Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / A tolerância ao lipopolissacarídeo (LPS) ocorre quando animais e células expostas ao LPS tornam-se hiporesponsivas a uma subseqüente dose de LPS. Acredita-se que esse mecanismo esteja envolvido na diminuição da resposta celular observada em pacientes com sepse grave e choque séptico. O objetivo do estudo foi avaliar a indução da tolerância em monócitos de voluntários sadios, em sangue total, após a exposição in vitro ao LPS, medido pela detecção de citocina intracelular e espécies reativas de oxigênio (EROs). Material e métodos: As células do sangue periférico foram condicionadas com pequenas dses de LPS por 18h e desafiadas com diferentes agonistas dos Toll-like receptors (lipopeptídeo ativador de macrófagos (MALP-2), flagelina e LPS) e bactérias gram-negativa (Pseudomonas aeruginosa) e gram-positiva (Staphylococcus aureus) mortas por calor ou condicionadas com pequenas doses de MALP-2 por 18h e desafiadas com MALP-2 ou LPS. Para detecção da interleucina-6 (IL-6) intracelular, amostras de sangue total foram estimuladas por 6h. Os monócitos foram identificados pelos parâmetros de dispersão frontal e dispersão lateral e positividade para CD14. As amostras foram marcadas para a verificação da produção de IL-6 intracelular nos monócitos por citometria de fluxo. Para indução de EROs, o sangue total foi estimulado por 30 minutos com LPS, P. aeruginosa, S. aureus. A produção de espécies reativas de oxigênio foi medida por citometria de fluxo pela detecção do 2’,7’ diclorofluoresceína-diacetato. Resultados: O condicionamento com doses crescentes de LPS resultou em menor detecção de IL-6 intracelular nos monócitos após desafio com LPS. Efeito similar foi observado com MALP-2, P. aerugionosa, S. aureus, mas não com a flagelina. O condicionamento com MALP-2 e desafio com MALP-2 ou LPS não resultou em menor detecção de IL- 6 intracelular nos monócitos. O condicionamento com 15ng/mL de LPS, por outro lado, resultou numa produção de EROs preservada ou aumentada nos monócitos após o desafio com LPS, P. aeruginosa, S. aureus. Conclusão: O fenômeno da tolerância envolve uma regulação complexa, na qual a produção de citocinas pró-inflamatórias, como a IL-6, está diminuída, enquanto a produção de EROS está preservada ou até aumentada. / Tolerance to lipopolyssacharide (LPS) occurs when animals or cells exposed to LPS become hyporesponsive to a subsequent challenge of LPS. This mechanism is believed to be involved in the down-regulation of cellular responses observed in patients with severe sepsis and septic shock. The aim of this investigation was to evaluate the induction of tolerance in monocytes of healthy volunteers, in whole blood, after LPS-exposition in vitro, assessed by intracellular cytokine detection and reactive oxygen species (ROS) generation. Material and Methods: Peripheral blood cells were conditioned with small doses of LPS for 18h and challenged with different agonists of Toll like receptors (Macrophage-activating lipopeptide-2 (MALP-2), Flagellin and LPS) and whole gram-negative (Pseudomonas aeruginosa) and gram-positive (Staphylococcus aureus) killed bacteria or conditioned with small doses of MALP-2 for 18h and challenged with MALP-2 or LPS. For detection of intracellular interleukin-6 (IL-6) samples of whole blood were stimulated for 6h. Monocytes were identified by forward scatter and side scatter parameters and CD14 positive staining. The samples were stained to verify the intracellular production of IL-6 on monocytes by flow cytometry. For induction of ROS, whole blood was stimulated for 30 minutes with LPS, P. aeruginosa and S. aureus. ROS production was measured by flow cytometry, using 2’,7’- dichlorfluorescein-diacetate detection. Results: The conditioning with increasing doses of LPS resulted in lower intracellular detection of IL-6 in monocytes after the challenge with LPS. Similar effect was observed with MALP-2, P. aeruginosa, and S. aureus, but not with Flagellin. The conditioning with MALP-2 and challenge with MALP-2 or LPS did not result in lower intracellular detection of IL-6 in monocytes. LPS conditioning with 15ng/mL of LPS, on the other hand, resulted in preserved or increased production of ROS in monocytes after challenge with LPS, P. aeruginosa and S. aureus. Conclusion: The phenomenon of tolerance involves a complex regulation, in which the production of pro-inflammatory cytokines such as IL-6 is diminished, whereas the production of ROS is preserved or even increased. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A tuberculose é considerada um problema de saúde pública mundial. Estima-se que um terço da população mundial está infectada pelo Mycobacterium tuberculosis. Trabalhos avaliando a interação patógeno vs. hospedeiro tem incentivado o estudo dos mecanismos envolvidos na resposta imunológica inicial nos indivíduos infectados e doentes. A participação dos linfócitos T na resposta contra a micobactéria tem destacado a importância dessas células na imunopatogênese. Uma subpopulação de linfócitos T, as células T γδ têm sido investigada quanto à sua participação na resposta imunológica, principalmente frente a processos infecciosos e inflamatórios. Essas células carregam cadeia TCR γδ, atuam tanto na resposta inata como na adaptativa e são encontradas em epitélios de alguns órgãos e no sangue periférico. Duas subpopulações são predominantes no sangue periférico, aquelas expressando TCR Vγ2Vδ2 e outras expressando TCR VγnVδ1. A subpopulação Vδ2 tem demonstrado reatividade a produtos micobacterianos, enquanto que os mecanismos específicos das células T Vδ1 permanecem desconhecidos. Este trabalho propôs investigar através da citometria de fluxo a distribuição dos linfócitos T γδ, Vδ1 e Vδ2 na infecção pelo M. tuberculosis. Este trabalho foi realizado com amostras de pacientes com tuberculose pulmonar na fase aguda e durante terapia específica, indivíduos expostos ao M. tuberculosis e controles saudáveis. Nós encontramos uma diminuição na freqüência de células T Vδ2 nos pacientes com tuberculose, permanecendo estável durante terapia. Ao contrário as células T Vδ1 revelaram tanto uma freqüência aumentada na fase aguda, como também aumento contínuo ao longo da terapia específica. Com base no impacto da doença na freqüência desses linfócitos T γδ, acreditamos que essas células estejam envolvidas na resposta imunológica inicial contra a micobactéria, e que exista uma provável função complementar dessas células com as xi células T αβ. Nós recomendamos futuros estudos para