence of FRAXA in the analyzed brothers with clinical suspicion of fragile X syndrome. / A Síndrome do X frágil é a principal causa de retardo mental hereditário com prevalência estimada de 1 em cada 3600 homens e 1 em cada 4000 a 6000 mulheres. Essa síndrome provoca comprometimento intelectual e social moderado a severo, associado com características como cabeça e orelhas grandes, rosto alongado e macroorquidismo. A causa mais frequente dessa desordem é a expansão do trinucleotídeo CGG localizado na região 5' UT do gene FMR-1, em Xq27.3. Esse loco corresponde a um sítio frágil que pode ser visualizado em cromossomos metafásicos sob condições seletivas de cultura. Neste estudo analisamos dois irmãos com indicativo clínico da Síndrome do X frágil. Linfócitos oriundos de sangue periférico foram avaliados após 96 h de cultura a 37°C em meio RPMI 1640 (suplementado com 5% de FBS, 20 mM de HEPES, 2 mM de glutamina e 1% M-PHA), LymphoGrow® e PB-MAX®. Para as culturas com antagonista, dois tubos de cada meio disponível foram preparados, e em cada um, 0,25 μg/mL de fluorodeoxiuridina (FUdR) ou 8 μg/mL de metotrexato (Mtx) foram adicionados 72 h após o início da cultura. As culturas foram colhidas após 95 h e 45 min utilizando-se métodos de rotina, após exposição a 0,1 μg/mL de colcemide durante 15 min. As lâminas foram coradas com Giemsa 5% para rastreamento de cromossomos fra(X), e a técnica de bandeamento G foi empregada para a confirmação do sítio frágil na região Xq27.3. Os linfócitos cultivados nos meios RPMI 1640, LymphoGrow e PB-MAX responderam de forma equivalente à adição dos antagonistas. Não houve diferença significativa pelo teste F a 5% de probabilidade entre o número médio de metáfases observado nos três meios em combinação com FUdR. Do mesmo modo, nos três meios o tratamento com metotrexato foi muito tóxico e resultou em número insuficiente de células analisáveis. Nessas culturas com Mtx não foram detectados cromossomos fra(X). Um total de 208 metáfases para irmão 1 e 205 para o irmão 2 foram analisadas, das quais 21% e 20%, respectivamente, foram positivas para X frágil. Esses dados estão de acordo com a estimativa de expressão em homens afetados que varia de 10-40% e corroboram com os de outros estudos que reportaram que homens da mesma família tendem a apresentar frequências similares de fra(X). Os procedimentos para a indução de sítio frágil e análise citogenética mostraram-se adequados para identificação de FRAXA nos irmãos analisados com indicativo clínico da Síndrome do X frágil.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CHAPTER II: Pequi, Caryocar brasiliense, is one of the species of highlight at the biome of the Brazilian savannah due to its utilization in culinary, popular medicine, industry in general, and iron and steel industry. It presents an elevated index of exploration, being capable of entering the list of the endangered species. In the region of São José do Xingu (MT), a tree of pequi without thorn at the mesocarp was found and this enables to improve pequi not only for consumption, taking advantage of the high appreciation it already has. To detect the existing genomic differences between the pequi with and without the thorn at the endocarp, RADP markers were utilized. The generated polymorphisms were cloned and sequenced in order to identify the sequences responsible for the fenotypical alteration. It was observed that the pequi without thorn is genetically isolated from the other populations of pequi with thorn at the endocarp, proving that this characteristic is related to the genetic divergence of the species. Analysis in BLASTn evidenced the similarity of the Dof1 genes of Zea mays, in the population with thorn, and in the population without thorn, with the gene of phosphinotricin acetyl transferase of Z. mays. In the analysis of BLASTx, the similarity was verified with the proteins responsible for the deficiency in ferric reductase 4, in the pequi without thorn and catalase, in the pequi without thorn. CHAPTER III:The pequi, Cayocar brasiliense Cambess. Is a feature of Brazilian cerrado plant suffering extractive action, mainly for food. It is a plant very appreciated in the regions of Minas Gerais, especially in the north of this state. In the region of Sao Jose do Xingu, Mato Grosso, was found in a plant which had no thorns in the core and this allowed further research to discover the lack of thorns as it is an unwanted feature of the plant. Thus, the cytogenetic study, using conventional Giemsa staining, NOR, banda C, DAPI and CMA3 were used for comparison between the pequi with and without spines in the putamen. It was found that these differences are not attributed to chromosomal differences between the two types of pequi. Both have the same chromosome number, the marking of NOR, C banding was not verified due to the size of chromosomes and differences in staining with DAPI and CMA3 could not be verified although related to these characteristics. CHAPTER IV: The pequi is a species that is gathered and today is seen as a source for the production of biodiesel. The objective of this study was to identify sequences from a cDNA library that