Orientador: Irene Lorand-Metze / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T02:42:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira-Cunha_FernandaGoncalves_M.pdf: 18014184 bytes, checksum: 6e22ea867f4a1fb74e5f242860b5e339 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A Leucemia aguda se caracteriza pela proliferação clonal da célula tronco hematopoética substituindo o tecido normal da medula óssea. A recente classificação da OMS incorpora características cito genéticas e imunofenotípicas que apresentam impacto prognóstico. Nós examinamos a distribuição e impacto na sobrevida de vários antígenos de linhagem e maturação usados na rotina de imunofenotipagem dos pacientes com leucemia aguda ao diagnóstico.Os casos foram diagnosticados pelo hemograma, citologia da medula óssea, citoquímica, citogenética e imunofenotipagem através de um painel de triagem de 3 cores (CD45, CD3, CD7, CDI9, CD13, CD33 e HLA-DR) e painéis secundários para LLA de linhagem B (CDI0, CD20, k e À de citoplasma e superfície) e LMA (CD2, CDI4, CDI5, CD34, CD56 e MPO). A expressão dos antígenos foi medida pela intensidade média de fluorescência (CMF) por citometria de fluxo usando o programa Paint-a-gate. Nós analisamos 5 pacientes com LLA de linhagem T. Mediana de idade: 29 anos (14-51).80% dos casos foram diagnosticadosapenas com o painel de triagem.O CD13 foi o marcador de linhagem cruzada mais expresso (80%). Analisamos 31 pacientes com LLA de linhagem B. Mediana de idade: 27 anos (7-67). O painel de triagem definiu a linhagem de 61% dos casos e com o secundário diagnosticamos todos os outros. Os antígenos de linhagem cruzada mais expressos foram os CD13 (35%) e CD33 (38%). Na análise multivariada de Cox a idade e o CMF do CD45 foram fatores preditivos de pior sobrevida.Analisamos 35 pacientes com LMA.Mediana de idade: 51 anos (11-79). O painel de triagem definiu todos os casos. Os subtipos FAB predominantes foram M2 e M4. Nós detectamos 2 sub populações de blastos com fenótipos diferentes em 5 casos e 3 em 1 caso. O marcador de imaturidade CD7 foi expresso em 20% dos casos, os marcadores de linhagem cruzada, CD2 e CD19 em 11% e observamos assincronismode maturação em 20% com CD34/CD15 e 22% com CD34/CD56positivos.Na análise multivariadade Cox o CMF do CD45 e MPO, a idade, cariótipo e número de leucócitos foram fatores preditivos de pior sobrevida. Pela medida da intensidade média de fluorescência dos antígenos nós pudemos detectar parâmetros prognósticos bem como sub populações de blastos fenotipicamente diferentes, que não tiveram influência na sobrevida, mas podem dificultar o estudo de doença residual mínima por citometria de fluxo, visto que a quimioterapiapode selecionar uma das populações / Abstract: Acute leukemia is characterized by a c1onal proliferation of haematopoietic stem cell substituting the normal bone marrow. The recent WHO c1assification for acute leukemia separates entities by recurrent cytogenetic abnormalities and immunophenotypic features presenting prognostic impact. We have examined the distribution and impact on survival of the expression of severallineage and maturation linked antigens used in routine immunophenotyping of patients with de novo acute leukemía. Cases were diagnosed by peripheral blood counts,bone marrow cytology, cytochemistry, cytogenetics and immunophenotyping using a first screening panel with 3 colors (CD45, CD3, CD7, CDI9, CD13, CD33 e HLA-DR) and secondary panel for precursor B ALL (CDI0, CD20, k e À) and AML (CD2, CDI4, CD15, CD34, CD56 e MPO). Antigen expression was measured by mean fluorescence intensity (MFI) by flow cytometry using the Paint-a-gate software. We analysed 5 cases of T-ALL. Median age: 29 years (14-51). In 80% of the cases were defined by primary panel. CD13 was the most expressed cross-lineage marker (80%). We analysed 31 cases ofB-ALL. Median age: 27 years (7-67). In 61% of the cases were defined by screening panel and the remaining, by secondary panel defined others. CD13 (35%) and CD33 (38%) were the cross-lineage markers most expressed. In Cox multivariate analysis, MFI of CD45 and age were significant for worse prognosis. We analysed 35 cases of AML. Median age: 51 years (11-79). The screening panel defined all cases. Predomínant FAB types were M2 and M4. In 5 cases we could detect 2 phenotypically different blast subpopulations and in 1 case we detected 3 subpopulations. The immaturity marker CD7 was expressed in 20% ofthe cases, the cross-lineage CD2 and CD19 were expressed in 11% of the cases and we could observe asynchronous in 20% with co-expression of CD34/CD15 and 22% with co-expression of CD34/CD56. In Cox multivariate analysis, MFI of CD45 and MPO, age, WBC and karyotype were significant for worse survival. By measuring the fluorescence intensity of the antigens, we could detect prognostic parameters as well as phenotypically different blast subsets. These did not influence survival, but may represent a pitfall in studies of mínimal residual diseaseby flow cytometry, as chemotherapy may select one of