Submitted by Bruna Rodrigues (bruna92rodrigues@yahoo.com.br) on 2016-09-27T14:16:35Z No. of bitstreams: 1 TeseJBT.pdf: 4183464 bytes, checksum: 396f197737f67452e4dcbb04ae000c10 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-10T14:11:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseJBT.pdf: 4183464 bytes, checksum: 396f197737f67452e4dcbb04ae000c10 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-10T14:11:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseJBT.pdf: 4183464 bytes, checksum: 396f197737f67452e4dcbb04ae000c10 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-10T14:12:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseJBT.pdf: 4183464 bytes, checksum: 396f197737f67452e4dcbb04ae000c10 (MD5) Previous issue date: 2015-11-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Parodontidae comprises the genera Parodon, Apareiodon e Saccodon, including 32 valid species. Of these, 16 occur in Brazil, and only ten defined at species level and one at genus level possess available chromosomal data. Due to the lack of cytogenetic data of Parodontidae species from the Tocantins-Araguaia and Jaguaribe river basins, this study analyzed by cytogenetic (classical and molecular) and molecular (DNA Barcode) methods six populations from the Tocantins-Araguaia river basin (Apareiodon cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, Apareiodon machrisi, Apareiodon argenteus and Parodon cf. pongoensis) and one species from the Jaguaribe river basin (Apareiodon davisi), in order to contribute to the knowledge of the genetic diversity of the family and assist in the understanding of chromosome evolution of this fish group. For all of the Apareiodon analyzed species was identified conservation in diploid number, distribution pattern of heterochromatic blocks and dispersion pattern of repetitive fraction WAp. However, karyotype formula, active nucleolar organizer regions, location of ribosomal genes 45S and 5S and distribution of satellite DNA pPh2004 sites shown to be variable among the species. The (GATA)n and telomeric (TTAGGG)n sequences exhibited similar pattern in A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2 and A. machrisi. In this work, we described the first reports of ribosomal genes co-location for Parodontidae, being observed in A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, A. machrisi and A. davisi, and also the polymorphism involving the two ribosomal sequences of A. davisi. Analysis of histones H1 and H4 localization represent the first study of histone genes in the family and showed that the seven collected species have co-location of these sequences in a chromosome pair, occuring one additional site of H1 in A. davisi, and dispersed sites of this sequence by the chromosomes of the species. Chromosomal analysis and DNA Barcode performed in A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2 and A. machrisi showed recent divergence among these individual groups, suggesting that Apareiodon sp. 2 is a possible new species, and Apareiodon sp. 1 is a population of A. machrisi. This work contributed to the knowledge of the genetic diversity of viii Parodontidae, presenting unpublished chromosomal and molecular data of this family. General analysis of chromosomal data of this family revealed conservation of karyotype macrostructure, however, more detailed analyzes indicated the occurrence of a great variety of chromosomal microstructural level. The results presented in this study, along with that available in literature, indicated that this microstructure chromosome diversity is clearly linked to repetitive DNAs dynamics. / Parodontidae é composta pelos gêneros Parodon, Apareiodon e Saccodon, incluindo 32 espécies consideradas válidas. Destas, 16 ocorrem em território brasileiro e apenas 11 possuem dados cromossômicos disponíveis. Considerando a escassez de dados citogenéticos para espécies de Parodontidae das bacias dos rios Tocantins-Araguaia e Jaguaribe, o presente trabalho analisou através de metodologias citogenéticas (clássicas e moleculares) e moleculares (DNA Barcode) seis populações da bacia dos rios Tocantins-Araguaia (Apareiodon cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, Apareiodon machrisi, Apareiodon argenteus e Parodon cf. pongoensis) e uma espécie da bacia do rio Jaguaribe (Apareiodon davisi), com o intuito de contribuir para o conhecimento da diversidade genética da família e auxiliar na compreensão da taxonomia e evolução cromossômica desse grupo de peixes. Para todas as espécies de Apareiodon analisadas, foi identificada conservação no número diploide, padrão de distribuição de heterocromatina e padrão de dispersão da fração repetitiva WAp. Entretanto, a fórmula cariotípica, as regiões organizadoras de nucléolo ativas, a localização dos genes ribossomais 45S e 5S e a distribuição dos sítios do DNA satélite pPh2004 mostraram-se variáveis entre as espécies. As sequências (GATA)n e telomérica (TTAGGG)n exibiram padrão similar para A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, A. machrisi. No presente trabalho foram descritos os primeiros relatos de co-localização de genes ribossomais para Parodontidae, sendo observados em A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, A. machrisi e A. davisi, e também do polimorfismo envolvendo as duas sequências ribossomais verificado em A. davisi. As análises da localização das sequências das histonas H1 e H4 representam os primeiros dados de genes histônicos para a família e evidenciaram para as sete espécies coletadas a ocorrência de co-localização destas sequências em um par cromossômico, ocorrendo um sítio adicional de H1 em A. davisi, e sítios dispersos dessa sequência pelos cromossomos das espécies. Análises cromossômicas e de DNA Barcode realizadas para A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, A. machrisi evidenciaram divergência recente entre esses grupos de indivíduos, vi sugerindo que Apareiodon sp. 2 represente uma possível espécie que carece de descrição taxonômica e Apareiodon sp. 1 seja uma população de A. machrisi. O presente trabalho contribuiu para o conhecimento da diversidade genética de Parodontidae, apresentando dados cromossômicos e moleculares inéditos desta família. Análises gerais dos dados cromossômicos conhecidos para a família revelam conservação da macroestrutura cariotípica, entretanto, análises mais detalhadas evidenciam a ocorrência de uma grande diversidade cromossômica em nível microestrutural. Os resultados apresentados no presente trabalho, juntamente aos disponíveis em literatura, indicam que esta diversidade da microestrutura cromossômica encontra-se claramente associada à dinâmica dos DNAs repetitivos. / 2012/15258-0

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 897621 bytes, checksum: e2a579de88f1b70bef922be819992a6c (MD5) Previous issue date: 2013-03-19 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The fluorescente in situ hybridization advent introducted the cytogenetics in molecular era, with methodological advances that enable the investigation of chromosome science at different levels. Among these advances, it stands out the unequivocally identification of homologous chromosomes pairs, the specific sequences location, the direct prospecting of chromosomal abnormalities, besides providing high-resolution information on the structure and organization of chromosomes. Within the strategies of molecular cytogenetics, microdissection and DOP-PCR techniques have been widely used in the chromosome-specific probes construction. However, the absence of well-established and reproducible protocols, besides the need for relatively large number of chromosomes for micromanipulation, this technique has been limited. The present study aimed to standard a methodology for chromosome-specific probes construction, involving micromanipulation and DOP-PCR techniques. Human lymphocyte cultures were carried out to obtain metaphases, both male and female origin. In situ amplification (PRINS) reaction was performed on a slide containing metaphase, applying 