Objetivo. Uma coorte de crianças foi observada sob duas abordagens: coorte prospectiva e coorte retrospectiva (histórica) e o objetivo foi comparar as estimativas da função de riscos do modelo de Cox entre as duas abordagens e a mesma comparação com o modelo complemento log-log. Além disso, comparar as estimativas da função de riscos pelos modelos de Cox e complemento log-log para cada uma das abordagens, separadamente. Métodos. Quando se estuda o tempo de sobrevida da amamentação sem as covariáveis, foram obtidas as estimativas pela técnica atuarial e modelo complemento log-log da informação retrospectiva e a técnica de Kaplan-Meier para a informação prospectiva. Os modelos de Cox e complemento log-log foram utilizados para estimar a razão de riscos (HR) com covariáveis para as duas abordagens. Resultados. Sem as covariáveis, a comparação entre as duas abordagens mostrou que as estimativas de S(t) pela informação retrospectiva estão um pouco defasadas em relação à medida prospectiva. Com as covariáveis, os resultados dos modelos de Cox e complemento log-log são semelhantes tanto para os dados prospectivos quanto para os retrospectivos. Foram semelhantes, também, os resultados de um mesmo modelo para cada uma das fontes de informação. Conclusões. Em geral, as estimativas foram bastante próximas em quaisquer das comparações. Somente a variável hábito de fumar da mãe durante a gravidez permaneceu nos modelos finais para todas as técnicas utilizadas, com estimativas próximas, reforçando semelhança entre as várias abordagens. / Objective. A cohort of children was observed under two approaches: prospective cohort and retrospective (historical) cohort and the objective was to compare the estimates of the hazard ratio from Cox model between the two approaches and do the same comparison using the complementary log-log model. Moreover, to compare the estimates of the hazard ratio from the two models to each one of the approaches, separately. Methods. When the survival time for breastfeeding is studied without the covariates, the comparison between the results of actuarial technique and the complementary log-log model has been made for the recorded information. The Kaplan-Meier technique has been used with the daily notebook measures. The Cox and complementary log-log models can estimate the risk rate of covariates categories to both approaches. Results. Without the covariates, the comparison between the two information resources showed that retrospective measures give lower estimates than that from the prospective measures. With covariates, the estimates are not so different and led to the same results. Conclusions. The estimates of each one of the comparisons were too close. Just the variable mothers smoking during the pregnancy stayed in the final models for every techniques used, with close estimates, reinforcing likeness between the several approaches.

A serinoprotease Pic é uma proteína autotransportadora que apresenta papel importante na colonização da mucosa intestinal por E. coli enteroagregativa (EAEC). Uma cepa de E. coli enteropatogênica atípicas (aEPEC) albergando o gene pic foi detectada em um estudo prévio. O presente estudo teve como objetivo caracterizar a proteína Pic produzida por essa cepa de aEPEC (BA589). O gene pic em BA589 está presente em um plasmídeo de alto peso molecular (~98 kb) e o sequenciamento desse gene mostrou identidade de 99% com pic de EAEC 042. Pic da cepa BA589 (Pic589) foi capaz de clivar mucina bovina, hemaglutinar eritrócitos de coelho e clivar moléculas das três vias sistema complemento. O mutante BA589Dpic todas essas atividades in vitro. A cepa selvagem foi capaz de colonizar o intestino de camundongos tratados com estreptomicina, o que não foi observado com o mutante BA589Dpic. Desta forma, a serinoprotease Pic representa um fator de virulência adicional na cepa de aEPEC BA589, relacionada às etapas de adesão, colonização e evasão do sistema imune inato. / The serine protease Pic is an autotransporter protein that plays an important role in the colonization of the intestinal mucosa by enteroaggregative E. coli (EAEC). An atypical enteropathogenic E. coli (aEPEC) strain harboring the pic gene has been detected in a previous study. The present study aimed to characterize the protein Pic produced by that aEPEC strain (BA589). In BA589 pic is located in a high molecular weight plasmid (~98 kb), and sequencing of this gene showed 99% identity with pic from EAEC 042. Pic from BA589 (Pic589) was able to cleave bovine mucin, hemagglutinate rabbit erythrocytes and cleave molecules of the three complement system pathways. The mutant BA589Dpic lost all these capacities. The wild type strain was able to colonize the intestine of streptomycin treated mice, which was not observed with the mutant BA589Dpic. Thus, the serine protease Pic represents an additional virulence factor in aEPEC strain BA589, associated with adherence, colonization and evasion of innate immune system.