these subsets / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Irene Lorand-Metze / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T06:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_Elisangela_D.pdf: 5950588 bytes, checksum: d00f171d21ca1cf1430070e17e34ace6 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Síndromes Mielodisplásicas (SMDs) são desordens clonais da célula precursora hematopoética pluripotencial caracterizadas por alterações na proliferação e maturação celulares e presença de apoptose medular excessiva. Alterações cariotípicas na mielodisplasia são comuns. Apesar dos critérios de diagnóstico estarem bem estabelecidos, o uso da citometia de fluxo (CF) no estudo desta doença tem sido muito explorado, pois desordens não-clonais (DNCs), que também apresentam citopenias periféricas, podem dificultar o diagnóstico. Populações eritroblástica, granulocítica, monocítica, linfóide e blástica em medula óssea (MO) de pacientes com SMD foram estudadas e comparadas à MO normal (doadores para transplante de MO) e às DNCs. Foram incluídos no estudo 32 casos de SMD (20 AR, 05 ARSA, 07 AREB), 11 controles normais e 10 pacientes com DNCs confirmadas. Selecionamos as populações celulares pelo dot plot CD45/side scatter (SSC). A análise quantitativa dos marcadores eritroblásticos CD71 e Glicoforina A (GlyA); granulocíticos e monocíticos CDllb, CD13, CDI6, CDI0 e CD64; linfóide CDI9, CD3, CD4, CD8 e CDI6; além do precursor CD34 e o pan leucocitário CD45, foi obtida através da intensidade média de fluorescência (IMF). A granularidade citoplasmática das células granulocíticas foi observada pela baixa IMF do SSC. Mielopoiese, presença de aberrações fenotípicas e o padrão maturacional também foram avaliados nestas células. Todos os pacientes com SMD tiveram algum tipo de alteração nas populações avaliadas pela CF. Os eritroblastos apresentaram perfil maturacional alterado em 20 casos (64,4%) e os monócitos em 22 (68,7%). Os granulócitos em 7 casos tiveram 1 anormalidade imunofenotípica, em 9 pacientes houve 2, em 9 casos 3 e em 2 pacientes 4 expressões anormais foram encontradas. O SSC esteve alterado em 7 casos (23%), os perfis do CDI6/CDl1b e CDI6/CD13 em 18 (56,2%) e 20 casos (66%), respectivamente, , o CD13 em 22 (73%), o CDllb em 17 (56%), , o CD16 em 11 (36%), o CD45 em 17 (56%), e por fim a deficiência do CDlO encontrada em 3 casos (10,3%). Assincronismo maturacional na população granulocítica foi encontrado enquanto nasDNCs a maturação granulocítica foi mantida. Os monócitos tiveram número aumentado tanto nos pacientes com SMD quanto nos com DNCs. A expressão do SSC, CD13 e CDl1b foram similares nos 3 grupos. CD64 esteve aumentado nos 2 grupos de pacientes enquanto o CD16 apenas na SMD. O CD45 esteve diminuído somente no grupo das DNCs. Os linfócitos B nos pacientes AREB tiveram uma diminuição intensa em relação aos outros subtipos FAR A maturação B está comprometida na SMD tanto numericamente quanto na expressão antigênica dos grupos de baixo e alto risco. Uma aberração fenotípica CD19+/cCD79a-foi encontrada nas células B na SMD mas não nos controles. As células T não tiveram alterações consideráveis. Os mieloblastos foram analisados nos dot plots CD16/CD11b e CD16/CD13 e CD34. Houve uma correlação entre a porcentagem de blastos visualizados pela morfologia (mielograma) com os do dot plot CD16/CD13 e número de células CD34 positivas, mas não com aqueles quantificados pelo dot plot CD16/CDllb. A técnica da CF pôde demonstrar presença de assincronismo maturacional, aberrações fenotípicas, granulopoiese alterada e utilidade na detecção de anormalidades imunofenotípicas na SMD. Além disso, possibilita monitorar a evolução da doença, observada pelo aumento de blastos na MO, e é capaz de diferenciar a SMD das citopenias periféricas não-clonais / Abstract: Myelodysplastic syndromes (MDSs) are characterized by abnormalities in proliferation, apoptosis and maturation of the hemopoietic cell lines. MDS is known by bone marrow (BM) celIs abnormalities identified by morphology. Although MDS diagnostic criteria are well established, flow cytometry (FCM) technique has been explored. Even so, non-clonal disorders that present periphera1 cytopenias such as MDS can difficult the diagnostic, mainly in MDS cases with normal karyotype. lnitially, we analyzed the erythroid, granulocytic and monocytic lineages maturation patterns, and the blastic population in BM from patients with MDS and compared them with normal BM (BM transplantation donors) and patients with pancytopenia due to non-clonal diseases (NCD). MDS are considered as hematopoietic myeloid stem celIs clonal disorders. However, accumulating evidence support that more immature stem celI, which has ability to differentiate into both myeloid and lymphoid celIs, could origin the disease. BM cell populations were separated in CD45/side scatter (SSC) plot. Staining intensity quantitative pattems assessment for CD45, CDI6, CD13, CDllb, CDIO, CD34 and CD64 were performed in 32 MDS BM cases and compared with 10 non-clonal diseases