FREITAS, Rosa Elayne Marques de. Avaliação biológica e de fatores gênicos modulados pelos retinóides no ciclo celular, proliferação, diferenciação, apoptose e necrose em células de cripta intestinal de rato. 2014. 91 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-02-19T15:58:43Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_remfreitas.pdf: 18814068 bytes, checksum: 2c625864a3c408b0890ffce574c5e148 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-02-19T16:00:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_remfreitas.pdf: 18814068 bytes, checksum: 2c625864a3c408b0890ffce574c5e148 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-19T16:00:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_remfreitas.pdf: 18814068 bytes, checksum: 2c625864a3c408b0890ffce574c5e148 (MD5) Previous issue date: 2014 / Infant mortality affects millions of children around the world and malnutrition contributes about one third of this mortality. Vitamin A is already used in the treatment of childhood malnutrition. However, few or no study has been done, carried out at the cellular level, to assess the impact of vitamin A supplementation in intestinal epithelial cells under in vitro protein malnutrition. Thus, we aimed to demonstrate the effects of malnutrition and treatment with retinoids in the processes of proliferation, apoptosis/necrosis, cell cycle and cell differentiation as well as activation of signaling pathways in IEC-6 rat cells under protein malnutrition. We demonstrated that malnutrition decreased cell proliferation in periods of 6, 12, 24 and 48 hours. In addition, retinyl palmitate treatment intensified the decrease of cell proliferation when compared to the malnourished group in the periods of 24 and 48 hours after supplementation. However, the reduction in proliferation was not related to cell death. Indeed, retinyl palmitate reduced apoptosis in the period of 48 hours after induction of malnutrition. Additionally, malnutrition stimulated cell quiescence, and the same was enhanced by retinol, which was identified by the increase in the percentage of cells in G0/G1 phase and the reduction of the percentage of cells in S phase and G2/M, especially in periods of 24 and 48 hours. To check if malnutrition, with or without supplementation of retinoids, was stimulating cell differentiation, we evaluated the gene transcription of the specific markers FABP and IAP within 42 hours. Both retinoids tested increased approximately 5-fold the expression of FABP and IAP mRNAs. Knowing that differentiation had been stimulated, we decided to check which intracellular signaling pathways, coupled to the activation of G proteins, were activated. Our results demonstrated that protein malnutrition decreased gene transcription of c-Jun, STAT3, MEF2C and ATF2, but increased the expression of the GLI-3 and c-Fos mRNAs in relation to the nourish group. However, retinoids increased the transcription of ELK-1, SRF, c-Jun, FOXO, STAT3, ATF2, GLI-3, NF-kB in relation to the malnourished group. Thus, this study showed that cell malnutrition interfered with cell proliferation stimulating cell quiescence. However, retinoids treatment intensified cell quiescence, decreased IEC-6 apoptosis and stimulated cell differentiation associated with the activation of the molecular pathways of ATF2, MAPK/ERK/JNK, IL-6, Hedgehog, PI3K/AKT and NF-kB. / A mortalidade infantil afeta milhões de crianças em todo mundo e a desnutrição contribui com cerca de um terço dessa mortalidade. A vitamina A já é utilizada no tratamento da desnutrição infantil. Contudo, poucos ou nenhum estudo fora realizado, ao nível celular, para avaliar o impacto da suplementação com a vitamina A em células epiteliais intestinais com desnutrição proteica in vitro. Desse modo, objetivamos demonstrar os efeitos da desnutrição e do tratamento com retinoides nos processos de proliferação, apoptose/necrose, ciclo celular e diferenciação celular, assim como na ativação das vias de sinalização em células IEC-6 de rato com desnutrição proteica. Demonstramos que a desnutrição diminuiu a proliferação celular nos tempos de 6, 12, 24 e 48 horas. Em adição, nos tempos de 24 e 48 horas a suplementação com palmitato de retinol intensificou esta redução em comparação ao grupo