Pacientes diabéticos tipo 2 apresentam risco de 3 à 5 vezes maior de sofrer infarto do miocárdio do que indivíduos não diabéticos, sendo que 75% desses pacientes morrem de complicações aterotrombóticas. Os mecanismos que levam o indivíduo a apresentar esse perfil pró-trombótico incluem danos ao endotélio, liberação de citocinas pró-inflamatórias, estresse oxidativo, ativação da cascata de coagulação e das plaquetas. As proteínas da cascata de coagulação e as plaquetas são os principais atores do controle do balanço anti/pró-coagulante. A cascata de coagulação pode ser ativada por dano ao endotélio ou por liberação de fatores, como o Fator Tecidual. Essa cascata culmina com a ativação da enzima trombina, que cliva o fibrinogênio e permite sua polimerização e deposição na forma de fibrina. A trombina também participa da ativação das plaquetas. Outros mecanismos têm sido propostos na tentativa de entender as causas do perfil pró-trombótico apresentado por indivíduos diabéticos. A geração Produtos Finais de Glicação Avançada (do inglês Advanced Glycation End-Products – AGE) nesses indivíduos tem sido frequentemente relatada como importante fator. Os AGE são modificações póstraducionais encontradas em proteínas e têm origem em uma reação nãoenzimática entre uma proteína e um açúcar redutor, ou com um aldeído reativo. Durante o diabetes a hiperglicemia é considerada a principal fonte de geração de AGE, mas a participação de outros aldeídos reativos, como o metilglioxal e o glicolaldeído (GA) também são de grande importância. O processo de glicação pode levar a duas situações no organismo: a) alteração na estrutura da proteína com consequente alteração da sua função; b) a geração de moléculas sinalizadoras (AGE) com potencial pró-inflamatório e pró-trombótico. Estudos recentes demonstraram que os AGE podem causar a ativação de plaquetas e promover a liberação de Fator Tecidual por monócitos e células endoteliais. Muitos estudos têm sido realizados com a intenção de entender o papel dos AGE sobre a coagulação, no entanto, faltam dados sobre os efeitos dos seus precursores (açucares e aldeídos reativos) na modulação da hemostasia. Nesta tese, demonstramos que o GA é capaz de reagir com proteínas plasmáticas in vitro, levando a um aumento nos níveis de carbonil. Os coágulos formados a partir de plasma incubado com GA apresentaram-se resistentes à ação proteolítica. O GA teve os mesmos efeitos quando incubado com o fibrinogênio purificado, indicando que essa proteína é um alvo importante no desequilíbrio hemostático causado pelo aldeído. Para avaliar se o aumento dos níveis do GA é relevante in vivo, ratos Wistar adultos foram injetados com esse aldeído. Verificou-se aumento na oxidação de proteínas (carbonil e sulfidril) e um encurtamento no tempo necessário para a coagulação do plasma, indicando um perfil pró-trombótico. Após o isolamento do fibrinogênio desses ratos, foi identificada a formação de CML e um atraso no tempo necessário para a fibrina polimerizar. Os nossos resultados indicam que o GA pode danificar diretamente o fibrinogênio e contribuir para os efeitos prótrombóticos vistos em algumas enfermidades. Ainda, os efeitos do GA in vivo não se restringem apenas às proteínas da cascata de coagulação sendo necessária a avaliação dos efeitos do GA sobre as células envolvidas com os processos de coagulação (plaquetas e células endoteliais). / The risk of myocardial infarction is 3-5 folds higher in type 2 diabetic patients than in healthy subjects. Seventy five percent of these patients die with atherothrombotic complications. The mechanisms behind this prothrombotic profile include endothelial damage, cytokine release, oxidative stress, coagulation and platelet activation. The balance between anti/pro-coagulant is controlled mainly by proteins of coagulation cascade and platelets. Coagulation can be triggered by endothelial damage or by factors release, such as Tissue Factor. This cascade ends with thrombin activation, which act upon fibrinogen and allows its polymerization in the insoluble form fibrin. Moreover, thrombin also may activate platelets. Several mechanisms have been proposed in order to explain the underlying factor responsible for prothrombotic profile seen in diabetes. The generation of Advanced Glycation End-products (AGE) in these patients has been often described as an important factor. AGE are posttranslational modifications found in proteins that have origin in a non-enzymatic reaction between a protein and a sugar (or reactive aldehydes). During the diabetes, the hyperglycaemia is believed to be the main agent of protein glycation. The role of reactive aldehydes, such as methylglyoxal and glycolaldehyde (GA) are important too. Glycation can lead to a two main events in organism: a) alteration in protein configuration, with change of function; b) generation of a class of signaling molecules (AGE), which may trigger the proinflammatory and pro-thrombotic events. Recent studies have revealed that AGE can cause platelet activation and induce Tissue Factor release from monocytes and endothelial cells. A lot of studies have been developed to understand the role of AGE in coagulation, although few have studied the glycation precursors on hemostasis. Here we show that GA is able in reacting with plasma proteins in vitro leading to generation of protein carbonyl. The clots generated from GA-incubated plasma were resistant to proteolysis. The incubation of purified fibrinogen in presence of GA revealed the same profile than we saw in whole plasma, suggesting the importance of this protein in the hemostatic dysfunction induced by GA. To evaluate if the increased levels of GA is relevant in vivo, Wistar rats were injected with the aldehyde and plasma was evaluated. Plasma proteins showed increase in oxidative damage (carbonyl and sulfhydryl) whereas the time necessary to plasma to clot shortened, suggesting a prothrombotic profile. The purification of fibrinogen from GA-injected rats revealed that there was an increase in generation of CML, evaluated by western blot. Moreover, there was a delay in the time necessary to fibrin polymerization in a system containing isolated fibrinogen. Our results suggest that GA can directly damage fibrinogen and thus, contribute to prothrombotic effects seen in some diseases. Moreover, the in vivo effects of GA are not only restricted to the coagulation cascade proteins. More studies are necessary to evaluate the effects of GA on cell that participate in coagulation regulation (e.g. platelets and endothelial cells).