50 μL of reaction mix with Platinun® Taq DNA Polymerase High Fidelity 1 U, enzime reaction buffer, MgSO4 2 mM, dNTPs 200 μM and primer 4 μM. Then, ten X chromosomes fragments were microdissected using microneedles coupled to a phase contrast microscope and transferred to a tube containing 0.2 μL proteinase K, where deproteinizated at 37 °C for 24 hours. The material was amplified by DOP-PCR in 15 μL of reaction, and marked with Tetramethyl-rhodamine-5-dUTP. The probe was denatured for 10 minutes at 99 °C in 35 μL of hybridization mix containing: formamide 50 %, SSC 2X, Dextran Sulfate 10 %, 1 mg of Cot-1 and 200 ng of labeled probe. This mix was applied on the slide, which was denatured at 75 ºC for 8 minutes and then subjected to hybridization at 37 °C for 20 hours. After hybridization, stringency washes and counter-staining with DAPI were performed, and the material was analyzed with a fluorescence microscope coupled to an image capture system. A subcentromeric X chromosome specific probe was obtained, with an unique mark in male metaphase and two marks in female metaphases, with one or two fluorescent signals in interphase nuclei. / Com o advento da hibridização in situ fluorescente, a citogenética foi introduzida na era molecular, com avanços metodológicos que possibilitaram a investigação em vários níveis da ciência dos cromossomos. Destaca-se entre esses avanços a identificação de pares de cromossomos homólogos de forma inequívoca, a localização de sequências específicas, a prospecção direta de anormalidades cromossômicas, além de proporcionar informações de alta-resolução sobre a estrutura e organização dos cromossomos. Dentro das estratégias da citogenética molecular, as técnicas de microdissecção e de DOP-PCR têm sido muito utilizadas na construção de sondas cromossomo-específicas. Entretanto, a ausência de protocolos bem estabelecidos e reprodutíveis, além da necessidade de captura por micromanipulação de um número relativamente grande de cromossomos, essa técnica tem sido limitada quanto à sua aplicação mais ampla. O presente trabalho teve como objetivo padronizar uma metodologia para construção de sondas cromossomo-específicas, associando as técnicas de micromanipulação e DOP-PCR. Culturas de linfócitos humanos foram realizadas para a obtenção de lâminas contendo metáfases, tanto de origem masculina quanto feminina. A reação de amplificação in situ (PRINS) foi realizada sobre uma lâmina contendo metáfases, aplicando uma mistura de 50 μl de reação, contendo 1,0 U de Platinun® Taq DNA Polymerase High Fidelity, tampão de reação da enzima, 2 mM de MgSO4, 200 μM de dNTPs e 4 μM de primer. Em seguida, dez fragmentos de cromossomos X foram microdissectados utilizando microagulhas acopladas a um microscópio de contraste de fase e transferidos para um tubo de 0,2mL contendo proteinase K, de onde seguiu para a desproteinização a 37 ºC por 24 horas. O material foi amplificado por DOP-PCR em 15 μl de reação, e marcado com Tetramethyl-rhodamine-5-dUTP. A sonda foi desnaturada por 10 minutos a 99 ºC em 35 μL de uma mistura de hibridização contendo: 50 % Formamida, 2X SSC, 10 % Dextran Sulfato, 1 μg de Cot-1 e 200 ng da sonda marcada. Essa mistura foi aplicada na lâmina, que foi desnatura a 75 ºC por 8 minutos e depois foi submetida à hibridização a 37 ºC por 20 horas. Após a hibridização, foram realizadas as lavagens de estringência, contra-coloração com DAPI, e visualização do material em microscópio de fluorescência acoplado a um sistema de captura de imagens. Uma sonda específica para a região subcentromérica do cromossomo X foi obtida, apresentando uma marcação em metáfases de indivíduos masculinos e duas marcações em metáfases de indivíduos femininos, além de um ou dois sinais fluorescentes nos núcleos interfásicos.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-08-26T12:43:27Z No. of bitstreams: 1 Janaina Teixeira da Silva.pdf: 438623 bytes, checksum: 514069070882dfcad2b59f12ecbc37c4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T12:43:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Janaina Teixeira da Silva.pdf: 438623 bytes, checksum: 514069070882dfcad2b59f12ecbc37c4 (MD5) Previous issue date: 2007-08-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Bambusa vulgaris is cultivated in Pernambuco, Paraíba and Maranhão states, aiming at to the production of cellulose with longer staple fibres for manufacture of high quality paper for packings. The improvement program of this and the too much species of bamboo in the region depends on the study of the cytogenetic variability to inform of its potentials for genetic manipulation. The present paper characterized cytogenetically six species, with two varieties of bamboo with economic potential for the Northeast of Brazil using conventional technique,banding with fluorochromes (CMA3 and DAPI) and Nitrate of Silver (AgNO3). The results had not shown differences in the chromosomic number of the species Dendrocalamus giganteus (2n=64), D. strictus (2n=64), D. asper (2n=64) and Bambusa tuldoides (2n=64), as well as B. textilis (2n=72) and B. vulgaris var. vittata (2n=72), however the last specie had distinct number of its another variety B. vulgaris var. vulgaris (2n=54). The basic numbers ranges from x=8 to x=12 and the level ploidy varied from hexaploid to octaploid. In general, the species had presented high chromosomic number and had not presented karyotype symmetrical. The structure of the interphase nucleus had been semireticulated with presence of some chromocenteres. The morphology of the chromosomes for all the analyzed species consist of metacentric and submetacentric. The double coloration with fluorochromes CMA3 and DAPI evidenced blocks CMA3+/DAPI- in the terminal region in chromosomes of all the analyzed species. In this coloration, in metaphase, had revealed secondary constrictions and had evidenced satellites in B. tuldoides, B. textilis, D. asper and D. giganteus. The others species had evidenced NOR`s (Nucleolar Organization Regions). The coloration with AgNO3 showed the occurrence of only one great nucleolar that occupies almost all part of the interphase nucleus in all the species. / Bambusa vulgaris é amplamente cultivada nos estados de Pernambuco, Paraíba e Maranhão, visando à produção de celulose com fibras mais longas para fabricação de papel de alta qualidade para embalagens. O programa de melhoramento das espécies de bambu na região depende do estudo da variabilidade citogenética para disponibilizar informações de seus potenciais para manipulação genética. O presente trabalho teve por objetivo caracterizar citogeneticamente, através de técnica convencional, bandeamento com fluorocromos (CMA3 e DAPI) e com Nitrato de Prata (AgNO3), seis espécies de bambu, sendo duas variedades com potencial econômico para o Nordeste. Os resultados obtidos mostraram semelhança no número cromossômico de Dendrocalamus giganteus (2n=64), D. strictus (2n=64), D. asper (2n=64), Bambusa tuldoides (2n=64), como também para B. textilis (2n=72) e B. vulgaris var. vittata (2n=72), tendo a última número distinto de sua outra variedade B. vulgaris var. vulgaris (2n=54). Os números básicos sugeridos variaram de x=8 a x=12 e o nível de ploidia de hexaplóide a octaplóide. Em geral, as espécies apresentaram elevado número cromossômico e cariótipo assimétrico. Os núcleos interfásicos foram dos tipos semi-reticulado com presença de alguns cromocentros. A morfologia dos cromossomos para todas as espécies analisadas variou de metacêntrico a submetacêntrico. A dupla coloração com fluorocromos CMA3 e DAPI evidenciou blocos CMA3 +/DAPI- na região terminal em cromossomos de todas as espécies analisadas. Nesta coloração, em metáfases, constrições secundárias mostraram-se distendidas e evidenciaram satélites nas espécies B. tuldoides e B. textilis, assim como, em D. asper e D. giganteus. As demais espécies mostraram blocos que evidenciaram as RON’ s. A coloração com AgNO3 mostrou a ocorrência de apenas um grande nucléolo ocupando grande parte do núcleo interfásico em todas as espécies.