desnutrido. Contudo, a diminuição da proliferação não estava relacionada à morte celular. Na verdade, o palmitato de retinol reduziu apoptose no tempo de 48 horas após a indução de desnutrição. Adicionalmente, a desnutrição estimulou a quiescência celular e a mesma foi intensificada pelo retinol identificada pelo aumento do percentual de células na fase G0/G1 e diminuição dos percentuais de células nas fases S e G2/M, principalmente nos tempos entre 24 e 48 horas. Para verificar se a desnutrição, associada ou não à suplementação dos retinoides, estimulava a diferenciação celular foi realizada a análise da transcrição gênica dos marcadores específicos FABP e IAP no período de 42 horas. Os dois retinoides testados aumentaram em aproximadamente cinco vezes a expressão dos mRNAs de FABP e IAP. Visto que a diferenciação fora estimulada, foram verificadas quais as vias de sinalização intracelular, acopladas à ativação da proteína G, estavam ativadas. Os resultados deste trabalho demonstraram que a desnutrição proteica diminuiu a transcrição gênica de c-Jun, STAT3, MEF2C, e ATF2, mas aumentou a expressão dos mRNAs de GLI-3 e c-Fos em relação ao grupo nutrido. Entretanto, os retinoides aumentaram a transcrição dos mRNAs de ELK-1, SRF, c-Jun, FOXO, STAT3, ATF2, GLI-3 e NF-κB em relação com o grupo desnutrido. Deste modo, este trabalho mostrou que a desnutrição interferiu na proliferação estimulando a quiescência celular. Porém, o tratamento com os retinoides intensificou a quiescência diminuindo a apoptose com estimulação da diferenciação celular associado com a ativação das vias moleculares do ATF2, MAPK/ERK/JNK, IL-6, Hedgehog, PI3K/AKT e NF-κB.

LIMA, Noelia Leal. Suplementação de alanil-glutamina em crianças de uma comunidade carente de Fortaleza - CE : impacto sobre a barreira intestinal e estado nutricional. 2006. 174 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2006. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-05T12:26:18Z No. of bitstreams: 1 2006_tese_nllima.pdf: 16398431 bytes, checksum: dc451eb3fb376c294d5719f348b47109 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-06T12:25:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_tese_nllima.pdf: 16398431 bytes, checksum: dc451eb3fb376c294d5719f348b47109 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-06T12:25:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_tese_nllima.pdf: 16398431 bytes, checksum: dc451eb3fb376c294d5719f348b47109 (MD5) Previous issue date: 2006 / In spite of the recognition of alterations in intestinal barrier function associated with malnutrition and the trophic effects of alanyl-glutamine (AG) on intestinal barrier function, measured by the rate of urinary excretion of Lactulose:Manitol, there are still few studies determining the effect of oral supplementation of AG in malnourished children. Objectives: Examine the effect of oral AG supplementation or the placebo Glycine (G) on intestinal barrier function and growth in children who are at risk for malnutrition and are residents of the University Park of Pici community. Methods: Double blind randomized study in children between 6 months and 8 years of age, with at least one of the z scores for the anthropometrical indicators (AIs) (weight-for-age, height-for-age, and weight-for-height) less than minus one. One hundred and seven children were randomized between July 2003 and November 2004, to receive AG (24 g/day) or G (25 g/day) in iso-nitrogenic quantities for 10 days. The urinary excretion of Lactulose:Mannitol was used as a measure of intestinal permeability, and was performed on the first and tenth days of the study protocol. The weight and height of the children were collected on the 1, 10, 30, and 120 days of the study protocol to calculate the AIs. Results: The percentage of urinary excretion of Lactulose decreased significantly in the group that received AG (p < 0.05 Student T test), but not in the group that received G. The cumulative improvement in the Anthropometrical Indicators, weight-for-height and weight-for-age on the 120 day of the study protocol were significant when covariant analysis was performed in the group which received AG versus the control group G (p < 0.04 and < 0.029, respectively). During the study period a total of 20 (19%) Adverse Events (AEs) were observed in the following order of frequency: vomiting (8.4%), diarrhea (2.8%), nausea (1.9%), respiratory infection (1.9%), scabies (1.9%), asthma (0.9%), epistaxis (0.9%). The AEs were not statistical different between the study groups, and only three of the AEs were considered Serious Adverse Events (SEAs), two in the AG group (1 asthma and 1 diarrhea) and one in the G group (1 diarrhea). Conclusions: The oral supplementation of AG for 10 days improved intestinal permeability and nutritional status in children at risk for malnutrition in a Fortaleza community. / Apesar do reconhecimento das alterações intestinais associadas à desnutrição e dos efeitos tróficos da alanil-glutamina (AG) na função de barreira intestinal, medida pela taxa de excreção urinária de Lactulose: Manitol, ainda são escassos os estudos para determinar o efeito de suplementação oral da AG em crianças desnutridas. Objetivos: Examinar o efeito de suplementação oral de AG ou placebo glicina (G) na função de barreira intestinal e crescimento em crianças sob risco nutricional residentes na comunidade do Parque Universitário do Pici. Métodos: Ensaio clínico randomizado controlado em crianças maiores de 6 meses e menores de 8 anos de idade, com pelo menos um dos escores z para os indicadores antropométricos (IAs) (peso-para-idade, estatura-para-idade e peso-para-estatura) < -1. Cento e sete crianças foram randomizadas, entre julho de 2003 a novembro de 2004, para receberem AG (24g/dia) ou G (25g/dia) em quantidades isonitrogênicas por 10 dias. A excreção urinária de Lactulose:Manitol foi utilizada como medida da permeabilidade intestinal e realizada nos 1° e 10° dias do protocolo de estudo. O peso e estatura das crianças foram coletados nos 1°, 10°, 30° e 120° dias do protocolo de estudo para cálculo dos IAs. Resultados: O percentual da excreção urinária de lactulose diminuiu significantemente no grupo que recebeu AG, mas não no grupo que recebeu G ( p < 0,05 teste t de Student). A melhora cumulativa nos indicadores antropométricos, peso-para-estatura e peso-para-idade, no 120° dia do protocolo de estudo foi significante quando realizado a análise de covariância no grupo que recebeu AG versus o grupo que recebeu glicina (respectivamente, p <0,04 e <0,029). Durante o período de estudo foram observados um total de vinte (19%) Eventos Adversos (EAs) na seguinte ordem de freqüência: vômitos (8,4%), diarréia (2,8%), náuseas (1,9%), infecção respiratória (1,9%), escabiose (1,9%), asma (0,9%), epistaxe (0,9%). Os EAs não foram diferentes na análise estatística entre os grupos estudados e somente três dos EAs foram considerados como Sérios Eventos Adversos (SEAs ), dois no grupo da alanil-glutamina (1 asma e 1 diarréia) e um no grupo da glicina (1 diarréia). Conclusões: A suplementação oral de AG por 10 dias melhorou a permeabilidade intestinal e o estado nutricional em crianças sob risco nutricional residentes em uma comunidade de Fortaleza.

ALVES, Luis Antonio de Oliveira. Expressão e regulação da quinase celular intestinal (ICK) em modelo de desnutrição in vivo e in vitro. 2014. 144 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-04T13:13:41Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_laoalves.pdf: 14635596 bytes, checksum: e4f1330eb5aa6bd3be3b7e58d448a025 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-04T13:14:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_laoalves.pdf: 14635596 bytes, checksum: e4f1330eb5aa6bd3be3b7e58d448a025 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-04T13:14:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_laoalves.pdf: 14635596 bytes, checksum: e4f1330eb5aa6bd3be3b7e58d448a025 (MD5) Previous issue date: 2014 / Malnutrition can affect the intestinal architecture, causing mucosal atrophy and compromising epithelial turnover. Although the gut is able to compensatorily respond to malnutrition, the molecular mechanisms by which the gut responds to protein deprivation are not completely understood. The intestinal cell kinase (ICK) is a highly conserved serine/threonine protein and a novel component of the signaling pathways that regulate cell proliferation in the intestinal crypt. In order to evaluate the role of the intestinal compensatory response