A heparina foi isolada no início do século XX e permanece, até os dias atuais, como um dos mais importantes e eficientes agentes terapêuticos de ação antitrombótica. Sua atividade anticoagulante deve-se à ativação da antitrombina (AT), uma serpina responsável pela inibição fisiológica de serino-proteinases plasmáticas, tais como fIIa e fXa. Os esforços no sentido da elucidação dos aspectos estruturais e dinâmicos associados ao reconhecimento molecular da heparina pela AT, em nível atômico, vêm encontrando diversas dificuldades, principalmente associadas aos compostos sacarídicos. Em decorrência de sua elevada polaridade e flexibilidade, glicosaminoglicanos como a heparina são difíceis de estudar e modelar. Soma-se a isto o fato de que os resíduos de iduronato presentes na heparina (IdoA) apresentam um incomum equilíbrio conformacional entre estados de cadeira (1C4) e bote-torcido (2SO), sendo esta última estrutura postulada como a possível conformação bioativa. Sendo assim, este trabalho apresenta um estudo de modelagem molecular do perfil conformacional da heparina, tanto em solução quanto complexada à AT, utilizando cálculos ab initio e simulações de dinâmica molecular (DM) Em decorrência da ausência de parâmetros capazes de descrever polissacarídeos nos campos de força atualmente disponíveis, cargas atômicas foram geradas, utilizando-se os esquemas de Mulliken, Löwdin e cargas ajustadas ao Potencial Eletrostático, através de cálculos quantum-mecânicos na base 6-31G** e testadas na simulação de DM da heparina. Diversas condições de simulação, tais como modelos de água, concentrações de sais e as conformações 1C4 e 2SO do IdoA, foram avaliadas de forma a identificar as melhores condições para a descrição conformacional da heparina em solução. O protocolo de DM obtido foi então utilizado no estudo do complexo AT-heparina. Os resultados obtidos estão de acordo com os dados experimentais atualmente disponíveis acerca da conformação da heparina e da contribuição energética de cada resíduo de aminoácido da AT para a formação do complexo com a heparina. A partir dos cálculos ab initio realizados, foi proposto um refinamento na estrutura da heparina determinada por RMN, enquanto que as simulações de DM permitiram reinterpretar aspectos da estrutura tridimensional da AT determinada por cristalografia de raios-X. Adicionalmente, os dados obtidos sugerem que não há requerimento conformacional para a interação do IdoA com a AT Globalmente, os dados indicam que simulações de DM podem ser utilizadas para representar adequadamente a conformação da heparina, assim como para caracterizar e quantificar suas interações com a AT. Assim sendo, propomos o uso de simulações de DM do complexo entre a AT e a heparina, ou entre a AT e compostos derivados da heparina, como uma ferramenta útil no processo de desenvolvimento de novos agentes antitrombóticos e anticoagulantes.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2016-09-23T17:13:35Z No. of bitstreams: 1 2016_RosângelaCorreaRodrigues.pdf: 2011915 bytes, checksum: 5ceb0d7d3ccdfbe13af5e43683c82276 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-11T21:28:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_RosângelaCorreaRodrigues.pdf: 2011915 bytes, checksum: 5ceb0d7d3ccdfbe13af5e43683c82276 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-11T21:28:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_RosângelaCorreaRodrigues.pdf: 2011915 bytes, checksum: 5ceb0d7d3ccdfbe13af5e43683c82276 (MD5) / Muitas mulheres têm feito uso concomitante de testosterona associado a contraceptivos hormonais e, todavia, não são bem estabelecidos os potenciais efeitos que esses dois tratamentos causam aos parâmetros fisiológicos e comportamentais. Sendo assim, a proposta do presente estudo foi avaliar os efeitos do tratamento prolongado de testosterona associado à algestona acetofenida e enantato de estradiol sobre os parâmetros fisiológicos e comportamentais de 12 fêmeas de macaco-prego do CP-UnB. Para fins experimentais, a cada 21 dias, as fêmeas receberam um volume de 0,10 ml de contraceptivo hormonal combinado. Já a testosterona foi administrada por via intranasal em dose de 0,24 mg/kg, isto durante 3 ciclos menstruais consecutivos. As análises fisiológicas e comportamentais foram feitas ao longo de todo experimento, que teve duração de 210 dias consecutivos delineados em 6 fases sequenciais: 1a - linha de base (21 dias); 2a - administração do contraceptivo hormonal (21 dias); 3a - tratamento de contraceptivo hormonal e testosterona (63 dias); 4a - primeiro intervalo (washout) (21 dias) da testosterona; 5a - administração do contraceptivo hormonal e placebo (63 dias); e 6ª - segundo intervalo (washout) (21 dias) da testosterona. Foram feitas 21 coletas de sangue por fêmea ao longo de todo o experimento, as quais permitiram a análise dos parâmetros fisiológicos (estradiol, estrona, testosterona, di-hidrotestosterona, cortisol, gonadotrofinas, tempo de tromboplastina, tempo de protrombina, plaquetas, fibrinogênio, hemoglobina, globulina e lipídios). Já os parâmetros comportamentais foram obtidos pelo monitoramento da frequência e duração dos comportamentos não sexuais e sexuais apresentados pelas fêmeas de macacos-prego. Os resultados