explorar e avaliar a funcionalidade das células T Vδ1 e Vδ2, esses dados serão de grande valia para melhor compreender a contribuição dessas células na resposta imune durante a tuberculose. / Tuberculosis is an enormous challenge to global health. One third of the world’s population is estimated to be infected by the Mycobacterium tuberculosis. Previous reports assessing the interaction between the pathogen and the host have promoted further studies on the mechanisms involved during the innate immune response of infected individuals. The participation of T lymphocytes in the response against the mycobacterium has revealed the importance of these cells in immunopathogenesis of the disease. The γδ T cells, a subset of T lymphocytes, have been investigated with regard to their participation in the immune response, mainly against infectious and inflammatory processes. These cells express TCR γδ chains, participating in innate as well as adaptive responses, and are found in the epithelium of some organs and in the peripheral blood. There are two predominant subsets of cells in the peripheral blood: those expressing TCR Vγ2Vδ2 chains and those expressing TCR VγnVδ1 chains. The Vδ2 subset has demonstrated reactivity to compounds produced by M. tuberculosis, while the specific mechanisms of Vδ1 T cells remain unknown. Using flow cytometry, this study aims were to investigate the frequency of both Vδ1 and Vδ2 subsets of γδ T cells in Mycobacterium tuberculosis infection. This study was performed with samples that include acute tuberculosis patients, those receiving specific therapy, exposed individuals, and healthy controls. We found that the frequency of Vδ2 T cells was diminished in tuberculosis patients, and remained steadily low during specific therapy. In contrast, the Vδ1 T cells subset displayed not only increased frequency at acute phase, but also continued to rise throughout the course of specific therapy. Based on the impact of the disease on the γδ T cells frequency, we believe that these cells may be involved in an innate immune response xiii against the mycobacterium. Additionally, it is likely that they play a complementary role to αβ T cells during infectious processes. We recommend future studies to explore and evaluate the funcionality of Vδ1 and Vδ2 T cells in order to better understand the contribution of these subsets in the immune response during tuberculosis infection. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / A leptospirose constitui uma importante zoonose, encontrada em regiões de clima tropical, ocorrendo principalmente em épocas chuvosas. O controle da infecção depende do adequado reconhecimento do microorganismo pelos receptores de reconhecimento de padrão de patógenos, os TLRs, presentes nas células do sistema imune inato do hospedeiro. A ativação dos TLRs é fundamental para o desencadeamento da resposta inflamatória, mediadora da resposta de proteção e de lesão no processo infeccioso. Objetivos: Avaliar a expressão dos receptores TLR2, TLR4 e CD14 na superfície de monócitos e a resposta in vitro aos estímulos LipL32 (extraído de Leptospira sp.), MALP-2 (antígeno sintético de Mycoplasma fermentans) e LPS (antígeno extraído de Salmonella abortus equi) ligantes dos TLRs, medida pela produção de citocinas, em pacientes com leptospirose. Métodos: Foram incluídos 07 pacientes com quadro clínico e laboratorial de leptospirose e 07 voluntários sadios, utilizados como controle. As células mononucleares do sangue periférico (CMSP) foram separadas utilizando ficoll-paque, congeladas e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelamento, verificação da viabilidade e acerto da concentração de células para 1x106 células/mL foi mensurada a expressão de TLR2, TLR4 e CD14 na superfície de monócitos. O restante da suspensão de células foi incubada por 6 horas com os estímulos de 1000ng/mL de LipL32, 0,4U/mL de MALP-2 ou 100ng/mL de LPS. Após a primeira hora de incubação foi adicionado monensina para bloqueio da secreção de citocina. Em seguida, as CMSP foram marcadas com CD14, fixadas, permeabilizadas e expostas aos anticorpos anti-IL-6 e anti-TNF-α para detecção intracelular da produção destas citocinas inflamatórias nos monócitos. Foram adquiridos 10.000 eventos combinado-se morfologia e positividade para CD14 em citometria de fluxo. Resultados: Não foi observada diferença significativa na resposta inflamatória entre pacientes com leptospirose e voluntários sadios quando CMSP foram estimuladas in vitro com MALP-2 e LipL32 para indução da produção de citocinas inflamatórias (IL-6 e TNF-α) em monócitos. Todavia, a produção de TNF-α foi menor após estímulo com LPS (p=0,035), o que não ocorreu com a produção de IL-6. Em relação à expressão de receptores de superfície, foi observado aumento da expressão de TLR2 (p=0,025) na superfície de monócitos dos pacientes, porém não houve diferença na expressão de TLR4 e CD14. Conclusões: Neste estudo demonstramos que a capacidade de reconhecimento de antígenos pelos monócitos do sangue periférico de pacientes com leptospirose está preservada ou aumentada. Além disso, observamos que a produção de citocinas inflamatórias frente a antígeno da própria Leptospira (LipL32) e outro antígeno agonista de TLR2 (MALP-2) está mantida. Entretanto, a produção de citocina inflamatória frente ao LPS (agonista de TLR4) mostrou-se complexa podendo estar influenciada pela tolerância cruzada. / The Leptospirosis is one of the world's most important zoonoses, found in regions of tropical climate, occurring mainly in rainy seasons. The control of infection depends on the proper recognition of the microorganism by receptors for recognition of patterns of pathogens, the TLRs present in the cells of the innate immune system of the host. The activation of TLRs is crucial for triggering the inflammatory response, mediator of the response of protection in case of injury and infection. Objectives: To evaluate the expression of receptors TLR2, TLR4 and CD14 on the monocytes surface in vitro and response to stimuli LipL32 (extracted from Lestospira sp.), MALP-2 (synthetic antigen of Mycoplasma fermentans) and LPS (antigen extracted from bacteria-gram negative) binders of TLRs, as measured by production of cytokines in patients with leptospirosis. Methods: 07 patients with clinical and laboratory of leptospirosis were included and 07 healthy volunteers, used as controls. The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were separated using ficoll-paque, frozen and stored in liquid nitrogen. After thawing, checking