A Degeneração da Mácula Relacionada a Idade (DMRI) acomete pessoas com mais de 50 anos, comprometendo gravemente a visão. Desde 2005, têm-se sugerido uma correlação entre DMRI e o polimorfismo Y402H do Fator H (FH). Os mecanismos pelos quais a proteína FH participa da etiopatogenia dessa doença têm sido alvo de muitos estudos, desde então. Neste trabalho, investigamos a correlação entre esse polimorfismo e a expressão de proteínas da via alternativa e parâmetros do perfil lipídico de pacientes com DMRI. As concentrações de FH, Fator B, C3 e Proteína C-reativa foram semelhantes entre os grupos controle e paciente. As concentrações de Fator D e os autoanticorpos encontravam-se reduzidos nos pacientes; enquanto Fator I e os demais parâmetros do perfil lipídico estavam aumentados nesses pacientes. A variante Y402 aparentemente aderiu melhor à superfície das leptospiras (superfície ativadora da via alternativa) em relação à variante H402, mas não houve diferença entre as variantes em relação à ligação a células endoteliais (superfície não ativadora). / Age-related Macular Degeneration (AMD) affects people over 50 years, and severely prejudice the vision. Since 2005, it has been suggested a correlation between AMD and the Y402H polymorphism of Factor H (FH). After this, the mechanisms by which FH protein participates in the pathogenesis of this disease have been extensively studied. In this study, we investigated the correlation between this polymorphism and expression of proteins of the alternative pathway and lipid profile of patients with AMD. The concentrations of FH, Factor B, C3 and C-reactive protein were similar between the control and patient groups.Factor D concentrations and autoantibodies levels were reduced in patients, while Factor I concentrations and the levels of the other parameters of lipid profile were increased in these patients.Apparently, Y402 variant displays better adhesion to the surface of Leptospira (alternative pathway activating surface) than the H402 variant, but no difference between the variants of the linkage to endothelial cells (non-alternative pathway activating surface).

Hemólise intravascular, causada pelo envenenamento por aranhas Loxosceles, é dependente da ação da esfingomielinase D, toxina do veneno que se liga à membrana dos eritrócitos e ativa proteases responsáveis pela clivagem de glicoforinas, tornando as células sensíveis à ação lítica do Sistema Complemento autólogo. O objetivo do estudo foi identificar possíveis proteases envolvidas nesse processo. A toxina foi expressa, purificada e apresentou suas funções biológicas ativas. O tratamento de eritrócitos humanos com a toxina removeu glicoforinas da membrana, não teve ação sobre Kell, CD59, DAF e CR1 e induziu a deposição de C1q, C3, C4, C5b-9, fator B e properdina. O pré-tratamento das células com os inibidores galardina, bestatina e fenantrolina reduziu a hemólise dependente de complemento autólogo. A ativação de proteases das membranas sobre o substrato fluorescente Abz-FRSSR-EDDnp, induzida pela toxina, foi prevenida por PMSF, simvastatina e fenantrolina, sugerindo o envolvimento de metalo- e serinoproteases no modelo de hemólise dependente de complemento estudado. / Intravascular hemolysis caused by poisoning by spiders Loxosceles, is dependent on the sphingomyelinase D action, a toxin that binds to the erythrocytes membrane and activates proteases responsible for the glycophorins cleavage, rendering the cells sensitive to the lytic action of the autologous complement system. This study aimed to identify possible membrane proteases involved in this process. The toxin was expressed, purified and showed to be functionally active. Treatment of human erythrocytes with the toxin caused the removal of the membrane glycophorins, but did not act on Kell, CD59, DAF and CR1 and induced deposition of C1q, C3, C4, C5b-9, factor B and properdin. Pretreatment of cells with inhibitors galardin, phenanthroline and bestatin reduced the complement-dependent hemolysis. The action of membrane proteases upon the fluorescent substrate Abz-FRSSR-EDDnp, induced by the toxin, was prevented by PMSF, simvastatin, and phenanthroline, suggesting the involvement of metallo- and serine proteases in this complement-dependent hemolysis model.

