Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-10-02T21:33:20Z No. of bitstreams: 1 2018_MiltonRegodePaulaJunior.pdf: 8442618 bytes, checksum: 6b582db99e5fe3171d556dff5616c008 (MD5) / Approved for entry into archive by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-10-09T18:34:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_MiltonRegodePaulaJunior.pdf: 8442618 bytes, checksum: 6b582db99e5fe3171d556dff5616c008 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-09T18:34:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_MiltonRegodePaulaJunior.pdf: 8442618 bytes, checksum: 6b582db99e5fe3171d556dff5616c008 (MD5) Previous issue date: 2018-10-09 / A Mielofibrose (MF), conhecida também como Metaplasia Mielóide Agnogênica ou Mielofibrose Crônica Idiopática, é a menos frequente das neoplasias mieloproliferativas, sendo uma doença clonal ocasionada pela transformação neoplásica de célula hematopoiética pluripotente acompanhada de alterações reacionais intensas do estroma medular com fibrose colagênica, osteoesclrose e angiogênese. A MF é caracterizada por citopenias e/ou leucocitose, leucoeritroblastose, fibrose progressiva da medula óssea e hematopoiese extramedular com esplenomegalia. A patogênese molecular ainda é desconhecida e envolve várias alterações citogenéticas. O principal objetivo deste estudo foi investigar a presença de rearranjos cromossômicos em pacientes com MF. A análise cromossômica por microarranjos (CMA) permitiu ampliar o alcance e a sensibilidade na detecção de deleções e duplicações submicroscópicas para a compreensão de seus papéis que podem influenciar o diagnósitico, prognóstiico e evolução da MF e tem revelado alterações associadas à MF. Foram selecionados 16 pacientes, sendo 13 com mielofibrose primária e 3 pacientes com MF pós TE (MF pós trombocitemia Essencial). Em todos eles foi realizada uma investigação de alterações cromossômicas submicroscópicas por meio da CMA utilizando a plataforma Affymetrix CytoScan™750k (Affymetrix, EUA) e CytoScan HD. A citogenética convencional revelou anormalidades cromossômicas em 3 dos 16 casos (18,75%), enquanto que a análise de microarranjos cromossômicos detectou variações no número de cópias (CNV) ou segmentos de perda de heterozigose (LOH) em 10 de 16 (62,5%) pacientes. Estes incluíram 48 LOHs, 14 deleções, uma trissomia e uma duplicação. Dez pacientes apresentaram anormalidades cromossômicas múltiplas, variando de duas a treze CNVs ou LOHs. As alterações incluíam um total de 6196 genes, sendo 69 já associados com cânceres e 17 descritos em neoplasias hematológicas. Considerando que a maioria das CNV identificadas foram menores do que a resolução do cariotipo e a alta freqüência de LOHs em nosso estudo, propomos que as plataformas de microarranjo cromossômico que combinem oligos e polimorfismo de único nucleotídeo (SNP) devem ser investigadas como um teste genético de primeira linha para auxiliar o diagnóstico em pacientes com mielofibrose. / Myelofibrosis (PM), also known as Agnogenic Myeloid Metaplasia or Idiopathic Chronic Myelofibrosis, is the least frequent of myeloproliferative neoplasms. It is characterized by a clonal disease caused by the neoplastic transformation of pluripotent hematopoietic cells accompanied by intense reactional alterations of the medullary stroma with collagen fibrosis, osteosclerosis and angiogenesis. It is characterized by cytopenias and / or leukocytosis, leukoeritroblastosis, progressive fibrosis of the bone marrow and extramedullary hematopoiesis with splenomegaly. Molecular pathogenesis is still unknown and involves several cytogenetic changes. The main goal of this study was to investigate the presence of chromosomal rearrangements in patients with MF Chromosome Microarray Analysis (CMA) has allowed increasing the sensitivity in the detection of submicroscopic deletions and duplications and the understanding of their roles in the pathogenic processes and has revealed alterations associated with MF. Sixteen patients were selected, 13 of whom had primary myelofibrosis and 3 patients with myelofibrosis pos- ET. In all of them, an investigation of submicroscopic chromosomal alterations was performed using the Affymetrix CytoScan ™ 750k (Affymetrix, USA) and CytoScan HD platform. Conventional cytogenetics revealed chromosomal abnormalities in 3 of the 16 cases (18.7%), whereas the analysis of chromosomal microarrays detected variations in number of copies (CNV) or loss of heterozygosity change (LOH) in 10 of 16 (66,5%) patients. These included 48 LOHs, 14 deletions, one trisomy and one duplication. Ten patients had multiple chromosomal abnormalities, ranging from two to thirteen CNVs or LOHs. The alterations encompassed a total of 6196 genes, 69 asociated to cancers and 17 described in hematological malignancies. Considering that most of the CNVs identified were smaller than the resolution of the karyotype and the high frequency of LOHs in our study, we propose that chromosomal microarray platforms that combine oligos and single nucleotide polymorphism (SNP) should be used as a genetic test of the first line to aid the diagnosis in patients with myelofibrosis.