the feasibility and wisdom of the concentration of cells to 1x106 células/mL was measured the expression of TLR2, TLR4 and CD14 on the monocytes surface. The rest of the cell suspension was incubated for 6 hours with the stimuli of 1000ng/mL of LipL32, 0.4 U / mL of MALP-2 or 100ng/mL of LPS. After the first hour of incubation was added monensin for blocking the secretion of cytokine. Then the PBMC were stained with CD14, set, permeabilizaded and exposed to anti-IL-6 and anti-TNF-α for detection of intracellular production of inflammatory cytokines in monocytes. They were acquired 10,000 events combined to morphology and positive for CD14 in flow cytometry. Results: There was no significant difference in the inflammatory response among patients with leptospirosis and healthy volunteers when PBMC were stimulated in vitro with MALP-2 and LipL32 to induce the production of inflammatory cytokines (IL-6 and TNF-α) in monocytes. However, the production of intracellular of TNF-α was lower after stimulation with LPS (p = 0035), which did not occur to the production of IL-6. Regarding the expression of surface receptors, it was observed increased expression of TLR2 (p = 0025) on the monocytes surface of patients, but there was no difference in the expression of TLR4 and CD14. Conclusions: This study demonstrated that the ability of recognition of antigens by peripheral blood monocytes of patients with leptospirosis is preserved or increased. Also, we observed that the production of inflammatory cytokines in front of the Leptospira antigen (LipL32) and another antigen agonist of TLR2 (MALP-2) is maintained. Meanwhile, the production of inflammatory cytokine front of LPS (agonist of TLR4) proved to be complex may be influenced by cross tolerance. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

SOLON, Vitória Régia Magalhães. Estudo das subpopulações linfocitárias em sangue periférico de pacientes com hanseníase. 2012. 78 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-05T12:08:54Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_vrmsolon.pdf: 935285 bytes, checksum: a169aa20171b463c5e9f2e88152b971a (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-05T12:09:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_vrmsolon.pdf: 935285 bytes, checksum: a169aa20171b463c5e9f2e88152b971a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-05T12:09:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_vrmsolon.pdf: 935285 bytes, checksum: a169aa20171b463c5e9f2e88152b971a (MD5) Previous issue date: 2012 / Leprosy is a chronic infectious disease caused by the Mycobacterium leprae, a resistant alcohol-acid bacillus. It has a high infectivity, although the pathogenicity is low. Clinical manifestations present a great diversity. Host immune response is an important determinant of this clinical diversity, whilst lymphocytes collaborate to it. Thus, the present study aimed to describe lymphocyte subpopulations: T lymphocytes (CD3+), T helper lymphocytes (CD4+), T cytotoxic (CD8+), T CD4+CD8+, B (CD19+), Natural killers-NK (CD3- CD16+ CD56+) and T Natural killers - NKT (CD3+CD16+ CD56+) in peripheral blood samples from patients with leprosy, before and after the treatment with multidrugtherapy. Patients were selected at the Dona Libania Dermatology Center, at Fortaleza-CE, Brazil. The determination in each subpopulation of lymphocytes was done by flow-cytometer and statistical analysis by GraphPad Prism 5.0 for Windows. Significance was established at p values of <0.05. A total of 133 samples were studied, while 79 (59,4%) were males and 54 (40,6%)females. Median age of patients was 43 years old for the group before treatment and 46 years old for the group after treatment. Nine patients presented with paucibacillary and 124 with multibacillary form. NK (CD3-CD16+ CD56+) lymphocytes medians cells/mm³) were 142.0 [15,0–463,0] and 189,5 [18,0 – 1037,0], respectively for the groups before and after treatment, with a p value of 0.0484. On the other hand, no differences were observed when pauci and multibacillary groups were compared. T lymphocytes (CD3+), T helper lymphocytes (CD4+), T cytotoxic lymphocytes (CD8+), T (CD4+CD8+), B lymphocytes (CD19+) and NKT lymphocytes (CD3+CD16+CD56+)were similar at the groups before and after treatment and also at pauci and multibacillary. In conclusion, data from this study shows a reduction at NK lymphocytes (CD3-CD16+CD56+) populations in leprosy before any therapeutical intervention. After leprosy treatment, a recovery of this cell population occurs. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae, um bacilo álcool-ácido resistente. Tem alta infectividade, porém baixa patogenicidade, e quando se manifesta, apresenta-se sob uma grande diversidade de formas clínicas. Essa diversidade depende, em grande parte, da resposta imunológica do hospedeiro, sendo os linfócitos, em sua plasticidade, componentes essenciais no desenvolvimento da imunidade. Assim, este trabalho teve como objetivo descrever as subpopulações linfocitárias: linfócitos T totais (CD3+), T auxiliares (CD4+), T citotóxicos (CD8+), T CD4+CD8+, B (CD19+), Natural killers-NK (CD3- CD16+ CD56+) e T Natural killers - NKT (CD3+ CD16+ CD56+) no sangue periférico de pacientes portadores de hanseníase, antes e após uso da multidrogaterapia. Os pacientes foram selecionados no Centro de Dermatologia D. Libânia, Fortaleza-CE, Brasil. A determinação de linfócitos em cada subpopulação foi realizada por citômetria de fluxo e análise estatística pelo programa GraphPad Prism 5.0 para Windows. A significância foi estabelecida para valores de p<0,05. Um total de 133 amostras foram utilizadas para as comparações, sendo 79 (59,4%) do gênero masculino e 54 (40,6%) do gênero feminino. A mediana da idade dos pacientes foi de 43 anos no grupo pré-tratamento e de 46 anos no pós-tratamento. Nove pacientes foram incluídos na forma paucibacilar e 124, na multibacilar. As medianas das contagens (células/mm3) de linfócitos NK (CD3-CD16+ CD56+) nos grupos antes e após tratamento foram 142,0 [15,0–463,0] e 189,5 [18,0 – 1037,0], respectivamente (p=0,0484), enquanto não houve diferenças quando foram comparados os grupos pauci e multibacilar. As contagens de linfócitos T totais (CD3+), T auxiliares (CD4+), T citotóxicos (CD8+), T (CD4+CD8+), B (CD19+), e NKT(CD3+CD16+CD56+) mantiveram-se inalteradas nos grupos antes e pós-tratamento, assim como nos grupos pauci e multibacilar. Em conclusão, os resultados deste estudo apontam para uma redução na população de células NK (CD3-CD16+CD56+) em indivíduos com hanseníase antes de qualquer intervenção terapêutica. Após o tratamento, há uma recuperação na contagem desta população celular.