A deficiência da proteína C5 do sistema complemento humano é rara com 38 casos relatados na literatura e freqüentemente associada a severas infecções provocadas por bactérias Neisseria. O objetivo do trabalho é caracterizar imunológica e geneticamente esta deficiência encontrada pela primeira vez em brasileiros. Por imunodifusão dupla obtivemos níveis expressivos de C3, C4, C6, C7, C8, C9, Fator B, Fator H e Fator I em todos os membros desta família, a proteína C5 não foi detectada no soro de três irmãos: II:9, II:4 e II:5. Por ELISA a concentração de C5 nestes indivíduos foi (0,9; 1,0; 1,3 µg/ml, 45- 190 µg/ml). Soros destes probandos não apresentam atividade hemolítica mediada pelo sistema complemento. O cDNA de C5 dos indivíduos I:1, I:2, II:4 e II:9 apresenta a deleção do éxon 30. Causada pela substituição de GAG4028 por GAA4028 no último nucleotídeo deste éxon que leva a um erro no splicing. Este defeito provavelmente produz uma proteína incompleta e destinada à degradação. / The deficiency of the C5 component of the complement system is rare with 38 described cases in the literature. This deficiency is frequently associated with severe infections, especially caused by Neisseria. Our objective is to characterize immunologically and genetically this deficiency, the first of its type described in the Brazilian population.We noted that C3, C4, C6, C7, C8, C9, Factor B, Factor H and Factor I have expressive levels in all the individuals sera of this family. C5 was absent in individuals II:4, II:5 and II:9. By ELISA a C5 concentration in this individuals were 0,9; 1,0; 1,3 µg/ml (normal: 45 - 190 µg/ml). Their serum doesn´t present hemolytic activity mediated by complement system. The C5 cDNA from individuals I:1, I:2, II:4 and II:9 has éxon 30 deleted. Caused by the substitution of GAG4028 for a GAA4028 in the last codon of exon 30. This defect was responsible for the deficiency of C5 in this family and this deletion would probably produce an unstable protein destined for degradation.

Malária é uma das principais causas de doença e morte no mundo, principalmente de crianças. É considerada a força de seleção evolucionária mais forte que se conhece na história recente do genoma humano. Além dos fatores ambientais e do próprio parasito, fatores genéticos do hospedeiro têm um papel fundamental tanto na suscetibilidade como na evolução clínica da infecção. O sistema imune inato reconhece os plasmódios através de um número limitado de receptores de reconhecimento padrão (PRRs) e inicia vários mecanismos de defesa que resultam no desenvolvimento de inflamação e resistência do hospedeiro à infecção. Mas, a eliminação completa do parasito requer respostas imunes adaptativas que são amplificadas pela ativação do sistema imune inato. As manifestações clínicas de malária são dependentes dos níveis de citocinas próinflamatórias circulantes produzidas, as quais em níveis altos contribuem para a imunopatologia da doença. O balanço entre respostas pró e antiinflamatórias dirigidas contra o parasito é considerado crítico para a proteção clínica, assim a resposta imune inata pode contribuir tanto para proteção da malária como para modular a resposta imune adaptativa. Neste estudo, nós investigamos polimorfismos de um único nucleotídeo (SNP) dos genes de três PRRs: TLR, MBL e CR1 de indivíduos infectados por Plasmodium e residentes em áreas endêmicas de malária no Brasil. Os SNPs TLR1 (I602S), TLR4 (D229G), TLR6 (S249P), TLR9 (T-1237C/ -1486C), MBL [exon 1 nos códons 52, 54, e 57 (MBL2*A ou D, A ou B e A ou C, respectivamente); na região do promotor na posição -221 (*X ou *Y); e na posição +4 da região não traduzida (*P ou *Q)] e CR-1(C5507G) foram determinados por PCR-RFLP. Nós observamos associações entre os polimorfismos TLR1 I602S, TLR6 S249P e da região não traduzida +4 (*Q) e manifestações clínicas de malária e entre os polimorfismos TLR9 T-1486C, TLR T-1237C, MBL*D (códon 52) e do diplótipo de produção insuficiente de MBL (XA+O/O) e parasitemias mais altas. Nenhuma associação foi observada entre o polimorfismo CR-1 C5507G e manifestações clínicas de malária ou com parasitemia. Ao analisarmos juntos os polimorfismos de MBL e TLR, observamos que indivíduos com diplótipo de produção suficiente de MBL (YA/YA+YA/XA+YA/O+XA/XA) TLR1 I602S tinham menos manifestações clínicas de malária e indivíduos