are involved in the metabolic pathways for production of pequi fruit, to gain a better understanding of the species and its biological and genetic properties. To do so, a cDNA library was created and the clones were cloned and sequenced. These identified sequences were deposited in GenBank. Most of the sequences found are associated with protection against oxidative stress in plants, some are transcription factors and others provide structural and pathogenic resistance. / CAPÍTULO II: O pequi, Caryocar brasiliense, é uma das espécies de destaque no bioma do Cerrado devido a sua utilização na culinária, medicina popular, indústria e siderurgia. Apresenta índice de exploração elevado, podendo entrar na lista das espécies ameaçadas de extinção. Na região de São José do Xingu (MT) foi encontrada uma árvore produzindo pequi sem espinho no endocarpo, o que levantou a possibilidade de melhorar o pequi para consumo aproveitando a alta apreciação que já possui. Com o objetivo de analisar as diferenças genômicas entre o pequi com e o sem espinho no endocarpo, utilizou-se marcadores RADP (Random Amplified Polymorphism DNA). As bandas polimórficas geradas foram isoladas, clonadas e seqüenciadas, buscando identificar sequências responsáveis pela alteração fenotípica. Observou-se que o pequi sem espinho fica isolado geneticamente das demais populações de pequi com espinho no caroço, comprovando que essa característica está relacionada à divergência genética da espécie. Análises em BLASTn mostraram a similaridade aos genes Dof1 de Zea mays, na população com espinho e com o gene da Acetiltransferase Fosfinotricina de Z. mays, na população sem espinho. As análises em BLASTx revelaram similaridade com as proteínas responsáveis pela Deficiência em Redutase Férrica 4, no pequi sem espinho e com catalase, no pequi com espinho. CAPÍTULO III: O pequizeiro, Cayocar brasiliense Cambess., é uma planta característica do cerrado brasileiro que sofre ação extrativista, principalmente, para a alimentação. É uma planta bastante apreciada em regiões de Minas Gerais, especialmente no Norte desse estado. Na região de São José do Xingu, Mato Grosso, foi encontrada uma planta produzindo pequi sem espinhos no caroço. O estudo citogenético, por meio de coloração convencional de Giemsa, NOR, banda C, DAPI e CMA3 foi utilizado para a comparação entre plantas produtoras de pequi com e sem espinhos no caroço. Verificou-se que essas diferenças não podem ser atribuídas à diferenças cromossômicas entre os dois tipos de pequi. Ambas as plantas têm o mesmo número cromossômico, mesma marcação de NOR. Não foi verificado bandeamento C devido ao tamanho dos cromossomos. Diferenças de coloração com DAPI e CMA3 foram detectadas, porém não é possível afirmar que estejam relacionadas com a presença ou ausência de espinhos no fruto. CAPÍTULO IV: O pequizeiro (Caryocar brasiliense Cambess.) é uma espécie nativa do cerrado brasilieiro e que possui importância alimentar e social para a população que dela depende. É uma espécie que sofre ação extrativista e que, atualmente, é considerada fonte para a produção de biodiesel. Nesse trabalho o objetivo foi identificar, a partir de uma bilbioteca de cDNA, seqüências que estejam envolvidas em vias metabólicas para produção do fruto do pequi, para conhecimento da espécie, suas propriedades biológicas e genéticas. Dessa forma foi construída biblioteca de cDNA e os clones foram clonados e seqüenciados. As sequências identificadas foram depositadas no GenBank. Algumas das sequências encontradas estão relacionadas à proteção contra o estresse oxidativo em plantas, outras são fatores de transcrição e algumas sequências expressas têm funções estruturais e de resistência a patógenos. / Doutor em Genética e Bioquímica

A leucemia mielóide aguda ainda apresenta altos índices de mortalidade em adultos, exceção feita à leucemia promielocítica. A otimização dos protocolos de tratamento tem sido muito discutida há 3 décadas, com resultados ainda insatisfatórios. Fatores prognósticos como idade, cariótipo e tolerância à consolidação com altas doses de citarabina guardam relação com a melhor sobrevida. Com o objetivo de avaliar diferentes protocolos de tratamento e validar estes e outros fatores prognósticos, conduzimos um estudo retrospectivo no Hospital das Clínicas da Universidade de São Paulo, analisando prontuários médicos e os eventos relacionados à leucemia mielóide aguda, de 1978 a 2007. Analisamos 400 pacientes tratados curativamente e achamos que idade abaixo de 60 anos (27% vs 7%), cariótipo favorável (53% vs 28% vs 5%) e administração de doses totais de citarabina, principalmente se acima da mediana de 45,45 gramas (68% vs 44% vs 21%) tem impacto positivo na sobrevida global em 5 anos, sendo o uso de altas doses de citarabina um fator independente. A positividade para mieloproxidase, classificação FAB e protocolo de tratamento não mostraram associação estatisticamente significante para melhores índices de sobrevida. Pudemos concluir que, se os protocolos de indução não apresentam diferenças estatísticas, a consolidação intensiva com altas doses de citarabina em pacientes abaixo de 60 anos tem impacto