Made available in DSpace on 2016-04-04T12:40:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 rafael_soares_ioc_mest_2014.pdf: 9999442 bytes, checksum: ac5e27ea1a79926391d54c0c9862a009 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A fosfatidilserina (PS) é conhecida por seu papel na regulação da apoptose e interferir em várias vias de sinalização celular. Por meio da exposição da PS, as células apoptóticas são internalizadas de forma eficiente por fagócitos, prevenindo uma resposta inflamatória. Assim, durante a evolução, alguns protozoários se utilizaram do processo chamado de \201Cmimetismo apoptótico\201D para a evasão do sistema imune do hospedeiro. O Toxoplasma gondii é um protozoário parasito intracelular obrigatório e agente etiológico da toxoplasmose. Em taquizoítos de T. gondii da cepa RH, cepa do tipo I, virulenta, cerca de 50% dos parasitos expressam PS na sua superfície. No presente trabalho foram empregadas formas bradizoítas e taquizoítas de cepa ME49, a fim de elucidar a participação das subpopulações de T. gondii, PS positivas e negativas, na infecção de células musculares esqueléticas e seu papel no desenvolvimento da cistogênese, in vitro. Para essas análises os parasitos (cistos, taquizoítos e bradizoítos) incubados com anexina-FITIC foram analisados por técnicas de citometria de fluxo e microscopia de fluorescência. A parede cística e o interior dos cistos teciduais de T. gondii foram positivos para anexina, enquanto os taquizoítos e bradizoítos apresentaram subpopulações que expõem ou não PS em sua membrana A infecção de células hospedeiras por essas subpopulações de parasitos foi testada e quantificada em culturas de células musculares esqueléticas. As infecções e proliferação dos parasitos foram maiores na população total de taquizoítos em comparação com as suas subpopulações. Em infecções com bradizoítos utilizando população total e PS+ não se observou diferenças significativas, enquanto a infecção da subpopulação PS- foi significantemente menor. Quanto ao desenvolvimento da cistogênese, a infecção com taquizoítos não gerou a formação de cistos teciduais, enquanto células infectadas com bradizoítos da população total e da PS+ foram capazes de alta indução da cistogênese comparada à população PS-. Esses dados evidenciam a participação da exposição de PS em infecções pelo T. gondii e seu destino intracelular, mostrando que a exposição de PS é um fator importante que favorece o encistamento espontâneo em células musculares esqueléticas quando as culturas foram infectadas com bradizoítos / Phosphatidylserine (PS) is known for its role in regulating apoptosis and interferes with several cellular signaling pathways. Apoptotic cells, which exposure PS, are internalized efficiently by phagocytes, preventing an inflammatory response. Thus, during evolution, some protozoa use the process called "apoptotic mimicry" for evasion of the host immune system. Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan parasite and the causative agent of toxoplasmosis. In tachyzoites of T. gondii RH strain, type I virulent, about 50% of the parasites have PS on their surface. In the present work bradyzoites and tachyzoites forms of ME49 strain, type II avirulent, were employed in order to elucidate the involvement of subpopulations of T. gondii expressing positive and negative PS, during infection of skeletal muscle cells and its role in the development of cystogenesis, in vitro. For these assays, parasites (cysts, tachyzoites and bradyzoites) were incubated with annexin-FITIC and analyzed by flow cytometry and fluorescence microscopy. Cyst wall and the matrix of tissue cysts were positive for annexin, while tachyzoites and bradyzoites showed subpopulations exposing or not PS on their surface. The able of infection and proliferation of parasites were highest in the total population of tachyzoites compared with their subpopulations. In infections with bradyzoites was observed that total and PS+ populations showed no significant differences, while the PS- was significantly lower. Regarding the development of cystogenesis, infection with tachyzoites did not generate the formation of tissue cysts while bradyzoites, total population and PS+ were capable of inducing high cystogenesis compared to population PS-. These data show the involvement of PS exposure in infections with T. gondii and its intracellular fate, showing that exposure of PS is an important factor favoring the spontaneous encystment in skeletal muscle cells when the cell cultures were infected with bradyzoites.