com diplótipo de produção suficiente de MBL e não carreadores do alelo TLR9 -1486C tinham parasitemias mais baixas do que os indivíduos com diplótipo de produção insuficiente de MBL e carreadores dos alelos variantes de TLR1 I602S e TLR9 -1486C, respectivamente. Juntos, nossos dados indicam que polimorfismos do promotor de TLR-9 e os diplótipos de produção insuficiente de MBL (XA+O/O) devem de algum modo controlar o nível de parasitemia por plasmódios enquanto a deficiência de TLR1 parece predispor para a presença de manifestações clínicas de malária. Também, podemos sugerir que existe uma cooperação entre TLR1, TLR9 e MBL na ativação da resposta imune inata na malária. Estes achados genéticos devem contribuir para o entendimento da patogênese da malária e levantar uma questão potencialmente interessante que é digna de investigações posteriores em outras populações a fim de validar a contribuição genética destes loci na patogênese da malária / Malaria is one of the major causes of disease and death worldwide, mainly of children. It is also the strongest known force for evolutionary selection in the recent history of the human genome. Besides environmental and parasite factors, host genetic factors play a major role in determining both susceptibility to malaria and the course of infection. Innate immune mechanisms directed against Plasmodium parasites both contribute to protection from malaria and modulate adaptive immune responses. The innate immune system recognizes Plasmodium via a limited number of pattern-recognition receptors (PRRs) and initiates a broad spectrum of defense mechanisms that result in the development of inflammation and host resistance to infection. But, the complete control of the infection requires adaptive immune responses; and the innate immune system is also very efficient in instructing the cellular mediators of adaptive immunity to lead a powerful additional strike force against the parasite. Clinical malaria is characterized by high levels of circulating proinflammatory cytokines, which are thought to contribute to the immunopathology of the disease. The balance between pro- and anti-inflammatory responses toward the parasite is considered critical for clinical protection. The innate immune system initiates and thus sets the threshold of immune responses. In this study, we investigated single nucleotide polymorphisms (SNP) in the genes of three PRRs: TLR, MBL and CR1 in Plasmodium-infected individuals living in endemic areas of Brazil. The SNPs TLR1 (I602S), TLR4 (D229G), TLR6 (S249P), TLR9 (T-1237C/ -1486C), MBL [in the coding sequence of exon 1 at codons 52, 54, and 57 (MBL2*A or D, A or B, and A or C, respectively); in the promoter region at position -221 (*X or *Y); and in the untranslated sequence at position +4 (*P or *Q)] and CR-1(C5507G) were determined by PCR-RFLP. We observed associations of the TLR1 I602S, TLR6 S249P and untranslated sequence at position +4 MBL (*Q) variants with clinical manifestations of malaria and of the TLR9 T-1486C, TLR9 T-1237C, MBL2*D and MBL-insufficient diplotype (XA+O/O) with higher parasitemias. No association was observed to the CR-1 C5507G ) and clinical manifestations of malaria or parasitemia. Also, we observed that individuals with MBLsufficient haplotype (YA/YA+YA/XA+YA/O+XA/XA) and not bearing the allele TLR1 I602S had less clinical manifestations of malaria and individuals with MBL-sufficient haplotype and not bearing TLR9 -1486C had lower parasitemias when compared to individuals with MBL-insufficient diplotype and bearing the variant alleles TLR1 I602S and TLR9 -1486C, respectively. Altogether, our data indicate that TLR-9 promoter and MBL-insufficient haplotype (XA+O/O) polymorphisms to some extent may control the level of Plasmodium parasitemia while TLR1 deficiency seems to predispose to mild malaria. Also, they could suggest cooperation among TLR1, TLR9 and MBL in the immune response against malaria. These genetic findings may contribute to the understanding of the pathogenesis of malaria and raise a potentially interesting issue that is worthy of further investigation in other population in order to validate the genetics contribution of these loci to the pathogenesis of malaria