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-07-10T17:34:50Z No. of bitstreams: 1 TESE Cris Deuner.pdf: 2840678 bytes, checksum: 7bc792c5f1aa5c692cb567c4aa87a02f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-16T16:59:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE Cris Deuner.pdf: 2840678 bytes, checksum: 7bc792c5f1aa5c692cb567c4aa87a02f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-16T17:07:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE Cris Deuner.pdf: 2840678 bytes, checksum: 7bc792c5f1aa5c692cb567c4aa87a02f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-16T17:07:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Cris Deuner.pdf: 2840678 bytes, checksum: 7bc792c5f1aa5c692cb567c4aa87a02f (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 / O estresse salino afeta negativamente a manifestação do potencial fisiológico pela germinação, vigor das sementes e redução no desenvolvimento das plântulas. Além disso, a salinidade pode comprometer a divisão celular, inibindo o índice mitótico e causando anormalidades cromossômicas, bem como aumentar a produção de espécies reativas de oxigênio. As plantas, por sua vez, podem reagir a esse estresse com ajustes morfológicos, bioquímicos, fisiológicos, celular e molecular, sendo que determinados ajustes podem ser induzidos por uma ampla variedade de metabólitos secundários produzidos para a defesa natural da planta. Substâncias como o β-caroteno, as vitaminas C e E e os compostos fenólicos estão relacionados à capacidade antioxidante de inúmeros vegetais e auxiliam a diminuir os efeitos causados pela salinidade. Nesse âmbito, extratos de plantas têm sido estudados, visto que o mecanismo de ação dos antioxidantes, presentes em extratos vegetais, possui um importante papel na redução da oxidação lipídica em tecidos vegetal e animal, sob condições de estresse. A alface é a hortaliça folhosa mais importante no Brasil e além de vitaminas e sais minerais, possui carotenoides e alto teor de compostos fenólicos. As variedades roxas possuem ainda, grande quantidade de antocianinas, o que lhes confere maior atividade antioxidante. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o efeito do extrato de folhas de alface roxa sobre a qualidade fisiológica, atividade citogenética e antioxidante durante a germinação de sementes e crescimento inicial de plântulas de alface, submetidas a diferentes concentrações salinas, buscando elucidar possíveis mecanismos de tolerância que poderão servir de base para estudos futuros com outras culturas. Foram realizados experimentos em laboratório e casa de vegetação, onde plântulas de alface, cultivar Regina, foram submetidas, durante os estádios iniciais de desenvolvimento à diferentes concentrações de extrato de folhas de alface roxa combinado ou não a soluções salinas, sendo avaliados parâmetros relacionados à germinação, produção de biomassa, divisão celular e atividade antioxidante. O uso de extrato de folhas de alface roxa proporciona incrementos na germinação das sementes, auxilia o desenvolvimento inicial das plântulas, bem como diminui o estresse oxidativo causado pelo sal, justificado pelo aumento no índice de clorofila e de nitrogênio e pela menor concentração de sódio nas folhas. O extrato de alface roxa não afeta o índice mitótico, diminui o índice de células em prófase e aumenta a incidência das células em telófase de raízes de alface. O estresse salino afeta negativamente o desenvolvimento das plântulas de alface. / Salt stress negatively affects the manifestation of physiological potential for germination, seed vigor and reduced seedling development. Moreover, the salinity can affect cell division by inhibiting the mitotic index and causing chromosomal abnormalities, as well as increase the production of reactive oxygen species. Plants, in turn, can react to this stress with morphological adjustments, biochemical, physiologic, cellular and molecular, and some of these adjustments can be induced by a wide variety of secondary metabolites that is produced for the plant's natural defense. Substances such as β-carotene, vitamins C and E and phenolic compounds are related to the antioxidant capacity of various vegetables and help to reduce the effects caused by salinity. In this scope, plant extracts have been studied, since the mechanism of action of antioxidants present in plant extracts, it has an important role in reducing lipid oxidation in plant and animal tissues, under stress conditions. Lettuce is the hardwoods vegetable more important in Brazil, beyond of vitamins and minerals, has carotenoids and a high content of phenolic compounds. Purple varieties have also a lot of anthocyanins, which gives them greater antioxidant activity. The aim of this study was to characterize the effect of purple lettuce leaf extract on the physiological quality, cytogenetics and antioxidant activity during germination and initial growth of lettuce seedlings, under different salt concentrations, to elucidate possible mechanisms of tolerance which may serve as a basis for future studies with other cultures. Experiments were performed in the laboratory and greenhouse, where lettuce seedlings, cultivar Regina, were submitted during the initial stages of development, a different concentrations of purple lettuce leaf extract combined or not with salt solutions, being evaluated parameters related to germination, biomass production, cell division and antioxidant activity. The use of purple lettuce extract provides increases in seed germination, assists the early development of seedlings, as well as decreases the oxidative stress caused by the salt, justified by the increase in the chlorophyll and nitrogen index and by the lower concentration of sodium in the leaves. The purple lettuce extract does not affect the mitotic index, reduces the cell index in prophase and increases the incidence of cells in telophase of lettuce roots. Salt stress negatively affects the development of lettuce seedlings.