O comportamento meiótico e viabilidade do pólen foram estudados em 23 acessos de sete taxa de Lupinus ocorrentes no Rio Grande do Sul. Para as espécies L. lanatus, L. rubriflorus, L. multiflorus, L. paranensis, L. bracteolaris, L. guaraniticus e Lupinus sp., o pareamento cromossômico foi regular com preferencial formação de bivalentes, mas a ocorrência de alguns poucos quadrivalentes foi observado em um acesso de Lupinus sp e presença de quadrivalentes, associações múltiplas e aderência cromossômica foi evidenciada em um acesso de.L. guaraniticus. O índice meiótico e a estimativa da viabilidade do pólen foram superiores a 90% em todos os acessos e espécies analisadas, como reflexo da regularidade meiótica, indicando serem plantas meióticamente estáveis. Números cromossômicos de (2n=36) foram determinados pela primeira vez para L. guaraniticus e L. paraguariensis e confirmados números de 2n=36 para L. lanatus, L. rubriflorus e 2n=34 para L. bracteolaris ocorrentes no Rio Grande do Sul. Em 13 acessos analisados de Lupinus sp provenientes do Peru e Bolívia foi observado 2n=48 cromossomos, e 2n=36 em dois acessos de Lupinus cf. bandelierae da Bolívia. No híbrido ornamental Lupinus Russel foi observado 2n=48 cromossomos. As duas espécies unifolioladas norte americanas L. cumulicula e L. villosus exibiram número cromossômico de 2n=52, diferindo dos demais números conhecidos para as Américas. Os dados cromossômico obtidos neste trabalho aliados aos da literatura reforçam a idéia de que os lupinos andinos formam um grupo citológico diferenciado dentro do gênero, que os lupinos do sudeste da América do Sul são também um grupo citologicamente diferente da maioria dos demais taxa americanos, e que os lupinos unifoliolados norte americanos e os brasileiros não são diretamente relacionados.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-09T13:02:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1723079 bytes, checksum: 74b5fa05ccc4aa2d6f6e11bb50931a0e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T13:02:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1723079 bytes, checksum: 74b5fa05ccc4aa2d6f6e11bb50931a0e (MD5) Previous issue date: 2001-03-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Capsicum é um dos membros mais importantes, economicamente, da família Solanaceae. De suas 25 espécies, cinco são extensivamente cultivadas, principalmente pelo seu valor agronômico como especiaria. Apesar desta importância econômica, estudos citogenéticos para a compreensão de aspectos carioevolutivos das espécies de Capsicum ainda não foram realizados. C. annuum L., a espécie mais cultivada do gênero, não teve seu cariótipo claramente caracterizado quanto à morfologia cromossômica. No presente trabalho, diversas técnicas citogenéticas foram aplicadas em linhagens e variedades cultivadas de Capsicum annuum L., com o objetivo de caracterizar o cariótipo da espécie. A eficiência dos pré-tratamentos, utilizando 8-hidroxiquiloneína, amiprofos-metil, orizalina, trifluralina e brometo de etídio, em diferentes concentrações e tempos de exposição, foi verificada em meristemas radiculares. A preparação das lâminas pela técnica de dissociação celular e secagem-ao-ar com maceração enzimática foi realizada em cromossomos fixados. Com metodologias citogenéticas de coloração convencional e bandeamentos DAPI, Q, C e NOR (Ag-NOR), foi possível elaborar cariogramas e idiogramas, pelo cálculo do índice centromérico, da área e do perfil de densidade óptica média e pelas medidas absolutas e relativas dos cromossomos. Dentre as principais características citogenéticas encontradas, nas amostras estudadas, destacou-se o cariótipo com 2n=24 cromossomos, composto de 11 pares metacêntricos, semelhantes morfologicamente, e 1 par acrocêntrico. Não se observaram regiões positivas em cromossomos submetidos às técnicas de bandeamento DAPI, Q e C. A técnica de bandeamento NOR (Ag-NOR) evidenciou apenas uma região organizadora nucleolar localizada, distalmente, no braço curto do par cromossômico de número 8. Verificou-se a presença de outras constrições secundárias, que sugerem ser vestígios citogenéticos de rearranjos por fusão de cromossomos. / Economically, Capsicum is one of the most important members of the Solanaceae family. Five of its 25 species are extensively cultivated, mainly because of its agronomic value as spices. Despite its economical importance, cytogenetic studies for the comprehension of the caryevolutionary aspects of the Capsicum species still have not been made. This way, C. annuum L. hasn't had its caryotype clearly characterized as far as its morphology chromosome. In this study many cytogenetic techniques were applied to lines and variety of C. annuum L. cultivated, with the main goal of having its caryotype characterized. The efficiency of the pre-treatment using 8- hydroxiquilonein, amiprophos-metil, oryzalin, tryfluralin and ethidium bromide, in different concentration and exposition time, was verified in radical meristems. The slide preparation using the cell disassociation technique and air dryness with enzymatic maceration was done in fixed chromosomes. With cytogenetic methodology of conventional coloring and banding DAPI, Q, C and NOR (Ag-NOR) it was possible to elaborate caryograms and idyograms, by the index of the centromeric calculus, the area and the profile of optical median density and by absolute and relative measurements of the chromosomes. Among the mainly cytogenetic characteristics found, distinguish the caryotype with 2n=24 chromosomes, formed by 11 metacentric pairs, morphologically similar, and one nucleolar organized region, located at the end of the short arm on the number 8 pair. It was verified the presence of other secondary constrictions, which suggested being cytogenetic vestiges of rearrangements by fusion of chromosomes. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Cleber Casali (clebercasali@ufv.br) on 2017-06-01T18:20:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 814506 bytes, checksum: 72a5b8760b3236d37f898dddf3ac222a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T18:20:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 814506 bytes, checksum: 72a5b8760b3236d37f898dddf3ac222a (MD5) Previous issue date: 2004-07-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As espécies do gênero Melipona são conhecidas como abelhas indígenas sem ferrão. Apresentam grandes relevâncias econômica e ecológica devido à sua importância na polinização e na produção de mel. Até o momento foram estudadas citogeneticamente 16 das 42 espécies descritas do gênero. Na citogenética, a utilização das endonucleases de restrição in situ (REs) tem se mostrado muito útil, por produzir informações sobre a constituição da cromatina. O presente trabalho teve como objetivos utilizar duas REs seguidas da coloração com fluorocromos, para obter informações a respeito da composição e organização da cromatina das três espécies do gênero Melipona (M. bicolor, M. quadrifasciata e M. subnitida); incrementar o entendimento dos mecanismos de atuação das enzimas de restrição in situ; e, com base no padrão de bandeamento, inferir sobre as relações de parentesco entre as espécies estudadas. Os cromossomos metafásicos foram tratados com a combinação das REs HaeIII e DraI, com os fluorocromos QM e CMA 3 , obtendo, assim, quatro tratamentos para cada espécie. As presenças ou ausências de bandas foram analisadas e os cladogramas, montados com o auxílio do programa PAUP ® . Foi reconhecida uma nova modalidade de atuação das REs nos cromossomos das espécies estudadas, que resultou no aumento da fluorescência de algumas regiões dos cromossomos. Os tratamentos com as REs parecem ter amplificado as marcações dos fluorocromos, provavelmente devido à descondensação do DNA, que aumentou a acessibilidade dos fluorocromos. A utilização dos caracteres obtidos com a aplicação das REs produziu um cladograma informativo, no qual se percebe uma grande divergência entre as espécies M. bicolor e M. subnitida. / The bees of genus Melipona are known as stingless indigenous bees. They have great economical and ecological relevance due to their importance on pollination and honey production. Until present, 16 out of 42 species of Melipona have been cytogenetically studied. In cytogenetics, the use of in situ restriction endonucleases (REs) has been very useful for generating information towards a better comprehension of the nature of chromatin. The objective of this work was to apply two REs, followed by fluorochrome dying, to characterize chromatin composition and organization in three species (M. bicolor, M. quadrifasciata and M. subnitida); and infer about the degree of similarity among these species. Metaphase chromosomes were treated with the combination of the REs HaeIII and DraI with fluorochromes QM and CMA 3 , representing four treatments for each species. The presence or absence of bands were recorded as characters and a Neighbor Joining analysis was carried out with PAUP*. Combination of REs action and fluorochromes resulted in the increase of fluorescence at some regions of the chromosomes, probably because of the DNA decondensation, which increased the accessibility of the fluorochromes. REs patterns suggest greater divergence between the species M. bicolor and M. subnitida.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-04T18:14:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 492073 bytes, checksum: 6ad56958fb94f4a0587a049b848c5bd2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-04T18:14:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 492073 bytes, checksum: 6ad56958fb94f4a0587a049b848c5bd2 (MD5) Previous issue date: 2001-03-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A família Coccinellidae (Coleoptera) apresenta, aproximadamente, 4.000 espécies. Muitas delas têm sido utilizadas com eficiência tanto em programas de manejo de pragas quanto em estudos relacionados com impacto ambiental, causado por plantas transgênicas. As análises citogenéticas, na família Coccinellidae, espécies, foram sendo que realizadas a maioria somente em, aproximadamente, 4,3% das restringiu-se à descrição do número de cromossomos. Neste trabalho, foram realizadas análises citogenéticas em Eriopis connexa, Olla v-nigrum e Cycloneda sanguinea, visando: 1. adaptar a técnica para obtenção de cromossomos em células mitóticas e meióticas; 2. determinar o número e morfologia dos cromossomos metafásicos por coloração convencional; 3. avaliar o comportamento dos cromossomos durante a meiose, descrevendo o sistema de determinação sexual; 4. caracterizar a distribuição da heterocromatina constitutiva utilizando banda-C, banda HSS (Hot Saline Solution), enzimas de restrição (Msp-I e Hae-III) e fluorocromo (CMA 3 ); 5. aplicar metodologia de banda Ag-NOR para localizar a atividade gênica da região organizadora de nucléolo; 6. mapear, por meio de FISH, os cromossomos carreadores de genes rDNA. O número cromossômico foi 2n=18+XX para fêmeas e 2n=18+Xy para os machos, em todas as espécies. A única espécie que apresentou um cromossomo B eucromático restrito a fêmeas foi E. connexa. A meiose dos machos revelou a meio-fórmula n=9+Xy p , e o modo de associação dos cromossomos sexuais foram do tipo pára-quedas, em todas as espécies. Em C. sanguinea, durante a prófase I (paquíteno), a associação dos cromossomos sexuais ocorreu de maneira ponta-a- ponta linearmente até formar um pseudo-anel. Os resultados das metáfases mitóticas avaliadas por banda NOR, tanto em E. connexa quanto em C.sanguinea , mapearam a região organizadora de nucléolo ativa em um par autossômico. A análise com fluorocromo CMA 3 , realizada em E. connexa, foi consistente com a banda NOR sendo positiva nesta região. Em células meióticas de O. v-nigrum, a região NOR ativa esteve presente na vesícula sexual, sendo confirmada por FISH com genes