and 11 contrals. Granulocytic and monocyticabnormalities were identified per case and with 2 or more detected alterations. Antigenic expression pattems were determined during maturation. CDI6/CDI3, CD16/CDllb and CDIO/CD64plots were used for monitoring of granulocyte maturation and monocytic celIs, CD711GlyA for erythroblastic population and CD34+/SSC for blasts cells. Mostly MDS patients presented some kind of expression abnonnalities: 7 (23%) low SSC, 18 (56.2%) CD16/CDllb and 20 (66%) CDI6/CD13 abnonnal pattems, 1I (36%) CD16, 22 (73%) CD13, 17 (56%) CDllb, 17 (56%) CD45, 3 (10.3%) CDIO deficiency. Monocytes were increased in both MDS and NCD, but increase in expression of CDI6 occurred exclusively in MDS. The monocytes had similar expression in SSC, CD13 and CDllb among 3 groups. CD64 had increased in both patients groups but the CD45 was decreased more pronounciated in NCD. Asynchronous maturation was found in MDS patients, but was maintained in .NCD. Several abnormalities in CD71/Gly A expression were found in erythroblasts in MDS, but they were normal in NCD. Neither GlyA nor CD71 deficiency were observed in NCD. Myeloblastic celIs were analyzed in the CD16/CDllb and CDI6/CDI3 dot plots and CD34 expression. There was positive correlation between blasts percentage with CDI6/CD13 dot plot and absolut number of CD34 positive celIs, but not with those quantified by CDI6/CDllb dot plot. Ongoing the study, specific enumeration and characterization of CD34+/CDI9+ and CD34-/CDI9+ B-cell precursors and mature B-Iymphocytes was performed in all MDS cases by multiparameter FCM. Both quantitative and qualitative immunophenotypic abnormalities involving BM B-cells were shown in B population. CDI9+/cCD79a- phenotype asynchronous antigen expression was detected on CD34+ B-cell precursors but only when detectable levels of those precursos were shown in the MDS BM. There were not any considerable abnormalities for T lymphocytes. Abnormal B-cell maturation in MDS patients were shown by imunophenotypic evidences, and further investigations shall be used to undertand its nature. Concluding, FCM is an useful toei for differential diagnosis between donal and non-clonal disorders / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-27T19:37:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Katianne B.A.Sousa.pdf: 1701891 bytes, checksum: 5aeafe40b9a9abf7a64c229073d28651 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-27T19:47:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Katianne B.A.Sousa.pdf: 1701891 bytes, checksum: 5aeafe40b9a9abf7a64c229073d28651 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-27T19:48:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Katianne B.A.Sousa.pdf: 1701891 bytes, checksum: 5aeafe40b9a9abf7a64c229073d28651 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-27T19:48:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Katianne B.A.Sousa.pdf: 1701891 bytes, checksum: 5aeafe40b9a9abf7a64c229073d28651 (MD5) Previous issue date: 2014-08-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The arbovirus are virus group with a complex life cycle, once vertebrate hosts as well as arthropod vectors are involved. The Phlebovirus are arboviruses of the Bunyaviridae family transmitted mainly by Lutzomyia insects in the new world and Phlebotomus in the old world. These insects are important vectors of tropical diseases, such as leishamaniasis, causing outbreaks of febrile syndromes worldwide. A large fauna of phlebotomus is observed in the Amazon region and a few studies aimed to detect virus at those vectors. The present study aimed to the detection of arboviruses in phlebotomus collected in the Reserva Florestal Adolpho Ducke, Manaus and at the Ramal Nova Esperança, Manacapuru, Amazonas. The phlebotomus were collected using adapted CDC light traps, including parallel collections with manual aspirators. Speciemens were grouped in pools by sex and trap, and subsequently macerated. The macerated samples were inoculated into VERO cells, following by indirect immunofluorescence. The positives samples by flow cytometry were submitted to molecular assays, in order to amplify segments S and L of the Bunyavirus. Among the collected pools, 17 out of 243 were positive by flow cytometry, those samples presented displacement of positive cells within a range 1.19 – 71.6%. Also, molecular methods were applied for detection of Bunyavirus, following capillary and next generation sequencing. However, no virus was identified with this techniques. The samples are stored for futures studies, in order elucidate questions related to the presence of medical important arbovirus infecting phlebotomus at the Brazilian Western Amazon. / Arbovírus são um grupo de vírus que apresenta um ciclo biológico bastante complexo, que envolve hospedeiros vertebrados suscetíveis e um ou mais vetor artrópode. Os Phlebovirus são arbovírus da família Bunyaviridae transmitidos por insetos do gênero Lutzomyia no novo mundo e Phlebotomus no velho mundo. Estes insetos são importantes vetores