Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2009. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2011-05-30T22:18:31Z No. of bitstreams: 1 2009_SandraElisadeSousaCarvalho.pdf: 2803738 bytes, checksum: 3efd571bb5405a3e71ba15228b2dcc0f (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-06-05T18:39:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_SandraElisadeSousaCarvalho.pdf: 2803738 bytes, checksum: 3efd571bb5405a3e71ba15228b2dcc0f (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-05T18:39:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_SandraElisadeSousaCarvalho.pdf: 2803738 bytes, checksum: 3efd571bb5405a3e71ba15228b2dcc0f (MD5) / Dengue é uma importante arbovirose causada pelo vírus do dengue (DENV; Família Flaviviridae, Gênero Flavivirus). Notável aumento no número de casos de dengue e dengue hemorrágica foi registrado nas Américas. Neste estudo foi descrito a diversidade de sequências de diferentes genomas completos de DENV-1 e a inferência filogenética de vírus isolados na América. Dois isolados brasilienses (Distrito Federal, Brasil) de DENV-1 foram identificados em testes utilizando anticorpo policlonal e monoclonal. Os vírus foram amplificados in vitro em células C6/36 de Aedes albopictus. O RNA genômico desses isolados (DF01 e DF02) foram amplificados usando pares de oligonucleotídeos específicos para DENV-1 por RT-PCR. O genoma foi dividido em três fragmentos de cDNA que se sobrepõem e os cDNA amplificados foram clonados em pCR4-TOPO. O DNA plasmidial foi purificado e a sequência de nucleotídeos determinada. DF01 e DF02 foram completamente sequenciados e suas sequências comparadas a um grupo de dados representativo da diversidade genotípica americana de DENV-1 e a um isolado de Singapura, geneticamente distinto dos genótipos de circulação americana. Embora sejam observadas consideráveis diferenças em sequências de aminoácidos presentes em regiões importantes, vários elementos chaves (sítios de glicosilação, pontes disulfeto e sequências características a domínios funcionais de proteínas) foram completamente conservados. Análises filogenéticas indicaram a existência de um grupo monofilético dividido em dois sub-grupos na população de DENV-1 circulante na América Latina, relacionando a sua distribuição geográfica. Foram descritos três potenciais eventos de recombinação entre os isolados analisados, um destes ocorreu no novo vírus identificado DF01. Nossas análises de sequências genômicas completas de populações geograficamente estruturadas e com baixa diversidade na América Latina produziram forte evidência de recombinações relativamente difundidas. Os clones obtidos com fragmentos genômicos de DENV-1 utilizados no estudo, foram transferidos para um vetor modificado para o possível desenvolvimento de cDNA infeccioso. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Dengue is an important arboviral disease caused by dengue viruses (DENV; Family Flaviviridae, Genus Flavivirus). A dramatic increase in the number of dengue fever and hemorrhagic dengue cases had been reported in the American continent. In this work we describe the diversity found in full-length DENV-1 sequences and phylogenetic inference of dengue virus isolated in Americas. Two DENV-1 isolates form Brasília (Federal District, Brazil), were identified using polyclonal and monoclonal antibody-assay. The viruses were amplified in vitro in an Aedes albopictus C6/36 cell line. Genomic RNA of those isolates (DF01 e DF02) were amplified using specific primer pairs for DENV-1 by RT-PCR. The genome was divided into three overlapping cDNA fragments, and amplified cDNA was linked into pCR4-TOPO. Plasmid DNA was purified and nucleotide sequences were determined. DF01 and DF02 were completely sequenced and compared to a data set of full genomic sequence of DENV-1, that represent the genotypic diversity of this serotype, and one sequence from Singapura, used as outgroup. Although our genetic analyses revealed considerable differences at protein levels, several key elements (i.e. disulfide bridges, glycosylation sites and protein functional domains) were fully conserved. Phylogenetic analysis indicated the existence of one monophyletic Latin American cluster (LA) which could in turn be divided into two major sub-clusters, characterized by a geographical subdivision. We found three recombination events among all DENV examined sequences, one of the new full length genome described here was apparently recombinant. Our analysis of full genome sequences samples of DENV-1 population geographically structured and with low-diversity in Latin American has yielded strong evidence of relatively pervasive recombination. The clones obtained with DENV-1 subgenomic fragments used in this study, were transferred into lowcopy plasmid modified for the possible construction of an infectious cDNA clone.