to protein deprivation mediated by ICK, the activation of molecular pathways related to cell proliferation and survival were measured in C57BL/6J mice subjected to low protein diet (containing 2% protein) for five days and received standard chow-fed controls. We analyzed the intestinal canonical Wnt/β-catenin pathway, mammalian target of rapamycin (mTOR), mitogen-activated protein kinase (MAPK) and protein kinase B (PKB/Akt) by immunoblotting. We also measured the expression of intestinal stem cells markers (LGR-5 and Bmi1). We also conducted an in vitro study using human ileocecal adenocarcinoma cells (HCT-8) starved with low serum (0-1%) to evaluate the ICK response with or without gut trophic factors, such as glutamine (2 mM), alanyl-glutamine (10 and 50mM), and zinc (10 and 50μM), casein and bovine serum albumin (BSA) at a concentration of 0.25 or 0.5% in the medium, respectively. We also assessed ICK mRNA transcript by q-PCR after protein deprivation. In order to evaluate the effect of this kinase on cell proliferation and apoptosis, the ICK gene was silenced using interference RNA in HCT-8 cells. Cell viability was measured by trypan blue exclusion. Furthermore, caspase 3 and 9, cleaved PARP, analyzed by western blot, and annexin V, measured by flow cytometry, were used to assess apoptosis. In order to measure ICK effect on cell proliferation, we analyzed Wnt/β-catenin and cyclin D1 pathways by western blot. We identified a significant and transient increase in ICK intestinal levels following low-protein induced malnutrition, concomitant with the activation of molecular pathways related to proliferation and survival, as well as increased expression of intestinal stem cell markers. This work also documented that the protein deprivation, induced by low serum concentration, increased the expression of ICK in HCT-8 cells, an effect that was reversed by BSA in the medium. This reverse effect was not seen with other compounds such as glutamine, alanyl-glutamine or zinc. Despite the increase in ICK expression after protein deprivation, no significant difference in its transcripts was found, when compared with controls. The silencing of the ICK gene significantly decreased Wnt/β-catenin and cyclin D1 signaling activation in HCT-8 cells with increased apoptosis by a caspase dependent mechanism. Our results suggest that the increased ICK expression in response to protein deprivation is a protective mechanism that limits cell apoptosis and supports epithelial cell proliferation following malnutrition. Keywords: Malnutrition. Protein deprivation. Intestinal cell kinase. β / A desnutrição pode afetar a arquitetura intestinal, causando atrofia da mucosa e comprometendo o turnover epitelial. Embora o intestino seja capaz de responder compensatoriamente à desnutrição, os mecanismos moleculares pelos quais o intestino responde à privação proteica não estão completamente esclarecidos. A quinase celular intestinal (ICK) é uma proteína altamente conservada do tipo serina/treonina e um novo componente das vias de sinalização que regulam a proliferação celular na cripta intestinal. Para avaliar o papel da resposta intestinal compensatória à privação proteica, regulada pela ICK, foi medida a ativação de vias moleculares relacionadas à proliferação e sobrevivência celulares, como a via canônica Wnt/β-catenina, a via da proteína alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR), vias da proteína-quinase ativada por mitógeno (MAPK) e da proteína quinase B (PKB/Akt), bem como a expressão de marcadores para células-tronco intestinais (LgR-5 e Bmi1) por imunoblotting num modelo in vivo em camundongos fêmeas C57BL/6J submetidas à uma dieta hipoproteica (contendo 2% de proteína) por cinco dias e controles nutridos recebendo dieta padrão. Também foi realizado um estudo in vitro utilizando células HCT-8 de adenocarcinoma ileocecal humano desafiadas com meio padrão com restrição de soro fetal bovino (0-1%) para avaliar a resposta da ICK na presença ou não de fatores tróficos intestinais como glutamina (2mM), alanil-glutamina (10 e 50 mM) e zinco (10 e 50μM), além de caseína e albumina sérica bovina (BSA) na concentração de 0,25 e 0,5% no meio, respectivamente. A análise de RNAm foi feita para avaliar o transcrito de ICK por