de doenças tropicais, como a leishmaniose e vem causando surtos de síndromes febris pelo mundo. Mesmo com uma vasta fauna de flebotomíneos na região Amazônica poucos estudos tiveram como objetivo principal detectar vírus nestes vetores. Em função do descrito anteriormente o presente trabalho teve como objetivo a detecção de Bunyavirus em flebotomíneos coletados na Reserva Florestal Adolpho Ducke, Manaus e no Ramal Nova Esperança, Manacapuru, Amazonas. Os flebotomíneos foram coletados em armadilhas de luz do tipo CDC adaptadas, além de coletas paralelas com aspiradores manuais. Os espécimes foram agrupados em pools, por sexo e armadilha, sendo posteriormente macerados. O material macerado foi inoculado em culturas de células VERO, seguido por técnicas de imunofluorescência indireta para família Bunyaviridae. As amostras positivas pela citometria de fluxo foram submetidas a ensaios moleculares, na tentativa de amplificação dos segmentos S e L de Bunyavirus. Dos 243 pools coletados foi identificada a presença de vírus da família Bunyaviridae em 17 pools através dos resultados obtidos pela citometria de fluxo, com base no deslocamento de células positivas que variaram entre 1,19 - 71,6%. Nesse projeto foi utilizado pela primeira vez um protocolo para Citometria de fluxo para Bunyavirus. Foram aplicadas também metodologias moleculares para detecção de Bunyavirus, seguidos de sequenciamento capilar e de Nova Geração. Entretanto, não foi possível a identificação viral por técnicas moleculares. As amostras estão armazenadas para experimentos futuros, na tentativa de elucidar questões como: a circulação de arbovírus de importância médica em flebotomíneos na Amazônia Ocidental Brasileira.

Orientadores : Irene Lorand-Metze, Carmen Silvia Passos Lima / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T16:54:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_Elisangela_M.pdf: 23459196 bytes, checksum: e3c3f69e1b6470bb9cfa7570a9a84ff0 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Síndromes mielodisplásicas (SMD) são um grupo heterogêneo de doenças clonais caracterizadas por citopenias periféricas persistentes de uma ou mais linhagens e com possibilidade para transformação leucêmica. Níveis aumentados de apoptose nas células precursoras hematopoéticas (células CD34l foram observados em pacientes com SMD de baixo risco (AR e ARSA), sugerindo esse mecanismo como o responsável pela hematopoes e ineficaz nessa doença. A Amifostina (AMF) é considerada um agente citoprotetor, com ação antioxidante, potente estimulador da hematopoese normal e supressor apoptótico nos precursores mielodisplásicos. Analisamos a expressão dos marcadores da apoptose, (Fas e FasL) nas células CD34+ em pacientes com SMD de baixo risco, submetidos ao tratamento com a AMF. Foram estudados 17 pacientes, sendo 11AR e 6 ARSA. A resposta terapêutica em relação ao nível da hemoglobina, ao número de neutrófilos e às plaquetas, aos critérios de inclusão e às respostas foi definida pelo protocolo de tratamento da AMF. Dos 17 pacientes tratados, 10 apresentaram critérios de resposta em pelo menos uma série do hemograma após 2 ciclos de AMF, os quais receberam mais 4 ciclos adicionais. Quatro pacientes (3 não respondedores e um respondedor) apresentaram evolução da SMD (aumento de blastos medulares) durante ou após o tratamento. As atipias celulares na medula óssea (MO) e o número de células CD34+ diminuíram nos pacientes respondedores após o ciclo 2. No grupo dos não respondedores não houve alterações significativas em nenhum desses parâmetros. Os pacientes que responderam à amifostina tinham, antes do tratamento, uma percentagem menor de expressão de Fas e FasL nas células CD34+ e de linfócitos na medula óssea em relação aos que não responderam. A percentagem de linfócitos aumentou ainda mais após o tratamento neste último grupo. Esse resultado sugere que, no grupo que não respondeu à amifostina o sistema imune pode estar impedindo a resposta ao tratamento. Esses resultados favorecem a hipótese de que a resposta à AMF é influenciada pela expressão dos marcadores apoptóticos e/ou pela percentagem de linfócitos na MO. A resposta à AMF não depende apenas da supressão apoptótica. Um seguimento maior de pacientes é necessário para observar a durabilidadede resposta / Abstract: Not informed. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:13:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2653_1.pdf: 3219087 bytes, checksum: e49263700ce90bf224851971f1039607 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A radiossensibilidade celular está diretamente relacionada às falhas no mecanismo de reparo dos danos causados ao DNA. Nesse mecanismo, a molécula considerada como chave é a proteína p53. Neste contexto, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a correlação entre os níveis de expressão da proteína p53 com a radiossensibilidade individual. Para tanto, amostras de sangue periférico de 23 indivíduos sadios foram divididas em alíquotas e, separadamente, irradiadas com doses de 0,5; 1; 2 e 4 Gy. Em seguida, células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram obtidas e cultivadas durante 72 horas, tanto na presença quanto na ausência de mitógenos (Fitohemaglutinina PHA e Pokeweed PKW). Em paralelo, a viabilidade celular foi determinada utilizando o corante azul de trypan (0,4%). Os resultados obtidos demonstraram que a expressão da proteína p53 em PBMCs aumenta com a dose absorvida sendo inversamente proporcional à viabilidade celular. O maior índice da expressão de p53 foi observado em culturas estimuladas com PHA durante 72 horas. O aumento na expressão da p53, em resposta à radiação, foi significativamente diferente entre os indivíduos estudados, o que pode ser relacionado a variabilidade na radiossensibilidade individual. Os resultados desse trabalho sugerem estudos adicionais no sentido de correlacionar os níveis de expressão de p53 com efeitos adversos graves em pacientes submetidos à radioterapia

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:14:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2680_1.pdf: 1987756 bytes, checksum: fdd0f79604394508bc5200c1a773e36e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A radiossensibilidade individual é reconhecida como um importante fator biológico que contribui de maneira significativa na resposta aos danos radioinduzidos em tecidos e células do organismo. Entretanto, os eventos moleculares associados à radiossensibilidade individual ainda são pouco conhecidos. Dessa maneira, o estabelecimento de uma correlação entre as expressões moleculares e a radiossensibilidade individual poderão contribuir para o aprimoramento de pesquisas cujo objetivo seja a definição de diferentes graus de sensibilidade humana à irradiação. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi analisar parâmetros moleculares que caracterizam a apoptose em linfócitos humanos irradiados in vitro, avaliando seu potencial para estimação de radiossensibilidade individual. Para tal, amostras de sangue periférico de 12 voluntários foram coletadas e alíquotas foram irradiadas (fonte 60Co) individualmente com diferentes doses. Células mononucleares foram isoladas, processadas e mantidas com ou sem cultivo celular (com ou sem estímulo mitótico pela fitohemaglutinina-PHA). Com auxílio da citometria de fluxo, quantificou-se nos linfócitos a expressão da fosfatidilserina na membrana plasmática, bem como a expressão das proteínas caspase-3 ativa e p53. Verificou-se que os linfócitos irradiados com diferentes doses e cultivados por diferentes tempos apresentam uma resposta apoptótica do tipo dosedependente, com aumento dos níveis de apoptose nas células estimuladas com PHA. Para os linfócitos não estimulados com PHA, verificou-se que o fenômeno de apoptose em sua fase tardia é predominante. Correlações positivas foram observadas entre a apoptose radioinduzida e os níveis de expressão dos marcadores protéicos investigados. Os maiores níveis de caspase- 3 ativa e p53 foram encontrados nos linfócitos irradiados; dos quais os linfócitos estimulados com PHA apresentaram maiores níveis de expressão protéica. Adicionalmente, contatou-se que dentre as amostras irradiadas, a p53 é expressa tanto em linfócitos quiescentes quanto em linfócitos proliferantes. Os resultados deste estudo indicaram a existência de uma forte correlação entre a quantificação das moléculas que caracterizam a apoptose e a radiossensibilidade de linfócitos

A refrigeração é a forma mais utilizada para a preservação do sêmen suíno empregado na inseminação artificial. Apesar do constante aprimoramento de diluidores comerciais em favor da manutenção da viabilidade espermática, sabe-se que alterações estruturais e principalmente funcionais ocorrem nestas células em resposta às baixas temperaturas de armazenamento. Além disso, embora tais modificações muitas vezes não sejam identificadas pelas análises de rotina, seus efeitos diretos sobre a capacidade fertilizante do espermatozoide tem sido relatados. Em paralelo, uma gama de estudos buscando identificar possíveis ações do plasma seminal sobre a célula espermática in vitro gera ainda resultados bastante controversos. Diante disso, o presente trabalho buscou avaliar como a presença ou não do plasma seminal durante o processo de refrigeração pode influenciar sobre a resposta do espermatozoide suíno aos eventos de capacitação e hiperativação espermática. Para isso, após serem mantidos sobre refrigeração à 17°C por 72 horas, na presença ou não do plasma seminal, espermatozoides foram submetidos à capacitação in vitro e ao decorrer desta, avaliados quanto às características de motilidade pela análise computadorizada do sêmen; e funcionalidade celular por citometria de fluxo. Resultados obtidos à partir das análises de desordem lipídica, translocação da fosfatidilserina e permeabilidade da membrana plasmática mostraram que espermatozoides suínos refrigerados são capazes de responder à capacitação in vitro de forma semelhante, independente de prévia manutenção ou não, com o plasma seminal. Para os parâmetros de motilidade, bem como