Muitas ferramentas de diagnóstico da dengue tornaram-se disponíveis, porém requerem coleta de sangue como amostra para análise. Um método não invasivo de confirmar a infecção por dengue seria de importância considerável para os estudos clínicos e epidemiológicos. Testes de saliva podem encorajar os pacientes a serem mais receptivos para o diagnóstico da dengue. Possíveis problemas com o uso de sangue incluem a exigência de consentimento e a cooperação do paciente. Em muitos casos, flebotomia em indivíduos com fobia de agulhas, portadores de deficiências e discrasias sanguíneas e, especialmente em bebês e crianças, ou ainda devido a razões sociais, religiosas, à necessidade de um enfermeiro treinado e à necessidade de se separar o soro do plasma antes do teste. Objetivo deste trabalho foi identificar RNA viral em amostras de saliva de pacientes infectados com dengue durante o período febril; avaliar o teste rápido para identificar NS1 em amostra de saliva; identificar a presença de NS1 em amostras de saliva por meio do teste ELISA. Foram coletas amostras de saliva de pacientes durante o período febril com e sem dengue. Todos diagnósticos foram confirmados por exame de sangue para IgM/IgG. Foi feito o teste da Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real em 10 amostras de pacientes com dengue. Em 44 amostras foram testados as tiras de diagnóstico rápido da dengue e ao teste ELISA NS1, para a detecção da proteína NS1. Esse estudo ressaltou a importância da busca pelo diagnóstico laboratorial rápido, prático e financeiramente acessível de doenças febris agudas com sintomas inespecíficos, principalmente em áreas de ocorrência de dengue. Nesse estudo foi encontrada alta especificidade (94%) e média sensibilidade (73%) nos resultados da identificação da proteína NS1 nas amostras de saliva em estágios precoces da infecção por dengue. Esse método, se aprimorado para saliva, poderá ter resultados ainda melhores, por isso mais estudos são necessários. / This study brings a literature review about the current dengue status worldwide and in Brazil followed by a systematic review that highlights the dengue diagnosis through saliva. A prospective study was also made, which evaluated the dengue virus infection diagnosis accuracy through the NS1 antigen detection in saliva samples using ELISA assays. The NS1-ELISA results in saliva were compared to the IgM-ELISA and IgG-ELISA serology. A total of 44 saliva samples were obtained from November 2012 to February 2013. The results showed that de NS1-ELISA presented a sensibility of 0.73, specificity of 0.94, Positive Predictive Value of 0.95, Negative Predictive Value of 0.70, Positive Likelihood Ratio of 13.15, Negative Likelihood Ratio of 0.28. Having these findings in mind, it is possible to suggest that the NS1 detection in saliva may be an important diagnostic tool in special cases, such as people that fear needles, with blood dyscrasias, babies, children, as well as to quickly monitor epidemics and their dissemination.

No description available.

Objetivo: describir los conocimientos y prácticas respecto a las medidas preventivas de dengue en la persona responsable del cuidado de la vivienda en el centro poblado Batangrande. Métodos: se realizó una investigación de tipo cuantitativa con diseño descriptivo de corte transversal. Como técnica de recolección de datos se utilizó la entrevista y como instrumento el cuestionario, el cual va dirigido de forma específica a las variables que se pretenden estudiar en la presente investigación. Resultados: se realizaron 345 visitas en total, de las cuales 15 de las viviendas se encontraron cerradas quedando finalmente 330 viviendas que fueron entrevistadas. En cuanto a conocimientos sobre dengue, 29,1% (96) personas manifestaron conocer la enfermedad. En relación a medidas higiénicas para eliminar criaderos del zancudo, 5,2% (17) señalaron que conocen dichas medidas, mientras que 0,6% (2) reconocieron qué medidas tomar para evitar ser picado por el mosquito del dengue. De las prácticas evaluadas más destacadas para prevenir el dengue en las personas entrevistadas y que se encuentran por encima del 50% son aquellas que eliminan aguas estancadas y la colocación de abate. Conclusiones: los conocimientos sobre dengue son escasos, y existe un porcentaje aceptable de prácticas adecuadas. / Tesis