q-PCR, após privação proteica. No intuito de avaliar o efeito dessa quinase sobre a proliferação celular e apoptose, foi realizado o silenciamento do gene da ICK com uso de RNA de interferência em células HCT-8. A viabilidade celular foi avaliada com base na exclusão do azul de tripan. Posteriormente, foram realizados testes de western blot para caspase 3 e 9, PARP-clivada, além de anexina V por citometria de fluxo para avaliar apoptose, assim como western blot para via Wnt/β-catenina e ciclina D1 no intuito de medir os mecanismos relacionados à proliferação celular. Dessa forma, foi identificado um aumento significativo e transitório nos níveis intestinais de ICK na desnutrição induzida pela ração hipoproteica, concomitante com a ativação de vias moleculares relacionadas à proliferação e sobrevivência, bem como o aumento da expressão de marcadores para células-tronco intestinais. Esse trabalho também documentou que a privação proteica, induzida por baixa concentração de soro, aumenta a expressão de ICK em células HCT-8, efeito que foi revertido pela adição de BSA no meio. O mesmo resultado, não foi observado com outros compostos como glutamina, alanil-glutamina e zinco. Apesar do aumento da expressão da ICK após privação proteica, não houve diferença significativa da sua transcrição quando comparado com os controles. O silenciamento do gene de ICK reduziu significativamente a sinalização da via Wnt-β-catenina e ciclina D1 em células HCT-8 com aumento da apoptose por um mecanismo dependente de caspases. Os resultados sugerem que o aumento da expressão de ICK em resposta à privação proteica é um mecanismo de proteção que limita a apoptose e suporta a proliferação celular epitelial na desnutrição.

Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-14T19:18:58Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_RepostaPressoraMicroinjeção.PDF: 526139 bytes, checksum: 62c17bd984f8a1aaa4f908cf6b372846 (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-18T18:29:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_RepostaPressoraMicroinjeção.PDF: 526139 bytes, checksum: 62c17bd984f8a1aaa4f908cf6b372846 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-18T18:29:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_RepostaPressoraMicroinjeção.PDF: 526139 bytes, checksum: 62c17bd984f8a1aaa4f908cf6b372846 (MD5) Previous issue date: 2008 / A desnutrição energético-protéica caracteriza-se pela existência de um desequilíbrio celular entre o fornecimento de nutrientes e a demanda corporal para assegurar o crescimento e funções orgânicas específicas. Dados anteriores do nosso laboratório sugerem um comprometimento dos reflexos neurais de controle da pressão arterial de ratos acordados submetidos à desnutrição protéica. Considerando que o Bulbo Rostroventrolateral (RVLM) desempenha um importante papel na regulação cardiovascular por conter neurônios retículo-espinhais pré-motores simpáticos e que o L-glutamato parece ser o principal neurotransmissor excitatório dessa área decidimos então, estudar o perfil da resposta pressora secundária à microinjeção de L-glutamato no RVLM de ratos não-anestesiados submetidos à desnutrição protéica. Foram utilizados 34 ratos Fisher divididos em dois grupos de acordo com a dieta recebida: 15% de proteína durante 35 dias para o grupo controle (n = 15) ou 6% de proteína para o grupo desnutrido (n = 19). Foram implantadas cânulas-guia em direção ao RVLM desses animais quatro dias antes dos experimentos. No dia anterior aos experimentos foi inserido um cateter na artéria femoral para registro dos parâmetros cardiovasculares. Os resultados encontrados mostraram que os animais desnutridos apresentaram níveis de frequência cardíaca basal significativamente maiores quando comparados aos animais controle (412,18 ± 16,03 bpm vs. 370,74 ± 9,59 bpm, respectivamente). Além disso, os animais desnutridos apresentaram alterações na curva de resposta pressora associada à microinjeções de diferentes doses de L-glutamato no RVLM (1 fM: 8,35 ± 0,95 (n = 2) vs. 6,3 ± 1,4 mmHg (n = 2); 10 fM: 16,025 ± 2,19 (n = 4) vs. 6,13 ± 3,03 mmHg (n = 3); 100 fM : 20,66 ± 4,12 (n = 3) vs. 7,57 ± 1,64 mmHg (n = 4); 1 pM: 14,23 ± 3,07 (n = 3) vs. 16,23 ± 4,43 mmHg (n = 3); 10 pM: 12,32 ± 4,9 (n = 4) vs. 8,45 ± 2,05 (n = 4) mmHg; 100 pM: 21,02 ± 5,39 (n = 5) vs. 8,7 ± 2,23 mmHg (n = 3); 1 nmol: 18,6 ± 0,72 mmHg (n = 5) vs 30,6 ± 1,25 mmHg (n = 3); 10 nM: 23,92 ± 3,11 (n = 4) vs. 32,24 ± 5,35 mmHg (n = 5); 100 nM: 24,8 ± 4,68 (n = 4) vs. 36,43 ± 7,15 mmHg (n = 3), respectivamente). Essas diferenças não podem ser explicadas por alterações na linha de base da pressão arterial média ou no pico de respostas pressoras obtidas após a microinjeção de L-glutamato no RVLM. A avaliação do índice bradicárdico revelou que, após microinjeções de baixas concentrações de L-glutamato (1x10-15M a 1x10-13M) no RVLM, os animais desnutridos apresentaram redução da função baroceptora, ao passo que, após microinjeções de doses maiores de L-glutamato (1x10-12 M a 1x10-9 M), o índice bradicárdico dos animais desnutridos não se mostrou alterado. Portanto, os resultados do presente estudo mostram que o protocolo de desnutrição protéica pós-desmame foi capaz de promover disfunções na neurotransmissão glutamatérgica do barorreflexo no RVLM. ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Malnourishment is characterized by an imbalance between nutrient intake and body needs to ensure growing, maintenance and specific organic functions. Previous studies from our laboratory showed that protein malnutrition in rats promoted an increase in basal mean arterial pressure and heart rate, as well changes in cardiovascular reflexes. Considering that Rostral Ventrolateral Medulla (RVLM) appear to be involved in cardiovascular regulation, since it contains sympathetic pre-motor neurons, and that L-glutamate seems to be the main neurotransmitter in this nucleus, we aimed to evaluate the pressure response to L-glutamate microinjection into the RVLM of awake rats submitted to protein restriction. Male Fischer rats used in the present study were divided into 2 groups according to the diet offered: control group (n = 15) that received 15% of protein and the low protein group (n = 19) that in turn received 6% of protein in diet for 35 days after weaning. Four days before experimental procedures, guide cannulas were implemented in direction to the RVLM for microinjections. Twenty-four hours before the experiments the femoral artery were cannulated for cardiovascular recordings. The results indicate that the baseline heart rate (HR) was increased in malnourished animals when compared to control animals (412.18 ± 16.03 bpm vs. 370.74 ± 9.59 bpm, respectively). Moreover, we observed that malnourished animals presented different concentration-related pressor response curve, subsequent to L-glutamate microinjections into the RVLM of awake malnourished animals in comparison to control rats: (1 fM: 8.35 ± 0.95 (n = 2) vs. 6.3 ± 1.4 mmHg (n = 2); 10 fM: 16.025 ± 2.19 (n = 4) vs. 6.13 ± 3.03 mmHg (n = 3); 100 fM : 20.66 ± 4.12 (n = 3) vs. 7.57 ± 1.64 mmHg (n = 4); 1 pM: 14.23 ± 3.07 (n = 3) vs. 16.23 ± 4.43 mmHg (n = 3); 10 pM: 12.32 ± 4.9 (n = 4) vs. 8.45 ± 2.05 (n = 4) mmHg; 100 pM: 21.02 ± 5.39 (n = 5) vs. 8.7 ± 2.23 mmHg (n = 3); 1 nmol: 18.6 ± 0.72 mmHg (n = 5) vs 30.6 ± 1.25 mmHg (n = 3); 10 nM: 23.92 ± 3.11 (n = 4) vs. 32.24 ± 5.35 mmHg (n = 5); 100 nM: 24.8 ± 4.68 (n = 4) vs. 36.43 ± 7.15 mmHg (n = 3), respectively). These differences cannot be explained by alterations in the baseline mean arterial pressure or by the peak of pressure response induced by microinjection of L-glutamate in the RVLM. The evaluation of the bradycardic index demonstrated that malnourished animals exhibit reduced baroreflex gain at lower concentrations of L-glutamate (10 fM and 100 fM) while microinjections of higher concentrations of L-glutamate did not change the bradycardic index in malnourished rats (10 pM, 100 pM, 1 nM, 10 nM, 100 nM). Therefore, the results presented in this study indicate that the after weaning protein restriction protocol was able to promote cardiovascular autonomic dysfunction in rats by affecting glutamatergic neurotransmission of the baroreflex at the RVLM level.