Orientadores: Shirlei Maria Recco-Pimentel, Carmen Sílvia Busin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T01:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruschi_DanielPacheco_M.pdf: 3876863 bytes, checksum: 337679c24ea52e966f84be587a0058cb (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A taxonomia e as relações de parentesco em Phyllomedusa são temas de constantes discussões. Hipóteses sobre os relacionamentos intra- e interespecíficos desse gênero decorrem basicamente de análises morfológicas e comportamentais, o que não têm sido suficiente para responder alguns dos questionamentos. O grupo de P. hypochondrialis, o maior dentro do gênero, apresenta dificuldades na sua delimitação e, até o momento, não foi observada nenhuma sinapomorfia que possa reunir as espécies atualmente alocadas no grupo, de maneira que outras ferramentas podem ser elucidativas para resolução dessa problemática. O presente trabalho teve como objetivo utilizar dados citogenéticos e de sequências de DNA mitocondrial para o estudo de algumas das espécies do grupo de P. hypochondrialis. Todos os espécimes apresentaram o número diplóide 2n=26 e morfologia dos cromossomos bastante conservada, o que permitiu a inferência de homeologias cromossômicas. Exceto nas populações de Phyllomedusa sp. (aff. azurea) que apresentam o par 7 submetacêntrico, os cariótipos das demais populações analisadas foram constituídos por seis pares metacêntricos (1, 4, 8, 11-13), seis submetacêntricos (2, 3, 5, 6, 9, 10) e um subtelocêntrico (par 7). A diferença detectada no par 7 pode ser atribuída à presença de uma NOR nos braços curtos dos cromossomos 7 submetacêntricos. Pequenas variações na morfologia de alguns pares cromossômicos, incluindo a localização da NOR, foram observadas em P. rohdei de Ilhéus/BA em relação à descrita por outros autores, corroborando a hipótese da provável existência de espécies crípticas sob esse nome. O cariótipo de P. nordestina se diferenciou dos demais principalmente pela grande quantidade de heterocromatina e pela posição da NOR em 9p. A análise de morfologia externa relativa aos dois caracteres indicados para diagnose e separação de P. hypochondrialis e P. azurea, aplicados a todos os espécimes de diferentes localidades brasileiras, mostrou variações intrapopulacionais não acompanhadas de variações citogenéticas e moleculares. Esses dados apontam a necessidade de uma re-avaliação desses caracteres de diagnose e separação para essas espécies. A análise conjunta de dados citogenéticos e moleculares das populações permitiu identificar a população de Belterra/PA como P. hypochondrialis, portadora de NOR intersticial em 8p. Dados moleculares sugerem que as populações de Uberlândia (Minas Gerais), de São Luís, Bacabeira e Urbano Santos (Maranhão) e de Porto Nacional (Tocantins) possivelmente correspondam a um mesmo táxon, P. azurea. Nesse caso, a NOR em 7p nas populações ao Norte (Maranhão e Tocantins) e em 4p ao sudeste (Minas Gerais) corresponderia a variação interpopulacional. Na análise filogenética molecular, os haplótipos de Chapada dos Guimarães + Santa Terezinha (Mato Grosso) formaram um clado e as populações de Laranjal do Jari (Amapá) e de Prainha (Pará) formaram cada uma um ramo independente. Os dados dessas quatro populações (portadoras de NOR pericentromérica em 8q) sugerem que uma revisão minuciosa deva ser realizada para auxiliar no esclarecimento de seus status taxonômicos. / Abstract: Taxonomy and phylogenetic relationships of Phyllomedusa have been subject of continuous discussions. Hypotheses about the intra- and interspecific relationships within this genus have basically arised from morphological and behavioral characteristics, which have not been enough to elucidate the problems as the assigning of species to the P. hypochondrialis group. So, other tools may help to solve this problem. This work aimed to contribute with cytogenetic analysis and mitochondrial DNA sequencing data to the understanding of intra- and interspecific relationships involving the species P. rohdei, P. nordestina, P. hypochondrialis and P. azurea of the P. hypochondrialis group. These species showed the same chromosome number, 2n=26, with a very similar morphology. All populations had karyotypes with six metacentric (1, 4, 8, 11-13), six submetacentric (2, 3, 5, 6, 9, 10) pairs and one subtelocentric pair (7). The populations of Phyllomedusa sp. (aff. azurea) from São Luis, Bacabeira, Urbano Santos (Maranhão state) and Porto Nacional (Tocantins state) had the pair 7 submetacentric. This morphological difference in pair 7 can be attributed to the Nucleolus Organizer Region (NOR) that is located only in the submetacentric pair 7. The karyotype of P. nordestina was distinguished from P. rohdei by the large amount of heterochromatin and by the position of the NOR in chromosome 9p, whereas in P. rohdei it is located in 9q. The karyotype of P. rohdei also differed from that described by other author, suggesting the existence of cryptic species. Brazilian populations of P. azurea, P. hypochondrialis and other populations related to those species were analyzed. Intrapopulational variations in characters of external morphology were not associated with cytogenetic and molecular variations, showing that it is necessary a reevaluation of the diagnosis and separation characters for those species. The combined analysis of molecular and cytogenetic data allowed classifying the population of Belterra/PA as P. hypochondrialis, with NOR in pair 8p. Molecular data suggested that populations from Uberlândia (Minas Gerais), São Luiz, Bacabeira e Urbano Santos (Maranhão) and Porto Nacional (Tocantins) probably correspond to the taxon P. azurea. By comparing the karyotype of specimens from North populations (Maranhão and Tocantins) and from Southeast populations (Minas Gerais) different NOR positions were observed and interpreted as an interpopulational variation. The genetic diversity observed among populations with pericentromeric NOR in 8q (Laranjal do Jari, Prainha and Chapada dos Guimarães + Santa Terezinha; three clades in the molecular phylogenetic analysis) suggests that these populations could be in incipient process of speciation. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2018-11-13T14:51:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) resumo_dissertacao_sheila_bigolin_teixeira.pdf: 16275 bytes, checksum: ccfd6e59b0a930bb991d125e307f318b (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-11-13T15:59:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) resumo_dissertacao_sheila_bigolin_teixeira.pdf: 16275 bytes, checksum: ccfd6e59b0a930bb991d125e307f318b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-13T15:59:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) resumo_dissertacao_sheila_bigolin_teixeira.pdf: 16275 bytes, checksum: ccfd6e59b0a930bb991d125e307f318b (MD5) Previous issue date: 2017-08-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O arroz é umas das culturas agrícolas de maior importância em nível mundial, porém a sua produtividade é altamente afetada por estresses abióticos, que podem ocorrer durante os diferentes estádios de desenvolvimento da cultura. Quando estes ocorrem no período de instalação da lavoura, podem comprometer o estande de plantas, por afetar diretamente o vigor e a viabilidade das sementes. Neste sentido, o condicionamento de sementes em extrato vegetal surge como alternativa para melhorar a expressão do vigor das sementes, atuando sobre a tolerância aos diferentes estresses. Desta forma, o presente trabalho teve por objetivo avaliar o efeito do condicionamento de sementes de arroz em extrato de cenoura como possível atenuador de estresses abióticos na cultura do arroz. Assim, foram