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-graduação Multidisciplinar em Saúde, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:26:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328527.pdf: 1210438 bytes, checksum: 91cbb7b1cf3530706a9f846c4021cbd1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Os cânceres são doenças que apresentam expansão clonal descontrolada de células somáticas, promovendo a ruptura da organização tecidual. O genoma humano possui inúmeros mecanismos de proteção de sua integridade. Quando não ocorre a reparação dos danos no DNA, podem ocorrer desequilíbrios genéticos; entre esses, as aneuploidias, as quais são boas indicadoras da presença de neoplasia, assim como, podem sugerir o prognóstico em vários tumores. Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), a classificação dos tumores dos tecidos hematopoético e linfoide deve ser baseada em uma abordagem diagnóstica com ênfase nos seguintes parâmetros: morfológico, fenotípico, genotípico e características clínicas. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi implantar a análise do conteúdo de DNA, por citometria de fluxo, para avaliação do prognóstico de hemopatias malignas nos pacientes atendidos pelo Serviço de Hematologia do Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina. Para atingir o objetivo, inicialmente a metodologia foi padronizada com células de sangue periférico de oito indivíduos sem neoplasias hematológicas. Após essa etapa, foram iniciados os testes com amostras de medula óssea, sangue periférico, e aspirados e biópsias de linfonodo de pacientes que apresentaram células patológicas no exame imunofenotípico, entre os meses de maio e dezembro de 2013. Na padronização da metodologia, foi estabelecida a utilização de anticorpos monoclonais (AcMo) conjugados ao fluorocromo FITC para não ocorrer interferência com a faixa de emissão da fluorescência do iodeto de propídeo (PI). Os AcMo padronizados para cada doença foram: CD20 e CD22, para Leucemia Linfoblástica Aguda do tipo B (LLA-B) e linfomas; CD 7 para Leucemia Linfoblástica Aguda do tipo T (LLA-T); e CD38, para Mieloma Múltiplo (MM) - todos conjugados ao fluorocromo FITC. No total, foram analisadas 25 amostras de pacientes que apresentaram células patológicas no exame imunofenotípico. A maior quantidade de amostras foi proveniente de pacientes com linfoma- principalmente Linfoma de Burkitt e Linfoma de Células do Manto -, os quais apresentaram 73,3% de presença de aneuploidias. Além disso, também foram analisadas amostras com células de LLA e MM. As LLAs exibiram 100% de presença de aneuploidias; enquanto o MM,25%. A partir deste estudo, foi possível padronizar a metodologia para análise do conteúdo de DNA de linfomas, LLA e MM. Os resultados encontrados indicam que a citometria de fluxo é um bom método para auxiliar na estimativa do prognóstico dos pacientes diagnosticados com neoplasias hematológicas.<br> / Abstract: Cancers are diseases with uncontrolled clonal expansion of somatic cells that promotes breakdown of tissue organization. The human genome has numerous mechanisms to protect its integrity. When the DNA damage repair does not occur, genetic imbalances can happen; among them, the aneuploidies, which are good indicators of malignancy, and may suggest a prognosis in several tumors. According to the World Health Organization (WHO), the classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues should be based on a diagnostic approach with emphasis on the following parameters: morphological, phenotypic, genotypic and clinical characteristics. Therefore, the aim of this study was to implement the analysis of DNA content by flow cytometry in order to assess the prognosis of hematological malignancies in patients treated by the Hematology Service at University Hospital of Universidade Federal de Santa Catarina. Initially, the methodology was standardized with peripheral blood cells of individuals without hematologic malignancies. After, it was performed the tests with samples of bone marrow aspirates, peripheral blood, and lymph node aspirates and biopsies from patients with pathological cells inimmunophenotyping, between May and December 2013. During the development of standardized methodology, it was established the use of monoclonal antibodies (MoAb) conjugated to FITC fluorochrome to prevent the interference with the emission range of propidium iodide(PI) fluorescence. The MoAb standardized for each disease were: CD20 and CD22 for B- Acute Lymphoblastic Leukemia (B-ALL) and lymphomas; CD7 for T- Acute Lymphoblastic Leukemia (T-ALL), and CD38 for Multiple Myeloma (MM) - all conjugated to FITC fluorochrome. A total of 25 samples obtained from patients with pathological cells in immunophenotyping were analyzed. The largest number of samples came from patients with lymphomas, especially Burkitt Lymphoma and Mantle Cell Lymphoma, which showed 73.3% of aneuploidy. Moreover, samples with ALL cells and MM cells were also analyzed. ALL showed the presence of 100% aneuploidy, while the MM, 25%. By the present study, it was possible to standardize the methodology for analysis of DNA content of lymphoma, ALL and MM. The results indicate that flow cytometry is a good method to assist the estimation of prognosis of patients diagnosed with hematological malignancies.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:38:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) luisa_miranda_ipec_dout_2013.pdf: 2382714 bytes, checksum: d55b4e803e3fb5de09cd228382c4aa44 (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A ocorrência de formas graves de esporotricose felina, aliada a lesões sem granulomas e ricas em estruturas leveduriformes, evidencia a suscetibilidade destes animais para a doença e enfatiza a importância do estudo da sua patogenia. O objetivo deste estudo foi descrever o processo inflamatório e a carga fúngica das lesões em diferentes apresentações clínicas, e sua relação com o perfil de leucócitos no sangue periférico de gatos com esporotricose por meio da técnica de citometria de fluxo (CF) e com a infecção pelo Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) e/ou pelo Vírus da Leucemia Felina (FeLV). Gatos com lesões cutâneas com isolamento de Sporothrix sp. foram incluídos no estudo, separados nos grupos L1, L2 e L3 (lesões em um, dois e três ou mais locais, respectivamente) e submetidos a coleta