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:20:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ivan_junior_ipec_dout_2013.pdf: 1028310 bytes, checksum: dff45af1d04ca95b16081c45df029842 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O regime de tratamento com múltiplas drogas é correspondente a uma interação de drogas que pode causar efeitos adversos e falha no tratamento. Essa interação pode gerar modificações funcionais dos transportadores de membrana e por consequência a biodisponibilidade das drogas durante o tratamento. Dentre os transportadores de drogas transmembranares está a glicoproteína-P (P-gp), uma proteína de 170KD, produto do gene MDR1, caracterizada como uma \201CATP Binding cassete\201D (ABC). Seu papel está muito bem definido nas células neoplásicas multirresistentes a drogas, assim como sua relação com as drogas para o tratamento da infecção pelo HIV. Entretanto, pouco tem sido estudado sobre esta bomba de efluxo na tuberculose multirresistente (TBMR). Neste estudo analisamos por citometria de fluxo sua expressão e atividade de efluxo nos monócitos, principal célula relacionada com a tuberculose e também em linfócitos e granulócitos do sangue periférico por meio da citometria de fluxo. A taxa de efluxo foi medida através do uso da Rodamina 123 (Rho123) e a expressão da P-gp através do anticorpo monoclonal anti-CD243 (clone UIC2). A utilização direta do sangue total para a determinação da atividade de efluxo por citometria de fluxo caracterizou a implantação de uma nova ferramenta de análise para a pesquisa A análise contemplou 52% do total de pacientes em tratamento de TBMR no ambulatório do Laboratório de Pesquisa em Micobacterioses do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC). Para as análises foram levadas em consideração a idade, cor da pele, o tempo de tratamento e a quantidade de drogas administradas. O estudo revelou que há correlação entre a expressão da P-gp nos monócitos e a idade dos pacientes (P<0,01). Diferenças entre pacientes brancos e não brancos também foram observadas. Em linfócitos a expressão de P-gp quando aumentada foi diretamente proporcional à atividade de efluxo observada nos monócitos (P< 0,05). Além disso, pacientes submetidos ao tratamento para TBMR por até seis meses apresentaram uma maior expressão de P-gp e, linfócitos quando comparados àqueles que receberam o tratamento por mais de seis meses (P<0,01) / When two or more drugs are administrated, such interactions can cause additive, synergistic or antagonistic effects. The drug transporters may undergo treatments effects and therefore change the dr ugs bioavailability during the treatment and can cause treatment failure. Among the know n drug transporters there is transmembrane P - glycoprotein (P - gp). It is a 170 KDa transmem brane protein w h ich is a product of multidrug resistance MDR1 gene. This protein is a well - characterized ABC transporter ( ATP Binding Cassette ) and is responsible for efflux of the chemotherapeutic agents from resistant cancer cells. There are few studies about this protein in multidrug - resistant tuberculosis (MDR - TB) . In this study, P - gp expression and activity were detect by flow cytometry in monocytes, the main cell related with the M.tuberculosis infection , as well as in lymphocytes and granulocytes from whole peripheral blood . P - gp mediated efflux was determined indirectly by measuring the retention of a fluorescent P - gp substrate, rhodamine 123 ( Rho123) . P - gp expression was assessed using anti - P - gp monoclonal antibody UIC2 (CD243 ). The efflux activ ity with whole blood using flow cytometry technique as a new tool to pharmacogenetic research was developed in this study. We analyzed 52 % of outpatient in MDR - TB treatment from Laboratory Research Mycobacteriosis Institute Evandro Chagas Clinical Researc h (IPEC). We considered variables as age, race, treatment time, amount of drug administered at the time of blood collection and their correlation with P - gp expression and activity. The result revealed a correlation between the P - gp expression in monocytes and ag e ( P < 0 .01). In addition, difference between white and nonwhite patients was observed . Lymphocyte P - gp expression was statistically significant greater in patients w ith increased monocytes efflux activity evidenced by P - gp inhibition with CSA ( P < 0 .0 5 ). P atients undergoing MDR - TB treatment for six months had a higher P - gp expression in lymphocytes compared to those who received the treatment for more than six months ( P < 0 .01).