independente na sobrevida global, com resultados ainda melhores quando a dose total é maior ou igual a 45,45 gramas. O cariótipo também foi validado em nossa população / Acute myeloid leukemia in adults is still a highly fatal disease, except for acute promyelocitic leukemia. The optimization of treatment protocols has been debated for three decades, without satisfactory results. Prognostic factors like age, kariotype and consolidation with cytarabine in high dosis seem to correlact with a better overall survival. We conducted a retrospective study in the General Hospital of University of Sao Paulo analyzing medical records and acute myeloid leukemia outcomes to compare different treatment protocols used through 1978 to 2007. We also intended to validate international prognostic factors as the ones cited in our population. We analyzed 400 patients treated with curative intention and found better overall survival in 5 years regarding age less than 60 years (27% vs 7%), favorable karyotipe (53% vs 28% vs 5%) and high dosis cytarabine in consolidation, meanly if total dose was at least the median of 45,45 g (68% vs 44% vs 21%). Consolidation with high dosis cytarabine was an independent predictor of better overall survival. No estatistical differences were seen regarding myeloperoxidase positivity, induction protocol and FAB classification. We concluded that, if the induction protocols seem to be no different in results, consolidation with high dosis cytarabine for patients under 60 years has impact in overall survival, being even better when the total dosis is at least 45,45 g. Karyotipe has also been validated in our study population

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The genus Leptodactylus has wide distribution and it can be found in many physiographic and climatic zones. This fact has raised questions about the taxonomy of this genus because many species that are considered of great geographic distribution has shown to be two or more closely related. The species Leptodactylus fuscus and Leptodactylus latrans, both widely spread, are found in the state of Sergipe in the Caatinga biome and little is known about the ecology, biology and diversity between and within populations that occupy this exclusively Brazilian biome. Therefore, the present study aimed to characterize the species L. fuscus and L. latrans, which occur in different fragments of Caatinga from the state of Sergipe, using cytogenetic and morphometric data. The karyotypes of populations from the municipalities of Carira, Poço Redondo and Tobias Barreto were analyzed by conventional staining techniques, C-band and Ag-RON. The species showed similar cytogenetic patterns, without evidence of species-specific markers; however some variations in morphology and bands were observed when compared to the karyotypes described in the literature. In morphometric analysis, 21 different characters were analyzed in the two species in each location, showing that populations of L. fuscus presented no significant differences between them; however variations were found in samples of L. latrans, mainly on the size of the specimens. The analyzed data showed that there were no cytogenetic and morphometric differences within the L. fuscus populations and that the morphometric variations observed in L. latrans may be due to environmental effects. / O gênero Leptodactylus tem ampla distribuição geográfica e está presente nas mais diversas zonas climáticas e fisiográficas. Esse fato tem levantado questionamentos de caráter taxonômico, pois muitas espécies consideradas de grande distribuição geográfica têm mostrado tratar-se de duas ou mais espécies estreitamente relacionadas. As espécies Leptodactylus fuscus e Leptodactylus latrans, ambas de ampla distribuição, são encontradas no Estado de Sergipe no bioma Caatinga e pouco se conhece sobre a ecologia, biologia e diversidade inter e intrapopulacional em populações que ocupam este bioma exclusivamente brasileiro. Nesse sentido, o presente estudo teve como objetivos caracterizar através de dados citogenéticos e morfométricos as espécies L. fuscus e L. latrans de ocorrência em diferentes fragmentos de Caatinga do Estado de Sergipe. Os cariótipos das populações dos municípios de Carira, Poço Redondo e Tobias Barreto foram analisados, por meio de técnicas de coloração convencional, Banda C e Ag-RON. Os exemplares estudados apresentaram padrões citogenéticos bastante similares, sem evidências de marcadores espécie-específicos; porém, algumas variações de morfologia e bandas foram observadas quando comparadas aos cariótipos já descritos na literatura. Nas análises morfométricas, 21 caracteres foram analisados nas duas espécies, em cada uma das localidades, mostrando que as populações de L. fuscus não apresentaram diferenças significativas entre elas; contudo variações foram encontradas nas amostras de L. latrans, principalmente quanto ao tamanho dos espécimes coletados. Os dados analisados conjuntamente mostram que populações de L. fuscus não diferem citogenética e morfometricamente entre si e as variações morfométricas observadas em L. latrans podem ser devidas aos efeitos ambientais.