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-10-14T21:05:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseProteômicaComparativa.pdf: 1930862 bytes, checksum: 8b9ca5313718b5e5a2d966f239ed40c1 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-10-29T18:49:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseProteômicaComparativa.pdf: 1930862 bytes, checksum: 8b9ca5313718b5e5a2d966f239ed40c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-29T18:49:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseProteômicaComparativa.pdf: 1930862 bytes, checksum: 8b9ca5313718b5e5a2d966f239ed40c1 (MD5) Previous issue date: 2014 / A leishmaniose é uma doença endêmica em vários países, com incidência anual de 2 milhões de casos. A forma visceral da doença é a mais severa e a falta de tratamento pode levar o indivíduo à morte. Está bem estabelecido que a desnutrição (DPC) constitui fator de risco para a progressão clínica da leishmaniose visceral (LV), porém, pouco se conhece sobre os mecanismos bioquímicos envolvidos tanto na biologia do parasito quanto na resposta do hospedeiro na ocorrência simultânea de DPC e LV. Assim, o presente trabalho teve como foco a análise do perfil proteômico de Leishmania (Leishmania) infantum após a passagem pelo modelo murino de desnutrição proteica. Camundongos do grupo teste receberam dieta contendo 3% de proteína, enquanto os do grupo controle receberam dieta normal, contendo 14%. Após 8 semanas do início da dieta, confirmou-se a desnutrição dos animais do grupo teste a partir dos parâmetros peso corporal e dosagem sérica de proteína total e albumina. Os camundongos de cada grupo foram infectados com promastigotas de L. infantum, na mesma dose, e, posteriormente, os parasitos foram recuperados do fígado e baço na 2a semana (fase aguda) e na 15a semana (fase crônica) pós-infecção. Após a 15ª semana de infecção crônica, parasitos recuperados de animais de ambos os grupos exibiram curva de crescimento diferencial in vitro, sugerindo maior atividade proliferativa de promastigotas isolados de camundongos desnutridos. O estado nutricional também influenciou significativamente no aumento da carga parasitária total do fígado em animais desnutridos. A técnica 2D-PAGE comparativa, para os extratos de L. infantum recuperados dos dois grupos, revelou perfis eletroforéticos similares com poucos spots únicos de cada extrato. No entanto, promastigotas recuperados de animais em fase crônica da LV e submetidos à desnutrição apresentaram aumento de expressão para proteínas envolvidas com biossíntese proteica. A resposta imune humoral dos animais, frente a antígenos solúveis do parasito, também foi avaliada pela técnica de Western blotting. Essa abordagem imunoproteômica revelou padrões de reatividade distintos para os soros de animais de ambos os grupos. De particular importância, o soro de camundongos desnutridos quando empregado na mesma diluição do soro de camundongos normonutridos, não reconhece proteínas da família das HSP’s e chaperoninas, as quais têm sido descritas como altamente imunogênicas em diversos estudos. Coletivamente, os resultados obtidos demonstraram que a DPC altera o perfil proteômico de L. infantum, compromete o estabelecimento de uma resposta humoral eficaz contra proteínas do parasito e está associada ao aumento de carga parasitária no hospedeiro vertebrado. ____________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Leishmaniasis is an endemic disease in many countries with approximately 2 million cases reported annually. The visceral form of the disease is the most severe, and the lack of treatment can lead to death. It has been established that undernutrition constitutes a risk factor for the progression of visceral leishmaniasis (VL). However, little is known about the biochemical mechanisms involved in parasite´s biology as well as in the host response when undernutrition and VL occur simultaneously. In this context, the present investigation intended to evaluate the proteomic profile of Leishmania (Leishmania) infantum promastigotes after passage in mice previously maintained under protein restriction. Mice belonging to the test group received a diet containing 3% protein whilst those from the control were fed a 14% protein diet. After 8 weeks, protein undernutrition was confirmed for test-group animals by monitoring body weight and serum levels of total protein and albumin. Mice from both groups were then inoculated with L. infantum promastigotes, at the same dose, and parasites recovered from liver and spleen on the 2nd (acute