rDNA. Entretanto, os resultados das análises da mitose e meiose de C. sanguinea , por banda NOR e coloração seqüencial FISH/AgNOR, foram controversos. Os genes ativos localizaram-se em um par autossômico (metáfase espermatogonial), porém a vesícula sexual (prófase I) e o lúmen do pára-quedas (metáfase I) ficaram fortemente impregnados por prata. O FISH mapeou os genes rDNA fora da vesícula sexual. Com base nestes resultados sugeriu-se que essas substâncias sejam proteínas nucleolares, sintetizadas pelo par autossômico e importadas durante a associação dos cromossomos sexuais (prófase I). Tanto em C. sanguinea quanto em E. connexa, a heterocromatina constitutiva avaliada por banda-C, localizou-se principalmente na região pericentromérica de todos os cromossomos. Esta região foi rica em pares de base GC (digerida pela Hae III). Entretanto, alguns blocos de heterocromatina constitutiva (telômeros) não foram digeridos. A banda HSS (Hot Saline Solution) extraiu toda a heterocromatina, sugerindo-se que a heterocromatina seja rica, também, em seqüências repetitivas de bases AT, conferindo, portanto, uma natureza molecular heterogênea. A utilização da enzima Msp-I forneceu resultado negativo. / The family Coccinellidae (Coleoptera) comprises about 4,000 species in which some environmental of them disturbance are used studies in pest caused by management transgenic programs plants. and in Cytogenetic analyses of Eriopis connexa, Olla v-nigrum and Cycloneda sanguinea were made with the following purposes: 1. Modification of methodology with the purpose of obtaining best mitotic and meiotic chromosome preparations; 2. Establishment of number and morphology of mitotic chromosomes obtained by conventional staining; 3. Evaluation of meiotic chromosome behavior and description of sexual determination system; 4. Characterization of constitutive heterochromatin by C-band, HSS-band (Hot Saline Solution), restriction enzymes (Msp-I and Hae III), and CMA 3 fluorochrome; 5. Determination of genetic activity of NOR-region by Ag-NOR band; 6. Application of FISH methodology with the purpose of locating the chromosomes with rDNA genes. All the species studied showed 2n = 18 + XX for females and 2n = 18 + Xy for males. E. connexa was the only species with an euchromatic B-chromosome in female individuals. The male meiosis showed n= 9 + Xy p , with a parachute association of sexual chromosomes in all species studied. In prophase I of C. sanguinea , the association of sexual chromosomes were initially end -to-end, finishing in a pseudo-ring formation. The NOR-band technique in E. connexa and C. sanguinea showed the nucleolar organizing region in a pair of autosomic chromosomes. These chromosomes in E. connexa were also stained by CMA 3 fluorochrome. Both NOR and CMA 3 bands stained the same chromosome region. In meiotic cells of O. v -nigrum, an active NOR-region was observed in sexual vesicle, which was confirmed by FISH/rDNA probe. However, the results of C-band and sequential staining by FISH/agNOR were controversial. The functional genes were located in an autosomic pair (spermatogonial metaphase); however, the sexual vesicle (prophase I) and the parachute lumen (metaphase I) were staining strongly with Ag. The FISH methodology showed the rDNA genes out of the sexual vesicle. These results suggested that nucleolar proteins made in the autosomic pair were imported during the association of sexual chromosomes (prophase I). Both in C. sanguinea and E. connexa, constitutive heterochromatin showed by C-band was found mainly in pericentromeric regions of all chromosomes. These regions were GC-rich (digested by Hae III), but some heterochromatic blocks (telomere) were not digested by Hae III). The HSS band extracted all the heterochromatin, suggesting that this chromosome region was also AT-rich with a heterogeneous molecular nature. A negative result was seen with digestion by Msp I restriction enzyme. / Tese importada do Alexandria

LIMA, Diego Silva. Avaliação dos genes MLL, RB e TP53 em pacientes com síndrome mielodisplásica. 2011. 95 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:56:53Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_dslima.pdf: 4024143 bytes, checksum: 0a18d4cb329d542975fac3641f5bbd03 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:59:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_dslima.pdf: 4024143 bytes, checksum: 0a18d4cb329d542975fac3641f5bbd03 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-03T12:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_dslima.pdf: 4024143 bytes, checksum: 0a18d4cb329d542975fac3641f5bbd03 (MD5) Previous issue date: 2011 / Myelodysplastic syndromes (MDS) represent a heterogeneous group of clonal disorders affecting the hematopoietic pluripotent cell, characterized by low cell counts in peripheral blood, dysplasia in one or more cell lines, inefficient hematopoiesis and increased risk of progression to acute myeloid leukemia. Although the disease can affect patients of other age groups, they are more frequent in those with advanced age with an average 60 to 75 years at diagnosis. Chromosomal abnormalities are observed in approximately 50% of all cases of MDS and are related with clinical and morphological findings. The aim of this study was to determine, through the technique of FISH (fluorescence in situ hybridization), the frequency of changes involving the MLL, RB, and TP53 genes in patients with MDS and associate these changes with cytogenetic findings. The cases included in the study were selected in the ambulatory of SMD from University Hospital Walter Cantídio. Thirty three patients were selected, 17 had aged over 60 years. 52% of patients were classified, according to WHO criteria, as refractory cytopenia with dysplasia in multiple lineages (RCDM) and 61% stratified, according to IPSS, as intermediate risk 1 (INT-1). 