Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2014-10-20T17:43:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Priscilla Carolinne Bagano Vilas Boas.pdf: 1837183 bytes, checksum: 784433b804bcd85b98b7c4fdf2b6a40f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-20T17:43:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Priscilla Carolinne Bagano Vilas Boas.pdf: 1837183 bytes, checksum: 784433b804bcd85b98b7c4fdf2b6a40f (MD5) / FAPESB / Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico de diversas doenças crônicas infecto-contagiosas em diferentes espécies de mamíferos, sendo a linfadenite caseosa a mais importante delas, encontrada em caprinos e ovinos. Esta patologia leva à formação de granulomas nos linfonodos superficiais e internos, e em alguns órgãos como os pulmões, fígado e baço, acarretando em diversas perdas econômicas para a caprino-ovinocultura. Neste trabalho, camundongos BALB/c foram imunizados com proteínas de um antígeno somático hidrofóbico extraído de uma linhagem virulenta de C. pseudotuberculosis. Os esplenócitos obtidos foram fusionados com células mielomatosas da linhagem SP2/0 e os hibridomas produzidos através desta fusão foram submetidos a testes de ELISA para identificação dos clones produtores de anticorpos específicos para o antígeno somático hidrofóbico. Foram selecionados quatro clones, posteriormente injetados intraperitonialmente em camundongos BALB/c, para produção de líquido ascítico. Os líquidos ascíticos foram testados por western blotting, usando o antígeno somático hidrofóbico submetido à eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) a 12,5 e 15%. Em SDS-PAGE a 12,5% todos os líquidos obtidos reconheceram duas bandas, com pesos moleculares estimados em 31 e 34 kDa e o clone 3-12C CL9A, também reconheceu uma banda com peso molecular de 19 kDa. Em SDS-PAGE a 15%, o clone 1-6G CL10 manteve o reconhecimento de apenas duas bandas de 31 e 34 kDa. Os demais apresentaram reconhecimento de outras bandas, além destas duas. Bandas proteicas com pesos moleculares similares aos aqui encontrados, já foram descritas na literatura em estudos realizados com soro de caprinos e ovinos infectados por C. pseudotuberculosis. Os anticorpos produzidos neste trabalho possuem potencial para utilização em imunoensaios, visando o aprofundamento de estudos sobre a relação micro-organismo hospedeiro, assim como a possibilidade de produção de um kit para o diagnóstico da infecção

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2014-10-22T18:26:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Daiane Mendes Carvalho.pdf: 2848139 bytes, checksum: 2996209ff7e3bed29850ce444ef4c0d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-22T18:26:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Daiane Mendes Carvalho.pdf: 2848139 bytes, checksum: 2996209ff7e3bed29850ce444ef4c0d3 (MD5) / FAPESB / A Corynebacterium pseudotuberculosis é um patógeno intracelular facultativo de elevada importância veterinária por ser capaz de infectar diferentes animais de produção, incluindo equinos, bovinos e pequenos ruminantes. A pesquisa recente por determinantes moleculares de virulência em diversos agentes patogênicos tem dedicado atenção às proteínas reguladoras da expressão gênica. Os fatores sigma alternativos da RNA polimerase bacteriana proporcionam um meio de regular rapidamente a expressão gênica em resposta a várias mudanças do ambiente extracelular. Nesse contexto, o presente estudo avaliou a expressão diferencial dos fatores sigma alternativos presentes no genoma da bactéria C. pseudotuberculosis durante contato com fatores do hospedeiro, utilizando duas estratégias experimentais, in vivo e in vitro. Ovinos foram infectados experimentalmente com uma linhagem virulenta desta bactéria, punções aspirativas foram realizadas nos linfonodos nos tempos 5, 15 e 30 dias após a infecção. Duas condições diferentes de crescimento: cultura controle, em meio Infusão Cérebro-Coração e cultura que mimetiza o crescimento no hospedeiro, Soro Fetal Bovino, foram estudadas. Curvas de crescimento bacteriano nos dois meios foram realizadas através de contagens bacterianas por monitoramento da DO595nm e citometria de fluxo. RNA total foi extraído das amostras de punção aspirativa e das culturas quando atingiram a densidade de 107 células/mL. Os cDNAs gerados por transcrição reversa in vitro foram submetidos a ensaios de PCR quantitativa em tempo real