A rejeição ao aloenxerto mediada por mecanismos celulares ou humorais representa uma importante complicação no pós-transplante renal. Estudos anteriores demonstraram que o depósito de C4d peritubular é um marcador de rejeição mediada por anticorpos. A técnica padrão ouro para a pesquisa de C4d é a imunofluorescência em criostato. No entanto, o manuseio do material congelado implica em algumas limitações custo-operacionais, particularmente em nosso meio. Nos casos de rejeição mediada por anticorpos é de relevância patogenética a análise da participação de linfócitos B e plasmócitos, pois são as células responsáveis pela produção de anticorpos. Considerando que até o momento o envolvimento de linfócitos B e plasmócitos no processo de rejeição foi pouco investigado, no presente estudo também será analisada a expressão de CD20 e CD138 em biópsias renais, para caracterização destes componentes celulares. Portanto, o objetivo do presente estudo foi analisar a detecção do fragmento C4d por meio de 4 diferentes técnicas, além de analisar o infiltrado de linfócitos B e plasmócitos em biópsias de enxerto renal, correlacionando estes achados com o C4d peritubular. Foram analisadas 107 biópsias de 82 pacientes submetidos a transplante renal. A pesquisa do C4d foi realizada utilizando-se as técnicas de imunofluorescência [IF] (em cortes de criostato e de parafina) e imuno-histoquímica [IH] (em cortes de criostato e de parafina), enquanto que as pesquisas dos linfócitos B e plasmócitos foram realizadas pela técnica de IH em cortes de parafina utilizando-se os anticorpos anti-CD20 e anti-CD138, específicos para linfócitos B e plasmócitos, respectivamente. Com relação à detecção de C4d, as técnicas com maior índice de concordância com a IF-criostato, considerada padrão-ouro, foram IH-criostato (75,6% dos casos apresentaram resultados coincidentes, r=0,72; p<0,0001) e IF-parafina (73%, r=0,59; p=0,0001), enquanto a taxa de concordância na técnica de IH-parafina foi de apenas 51,4% (r=0,35; p=0,03). Analisando a evolução clínica, a sobrevida do enxerto renal em 3 anos pós-biópsia foi menor no grupo C4d positivo comparado ao grupo C4d negativo (67% vs 96%, respectivamente, p=0,01). A prevalência de linfócitos B (CD20+) foi de 54% das biópsias de enxerto renal. A análise histológica do infiltrado de linfócitos B revelou 2 padrões distintos de infiltrado: padrão de células isoladas (74%) e padrão nodular (26%). O padrão nodular esteve associado a uma menor sobrevida do enxerto renal em 3 anos pós-biópsia (61% vs 89% no grupo CD20 negativo; p=0,03; e 61% vs 87% no grupo padrão de células isoladas; p=0,03). A prevalência de plasmócitos (CD138+) em biópsias de enxerto renal foi de 59%. O infiltrado plasmocitário não esteve associado a uma pior evolução clínica do transplante. A análise da correlação entre C4d peritubular, linfócitos B e plasmócitos demonstrou que o número de células CD20+ e CD138+ foi significativamente maior nos casos C4d positivos comparados aos casos C4d negativos (CD20+: 155±53 vs 26±7 cels/mm2, respectivamente; p=0,001; CD138+: 46±22 vs 4±1 cels/mm2, respectivamente; p=0,002). O presente estudo concluiu que o depósito peritubular de C4d e o infiltrado de linfócitos B, em especial o padrão nodular, estão associados a uma evolução clínica desfavorável do transplante renal. Outra conclusão importante é que há uma associação positiva entre os infiltrados de linfócitos B e de plasmócitos com o C4d peritubular, sugerindo um possível papel destas células responsáveis pela produção de anticorpos na ativação do sistema complemento in situ. Finalmente, as técnicas de IH-criostato e IF-parafina podem ser consideradas técnicas alternativas à técnica de IF-criostato para a detecção do C4d / Allograft rejection mediated by cellular or humoral mechanisms represents an important complication after kidney transplantation. Capillary C4d deposition was recognized as a specific and independent prognostic marker of antibody mediated rejection. The gold standard technique for C4d detection is the immunofluorescence in cryostat sections. However, this technique involves some operating and costs limitations, particularly in Brazil. In antibody mediated rejection, the analysis of B lymphocytes and plasma cells is of pathogenetic relevance since these cells are responsible for antibody production. Considering that the involvement of B lymphocytes and plasma cells in the rejection process is not clear, in this study the