o estudo da população espermática hiperativada, foram apresentados resultados semelhantes entre ambos os grupos, o que demonstra a não influencia da prévia exposição ao plasma seminal sobre a mudança do padrão de motilidade espermática. Ainda, parâmetros qualitativos avaliados neste estudo suportam nossa afirmação de que, a ausência de contato entre o espermatozoide suíno e os componentes do plasma seminal durante seu armazenamento não reflete em qualquer efeito prejudicial sobre a qualidade espermática, além de oferecer uma maior resistência à estas células contra lesões de acrossoma (P < 0,05). Desta forma, o presente trabalho concluiu que a remoção do plasma seminal previamente ao armazenamento do espermatozoide suíno à 17 °C por 72 horas não é prejudicial à sua qualidade e funcionalidade, podendo ainda ser benéfica à sua capacidade fertilizante. / Liquid storage is the main form of preservation of boar sperm prior to its use in artificial insemination. Despite the constant improvement of commercial extenders in favor of maintaining sperm viability, it is known that structural and mainly functional alterations occur in these cells in response to low storage temperatures. Furthermore, although these modifications are often not identified by routine analyzes, their direct effects on the fertilizing capacity of spermatozoa have been reported. In view of this, in vitro studies aiming to identify possible actions of seminal plasma as modulator of sperm function have yielded controversial results. Therefore, the present work aimed to evaluate how the presence or absence of seminal plasma during liquid storage may influence the responsiveness of spermatozoa to capacitation and hyperactivation events. For this, liquid boar sperm stored at 17 °C for 72 hours in the presence or not of the seminal plasma were submitted to in vitro capacitation. During the course, sperm motility characteristics were evaluated by computer-assisted semen analysis; and sperm functionality by flow cytometry. Results obtained from lipid disorder, phosphatidylserine translocation and plasma membrane permeability analyzes have shown that liquid boar sperm stored in the presence or not of seminal plasma are able to respond to in vitro capacitation in a similar way. For motility parameters including the study of hyperactivated boar sperm, results were similar for both groups, demonstrating that previous exposure to seminal plasma was not able to influence on sperm motility pattern. In addition, semen quality parameters evaluated in this study support our current observations that the absence of contact between spermatozoa and components of seminal plasma during liquid storage does not reflect any detrimental effect on sperm quality, besides offering greater resistance to these cells against acrosome damages (P < 0.05). Therefore, the present study concluded that the removal of seminal plasma prior to liquid storage of boar spermatozoa at 17 °C for 72 hours is not detrimental to its quality and functionality, and may still be beneficial to its fertilizing capacity.

A refrigeração é a forma mais utilizada para a preservação do sêmen suíno empregado na inseminação artificial. Apesar do constante aprimoramento de diluidores comerciais em favor da manutenção da viabilidade espermática, sabe-se que alterações estruturais e principalmente funcionais ocorrem nestas células em resposta às baixas temperaturas de armazenamento. Além disso, embora tais modificações muitas vezes não sejam identificadas pelas análises de rotina, seus efeitos diretos sobre a capacidade fertilizante do espermatozoide tem sido relatados. Em paralelo, uma gama de estudos buscando identificar possíveis ações do plasma seminal sobre a célula espermática in vitro gera ainda resultados bastante controversos. Diante disso, o presente trabalho buscou avaliar como a presença ou não do plasma seminal durante o processo de refrigeração pode influenciar sobre a resposta do espermatozoide suíno aos eventos de capacitação e hiperativação espermática. Para isso, após serem mantidos sobre refrigeração à 17°C por 72 horas, na presença ou não do plasma seminal, espermatozoides foram submetidos à capacitação in vitro e ao decorrer desta, avaliados quanto às características de motilidade pela análise computadorizada do sêmen; e funcionalidade celular por citometria de fluxo. Resultados obtidos à partir das análises de desordem lipídica, translocação da fosfatidilserina e permeabilidade da membrana plasmática mostraram que espermatozoides suínos refrigerados são capazes de responder à capacitação in vitro de forma semelhante, independente de prévia manutenção ou não, com o plasma seminal. Para os parâmetros de motilidade, bem como o estudo da população espermática hiperativada, foram apresentados resultados semelhantes entre ambos os grupos, o que demonstra a não influencia da prévia exposição ao plasma seminal sobre a mudança do padrão de motilidade espermática. Ainda, parâmetros qualitativos avaliados neste estudo suportam nossa afirmação de que, a ausência de