para a quantificação relativa dos transcritos de nove genes: sigA, sigB, sigC, sigD, sigE, sigH, sigK, sigM e 16S rDNA. Os genes sigA e 16S rDNA foram utilizados como normalizadores da reação de PCR quantitativo, mas foi observado que o 16S rDNA não se apresentou como um bom gene normalizador neste estudo. Assim, surgiu a necessidade de realizar um estudo com normalizadores. Foram analisados resultados de RNAseq da linhagem 1002 da C. pseudotuberculosis, em três condições; estresse osmótico, acidez e choque térmico. Desse modo, de 19 genes selecionados a partir estudos de normalizadores em outros gêneros, nessas condições, apenas os genes dnaG, rpoC, gyrA, gyrB, efp, rpoB, fusA e atpA cumpriram os critérios definidos para serem considerados como bons genes normalizadores. Foram analisados a expressão desses 8 genes em duas condições de cultivo, através da técnica de RT-qPCR. O NormFinder sugeriu o gyrA e fusA como os genes normalizadores mais adequados. Não foi possível analisar a expressão dos genes codificadores de fatores sigma das amostras da estratégia in vivo, devido à baixa concentração de RNA bacteriano das amostras de punção aspirativa. Foi possível detectar alterações nas expressões de vários genes codificadores de fatores sigma nas condições estudadas in vitro. O gene codificador do fator SigD foi o que apresentou maior ativação durante o crescimento bacteriano em Soro Fetal Bovino. Os resultados obtidos pelo presente trabalho sugerem o envolvimento do fator SigD na resposta adaptativa de C. pseudotuberculosis durante crescimento em meio que mimetiza o crescimento no hospedeiro. Após a predição de genes regulados pelo SigD foi possível observar que este fator regula a expressão de genes associados a resposta ao choque térmico, como as proteínas chaperonas, sugerindo assim a importância deste fator, sendo possivelmente importante durante o processo da infecção.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-10-20T16:10:30Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Gabriele Costa Rodrigues.pdf: 669924 bytes, checksum: 39da9a8e9734a6d7491ddbfaf0f55cd4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-20T16:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Gabriele Costa Rodrigues.pdf: 669924 bytes, checksum: 39da9a8e9734a6d7491ddbfaf0f55cd4 (MD5) / A linfadenite caseosa é uma doença infecciosa crônica que afeta ovinos e caprinos, causada por uma bactéria intracelular facultativa, Corynebacterium pseudotuberculosis. Pouco se conhece sobre a imunorreatividade induzida por diferentes linhagens deste microrganismo, bem como sobre o efeito no hospedeiro de seus antígenos secretados. O objetivo deste trabalho foi avaliar o reconhecimento antigênico e a ativação de células esplênicas de camundongos Balb/c infectados com duas linhagens de C. pseudotuberculosis, utilizando para tanto dois preparados antigênicos obtidos a partir da linhagem atenuada T1, denominados SeT1 e Q5, ao longo dos primeiros 35 dias após a inoculação. Os camundongos foram infectados com 102 CFU da linhagem VD57 ou da linhagem T1 e sacrificados nos dias 0, 15 e 35. A resposta humoral e celular foram avaliadas pela identificação de IgG total e subclasses, específicas contra estes antígenos secretados, bem como pela quantificação de citocinas produzidas “in vitro”, contra estas mencionadas biomoléculas. O grupo infectado com a linhagem selvagem VD57 apresentou diversas lesões granulomatosas, ao contrário dos camundongos infectados com a linhagem atenuada T1 que não desenvolveram lesões. A linhagem VD57 induziu expressiva produção de TNF-alfa, IFN-gama e IL-10, enquanto que a produção de IL-4 foi semelhante nos dois grupos, apesar de ter apresentado valores significativos com a estimulação pela fração Q5. Através do “Western Blotting” foi possível identificar quatro bandas na fração antigênica Q5, reativas com soros de camundongos infectados com a linhagem T1. Utilizando-se o ensaio imunoenzimático ELISA observou-se uma baixa resposta pelo grupo infectado com a linhagem T1 e uma resposta expressiva dos animais infectados com a linhagem VD57 apenas no dia 35. Neste último grupo, notou-se resposta predominante de IgG1 e IgG2a quando se utilizou como antígeno, respectivamente os preparados Q5 e SeT1. Os dados mostram que os dois preparados antigênicos foram capazes de estimular a imunidade humoral e celular, entretanto, ativando diferentemente os padrões de resposta Th1 e Th2.

Orientador: Raghuvir Krishnaswamy Arni / Banca: Patrick Jack Spencer / Banca: Marcos Roberto de Mattos Fontes / Banca: João Ruggiero Neto / Banca: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Resumo: Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis) é o agente etiológico da linfadenite caseosa (CLA), uma doença que afeta diferentes grupos de animais em todo o mundo, especificamente áreas de produção de ovinos e caprinos, que causam perdas econômicas significativas. Estas bactérias podem infectar humanos, e 25 casos de infecções em humanos foram relatados na literatura. Atualmente, não há nenhum tratamento eficiente para esta doença e também não existem estruturas cristalográficas de proteínas de C. pseudotuberculosis que possam ajudar a compreender melhor o mecanismo de ação desse patógeno. No presente estudo, foram expressas e purificadas proteínas-chave que desempenham papéis importantes no metabolismo deste patógeno. Três proteínas de C. pseudotuberculosis foram expressas e purificadas. Triose fosfato isomerase (TIM) é uma enzima ativa da via glicolítica, sendo uma das principais enzimas envolvidas no fornecimento de energia para o organismo. Esta enzima foi expressa purificada e cristalizada. Tiorredoxina redutase (TrxR) e Tioredoxina (Trx) participam do sistema tioredoxina (redox), em que o Trx atua como um substrato para o TrxR. Estas enzimas têm diversas funções nos organismos. Estas enzimas foram expressas, purificadas e caracterizadas. A estrutura cristalográfica da TIM foi determinada a 2,5 Å. Proteínas de veneno de serpente, também foram investigados neste estudo, e cinco proteínas diferentes do gênero Bothrops foram purificados e cristalizadas. A estrutura cristalina da Atroxlysin-I foi determinada a 1,8 Å de resolução e foi comparada com diferentes metaloproteinases-I que foram depositados no PDB / Abstract: Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis) is the etiological agent of Caseous Lymphadenitis (CLA), a disease that affects different groups of animals worldwide, specifically sheep and goat production areas, which result a significant economic losses. These bacteria even infect humans; to date 25 different cases of infections in humans are reported in the literature. Currently, no efficient treatment for this disease is available neither a crystallographic structure of any protein from C. pseudotuberculosis that could assist in better understanding of the mechanism of action of this pathogen. In the present study, we have expressed and purified key proteins that play a major role in the metabolism of this pathogen. Plasmids of three different proteins from C. pseudotuberculosis were designed. Triose phosphate isomerase (TIM) is an active enzyme of glycolytic pathway, which is one of the main energy supplier enzymes for the organisms. This enzyme was expressed, purified and crystallized, the crystal structure was determined at 2.5 Å. Thioredoxin reductase (TrxR), and Thioredoxin (Trx) are the part of thioredoxin (redox) system, in which the thioredoxin act as a substrate for the TrxR. These enzymes have a diverse function in organisms. These enzymes were expressed, purified and characterized. Snake venom proteins were also investigated in this study; five different proteins from genus Bothrops were purified and crystallized. The crystal structure of Atroxlysin-I was determined at 1.8 Å resolutions and compared with different metalloproteinases-I, deposited to PDB / Doutor

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-03T15:31:11Z No. of bitstreams: 1 Silvio Romero de Oliveira Abreu.pdf: 293479 bytes, checksum: 1d92e8e4a790a3674cda0778689b8d8c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-03T15:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silvio Romero de Oliveira Abreu.pdf: 293479 bytes, checksum: 1d92e8e4a790a3674cda0778689b8d8c (MD5) Previous issue date: 2007-02-05 / The main purpose of this study was to compare genotypically samples of Corynebacterium pseudotuberculosis obtained from the abscesses of sheep and goats diagnosed with caseous lymphadenitis proceeding from the semi-arid region of Pernambuco, Brazil. The RFLP-PCR technique was used to fingerprint the genes rpoB and pld, with the restriction enzymes Hpy-Ch4 and MspI; and PstI and MspI applied, respectively. The banding pattern observed through eletrophoreses was similar in all samples for both genes studied, independently of the restriction enzyme utilized. The in vitro sensitivity profile was also analyzed by testing the samples with 14 different antimicrobials. Initially, the contents of the abscesses were cultivated in blood-agar and the isolated colonies obtained were identified using the API-Coryne biochemical identification kit (Bio-Merieux, France), and selecting Gram-positive and nitrate-negative samples, which were classified as Corynebacterium pseudotuberculosis. The disk diffusion technique was used to perform antibiogramsand the results showed that 96.8% of the samples were sensitive to chloramphenicol and ciprofloxacin; 93.5% were sensitive to norfloxacin and cefazolin; 90.3% to amoxicillin and tetracycline; 87.1% to sulfa-trimethoprim; 83.9% to orbifloxacin; 77.4% to ampicillin, lincomycin and penicillin; 32% to gentamicin; 12.9% to novobiocin and 9.7% to neomycin. It was also noted that 87.1% of the samples were resistant to novobiocin; 80.6% to neomycin; 41.9% to gentamicin; 19.3% to lincomycin; 16.1% to ampicillin, orbifloxacin and penicillin; 12.9% to sulfatrimethoprim; 6.4% to cefazolin, norfloxacin and amoxicillin, and 3.2% to ciprofloxacin, chloramphenicol and tetracycline. For all samples, with the exception of one, was found some degree of multiple resistances with 16% of them being multiresistant to approximately 50% of the antimicrobial drugs tested. Based on those results, it is possible to conclude that there is a phenotypic variation among the samples analyzed, which could be associated to one or more resistance genes. Thegenotypic results did not demonstrate any difference on the band fragmentation pattern among the samples when analyzing the genes pld and rpoB, regardless of the host species origin or geographic area, indicating a homogeneous genotypic profile of the infection in the region of study. / Objetivou-se com este estudo comparar genotipicamente amostras de Corynebacterium pseudotuberculosis recuperadas do conteúdo de abscessos de caprinos e ovinos com linfadenite caseosa procedentes do Sertão de Pernambuco, Brasil. Utilizou-se a técnica de fingerprint RFLP-PCR aplicadas aos genes rpoB e Pld. Os genes foram tratados com Hpy-Ch 4 e Msp I e Pst I e Msp I, respectivamente.Os perfis de restrição observados foram semelhantes entre todas as amostras para os dois genes estudados. Avaliou-se o perfil de sensibilidade in vitro frente a 14 antimicrobianos. Inicialmente o conteúdo dos abscessos foi cultivado em ágar-sangue e as colônias isoladas foram identificadas pelo kit de identificação bioquímico API-Coryne (Bio-Merieux – França), sendo selecionadas as amostras Gram-positivas e nitrato-negativas, classificadas como C. pseudotuberculosis. Para a realização dos antibiogramas, utilizou-se a técnica de difusão em discos. A sensibilidade aos antimicrobianos demonstram que 96,8% das amostras foramsensíveis ao cloranfenicol e ciprofloxacina; 93,5% a norfloxacina e cefazolina; 90,3% a amoxicilina e tetraciclina; 87,1% a sulfa-trimetoprim; 83,9% a orbifloxacina; 77,4% a ampicilina, lincomicina e penicilina; 32% a gentamicina; 12,9% a novobiocina e 9,7% a neomicina. Quanto à resistência, 87,1% das amostras foram resistentes à novobiocina; 80,6% a neomicina; 41,9% a gentamicina; 19,3% a lincomicina; 16,1% a ampicilina, orbifloxacina e penicilina; 12,9% a sulfa-trimetoprim; 6,4% a cefazolina, norfloxacina e amoxicilina e 3,2% a ciprofloxacina, cloranfenicol e tetraciclina. Com exceção de uma amostra todas as demais apresentaram algum grau de resistência múltipla, sendo que 16% delas foram multirresistentes a aproximadamente 50% dos antimicrobianos testados. Concluiu-se que apesar de existir uma variação fenotípica entre as amostras analisadas que pode estar associada a um ou mais genes de resistência, os resultados da genotipagem demonstram não haver qualquer diferença nos padrões de fragmentos de bandas entre as amostras para os genes pld e rpoB, independente da origem da espéciehospedeira ou da área geográfica, indicando um padrão genotípico homogêneo de infecção na região estudada.

En Amérique du Nord, et particulièrement au Canada, il y a très peu de données sur l’incidence des causes de mortalité chez l’espèce caprine. Le premier objectif de cette étude était de déterminer les principales causes de mortalité chez les chèvres au Québec. Depuis 2006, avec l’arrêt de la vaccination contre la lymphadénite caséeuse, les éleveurs de caprins laitiers et de boucherie du Québec ont rapporté une recrudescence des abcès chez leur bétail. Le second but de cette étude était de déterminer l’importance de la lymphadénite caséeuse dans le dépérissement et la mortalité des chèvres du Québec. Cent-cinquante-deux chèvres provenant de 13 élevages différents ont été soumises pour nécropsie et la cause de mortalité, de même que la présence d’abcès (s’il y a lieu), leur localisation et leur cause furent compilés. Les mortalités proportionnelles étaient, par ordre décroissant : l’entérotoxémie de type D (n= 26; 17,1%), la pneumonie (n= 21; 13,8%), la paratuberculose (n= 16; 10,5%), listériose encéphalitique (n= 10; 6,6%), la toxémie de gestation (n= 8; 5,3%), l’arthrite-encéphalite caprine (n= 7; 4,6%) et la lymphadénite caséeuse (n= 6; 3,9%). La lymphadénite caséeuse a été diagnostiquée chez 24,3% des chèvres soumises, mais sans être une cause majeure de dépérissement ou de mortalité. Les abcès étaient internes dans 54,1% des cas. Au total, la paratuberculose a été diagnostiquée chez 29 chèvres (16 en étant décédées) et fut considérée comme une cause majeure de dépérissement, d’émaciation et de mortalité. Le développement et l’implantation de mesures préventives contre cette maladie seraient donc à envisager dans le futur. / In North America, and especially in Canada, the incidence and the causes of death in goats are not well documented. The first objective of this study was to determine the main causes of mortality in goats in Quebec. Dairy and meat goat farmers had reported an increase in abscesses in their herd since vaccination for caseous lymphadenitis stopped being available (2006) in Quebec. The second objective of this study was to determine the importance of caseous lymphadenits in wasting and mortality in caprine herds from Quebec. One hundred and fifty-two goats from 13 different herds from Quebec were submitted for necropsy and the cause of mortality, as well as the presence, location and cause of abscesses (if present) were recorded. Proportional mortalities were, in decreasing order: type D enterotoxemia (n= 26; 17,1%), pneumonia (n= 21; 13,8%), paratuberculosis (n= 16; 10,5%), encephalitic listeriosis (n= 10; 6,6%), pregnancy toxemia (n= 8; 5,3%), caprine arthritis-encephalitis (n= 7; 4,6%) and caseous lymphadenitis (n= 6; 3,9%). Caseous lymphadenitis was diagnosed in 24.3% of the submitted goats, but was not a major cause of debilitation or mortality. Abscesses were localized internally in 54.1% of the cases. Overall, paratuberculosis was diagnosed in 29 goats (16 of which died of the condition) and was considered a major cause of wasting, emaciation and mortality. Development and implementation of preventive measures to control this disease in goat herds would certainly be relevant in the future.

En Amérique du Nord, et particulièrement au Canada, il y a très peu de données sur l’incidence des causes de mortalité chez l’espèce caprine. Le premier objectif de cette étude était de déterminer les principales causes de mortalité chez les chèvres au Québec. Depuis 2006, avec l’arrêt de la vaccination contre la lymphadénite caséeuse, les éleveurs de caprins laitiers et de boucherie du Québec ont rapporté une recrudescence des abcès chez leur bétail. Le second but de cette étude était de déterminer l’importance de la lymphadénite caséeuse dans le dépérissement et la mortalité des chèvres du Québec. Cent-cinquante-deux chèvres provenant de 13 élevages différents ont été soumises pour nécropsie et la cause de mortalité, de même que la présence d’abcès (s’il y a lieu), leur localisation et leur cause furent compilés. Les mortalités proportionnelles étaient, par ordre décroissant : l’entérotoxémie de type D (n= 26; 17,1%), la pneumonie (n= 21; 13,8%), la paratuberculose (n= 16; 10,5%), listériose encéphalitique (n= 10; 6,6%), la toxémie de gestation (n= 8; 5,3%), l’arthrite-encéphalite caprine (n= 7; 4,6%) et la lymphadénite caséeuse (n= 6; 3,9%). La lymphadénite caséeuse a été diagnostiquée chez 24,3% des chèvres soumises, mais sans être une cause majeure de dépérissement ou de mortalité. Les abcès étaient internes dans 54,1% des cas. Au total, la paratuberculose a été diagnostiquée chez 29 chèvres (16 en étant décédées) et fut considérée comme une cause majeure de dépérissement, d’émaciation et de mortalité. Le développement et l’implantation de mesures préventives contre cette maladie seraient donc à envisager dans le futur. / In North America, and especially in Canada, the incidence and the causes of death in goats are not well documented. The first objective of this study was to determine the main causes of mortality in goats in Quebec. Dairy and meat goat farmers had reported an increase in abscesses in their herd since vaccination for caseous lymphadenitis stopped being available (2006) in Quebec. The second objective of this study was to determine the importance of caseous lymphadenits in wasting and mortality in caprine herds from Quebec. One hundred and fifty-two goats from 13 different herds from Quebec were submitted for necropsy and the cause of mortality, as well as the presence, location and cause of abscesses (if present) were recorded. Proportional mortalities were, in decreasing order: type D enterotoxemia (n= 26; 17,1%), pneumonia (n= 21; 13,8%), paratuberculosis (n= 16; 10,5%), encephalitic listeriosis (n= 10; 6,6%), pregnancy toxemia (n= 8; 5,3%), caprine arthritis-encephalitis (n= 7; 4,6%) and caseous lymphadenitis (n= 6; 3,9%). Caseous lymphadenitis was diagnosed in 24.3% of the submitted goats, but was not a major cause of debilitation or mortality. Abscesses were localized internally in 54.1% of the cases. Overall, paratuberculosis was diagnosed in 29 goats (16 of which died of the condition) and was considered a major cause of wasting, emaciation and mortality. Development and implementation of preventive measures to control this disease in goat herds would certainly be relevant in the future.

Submitted by LIEGE ABDALLAH KAWAI null (liegekawai@gmail.com) on 2017-12-13T13:56:50Z No. of bitstreams: 1 liege kawai - tese final.pdf: 5173025 bytes, checksum: 74d38826e72cc45ba04c0050ac6a409b (MD5) / Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2017-12-13T14:57:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 kawai_la_dr_sjrp.pdf: 5173025 bytes, checksum: 74d38826e72cc45ba04c0050ac6a409b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-13T14:57:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 kawai_la_dr_sjrp.pdf: 5173025 bytes, checksum: 74d38826e72cc45ba04c0050ac6a409b (MD5) Previous issue date: 2017-11-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis), é uma bactéria gram positiva anaeróbia facultativa, pleomórfica, que não esporula, não forma cápsula, e que apresenta 2 biotipos ou biovares, sendo o biovar equi capaz de infectar preferencialmente equinos, enquanto o biótipo denominado ovis acomete pequenos ruminantes. Esta bactéria faz parte do grupo CMNR (Corynebacterium, Mycobacterium, Nocardia e Rhodococcus), que demonstra grande importância veterinária e médica, uma vez que estes micro-organismos comumente infectam animais, podendo infectar o homem, causando perdas econômicas pela ineficácia ou alto custo de terapias existentes. Um exemplo seria a linfadenite caseosa (LC) causada por C. pseudotuberculosis, que afeta particularmente a pecuária de caprinos e ovinos, com a condenação da carcaça e redução da produção de lã e de carne. A transmissão da doença e contágio dos animais é direta, muitas vezes através da alimentação e ingestão de água em local contaminado por animais doentes. Essa doença possui incidência na pecuária mundial, principalmente de caprinos e ovinos, havendo registros de ocorrência no Brasil, Europa, Oriente Médio, Austrália, Nova Zelândia, África do Sul, Canadá e Estados Unidos e mesmo com todos os avanços tecnológicos, ainda não há métodos de prevenção totalmente eficazes, como vacinas e medicamentos, tampouco para o tratamento de animais infectados, que geralmente são de custo elevado, por longos períodos e sem a garantia de cura ou de isenção de reincidência da LC. Deste modo, técnicas mais rápidas e fáceis para detecção e diagnóstico da doença, bem como para seu tratamento, se tornam imprescindíveis, evitando não só a disseminação da doença, mas também suas consequentes perdas econômicas. Atualmente, devido ao uso indiscriminado de antibióticos para o tratamento de infecções de origem bacteriana, bem como à constante exposição destes micro-organismos a essas drogas em ambientes hospitalares, observa-se o desenvolvimento de micro-organismos resistentes às terapias disponíveis, sendo um desafio mundial a descoberta e elaboração de tratamentos eficazes para a prevenção, controle e eliminação destes patógenos, como alternativa aos já existentes. Visando terapias alternativas e direcionadas para infecção por C. pseudotuberculosis, as proteínas tioredoxina, tioredoxina redutase e diphtheria toxin repressor foram estudadas no presente trabalho, a fim de melhor compreender este