Resumo não disponível.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_8522_Dissertação Final Alda Francisca Rodrigues de Sousa Fernandes20150806-93833.pdf: 1352628 bytes, checksum: 5c09297b08c4059df782f1a6ee8afc62 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / CAPES / Moraceae compreende plantas latescentes de porte arbóreo como as figueiras (Ficus), de porte arbustivo como as espécies de Sorocea, ou herbáceas como as espécies de Dorstenia. O gênero Dorstenia é o único herbáceo dentro da família, com cerca de 105 espécies, e possui princípios ativos ligados a diversas funções terapêuticas. Além do uso medicinal, os carapiás, como são conhecidas popularmente as espécies de Dorstenia, também apresentam grande potencial como plantas ornamentais. Alguns estudos envolvendo sistemática, filogenia, molecular e fitoquímica são relatados para algumas espécies de Dorstenia. No entanto, são poucos os relatos a respeito dos dados citogenéticos e conteúdo de DNA no gênero, provavelmente em virtude da dificuldade de encontrar populações naturais em campo e à situação vulnerável que compromete grande parte das espécies. Dados citomorfológicos associados com o valor 2C de DNA podem gerar informações sobre a evolução cromossômica e colaborar com os aspectos sistemáticos e taxonômicos de um grupo. Diante do exposto, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar, por meio da citogenética e citometria de fluxo, três espécies de Dorstenia: D. arifolia Lam., D. bonijesu Carauta & C. Valente e D. elata Hook. Para isso, o número cromossômico foi determinado, parâmetros morfométricos e de assimetria intercromossômica (A2) foram estabelecidos e o conteúdo de DNA nuclear foi mensurado. O material vegetal foi coletado em Mata das Flores, ES. Para a citogenética, raízes foram obtidas por meio de sistema hidropônico, tratadas com APM nas concentrações de 3, 4 e 5 μM, por 16 a 18 h e fixadas em metanol: ácido acético (3:1), para posterior digestão, coloração e observação das lâminas. Para citometria de fluxo indivíduos jovens foram coletados. As folhas foram utilizadas como material de análise para xi quantificar o conteúdo de DNA nuclear. A metodologia citogenética possibilitou a obtenção de material adequado para análise. Encontraram-se 32 cromossomos e foi possível montar o primeiro cariograma para as três espécies. Com os dados morfométricos, a classificação dos cromossomos foi determinada e foram confirmadas as diferenças entre os três cariótipos. O índice de assimetria A2 variou entre as espécies: D. bonijesu apresentou A2 = 0,16, seguido por D. arifolia A2 = 0,14 e D. elata A2 = 0,13. As análises de citometria de fluxo possibilitaram mensurar o conteúdo de DNA nuclear de 2C = 3,49 picogramas (pg) para D. elata, 2C = 4,05 pg para D. bonijesu, e 2C = 5,47 pg para D. arifolia. Apesar das três espécies apresentarem o mesmo número de cromossomos (2n = 32), os valores de conteúdo de DNA evidenciados pela citometria de fluxo e os resultados do índice assimétrico foram diferentes. De acordo com os valores de A2 e dados descritos na literatura D. elata pode ser a espécie mais derivada em relação a D. bonijesu e D. arifolia, por possuir o menor índice de assimetria e menor conteúdo de DNA nuclear. Assim, os dados da presente pesquisa permitiram caracterizar, pela primeira vez, três espécies de Dorstenia, contribuindo para diferentes áreas como ecologia, filogenia, sistemática e evolução. / Moraceae comprises latescentes plant tree size as the fig trees (Ficus), shrub species as Sorocea, or herbaceous species as Dorstenia species. The Dorstenia is the only herbaceous within the family, with about 105 species, and it has active ingredients linked to several therapeutic functions. Besides the medical use, the "carapiás", as popularly known, the Dorstenia species also have a high potential as ornamental plants. Some studies involving systematic, phylogeny, molecular and phytochemical are reported to some species of Dorstenia. However, there are few reports about the cythogenetic data and DNA content in the gender, probably due to the difficulty to find natural populations in the field and the vulnerable situation that affects most species.Cytomorphological data associated with the DNA 2C value can generate information on the chromosomal evolution and cooperate with systematic and taxonomic aspects of a group. That being said, the objective of this study was to characterize, by using cytogenetics and flow cytometry, three species of Dorstenia:. D. arifolia Lam., D. bonijesu Carauta & C. Valente and D. elata Hook. For this, the chromosomal number was determined, morphometric and intrachromosomal asymmetry (A2) parameters were established and nuclear DNA content was measured. The plant material was collected in Mata das Flores, ES. To cytogenetics, roots were obtained by using the hydroponic system, treated with APM in the concentrations of 3, 4 and 5 uM, for 16 to 18 h and fixed in methanol: acetic acid (3:1), for later digestion, coloring and observation of the slides. For flow cytometry young individuals were colected. The leaves were used as material of analysis to quantify the nuclear DNA content. The Cytogenetic methodology allowed to obtain suitable material for analysis. It was found 32 chromosomes and it was possible to mount the first karyogram to the three species. With the morphometric data, the classification of chromosomes was xiii determined and the differences were confirmed between the three karyotypes. The A2 asymmetry index varied between the species: D. bonijesu showed A2 = 0.16, followed by D. arifolia A2 = 0.14 and D. elata A2 = 0.13. The flow cytometric analysis allowed to measure the nuclear DNA content of 2C = 3.49 picograms (pg) for D. elata, 2C = 4.05 pg for D. bonijesu , and 2C = 5.47 pg for D. arifolia. Despite of the fact that the three species have the same chromosome number (2n = 32), the DNA content values obtained by flow cytometry and the results of the asymmetric index were different. According to the A2 values and data described in the literature D. elata can be the species more derivative in relation to D. bonijesu and D. arifolia, for having the lowest asymmetry index, and the lowest content of nuclear DNA. Therefore, the present research data allowed to characterize, for the first time, three species of Dorstenia, contributing to different areas such as ecology, phylogeny, systematics and evolution.

Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-11-13T21:13:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DESEMPENHO DA TÉCNICA DE CITOMETRIA DE FLUXO, NO.pdf: 3747193 bytes, checksum: ef571a9dce24b87b45d8fd8d89916048 (MD5) / Approved for entry into archive by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2015-11-16T21:07:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DESEMPENHO DA TÉCNICA DE CITOMETRIA DE FLUXO, NO.pdf: 3747193 bytes, checksum: ef571a9dce24b87b45d8fd8d89916048 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T21:07:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DESEMPENHO DA TÉCNICA DE CITOMETRIA DE FLUXO, NO.pdf: 3747193 bytes, checksum: ef571a9dce24b87b45d8fd8d89916048 (MD5) Previous issue date: 2014 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O diagnóstico de rotina pós-natal da toxoplasmose congênita é baseado na detecção de anticorpos IgM e/ou IgA anti-T. gondii no soro dos neonatos. No entanto, em um número significativo de neonatos infectados esses anticorpos não são detectados, dificultando o diagnóstico precoce da doença. Portanto, neste estudo foi avaliado o desempenho da pesquisa de anticorpos anti-T. gondii por citometria de fluxo no diagnóstico sorológico pós-natal precoce da toxoplasmose congênita. Foram avaliados 88 amostras de soro de crianças com infecção congênita pelo T. gondii (TOXO) e 19 amostras de soro de crianças não infectadas (NI). A sensibilidade do teste foi de 47,6% para IgM, 72,6% para IgA e 75% para IgG, com 100% de especificidade para todos os testes. Quanto a pesquisa de subclasses de IgG, a sensibilidade foi de 73,9% para IgG1, 60,2% para IgG2 e 83% para IgG3 com 100% de especificidade para todos os testes. A sensibilidade de IgG4 foi superior às demais, alcançando 94,7%, embora apresentou uma baixa especificidade de 4,6%. A pesquisa da avidez de IgG quando aplicada para segregação dos grupos TOXO e NI, apresentou um ótimo desempenho com 97% de sensibilidade e 93% de especificidade. Foi também realizado uma análise comparativa da presença de IgG e IgG3 em crianças do grupo TOXO e NI com suas respectivas mães. Nossos resultados mostraram que as crianças infectadas apresentaram uma reatividade média desses anticorpos equivalentes a de suas respectivas mães, o que sugere estarem sintetizando estes anticorpos em resposta a infecção pelo T. gondii. Em contraste, as crianças não infectadas apresentaram uma menor reatividade média desses anticorpos em relação à suas respectivas mães. Além disso, nosso estudo propôs um algoritmo para o diagnóstico da toxoplasmose congênita utilizando o teste de IgM por métodos convencionais disponíveis na rotina dos laboratórios clínicos como estratégia inicial seguido da pesquisa de IgG3 e avidez de IgG pela citometria de fluxo com desempenho final de 98% de sensibilidade e 93% de especificidade. A análise dos dados demonstrou a aplicabilidade da citometria de fluxo para a pesquisa de anticorpos IgG3 e avidez de IgG anti-T. gondii como uma ferramenta complementar para o diagnóstico precoce da toxoplasmose congênita. / The routine diagnosis of pos-natal congenital toxoplasmosis is based on the detection of IgM and/or IgA anti-T. gondii antibodies in neonates sera. However, in a significant number of infected newborns these antibodies are not detected, hindering the early diagnosis of the disease. Therefore, in this study it was evaluated the performance of the detection of anti-T. gondii antibodies by flow cytometry in the sorological diagnosis of early pos-natal congenital toxoplasmosis., Eight eight sera samples of children with congenital infection by T.gondii (TOXO) and 19 sera samples of uninfected children were evaluated. The sensitivity of the test was 47.6% for IgM, 72.6% for IgA, and 75% for IgG, with 100% of specificity for all tests. As to the IgG subclasses, the sensitivity was 73.9% for IgG1, 60.2% for IgG2, and 83% for IgG3 with 100% of specificity for all tests. The sensitivity of IgG4 was superior to the aformentioned subclasses reaching 94.7%, although achieved a poor specificity of 4.6%. The IgG avidity when employed to segregate TOXO and NI groups presented a great performance, with 97% of sensitivity and 93% of specificity. It was also done a comparative analysis of the presence of IgG and IgG3 in children of TOXO and NI groups with their respective mothers. Our results showed that the children with congenital toxoplasmosis presented an average reactivity of these antibodies equivalent to their respective mothers, which suggests that they are producing antibodies in response to T.gondii infection. In contrast, uninfected children presented a lower average reactivity of those antibodies in comparison to their respective mothers. In addition, our study proposed an algorithm for the diagnosis of congenital toxoplasmosis using IgM test performed by conventional methods available in routine clinical laboratories as the initial approach followed by the search for IgG3 and IgG avidity using flow cytometry, reaching a final performance of 98% of sensitivity and 93% of specificity. Data analysis showed the applicability of flow cytometry for the detection of IgG3 antibodies and IgG anti-T. gondii avidity as a complementary tool for the early diagnosis of congenital toxoplasmosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-01Bitstream added on 2014-06-13T18:41:54Z : No. of bitstreams: 1 munhoz_td_dr_jabo.pdf: 1806915 bytes, checksum: 10b016880b9017b3102afefa3e695dde (MD5) / O linfoma é a neoplasia hematopoiética mais comum nos cães e uma das mais frequentes, dentre todas as neoplasias, nesta espécie. Apresenta-se em diversas localizações anatômicas e pode apresentar classificações histológicas e imunofenotipos distintos. Dependendo da resposta imune do paciente frente à instalação de um tumor, algumas informações sobre o prognóstico podem ser obtidas. Atualmente, as células T reguladoras (Tregs) vêm sendo estudadas em algumas neoplasias caninas, por seu comprovado potencial imunossupressor, principalmente por inibir a resposta antitumoral. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos quantificar, por citometria de fluxo, as células Tregs em sangue periférico de cães com linfoma multicêntrico de imunofenótipos B e T, respectivamente 14 e 8 cães, no momento do diagnóstico e após o primeiro ciclo de quimioterapia antineoplásica com o protocolo Madison-Wisconsin (MW) de 19 semanas adaptado, e comparar com cães saudáveis (n=10), buscando quantificá-las em cães com linfoma de diferentes imunofenótipos antes e após a 5ª semana do protocolo MW. Os resultados mostraram que cães com linfoma apresentaram uma porcentagem significativamente maior de Tregs (18,84±2,56) quando comparada aos cães sem neoplasia (4,70±0,50) (p<0,01). Além disso, após a 5ª semana de tratamento houve uma significante redução da população de Tregs (7,54±1,08), atingindo valores semelhantes a dos cães controle (4,70±0,50) (p>0,05). Não houve diferença nas Tregs em relação aos imunofenotipos B (17,45±2,77) e T (21,27±5,27) (p>0,05). Concluiu-se que o linfoma em cães leva a um aumento de células Tregs e que o tratamento com o protocolo quimioterápico MW reduz significativamente as células Tregs em sangue periférico, atingindo valores próximos aos dos cães saudáveis / Lymphoma is the most common hematopoietic malignancy in dogs and one of the most frequent among all neoplastic diseases in this species. It can occur in several anatomical locations with distinct histological and immunophenotypes. Depending on the host immune response towards the tumor, prognosis information could be collected. Because its well established immunosuppressant, antitumor activity, the function of regulatory T cells (Tregs) in canine neoplasias has been investigated. In this study, we sought to quantify, using flow cytometry, the Tregs subpopulation in peripheral blood of healthy dogs (10) and in those diagnosed with type-B (14) and type-T (8) multicentric lymphoma before (at diagnosis) and after the first cycle (5-week) of 19-week Madison- Wisconsin (MW) protocol of chemotherapy. Our results indicated that dogs with lymphoma showed higher percentage of Tregs (18,84±2,56) when compared to healthy dogs (4,70±0,50) (p<0,01). In addition, 5-week chemotherapy treatment reduced the Tregs subpopulation (7,54±1,08) to levels similar to control (4,70±0,50) (p>0,05). There was no difference in Tregs percentage between B-type (17,45±2,77) and T-type (21,27±5,27) lymphoma (p>0,05). With this, we conclude that canine lymphoma increases Tregs in the peripheral blood and the MW protocol of chemotherapy reduces this cell subpopulation to control values

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-02Bitstream added on 2014-06-13T20:04:26Z : No. of bitstreams: 1 santana_las_dr_jabo.pdf: 557636 bytes, checksum: 26ce65892340f8faf732dffdb9f70b85 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Atualmente, a citometria de fluxo está tornando-se uma ferramenta útil na Medicina Veterinária, particularmente na clínica de pequenos animais. O presente ensaio teve como objetivo imunomarcar as subpopulações linfocitárias CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD21+, com a utilização de marcadores de superfície (anticorpos monoclonais), em quatro diferentes raças de cães domésticos e correlacionar esses dados com o eletroforetograma de proteínas séricas desses animais. Foram utilizados 40 cães adultos, machos e fêmeas, das raças Beagle, Golden Retriever, Bulldog Inglês e sem raça definida, divididos em 4 grupos, sendo 10 cães por grupo experimental. Os cães foram submetidos à avaliação clínica, hematológica (hemograma) e à análise quantitativa, no sangue periférico, das subpopulações de linfócitos CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD21+. Paralelamente, foi realizada a análise qualiquantitativa das proteínas séricas totais e suas frações. As proteínas séricas foram separadas por eletroforese em matriz de gel de poliacrilamida, e suas concentrações determinadas por densitometria computadorizada. O número médio de células obtido para a subpopulação de linfócitos T citotóxicos foi significativamente maior (p<0,05) nos Bulldogs Ingleses e cães SRD, comparativamente aqueles encontrados nos grupos Beagles e Golden Retrievers. Ademais, observou-se que o número médio de células obtido para a subpopulação de linfócitos B foi significavamente maior (p<0,05) nos Bulldogs Ingleses, quando comparado àquele dos Beagles. No presente estudo, não foi possível estabelecer correlação entre as subpopulações linfocitárias analisadas e as proteínas totais e suas frações / Flow cytometry is useful tool in veterinary medicine, particularly in small animal practice. The objective of this study was to determine lymphocyte subsets of CD5+CD4+, CD5+CD8+ and CD21+ in four different breeds of domestic dogs and correlate these data with the electrophoretogram of serum proteins in these animals. A total of 40 adult dogs, males and females of Beagles, Golden Retrievers, English Bulldogs and crossbreed dogs were divided in four groups, with 10 dogs per experimental group. The dogs were submitted to clinical, hematological and quantitative analysis, in peripheral blood, of lymphocyte subsets of CD5+CD4+, CD5+CD8+ and CD21+. Also we performed a qualitative and quantitative analysis of total serum protein and its fractions. The serum proteins were separated by electrophoresis in polyacrylamide gel matrix, and their concentrations were determined by computerized densitometry. The average number of cells obtained for the subsets of cytotoxic T lymphocytes was significantly higher (p<0,05) in the British Bulldogs and crossbreed dogs compared to those found in Beagles and Golden Retrievers. Furthermore, it was observed that the average number of cells obtained for the subsets of B lymphocytes was significavamente higher (p<0,05) in English Bulldogs compared to that of Beagles. In the present study, there was no correlation between lymphocyte subsets with total proteins and its fractions

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-05Bitstream added on 2014-06-13T18:48:24Z : No. of bitstreams: 1 castro_mp_dr_jabo.pdf: 623759 bytes, checksum: 8b47fffe94519815df98fe793f386239 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Facta / A destruição dos micro-organismos ocorre principalmente por mecanismos dependentes de oxigênio e pela liberação de enzimas líticas dos grânulos intracelulares dos neutrófilos. Neutrófilos ativados in vitro e in vivo geram espécies reativas de oxigênio e sofrem apoptose rapidamente. O resveratrol possui efeitos protetores na aterosclerose, possui potencial anticancerígeno e antiinflamatório podendo também atuar como protetor e regenerador dos antioxidantes primários do organismo. O objetivo do presente estudo foi verificar o efeito protetor de diferentes concentrações de resveratrol na apoptose e produção de superóxido de neutrófilos. Uma suspensão de neutrófilos final de 1 x 106 mL de 10 cães adultos hígidos foram aliquotadas e pré- incubadas com diferentes concentrações finais de resveratrol (0, 30, 60 e 90 Rmol) durante 4 horas. A taxa de apoptose foi determinada por citometria de fluxo capilar, utilizando-se do sistema Anexina V-PE e a de superoxido por sonda HE. Nos grupos tratados com resveratrol (30, 60 e 90 Rmol) e estimulados com CAM (camptotecina) não houve diminuição nos índices apoptóticos. Na presença de PMA (forbol-12-miristato 13 acetato) a fluorescência média do brometo foi superior em todos os tratamentos. Nos grupos tratados com RV e estimulados com PMA não houve diminuição na quantidade de superóxido. Conclusões: Nas doses utilizadas o resveratrol não inibiu a apoptose de neutrófilos. A incubação dos neutrófilos com RV não afetou a viabilidade celular. As taxas de produção de superóxido não diferiram entre os tratamentos utilizados p>0,05, constatado através de citometria de fluxo / The destruction of microorganisms occurs mainly by oxygendependent mechanisms involving the generation of reactive oxygen metabolites and also the liberation of lytic enzymes from intracellular granules. Activated neutrophils generate ROS and suffer apoptosis quickly, verified in-vitro and in- vivo. Resveratrol has protective effects against atherosclerosis, it has anticarcinogenic and anti inflammatory potential and it may also protect and regenerate body’s primary antioxidants. The objective of the present study was to examine the possible protective effect of different concentrations of resveratrol on apoptosis and superoxide production of stimulated neutrophils. A final neutrophil suspension of 1 x 106 of 10 adult healthy dogs was aliquoted and pre-incubated with different final concentrations of resveratrol (0, 30, 60 e 90 Rmol) for 4 hours. Superoxide production rate and apoptosis was determined by capillary flow cytometry used anexin V-PE system and HE probe. In PMA(forbol-12-miristato 13 acetato) presence, bromide average fluorescence was superior in every treatment. In the groups treated with resveratrol and stimulated with PMA there was no reductions in amount of superoxide. In groups treated with resveratrol and stimulated with CAM (camptotecina) there was no decrease in apoptotic index. It was also observed that the concentrations of RV used did not affected cellular viability

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-04Bitstream added on 2014-08-13T18:00:11Z : No. of bitstreams: 1 000764397.pdf: 797747 bytes, checksum: 6a89fbc6b7371005e020d9f2b9ab35ec (MD5) / A Leucemia Linfocítica Crônica (LLC) é uma neoplasia de linfócitos B maduros, de curso clínico heterogêneo, com alguns pacientes necessitando de tratamento imediato e outros vivendo sem tratamento por décadas. Por essa característica, se faz necessária a identificação de marcadores prognósticos acessíveis e de valor clínico. O objetivo principal foi avaliar retrospectivamente os indicativos prognósticos de progressão da doença (ZAP-70, CD38, ploidia de DNA e Fase S) em pacientes portadores de LLC, frente a sua evolução clínica. Como objetivos secundários, foram comparadas as metodologias de análise de ZAP-70 por citometria de fluxo(CF) ISO Método e Análise em Tubo Único, assim como as técnicas de análise de conteúdo de DNA pelo modelo matemático (ModFit LT™) e estratégia de gating boleano (Infinicyt™). Na cauística foram incluídos 27 pacientes que possuíam disponíveis os dados clínicos e laboratoriais em estudo e que concordaram e preencheram o termo de consentimento livre e esclarecido. A avaliação da situação clínica foi feita uma única vez, e assim como os resultados das expressões de CD 38 e ZAP 70, foi realizada através de revisão de prontuário médico. A análise do conteúdo de DNA por CF foi avaliada pelos dois métodos supracitados, a partir de arquivos do laboratório de citometria de fluxo da instituição. Como resultados, não se observou relação das expressões de ZAP-70 e CD38 com o estado clínico dos pacientes. Em relação à análise de índice de DNA e Fase S, não houve diferença estatística (p=0,69 e p=0,08 respectivamente utilizando-se os softwares ModFit LT™ e Infinicyt™). Também foi encontrado que os dados obtidos na análise de DNA indicam a possibilidade de utilização da Fase S na avaliação prognóstica dessa série de pacientes. Todos os três fatores estudados são considerados prognósticos. Não houve relação dos marcadores estudados com a evolução ... / The Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) is a mature B lymphocytes malignancy, on heterogeneous clinical course, where some patients require immediate treatment and others live for decades without treatment. For this peculiarity, it’s required the identification of prognostic markers and clinical value. The main objective was to retrospectively, evaluate the prognostic indicator of the disease progression (ZAP- 70, CD38, DNA ploidy and S phase) in patients under CLL, facing the clinical evolution. As secondary purposes, methodologies were compared to ZAP- 70 analysis by flow cytometry (FC) ISO Method and Single-Tube Analysis, as well as technical analysis of DNA content by the mathematical model (ModFit LT ™) and boolean gating principle (Infinicyt ™ ). On the registration of the cases observed, there were included 27 patients under the clinical and laboratory data who had available and filled in the term consenting agreement. The evaluation of the clinical situation was made only once, and the results of expressions and CD38 and ZAP 70, were held by reviewing medical records. The analysis of DNA content by CF was evaluated by the above two methods files from a laboratorial flow cytometry institution. As a result, no relation of the expressions of CD38 and ZAP- 70 with the clinical status of the patients was observed. Concerning the analysis of DNA index and S phase, there wasn’t any statistical difference (p = 0.69 and p = 0.08 respectively using the ModFit LT ™ and Infinicyt ™ software ). It was also found that the data obtained in the analysis of DNA indicates the possibility of using the S phase in the prognostic evaluation of those patients. Conclusion: all the three factors studied are considered prognostic. There was no relation of the markers studied to the clinical course of patients. To correlate these data with clinical follow-up of those patients, it is necessary a longer period of time

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-24Bitstream added on 2015-01-26T13:30:21Z : No. of bitstreams: 1 000798819.pdf: 983001 bytes, checksum: 2fc0b03354d07607d8a8e61e7ab3880b (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / A alta prevalência do câncer de mama é um fator que nos instiga a investigar novos biomarcadores para a doença. Proteínas séricas ou plasmáticas já são utilizadas rotineiramente no rastreamento de algumas neoplasias. As micropartículas (MPs) são fragmentos da membrana plasmática liberadas por diversos tipos celulares e estão associadas com a resposta inflamatória. Estudos recentes mostram que a presença de MPs e citocinas/quimiocinas circulantes possuem uma relevante associação clínica com o câncer de mama. O objetivo deste estudo foi medir os níveis desses biomarcadores inflamatórios (MPs, citocinas e quimiocinas) no soro de mulheres com câncer de mama pré e pós-quimioterapia comparando com o grupo controle; assim como associar esses dados com diversos parâmetros clínicos e hemograma. Foi coletado sangue periférico de mulheres sem evidências de doenças (n=20) e com câncer de mama (n=38). Foi utilizada a citometria de fluxo para dosagens dos níveis séricos de citocinas (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6 IL-10, IL-12, IL- 17A, TNF, IFN-gama), quimiocinas (CXCL-8, CXCL-9, CXCL-10, CCL-2, CCL-5) e micropartículas provenientes de diversas células (neutrófilos, leucócitos, monócitos, eritrócitos, endotélio, plaquetas, linfócitos). As diferenças entre os grupos foram avaliadas pelo teste de Mann-Whitney ou Kruskal- Walis. As diferenças com valor de p<0,05 foram consideradas significativas. Não houveram diferenças significativas nos níveis de micropartículas, citocinas e quimiocinas estudadas entre os grupos controle e câncer de mama. Entretanto houve uma diminuição dos níveis de micropartículas derivadas de plaquetas nas pacientes pós-quimioterapia e um aumento de níveis séricos de IL-6, CCL-5 e CXCL-10 pós-quimioterapia. Em associação com os dados clínicos foi demostrado que baixos níveis de micropartículas derivadas de monócitos e altos níveis de CCL-2 e CXCL10 estão associados a tumores mais ...