78% of patients had abnormalities detected by cytogenetics, among them 31% had complex karyotypes (more than 3 changes per metaphase). 18% of patients had changes at least in one of the three genes valued in this study by FISH. Three patients showed alterations of TP53 gene, being detected in two patients (records 31 and 6) the deletion of a single allele or both alleles of the gene, respectively, and in the third (record 2), we detected amplification of TP53 gene, all this changes were not detected by classical cytogenetics, because it is a less sensitive technique. 6% of patients (records 7 and 22) had rearrangement of MLL gene. In the first case, FISH discarded the gene deletion alleged by cytogenetic, proving that it was present in the genome of the patient, but in a rearranged form, and in the second case cytogenetics failed to demonstrate rearrangement of the gene. For the RB gene, FISH identified only one patient (3%) with deletion of one allele of the gene, and this change was also not detected by classical cytogenetics. During evaluating the TP53 gene, FISH allowed identification of two patients (records 5 and 10) presenting at least six extra copies of chromosome 17, probably representing a small hyperdiploid clone partially detected in the first patient and not detected in the second . In the six patients who showed abnormalities of the genes analyzed, FISH has provided information that added, changed or confirmed the result previously given by classical cytogenetics, which are a major application of this technique due to its high sensitivity compared to the traditional method. / As síndromes mielodisplásicas (SMD) representam um grupo heterogêneo de doenças clonais que acometem a célula precursora hematopoética pluripotente, caracterizando-se por baixa contagem de células no sangue periférico, displasia em uma ou mais linhagens celulares, hematopoese ineficiente, além do risco aumentado de progressão para leucemia mielóide aguda. Embora a doença possa acometer pacientes de outras faixas etárias, é mais frequente naqueles com idade avançada, com média ao diagnóstico de 60 a 75 anos. As anormalidades cromossômicas são observadas em aproximadamente 50% de todos os casos de SMD, estando, em alguns casos, relacionadas com achados clínicos e morfológicos. O objetivo deste trabalho foi determinar, através da técnica de FISH (hibridização in situ por fluorescência), a frequência de alterações envolvendo os genes MLL, RB e TP53 em pacientes com SMD e associar estas alterações com os achados citogenéticos. Os casos inseridos no estudo foram oriundos do ambulatório de SMD do Hospital Universitário Walter Cantídio. Dos 33 pacientes selecionados, 17 pertenciam ao grupo com idade acima de 60 anos. 52% dos pacientes foram classificados, segundo a OMS, como citopenia refratária com displasia em múltiplas linhagens (CRDM) e 61% estratificados, segundo o IPSS, como de risco intermediário 1 (INT-1). Um total de 78% dos pacientes apresentaram alterações citogenéticas, dentre eles 31% possuíam cariótipos complexos (mais de 3 alterações por metáfase). A técnica de FISH permitiu identificar em 18% dos pacientes alterações envolvendo um dos três genes avaliados. Três pacientes apresentaram alteração do gene TP53, sendo detectada em dois deles (registros 31 e 6) a deleção de um único alelo ou de ambos os alelos do gene, respectivamente, e no terceiro (registro 2), detectou-se a amplificação do gene TP53, sendo estas alterações não visualizadas através da citogenética clássica, por se tratar de um técnica menos sensível. Detectou-se em 6% dos pacientes (registros 7 e 22) rearranjo do gene MLL, no primeiro a FISH descartou a suposta deleção do gene alegada pela citogenética, provando que o mesmo estava presente no genoma do paciente, porém de forma rearranjada e no segundo a citogenética não conseguiu demonstrar o rearranjo do gene. Quanto ao gene RB, a FISH permitiu identificar apenas um paciente (3%) com deleção de um dos alelos do gene, sendo esta alteração também não detectada pela citogenética clássica. A FISH possibilitou identificar, durante a avaliação do gene TP53, dois pacientes (registros 5 e 10) apresentando pelo menos 6 cópias extras do cromossomo 17, devendo essa alteração se tratar de um pequeno clone hiperdiplóide detectado parcialmente no primeiro paciente e não detectado no segundo. Nos seis pacientes que apresentaram alteração dos genes avaliados, a FISH proveu informações que adicionaram, confirmaram ou alteraram o resultado previamente emitido pela citogenética clássica, sendo estas uma das principais aplicações desta técnica devido sua alta sensibilidade quando comparada ao método clássico.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7199_Micheli Sossai Spadeto.pdf: 1074523 bytes, checksum: 2ccb0312d06bd6cb23fd34afb8d8d8c0 (MD5) Previous issue date: 2015-02-28 / CAPES / As técnicas de cultura de tecidos in vitro podem gerar subsídios à propagação e manutenção do germoplasma de espécies florestais de interesse, como Myrsine coriacea (Sw.) R.Br. ex Roem. & Schult. (Primulaceae). Essa espécie vem se destacando na indústria farmacêutica por produzir substâncias como o ácido mirsinóico B, de efeito antinociceptivo e a proteína lectina, com ação potencial na cura do câncer. Além disso, o estabelecimento in vitro de M. coriacea, é importante no fornecimento de material vegetal (folhas e raízes) para análises citogenéticas e de citometria de fluxo, que podem ser utilizadas para a caracterização cariotípica da espécie. Com base no exposto, o presente trabalho teve como objetivos: estabelecer um protocolo de propagação in vitro para M. coriacea, mensurar o conteúdo de DNA nuclear e determinar o número cromossômico dessa espécie. Desse modo, plântulas de M. coriacea foram obtidas por duas vias de propagação in vitro: germinação de sementes maduras e regeneração a partir de embriões zigóticos imaturos. A maior frequência de germinação (100%) foi observada para sementes previamente tratadas com HCl 10% e inoculadas em meio MS suplementado com 10.74 µM de ácido giberélico, no qual, as primeiras plântulas foram geradas após 41 dias de cultivo. Na embriogênese somática, utilizando embriões zigóticos imaturos, calos friáveis e embriões somáticos foram obtidos em meio MS suplementado com 4.44 µM de 6-benzilaminopurina, sendo que as plântulas foram regeneradas após 120 dias de cultivo. Folhas e raízes das plântulas obtidas in vitro foram utilizadas nas análises de citometria de fluxo, as quais revelaram uma variação intraespecífica no conteúdo de DNA nuclear de M. coriacea. Tal variação se confirmou nas análises citogenéticas, onde alguns indivíduos apresentaram 2n = 45 e outros 2n = 46 cromossomos. Tendo em vista a dioicia em M. coriacea, os dados sugerem que essa variação esteja relacionada à presença de cromossomos sexuais. Além disso, grupos de pares de cromossomos morfologicamente idênticos também foram observados indicando uma possível origem poliploide da espécie. Os resultados obtidos nesse estudo contribuem com estudos sobre determinação do sistema sexual, evolução e cultivo in vitro do gênero Myrsine. / In vitro tissue culture techniques can generate subsidies for the propagation and germplasm maintenance of forest species of interest such as Myrsine coriacea (Sw.) R. Br. Ex Roem. & Schult. (Primulaceae). This species has been highlighted in the pharmaceutical industry for producing substances like mirsinoic acid B, showing analgesic effects, and the lectin protein, with potential câncer - healing action. Thus, the establishment and in vitro culture of M. cor iacea is a potential alternative for the production of these substances and the generation of seedlings for reforestation programs. Besides the economic relevance, M. coriacea is a dioecious species with male and female representatives clearly defined in the reproductive period. Based on the above, this study aimed to establish a protocol for in vitro propagation of M. coriacea, measure the nuclear DNA content and determine the chromosome number of the species. M. coriacea seedlings were obtained by in vitro propagation thro ugh two routes: mature seed germination and regeneration from immature zygotic embryos. The highest frequency of germination (100%) was observed for seeds previously treated with 10% HCl and inoculated in medium MS (Murashige and Skoog) supplemented with 10.74 mM of gibberellic acid, in which the first seedlings were generated after 41 days of culture. In somatic embryogenesis using immature zygotic embryos, friable calli and somatic embryos were obtained in medium MS s upplemented with 4.44 μM of 6 - benzylaminopurine, and the plantlets were regenerated after 120 days of cultivation. Leaves and roots of the seedlings obtained in vitro were used in flow cytometric analysis, which revealed an intraspecific variation in nucle ar DNA content in M. coriacea. This variation was confirmed by cytogenetic analysis, xv where some individuals showed 2n = 45 and others 2n = 46 chromosomes. Given the dioecy of M. coriacea, the data suggest that this variation is related to the presence of sex chromosomes. Furthermore , groups of morphologically identical chromosome pairs were also observed indicating a possible polyploidy origin of the specie. The establishment of the in vitro culture protocol for M. coriacea enabled the mass propagation of the species and is useful for the large - scale production of plants with reduced time and space. The flow cytometry and cytogenetic data showed for the first time that the male and female individuals of M. coriacea differ in DNA content and chromosome number

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:11:54Z : No. of bitstreams: 1 lopes_at_me_jabo.pdf: 1243839 bytes, checksum: 8708fa8a3a2a924bf7100eb2b3992e01 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A família Chrysopidae, pertencente à ordem Neuroptera, é a mais numerosa, compreendendo mais de 1200 espécies válidas, distribuídas em várias regiões do mundo, principalmente na Neotropical. A classificação desta família em gêneros e espécies é baseada em estudos da morfologia externa e da genitália de machos e fêmeas adultos. No entanto tem-se buscado novas metodologias para auxiliar tanto na taxonomia, quanto no conhecimento da evolução. A citogenética é uma ferramenta bastante importante para o conhecimento da extensão da biodiversidade, pois a partir de diferenças presentes nos cromossomos podem-se distinguir grupos, bem como padrões de evolução. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar citogeneticamente 18 espécies de crisopídeos de ocorrência em Jaboticabal – SP., quanto ao número diplóide, morfologia e tamanho dos cromossomos, sistema cromossômico sexual, e quando possível, analisar o comportamento meiótico. Os cromossomos foram obtidos a partir de preparações gonadais masculinas e femininas de indivíduos adultos e de embriões, submetidos à coloração convencional e fotografados com câmara MOTICAM acoplada a microscópio e software IMAGE da Motic. Das 18 espécies analisadas, somente em Chrysoperla defreitasi não foi possível observar o par heteromórfico, no entanto as demais espécies exibiram sistema sexual do tipo XY/XX. O número diplóide variou entre 2n=16 nas espécies do gênero Leucochrysa a 2n=6 em Chrysopodes delicata, e esta diferença refletiu na morfologia cromossômica e permitiu diferenciar algumas das espécies. Nas espécies em que foram obtidas células meióticas observou-se a formação de bivalentes autossômicos com quiasmas terminais e univalentes sexuais assinápticos e aquiasmáticos / The family Chrysopidae, belonging to the Neuropteran order, is the most numerous, comprising more than 1200 valid species, distributed in various regions of the world, mainly in the Neotropical. The classification of this family into genera and species is based on the study of external morphology and male and female adults genitalia. However, new methods to assist the taxonomy and the evolution have been studied. The cytogenetic is a very important tool for to understand the extent of biodiversity, because the differences in the chromosomes can be distinguished group, and pattern of evolution. The objective of this study was to perform cytogenetic analysis of 18 species of green lacewings of occurrence in the city of Jaboticabal – SP, characterizing them as to the diploid number, shape and size of chromosomes, and when was possible, analyzed the meiotic behavior. The chromosomes preparations were obtained from adults male and female gonodals and embryos that were conventional stained and photographed with a MOTIC camera coupled in a microscope and software IMAGE from Motic. Of the 18 species analyzed, only Chrysoperla defreitasi was not possible to observe the heteromorphic pair, however the other species exhibited sexual system of the type XY / XX. The diploid number varied from 2n = 16 in the genus Leucochrysa to 2n = 6 in Chrysopodes delicata, and this difference reflected in chromosome morphology and allowed to differentiate some of the species. In the species in which meiotic cells had obtained it was possible observed the formation of autosomal bivalents with terminal chiasmata and univalents sex without chiasmata and synaptic

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:03:23Z : No. of bitstreams: 1 cabraldemello_d_dr_botib.pdf: 1654082 bytes, checksum: 7e6b12e5a0a939210a7949c8a83f729c (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O mapeamento cromossômico de seqüências repetitivas de DNA tem se mostrado uma eficiente ferramenta nos estudos comparativos e evolutivos em diversos organismos. Estudos cromossômicos com besouros da subfamília Scarabaeinae têm revelado ampla variabilidade, entretanto a análise da organização cromossômica de DNAs repetitivos neste grupo é escassa e direcionada unicamente ao mapeamento do DNA ribossomal (DNAr) 18S. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar cromossomicamente DNAs repetitivos em espécies de Scarabaeinae, utilizando bandeamentos cromossômicos e mapeamento físico cromossômico de seqüências repetitivas, incluindo famílias multigênicas de RNAr 18S, RNAr 5S e histona H3 e a fração de DNA C0t-1. Ampla variabilidade foi observada relacionada ao número/localização dos sítios de DNAr 18S, aparentemente associada a diversificação da heterocromatina. Por outro lado, os genes de RNAr 5S e histona H3, mostraram-se amplamente conservados e co-localizados em um par cromossômico, com aparente intercalação. Análises em representantes de Dichotomius revelaram conservação dos blocos de heterocromatina, entretanto com aparente compartimentalização dos mesmos. O uso da fração DNA C0t-1 confirmou o enriquecimento em DNAs repetitivos da heterocromatina, que se apresentou diversificada entre as espécies, utilizando como referência D. geminatus. Por outro lado, regiões terminais dos cromossomos apresentaram-se amplamente conservadas entre as seis espécies. Além disso, a análise da fração de DNAs repetitivos em D. geminatus indicou origem intraespecífica do cromossomo B desta espécie que possivelmente pode estar sofrendo homogeneização com seqüências encontradas no complemento A. Os resultados indicam distintos padrões de diversificação para o DNA repetitivo nos representantes de Scarabaeinae, sugerindo extensiva reorganizaçãomicrogenômica ao longo / The chromosomal mapping of repeated DNAs has been used as an efficient tool in comparative and evolutionary studies in some organism. The chromosomal studies in beetles belonging to the subfamily Scarabaeinae have revealed wide variability, although the analysis of chromosomal organization of repeated DNAs in this group is scarce and directed solely for 18S rDNA mapping. The present study aimed in chromosomal characterization of repeated DNAs in Scarabaeinae species using chromosomal banding and physical chromosome mapping of repeated sequences, including the multigene families for 18S and 5S rRNAs and H3 histone genes and the C0t-1 DNA fraction. Wide variability was observed concerning the number and location of 18S rDNA sites, apparently associated to the heterochromatin diversification. On the other hand, the 5S rRNA and H3 histone genes were widely conserved and co-located in one chromosomal pair, showing apparently interspersion. Analysis in Dichotomius representatives revealed conservation for heterochromatic blocks, although an apparent compartmentalization was observed. The use of C0t-1 DNA fraction confirmed the heterochromatin repeated DNAs enrichment, which is diversified among the species, using as reference D. geminatus. On the other hand, the terminal regions of the chromosomes were highly conserved among the six species. Moreover, the analysis of repeated DNA fraction from D. geminatus indicated intraspecific origin of a B chromosome in this species that possibly could be suffering homogenization with A complement sequences. The results indicate distinct diversification patterns for repeated DNAs in Scarabaeinae representatives, suggesting extensive microgenomic reorganization along the cladogenesis of the group