de sangue e de fragmentos de lesão. O estado geral dos animais foi classificado como bom, regular ou ruim. Ao exame histopatológico, as lesões foram agrupadas de acordo com o processo inflamatório (granulomatoso ou inespecífico), grau de ativação de fagócitos predominantes nos granulomas (macrófagos ou células epitelióides), organização do granuloma (bem formado ou mal formado) e intensidade dos tipos celulares no infiltrado A carga fúngica foi verificada pelas técnicas de impregnação pela prata de Grocott (IPG) e imuno-histoquímica (IHQ). A CF foi aplicada no sangue periférico, utilizando anticorpos monoclonais para os marcadores CD4, CD8, CD21, CD14 e granulócitos. Cento e um animais foram incluídos no estudo: 20 do grupo L1, 22 do grupo L2 e 59 do grupo L3. O processo inflamatório granulomatoso supurativo (PIGS) foi observado em 99 casos. A maioria das lesões, sobretudo no grupo L3, apresentavam granulomas mal formados (pvalor= 0,032) e com predomínio de macrófagos (p-valor=0,010). A IPG e a IHQ evidenciaram estruturas leveduriformes (EL) em 94 casos cada uma, sendo a concordância entre as duas observada em 92 casos. As duas técnicas associadas apresentaram sensibilidade de 98,0%. A carga fúngica de mais de 400 EL/ campo (400x) ocorreu em 48,5% dos casos com PIGS e foi predominante nos animais do grupo L3. Houve correlação entre granulomas mal formados e com predomínio de macrófagos e a carga fúngica superior a 100 EL/ campo (p-valor<0,01). A CF foi realizada em 33 casos de esporotricose e cinco animais não infectados (Grupo controle). O percentual de linfócitos T CD8+ foi maior nos animais dos grupos L2 e L3 (p-valor=0,01) O maior percentual de células CD4+ esteve associado ao grupo L1 e ao estado geral bom (pvalor= 0,04 e 0,03, respectivamente). A expressão CD8low ocorreu em 20 animais com esporotricose, sendo predominante no grupo L3 (p-valor=0,01), e não ocorreu no grupo controle. Esta expressão foi associada a granulomas com predomínio de macrófagos (p-valor=0,01) e ocorreu em 76,2% dos casos com carga fúngica acima de 100 EL/campo. Três animais foram positivos para FIV, quatorze para FeLV e dois para os dois testes. Não houve correlação entre estes testes e os demais achados. Estes resultados sugerem associação entre a resposta bem organizada, menor carga fúngica e aumento de linfócitos CD4+ com o controle da doença, manutenção do estado geral bom e lesões localizadas. No estado geral ruim, as lesões disseminadas e alta carga fúngica estavam relacionadas a existência de um padrão de resposta com aumento de células CD8+ e aumento da expressão de CD8low / The occurrence of severe forms of feline sporotrichosis, along with lesions without granulomas and rich in yeast-like forms, demonstrate the su sceptibility of these anim als to the disease and emphasizes the importance of the study of its pathogenesis. The aim of this study was to describe the inflammatory changes and fungal load at different clinical presentations and its relationship with the profile of leukocytes in peripheral blood of cats with sporotrichosis by means of flow cytometry (FC) technique and with Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and / or Feline Leukemia Virus (FeLV). Cats presenting cutaneous lesions with isolation of Sporothrix sp. in culture were included. They were separated in groups L1, L2 and L3 (lesions in one, two and three or more sites, respectively) and were subjected to blood sample collection and to biopsy of the lesion. The general condition of the animal s was classified as good, fair or poor. Histologically, the lesions were described according to the inflammatory process (granulomatous or nonspecific), degree of activation of predominant phagocytes within the granulomas (macrophages or epithelioid cells), granulomas organization (well-formed or poorly formed) and intensity of cell types within the inflammation. The fungal lo ad was assessed by Grocott silver stain (GSS) technique and immunohistochemistry (IHC). The FC was applied to peripheral blood by means of monoclonal antibodies to target CD4, CD8, CD21, CD14 and granulocytes. One hundred and one animals were included: 20 in group L1, 22 in group L2 and 59 in group L3. Histologically, 99 lesions showed suppurative granulomatous inflammation (SGI). Most lesions, specially in the group L3, showed poorly formed granulomas (p-value=0.032) and predominantly macrophages (p-value=0.010). The GSS and IHC s howed yeast-like forms (YF) in 94 cases each one and their concordance was noted in 92 cases. Together, the two techniques showed sensivity of 98.0%. The fungal load of more than 400 YF/Field (400x) occurred in 48,5% of cases by GSS and was predominant in group L3. There was a correlation between poorly formed granulomas with macrophages predominance and the fungal load exceeding 100 YF/Field (p-value<0.01). The CF was performed in 33 cases of sporotrichosis and five uninfected cats (control group). The percentage of CD8 + T cells was greater in the groups L2 and L3 (p-value=0.001). The higher percentage of CD4 + T cells was correlated to group L1 and to good general condition (p- value=0.04 and 0.03, respectively). The reduced expression of the CD8 molecule (CD8low) occurred in 20 animals with sporotrichosis, being predominat in group L3 (p-value=0.01), and was not observed in control group. This expression was associated with granulomas with macrophage predominance (p-value=0.01) and occurred in 76.2% of cases with fungal load above 100 YF/field. Three animals were positive to FIV, four teen to FeLV and two to both tests. There was no correlation between these tests and the other findings. These results suggest an association of the well-organized response, the lower fungal load and increased CD4 + T lymphocytes with the control of the disease, al ong with the good general condition and localized lesions. At the poor general condition, the dissem inated lesions and high fungal load were related to a response patter n with and increase of CD8 + T lymphocytes and particulary of the CD8 low expression.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7199_Micheli Sossai Spadeto.pdf: 1074523 bytes, checksum: 2ccb0312d06bd6cb23fd34afb8d8d8c0 (MD5) Previous issue date: 2015-02-28 / CAPES / As técnicas de cultura de tecidos in vitro podem gerar subsídios à propagação e manutenção do germoplasma de espécies florestais de interesse, como Myrsine coriacea (Sw.) R.Br. ex Roem. & Schult. (Primulaceae). Essa espécie vem se destacando na indústria farmacêutica por produzir substâncias como o ácido mirsinóico B, de efeito antinociceptivo e a proteína lectina, com ação potencial na cura do câncer. Além disso, o estabelecimento in vitro de M. coriacea, é importante no fornecimento de material vegetal (folhas e raízes) para análises citogenéticas e de citometria de fluxo, que podem ser utilizadas para a caracterização cariotípica da espécie. Com base no exposto, o presente trabalho teve como objetivos: estabelecer um protocolo de propagação in vitro para M. coriacea, mensurar o conteúdo de DNA nuclear e determinar o número cromossômico dessa espécie. Desse modo, plântulas de M. coriacea foram obtidas por duas vias de propagação in vitro: germinação de sementes maduras e regeneração a partir de embriões zigóticos imaturos. A maior frequência de germinação (100%) foi observada para sementes previamente tratadas com HCl 10% e inoculadas em meio MS suplementado com 10.74 µM de ácido giberélico, no qual, as primeiras plântulas foram geradas após 41 dias de cultivo. Na embriogênese somática, utilizando embriões zigóticos imaturos, calos friáveis e embriões somáticos foram obtidos em meio MS suplementado com 4.44 µM de 6-benzilaminopurina, sendo que as plântulas foram regeneradas após 120 dias de cultivo. Folhas e raízes das plântulas obtidas in vitro foram utilizadas nas análises de citometria de fluxo, as quais revelaram uma variação intraespecífica no conteúdo de DNA nuclear de M. coriacea. Tal variação se confirmou nas análises citogenéticas, onde alguns indivíduos apresentaram 2n = 45 e outros 2n = 46 cromossomos. Tendo em vista a dioicia em M. coriacea, os dados sugerem que essa variação esteja relacionada à presença de cromossomos sexuais. Além disso, grupos de pares de cromossomos morfologicamente idênticos também foram observados indicando uma possível origem poliploide da espécie. Os resultados obtidos nesse estudo contribuem com estudos sobre determinação do sistema sexual, evolução e cultivo in vitro do gênero Myrsine. / In vitro tissue culture techniques can generate subsidies for the propagation and germplasm maintenance of forest species of interest such as Myrsine coriacea (Sw.) R. Br. Ex Roem. & Schult. (Primulaceae). This species has been highlighted in the pharmaceutical industry for producing substances like mirsinoic acid B, showing analgesic effects, and the lectin protein, with potential câncer - healing action. Thus, the establishment and in vitro culture of M. cor iacea is a potential alternative for the production of these substances and the generation of seedlings for reforestation programs. Besides the economic relevance, M. coriacea is a dioecious species with male and female representatives clearly defined in the reproductive period. Based on the above, this study aimed to establish a protocol for in vitro propagation of M. coriacea, measure the nuclear DNA content and determine the chromosome number of the species. M. coriacea seedlings were obtained by in vitro propagation thro ugh two routes: mature seed germination and regeneration from immature zygotic embryos. The highest frequency of germination (100%) was observed for seeds previously treated with 10% HCl and inoculated in medium MS (Murashige and Skoog) supplemented with 10.74 mM of gibberellic acid, in which the first seedlings were generated after 41 days of culture. In somatic embryogenesis using immature zygotic embryos, friable calli and somatic embryos were obtained in medium MS s upplemented with 4.44 μM of 6 - benzylaminopurine, and the plantlets were regenerated after 120 days of cultivation. Leaves and roots of the seedlings obtained in vitro were used in flow cytometric analysis, which revealed an intraspecific variation in nucle ar DNA content in M. coriacea. This variation was confirmed by cytogenetic analysis, xv where some individuals showed 2n = 45 and others 2n = 46 chromosomes. Given the dioecy of M. coriacea, the data suggest that this variation is related to the presence of sex chromosomes. Furthermore , groups of morphologically identical chromosome pairs were also observed indicating a possible polyploidy origin of the specie. The establishment of the in vitro culture protocol for M. coriacea enabled the mass propagation of the species and is useful for the large - scale production of plants with reduced time and space. The flow cytometry and cytogenetic data showed for the first time that the male and female individuals of M. coriacea differ in DNA content and chromosome number

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-11-10T17:02:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_InovaçõesDiagnósticoMonitoração.pdf: 2809852 bytes, checksum: 5e2dc6ce18b064089906e87dc171d3a6 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-18T14:41:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_InovaçõesDiagnósticoMonitoração.pdf: 2809852 bytes, checksum: 5e2dc6ce18b064089906e87dc171d3a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-18T14:41:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_InovaçõesDiagnósticoMonitoração.pdf: 2809852 bytes, checksum: 5e2dc6ce18b064089906e87dc171d3a6 (MD5) Previous issue date: 2013 / Um dos desafios em relação ao tratamento na fase crônica da doença de Chagas (DCh) são as limitações dos métodos disponíveis para detectar a cura parasitológica nessa fase da infecção. Sendo assim, esse trabalho visa estabelecer uma inovação metodológica na monitoração da cura parasitológica pós-tratamento etiológico da DCh, por meio da técnica de FC-ATE-Triplex, analisando IgG1 anti-T. cruzi. Como metodologia desse trabalho, foi proposto um modelo de pesquisa de anticorpos IgG1 anti-formas evolutivas vivas do T. cruzi (amastigota (AMA), tripomastigota (TRIPO) e epimastigota (EPI) fixada) por citometria de fluxo, empregando um modelo de segregação fluorescente diferencial (fluorescência 1- isotiacianto de fluoresceína) e um sistema de revelação fluorescente complementar (fluorescência 2- estreptoavidina-ficoeritrina). Avaliando a reatividade de IgG1 anti-AMA, TRIPO e EPI em amostras de soros dos grupos tratado curado (TC) e tratado não curado (TNC), as amostras do grupo TC apresentaram uma baixa reatividade e as dos grupo TNC uma alta reatividade com as três formas evolutivas do T. cruzi. Após análise de desempenho dessa nova metodologia, os critérios de interpretação foram: diluição 1:000 e ponto de corte de 40% para AMA e diluição 1:250 e ponto de corte de 20% para TRIPO e EPI. Avaliando a reatividade de IgG1 anti-AMA, TRIPO e EPI pela técnica proposta, em amostras de soros dos grupos não tratado (NT) e não