Describe el aislamiento y caracterización molecular de un nuevo flavivirus únicamente de mosquito, aislado de Culex (Melanoconion) occossa colectados en 2009 de un área urbana de Iquitos, Perú, ubicada en la cuenca del Amazonas, en la región noreste del Perú. La evidencia del Flavivirus es detectada mediante ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFI) en sobrenadante de cultivo celular de las células infectadas C6/36 usando anticuerpos policlonales grupo de Flavivirus y confirmada por RT-PCR. En comparación por pares de las secuencias de la región ENV, la más alta de nucleótidos (47,4%) y de aminoácidos (39,8%) la identidad se observa en el virus Nounané (NOUV). En comparación por pares de la región NS5, la identidad de nucleótidos más alta se observa en el virus Spondweni (65,9%), el virus de Iguape (IGUV; 65,7%) y el virus de Kedougou (65,6%); sin embargo, en el nivel de aminoácidos, la más alta identidad en pares de bases se observa en IGUV (69,8%), virus Naranjal (69,6%) y el virus Bussuquara (69,3%). El análisis filogenético utilizando ENV parcial y secuencias de aminoácidos NS5 revela que este Flavivirus forma un clado con NOUV. Para investigar la gama de huéspedes del nuevo Flavivirus, se inoculan una variedad de células de mamíferos (Vero 76, Vero E6, BHK, LLCMK y MDCK) con el tercer pasaje del aislamiento C6/36 y monitorea el efecto citopático (EC). No se detecta EC, y todas las líneas de células de mamífero son negativas para el antígeno Flavivirus por IFI y ARN Flavivirus por RT-PCR luego de catorce días de incubación. Propone que este Flavivirus genéticamente diferente sea llamado Nanay Virus (NANV), debido a la zona de Iquitos, Perú, donde fue detectado por primera vez.

Affected by unprecedented urban growth, overcrowding, poverty, and health inequalities, Bangladesh has remained hyperendemic for dengue since 2000. Considering the complexities involved with dengue transmission, I argued that understanding transmission requires encapsulating different disciplinary knowledge as well as non-academic knowledge. I have applied an Ecohealth approach to investigate dengue transmission dynamics in Dhaka, Bangladesh. Using the Delphi method, all 90 Wards of Dhaka were classified into ‘high’, ‘medium’, and ‘low’ Socio-Economic Status (SES) zones. A total of 1,200 households were randomly selected which represented the SES zones. During 2011-2012, these sampled households were repeatedly inspected for Aedes mosquitoes and to collect blood samples from residing members. This transdisciplinary investigation focused on: i) the rates of human exposure to dengue virus (DENV) by identifying individuals with IgM and IgG antibodies in the serosurvey samples; ii) abundance of dengue vector mosquitoes (Aedes aegypti) in the same households; iii) risk perception, and Knowledge, Attitude and Practice (KAP) regarding dengue among community members and experts. KAP survey results indicated that 93.7% of the community members knew that mosquitoes act as the primary vector of its transmission; 87.3% were unaware that Aedes mosquitoes prefer to lay their eggs in water containers. The entomological survey results showed that 26.7% of all surveyed houses in the city were infested with Aedes aegypti mosquitoes. The ornamental functional categories of containers were most significant containers in producing maximum number of Aedes pupae; this was found to be a significant risk factor for seroprevalence and seroconversion. The examination of IgG seroprevalence revealed that seropositivity was strongly correlated with increased age and number of indoor potted plants. The serosurvey findings showed that seroprevalence was high (79.9%), revealing that most dwellers had been exposed DENV. However, there was no significant association between Aedes positive houses and houses with seroconverted persons, indicating that people were being infected in distant areas outside their houses. A persistently high rate of dengue infection in Dhaka is being influenced by the lack of knowledge and awareness of the eco-bio-social factors. Improvement in intersectoral coordination to formulate and implement dengue epidemic prevention and control interventions is necessary. / May 2015

A Dissertation submitted to the Faculty of Medicine, University of the witvmtersrand, Johannesburg, in fulfilment of the requirements for the Degree of Master of Science in Medicine. / The potential of Aedes aegypti to act as a vector of dengue (DEN) viruses was assessed in the tropical and subtropical regions of South Africa. The prevalence in bamboo pot ovitraps, utilization of artificial larval habitats and antihropophflism of Ae. aegypti was measured in fifteen populations from coastal Natal and five from the Transvaal. Pot indices generally ranged from 40-100 per cent (x±s;c= 60,3±9,8), with a mean abundance index of 0,43±0,15 (sx) mosquitoes/pot/day. Artificial container indices ranged from 11-83 per cent (X±si = 56,8±5,6). Biting rates ranged from 0,2-29,0 per manhour, in direct relationship to the level of urbanization. The feral Nduntupopulation was least anthropophilic, although pot and abundance indices were high. To investigate the presence of subspp. aegypti and formosus, the pale scales on tergite-1 were counted in ten or more siblings from each of 196 families, representing eighteen populations. At least 118 of these families were heterogeneous, each containing some siblings with no pale scales and others with pale scales on tergite-1, thus invalidating this character for distinguishing between the subspp. Isozyme electrophoresis 'did not provide diagnostic electromorphs for distingllishing between different populations. Allelomorph frequencies and the numberof pale scales on tergite-l and tergite-2 differed significantly in individual populations but not between anthropophilic and non-anthropophilic populations. As there was no correlation between tergal morphology, isozymes and anthropophilism, the populations could not be resolved into the two subspp. Based on the only morphological character that appears to be reliable, viz. the blackness of the background scales, all of the populations are probably Ae. aegypti formosus. The vector competence of five populations for DEN-1 and DEN-2 viruses was tested in the laboratory after allowing mosquitoes to feed on an infective blood-virus mixture. Viral antigen was detected by indirect fluorescent antibody test. Head-squash infection rates (HSIRs)ranged from 11-54 per cent for DEN-land from 19- 46 per cent for DEN...2. Transmission rates (TRs) were determined by in vitro capillary method and ranged from 67-100 per cent for DEN-1 and from 11-86 pier cent for DEN-2.Meanvector competence indices (calculated from HSIRsand TRS) ware 0,13-0,41 for DEN-l and 0,,18-0,34 for DEN-2.It is concluded that, should DEN be reintroduced to South Africa via the shipping or tourist industries, Ae. aegypti would be an efficient urban vector. The Durban population is of particular epidemiological importance because it was highly anthropophilic and was the most vectorially competent of the South African populations. / Andrew Chakane 2018

O desenvolvimento de uma vacina para o controle da dengue é uma prioridade em todo o mundo. O domínio helicase da proteína NS3 (NS3H) viral alberga epítopos reconhecidos por linfócitos T citotóxicos, os quais tem papel importante na eliminação de células infectadas. Esse trabalho propôs a obtenção de uma forma recombinante, produzida em linhagens de Escherichia coli, da NS3H do DENV2 com características similares à proteína nativa e sua utilização como um potencial antígeno vacinal. A NS3H foi obtida na forma solúvel, foi reconhecida por anticorpos de camundongos e de humanos infectados e foi capaz de interagir com o RNA viral. Camundongos imunizados com NS3H coadministrada com diferentes adjuvantes desenvolveram respostas imunológicas específicas mas não foram protegidos após desafio. Em conjunto, os resultados indicam que a proteína NS3H recombinante preserva conformação e determinantes antigênicos da proteína viral nativa e pode ser útil em estudos sobre a biologia viral e na busca de estratégias anti-virais voltadas para o controle da dengue. / The development of a dengue vaccine is a worldwide priority. The helicase domain of viral NS3 protein (NS3H) preserves epitopes recognized by cytotoxic T lymphocytes, which plays an important role in the elimination of infected cells. This study aimed the generation of a recombinant NS3H form of a type 2 dengue virus (DENV2) lineage, in Escherichia coli strains, with properties similar to the native protein and its use as a potential vaccine antigen. The NS3H was obtained in soluble form, was recognized by antibodies from mice and human subjects and was able to interact with the viral RNA. Mice immunized with NS3H combined with different adjuvants developed specific immune responses but did not confer protection to a lethal challenge. Altogether, the results indicate that the recombinant NS3H protein preserves conformational and antigenic determinants of the native protein and may be a useful tool for studies dealing with the DENV biology and the search for anti-virus approaches.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:54:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIRCE SAYURI OTAKE GUOLLO.pdf: 1073948 bytes, checksum: 3c37949ac45c5ba805d30bc1620419a0 (MD5) Previous issue date: 2013-11-01 / Introduction: Dengue is one of the arboviruses that mostly affects people worldwide, with its early diagnosis and treatment being necessary to avoid complications that may lead to death. Objective: Describe cases of dengue as per demographic aspects; analyze the evolution of morbimortality in the cases of dengue reported and describe the spatial distribution of deaths by dengue. Methodology: Descriptive analytical study using a cross-sectional retrospective design with cases of dengue reported in the municipality of Cuiabá, Mato Grosso state, between 2007 and 2011. Data were obtained in the Notifiable Diseases Information System (SINAN, as per its acronym in Portuguese), whose access was provided by the Epidemiological Surveillance Department of the City Health Department of Cuiabá. The cases of dengue were classified as classic and severe dengue. The criterion adopted to confirm the cases of classic dengue was clinical/epidemiological/laboratorial and severe cases had only laboratorial confirmation. Results: A total of 18,497 cases of dengue were diagnosed in Cuiabá. Among these, 98.6% (p<0.01) occurred in the urban area. Women were more affected by dengue (53.0%) (p<0.01). The most affected age range was between 5 and 14 years (25.09%) (p<0.01). Among the 18,497 cases of dengue, 18,021 (97.50%) evolved to the classic form, 476 (2.58%) to the severe form (p<0.01) and 19 (0.1%) to death. The year of 2009 showed the greatest prevalence of the classic (62.16%) and the severe (1.94%) forms of dengue. This period also showed a greater prevalence of deaths (p=0.95), a higher number of hospitalized patients for both clinical forms of the disease (p=0.83), as well as a greater coefficient of the incidence of dengue in its severe form (2,178/100,000 inhabitants) and a greater coefficient of mortality (2.4/100,000 inhabitants). The greatest prevalence of hospitalizations due to severe cases of dengue was observed in the age range between 5 and 14 years, however, the highest rate of mortality occurred in children under one year of age and in adults aged between 55 and 64 years. The greatest prevalence of deaths by dengue occurred in the south region of the city (31.58%). Conclusion: The urban zone was the place with the greatest prevalence of dengue cases and women were more affected. The age range between 5 and 14 years was more affected by the disease, with higher rates of hospitalization (p=0.83) and mortality (p=0.95). During the studied years, with exception for 2008, the prevalence of the clinical forms of dengue was found to be dependent on the age range (p<0.01). The analysis of the incidence of the clinical forms of dengue by age range, separately, revealed that children under one year of age, between 1-4 years, 15-24 years and 55-64 years are independent on the year of evaluation (p>0.05); and the others are dependent (p<0.01). The classic form of dengue had a greater prevalence in all age ranges. The greatest prevalence of deaths by dengue occurred in the south region of Cuiabá (31.58%). A migration is observed in the changes of epidemiological profile of the morbimortality by dengue for both clinical forms of the disease. The year of 2009 was atypical, which is probably associated to an epidemic. / Introdução: A dengue é uma das arboviroses que mais afeta o homem em todo o mundo, sendo necessário o diagnóstico precoce e tratamento para evitar complicações que possam levar ao óbito. Objetivo: Descrever os casos de dengue segundo os aspectos demográficos; analisar a evolução da morbimortalidade dos casos notificados da dengue e descrever a distribuição espacial dos óbitos por dengue. Metodologia: Estudo descritivo, analítico tipo retrospectivo transversal dos casos de dengue notificados no Município de Cuiabá-MT, no período de 2007 a 2011. Os dados foram obtidos no Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN), disponibilizados pela Vigilância de Epidemiologia da Secretaria Municipal de Saúde de Cuiabá. Os casos da dengue foram classificados em dengue clássica e grave. O critério adotado para confirmação dos casos de dengue clássica foi clínico/epidemiológico/laboratorial e os casos graves somente laboratoriais. Resultados: Foram diagnosticados 18.497 casos da dengue no Município de Cuiabá. Desses 98,6% (p<0,01) ocorreram na zona urbana. As mulheres foram as mais acometidas pela dengue (53,0%) (p<0,01). A faixa etária mais afetada foi entre 5 a 14 anos (25,09%) (p<0,01). Dentre os 18.497 casos de dengue, 18.021 (97,50%) evoluíram para a forma clássica, 476 (2,58%) para a forma grave (p<0,01) e 19 (0,1%) para o óbito. No ano de 2009 ocorreu a maior prevalência das formas clássicas (62,16%) e grave (1,94%) da dengue. Também tiveram maior prevalência, neste período os óbitos (p=0,95) e o maior número de pacientes hospitalizados para as duas formas clínicas da doença (p=0,83), assim como, maior coeficiente da incidência da dengue na sua forma grave (2.178/100.000 hab) e maior coeficiente de mortalidade (2,4/100.000hab.). A maior prevalência de internações hospitalares por casos graves ocorreu na faixa etária de 5 a 14 anos, porém a maior taxa de mortalidade ocorreu em crianças menores de um ano e em adultos com idade entre 55 a 64 anos. A maior prevalência de óbitos por dengue ocorreu na região sul da cidade (31,58%). Conclusão: A zona urbana foi o local onde ocorreu a maior prevalência dos casos da dengue e o sexo feminino foi o mais acometido. A faixa etária entre 5-14 anos foi a mais acometida pela doença, com maiores taxas de internação (p=0,83) e mortalidade (p=0,95) . Durante os anos estudados, exceto o ano de 2008, foi identificado que a prevalência das formas clínicas da dengue é dependente da faixa etária (p<0,01). Quando analisada a incidência das formas clínicas da dengue por faixa etária, separadamente, identificou-se que menor de 1 ano, 1-4 anos, 15- 24 anos e 55-64 anos, são independentes do ano de avaliação (p>0,05); as demais são dependentes (p<0,01). A forma clássica da dengue teve maior prevalência em todas as faixas etárias. A maior prevalência de óbitos por dengue ocorreu na região sul da cidade de Cuiabá (31,58%). Observa-se uma migração nas mudanças no perfil epidemiológico da morbimortalidade da dengue para as duas formas clínicas da doença. O ano de 2009 foi um ano atípico que provavelmente pode estar associado a uma epidemia.

A dengue é uma doença que afeta milhões de pessoas e possui um número significativo de mortes. Não há nenhum tratamento vacinal legalizado para uso. As estratégias vacinais contra a dengue baseadas em proteínas não estruturais têm demonstrado serem mais seguras do que as baseadas em proteínas estruturais. A proteína não estrutural 5 (NS5) do vírus dengue é a proteína mais conservada entre os quatro sorotipos e desempenha um papel crucial na replicação viral. Neste estudo, foi gerada uma forma recombinante da NS5 expressa em E. coli com propriedades antigênicas preservados. As condições de cultura foram optimizadas, o que permitiu a expressão dessa proteína na forma solúvel. A imunização de camundongos Balb/c com a NS5 sozinha ou em combinação com um adjuvante (poli (I:C)) promoveu o aumento da sobrevida de camundongos após desafio letal com DENV2. A combinação da NS5 com poli (I:C) emulsionado em Montanide 720 levou a expansão de linfócitos T CD8+ específicos. Os resultados indicam que a proteína NS5 obtida preserva determinantes antigênicos da proteína nativa e pode ser uma ferramenta útil para estudos sobre a biologia do DENV, busca de drogas antivirais e desenvolvimento de vacinas. / Dengue fever is a disease affecting millions of people worldwide and causing a significant number of deaths. There are no effective treatments or vaccine approaches capable of preventing such infection. Anti-DENV vaccine strategies based on nonstructural proteins as antigens have been shown to be safer than those based on structural proteins. The DENV nonstructural protein 5 (NS5), plays a crucial role in viral replication. In this study, we generated a recombinant form of DENV2 NS5 expressed in E. coli in high amounts and with preserved antigenic properties with regard to the native protein. Culture conditions were optimized in order to allow expression of NS5 as a soluble protein. The immunization of Balb/c mice using this protein alone or in combination with poly (I:C) led to increased survival after intracranial challenge with the DENV2 JHA1 strain. The combination of the protein with poly (I:C) emulsified in Montanide 720 led to the activation of NS5-specific CD8+ T lymphocytes. Altogether, the results indicate that the recombinant NS5 protein preserves antigenic determinants of the native protein and may be a useful tool for studies dealing with the DENV\'s biology, search for anti-viral drugs and vaccine development.