Orientador: Eliana Regina Forni Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:44:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferrari_Fernanda_M.pdf: 4024604 bytes, checksum: fadaeedca82d057b615fd5bfb85b4706 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A cana-de-açúcar assumiu grande importância no cenário econômico mundial, não só pela produção de açúcar, mas também de etanol. Variedades modernas de cana-de-açúcar são essencialmente derivadas de hibridações feitas no início do século XX entre duas spécies de Saccharum, S. officinarum (2n = 80) e S. spontaneum (2n = 40-128), seguidas de retrocruzamentos dos híbridos com S. officinarum. Devido à poliploidia natural do gênero e a aneuploidia das variedades híbridas o estudo citogenético em cana-de-açúcar é complexo. O advento da citogenética molecular, mediante a técnica de hibridização de DNA in situ (FISH e GISH), vem propiciando avanços no entendimento da organização genômica de Saccharum e de gêneros relacionados. O objetivo deste trabalho foi realizar análises cromossômicas, de número e sítios de rDNA, nas duas principais espécies do gênero, S. officinarum e S. spontaneum, e em mais três importantes variedades brasileiras, RB72454, RB835486 e RB867515. Foi possível confirmar as identidades das espécies S. officinarum (2n = 80) e S. spontaneum (2n = 64) mediante a contagem do número cromossômico. Foram caracterizados, pela primeira vez, os números cromossômicos das variedades RB72454 e RB835486 (2n = 112) e na RB867515 (2n = 110). Através de técnicas de hibridização in situ fluorescente foram quantificados os sítios de rDNA 45S e 5S. As espécies S. officinarum e S. spontaneum, conforme já descrito na literatura, apresentaram 8 sítios de cada locus. As variedades RB72454 e RB835486 apresentaram 12 sítios de cada locus e a variedade RB867515 apresentou 11 sítios do rDNA 45S e 9 sítios do rDNA 5S. Os loci de rDNA 45S e 5S encontram-se em grupos homó(eó)logos distintos e por isso, esses dois genes caracterizam-se dois marcadores cromossômicos em Saccharum spp. A localização do locus de rDNA 45S em posição distinta nos cromossomos de S. officinarum (terminais) e S. spontaneum (intersticiais), possibilitou a quantificação da contribuição dessas espécies, no respectivo grupo homeólogo, para as variedades RB72454 e RB867515 / Abstract: Sugarcane has assumed an eminent position in the world economical scenario, not only for sugar, but also for ethanol production. Current sugarcane varieties are hybrids from initial interspecific crosses involving mainly two species of Saccharum, S. officinarum (2n = 80) and S. spontaneum (2n = 40-128), followed by backcrossing with S. officinarum. Due to the polyploidy nature of the genus Saccharum and the aneuploidy occurring in the interspecific hybrids, the cytogenetic study of sugarcane is complex. Moreover, chromosomes are small and morphologically similar. The molecular cytogenetics, with technique of DNA in situ hybridization (GISH and FISH), has provided advances in the understanding of genomic organization of this crop. The goal of this study was to realize chromosomal analysis, including chromosome number and sites of rDNA of two species, S. officinarum and S. spontaneum, and of three Brazilian varieties, RB72454, RB835486 and RB867515. The identities of the species S. officinarum (2n = 80) and S. spontaneum (2n = 64) were confirmed counting their chromosome numbers. We also counted the chromosome numbers of the varieties RB72454 and RB835486 (2n = 112) and RB867515 (2n = 110). Using FISH techniques, we could quantify the rDNA 45S and 5S sites of all the accesses. S. officinarum and S. spontaneum, as described in the literature, had 8 sites at each locus. For the varieties RB72454 and RB835486, 12 sites at each locus were detected and for RB867515, 11 sites of rDNA 45S and 9 sites of rDNA 5S were detected. The loci rDNA 45S and 5S are in different homo(eo)logues groups being thus characterized as two chromosomal markers for Saccharum spp. Since the rDNA 45S is located in different positions in S. officinarum (terminals) and S. spontaneum (interstitial), this marker could be applied in the quantification, in this homeologue group, of the chromosome numbers inherited from S. officinarum and S. spontaneum by the varieties RB72454, RB867515 / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Biologia Vegetal