infectado (NI), as amostras do grupo NT apresentaram valores de reatividade positivo e as do grupo NI valores de reatividade negativos com as três formas evolutivas. A reatividade de 28 amostras de soro do grupo tratado em avaliação (TEA) pela técnica de FC-ATE-Triplex revelou que 15 (53,6%) foram negativas com AMA, 11 (39,3%) com TRIPO e 8 (28,6%) com EPI. Avaliando a reatividade de IgG1 anti-AMA, TRIPO e EPI, em amostras de soros dos grupos TC e TNC em novas amostragens populacionais, todas as amostras do grupo TNC foram positivas com as três formas evolutivas, enquanto todas as amostras do grupo TC foram negativas com AMA, 5 das 7 amostras foram negativas com TRIPO e 6 das 7 foram negativas com EPI. Das 24 amostras do grupo TEA de uma nova amostragem populacional testadas pela FC-ATE-Triplex, 7 (29,2%) foram negativas com AMA, 1 foi negativa com TRIPO (4,2%) e 7 foram negativas com EPI (29,2%). A reatividade da FC-ATE-Triplex com o soro de pacientes com leishmaniose visceral (LV) e leishmaniose tegumentar americana (LTA) revelou que das 10 amostras de pacientes com LV, uma (10%) foi positiva com AMA, uma (10%) com TRIPO e duas (20%) com EPI, enquanto que dos 20 pacientes com LTA, 4 (20%) foram positivas com AMA, 6 (30%) com TRIPO e 10 (50%) com EPI. Sendo assim, a técnica de FC-ATE-Triplex apresentou um excelente desempenho na monitoração de cura parasitológica pós-tratamento etiológico, no diagnóstico e no controle de cura parasitológica precoce da doença de Chagas, mesmo quando testada em novas amostragens populacionais. Além do mais, essa nova metodologia, mesmo apresentando resultados falso-positivos, mostrou ser útil na segregação sorológica de pacientes chagásicos e de pacientes portadores de LV e de LTA. A reatividade diferencial observada em AMA, TRIPO e EPI sugere que na técnica de FC-ATE-Triplex existe a segregação de anticorpos pela afinidade pelo antígeno. As formas amastigotas do T. cruzi apresentaram uma maior reatividade, especificidade e mostraram ser boas fontes antigênicas na monitoração da cura parasitológica pós-tratamento etiológico e no controle de cura parasitológica precoce da doença de Chagas. _________________________________________________________________________ / ABSTRACT: One of the challenges regarding treatment in the chronic phase of Chagas disease (DCH) are the limitations of methods available to detect the parasitological cure at this stage of infection. In the present study, we have developed an innovative method to monitoring the parasitological cure after Chagas’ disease etiologic treatment. This method, named FC-ATE-Triplex, is based in simultaneous detection of IgG1 anti-T. cruzi by flow cytometry. It was proposed a model of antibody IgG1anti-live T. cruzi evolutive forms (live amastigotes (AMA) + live trypomastigotes (TRYPO) + fixed epimastigotes (EPI) fixed, using a model of differential segregation fluorescent (Fluorescence 1 - isotiacianto fluorescein) and a system of complementary fluorescence revelation (fluorescence 2 - streptavidin-phycoerythrin). The patients used in this study were divided in five groups: uninfected (NI), untreated (NT), treated cured (TC), treated not-cured (TNC) and treated under evaluation (TUE). The TC group samples showed a low reactivity and the TNC group a high reactivity with the three evolutive forms of T. cruzi. After performance analysis of this new approach, the interpretation criteria established were: 1:000 dilution and cutoff of 40% for AMA and 1:250 dilution and cutoff of 20% for EPI and TRYPO. The NT group samples showed values of positive reactivity and the NI group values of negative reactivity with the three evolutive forms of T. cruzi. The reactivity of 28 sera samples from the group TUE through the technique FC-ATE-Triplex revealed that 15 (53.6%) were negative with AMA, 11 (39.3%) with TRYPO and 8 (28.6%) with EPI. Assessing the reactivity of IgG1anti-AMA, TRYPO and EPI in sera samples of groups TC and TNC in new population samples, all samples of TNC group were positive with the three T. cruzi evolutive forms, while all samples of TC group were negative with AMA, 5 of 7 samples were negative with TRYPO and 6 of 7 were negative with EPI. Of the 24 samples of TUE group of a new population tested by FC-ATE-Triplex, 7 (29.2%) were negative with AMA, 1 was negative with TRYPO (4.2%) and 7 were negative with EPI (29.2%).). The reactivity of FC-ATETriplex with sera from patients with visceral leishmaniasis (VL) and American cutaneous leishmaniasis (ACL) revealed that of the 10 samples from patients with VL one (10%) was positive with AMA, one (10%) with TRYPO and two (20%) with EPI, while from 20 patients with ACL tested, 4 (20%) were positive with AMA, 6 (30%) with TRYPO and 10 (50%) with EPI. Thus, these results showed that FC-ATE-Triplex presented an excellent performance in monitoring of the parasitological cure after etiological treatment, in diagnosis and control of early parasitological cure of Chagas disease, even when tested on new sampling population. Moreover, this new methodology, even with false-positive results, proved to be useful in serological segregation of chagasic patients and patients with VL and ACL. The differential reactivity observed in AMA, TRYPO and EPI suggests that in the technique of FCATE-Triplex there is segregation of antibodies by antigenic affinity. The amastigotes of T. cruzi showed greater reactivity, specificity and to be good antigenic sources in monitoring parasitological cure after etiological treatment and control of early parasitological cure of Chagas disease.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências de Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:39:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 221571.pdf: 1747630 bytes, checksum: 95f6bd779e011abb44f7b39b6e8e3c67 (MD5) / A avaliação dos níveis de apoptose por citometria de fluxo é geralmente realizada por métodos que utilizam anexina V-FITC como marcador vital, que se associa aos resíduos de fosfatidilserina, externalizados no início do processo apoptótico. A utilização conjunta do marcador nuclear fluorescente iodeto de propídio (PI), por sua vez, torna possível verificar as alterações nucleares características dos estágios tardios da apoptose, como resultado do aumento da permeabilidade de membrana. Por outro lado, a utilização de calceína AM e homodímero de etídio (EthD-1) permite a verificação da apoptose através da detecção da diminuição de atividade esterásica intracelular e alterações físico-químicas na membrana celular, através do EthD-1, que combina-se à cromatina à medida que esta se torna condensada. O objetivo deste trabalho foi avaliar e comparar a sensibilidade na avaliação precoce da apoptose dos métodos que utilizam calceína AM e homodímero de etídio aqueles que utilizam anexina V FITC e iodeto de propídio, tomado como método de referência, a partir da marcação de células mononucleares periféricas de pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência adquirida (HIV). As análises por citometria de fluxo foram realizadas após os períodos de incubação de 24 e 48 horas em meio RPMI 1640. Os resultados demonstraram que a metodologia que utiliza calceína AM/ homodímero de etídio apresentou-se mais sensível na quantificação das células apoptóticas em ambos períodos de incubação (Média 46,95% ± 3,56, p<0,0001, para 24 horas e Média 37,67% ± 2,47, p<0,0014 para 48 horas), além de permitir definir com clareza as populações de células viáveis, em apoptose e inviáveis. Tendo em vista que a regulação anormal do processo de morte celular por apoptose está envolvida na patogênese de diversas desordens, incluindo a progressão da infecção pelo HIV, o emprego de metodologias sensíveis de avaliação desse processo, como a calceína AM-EthD-1, pode resultar em importante mecanismo de acompanhamento da progressão de doenças.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:05:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317914.pdf: 3287867 bytes, checksum: 384318c7ee62dcef59b7569f7b16fc5e (MD5) Previous issue date: 2013 / Os resultados dos testes laboratoriais devem ser comparados o intervalo de referência com o objetivo de se obter um diagnóstico e/ou uma decisão terapêutica. Por isso, os laboratórios de análises clínicas necessitam de intervalos de referência confiáveis e aplicáveis a sua população para todos os parâmetros analisados. De maneira geral, os intervalos de referência aplicados nas rotinas laboratoriais são obtidos da literatura ou de informações contidas nas bulas dos fabricantes dos reagentes; não sendo obtidos com resultados referentes à população ao qual será aplicado. Dessa forma, preconiza-se que cada laboratório estabeleça o intervalo de referência referente a sua população, baseado na metodologia utilizada na rotina. Para isso, foi analisado 238 amostras de sangue periférico de indivíduos adultos saudáveis, não fumantes, doadores de sangue do Serviço de Hemoterapia do Hospital Universitário Polydoro Ernani de São Thiago da Universidade Federal de Santa Catarina. Para a identificação e quantificação das células linfoides foi utilizado o seguinte painel de anticorpos monoclonais anti-: CD4/CD8/CD3/CD45, CD20/CD19/CD45, CD16/CD56/CD3/CD45 e TCRaB/TCRyd/CD3/CD45. Os intervalos de referência para encontrados foram CD3+ de 51,3 a 83,5% e de 718 a 2494 células/mm3; CD4+ de 24,4 a 54,2% e de 456 a 1492 células/mm3; CD8+ de 12,8 a 40,2% e de 272 a 1144 células/mm3; relação T CD4+/T CD8+ de 0,68 a 3,61; CD4+ CD8+ de 0,01 a 3,6% e de 2 a 88 células/mm3; TCR aB+ de 44,3 a 77% e de 855 a 2384 células/mm3; TCR yd de 0,99 a 15,9% e de 19 a 345 células/mm3; CD3+ CD4-CD8- de 1,2 a 13,3% e de 28 a 292 células/mm3; CD19+CD20+ de 6,3 a 20,8% e de 110 a 618 células/mm3; CD19+CD20- de 0,001 a 1,3% e de 0 a 23 células/mm3; NK maduras de 3,1 a 27,4% e de 70 a 745 células/mm3; NK imaturas de 0,08 a 1,1% e de 1 a 23 células/mm3; NK totais de 3,7 a 28,5% e de 82 a 760 células/mm3 e NKT de 0,9 a 21,4% e de 18 a 488 células/mm3. Com relação aos gêneros, as células T CD3+, T CD4+, CD4+CD8+, TCR aB+, TCR yd+, CD19+CD20-, NK maduras e imaturas e NKT apresentaram diferenças significativas na contagem de linfócitos tanto para o valor relativo quanto para o absoluto entre homens e mulheres. Por outro lado, as células T CD8+ e CD19+ apresentaram diferenças apenas relacionadas ao valor absoluto e na relação T CD4+/T CD8+ não foram observadas diferenças estatísticas. A comparação entre o intervalo de referência obtido em indivíduos naturais do Estado de Santa Catarina com os de indivíduos de outros Estados do país e de outros países do mundo confirmou a necessidade de se estabelecer intervalos de referência próprios para essa população.<br> / Abstract : The results of laboratory tests should be compared with the reference range in order to obtain a diagnosis and/or treatment decision. Thus, clinical laboratories need reliable and applicable reference intervals for its population for all parameters analyzed. In general, the reference ranges used in clinical laboratories are obtained from literature or information provided by the reagents manufacturers'. Thus, the reference range are not obtained with results concerning the population which will be applied, since few laboratories establish their own reference ranges. Thus, it is recommended that each laboratory establish reference range refeferente its population, based on the methodology used in the routine.With this purpose, we have analyzed 238 peripheral blood samples from healthy adult subjects, nonsmokers, who donated blood in the Hemotherapy Service of Hospital Universitário Polydoro Ernani de São Thiago da Universidade Federal de Santa Catarina. The panel of monoclonal antibodies employed was composed by anti-: CD4/CD8/CD3/CD45, CD20/CD19/CD45, CD16/CD56/CD3/CD45 e TCRaß/TCRyd/CD3/CD45. The reference ranges obtained were: CD3+ 51,3 to 83,5% and 718 to 2494 cells/mm3; CD4+ 24,4 to 54,2% and 456 to 1492 cells/mm3; CD8+ 12,8 to 40,2% and 272 to 1144 cells/mm3; T CD4+/T CD8+ ratio 0,68 to 3,61; CD4+ CD8+ 0,01 to 3,6% and 2 to 88 cells/mm3; TCR aß+ 44,3 to 77% and 855 to 2384 cells/mm3; TCR ?d 0,99 to 15,9% and 19 to 345 cells/mm3; CD3+CD4-CD8- 1,2 to 13,3% and 28 to 292 cells/mm3; CD19+CD20+ 6,3 to 20,8% and 110 a 618 cells/mm3; CD19+CD20- 0,001 to 1,3% and 0 to 23 cells/mm3; mature NK cells 3,1 to 27,4% and 70 to 745 cells/mm3; immature NK cells 0,08 to 1,1% and 1 to 23 cells/mm3; total NK cells 3,7 to 28,5% and 82 to 760 cells/mm3 and NKT cells 0,9 to 21,4% and 18 to 488 cells/mm3. In relation to genders, the CD3+, CD4+, CD4+ CD8+, TCR aß+, TCR yd+, CD19+CD20-, mature and immature NK and NKT cells showed significant differences for both relative and absolute values. Moreover, CD8+ and CD19+ cells differ only when related to absolute values and T CD4+/ T CD8+ ratio had no statistical differences. Comparison between reference ranges obtained in subjects born in Santa Catarina State and individuals from other states of the country or other countries of the world affirmed the need to establish reference intervals for this population.