CD20 and CD138 expression in kidney biopsies will be also analyzed. Therefore, the aim of the present study was to analyze the C4d detection by 4 different techniques and the infiltration of B lymphocytes and plasma cells in renal allograft biopsies, correlating these findings with the capillary C4d deposition. One hundred and seven biopsies of 82 renal transplant patients were analyzed. C4d was evaluated by immunofluorescence (IF) and immunohistochemistry (IHC) techniques in frozen and paraffin sections (obtained from the same patients), whereas B-lymphocytes and plasma cells were evaluated by immunohistochemistry in paraffin sections using specific antibodies anti-B Lymphocytes (CD20) and anti-plasma cells (CD138). Regarding the C4d detection, the techniques with higher concordance rate with frozen-IF, considered the gold standard, were the frozen-IHC technique (85.4% of cases showed coincident results, r=0.72; p<0.0001) and the paraffin-IF technique (73%, r=0.59; p=0.0001), whereas the concordance rate in the paraffin-IHC technique was only 51.4% (r=0.35; p=0.03). The clinical follow up analysis demonstrate that C4d positive group was associated with a poor graft survival at 3 years post-diagnosis (67% vs 96% in C4d negative group; p=0.01). The histological analysis of mature B cells (CD20+) infiltrate showed 2 distinct patterns: scattered cells and clusters. The cluster pattern was associated with poor graft survival at 3 years (61% vs 89% in the CD20 negative group; p=0.03; and 61% vs 87% in the CD20+ scattered pattern group; p=0.03). The plasma cells infiltrate was not associated with a worse clinical transplant outcome. The analysis of the capillary C4d and B lymphocytes correlation demonstrate that the number of CD20+ and CD138+ cells was significantly higher in C4d positive cases (CD20+: 155±53 vs 26±7 cells/mm2, respectively; p=0.001; CD138+: 46±22 vs 4±1 cells/mm2, respectively; p=0.002). This study concluded that C4d capillary and mature B cells (clusters pattern) are associated with worse graft survival. Another important conclusion is a positive association between B lymphocytes (mature B cells and plasma cells) and capillary C4d, suggesting a possible role of these cells, responsible for antibodies production, in the in situ complement system activation. Finally, the frozen-IHC and paraffin-IF techniques may be considered alternative to frozen-IF technique for C4d detection

Serpentes do gênero Bothrops são responsáveis por 90% dos acidentes ofídicos no Brasil. Seus venenos provocam efeitos locais em humanos e animais, como hemorragia, edema, dor e necrose, caracterizando uma resposta inflamatória, cujo mecanismo não está bem definido. Esses efeitos estão relacionados com a ação combinada de proteases, substâncias que induzem hemorragia e fosfolipases, bem como a liberação de mediadores endógenos gerados pelos venenos. Considerando que a ativação do sistema complemento (SC) e de funções celulares, como quimiotaxia, ativação, proliferação e citotoxicidade podem desempenhar papel importante nos processos inflamatórios e de lesão tecidual subsequentes ao envenenamento, o estudo propõe: a) investigar a capacidade dos venenos brutos de serpentes Bothrops jararacussu e Bothrops pirajai e das toxinas purificadas, serinoprotease de B. jararacussu (SPBj) e L-aminoácido oxidase de B. pirajai (LAAOBp), em modular a atividade do SC; b) avaliar a contribuição do efeito sobre o SC no recrutamento de leucócitos polimorfonucleares humanos (PMN); c) avaliar o potencial citotóxico direto dos venenos e toxinas sobre células mononucleares do sangue periférico humano (PBMC); d) analisar o efeito dos venenos sobre a modulação da expressão dos marcadores de ativação CD69, CD25 e HLA-DR em células T, B e natural killer (NK). Os resultados do ensaio de citotoxicidade mostraram que o veneno bruto de B. jararacussu foi citotóxico para PBMC apenas nas concentrações maiores, de 50 e 100g/mL, não apresentando citotoxicidade nas outras concentrações testadas. A serinoprotease apresentou baixa citotoxicidade para essas células, o que sugere a necessidade de maiores investigações quanto aos mecanismos que levam a essa morte celular. O aumento da viabilidade celular encontrado nas amostras incubadas com veneno bruto e LAAO de B. pirajai sugere possível indução de proliferação celular, que necessita de maiores estudos. Os resultados obtidos sugerem que os venenos brutos de B. jararacussu e B. pirajai são capazes de ativar o SC como observado nos ensaios cinéticos da VCVL e VA e de quimiotaxia de neutrófilos, onde ficou evidenciado que a migração celular foi devida a liberação dos fatores quimiotáticos do SC, C3a e C5a. e que suas respectivas toxinas, serinoprotease e LAAO apresentam efeitos moduladores sobre o SC humano, e estimulam investigações mais aprofundadas com a finalidade de se esclarecer os mecanismos de ação e identificar os componentes responsáveis pelos efeitos observados. Houve expressão aumentada de CD69, CD25 e HLA-DR nas células T CD4+ e CD8+, especialmente quando incubadas com veneno bruto de B. jararacussu e LAAO de B. pirajai, o que reflete ativação da resposta imune celular, e pode sugerir que este tipo de resposta desempenhe papel relevante na indução e/ou controle dos processos imunopatológicos decorrentes de envenenamentos por B. jararacussu e B. pirajai. Esta investigação visa fornecer subsídios para a possível utilização das toxinas para fins terapêuticos e como ferramentas para investigação dos mecanismos envolvidos nos processos fisiopatológicos que ocorrem em decorrência de picadas e também em outras doenças de caráter inflamatório. / Snakes of the genus Bothrops are responsible for 90% of snakebites in Brazil. Their venoms cause local effects in humans and animals, such as hemorrhage, edema, pain and necrosis, characteristic of an inflammatory response. The mechanism is not well defined. These effects are related to the combined action of proteases, substances that induce bleeding and phospholipases, as well as release of endogenous mediators generated by the venoms. Considering that activation of the complement system (CS) and cellular functions such as chemotaxis, activation, proliferation and cytotoxicity, may play a role in inflammatory processes and tissue injury following envenomation, the study proposes: a) to investigate the ability of crude venom of B. jararacussu and B. pirajai and the purified toxins, serineprotease of B. jararacussu and L-amino acid oxidase (LAAO) of B pirajai in modulating the activity of the CS, b) to assess the contribution of the effect on CS in the recruitment of human polymorphonuclear leukocytes (PMN), c) to assess the direct cytotoxic potential of venoms and toxins on human peripheral blood mononuclear cells (PBMC), d) to analyse the effect of venoms on the modulation of the expression of activation markers CD69, CD25 and HLA-DR on T, B and natural killer (NK) cells. The results of cytotoxicity assay showed that the crude venom of B. jararacussu was cytotoxic to PBMC only at higher concentrations, 50 and 100g/mL, showing no cytotoxicity in the other concentrations. The serineprotease showed low cytotoxicity to the cells, suggesting the need for further investigations about the mechanisms that lead to this cell death. The increase in cell viability found in samples incubated with crude venom of B. pirajai and LAAO suggests the possibility of induction of cell proliferation, which needs further study. The results suggest that the crude venom of B. jararacussu and B. pirajai are capable of activating the CS as observed in kinetic assays of classical pathwaylectin pathway and alternative pathway and neutrophil chemotaxis assay, where it was shown that cell migration was due to release of CS chemotactic factors, C3a and C5a, and that their respective toxins, serineprotease and LAAO have modulatory effects on human CS, and stimulate further research in order to clarify the mechanisms of action and identify the components responsible for the observed effects. There was increased expression of CD69, CD25 and HLA-DR on CD4+ and CD8+, especially when incubated with crude venom of B. jararacussu and LAAO of B. pirajai. It reflects activation of cellular immune response and may suggest that this type of response play an important role in the induction and/or control of immunopathological processes arising from envenomation by B. jararacussu and B. pirajai. This research aims to provide subsidies to the possible use of the toxin for therapeutic purposes and as tools for investigating mechanisms involved in pathophysiological processes that occur as a result of snakebites and also in other diseases of inflammatory nature.

Diversas proteínas pneumocócicas têm sido estudadas como candidatos vacinais. Entre elas, PspA e Ply induzem anticorpos essenciais para a proteção contra sepse, enquanto, SP 0148 e SP 2108 induzem IL-17 e protegem camundongos contra a colonização. Esse trabalho teve como objetivo principal desenvolver vacinas pneumocócicas baseadas em proteínas. Primeiramente, foi selecionada uma molécula de PspA com ampla reatividade cruzada. Em seguida, esta PspA foi fusionada com PdT, um pneumolisóide derivado da Ply. Essa proteína de fusão mostrou-se capaz de induzir resposta imunológica humoral e celular e protegeu camundongos contra desafio letal. Vacinas baseadas em BCG, que possui diversas propriedades adjuvantes, foram desenvolvidas expressando as proteínas pneumocócicas rPspA-PdT, SP 0148 e SP 2108. A imunização com o rBCG 0148/rSP 0148 induziu IL-17 e levou a proteção contra colonização. A combinação das três vacinas de rBCG mostrou-se mais eficiente na proteção contra desafio de colonização. Esses resultados sugerem um uso promissor do rBCG como vacina pneumocócica. / Several pneumococcal proteins have been proposed as vaccine candidates. PspA and Ply induce protective antibodies against sepse, while SP 0148 and SP 2108, induce IL-17 and protect mice against pneumococcal colonization. The major aim of this study was to produce pneumococcal vaccines based on proteins. First, we selected one PspA molecule able to induce broad-ranging cross-reactivity. Second, we constructed a hybrid protein containing a PspA fused to PdT, a detoxified form of Ply. The hybrid protein was able to induce humoral and cellular responses and protected mice against lethal challenge. Finally, due the adjuvant properties of BCG, we constructed recombinant BCG strains expressing PspA-PdT, SP 0148 and SP 2108. The immunization with rBCG-0148/rSP 0148 induced IL-17 and IFN-, and pneumococcal colonization in mice. Interestingly, the combination of all rBCG vaccines was more efficient in protecting mice against pneumococcal colonization. These results suggesting a promising use of rBCG as pneumococcal vaccine.

El presente trabajo de investigación desarrolla una idea de negocio para el curso Emprendimiento de Negocios Sostenibles: Implementación, impartido en la Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC). Nuestro modelo de negocio se consolidó con los conocimientos aprendidos durante la trayectoria universitaria. Para desarrollarlo, identificamos los dos principales problemas que presentan los dueños de perros al momento de educarlos y alimentarlos, ya que debido a la coyuntura hay una mayor cantidad de familias con al menos una mascota en casa. El problema de educarlos adecuadamente radica en la elección de un premio que la mascota quiera recibir y que a la vez este sea saludable y contribuya con su alimentación. Frente a ello, nuestra idea de negocio ha sido diseñada para poder dar una solución a esos dos problemas identificados, puesto que elaboramos galletas caseras saludables que sirven como premio y como complemento alimenticio debido al aporte nutricional de los ingredientes. La elaboración de las galletas premio saludables para perros es a base de avena y plátano, tiene vitamina B6, vitamina C, magnesio y potasio, ayudando así a mejorar la frecuencia cardiaca y a promover la salud ósea. Realizamos una investigación para determinar a nuestro público objetivo dentro de Lima metropolitana. Para nuestra idea de negocio, desarrollamos un plan que nos permita ordenar los recursos y estrategias adecuadas durante los primeros 3 años, ya que es importante conocer si el negocio es rentable. / This research work develops a business idea for the course Sustainable Business Entrepreneurship: Implementation, taught at the Peruvian University of Applied Sciences (UPC). Our business model was consolidated with the knowledge learned during the university career. To develop it, we identified the two main problems that dog owners present when educating and feeding them, since due to the situation there are a greater number of families with at least one pet at home. The problem of educating them properly lies in choosing a treat that the pet wants to receive and that at the same time is healthy and contributes to their diet. Faced with this, our business idea has been designed to be able to provide a solution to these two identified problems, since we make healthy homemade cookies that serve as a reward and as a food supplement due to the nutritional contribution of the ingredients. The preparation of healthy treats for dogs is based on oatmeal and banana, it has vitamin B6, vitamin C, magnesium and potassium, thus helping to improve heart rate and promote bone health. We conducted an investigation to determine our target audience within metropolitan Lima, determining zones 6 and 7 as the most appropriate. For our business idea, we develop a plan that allows us to organize the appropriate resources and strategies during the first 3 years, since it is important to know if the business is profitable. / Trabajo de investigación