conduzidos quatro estudos, sendo eles: avaliação da atividade citogenética de meristemas radiculares de arroz em resposta ao condicionamento em extrato de cenoura e a salinidade; potencial bioprotetor de extrato de cenoura sobre a viabilidade de sementes e respostas antioxidantes de plântulas de arroz sob estresse salino; extrato de cenoura: efeito sobre o crescimento e a atividade antioxidante de plantas de arroz cultivadas em rizotrons; aplicação de índices para avaliar a tolerância ao frio na viabilidade de sementes de arroz condicionadas em extrato vegetal. A análise citogenética nos meristemas radiculares demonstrou que houve aumento no índice mitótico em resposta ao extrato de cenoura na cultivar BRS 358 mesmo sob condições de estresse salino, caracterizando o efeito positivo do extrato. Quanto aos testes de viabilidade, o uso do extrato de cenoura manteve a germinação próximo ao controle mesmo sob condições de salinidade para a cultivar BRS Querência. Para as duas cultivares houve incremento no crescimento das plântulas tanto em condições de laboratório como em casa de vegetação. O extrato também diminui o estresse oxidativo causado pelo sal, justificado pela redução no acúmulo de peróxido de hidrogênio e peroxidação lipídica, além do aumento no índice de clorofila e de nitrogênio e pela menor área senescente das folhas de arroz submetido ao estresse salino. Sendo assim, a utilização de extrato de raízes de cenoura em condicionamento de sementes é uma técnica promissora na atenuação de estresses abióticos. / Rice is one of the world's most important agricultural crops, but its productivity is highly affected by different type of abiotic stress during crop stages of development. When these occur during the seedling period of the crop, it can compromise the plant standard, as it directly affects the vigor and seeds viability. In this regard, the conditioning of seeds in vegetal extract appears as an alternative to improve the expression of seed vigor, improving the tolerance of abiotic stress. Thus, the present work had the objective of evaluate the effect of the rice seeds conditioning on carrot extract as a possible attenuator of abiotic stress in rice crop. Thus, four studies were conducted: evaluation of the cytogenetic activity of root rice meristems in response to conditioning in carrot extract and salinity; Bioprotectant potential of carrot extract on seed viability and antioxidant responses of rice seedlings under saline stress; Carrot extract: effect on growth and antioxidant activity of rice plants cultivated in rhizotrons; Application of index to evaluate the cold tolerance in the viability of rice seeds conditioned in carrot extract. The cytogenetic analysis in the root meristems showed that there was an increase in the mitotic index in response to the carrot extract in cultivar BRS 358 even under saline stress conditions, characterizing the positive effect of the extract. Regarding the viability tests, the use of carrot extract kept the germination close to the control treatment even under salinity conditions for the cultivar BRS Querência. For both of the cultivars, there was an increase in seedling growth in both laboratory and greenhouse conditions. The extract also decreased the oxidative stress caused by salt, justified by the reduction in the accumulation of hydrogen peroxide and lipid peroxidation, besides the increase in the chlorophyll and nitrogen index and the smaller senescent area of the rice leaves submitted to saline stress. Thus, the use of carrot extract in seed conditioning is a promising technique for the attenuation of abiotic stresses.

Orientadores: Vera Lucia Gil da Silva Lopes, Iscia Lopes Cendes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T17:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freitas_ErikaCristinaLopesBurronede_D.pdf: 4235837 bytes, checksum: 014a02ceef9fbd93a09deb49df5f0a37 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A Síndrome Blefaroqueilodôntica (BCD) e os Defeitos de Linha Média Facial com Hipertelorismo (DLMFH) são defeitos craniofaciais raros. Por esse motivo, os estudos de grandes casuísticas têm sido limitados. Contribuição científica significativa neste assunto tem sido dada por nosso grupo, que delineou características clínicas e diretrizes para seguimento de longo prazo e evidenciou achados neuroradiológicos em ambas as anomalias. Embasado nesses achados preliminares e evidências recentes da literatura pertinente, foi possível estabelecer uma estratégia inicial para investigação etiológica da BCD e dos DLMFH, sendo os objetivos desse projeto: investigar a etiologia da BCD nos indivíduos afetados pela síndrome, por meio de estudo dos genes candidatos IRF6, P63, OSR2, TBX10, FOXE1, SHH, FGF8 e PAX3; pesquisar, nos indivíduos com DLMFH, a presença de mutações nos genes candidatos SHH, FGF8 e PAX3; identificar, em ambas as malformações, possíveis alterações cromossômicas; e, por último, associar os achados clínicos detectados nas investigações anteriores aos possíveis achados moleculares. Foram utilizadas técnicas de sequenciamento direto, array-CGH, genotipagem automática e hibridação in situ por fluorescência. Não foi possível relacionar nenhuma mutação pontual nos genes estudados associadas às malformações em questão, pois não foram encontradas alterações gênicas patogênicas. Entretanto foram detectadas em pacientes com DLFMH três aberrações cromossômicas em regiões distintas do genoma, tratando-se de um caso de duplicação no cromossomo 6 (paciente DLMFH7), um caso com deleção no cromossomo 9 e duplicação no cromossomo 20 (paciente DLMFH10) e um caso de deleção no cromossomo 2 (paciente DLMFH1). Nesse último, o gene PAX3 encontrava-se dentro da região deletada, confirmando a hipótese inicial de que alguns genes de desenvolvimento estão envolvidos na etiologia dos DLMFH. Conclui-se, portanto, que em indivíduos com DLMFH, a técnica de array-CGH pode ser útil para detecção de aberrações cromossômicas diversas e o aconselhamento genético deve ser individualizado / Abstract: The Blepharocheilodontic Syndrome (BCD) and Midline Facial Defects with Ocular Hypertelorism (MFDH) are rare craniofacial anomalies. Considering the rarity of these two groups of congenital defects, studies with large casuistry have been limited. Our group has significantly contributed to the scientific knowledge about both anomalies, delineating clinical characteristics, evidencing neurological findings and designing protocols for long term follow-up. Based in these preliminary findings and recent evidences of pertinent literature, it was possible to determine an initial etiologic investigation strategy for the BCD and the MFDH. The objectives of this project are to investigate the etiology of the BCD in affected individuals through IRF6, P63, OSR2, TBX10, FOXE1, SHH, FGF8 and PAX3 candidate genes study; to search MFDH patients for mutations in the SHH, FGF8 and PAX3 candidate genes; to identify, in both syndromes, possible chromosomal anomalies; and finally, to associate the detected clinical findings in previous investigations to the molecular results. The direct sequencing, array-CGH, automatic genotyping and FISH were the molecular techniques used in this study. It was not possible to relate any punctual mutation in the studied genes associated to the syndromes investigated since none pathogenetic alteration was found. Although, chromosomal anomalies in different locations of the genome were detected in three MFDH patients, a chromosome 6 duplication (in patient MFDH7), a chromosome 9 deletion and chromosome 20 duplication (in patient MFDH10), and a chromosome 2 deletion (in patient MFDH1). In the latter case, the PAX3 gene was inside the deleted region, supporting the initial hypothesis that some development genes are involved in the MFDH etiology. Therefore, it can be concluded that in MFDH patients, the array-CGH investigation can be useful to detect a wide range of chromosomal anomalies and the genetic counseling must be individualized / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-10-28T13:15:45Z No. of bitstreams: 3 Dissertação - Roberta Machado de Oliveira Frota Curado - 2015.pdf: 1412350 bytes, checksum: 3488f3ea9d285b268adb991ca619df94 (MD5) anexos - dissertacao - roberta m de o f curado.pdf: 1349907 bytes, checksum: d9adb8c0cfdeca8fe004bc23cde29b9b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T14:56:17Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Dissertação - Roberta Machado de Oliveira Frota Curado - 2015.pdf: 1412350 bytes, checksum: 3488f3ea9d285b268adb991ca619df94 (MD5) anexos - dissertacao - roberta m de o f curado.pdf: 1349907 bytes, checksum: d9adb8c0cfdeca8fe004bc23cde29b9b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-28T14:56:17Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Dissertação - Roberta Machado de Oliveira Frota Curado - 2015.pdf: 1412350 bytes, checksum: 3488f3ea9d285b268adb991ca619df94 (MD5) anexos - dissertacao - roberta m de o f curado.pdf: 1349907 bytes, checksum: d9adb8c0cfdeca8fe004bc23cde29b9b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-02-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Male infertility affects about half of couples with infertility history and is considered a multifactorial syndrome, including a broad spectrum of diseases. Chromosomal abnormalities are a major cause of human infertility and interfere with spermatogenesis. Infertility in patients with Klinefelter's syndrome (KS) is a consequence of degeneration of germ cells and that affects about 4% of infertile men. Objective: To investigate the presence of chromosomal abnormalities in infertile men with azoospermia or oligozoospermia seen at the Human Reproduction Laboratory of the Hospital das Clinicas (LabRep -HC) of the Federal University of Goiás, in 2013. Methodology: Descriptive study. Metaphases were analyzed in GTG bands obtained from lymphocytes cultures of 20 infertile men idiopathic causes. Results: The patients' ages ranged from 26-59 years and the design attempts ranged on average of 5 (± 5.02) years. In 3/20 (15%) patients were found karyotype 47, XXY (SK) and the rest, 17/20 patients had a normal karyotype. Conclusion: Genetic testing can help identify which patients would benefit from the technical reproduction. These studies are relevant because the assisted reproduction techniques ignore the process of natural selection and some classic chromosomal abnormalities end some deleterious mutations that could through generations. Thus, genetic assessment can lead to genetic counseling and hence the primary and secondary prevention of congenital defects in offspring of patients with male infertility. This study helps to assess the prevalence of chromosomal abnormalities in some men treated at LabRep - HC UFG. / A infertilidade masculina afeta cerca da metade dos casais com histórico de infertilidade e é considerada uma síndrome multifatorial, incluindo um amplo espectro de doenças. As anormalidades cromossômicas são uma das principais causas de infertilidade humana e interferem na espermatogênese. A infertilidade em indivíduos com a síndrome de Klinefelter (SK) é uma consequência da degeneração de células germinativas e acomete cerca de 4% dos homens com infertilidade. Objetivo: Investigar a presença de anormalidades cromossômicas de homens inférteis com azoospermia ou oligozoospermia, atendidos no Laboratório de Reprodução Humana do Hospital das Clínicas (LabRep -HC) da Universidade Federal de Goiás, no ano de 2013. Metodologia: Estudo descritivo. Foram analisadas metáfases em bandas GTG obtidas a partir de cultura de linfócitos de 20 homens inférteis de causas idiopáticas. Resultados: A idade dos pacientes variou de 26-59 anos e as tentativas de concepção variaram em média de 5 (± 5,02) anos. Em 3/20 (15%) pacientes foi encontrado cariótipo 47,XXY (SK) e o restante, 17/20 pacientes, apresentaram cariótipo normal. Conclusão: Os testes genéticos podem ajudar a identificar quais pacientes poderiam ser beneficiados com as técnicas de reprodução. Estes estudos são relevantes, pois as técnicas de reprodução assistida ignoram o processo de seleção natural e algumas anormalidades cromossômicas clássicas ou algumas mutações deletérias que poderiam ser herdadas. Desta forma, a avaliação genética pode levar ao aconselhamento genético e, consequentemente, à prevenção primária e secundária dos defeitos congênitos nos descendentes dos pacientes com infertilidade masculina. O presente estudo contribui para avaliar a prevalência de anormalidades cromossômicas de alguns homens atendidos no LabRep - HC da UFG.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-07T12:10:47Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cesar Augusto Sam Tiago Vilanova Costa - 2006.pdf: 1500361 bytes, checksum: 3401843db66da8f77a90a41b7a08f826 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-07T12:14:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cesar Augusto Sam Tiago Vilanova Costa - 2006.pdf: 1500361 bytes, checksum: 3401843db66da8f77a90a41b7a08f826 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T12:14:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cesar Augusto Sam Tiago Vilanova Costa - 2006.pdf: 1500361 bytes, checksum: 3401843db66da8f77a90a41b7a08f826 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2006-09-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Hypo pharynx is the under region of pharynx and serves both respiratory and digestive tract, acting as a passageway to air and food. It’s composed by squamous nonkeratinized epithelial tissue. Statistical studies indicates that 85 to 90% of neoplasies rush pyriform sinus and are characterized by fast dissemination and metastization. Epidemiological trends of hypo pharynx cancer in Goiania on period 1998 to 2003 analyzing data derived from Cancer Registry of Association for Cancer Combat of Goias, shows that the relative survival rate for men diagnosed with hypo pharynx cancer was 38% past 60 months while women presented a survival rate of 100%. Surgery was the treatments that present fewer rates (34%) and chemotherapy was associated to the most survival rate (54%). Patients that use tobacco presented a survival rate of 43% while non-tabagists present a rate of 60% of surviving. Relative survival rate for patients diagnosed with hypo pharynx tumor was 38% and estimated censure for 5 years was just 5%. Survival rate was extremely decreased due to 45% of cases were diagnosed in advanced stages of disease. It is important to point out that preventive campaign is important to evade the increasing of these pathologies that are related to behavior of tabagism and etilism. Present study also evaluates cytogenetically individuals diagnosed with hypo pharynx cancer. Cytogenetic analysis of exfoliated cells is largely used to evaluate cytotoxic and genotoxic alterations on people exposed to potentially mutagens. A number of 36 individuals were analyzed, representing case group, and 36 healthy individuals composed control group. Data was collected and analysis was performed to estimate main nuclear alterations. Standard protocols were adopted to collect and counting cells. Micronuclei test was used to determinate the frequency of cytotoxic and genotoxic alterations. Besides than micronuclei others alterations like broken-eggs, binucleated cells and piknotic nuclei are good markers of cell alterations because they are resulted from cytotoxic events frequently related