contato entre o espermatozoide suíno e os componentes do plasma seminal durante seu armazenamento não reflete em qualquer efeito prejudicial sobre a qualidade espermática, além de oferecer uma maior resistência à estas células contra lesões de acrossoma (P < 0,05). Desta forma, o presente trabalho concluiu que a remoção do plasma seminal previamente ao armazenamento do espermatozoide suíno à 17 °C por 72 horas não é prejudicial à sua qualidade e funcionalidade, podendo ainda ser benéfica à sua capacidade fertilizante. / Liquid storage is the main form of preservation of boar sperm prior to its use in artificial insemination. Despite the constant improvement of commercial extenders in favor of maintaining sperm viability, it is known that structural and mainly functional alterations occur in these cells in response to low storage temperatures. Furthermore, although these modifications are often not identified by routine analyzes, their direct effects on the fertilizing capacity of spermatozoa have been reported. In view of this, in vitro studies aiming to identify possible actions of seminal plasma as modulator of sperm function have yielded controversial results. Therefore, the present work aimed to evaluate how the presence or absence of seminal plasma during liquid storage may influence the responsiveness of spermatozoa to capacitation and hyperactivation events. For this, liquid boar sperm stored at 17 °C for 72 hours in the presence or not of the seminal plasma were submitted to in vitro capacitation. During the course, sperm motility characteristics were evaluated by computer-assisted semen analysis; and sperm functionality by flow cytometry. Results obtained from lipid disorder, phosphatidylserine translocation and plasma membrane permeability analyzes have shown that liquid boar sperm stored in the presence or not of seminal plasma are able to respond to in vitro capacitation in a similar way. For motility parameters including the study of hyperactivated boar sperm, results were similar for both groups, demonstrating that previous exposure to seminal plasma was not able to influence on sperm motility pattern. In addition, semen quality parameters evaluated in this study support our current observations that the absence of contact between spermatozoa and components of seminal plasma during liquid storage does not reflect any detrimental effect on sperm quality, besides offering greater resistance to these cells against acrosome damages (P < 0.05). Therefore, the present study concluded that the removal of seminal plasma prior to liquid storage of boar spermatozoa at 17 °C for 72 hours is not detrimental to its quality and functionality, and may still be beneficial to its fertilizing capacity.

Resumo: Considerando a importância da eubiota intestinal na saúde dos animais, o papel da dieta em sua composição e metabolismo tem sido estudado. Neste aspecto os prebióticos têm merecido destaque, incluindo-se a parede celular de leveduras (PCL), uma fonte natural de mananoligossacarídeos. Para o estudo de seu potencial prebiótico para cães, foram empregadas quatro dietas isonutrientes com inclusão de 0% (T0), 0,15% (T15), 0,30% (T30) e 0,45% (T45) de PCL. Foram utilizados oito Beagles adultos, divididos em dois quadrados latinos 4 X 4. Em cada período uma fase de adaptação de 15 dias precedeu 5 dias de coleta total de fezes para o ensaio de digestibilidade e 1 dia de coleta de fezes frescas para enumeração bacteriana, mensuração de pH e determinação das concentrações de ácidos graxos de cadeia curta e aminas bioativas. No dia 21 de cada período, amostra de sangue foi colhida para quantificação imunofenotípica por citometria de fluxo das subpopulações linfocitárias CD5+CD4+, CD5+, CD5+CD8+, CD45+ e CD45+CD21+. Os dados foram avaliados pelo Proc GLM do SAS, sendo as médias comparadas pelo teste de Tukey e por contraste polinomial e ortogonal (p<0,1). Os coeficientes de digestibilidade dos nutrientes não variaram com a inclusão de PCL (p>0,1). A inclusão de PCL não resultou em diferenças quanto às contagens de anaeróbios totais, aeróbios totais, bifidobactéria, lactobacilos, clostridios nas fezes dos cães (p>0.1). Verificou-se aumento linear na concentração fecal de butirato (p=0,055), redução linear das concentrações fecais de tiramina (P=0,1) e histamina (P=0,07) e redução quadrática de feniletilamina e triptamina (P=0,07). Os cães apresentaram, também, aumento linear na concentração de linfócitos CD5+ (P=0,10) e maior número de linfócitos CD45+CD21+ (P=0,053) mediante ingestão de PCL. Concluiu-se que a PCL apresenta efeito prebiótico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Considering the importance of the intestinal microbiota to the animal health, the role of diet upon microbiota composition and metabolism have been studied. Prebiotics have been emphasized on this regard, including the yeasts cell walls (YCW), a natural source of mannanoligosaccharides. To study the prebiotic potential of this compound for dogs, four isonutrient diets were used with inclusion of 