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissFMC.pdf: 1515469 bytes, checksum: fcd2cdfc67729e91afea6c9a579f0879 (MD5) Previous issue date: 2004-12-21 / Willing to develop the number cytogenetically reports on fish species belonged to the Loricariidae family, the actual work had as the basic aim to feature chromosomically three specimen of fishes from the basin of the Piracicaba river: Hypostomus albopunctatus; Liposarcus anisitsi and Corumbataia cuestae. The specimen H. albopunctatus and L. anisitsi which were previously feature cytogenetically in other basins and these cytogenetically data are correlated to the data obtained on this work, concerning to the species C. cuestae, the cytogenetically data obtained puts together the first feature of chromosome framing of a specie belonging to this king. The samples were exposed to conventional and differential cytogenetically methodologies, involving bandings-C, Ag- RON e FISH (hybridization fluorescent in situ) with probe 18S. The specimen H. albopunctatus and L. anisitsi were collected in Piracicaba river (Piracicaba country, SP), the H. albopunctatus, showed 2n=74 chromosomes (10M, 20SM, 44ST/A) the parts organized of nucleolus were seen as diversified, with until 3 chromosome marked by Silver Nitrate, featuring on this specie multiple RONs, being acrocentric chromosome with terminal bandings on short arms and of small submetacentric pair with telomeric bandings on short arms, coinciding to the results obtained by de FISH technique. The preparations to marking C, made it clear large heterochromatin interstitial arm of a acrocentric chromosomal pair, on short arm of a submetacentric pair pericentromeric marking of a long arm of a large metacentric pair beyond short markings in centromeric parts of chromosomal submetacentric. The samples of L. anisitsi showed 2n=52 chromosome (16M, 28SM, 6ST, 2A), after Silver Nitrate staining, the markings were placed on terminal position of a long arm by a submetacentric chromosomal pair, featuring a single RON, confirmed by FISH. The cytogenetical result obtained with two specimen on the actual work when compared to the same specimen already described belonged to other basins they show a considered conservation state. Differences were found, however, we might suggest that these specimen seem to be cytogenetically very preserved when we compare the cytogetical results already obtained to the species H. albopunctatus and L. anisitsi available in literature. The specie Corumbataia cuestae, colleted at Lapa river (Itirapina county-SP), showed 2n=54 chromosomes (28M; 20SM; 6ST/A) just to Nucleolus Organized Regions were observed, placed on the terminal part of short arm from number 2 pair featured as metacentric, and they were seen as heteromorphic thought the size, sequential analysis of metaphases in Giemsa/Silver and Giemsa/banding-C, discovered that the secondary constrictions correspond to RONs. The constitutive heterochromatin pattern is observed clearly nucleolus chromosomal pair, with large pericentromeric heterochromatic blocks. The results obtained to offer new subsidy for studies evolution of Loricariídae, to open perspective for best understanding of correlations between species of Hypostominae and Hypoptopomatinae. / Com intuito de incrementar o número de registros citogenéticos em espécies de peixes pertencentes à família Loricariidae, o presente trabalho teve como objetivo básico caracterizar cromossomicamente três espécies de peixes da bacia do rio Piracicaba: Hypostomus albopunctatus e Liposarcus anisitsi pertencentes à subfamília Hypostominae, e Corumbataia cuestae pertencente à subfamília Hypoptopomatinae. As espécies H. albopunctatus e L. anisitsi já foram previamente analisadas em outras bacias e os dados citogenéticos disponíveis são correlacionados a aqueles ora obtidos neste trabalho. Quanto à espécie C. cuestae, os dados citogenéticos obtidos constituem a primeira caracterização da estruturação cromossômica de uma espécie pertencente a este gênero. Os exemplares foram submetidos a metodologias citogenéticas convencionais, complementadas com bandamento-C, Ag-RON e FISH (hibridação fluorescente in situ) com sonda de rDNA 18S. As espécies H. albopunctatus e L. anisitsi foram coletadas no rio Piracicaba (município de Piracicaba, SP) H. albopunctatus, apresentou 2n=74 cromossomos (10M, 20SM, 44ST/A). As regiões organizadoras de nucléolo foram detectadas em até três cromossomos, pelo tratamento com o Nitrato de Prata, caracterizando RONs múltiplas, sendo um cromossomo acrocêntrico, com marcações terminais no braço longo e um par de submetacêntricos pequenos, com marcações teloméricas nos braços curtos, coincidindo com os resultados obtidos pela técnica de FISH. O bandamento C evidenciou grandes blocos de heterocromatina constitutiva na região intersticial do braço longo de um par de cromossomos acrocêntricos, no braço curto de um par de submetacêntricos, marcações pericentroméricas no braço longo de um par de metacêntricos grandes, além de marcações tênues em regiões centroméricas de cromossomos submetacêntricos. L. anisitsi apresentou 2n=52 cromossomos (16M, 28SM, 6ST, 2A). As Ag-RONs se localizaram na posição terminal do braço longo de um par de cromossomos submetacêntricos, caracterizando RONs simples, confirmadas por FISH. A heterocromatina constitutiva apresentou-se localizada em blocos bem evidentes no braço longo do par de cromossomos submetacêntricos portador da RON, adjacente à este sítio, na porção terminal do braço longo de um par submetacêntrico grande e também na região intersticial do braço longo de um par de cromossomos acrocêntricos grandes. Os resultados citogenéticos obtidos com essas duas espécies, mostram uma boa correlação com os resultados descritos para espécimens pertencentes a outras bacias, sugerindo uma estabilidade cariotípica entre diferentes populações dessas espécies. A espécie Corumbataia cuestae, coletada no córrego da Lapa (município de Itirapina-SP), apresentou 2n=54 cromossomos (28M; 20SM; 6ST/A). Apenas duas regiões organizadoras de nucléolos foram observadas, localizadas na região terminal do braço curto do par metacêntrico número 2, apresentandose heteromórficas quanto ao tamanho. Análises seqüenciais das metáfases coradas pelo Giemsa/ Nitrato de Prata/ bandeamento C, evidenciaram que as constricções secundárias no par número 2 correspondem as RONs. Regiões heterocromatina constitutiva são observadas nitidamente nesse par de cromossomos, com grandes blocos pericentroméricos. Os resultados obtidos oferecem novos subsídios para os estudos evolutivos dos Loricariídae, abrindo perspectivas para uma melhor compreensão das correlações entre as espécies de Hypostominae e Hypoptopomatinae.