to occupational exposure. Behaviors like tabagism, etilism and exposition time were also investigated to correlate cells alterations. The correlation between micronuclei frequencies of case and control group test doesn’t show statistic difference. Broken egg and binucleated cells were the most observed anomalies on case group and showed up significant statistic difference (p=0.03). Results indicates a high grade of cytotoxic anomalies on individuals with hypo pharynx cancer, specially in tabagists and chronic etilists individuals, behaviors that are correlated to induct and promote tumors in susceptible people due their capabilities to affect cell cycle. Studies about relationship between Human Papillomavirus (HPV) and cancer development are performed since 80’s. Although the correlation of HPV and cervical cancer are well established, the possible role of HPV and head and neck cancer are still unclear. Among controversial factors of HPV and carcinogenesis of squamous epithelial cells, there is a viral incidence that oscillates from 0 to almost 100% on studies that includes a myriad of viral genome detect methods, such Blotting and PCR. Importance of HPV infection and epithelial carcinogenesis is related to capabilities of High risk HPV 16 and 18 to promote cell alterations, by tumor suppressor proteins inactivation, tumor suppressor genes blockage and insertions of HPV oncogenes. On present study, HPV detection and typing was performed on tumors derived from hypo pharynx of 24 patients diagnosed with cancer (CID-O: C12,0 to C13,9). All samples was submitted to PCR with generic primers MY09/11 and GP05/06, as specific primers to HPV 6, 11, 16, 18, 33, 35, 45 and 58. Results shows that on 9 of 24 samples, HPV were detected by generic primers (a rate of 37,5%) and HPV types 16, 18 and 45 were identified, with a sample presenting coinfection of HPV 16 and 18. / A hipofaringe, região inferior da faringe, também chamada de laringofaringe ou faringolaríngea, serve aos sistemas respiratório e digestivo, funcionando como passagem para o ar e os alimentos. É composta de tecido epitelial escamoso estratificado não-queratinizado, com grande quantidade de glândulas seromucosas. As estatísticas mostram que entre 85 e 90% dos cânceres que acometem a hipofaringe são carcinomas espino-celulares. A lesão inicial no seio piriforme apresenta-se macroscopicamente sob o aspecto de um nódulo ou úlcera, tendo como característica principal, a rápida disseminação pela submucosa. Atualmente, com a associação de cirurgias radicais e radioterapia pós-peratória aumentou-se o controle locorregional destes tumores, contudo, a sobrevida global não sofreu alterações em decorrência das metástases à distância, o que não representa uma falha no tratamento realizado e sim uma evolução natural devido à característica invasiva desse tipo de neoplasia. Os tumores malignos de hipofaringe não são freqüentes, representando entre 5 a 10% das neoplasias das vias aerodigestivas superiores e apenas 0,5 % de todos os cânceres. Porém, do conjunto das neoplasias malignas da região da cabeça e pescoço, tumores de hipofaringe apresentam o pior prognóstico. A avaliação das tendências epidemiológicas apresentadas pelo câncer de hipofaringe em Goiânia no período de 1998 a 2003, analisando os dados disponíveis pelo Registro de Câncer de Base Populacional da Associação de Combate ao Câncer em Goiás, mostrou uma sobrevida relativa dos pacientes do sexo masculino diagnosticados com câncer de hipofaringe foi de 38% após 60 meses de segmento, enquanto que para o feminino apresentou-se uma sobrevida máxima de 100%, com todas as pacientes curadas. Dentre os tratamentos realizados, a cirurgia apresentou a menor taxa de sobrevida (34%) ao passo que para a quimioterapia foi associada uma sobrevida de 54%. A sobrevida dos pacientes tabagistas (43%) se mostrou muito inferior à dos indivíduos que não eram tabagistas (60%). Em fim, ao longo de cinco anos de segmento deste estudo, a taxa de sobrevida relativa para portadores de tumores malignos da hipofaringe foi de aproximadamente 38%, estimada para cinco anos com uma censura de apenas 5%. A taxa de sobrevida relativa é diminuída uma vez que cerca de 45% dos casos, o diagnóstico é feito tardiamente. O presente estudo também avaliou as alterações citogenéticas nucleares de pacientes portadores de câncer na região da hipofaringe. Foram analisados 36 indivíduos do grupo de casos, constituído de pacientes diagnosticados com tumores de hipofaringe, e 36 indivíduos saudáveis do grupo controle. Para obtenção dos dados foram considerados hábitos de consumo como tabagismo e etilismo e principalmente o tempo de exposição. Foram contadas 5000 células por indivíduo e as freqüências de micronúcleo, binucleadas, broken eggs e demais aberrações nucleares, foram calculadas para ambos os grupos. A freqüência de micronúcleo mostrada entre o grupo controle e o de casos não apresentaram diferença estatística. Porém, foi observado, por parte do grupo de casos, um grande número de células com broken eggs e binucleadas. Tais resultados demonstraram diferença estatística (p = 0,03). A binucleação e a formação de dois núcleos em forma de broken egg sugere que agentes como o tabaco e o alcoolismo crônico podem estar relacionados com a indução e progressão de tumores em pessoas susceptíveis, devido à capacidade desses mutágenos afetarem o ciclo celular. Dentre os fatores que geram controvérsias, podemos destacar o achado freqüente de variados tipos de HPV em mucosa oral normal, numa incidência que varia de 0% a quase 100% em diversos estudos, com numerosos métodos de identificação, incluindo entre eles um método altamente sensível, a PCR. A importância da infecção pelo HPV na carcinogênese de células epiteliais é suportada pela capacidade dos HPVs de alto risco, principalmente os tipos 16 e 18, de imortalizar os queratinócitos orais, quando em análise in vitro. O processo de imortalização pode envolver a desativação de proteínas supressoras de tumores pré-formadas pelas oncoproteínas virais, o bloqueio da transcrição de genes supressores de tumores como resultado da inserção do oncogene do HPV, ou a estimulação da transcrição do oncogene celular pela inserção de seqüências ativadoras de transcrição derivadas do próprio genoma do HPV. No presente estudo, o grupo amostral foi constituído de 24 pacientes diagnosticados com carcinoma de hipofaringe. Os casos foram obtidos do Registro de Câncer de Base Populacional de Goiânia/GO da Associação de Combate ao Câncer em Goiás. Todos os pacientes considerados foram diagnosticados como carcinomas de hipofaringe (CID-O: C12.0 a C13.9). Todas as amostras foram submetidas a uma PCR com os primers genéricos MY09/11 e GP05/06 para detecção em amplo espectro do genoma de HPV. Posteriormente, utilizou-se a mesma abordagem, com os primers tipo-específico para HPVs 6, 11, 16, 18, 33, 35, 45 e 58. Em 9 das 24 amostras utilizadas, foi observada amplificação com os primers genéricos, identificando-se o genoma de HPV em 37,5% (6/24) dos casos. Em 67% (6/9) das amostras, o genoma viral foi detectado por MY09/11 e em 33% (3/9) pelos primers GP05/06. As amostras positivas foram então submetidas a uma segunda PCR para a genotipagem dos HPVs, tendo sido observados os tipos 16, 18 e 45. Os tipos virais mais associados ao câncer da hipofaringe, no presente estudo, foram os HPV 16 e 18, presente em 6 amostras e o HPV45, encontrado em 1 amostra. Em um paciente foi observada a co-infecção de tipos virais de HPVs 16 e 18. Contudo, mesmo diante de tantas pesquisas realizadas, há muito para ser explorado, apesar de uma hipótese possível para a carcinogênese ser a interação sinérgica de carcinógenos químicos, virais, oncogenes e genes supressores de tumores.