0% (T0), 0,15% (T15), 0,30% (T30) and 0,45% (T45) of YCW. Eight Beagles adults were used, arranged in two 4 X 4 Latin squares. In each replicate an adaptation phase of 15 days preceded a 5 days of total feces collection for digestibility trial and 1 day collection of fresh fecal samples for bacterial enumeration, pH measurement and determination of short chain fatty-acids and bioactive amines concentration. On day 21, a blood samples were collected for immunophenotypic quantification of lymphocyte subsets CD5+CD4+, CD5+, CD5+CD8+, CD45+ e CD45+CD21+ through flow cytometry. The data were evaluated using Proc GLM of SAS, means were compared by Tukey test and polinomial and orthogonal contrasts (p <0,1). The inclusion of YCW did not change the coefficient of total tract apparent digestibility of nutrients (p>0.1) nor the fecal bacterial enumeration (total aerobes and anaerobes, Bifidobacterium, Lactobacillus, Clostridium and Escherichia coli) in dog's feces (p>0.1). Fecal butirate concentration increased linearly with YCW addition (p=0,055), fecal concentrations of tyramine (P=0,1) and histamine (P=0,07) decreased linearly, and phenylethylamine (P=0,07) and tryptamine (P=0,07) concentrations showed a quadratic reduction with YCW consumption. Dogs also presented a linear increase in lymphocytes CD5+ concentration (P=0,10) and a greater CD45+CD21+ lymphocytes number (P=0,053) with YCW addition. In conclusion YCW presents a prebiotic (changing bacterial end product formation) and immunostimulating effect for dogs. / Orientador: Aulus Cavalieri Carciofi / Coorientador: Ruben Pablo Schocken-Iturrino / Banca: Áureo Evangelista Santana / Banca: Maria Beatriz Abreu Glória / Mestre

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Coorientador: Letícia Abrahão Anai / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Banca: Sabryna Gouveia Calazans / Banca: Thiago Demarchi Munhoz / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Resumo: O linfoma pode ser caracterizado pela proliferação clonal de linfócitos malignos nos órgãos linfóides, podendo, porém, atingir diversos tecidos entre os quais a pele, denominado linfoma cutâneo. No cão, o linfoma cutâneo pode apresentar-se clinicamente por lesões localizadas ou generalizadas, podendo evoluir para lesões em placas e nódulos, muitas vezes edemaciados, ulcerados e hemorrágicos. Segundo avaliação histopatológica, podem ser classificados em epiteliotrópico ou não epiteliotrópico, com linhagem imunofenotípica T ou B, sendo o T mais comum. Células T reguladoras são linfócitos com capacidade imunossupressora, com papel importante na manutenção de processos fisiológicos, impedindo respostas de autoimunidade. Além disto, estudos demonstraram a influência das mesmas na supressão de respostas anti-tumorais, permitindo o escape das células neoplásicas dos mecanismos de defesa. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar a presença das células T reguladoras em 12 cães com linfoma cutâneo T e 12 animais saudáveis, no sangue periférico e pele, através das técnicas de citometria de fluxo, avaliando porcentagens de Tregs, células T CD4+ e CD8+, e imuno-histoquímica, com a expressão tecidual de Foxp3. Observou-se maior número de Tregs no sangue periférico de cães com linfoma cutâneo (10,84±1,18) em relação aos animais saudáveis (5,67±0,89), sem diferença quanto às porcentagens de células CD4+ (48,26±4,54; 51,01±4,92, respectivamente) e CD8+ (30,32±4,82; 31,78±5,65... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Lymphoma can be characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes in the lymphoid organs, but may reach several tissues including the skin, called cutaneous lymphoma. In dogs, the cutaneous lymphoma may present clinically as localized or generalized lesions, wich may progress to plaque and nodules, often swollen, ulcerated and bleeding. Histologically, they can be classified as epitheliotropic or non-epitheliotropic, with immunophenotypic line T or B. Regulatory T cells are lymphocytes with immunosuppressive capacity, with a significant role in the maintenance of physiological processes, preventing autoimmunity responses. Furthermore, studies have demonstrated their influence in the suppression of anti-tumor responses, allowing the escape of neoplastic cells from the defense mechanisms. Thus, the present study aimed to evaluate the presence of regulatory T cells in 12 dogs with cutaneous T cell lymphoma and 12 healthy animals in peripheral blood and skin, through flow cytometry techniques, assessing blood concentration of Tregs, CD4+ and CD8+, and immunohistochemical, through tissue expression of Foxp3. A higher number of Tregs in the peripheral blood of dogs with cutaneous lymphoma (10,84±1,18) was observed in relation to the healthy animals (5,67±0,89), with no difference in the percentages of CD4 + (48,26±4,54; 51,01±4,92, respectively) and CD8 + (30,32±4,82; 31,78±5,65, respectively) cells. There was no difference in cellular values between the animals with ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor