LUCETTI, E. C. P. Efeitos neuroprotetores da curcumina durante o desenvolvimento de ratos submetidos à isquemia cerebra global. 2015. 108 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-12-20T12:27:10Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_ecplucetti.pdf: 4147142 bytes, checksum: 4f03ef9519daf666db76da448ced9260 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-12-20T12:27:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_ecplucetti.pdf: 4147142 bytes, checksum: 4f03ef9519daf666db76da448ced9260 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-20T12:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_ecplucetti.pdf: 4147142 bytes, checksum: 4f03ef9519daf666db76da448ced9260 (MD5) Previous issue date: 2015-07-17 / The ischemic stroke precipitates a cascade of events that involve excitotoxicity, inflammation, oxidative stress and cell death. Curcumin has demonstrated neuroprotective effects, with antioxidant and antiinflammatory properties. Therefore, we aimed to study these effects of curcumin on experimental model of global cerebral ischemia in rats under development. Methods: Wistar female rats treatment began 24 hours after the birth of pups, during 21 days, with curcumin (25, 50 or 100 mg/kg/day, p.o.) or water + 1% Cremophor (10 ml/kg). In 21 day old rats were anesthetized with Ketamine (75 mg/kg, i.p.) and xylazine (10 m/kg, i.p.) and subjected to the global cerebral ischemia for 15 min, reperfusion at the same time, followed the left carotid cut. 24 h after surgery, pups started treating for 3 or 7 consecutive days. The animals treated for 7 days underwent behavioral tests, open field and water maze, to assess the locomotor activity and spatial memory, respectively. Groups of animals with 3 or 7 days after ischemia were sacrificed and the striatum, cortex and hippocampus were dissected. The striatum was used in homogenates preparation to monoamine and metabolites (DA, DOPAC, NS) dosing on HPLC. Homogenates from the hippocampus and cortex were prepared to test the antioxidant activity, 3 and 7 days post-ischemia, to nitrite and malondialdehyde (MDA) dosing. Hippocampal slices were separated for staining with Fluoro-Jade B and immunohistochemistry (iNOS, COX-2, TNF-). Results: Cerebral ischemia reduced the locomotor activity in rats and the treatment with curcumin reversed this effect; just like what happened with the special memory that was recovered after curcumin treatment in the three doses used. The striatum lesion reflected in a reduction in the levels of monoamines and these values were increased with the use of curcumin 3 and 7 days after surgery dose-dependent manner on day 3. MDA and nitrite levels were significantly increased in cortex and hippocampus, 3 and 7 days after global cerebral ischemia, when compared to the false-operated groups. The treatment with curcumin significantly protected these areas only at 3 days post-ischemia, in the doses of 50 and 100 mg/kg. On the 7th day, the best results were obtained with the dose of 25 mg/kg. Furthermore, there was a decrease in immunostained cells for iNOS, COX-2 and TNF- in treated groups with curcumin compared with ischemic group. As reduction Fluoro-Jade B positive cells. Conclusion: The previous treatment of the dams during the lactation period and the subchronic treatment of puppies with curcumin exerted neuroprotective properties against damage caused by global cerebral ischemia/reperfusion. These effects reflected improved in locomotor activity and memory. This activity was observed through anti-inflammatory and antioxidant actions of curcumin, especially three days after the ischemic event. These actions were confirmed with inhibition of COX-2, iNOS and TNF-. In addition, neurons were preserved in the hippocampus, which could be seen by staining with Fluoro-Jade B, viewed through green fluorescence. / O acidente vascular cerebral isquêmico precipita uma cascata de eventos que envolvem excitotoxicidade, inflamação, estresse oxidativo e morte celular. A curcumina tem demonstrado efeitos neuroprotetores, com propriedades antioxidantes e antiinflamatórias. Sendo assim, objetivou-se estudar estes efeitos da curcumina em modelo experimental de isquemia cerebral global em ratos em desenvolvimento. Métodos: O tratamento de ratas Wistar foi iniciado 24h após o nascimento dos filhotes, durante 21 dias, com curcumina (25, 50 ou 100 mg/kg/dia, v.o.) ou água+Cremophor 1% (10 ml/kg). No 21º dia de vida os ratos foram anestesiados com Ketamina (75 mg/kg, i.p.) e Xilazina 2% (10 m/kg, i.p.) e submetidos à isquemia cerebral global durante 15 min, reperfusão pelo mesmo tempo, seguida de corte da carótida esquerda. 24 h após iniciou-se o tratamento dos filhotes com curcumina durante 3 ou 7 dias consecutivos. Animais tratados durante 7 dias realizaram os testes comportamentais, campo aberto e labirinto aquático, para avaliar a atividade locomotora e memória espacial, respectivamente. Grupos de animais com 3 ou 7 dias após a isquemia foram eutanasiados e o corpo estriado, córtex e hipocampo foram dissecados. O corpo estriado foi utilizado na preparação de homogenatos para dosagem de monoaminas e metabólitos (DA, DOPAC, NE) em HPLC. Homogenatos de hipocampo e córtex foram preparados para dosar os níveis de nitrito e malondialdeído (MDA). Fatias de hipocampo foram separadas para a coloração com o Fluoro-Jade B e imunohistoquímica (iNOS, COX-2, TNF-). Resultados: A isquemia cerebral reduziu a atividade locomotora em ratos e o tratamento com curcumina reverteu este efeito; assim como o que ocorreu com a memória espacial que foi reduzida pela isquemia. A lesão no corpo estriado refletiu em redução nos níveis de monoaminas e estes valores foram aumentados com uso da curcumina 3 e 7 dias após a cirurgia e de maneira dose-dependente no 3º dia. Os níveis de MDA e nitrito foram significativamente aumentados em córtex e hipocampo, 3 e 7 dias após a isquemia cerebral global, quando comparados aos grupos falso operados. O tratamento com curcumina protegeu estas áreas de maneira significativa somente no 3º dia pós-isquemia, nas doses de 50 e 100 mg/kg. No 7º dia, os melhores resultados foram obtidos com a dose de 25 mg/kg. Além disso, houve uma diminuição nas células imunocoradas para iNOS, COX-2 e TNF- nos grupos tratados com curcumina em comparação com o grupo isquemiado. Assim como redução de células Fluoro-Jade B positivas. Conclusão: O tratamento prévio das mães durante o período de lactação bem como o tratamento subcrônico dos filhotes com a curcumina exerceu propriedades neuroprotetoras contra os danos causados pela isquemia cerebral global mais reperfusão. Estes efeitos refletiram na melhora da atividade locomotora e memória. Esta atividade foi observada através de ações antiinflamatórias e antioxidantes da curcumina, principalmente 3 dias após o evento isquêmico. Estas ações foram confirmadas com a inibição da COX-2, iNOS, redução de citocinas pró-inflamatórias, como TNF-. Além disso, neurônios foram preservados no hipocampo, o que pôde ser visto através da coloração com Fluoro-jade B, visualizada através de fluorescência verde.

MENEZES, Ana Paula Fontenele. Efeitos da curcumina e do resveratrol em ratos com parkinsonismo experimental induzido por 6-hidroxidopamina : um estudo comportamental e neuroquímico. 2012. 130 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-04-08T13:40:15Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_apfmenezes.pdf: 1190045 bytes, checksum: 0d52528bff95b9735022825bf1457821 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-04-08T13:41:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_apfmenezes.pdf: 1190045 bytes, checksum: 0d52528bff95b9735022825bf1457821 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-08T13:41:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_apfmenezes.pdf: 1190045 bytes, checksum: 0d52528bff95b9735022825bf1457821 (MD5) Previous issue date: 2012 / A doença de Parkinson é uma desordem neurodegenerativa caracterizada pela perda de células dopaminérgicas no trato nigroestriatal, com uma correspondente diminuição no conteúdo de dopamina (DA) no estriado. Diversos fatores têm sido envolvidos na degeneração neuronal na DP incluindo, estresse oxidativo, disfunção mitocondrial e excitotoxicidade. A Curcumina é um polifenol e o Resveratrol é uma fitoalexina que têm sido descritos como tendo propriedades antioxidantes e antiinflamatórias. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do Resveratrol e da Curcumina sobre as alterações comportamentais e bioquímicas induzidas pela 6-OHDA, um modelo animal de parkinsonismo. Ratos machos Wistar (180-240g) receberam injeções de 6-OHDA (18 µg/3µl) no estriado direito através de uma cirurgia estereotáxica e foram tratados por via intragástrica com Curcumina (25, 50, 100 e 200 mg/kg) ou Resveratrol (5, 10 e 50 mg/kg) por quinze dias. Não foram observadas diferenças estatísticas na atividade locomotora (teste do campo aberto) e na função sensório-motora (teste da vibrissa) entre os grupos. A Curcumina e o Resveratrol melhoraram a assimetria motora no teste do cilindro e a memória aversiva no teste da esquiva passiva. Um resultado similar foi observado no teste do nado forçado, onde ambos os antioxidantes reverteram o comportamento depressivo, assim como preveniram a redução do conteúdo de dopamina e serotonina. Entretanto, somente o Resveratrol preveniu os déficits apresentados pelos animais em uma versão com pistas do water maze, o aumento das rotações contralaterais no teste da apomorfina e a perda de neurônios dopaminérgicos no estriado e substância negra. Os resultados demonstraram efeitos neuroprotetores do Resveratrol, mas somente efeitos parciais foram observados após o tratamento com Curcumina. Dessa forma, o presente estudo fornece suporte para os efeitos benéficos dos antioxidantes como adjuvantes do tratamento da Doença de Parkinson.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2013-07-16T03:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 265976.pdf: 1266582 bytes, checksum: b97305d88626a2ba8a9b167ca43ffbb3 (MD5) / A vetorização de agentes antineoplásicos através de nanopartículas é uma estratégia promissora para o tratamento do câncer. Dentre os fármacos existentes, a curcumina, composto natural extraído do açafrão (Curcuma longa L.), tem sido extensivamente estudada devido a sua ampla variedade de propriedades farmacológicas, em especial a atividade antitumoral. Porém, os problemas de baixa estabilidade e biodisponibilidade inerentes a este composto requerem o aprimoramento da forma farmacêutica. Assim, o presente trabalho teve como objetivo principal o desenvolvimento de suspensões coloidais de nanocápsulas lipídicas e poliméricas contendo curcumina a fim de melhorar a estabilidade e eficácia terapêutica deste fármaco. As suspensões de nanocápsulas lipídicas e poliméricas foram preparadas pelas técnicas de inversão de fases e nanoprecipitação, respectivamente. Após o desenvolvimento e validação de um método fluorimétrico para quantificação da curcumina nas formulações, a influência da quantidade de curcumina inicialmente adicionada sobre a eficiência de encapsulação, taxa de recuperação e teor de fármaco foi avaliada. A eficiência de encapsulação foi superior a 99 % e a curcumina foi completamente recuperada em todas as preparações, enquanto o teor de fármaco variou entre 127,04 a 509,49 g/mL. Ambos os métodos permitiram a obtenção de partículas submicrônicas com um diâmetro médio de 140 nm para os sistemas poliméricos e 40 nm para os lipídicos. Partículas esféricas, apresentando uma estrutura do tipo núcleo-casca foram visualizadas por microscopia eletrônica de transmissão. Os ensaios de liberação in vitro realizados em tampão acetato pH 5,0 a 37 °C contendo 0,25 % (p/v) de lauril sulfato de sódio demonstraram um efeito burst inicial, seguido por uma liberação sustentada por até 48 horas para todas amostras testadas. As nanocápsulas lipídicas conduziram a mais rápida liberação da curcumina, quando comparadas as nanocápsulas poliméricas, podendo este resultado ser relacionado ao tamanho reduzido, à maior área superficial e à parede mais fina das partículas. Estudos de estabilidade hidrolítica e fotoquímica mostraram que a associação da curcumina às nanocápsulas reduz a velocidade de degradação do fármaco frente à exposição à luz UV e em pH 7,4. A captura da curcumina livre e encapsulada foi observada por microscopia de fluorescência, após incubação com células de macrófagos murino J774. Os resultados indicaram que a captura do fármaco é reduzida pelo uso destes sistemas coloidais. A eficácia das suspensões de nanocápsulas foi avaliada em linhagem celular de melanoma murino B16-F10 in vitro e in vivo. A curcumina livre e encapsulada reduziu significativamente a viabilidade das células tumorais de maneira concentração e tempo dependente, por indução de apoptose celular. Nos estudos in vivo, estas formulações induziram a redução significativa do volume tumoral formado. Assim, a encapsulação da curcumina em nanocápsulas poliméricas e lipídicas mostrou ser benéfica no que diz respeito à melhoria da estabilidade e da eficácia terapêutica deste fármaco.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / La curcumina es un compuesto fenólico con una potente actividad biológica. Entre éstas destacan sus propiedades antioxidantes, anticancerígenas y antiinflamatorias. Esta molécula presenta además una muy baja toxicidad y buenas propiedades organolépticas. Sin embargo, todas estas propiedades se ven afectadas por inconvenientes que limitan su uso en medicina, como son su muy baja solubilidad y su baja estabilidad. Estas características de la curcumina hacen que sea muy dificultoso desarrollar una forma farmacéutica apropiada para su uso terapéutico. El objetivo de este trabajo fue incorporar a la curcumina dentro de nanovehículos como nanoemulsiones y nanocápsulas, formuladas con distintos polímeros, para luego estudiar su velocidad de degradación frente a la radiación ultravioleta (UV) y al radical hidroxilo (·OH). Para realizar lo anterior se desarrollaron protocolos de fabricación de distintos nanovehículos conteniendo curcumina. Estos fueron caracterizados en función de su tamaño, potencial zeta, índice de polidispersión, eficiencia de encapsulación y rendimiento. Además, se optimizó una metodología analítica, por espectrofotometría UV-visible, que permitió cuantificar la curcumina presente en los nanovehículos. Finalmente se realizó un estudio de degradación de la curcumina en los distintos nanovehículos, siendo sometidos a radiación UV y agentes oxidantes. Se compararon las pendientes de degradación de la curcumina en los nanosistemas, determinando cual es la formulación que presenta una mayor protección del principio activo. Los resultados mostraron que la curcumina, cuando está incluida en nanovehículos de núcleo oleoso, presenta una menor degradación frente a estímulos lumínicos y oxidativos. Además, se demostró que la incorporación de una cubierta polimérica en los nanosistemas (nanocápsulas) aumenta la protección del principio activo, llegando a tener una degradación por radiación UV siete veces menor que cuando está libre en una solución, y en el caso de la oxidación su degradación es cuatro veces más lenta cuando está encapsulada. Además, se obtuvieron formulaciones con porcentajes de encapsulación de 100% y eficiencias de asociación de la curcumina sobre el 80% / Curcumin is a phenolic compound with potent biological activity, among which its antioxidant, anticancer and anti-inflammatory properties stand out. It also show very low toxicity and good organoleptic properties. However, all these properties are affected by some drawbacks, such as their very low solubility and low stability. These characteristics of curcumin make it very difficult to develop a pharmaceutical dosage form suitable for therapeutic use. The aim of this work was to incorporate curcumin into nanovehicles such as nanoemulsions and nanocapsules, formulated with different polymers, and then to study its rate of degradation against ultraviolet (UV) radiation and the hydroxyl radical. To carry out the above, protocols for the manufacture of different nanovehicles containing curcumin were developed, these were characterized according to their size, zeta potential, polydispersity index, encapsulation efficiency and yield. In addition, an analytical methodology was optimized by UV-visible spectrophotometry, which allowed the quantification of curcumin present in nanovehicles. Finally, a study of degradation of curcumin was carried out in the different nanovehicles, being subjected to UV radiation and oxidizing agents. The slopes of degradation of curcumin were compared in the nanosystems, determining which is the formulation that presents a larger protection of the active. The results showed that curcumin, when included in nanovehicles of oily nucleus, show a lower degradation against light and oxidative stimuli. In addition, the incorporation of a polymer coating on these nanosystems (nanocapsules) increases the protection of the active, resulting in a seven times lower degradation by UV radiation when compared with free in a solution, and in the case of oxidation, the degradation is four times slower when it is encapsulated. In addition, formulations with 100% percentage of encapsulation and association efficiencies over 80% were obtained

O câncer é uma doença caracterizada pela proliferação descontrolada de células que tem a capacidade de invadir tecidos adjacentes e formar metástase. A quimioterapia representa uma abordagem clínica importante no tratamento do câncer, contudo sua eficácia é limitada devido a baixa seletividade dos medicamentos utilizados e o desenvolvimento de resistência por parte das células tumorais. Diante do contexto, é crucial a busca por novas substâncias que possam melhorar as propostas terapêuticas para o tratamento do câncer. A atividade antitumoral da curcumina (5), um composto natural derivado da Curcuma longa, tem sido amplamente relatada. Da mesma forma, o resveratrol (7), um polifenol presente em uma variedade de fontes alimentares tem sido considerado um potencial agente quimiopreventivo/quimioterapêutico. Contudo, a aplicação clínica desses compostos tem sido limitada, devido a baixa solubilidade e biodisponibilidade. Dessa forma, este trabalho visou à síntese, caracterização e avaliação da atividade antiproliferativa de oito diferentes compostos (PQM-160-167), dos quais 6 contêm domínios estruturais em analogia à curcumina (5) e ao resveratrol (7); e 2 são análogos da curcumina (5). O potencial antiproliferativo dos compostos sintetizados foi avaliado sobre diferentes linhagens derivadas de tumores humanos e os resultados mostraram que as substâncias PQM-162 e PQM-163, que são híbridos de curcumina-resveratrol, foram mais efetivos em reduzir a viabilidade de células MCF 7 (IC50 para PQM-162 = 40,49 ± 1,01 µM e PQM-163 = 19,09 ± 0,67 µM) e HT 144 (IC50 de PQM-163 = 25,23 ± 2,93 µM), as quais são derivadas de câncer de mama e de melanoma, respectivamente. O efeito de PQM-162 e PQM-163 sobre as linhagens MCF 7 e HT144 foi superior ao observado para a curcumina (IC50 para MCF 7 = 47,32 ± 2,33 µM e para HT 144 = 42,76 ± 3,79 µM). Além disso, foi demonstrado que a redução na viabilidade induzida pela substância PQM-162 em culturas de células MCF 7 foi devido, pelo menos em parte, a sua capacidade de bloquear o ciclo celular em G2/M. Estudos adicionais devem ser realizados para avaliar o perfil de toxicidade desses compostos sobre células normais, bem como dom possível mecanismo de ação. / Cancer is a disease characterized by uncontrolled proliferation of cells that have the ability to invade surrounding tissues and form metastases. Chemotherapy is an important clinical approach in the treatment of cancer, but their effectiveness is limited due to low selectivity and the development of resistance by tumor cells. On the context, it is crucial the search for new substances, that can improve the therapeutic approaches to cancer treatment. The antitumor activity of curcumin (5), a natural compound derived from Curcuma longa, has been widely reported. Similarly, resveratrol (7), a polyphenol present in a variety of food sources, has been considered as a potential chemoprotective/chemotherapeutic agent. However, clinical application of such compounds has been limited due to low solubility and poor bioavailability. Thus, this work aimed at the synthesis, characterization and evaluation of the antiproliferative activity of eight different compounds (PQM-160-167), of which six contain structural domains of analogy with curcumin (5) and resveratrol (7); and two are analogs of curcumin (5). The proliferative potential of these compounds was evaluated on different cell lines derived from human tumors. The results showed that substances PQM-162 and PQM-163, which are hybrids of curcumin and resveratrol, were more effective in reducing the viability of MCF 7 cells (IC50 for PQM-162 = 40.49 ± 1.01 µM and PQM-163 = 19.09 ± 0.67 µM) and HT 144 (IC50 PQM-163 = 25.23 ± 2.93 µM), which are derived from breast cancer and melanoma, respectively. The effect of PQM-162 and PQM-163 on lines MCF 7 and HT144 was higher than that observed for curcumin (IC50 for MCF 7 = 47.32 ± 2.33 µM and HT 144 = 42.76 ± 3.79 µM). Furthermore, it was shown that the reduction in viability induced by PQM-162 substance in MCF 7 cell cultures was due, at least in part, its ability to block the cell cycle in G2/M stage. Additional studies should be conducted to assess the toxicity profile of these compounds on normal cells and the possible mechanism of action. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Produtos naturais têm fornecido fármacos para uma grande variedade de doenças, como as parasitoses, que afetam aproximadamente 1 bilhão de pessoas. Os compostos fenólicos como a curcumina, as cumarinas e os benzopiranos, têm atraído considerável interesse visto que são reconhecidos pela ampla gama de atividades biológicas. Neste trabalho, foi realizada a hibridização molecular entre a curcumina e cumarina através da reação de Pechmann, que mostrou melhores resultados em aquecimento convencional que micro-ondas (90% de rendimento, 75 °C). O híbrido obtido, LASOM 135, apresentou forte atividade antioxidante frente a radicais peroxila (IC50 < 0,5 μM), mostrando que as duas porções farmacofóricas contribuíram para esta atividade biológica. Além disto, LASOM 135 apresentou atividade tripanomicida (IC50 = 11,8 μM). Os benzopiranos benzopyrans HP1 (6-isobutiril-5,7-dimetoxi-2,2-dimetil-benzopirano), HP2 (7-hidroxi-6-isobutiril-5-metoxi-2,2-dimetil-benzopirano) e HP3 (5-hidroxi-6-isobutiril-7-metoxi-2,2-dimetil-benzopirano), encontrados até o momento somente na planta nativa do Rio Grande do Sul Hypericum polyanthemum (Guttiferae), demonstram várias atividades biológicas, despertando considerável interesse no potencial terapêutico destas moléculas. Assim sendo, neste trabalho foi realizada a modificação estrutural de HP1, HP2 e HP3 através de aminação redutiva, se obtendo três derivados aminados inéditos com baixo a médio rendimento. Também se avaliou a atividade contra epimastigotas de Trypanosoma cruzi dos três benzopiranos, onde se elegeu HP2 como o protótipo para obtenção de novas moléculas tripanomicidas. Além disso, a atividade larvidicida em Aedes aegypti demonstro que os benzopiranos HP1, HP2 e HP3 são os responsáveis pela atividade larvicida do extrato n-hexano de H. polyanthemum. Tanto HP1 como o extrato demonstraram atividade reguladora do crescimento / Historically, natural products have been supplied drugs for a wide range of diseases, like the parasitic ones, which affect about 1 billion people. In this way, the phenolic compounds as curcumin, coumarins and benzopyrans, have attracted attention since they are recognized by their wide range of activities. In this study the molecular hybridization was performed between curcumin and coumarins through Pechmann reaction in conventional heating since it showed better results than the microwave one (90% yield, 75°C). The new hybrid, LASOM 135, presented strong antioxidant activity against peroxyl radicals (IC50 < 0.5 μM) indicating a synergism of the curcumin and coumarin pharmacophoric moieties. Besides, LASOM 135 presented trypanocide activity (IC50 = 11.8 μM). The benzopyrans HP1 (6-isobutyryl-5,7-dimethoxy-2,2-dimethyl-benzopyran), HP2 (7-hydroxy-6-isobutyryl-5-methoxy-2,2-dimethyl-benzopyran) and HP3 (5-hydroxy-6-isobutyryl-7-methoxy-2,2-dimethyl-benzopyran) are found until this moment only in the native plant to Rio Grande do Sul Hypericum polyanthemum (Guttiferae), and showed many biologic activities. Thus, in this study are described the achievement of three amino derivatives by structural modification of these molecules through reductive amination with a low to medium yield. The activity against epimastigotes of Trypanosoma cruzi was also evaluated by HP1, HP2 and HP3 and HP2 was elected as a hit to new trypanocide compounds. Besides, the larvicidal activity in Aedes aegypti was evaluated for the three benzopyrans. The benzopyrans demonstrated to be the responsible for the larvicidal activity of the extract. Both the HP1 as the extract demonstrated growth regulatory activity.

Curcumina é um composto natural presente na Curcuma longa, que apresenta diversas atividades medicinais, porém sua baixa solubilidade limita sua aplicação médica. Para solucionar esse problema e viabilizar seu uso, diversas pesquisas no campo da nanotecnologia estão sendo feitas. Neste estudo foram obtidas nanopartículas de curcumina utilizando como solventes o etanol (E) e o clorofórmio (C), e através dos procedimentos de agitação magnética e sonicação. As nanopartículas foram caracterizadas por espalhamento de luz dinâmico (DLS), potencial Zeta, microscopia de força atômica (AFM) e pelas espectroscopias no infravermelho (FTIR), no ultravioleta/visível (UV-Vis) e de fluorescência. Foram feitos ensaios de solubilidade, fotodegradação e citotoxicidade. As nanopartículas obtidas com o solvente E e pelos processos de agitação e sonicação foram denominadas de NEA e NES, e com o solvente C de NCA e NCS, respectivamente. Teste inicial de liberação in vitro foi feito para a amostra NCA dispersas em gelatina com posterior recobrimento com Eudragit S100®; esse teste foi feito em HCl (pH 2,0) e tampão fosfato (pH 7,5). A morfologia dessas membranas recobertas ou não com Eudragit S100® foram analisadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV). As nanopartículas tiveram um rendimento entre 60 e 78%. O resultado de DLS mostrou a obtenção de partículas nanométricas entre 189 e 248 nm para as NEA, NES e NCS e de 591 nm para NCA, com potencial Zeta acima de |25| mV para todas as amostras. As nanopartículas apresentaram uma fotodegradação mais lenta do que o produto comercial. As espectroscopias de FTIR, UV-Vis e fluorescência apresentaram bandas características da curcumina comercial, indicando que as nanopartículas têm as mesmas características químicas e físicas do bioativo. As nanopartículas mostraram um aumento na solubilidade de 37 a 56 vezes em relação à curcumina comercial. Os ensaios de citotoxicidade indicam que as nanopartículas não apresentaram toxicidade para a linhagem VERO, enquanto que para a linhagem HEp-2 ocasionaram morte celular. Assim, os procedimentos utilizados para o preparo das nanopartículas de curcumina foram eficientes, sendo que uso do solvente E mostrou ser o mais indicado para se obter nanopartículas. A morfologia por MEV das membranas de gelatina/NCA mostra um recobrimento uniforme com Eudragit S100®. Os testes iniciais de liberação in vitro mostraram que as nanopartículas de curcumina são protegidas pelo sistema em pH ácido e liberadas apenas quando em pH 7,5. / Curcumin is a natural compound present in Curcuma longa, which has several medicinal effects but due to its low solubility, its medical application gets constrained. To solve this problem and make it feasible to use, several studies are being made in the nanotechnology field. In this study curcumin nanoparticles were obtained using different solvents, ethanol (E) and chloroform (C), with two procedures, magnetic stirring and sonication. The nanoparticles were characterized by dynamic light scattering (DLS), Zeta potential, atomic force microscopy (AFM) and by infrared spectroscopy (FTIR), ultraviolet/visible spectroscopy (UV-vis), fluorescence spectroscopy. Solubility, photodegradation and cytotoxicity trials were made. The nanoparticles were named NEA and NES when prepared with E solvent, by magnetic stirring and sonication processes, and named NCA and NCS with C solvent, respectively. A preliminary in vitro release test was made with the NCA sample. It was dispersed in gelatin with the Eudragit S100® coating; this release test was done in HCl (pH 2.0) and phosphate buffer (pH 7.5). The membranes with and without Eudragit S100® coating were morphologically analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The nanoparticles yield between 60 and 78%. The DLS results showed nanometric particles between 189 and 248 nm for NEA, NES and NCS samples and 591 nm for NCA sample. Moreover, a Zeta potential superior to |25| mV was obtained for all samples. The nanoparticles showed a slower photodegradation compared to the commercial curcumin. The FTIR, UV-vis and fluorescence spectroscopy resulted in characteristic bands, indicating that these nanoparticles have the same chemical and physical characteristics of the commercial curcumin. Likewise, an increase in solubility of 37 to 56 times was observed in comparison with the commercial product. Furthermore, the cytotoxicity assays suggested no toxicity to VERO cell lineage, while death for HEp-2 cell lineage. The procedures used for the curcumin nanoparticles preparation were efficient; however, the most suitable nanoparticles were obtained with E solvent. The morphology by SEM of gelatin/NCA membranes indicates a uniform coating with Eudragit S100®. In vitro release tests showed that curcumin nanoparticles were protected by this system at acid pH and released at pH 7.5.

Tesis para optar al grado de magister en farmacología / El cáncer de cuello uterino (CCU) es un tipo de cáncer que tiene una etiología viral. Este agente es el virus papiloma humano de alto riesgo (VPH-AR), el cual en un proceso tumoral sobreexpresa las oncoproteínas E6 y E7. Éstas últimas regulan la expresión de Pirin, que es una proteína que participa en la transición epitelial-mesenquimal (TEM) y en la migración celular. Se ha reportado que la TEM y la migración celular disminuyen en presencia del compuesto natural curcumina. Por esta razón, se propuso que dicha disminución causada por curcumina ocurre a través de un mecanismo dependiente de Pirin. Para demostrar esto, se utilizó la línea celular SiHa de CCU, con 1-2 copias integradas de VPH16. Con los ensayos de viabilidad y citotoxicidad celular (MTS) a distintos tiempos y concentraciones de curcumina se determinó que la concentración a utilizar era de 20 μM por 72 horas. Este tiempo y concentración están en concordancia con datos previamente publicados. Se analizó la expresión génica y los niveles proteicos de algunos marcadores de la TEM, con las técnicas RT-qPCR y Western Blotting, respectivamente. Para ello, en células tratadas con curcumina se extrajo ARN total y proteínas, los cuales se cuantificaron para ser utilizados en dichas técnicas. Los resultados obtenidos sugieren una disminución de la transición epitelial-mesenquimal en la línea celular SiHa expuesta a curcumina. Esto se respalda en la disminución de los niveles proteicos de N-cadherina, Vimentina y Slug en presencia de este compuesto natural. Además, se observó que la expresión de PIR y los niveles de Pirin disminuyeron en las células SiHa, al ser expuestas a curcumina. Luego, para analizar como la TEM depende de Pirin, las células SiHa utilizadas fueron transfectadas transientemente con un ARN interferente pequeño (ARNip) para el knockdown de PIR. Se observó un aumento significativo de transcritos de E-cadherina y una disminución significativa de N-cadherina en presencia del interferente. Además, se evidenció una disminución similar en la combinación del interferente con curcumina. Finalmente, se realizó un ensayo fenotípico de migración celular observándose una disminución significativa en presencia de este compuesto natural. La conclusión de esta tesis es que la disminución de la TEM inducida por curcumina, en este modelo experimental, ocurre por un mecanismo dependiente de Pirin. Se requieren experimentos adicionales para confirmar dicho mecanismo. La proteína Pirin podría ser un importante blanco farmacológico en el tratamiento del cáncer de cuello uterino. / Cervical cancer (CCU) has a viral etiology and it is induced by high-risk human papilloma virus (HR-HPV) that in turn, overexpresses E6 and E7 oncoproteins. These viral proteins regulate the expression of Pirin, which is a protein that participates in the epithelial-mesenchymal transition (EMT) and cell migration. It has been reported that EMT and cell migration decrease in the presence of the natural compound curcumin. For this reason, it was proposed in this thesis that such decrease is caused by curcumin through a Pirin-dependent mechanism. To demonstrate this statement, SiHa cell line derived from cervical cancer was used since it contains 1-2 integrated copies of HPV16. Viability and cytotoxicity cell tests (MTS) were used to determine curcumin dose and exposures times. Results indicated a significant decrease in EMT after exposure to 20 μM curcumin for 72 hours in SiHa cell line. This is supported by a decrease in the protein levels of N-cadherin, Vimentin and Slug in the presence of curcumin. Furthermore, it was observed that PIR expression and Pirin protein levels significantly decreased in SiHa cells when exposed to curcumin. Then, to analyze if EMT depends on Pirin, SiHa cells were transfected with a small interfering RNA (siRNA) for the silencing of PIR. It was observed a significant increase of E-cadherin transcripts and a significant decrease of N-cadherin proteins levels in the presence of the siRNA. In addition, a similar decrease in the combination of the interferer with curcumin was evidenced. Finally, a phenotypic assay of cell migration was performed observing a significant decrease in the presence of this natural compound. It can be concluded in this thesis that the reduction of curcumin-induced EMT in this experimental model, occurs in a Pirin-dependent manner. To confirm this mechanism, additional experiments are warranted. Pirin protein could be an important pharmacological target in the treatment of cervical cancer.

Submitted by DAYANE DE ALMEIDA BRANDÃO null (dayaneabrandao@hotmail.com) on 2016-05-16T01:24:28Z No. of bitstreams: 1 Dayane de Almeida Brandão-FINAL.pdf: 3147709 bytes, checksum: 4a2e64ad8796eb690412408acd162ec3 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-05-17T14:19:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 brandao_da_me_arafo.pdf: 3147709 bytes, checksum: 4a2e64ad8796eb690412408acd162ec3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-17T14:19:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 brandao_da_me_arafo.pdf: 3147709 bytes, checksum: 4a2e64ad8796eb690412408acd162ec3 (MD5) Previous issue date: 2016-03-18 / Curcumin é um polifenol amarelo extraído do rizoma de uma planta tropical, do tipo herbácea. Possui ações anti-inflamatória, antioxidante, antiangiogênica, imunomodulatória, citotóxica, antimicrobiana e antiapoptótica. A aplicação terapêutica do curcumin vem sendo avaliada em modelos pré-clínicos e estudos de várias doenças. As limitações da eficácia do curcumin in vivo são atribuídas à sua má solubilidade em veículos aquosos e baixa taxa de absorção no trato gastrointestinal. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito dose-resposta do composto sintético análogo ao curcumin (CMC2.24) em diferentes doses (1 mg, 3 mg, 10 mg, 30 mg) sobre o processo inflamatório e osteoclastogênese em modelo de doença periodontal in vivo e in vitro, para analisar qual é a dose mínima necessária para que o composto tenha o efeito biológico. A doença periodontal foi induzida em ratos por meio de injeção de 30 µg de LPS de Escherichia coli, realizadas 3x/semana durante 4 semanas. Os controles receberam injeções do mesmo volume do veículo de diluição do LPS (PBS). A administração de CMC2.24 (1, 3, 10 e 30mg/kg) foi feita por via intragástrica (gavagem oral) diariamente, durante 29 dias (um dia antes da primeira injeção de LPS/PBS). A expressão de fosfatase ácido tartarato resistente (TRAP), indicativa de diferenciação osteoclástica, foi avaliada por meio de imunohistoquímica, a proporção de células inflamatórias, em cortes corados com H/E, por estereometria, a presença de citocinas através do PCR em tecido gengival e a reabsorção óssea por análise de coloração por azul de metileno e microtomografia computadorizada. Nos experimentos in vitro, macrófagos foram estimulados com microrganismos e tratados com CMC2.24 em concentração de 1, 3, 10 e 30 µM. A expressão gênica foi avaliada através de PCR e ELISA, enquanto fagocitose e quantificação de espécies reativas de oxigênio foram avaliadas por atividade fagocitária e produção de ROS, respectivamente. De acordo com os resultados, CMC2.24 reduziu significativamente o infiltrado inflamatório. Além disso, CMC diminuiu significativamente a quantidade de células TRAP positiva a partir de 3 mg/kg e a perda óssea alveolar, a partir de 1 mg/kg. In vitro, experimentos utilizando macrófagos demonstraram que o CMC inibe a produção de TNF e IL-10 após estímulos microbianos. Além disso, CMC2.24 também inibiu atividade fagocitária e estimulou a produção de ROS. CMC2.24 em diferentes doses demonstrou potencial terapêutico para aplicação em doença periodontal, devido à inibição da resposta inflamatória e também foi efetivo na redução da reabsorção óssea inflamatória. / Curcumin is a yellowish polyphenol extracted from the rizome of a herbaceous tropical plant. It has multiple biological activities described, including anti-inflammatory, antioxidant, antiangiogenic, immunomodulatory, cytotoxic, antimicrobial and pro- and antiapoptotic activities. Its therapeutic application is actively evaluated in preclinical models and clinical studies of various diseases. In vivo use of curcumin is limited by its pharmacodynamic propereties, such as poor solubility in aqueous vehicles, low absorption rate in the gastrointestinal tract and short half-life in the peripheral circulation. The aim of this study was to evaluate the dose-response effect of a synthetic compound that is structurally to natural curcumin (CMC2.24) in a model of experimental periodontal disease that mimics the host-microbial interaction and the resultant inflammation and bone resorption that are hallmarks of this conditions in humans. Periodontal disease was induced in mice by injection of 30 ug LPS of Escherichia coli, carried out 3x / week for 4 weeks. Controls received injections of the same volume of vehicle (PBS). Administration of CMC2.24 (1, 3, 10 and 30mg / kg) was performed daily (starting the day before the first LPS/PBS injection) by oral gavage (1, 3, 10 and 30 mg/Kg) during the whole experimental period. Immunohistochemical detection of tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) was used to identify osteoclasts in the area of interest; the inflammatory infiltrate was assessed by stereometric/morphological analysis in H/E-stained sections; expression of candidate inflammatory cytokines in the gingival tissue determined by RT-PCR and the extent of inflammatory bone resorption quantitated macroscopic analysis of the area of exposed root surface and also by computed microtomography. In in vitro experiments, murine macrophages were stimulated with periodontal diseaseassociated microorganisms in the presence and absence of CMC2.24 (1, 3, 10 and 30 uM). Gene expression was assessed by RT-PCR and ELISA; phagocytic activity was studied by immunocytofluorescence and production of reactive oxygen species was determined by a biochemical assay using a ROS-substrate that emit fluorescence upon cleavage. In vivo, administration of CMC2.24 significantly reduced the inflammatory infiltrate, and the number of osteoclasts starting at the 3 mg/Kg dosage; whereas inflammatory bone resorption was significantly inhibited already at the 1 mg/Kg dosage. In vitro, pre-treatment of macrophages with CMC2.24 markedly inhibited the production of TNF and IL-10 after microbial stimuli. CMC2.24 also inhibited phagocytic activity and stimulated production of ROS. We conclude that CMC2.24 at low doses (3 mg/Kg) has therapeutic potential for application in periodontal disease, due to inhibition of microbial-related inflammation.

Orientador: Rejane Maira Góes / Resumo: O consumo excessivo de lipídios na dieta constitui um problema na alimentação da sociedade atual, contribuindo para o desenvolvimento de doenças e de cânceres como o de mama, de próstata e de cólon. Se tratando da próstata, os lipídios podem ter ação direta, ou por mediadores celulares deles derivados e desequilibrar os níveis de esteroides sexuais. Contudo, alguns componentes dietéticos exercem papel benéfico para a saúde prostática ou mesmo propriedades terapêuticas, como a curcumina. Existe, portanto, interesse crescente na ação da curcumina sobre a próstata, e seus análogos sintéticos vem sendo testados para aplicação no tratamento de doenças prostáticas. Sabendo-se que componentes da dieta materna podem afetar a próstata masculina permanentemente, por programação do desenvolvimento, este estudo avaliou as consequências da dieta materna enriquecida com lipídios saturados da banha de porco, durante a gestação e lactação de ratos Wistar, associada ou não à suplementação alimentar com curcumina, além da ingestão do óleo de milho comercial, sobre a histofisiologia da próstata ventral da prole na idade adulta. Ratos Wistar foram divididos em cinco grupos (n=12 por grupo; 12 semanas de idade), segundo o regime alimentar ao qual as mães foram submetidas da 8ª sem. de idade até o desmame dos filhotes: C - dieta padrão; O- dieta padrão e óleo de milho (100µL em dias alternados, via gavagem); Cm - dieta padrão e óleo de milho contendo curcumina (100mg/kg de peso corporal, em dias... / Abstract: Excessive consumption of lipids in the diet is a problem in the feeding of current society, contributing to the development of diseases and cancers such as breast, prostate and colon. Lipids can have direct action on the prostate gland, or by cellular mediators derived from them and unbalance levels of sexual steroids. However, some dietary components play a beneficial role in prostate health or even therapeutic properties, such as curcumin. There is, therefore, growing interest in the action of curcumin on the prostate, and its synthetic analogues have been tested for application in the treatment of prostatic diseases. Knowing that components of the maternal diet can permanently affect the male prostate gland by developmental programming, this study evaluated the consequences of the maternal diet enriched with lard saturated lipids during gestation and lactation of Wistar rats, associated or not with dietary supplementation with curcumin, in addition to the commercial corn oil intake, on the histophysiology of the ventral prostate of the offspring in adulthood. Wistar rats were divided into five groups (n = 12 per group, 12 weeks old), according to the diet to which the mothers were submitted from the 8th week of age until the weaning of the pups: C - standard diet; O- standard diet and corn oil (100 μL on alternate days, via gavage); Cm - standard diet and corn oil containing curcumin (100mg / kg body weight, every other day, via gavage); L - diet enriched with lard (31% of... / Mestre