O nucléolo é uma organela nuclear responsável pela produção dos ribossomos, através das Regiões Organizadoras do Nucléolo (NORs). Espécies que possuem mais de um par de cromossomos contendo NORs terão, obrigatoriamente, pelo menos um par ativo, sendo as demais NORs funcionais de acordo com a demanda celular. O mecanismo de compensação de dose é visualizado e bem estabelecido em híbridos interespecíficos, conhecido como dominância nucleolar, com a inativação de NORs de um dos parentais por outras homeólogas ativas que as dominam. A arquitetura da cromatina nas NORs e o controle da sua expressão foram estudados com o objetivo de se entender os mecanismos envolvidos no fenômeno da dominância nucleolar em espécies diplóides que possuem múltiplas NORs. A espécie modelo utilizada neste estudo foi Crotalaria juncea (Leguminosae-Papilionoideae), caracterizada por conter 2n=2x=16, e NORs no braço curto do cromossomo 1, sendo este o principal organizador do nucléolo, e no braço longo do cromossomo 4 adjacente à heterocromatina centromérica, sendo este um sítio adicional (sítio menor) e de expressão facultativa, previamente determinada. Nas raízes de C. juncea sincronizadas, observou-se que a nucleologênese tem seu início durante o final da telófase, em que os 4 sítios de genes ribossomais podem ter atividade e formar até 4 nucléolos, os quais tendem a se fundir durante a interfase. A Hibridação in situ fluorescente (FISH) permitiu estudos da arquitetura da cromatina, com a visualização dos territórios cromossômicos, onde a cromatina não está organizada de forma aleatória dentro do núcleo, e consequentemente o rDNA 45S dentro do nucléolo. Observou-se também que todos os sítios de rDNA 45S possuem diferença no tamanho do arranjo repetitivo. Assim sendo, a hierarquia de dominância está de acordo com o tamanho de cada arranjo (sítio), e estes são ativados de acordo com a demanda celular. As análises das modificações nas histonas mostraram que a H3K9Met1 apresentou marcas fracas no nucléolo, enquanto no restante da cromatina nuclear sua marcação foi intensa. Já a H3K9Met2 apresentou marcação fortemente associada à cromatina presente no nucléolo, com alguns pequenos pontos heterocromáticos dispersos no núcleo. Pela observação entende-se que ambas metilações controlam diferentes tipos de heterocromatinas, ou seja, a H3K9Met2 controla principalmente heterocromatinas associadas aos genes ribossomais, e a H3K9Met controla heterocromatinas não associadas ao rDNA. O rDNA é hiperacetilado dentro do nucléolo para a H3K14. Não foi observada marcação nucleolar para H4K8ac, mas pôde ser observadas regiões hiperacetiladas em outras regiões da cromatina. A metilação do DNA esteve diretamente associada à diferentes níveis de organização da cromatina das NORs. As heterocromatinas adjacentes ao nucléolo apareceram fortemente metiladas, enquanto a cromatina distendida dentro do nucléolo apresentou marcação dispersa, com algumas regiões mais fortemente marcadas, onde a cromatina apresentava-se mais condensada e provavelmente não associados com a cromatina ativa. As fibras estendidas permitiram uma análise de alta resolução, onde foi possível observar que regiões não metiladas apareciam intercaladas entre grandes regiões fortemente metiladas, sugerindo que estas regiões hipometiladas estão, possivelmente, associadas com as alças de transcrição dentro do nucléolo. 12 Esses resultados contribuem para o entendimento sobre o controle genético e epigenético na arquitetura da cromatina ribossomal, bem como seu controle na expressão dos genes ribossomais no genoma das plantas. / The nucleolus is a nuclear organelle responsible for the ribosomes production, by Nucleolus Organizer Regions (NORs). Species presenting more than one chromosome pair with NORs should present, one pair expressing the genes, at least; while the other pairs expressing their genes accordingly to cellular demand. Dosage compensation mechanism is visualized and well established of interspecific hybrids as a well-described phenomena named nucleolar dominance, where a NOR from one parental could lead to inactivation of a NOR from the other parental which is dominated. The chromatin architecture and expression of the NORs were studied to address the mechanism involved in the nucleolar dominance of diploid species containing multiple sites of 45S rDNA. The model species used in the present study was the crop Crotalaria juncea (Leguminosae-Papilionoideae) characterized by 2n=2x=16 chromosomes, being the main NOR mapped into chromosome 1 short arm and presenting an additional site (minor site) in the chromosome 4 long arm adjacent to a centromeric heterochromatin and facultatively expressed. Synchronized meristematic root tip cells determined to nucleologenesis starts during the late-telophase, often expressing every ribosomal gene sites, when up to four nucleoli could be observed and these become merged during interphases. FISH allowed nucleolar chromatin architecture be accessed revealing distinct chromosomal domains (territories), suggesting a non-random distribution of the 45S rDNA, even between homologous chromosomes, into the nucleolus. The 45S rDNA sites from both chromosome pairs 1 and 4 of C. juncea showed differences in their array sizes. The differences in the 45S rDNA array sizes and the order of loci expression suggest a hierarchy of dominance, a feature of nucleolar dominance; being the small RONs activated only on demand. Immunodetection of histone modifications showed different patterns to methylation distribution across the chromatin as a whole; where H3K9Met1 was found mainly distributed along the nuclear chromatin without an evident signal into nucleolus, while H3K9Met2 was detected as conspicuous dots in the nuclear chromatin and highly accumulated into the nucleolus. The results indicate different control on heterochromatin establishment and maintenance, being the modifications specific to certain chromosomal regions. Indeed, H3K9Met is a key component in the nucleolus chromatin architecture and expression. The chromatin inside the nucleolus showed a high accumulation of H3K14ac, with a weak fluorescent signal along the nucleus; on the other hand H4K8ac showed a strong signal homogenously distributed across the nuclear chromatin, but without evident signals inside the nucleolus. DNA methylation was directly associated with different levels of chromatin organization of the NORs. The heterochromatic regions associated to RON are highly methylated, while the chromatin inside the nucleolus showed weaker signals, with some bright spots probably in condensed regions and related to chromatin inactivity. Extended DNA fiber allowed a higher resolution mapping that revealed long methylated regions intermingled by nomethylated ones, being the last probably associated to transcriptional loops of rRNA genes into the nucleolus. The results presented herein contributes to a better understand about the nucleolar chromatin architecture and the genetic and epigenetic control of the ribosomal genes expression on plant genomes.