micro-organismo. / Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis), is a gram-positive, facultative anaerobe, pleomorphic, non-sporulating bacterium with two biotopes or biovars, being the biovar equi capable of infecting horses, whereas the biotype called ovis infects small ruminants. It is part of the CMNR group (Corynebacterium, Mycobacterium, Nocardia and Rhodococcus), which demonstrates great veterinary and medical importance, since these common microorganisms infect animals and can infect humans, causing economic losses due to the inefficiency or high cost of existing therapies. An example is a caseous lymphadenitis (LC) caused by C. pseudotuberculosis, which particularly affects the goats and sheep livestock, with carcass condemnation and reduction of wool and meat production. The transmission of disease and the contagion of animals is direct, often through feeding and drinking water in places contaminated by sick animals. This disease has an incidence in the world livestock, mainly of goats and sheep, with occurrence records in Brazil, Europe, the Middle East, Australia, New Zealand, South Africa, Canada and the United States and even with all technological advances, still there are no totally effective prevention methods, such as vaccines and medications, nor for the treatment of infected animals, which are usually of a high cost, for long periods and without guarantee of cure or exemption from recurrence of LC. In this way, faster and easier techniques for the detection of the diagnosis of this disease as well as for its treatment become essential, avoiding not only a spread of the disease, but also its consequent economic losses. Currently, the use of indiscriminate antibiotics for the treatment of infections of bacterial origin, as well as the constant exposure of these microorganisms to these drugs in hospital environments, shows the development of microorganisms resistant to the available therapies, being one world-wide challenge the elaboration of effective treatments for the prevention, control and elimination of these pathogens, as an alternative to the existing ones. Aiming alternative therapies for infection by C. pseudotuberculosis, proteins such as thioredoxin, thioredoxin reductase, diphtheria toxin repressor, were studied in the present work, for a better comprehension of this microorganism.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-07T14:44:50Z No. of bitstreams: 1 Flavia Figueiraujo Jabour.pdf: 2776762 bytes, checksum: c6f5ab38588135603c3ae6a6a04e7a81 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-07T14:44:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flavia Figueiraujo Jabour.pdf: 2776762 bytes, checksum: c6f5ab38588135603c3ae6a6a04e7a81 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Tuberculosis, paratuberculosis and caseous lymphadenitis are important granulomatous diseases that affect various animal species, including sheep and goats and determine major economic losses. These diseases have similar clinical and pathological characteristics and deserve further investigation and differentiated to facilitate its control. The objective was to study to diagnose the occurrence of granulomatous diseases such as tuberculosis, paratuberculosis and caseous lymphadenitis in sheep and goats slaughtered in a municipal slaughterhouse, State of Alagoas, Brazil. Two hundred animals had been slaughtered during four visits made to the slaughterhouse from 2009 to 2011. Among these two hundred animals, 39 sheep and 3 goats presented macroscopic lesions in several body tissues. Histopathological, immunohistochemistry and bacteriological exams were executed for diagnostic. Lesions in the gut compatible with alterations caused by Oesophagostomum sp. were found in the sheep and goats. All samples were negative in immunohistochemistry for Mycobacterium spp. In the bacteriological test, Corybacterium pseudotuberculosis was isolated from lung, lymph nodes, small and large gut of 18 sheep and from the large gut of one goat. Alterations of tuberculosis and paratuberculosis were not observed, however lesions of other economically important diseases were found, such as caseous lymphadenitis associated with alterations of oesophagostomiasis e fascioliasis. In the second studythe objective was to perform the tuberculin skin test in 275 sheep and 45 goats coming from four herds in three cities of Eastern Mesoregion of Alagoas state. We also applied a questionnaire to analyze the epidemiological profile of the properties studied. All goats were negative to the tuberculin skin test and two sheep (0.72%) were positive for two different properties (50%). Join the occurrence of tuberculosis in sheep in the state of Alagoas. Despite the lower frequency of cases there were a high number of outbreaks. This result indicates that one should intensify their efforts to control tuberculosis in these regions studied to prevent the spread of mycobacteria to other flocks of sheep and goats and similar epidemiological studies should be conducted in other regions of the state of Alagoas to investigate the occurrence of disease and your impact in sheep and goat herds. / Tuberculose, paratuberculose e linfadenite caseosa são doenças granulomatosas importantes que acometem várias espécies animais, incluindo ovinos e caprinos e determinam grandes prejuízos econômicos. Estas doenças possuem características clínico-patológicas semelhantes e merecem ser melhor investigadas e diferenciadas para facilitar seu controle. Objetivou-se estudar a ocorrência de doenças granulomatosas em ovinos e caprinos abatidos em um matadouro no Estado de Alagoas, além de determinar a ocorrência de tuberculose em ovinos e caprinos em propriedades rurais na região da Zona da Mata Alagoana. No primeiro estudo Foram estudados 200 animais abatidos nos anos de 2009 a 2011. Destes, 39 ovinos e três caprinos apresentaram lesões macroscópicas em vários tecidos. Para o diagnóstico foram realizados exames histopatológico e bacteriológico, e imunohistoquímica. Observou-se, ao exame histopatológico, lesões intestinais compatíveis com Oesophagostomum sp. em ovinos e caprinos e com fasciolose no fígado de ovinos. Na imunohistoquímica todas as amostras foram negativas para Mycobacterium spp. Ao exame bacteriológico isolou-se Corynebacterium pseudotuberculosis nos tecidos de 18 ovinos (pulmão, fígado, linfonodos, intestino delgado e intestino grosso) e de um caprino (intestino grosso). Não foi diagnosticada tuberculose e paratuberculose nos animais estudados, no entanto observou-se a ocorrência de outras doenças economicamente importantes como linfadenite caseosa associada a lesões de oesofagostomose e fasciolose. No segundo estudo objetivou-se realizar o diagnóstico da tuberculose em caprinos e ovinos em três municípios da Mesorregião do Leste Alagoano. Foram tuberculinizados 275 ovinos e 45 caprinos procedentes de quatro rebanhos. Também foram aplicados questionários para estudar o perfil epidemiológico das propriedades estudadas. Todos os caprinos foram negativos ao teste tuberculínico e dois ovinos (0,72%) foram positivos, registrando-se 50% de focos da doença. Registra-se a ocorrência da tuberculose em ovinos no estado de Alagoas. Apesar da baixa frequência de casos positivos observou-se um elevado número de focos da doença. Este resultado indica que medidas de controle devem ser intensificadas para evitar a disseminação de micobactérias a outros rebanhos de ovinos e caprinos e estudos epidemiológicos semelhantes devem ser realizados em outras regiões do estado de Alagoas para investigar a ocorrência da doença e seu impacto na criação de caprinos e ovinos. Apesar de não ter sido diagnosticada a tuberculose clínica e a paratuberculose nos animais estudados, observou-se a ocorrência de outras doenças economicamente importantes como linfadenite caseosa associada a lesões de oesofagostomose e fasciolose nos animais abatidos.

Caseous lymphadenitis (CLA) is a disease primarily in sheep and goats, caused by Corynebacterium pseudotuberculosis, characterized by abscess formation in external and/or internal lymph nodes and organs. Economic losses occur due to emaciation, reduced milk production and impaired growth in affected animals. At the Swedish Veterinary Agency, bacterial culture is used as a diagnostic method for detecting CLA, requiring puncture of clinical abscesses. This sampling method increases the risk for disease transmission and overlooks animals affected by internal abscesses. In this study, a commercially available enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)-kit, based on an indirect ELISA, was validated for detecting antibodies for CLA, aiming for a more cost-effective and safer method that also can detect animals with internal abscesses. Serum and milk samples were analyzed to investigate the concordance between the two sample types. A subset of serum and milk samples was sent to Norway for analysis to compare the ELISA results, and comparison with another laboratory's results was conducted. The ELISA-kit demonstrated high sensitivity (92% for serum, 100% for milk), crucial for controlling CLA at herd level, while the specificity was estimated at 68% for serum and 61% for milk. To avoid increased and unnecessary culling of animals, a confirmatory method should analyze positive individuals to increase the specificity. Pooled milk samples could reduce costs for herd-level analysis, followed by serum sampling for positive herds.