Estudos de citogenética comparativa são rotineiramente desenvolvidos a partir da comparação dos padrões de bandamentos cromossômicos. Contudo, quando se trata de espécies que apresentam genomas altamente rearranjados, como no caso das espécies de Akodon, ou que são muito divergentes, a comparação de cromossomos por padrões de bandas torna-se inadequada. Como consequência, a pintura cromossômica tem se tornado o método de escolha assertivo, já que permite comparação genômica no nível citogenético. Nessa tecnologia sondas de um cromossomo inteiro de uma determinada espécie são hibridadas in situ em cromossomos de outra espécie, detectando as regiões homólogas entre os genomas. No presente estudo comparamos os cariótipos altamente diferenciados de algumas espécies de Akodon por meio de pintura cromossômica recíproca com uso de sondas espécie-específicas, obtidas a partir de cromossomos separados por citometria de fluxo. Os resultados revelaram homologia completa entre os complementos de Akodon sp. n. (ASP), 2n=10, A. cursor (ACU), 2n=15, A. montensis (AMO), 2n=24 e A. paranaensis (APA), 2n=44 e evidenciaram com precisão muitos rearranjos cromossômicos entre os complementos das espécies. Rearranjos Robertsonianos e em tandem, inversões pericêntricas e/ou reposicionamento de centrômero, inversão paracêntrica, translocações, inserções e existência de sítios frágeis nos complementos foram observados. A pintura cromossômica empregando o conjunto de sondas de APA para 21 autossomos mais cromossomos X e Y evidenciou oito segmentos sintênicos compartilhados entre A. montensis, A. cursor e Akodon sp. n., cinco associações exclusivas para A. cursor e seis para Akodon sp. n. Foi também detectada homologia completa dos cromossomos X, com exceção da região heterocromática de ASP X, e até mesmo dos cromossomos Y que geralmente não apresenta sinal hibridação entre diferentes espécies de mamíferos. Esses dados indicam que essas espécies intimamente relacionadas passaram por um processo recente de intensa diferenciação autossômica, no qual se conservou a homologia total, por exceção de Akodon sp. n., entre os cromossomos sexuais. Pertencente a tribo Akodontini, Deltamys Thomas 1917 é um táxon pouco estudado e que é raramente capturado. Utilizando-se de caracteres morfológicos ou genéticos, alguns autores consideram Deltamys como um gênero pleno enquanto outros acreditaram que esse devesse ser referido como subgênero ou sinônimo de Akodon. A única espécie formalmente descrita é Deltamys kempi que apresenta cariótipo básico com 2n=37 nos machos e 2n=38 nas fêmeas, NF=38, com sistema de determinação de sexo do tipo X1X1X2X2: X1X2Y. Uma característica citogenética que distingue Deltamys de Akodon é a presença de um pequeno par metacêntrico marcador em Akodon. Um cariótipo com 2n=40 e NF=40; XX: XY foi relacionado ao gênero Akodon porém, como em Deltamys kempi , esse complemento não apresenta o pequeno par metacêntrico. As análises filogenéticas de máxima parcimônia e máxima verossimilhança baseadas em sequências do gene mitocondrial do citocromo b evidenciaram o monofiletismo dos espécimens de Akodon sp. 2n=40, e o monofiletismo de Deltamys kempi. Além disso, revelaram que Akodon sp. é grupo irmão de Deltamys kempi, estando mais relacionado a este último gênero do que às demais espécies de Akodon, sugerindo a inclusão dos espécimens portadores do cariótipo com 2n=40 em Deltamys. Dessa forma, o gênero Deltamys se mostrou mais diverso do que até então se tinha conhecimento, agrupando duas linhagens: Deltamys kempi , 2n=37-38 ; X1X1X2X2: X1X2Y e Deltamys sp. 2n=40, XX: XY, que apresentam entre sí uma marcante divergência genética que chega a 12, 1%. Um cariótipo com 2n=50, NF=48 foi descrito para espécimes de Thaptomys Thomas,1916, coletados em Una, estado da Bahia, Brasil, que são indistinguíveis morfologicamente dos Thaptomys nigrita que apresentam 2n=52, NF=52, encontrados em outras localidades brasileiras. Foi então proposto que esse novo cariótipo com 2n=50 pertencesse a uma espécie críptica de Thaptomys nigrita, uma vez que os rearranjos cromossômicos observados somados a distância geográfica pode representar uma barreira reprodutiva entre as duas formas. Com o intuito de se estabelecer as relações entre indivíduos de Thaptomys com os dois números diplóides, análises filogenéticas moleculares foram realizadas com o uso de dezoito sequências do gene