demonstram que o tratamento contraceptivo hormonal combinado promoveu alterações hormonais nas fêmeas de macacosprego (F1,61=5.09; p<0.001), como, por exemplo, redução nas concentrações de estrona, possivelmente decorrente do efeito do contraceptivo na supressão dos hormônios hipofisários. Também foi possível verificar redução dos tempos de protrombina (F1,61=91.77; p<0.001) e tromboplastina (F1,61=42.94; p<0.001), bem como aumento no número de plaquetas quando as fêmeas de macaco-prego receberam o tratamento com contraceptivo (F1,61=450.92; p<0.05). Os esteroides sintéticos podem se ligar aos receptores endoteliais e promover mudanças nos fatores de coagulação. Já os tratamentos associados de testosterona ao contraceptivo hormonal promoveram elevação na concentração de estrona, testosterona, di-hidrotestosterona e Cortisol, além do aumento na frequência dos comportamentos sexuais das fêmeas de macaco-prego (p<0,05). Embora nosso estudo tenha usado dose de testosterona inferior às mencionadas na literatura, e esta tenha sido administrada por via intranasal nossos resultados também demonstraram que o uso exógeno de testosterona promove mudanças nos parâmetros hormonais. Sendo assim, os resultados obtidos neste estudo podem ser relevantes para futuras pesquisas que tenham como proposta avaliar a ação do tratamento de testosterona em usuárias de CHC. Pelo menos em fêmeas de macacos-prego, independentemente da idade, foram observadas alterações sobre alguns parâmetros fisiológicos e no aspecto comportamental. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Many women have made concomitant use of testosterone associated with hormonal contraceptives, and yet the potential effects that these two treatments cause to the physiological and behavioral parameters are not well established. Thus, the purpose of this study was to evaluate the effects of prolonged treatment of testosterone associated with algestone acetophenide and estradiol enanthate on the physiological and behavioral parameters of 12 capuchin females CP-UNB. For experimental purposes, every 21 days, females received a volume of 0.10 ml of combined hormonal contraceptive. Testosterone has been administered intranasally in doses of 0.24 mg/kg over 3 consecutive menstrual cycles. The physiological and behavioral analyzes were performed throughout the experiment, which lasted for 210 consecutive days outlined in 6 sequential phases: 1st - baseline (21 days); 2nd - hormonal contraceptive administration (21 days); 3rd - treatment of hormonal contraceptive and testosterone (63 days); 4th - first interval (washout) (21 days) of testosterone; 5th - administration of hormonal contraceptive and placebo (63 days); and 6th - second gap (washout) (21 days) of testosterone. Twenty-one (21) blood samples were taken per female capuchin throughout the experiment, which enabled the analysis of physiological parameters (estradiol, estrone, testosterone, dihydrotestosterone, cortisol, gonadotropins, thromboplastin time, prothrombin time, platelets, fibrinogen, hemoglobin, globulin and lipids). Other behavioral parameters were obtained by monitoring the frequency and duration of non-sexual and sexual behaviors shown by monkeys. The results demonstrate that the combined hormonal contraceptive treatment promoted hormonal changes in female capuchin monkeys (F1,61 = 05.09, p <0.001), such as, for example, reduction of estrone concentrations, probably due to the contraceptive effect of the suppression of pituitary hormones. It was also observed reduction of prothrombin time (F1,61 = 91.77, p <0.001) and thromboplastin time (F1,61 = 42.94, p <0.001) and increase in the number of platelets when the monkeys received treatment with contraceptive ( F1,61 = 450.92, p <0.05). The synthetic steroids can bind to endothelial receptors and promote changes in coagulation factors. The testosterone-associated hormonal contraceptive treatment promoted an elevation in the concentration of oestrone, testosterone, dihydrotestosterone, and Cortisol, and increased frequency of sexual behavior of female capuchin monkeys (p <0.05). Although our study has used a lower dose of testosterone to those mentioned in the literature, and it has been administered intranasally, our results also demonstrate that the use of exogenous testosterone promotes changes in the hormonal parameters. Thus, the results obtained in this study may be relevant to future research within proposal to evaluate the effect of testosterone treatment in CHC users. At least in female capuchin monkeys, regardless of age, changes were observed on some physiological parameters and behavioral aspects.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-10Bitstream added on 2014-06-13T20:57:23Z : No. of bitstreams: 1 thomazini_cm_me_botfmvz.pdf: 491398 bytes, checksum: 7899d6b3ba0e2eb62d0489babd115540 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A hemostasia é um mecanismo de equilíbrio delicado que depende de diversas interações de componentes interdependentes. A medicina de aves e o interesse nos estudos fisiopatológicos desses animais vem aumentando nos últimos anos, porém de forma lenta. A rotina laboratorial ainda é uma dificuldade para o avanço do conhecimento e do diagnóstico de doenças nas aves, em especial na análise da hemostasia, uma vez que testes de coagulação utilizados para mamíferos, nem sempre podem ser usados nesses animais. Este presente estudo utilizou a tromboelastometria para avaliar as características viscoelásticas do sangue de frangos de corte, ativado por diferentes agonistas como as tromboplastinas homóloga e heteróloga para a via extrínseca, que também foram comparadas em diferentes temperaturas (37 e a 40°C). A tromboelastometria demonstrou ser uma metodologia eficiente em detectar as alterações viscoelásticas do sangue que sofreu a influência de temperaturas e de especificidade de agonistas. Avanços na utilização de métodos laboratoriais devem ser incentivados na rotina da patologia clínica veterinária, porque dessa forma poderemos melhor compreender os mecanismos do equilíbrio e desequilíbrio da coagulação e assim progredir no diagnóstico de distúrbios que acometem as aves / Hemostasis depends on a delicate balanced mechanism of several interactions between components of blood that are interdependent. The avian medicine and the interest in pathophysiological studies of these animals have increased, but slowly. Routine laboratory is still a difficulty in advancing diagnosis of diseases in birds. Tests for coagulation analysis used in mammals, can’t always be used in these patients. This study used thromboelastometry to evaluate viscoelastic properties of poultry blood, that was activated with different agonists to extrinsic pathway activator, as homologous and heterologous thromboplastins, and also different temperatures were compared (37 and 40°C). The thromboelastometry is an efficient method to detect changes in blood viscoelasticity that was influenced by temperature and specificity of agonists. Advances in the use of laboratory methods should be encouraged in the routine of veterinary clinical pathology, because in that way, we better understand the mechanisms of balance and imbalance of coagulation and thus progress in diagnosis of diseases that affect these animals

Orientador: José Geraldo Nery / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Moacir Fernandes Godoy / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo a síntese e a caracterização de diferentes tipos de famílias zeolíticas e a avaliação do uso como agentes hemostáticos coagulantes. Foram sintetizadas três classes de zeólitas: faujasita (FAU), gismondina (GIS) e mordenita (MOR) em sua forma sódica, e estas zeólitas foram convertidas para as formas Ca2+ pelo processo de troca iônica. Após a caracterização desses materiais, foram avaliados seus potenciais como agentes hemostáticos coagulantes, tanto em sua forma sódica como a forma Ca2+, com testes in vitro utilizando a tromboelastografia. Para que se obtivesse dados comparativos, foi utilizado nos testes um agente hemostático já conhecido, o Caolin. Os resultados mostraram que os seis materiais zeolíticos sintetizados agiram como agente hemostático coagulante diminuindo consideravelmente o tempo de coagulação e aumentando a taxa de geração de trombina. Entretanto, a zeólita GIS/Ca2+ exibiu maior eficácia nos parâmetros gerais como taxa de geração do coágulo (K), taxa de geração de trombina (α) e propriedade elástica da fibrina (AM), enquanto que a MOR/Ca2+ exibiu resultados menos eficazes nos parâmetros gerais de coagulação, demostrando que sua estrutura é de difícil acesso ao Ca2+ durante o processo de troca iônica, interferindo no processo de coagulação / Abstract: The main goals of this research work were the synthesis and characterization of different types of zeolites and evaluation of their use as hemostatic agents. Initially, three differents zeolites were synthesized: faujasite (FAU), gismondine (GIS) and mordenite (MOR). The three zeolites were first prepared in their sodium form and thereafter they were submitted to an ion exchange process in order to the replace extra-framework Ca2+. After characterization these materials, were assessed in their potential as hemostatic agents, both the sodium as weel as the calcium forms, in vitro tests using thromboelastography. In order obtain comparative data was used in testing agent hemostatic already know, the Kaolin. The resultds showed that all six zeolites materials have successfully as a agent hemostatic reducing the coagulation time and increasing the rate of clot thrombin generation. Altrought, zeolite GIS/Ca2+ to be more efficient in general parameters such as rate of generation (K), thrombin generation rates (α) and elastic property of fibrin (AM), while the results showed MOR/Ca2+ less efficient in the general parameters of coagulation, showing that its structure is difficult acess to Ca2+ in the ion exchange process / Mestre

Orientador: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Coorientador: Deborah Penteado Martins Dias / Banca: Annelise Carla Camplesi dos Santos / Banca: Angélica Trazzi Bento de Morais / Resumo: O abdome agudo é relatado como uma das principais enfermidades que acometem os equinos, constituindo uma das urgências mais frequentes dentro da medicina equina. As compactações são afecções mais comuns de abdome agudo, sendo caracterizadas pela distensão intestinal decorrente da estagnação do bolo fecal no intestino, podendo ocorrer mais comumente no ceco ou cólon. Diversas alterações nos parâmetros hemostáticos de equinos com abdome agudo são descritas, sendo mais comuns estudos em animais com afecções graves. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi, mediante análises seriadas, avaliar e comparar o perfil hemostático em conjunto com o hematológico, de equinos que apresentam compactação de cólon maior submetidos ao tratamento medicamentoso com animais sadios, com o intuito de melhor compreender os transtornos hemostáticos decorrentes do quadro. Para isso, foram realizados exames hematológicos (eritrograma e leucograma) e hemostáticos (plaquetograma, fibrinogênio plasmático, TP e TTPA) em 20 equinos adultos, sendo dez com compactação de cólon maior de tratamento medicamentoso (GD) e dez hígidos (GC). Os animais foram avaliados em quatro momentos (T0-T72), a cada 24 horas. Nos resultados, verificou-se que no eritrograma o aumento do RDW no GD foi associado a um possível aumento no consumo de oxigênio durante a reação inflamatória. O leucograma apresentou alterações compatíveis com a situação de estresse e dor apresentados pelos animais do GD na admissão e com a possível reação inflamatória desencadeada pelas lesões na microvasculatura. A diminuição gradativa apresentada pelo fibrinogênio foi associada a uma possível resolução da obstrução e diminuição da inflamação ou ao consumo da proteína durante o processo hemostático. No TP houve aumento no GD em comparação ao GC nos momentos T0, T24 e T48. No TTPA houve aumento considerável no momento T0 do GD. Nas condições... / Abstract: The acute abdomen is reported as one of the major diseases that affect horses, constituting one of the most common emergency in equine medicine. The impactions are one of the most common forms of acute abdomen, being characterized by intestinal distention due to the stagnation of fecal mass in the intestine, and can most commonly occur in the cecum or colon. Several changes in hemostatic parameters of horses with acute abdomen are described, more common animal studies with serious diseases. In this context, the objective of this work was by serial analysis, evaluate and compare the hemostatic profile in conjunction with hematologic horses presenting large colon impactation submitted to medication treatment with healthy animals, in order to better understand the hemostatic disorders arising from the framework. For this, blood tests were performed (erythrocyte and leukocyte count) and hemostatic (platelet parameters, plasma fibrinogen, PT and APTT) in 20 adult horses, ten with medical treatment of large colon impactation (GD) and ten healthy (GC). The animals were evaluated in four stages (T0-T72), every 24 hours. In the results, it was found that the erythrocyte increased RDW in GD was associated with a possible increase in oxygen consumption during the inflammatory reaction. The leucocyte count showed changes consistent with the situation of stress and pain presented by the animals of GD on admission and with the possible inflammatory reaction triggered by injury in the microvasculature. The gradual reduction presented by fibrinogen was associated with a possible resolution of the obstruction and decreased inflammation or consumption of protein during the hemostatic process. In PT there was an increase in DG compared to GC at T0, T24 and T48. In the APTT there was considerable increase in DG T0 time. The conditions in which this study was conducted, we conclude that leukocyte changes were compatible with stress caused by obstruction ... / Mestre

Orientador: Regina Kiomi Takahira / Banca: Izolete Aparecida T. Santos / Banca: Benedito Carlos Prezoto / Resumo: A hemostasia é um mecanismo de equilíbrio delicado que depende de diversas interações de componentes interdependentes. A medicina de aves e o interesse nos estudos fisiopatológicos desses animais vem aumentando nos últimos anos, porém de forma lenta. A rotina laboratorial ainda é uma dificuldade para o avanço do conhecimento e do diagnóstico de doenças nas aves, em especial na análise da hemostasia, uma vez que testes de coagulação utilizados para mamíferos, nem sempre podem ser usados nesses animais. Este presente estudo utilizou a tromboelastometria para avaliar as características viscoelásticas do sangue de frangos de corte, ativado por diferentes agonistas como as tromboplastinas homóloga e heteróloga para a via extrínseca, que também foram comparadas em diferentes temperaturas (37 e a 40°C). A tromboelastometria demonstrou ser uma metodologia eficiente em detectar as alterações viscoelásticas do sangue que sofreu a influência de temperaturas e de especificidade de agonistas. Avanços na utilização de métodos laboratoriais devem ser incentivados na rotina da patologia clínica veterinária, porque dessa forma poderemos melhor compreender os mecanismos do equilíbrio e desequilíbrio da coagulação e assim progredir no diagnóstico de distúrbios que acometem as aves / Abstract: Hemostasis depends on a delicate balanced mechanism of several interactions between components of blood that are interdependent. The avian medicine and the interest in pathophysiological studies of these animals have increased, but slowly. Routine laboratory is still a difficulty in advancing diagnosis of diseases in birds. Tests for coagulation analysis used in mammals, can't always be used in these patients. This study used thromboelastometry to evaluate viscoelastic properties of poultry blood, that was activated with different agonists to extrinsic pathway activator, as homologous and heterologous thromboplastins, and also different temperatures were compared (37 and 40°C). The thromboelastometry is an efficient method to detect changes in blood viscoelasticity that was influenced by temperature and specificity of agonists. Advances in the use of laboratory methods should be encouraged in the routine of veterinary clinical pathology, because in that way, we better understand the mechanisms of balance and imbalance of coagulation and thus progress in diagnosis of diseases that affect these animals / Mestre

As doenças decorrentes da aterosclerose apresentam uma prevalência mais elevada entre pacientes submetidos a transplante de órgãos sólidos comparativamente à população em geral. Os motivos para esta discrepância podem estar na maior exposição dos pacientes transplantados a fatores de risco cardiovascular. Recentemente identificou-se a participação de fatores da coagulação na patogênese da aterosclerose, tanto em estudos populacionais quanto em pacientes transplantados. No presente estudo aferiram-se diversos fatores da coagulação e a exposição a fatores de risco convencionais para doença cardiovascular em um grupo de 270 pacientes transplantados renais comparativamente a um grupo de indivíduos saudáveis. Adicionalmente, compararam-se pacientes transplantados renais com e sem o diagnóstico de doença cardiovascular quanto a exposição a características ambientais e genéticas relacionadas aos fatores da coagulação e fatores de risco clássicos para doença cardiovascular. As variáveis estudadas foram: idade, sexo, tabagismo, história familiar de doença cardiovascular, índice de massa corporal, pressão arterial sistólica e diastólica, esquema imunossupressor, glicemia, colesterol total, triglicerídios, fibrinogênio, interleucina-6 (IL-6), inibidor do ativador do plasminogênio tipo 1 (PAI- 1 ), fator VIl coagulante (FVIIc), polimorfismos genéticos do fator VIl c (Arg/Gin 353), alfa (TIA 312) e beta (G/A-445 ) fibrinogênio, PAI-1 (4G/5G), IL-6 (intron-4). O grupo de 270 pacientes transplantados renais foi similar ao grupo de 31 indivíduos saudáveis em relação à idade, sexo e índice de massa corporal. Entre os pacientes transplantados a proporção de tabagistas foi menor (15,9% vs 38,7%) e pressão arterial mais elevada (146/84 vs 133/71 mmHg). Os níveis de colesterol total, triglicerídios, fibrinogênio, interleucina 6, fator VIl coagulante e dímero-D foram mais elevados nos pacientes transplantados comparativamente aos indivíduos saudáveis. Sessenta e três (23,3%) pacientes transplantados tinham o diagnóstico de doença cardiovascular, sendo que 22 já apresentavam doença previamente ao transplante. Estes pacientes eram mais idosos e apresentavam maior freqüência de história familiar positiva para doença cardiovascular e tabagismo comparativamente aos pacientes transplantados sem doença cardiovascular. Não houve diferença entre os 2 grupos em relação a sexo, índice de massa corporal e pressão arterial. Os esquemas de medicações imunossupressoras foram similares nos 2 grupos. Os pacientes com doença cardiovascular apresentaram níveis significativamente mais elevados de fibrinogênio [415 (230-1050) mg/dl vs 360 (211-650) mg/dl P<0,001], interleucina-6 [2,4 (0,26-25) pg/ml vs 2,0 (0,19-23,9) P=0,017], glicose [6 ,6+-2,7 mmoi/L vs 5,9+-1 ,3 mmoVL P=0,007), triglicerídios [1 ,8(0,7-7,5) mmoi/L vs 1,5 (0,4- 12,3) mmoi/L P=0,023] e mais baixos de albumina (40,5+3,3 g/L vs 42,5+3,6 g/L P<0,001). Os níveis de fator Vllc [97(29,8-214)% vs 96 (40,7-226) %; P=0,31], PAI- 1 [9 ,9(2,0-34,6) AU/ml vs 9,0{0,8-50) AU/ml; P=0,248] e colesterol total [6 ,0(4,0- 11 ,0) mmoi/L vs 5,9 (2,9-10,2) mmoi/L P=0,454) foram similares. A freqüência dos alelos raros dos polimorfismos genéticos dos genes do beta fibrinogênio (A/G -445), alfa fibrinogênio (A/T 312), IL-6 (intron-4 A/G), fator Vllc (Arg/Gin-353) e PAI-1 (4G/5G) foram similares entre os pacientes transplantados renais com e sem doença cardiovascular. A interação do a leio A-445 do beta fibrinogênio e tabagismo associou-se com maior prevalência de doença cardiovascular nos pacientes transplantados renais. Em análise de covariância observou-se associação dos níveis de fibrinogênio com a idade, níveis de IL-6 e ciclosporinemia. Os níveis de fator Vllc associaram-se com os niveis de trigliceridios e colesterol e com o genótipo, sendo mais baixo nos portadores do alelo raro (Gin353). Os níveis de PAI-1 associaramse com os níveis de glicose e triglicerídios e com o genótipo, sendo mais elevado nos portadores do alelo 4G. Os nlveis de IL-6 associaram-se com ciclosporinemia. Em análise de regressão logística observou-se associação independente de doença cardiovascular com idade, história familiar positiva para doença cardiovascular, tabagismo e níveis séricos de fibrinogênio e albumina. Em conclusão, identificou-se alterações no sistema de coagulação de pacientes transplantados renais à longo prazo. A prevalência de doença cardiovascular associou-se com estas alterações e com fatores de riscos clássicos para doença cardiovascular, como idade, história familiar e tabagismo. Não detectou-se associação entre a freqüência dos diversos polimorfismos genéticos e prevalência de doença cardiovascular entre os pacientes transplantados. A associação entre a interação de tabagismo e presença do alelo raro (A-445) do beta-fibrinogênio com o diagnóstico de doença cardiovascular merece futura investigação. / The prevalence of clinicai consequences of atherosclerosis is increased in patients submitted to solid organs transplantation, in comparison to the general population. The reason of this is not completely understood. The exposition to a higher prevalence of classical risk factors for cardiovascular disease has been considered. Recently, abnormalities in the coagulation factors are also thought to play a role in the pathogenesis of the atherosclerosis, both in unselected populations and transplant patients. In this study, we studied coagulation factors and the exposition to classical risk factors for cardiovascular disease in a group of 270 renal transplant recipients and compared them to a sample of 31 healthy subjects. Additionally, we analysed those risk factors for cardiovascular disease in transplant patients with and without a diagnosis of cardiovascular disease. In this setting, we evaluated the distribution of the coagulation factors leveis and polymorphisms of the respective genes. The variables studied were: age, gender, smoking, family history of cardiovascular disease, body mass index, blood pressure, immunosuppressor agents, glicemia, total cholesterol, tryglicerides, fibrinogen, interleukin-6 (IL-6), plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1 ), facto r VIl coagulant (FVIIc), D-dimer, and genetic polymorphisms of factor Vllc (Arg/Gin 353) , alpha (T/A 312) and beta (G/A445 ) fibrinogen, PAI-1 (4G/5G), IL- 6 (intron-4). Age, gender and body mass index were similar in renal transplant recipients and control group. However, in the transplant group the frequency of smokers was lower (15,9% vs 38,7%) and the blood pressure was higher (146/84 vs 133/71 mmHg). The total cholesterol, tryglicerides, fibrinogen, IL-6, facto r VIl c and Ddimer leveis were significantly increased in transplant recipients compared to healthy controls. Cardiovascular disease was present in sixty-three (23,3%) transplant patients. Twenty-two of them have had the diagnosis previous to transplantation. The former patients were older and the frequency of smoking and positive family history of cardiovascular disease was higher compared to transplant patients without cardiovascular disease. There were no differences between these 2 groups related to sex, body mass index and blood pressure. The immunosuppressive regimes were similar in both groups. The patients with cardiovascular disease presented significantly higher leveis of fibrinogen [415 (230-1050) mg/dl vs 360 (21 1-650) mg/dl P<0,001], IL-6 [2,4 (0,26-25) pg/ml vs 2,0 (0,19-23,9) P=0,017], glucose [6,6+- 2,7 mmol/1 vs 5,9+-1 ,3 mmol/1 P=0,007) and tryglicerides [1 ,8(0,7-7,5) mmol/1 vs 1,5 (0,4-12,3) mmol/1 P=0,023]. and lower leveis of albumin (40,5+3,3 g/1 vs 42,5+3,6 g/1 P<0,001). The leveis offactor Vllc [ 97(29,8-214)% vs 96 (40,7-226) %; P=0,31]. PAI-1 [9,9(2,0-34,6) AU/ml vs 9,0{0,8-50) AU/ml; P=0,248] and total cholesterol [6,0(4,0-11 ,0) mmol/1 vs 5,9 (2,9-1 0,2)] mmol/1 P=0,454] were similar. The frequency of the rare alleles of the polymorphic genes of beta fibrinogen (A/G -445), alpha fibrinogen (AIT 312), IL-6 (intron-4 A/G), factor Vllc (Arg/Gin-353) and PAI-1 (4G/5G) were similar in both groups of transplant patients. The interaction of the beta fibrinogen allele A-445 and smoking was associated with a higher prevalence of cardiovascular disease. Fibrinogen leveis were associated with age, IL-6 leveis and trough leveis of cyclosporin. Difference in plasma factor Vllc leveis were associated with factor VIl genotype, tryglicerides and cholesterol. Carriers of the Gln353 allele had lower Vllc when compared with Arg353 homozygous, which may conter a reduced thrombotic risk. Difference in PAI-1 leveis was associated with glucose, tryglicerides and 4G/5G genotype. Carriers of the 4G allele had higher PAI-1 leveis compared with 5G homozygous. IL-6 leveis were associated with trough cyclosporin leveis. Cardiovascular disease was independently associated with age, positive family history for cardiovascular disease, smoking, fibrinogen and albumin in multivariate analysis. In conclusion, long-term renal transplant recipients manifest alterations in coagulation system. Cardiovascular disease was associated with these conditions, as well as with the classical risk factors such as age, positive family history and smoking. There was no association between the polymorphic genes coding for beta and alpha fibrinogen, IL-6, factor Vllc and PAI-1 with a higher prevalence of cardiovascular disease in the transplant recipients presently studied. The association between the prevalence of cardiovascular disease and interaction of smoking and the 13-fibrinogen A-445 allele deserves further investigation.

A hemofilia A (HA) é uma doença hemorrágica hereditária ligada ao cromossomo X, causada pela atividade reduzida ou ausente do fator VIII da coagulação (FVIII). Essa doença é o resultado de mutações heterogêneas no gene do FVIII. A identificação das mutações patogênicas é importante para o aconselhamento genético e para a avaliação das manifestações clínicas. Embora mais de 700 mutações no gene já tenham sido descritas como responsáveis pela HA grave (nível de FVIII <1%), não existem dados a respeito na população do Rio Grande do Sul. O objetivo desse trabalho é a identificação das alterações genéticas em 48 pacientes hemofílicos graves, de diferentes famílias, com resultado negativo para a presença das inversões nos íntrons 22 e 1. Tais inversões são as mutações mais comumente encontradas (40-50% e 5%, respectivamente) em hemofílicos A graves. Todos os pacientes foram analisados para a presença de grandes deleções por PCR multiplex, utilizando-se 35 pares de primers que abrangem os 26 éxons e as regiões 5’ e 3’UTR do gene. Os pacientes que não apresentaram grandes deleções foram analisados por sequenciamento direto dos exons. As variações nas sequências foram verificadas com os softwares Codon Code Aligner e MEGA5.04, para realizar alinhamentos múltiplos e para analisar a tradução da proteína mutada. O software PolyPhen-2 foi utilizado para verificar se as mutações alterariam a estrutura e a função da proteína; o software SDM foi utilizado para verificar se as mutações alterariam a estabilidade da proteína. Uma figura com a localização das mutações no gene do FVIII foi desenhada com o programa Pymol. Foram encontradas em 70% dos pacientes: uma grande deleção (incluindo os éxons 4, 5 e 6), nove pequenas deleções, cinco pequenas inserções, oito mutações de sentido trocado e seis mutações sem sentido, das quais treze são recorrentes e dezesseis são novas mutações, não descritas no banco de dados online HAMSTeRS. Quarenta e quatro por cento dos indivíduos com mutação encontrada desenvolveram inibidores, sugerindo um maior risco de desenvolvimento de inibidores em pacientes com grandes deleções, mutações sem sentido e pequenas deleções/inserções, quando comparado com pacientes com mutações de troca de sentido. Entre outras mutações de efeito evidente, foram encontradas duas mutações (D542G e S109P) que podem interferir em sítios de ligação ao cálcio, uma mutação (P2205R) que pode ser prejudicial à interação entre o FVIII e o fator de von Willebrand (FvW) e uma mutação (L2297R), que altera a superfície eletrostática da proteína. Esses dados contribuem para o melhor entendimento da funcionalidade e da estrutura do FVIII. / Hemophilia A (HA) is an X-linked inherited bleeding disorder caused by reduced or absent clotting factor VIII (FVIII) activity, determined by heterogeneous mutations in the FVIII gene. Identification of these pathogenic mutations is important for genetic counseling and the assessment of clinical manifestations. Although more than 700 mutations of the FVIII gene have been reported as responsible for severe hemophilia (FVIII: C<1%), the corresponding data is currently insufficient for Southern Brazilian populations. The aim of this study was to identify genetic changes in 48 unrelated severe HA patients, who showed negative results for inversions in introns 22 and 1. These inversions are the most common mutations (40-50% and 5%, respectively) in severe HA patients. All patients were screened for gross deletions by multiplex PCR, with 35 pairs of primers for the 26 exons and 5’- and 3’- UTR of the gene. Those without any gross deletion were then analyzed by direct sequencing for all exons. Sequence variation was analyzed with the Codon Code Aligner and the Mega0.4 softwares for multiple alignments and protein translation. PolyPhen-2 was used to predict if the mutations would alter protein’s structure and function; SDM was used to verify if the mutations would alter the protein stability. One image with the location of FVIII mutations was drawn with the Pymol software. In 70% of the patients one gross deletion (including exons 4, 5 and 6), nine small deletions, five small insertions, eight missense and six nonsense mutations were found, of which thirteen were recurrent and sixteen were novel, never reported in the HAMSTeRS database. Forty-four per cent of these mutation carriers developed FVIII inhibitors, suggesting a higher risk of inhibitors development in patients with large deletions, small deletions/insertions, and nonsense mutations than in patients with missense mutations. Among mutations of clear effect, two mutations (D542G and S109P) that may interfere with calcium binding, a mutation that may affect FVIII and von Willebrand factor (FvW) interaction (P2205R), and L2297R, that clearly affects the molecule’s electrostatic surface were found. The results enable us to better understand structural and functional aspects of this protein.

Foi realizada inicialmente uma revisão sobre o processo de hemostasia, as características da hemofilia A, e os fatores que influem na formação de inibidores contra o Fator VIII, um dos principais problemas na terapêutica de reposição do mesmo em hemofílicos A graves. Posteriormente, visando verificar possíveis suscetibilidades genéticas no desenvolvimento de tais anticorpos, foram descritos estudos envolvendo 154 hemofílicos A graves localizados no Rio Grande do Sul, 47 com e 107 sem inibidores. A pesquisa envolveu 10 polimorfismos em cinco sistemas relacionados à resposta imune (IL4, IL4R, IL10, TNFα e TNFR1). Três desses polimorfismos (IL4R 1902A>G, TNFα -863A>C, e TNFR1 303A>G) nunca haviam sido estudados dentro desse contexto. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas nas prevalências desses polimorfismos entre as duas séries, em concordância com algumas, mas não todas as investigações prévias. A questão de por que alguns pacientes desenvolvem tais inibidores, mas outros não, permanece em aberto. / A review was initially made on the hemostatic process, the characteristics of hemophilia A, and the factors that influence the formation of inhibitors against Factor VIII, one of the main problems that exist in the therapeutics of its replacement in severe hemophilia A patients. Afterwords, in an attempt to verify possible genetic susceptibilities in the development of such antibodies, a description was made of studies involving 154 severe hemophilia A subjects living in Rio Grande do Sul, 47 with and 107 without inhibitors. The research included 10 polymorphisms in five systems related to the immune response (IL4, IL4R, IL10, TNFα and TNFR1). Three of them (IL4R 1902A>G, TNFα -863A>C, and TNFR1 303A>G) had never been studied in this context. No statistical significant differences were found between the two series, in agreement with some, but not all previous investigations. The question of why some, but not all severe hemophilia A patients develop anti-Factor VIII antibodies remain open.