mitocondrial do citocromo b provenientes de espécimes cariotipados coletados ao longo da distribuição geográfica do gênero. Dois clados principais, Nordeste (A) que agrupa espécimens com 2n=50 e Sudeste (B) que agrupa espécimes com 2n=52, foram recuperados por análises de máxima parcimônia e máxima verossimilhança. As relações filogenéticas intra-genéricas corroboram os distintos números diplóides, e mostram os cariótipos com 2n=50 e 2n=52 como clados irmãos entre si separados pela cladogênese basal de Thaptomys . No presente trabalho são apresentados estudos de filogenia molecular e citogenética para o gênero monotípico de roedor fossorial Blarinomys Thomas 1896. Foram realizadas análises de máxima parcimônia e máxima verossimilhança com base em sequências do gene mitocondrial citocromo b , para amostra de 11 exemplares de B. breviceps provenientes de nove localidades de quatro estados do território brasileiro. Todas as topologias recuperaram duas linhagens principais: um clado Nordeste (A) e outro Sudeste. O clado sudeste agrupou dois clados irmãos, B e C. A divergência de sequência entre os indivíduos variou de: 4,7- 8,0% entre os clados nordeste e sudeste; 4,3-5,7% entre os clados B e C; 6,1-8,0% entre os clados nordeste; e B, e 4,7-6,4% entres os clados nordeste e C. Dentro dos clados a divergência variou de 0- 4,2% no clado nordeste, foi de 0,7% no clado B, e variou de 0,1- 1,3% no clado C. Variação entre espécimes da mesma região geográfica foi de 0-1,3%. Os estudos de citogenética de cinco exemplares revelaram alta diversidade cariotípica com cinco números diplóides distintos: 2n=52 (48A+2Bs, XY), 2n=43 (37A+4Bs, XX), 2n=37 (34A+1B, XY), 2n=34 (32A, XX) e 2n=31 (27A+2Bs, XX) e mesmo número de braços autossômicos (NF=50), excluindo-se os cromossomos sexuais e os supernumerários. Foram observados polimorfismos decorrentes de rearranjos Robertsonianos, além de variação de 0 a 4 cromossomos Bs, que são heterogêneos quanto a morfologia, constituição de heterocromatina e presença de sinais teloméricos intersticiais (ITS). ITS também foram observados na região pericentromérica de alguns pares autossômicos com dois braços em três dos exemplares. Foi realizada pintura cromossômica com sonda do cromossomo X de Akodon cursor (ACU X). Nossos dados revelaram uma diversidade até então desconhecida para Blarinomys , mostrando duas linhagens distintas correspondentes a regiões na Mata Atlântica e um extraordinário polimorfismo cromossômico. / Traditionally comparative cytogenetic studies are based mainly on banding patterns. Nevertheless, when dealing with species with highly rearranged genomes, as in Akodon species, or with other highly divergent species, cytogenetic comparisons of banding patterns prove to be inadequate. Hence, comparative chromosome painting has become the method of choice for genome comparisons at the cytogenetic level, since it allows complete chromosome probes of a species to be hybridized in situ onto chromosomes of other species, detecting homologous genomic regions between them. In the present study, we have explored the highly rearranged complements of the Akodon species using reciprocal chromosome painting through species-specific chromosome probes obtained by chromosome sorting. The results revealed complete homology among the complements of Akodon sp. n. (ASP), 2n=10, A. cursor (ACU), 2n=15, A. montensis (AMO), 2n=24 and A. paranaensis (APA), 2n=44 and extensive chromosome rearrangements have been detected within the species with high precision. Robertsonian and tandem rearrangements, pericentric inversions and/or centromere repositioning, paracentric inversion, translocations, insertions and fragile sites were observed. The chromosome painting using the APA set of 21 autosomes plus X and Y exhibited eight syntenic segments that are shared with A. montensis, A. cursor and Akodon sp. n. plus five exclusive associations for A. cursor and six for Akodon sp. n. Chromosomes X, except for the heterochromatin region of ASP X, and even chromosome Y that often present no hybridization signal when hybridized between species of mammals, shared complete homology among the species. These data indicate that all those closely related species have experienced a recent intensive process of autosomic differentiation, in wich, there is still complete maintenance, except for chromosome X of Akodon sp. n., of the sex chromosomes homologies. Member of the tribe Akodontini, Deltamys Thomas 1917 is a poorly studied and rarely collected taxon. Based on morphological or genetic characters, some authors considered Deltamys as a full genus while others regarded it as subgenus or synonym of Akodon. The single described species, Deltamys kempi presents a basic karyotype with 2n=37 in males and 2n=38 in females, FN=38, and with sex determination system of the type X1X1X2X2: X1X2Y. A cytogenetic character that distinguishes Deltamys from Akodon is the presence of a small metacentric pair marker in Akodon. A karyotype with 2n=40 and FN=40; XX: XY was related to the genus Akodon, but as in Deltamys kempi, this complement does not present the small metacentric pair. Phylogenetic analyses of maximum parsimony and maximum likelihood based on sequences of the mitochondrial gene cytochrome b evidenced the monophyly of a clade grouping specimens of Akodon sp. 2n=40 and monophyly of a clade containing specimens of Deltamys kempi. Besides that, the analyses showed that Akodon sp. is the sistergroup of Deltamys kempi, thus more related to this genus than to other species of Akodon and suggesting the placement of specimens with 2n=40 Deltamys. The genus Deltamys is, thus, more diverse than previously thought, grouping two lineages: Deltamys kempi, 2n=37-38 ; X1X1X2X2: X1X2Y and Deltamys sp. 2n=40, XX: XY, with a marked genetic divergence of 12,1% between them. A karyotype with 2n=50, FN=48 has been described for specimens of Thaptomys Thomas, 1916 collected at Una, State of Bahia, Brazil, which are morphologically indistinguishable from Thaptomys nigrita with 2n=52, FN=52 found in other Brazilian localities. It has been hence proposed that this new karyotype with 2n=50 could belong to a distinct species, cryptic of Thaptomys nigrita, once chromosome rearrangements observed along with the geographic distance could represent a reproductive barrier between both forms. Molecular phylogenetic analyses using the cytochrome b sequences of eighteen karyotyped specimens of Thaptomys were performed attempting to establish the relationships among the individuals along the geographic distribution of the genus. Two major clades, Northeastern (A) with specimens with 2n=50 and Southeastern (B) with specimens with 2n=52, were reconstructed by maximum parsimony (MP) and maximum likelihood (ML). The intra-generic relationships recovered by phylogenetic analyses corroborated the distinct diploid numbers. The 2n=50 and 2n=52 karyotypes appeared as monophyletic separated by the basal cladogenesis of the genus, sister-group to each other. We present molecular phylogenetic and cytogenetic data on the monotypic fossorial rodent genus Blarinomys . Maximum parsimony and maximum likelihood based on cytochrome b gene sequences were performed for a sample of 11 individuals from nine localities of four states of Eastern Brazil. All topologies recovered two main lineages: a Northeastern (A) and a Southeastern clade. The Southeastern grouped two sister-clades B and C. Sequence divergence between individuals ranged from 4.7-8.0% between northeastern and southeastern clades, from 4.3-5.7% between clades B and C, from 6.1-8.0% between clades northeastern and B, and from 4.7-6.4% between clades northeastern and C. Within the clades, divergence varied from 0- 4.2% in the northeastern clade, was 0.7% in the clade B, and varied from 0.1- 1.3% in clade C. Variation among specimens from the same geographic regions ranged from 0-1.3%. Cytogenetic studies of five individuals revealed high karyotypic diversity with five distinct diploid numbers: 2n=52 (48A+2Bs,XY) from state of Bahia, and 2n=43 (37A+4Bs,XX), 2n=37 (34A+1B,XY), 2n=34 (32A,XX), and 2n=31 (27A+2Bs,XX) from state of São Paulo; and same number of autosomic arms (FN=50) excluding sex chromosomes and supernumeraries. Polymorphisms are due to Robertsonian rearrangements, in addition to the variation from none to four B chromosomes, which are heterogeneous regarding morphology, heterochromatin constitution and presence of interstitial telomeric signals (ITS). ITSs were also observed in the pericentromeric regions of some biarmed autosomic pairs of three specimens. Our results revealed a high unknown diversity for Blarinomys , showing two distinct lineages corresponding to regions of the Atlantic Rainforest, besides an extraordinary chromosomal polymorphism.

A protease FtsH pertence à superfamília das proteínas AAA (ATPases Associadas à diversas Atividades celulares) cujos membros estão amplamente distribuídos entre procariotos e eucariotos. Nas plantas superiores, elas são codificadas por genes nucleares e sintetizadas por ribossomos citosólicos com uma seqüência de direcionamento na extremidade amino-terminal responsável pela translocação da pré-proteína para o interior das organelas, notadamente mitocôndrias e cloroplastos. Com o objetivo de caracterizar o processo de translocação da proteína aos tilacóides e sua regulação gênica em plantas, isolou-se um cDNA de frutos de tomate (Lycopersicon esculentum Mill. cv. MicroTom), cuja seqüência de aminoácidos revela a presença de todos os motivos clássicos pertencentes a uma protease do tipo FtsH-p1. A caracterização inicial da proteína indicou a presença de um típico peptídeo de trânsito cloroplástico em sua extremidade amino-terminal. A fim de definir qual região da proteína madura está envolvida no direcionamento da protease às membranas, foram realizadas construções gênicas contendo diferentes comprimentos da região amino-terminal da FtsH-p1 de tomate fusionados ao gene repórter GFP (green fluorescent protein). Estudos realizados a partir de frações enriquecidas de cloroplastos, estroma e tilacóide, provenientes de plantas transgênicas expressando estavelmente estas construções, revelaram que todas as proteínas de fusão acumularam-se no estroma sendo, portanto incapazes de associarem-se aos tilacóides. Estes dados indicam que a inserção da FtsH-p1 de tomate nas membranas dos tilacóides dependem de informação presente na proteína madura, necessária para a interação com as membranas ou mesmo com um fator adicional desconhecido. Alem disso, foi mostrado que membros da família das proteases do tipo das FtsHs em plantas não apresentam o clássico motivo RRXFLK, previamente descrito como essencial para a translocação dependente de uma dupla arginina (Tat). Devido ao envolvimento de ortólogos desta proteína em processos fisiológicos importantes nas plantas, abriu-se a possibilidade de estudar a regulação da FtsH-p1 de tomate via clonagem e caracterização da sua região promotora. Uma vez clonada, 4 deleções à partir da extremidade 5’ nesta região foram realizadas e fusionadas de forma a dirigirem a expressão do gene repórter uidA (GUS). Estas construções foram expressas estavelmente em plantas de tabaco, a fim de estudar sua regulação em diferentes tecidos, estádios de desenvolvimento e em resposta a estímulos ambientais ou situações de estresse. Os resultados preliminares mostraram que a seqüência regulatória clonada é responsível tanto à fatores ambientais, como luz, quanto aos hormônios auxina, citocinina e giberelina. Além disso, foi observada uma regulação negativa na presença de peróxido de hidrogênio. Entretanto, tratamentos envolvendo estresse salino, bem como variações na temperatura não geram nenhum efeito na atividade da enzima GUS. O mesmo ocorre quando as plantas são colocadas em presença de ácido abscísico (ABA). Os resultados deste estudo contribuem significativamente para um melhor entendimento dos mecanismos de regulação envolvidos no controle da expressão gênica da FtsH-p1 de tomate, bem como sugerem novas perspectivas no direcionamento de proteínas às membranas. / The FtsH protease belongs to the AAA family (ATPases associated with different cellular activities) whose members are widely distributed in prokaryotes and eukaryotes. In higher plants, these proteins are nuclear-encoded and synthesized by cytosolic ribosomes as larger molecular weight precursors. These molecules carry at the N-terminal extension a specific targeting sequence that directs translocation of the preproteins to the envelope membranes of mitochondria and chloroplasts. In the present work, a tomato (Lycopersicon esculentum Mill. cv. MicroTom) fruit cDNA encoding a plastid FtsH-p1 has been isolated, cloned and characterized. In order to define the protein domains involved on thylakoid targeting, several gene constructions were prepared carrying increasing lengths of the N-terminal region of tomato FtsH fused to the gfp (green fluorescent protein) reporter gene. In vivo expression studies based on onion cells or stable expression in transgenic tobacco plants showed that the chimeric proteins were translocated to plastids. In addition, sub-organellar fractionation indicated that GFP accumulated in the stromal fraction, instead of being translocated to the thylakoid membrane. These data suggest that membrane insertion of tomato FtsH-p1 requires information present in the mature protein. One remarkable finding was that members of the FtsH family do not present the classical RRXFLK motif, that has been shown to be essential for the Tat-dependent pathway. The FtsH-family members are involved in important physiological processes in plant cells. Therefore, this study opened up the possibility of studying the FtsH-p1 gene regulation by characterization of its regulatory region. After cloning a 1700 bp fragment corresponding to 5’ upstream region of the tomato FtsH coding sequence, four deletions of the promoter region were performed and the resulting fragments were fused to the uidA (GUS) reporter gene. These gene constructs were stable expressed in tobacco plants and further characterized. The results showed that the promoter region is positively regulated by light and the phytohormones auxin, cytokine and gibberelin. Besides, the promoter was down regulated by hydrogen peroxide. However, GUS activity was not affected by salt stress, variations on the temperature and abcisic acid treatment. The results presented here expand the current understanding of factors involved on FtsH gene regulation as well as bring new insights on the protein targeting to membranes.