phase) and 15th (chronic phase) weeks post-infection. Promastigotes from mice under chronic phase VL exhibited a differential growth curve in vitro, suggesting an increased proliferative activity for parasites isolated from animals of the test group. The nutritional status also significantly increased parasite burden in the liver of test-group animals. A comparative 2D-PAGE technique, using protein extracts of L. infantum promastigotes isolated from both groups, revealed similar electrophoretic profiles with few unique spots assigned to each extract. Nevertheless, promastigotes recovered from animals under chronic phase VL and submitted to protein restriction displayed increased expression of molecules involved with protein biosynthesis. The reactivity of whole serum IgG against parasite soluble antigens was also evaluated using the Western blotting technique. This immunoproteomic approach revealed distinct reactivity patterns associated with the sera of animals belonging to the two groups. Of particular importance, sera from test-group animals, when used in the same dilution as sera from control-group animals, did not recognize HSP´s and chaperones which have been described as highly immunogenic in various studies. Collectively, our results demonstrated that protein undernutrition alters the proteomic profile of L. infantum, compromises the establishment of an efficient humoral response against promastigote antigens and is associated to increased parasite burden in the vertebrate host.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-04-13T20:00:53Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_QuimiorreflexoReceptoresAT1.pdf: 3761842 bytes, checksum: 8edb360fbae9ca200efb17af2f631f18 (MD5) / Rejected by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br), reason: Por favor corrija a data do documento. lembre-se a data é a de defesa e não do ano de submissão. on 2016-04-15T13:20:15Z (GMT) / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-04-15T16:50:18Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_QuimiorreflexoReceptoresAT1.pdf: 3761842 bytes, checksum: 8edb360fbae9ca200efb17af2f631f18 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2016-04-27T19:18:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_QuimiorreflexoReceptoresAT1.pdf: 3761842 bytes, checksum: 8edb360fbae9ca200efb17af2f631f18 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-27T19:18:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_QuimiorreflexoReceptoresAT1.pdf: 3761842 bytes, checksum: 8edb360fbae9ca200efb17af2f631f18 (MD5) Previous issue date: 2015 / Neste trabalho investigamos o quimiorreflexo arterial e o possível envolvimento de receptores AT1 na sua modulação em ratos recuperados da restrição proteica pós desmame submetidos ao treinamento físico crônico. Para tanto, ratos Fischer foram divididos em grupos controles sedentários (C105 S) e treinados (C105 T), e recuperados sedentários (R-RP S) e treinados (R-RP T). Os ratos recuperados foram alimentados com dieta hipoproteica (caseína - 8%) por 35 dias após o desmame e, em seguida, recuperados com dieta normoproteica (20%) por 70 dias. Os grupos controles receberam apenas dieta normoproteica por 105 dias. O programa de treinamento físico de natação foi realizado diariamente (5 dias por semana) durante oito semanas, cumprindo normativas de intensidade e volume progressivos. 48 horas após a cirurgia de canulação, a pressão arterial média (PAM) e a frequência cardíaca (FC) foram registradas em ratos acordados. O quimiorreflexo foi estimulado por injeções intravenosas (i.v.) de KCN (20-160μg/kg) imediatamente antes (basal) e após 75 minutos do bloqueio de receptores AT1 com losartan (20 mg/kg, i.v.). Em ratos sedentários, as respostas pressora e bradiarrítmica evocadas pela dose de 60 μg/kg de KCN foram maiores no grupo R-RP S em relação ao grupo C105 S [25 ± 5 mmHg; -27 ± 9 bpm (C105 S) e 45 ± 4 mmHg e -76 ± 14 bpm (R-RP S)]. A administração de losartan não modificou estas respostas. Em ratos treinados, não foram observadas diferenças na resposta pressora para a mesma dose de KCN entre os grupos R-RP T e C105 T. Contudo, a resposta bradiarrítmica foi maior no grupo C105 T em relação ao grupo R-RP T [-166 ± 44 bpm (C105 T) e -44 ± 36 bpm (R-RP T). O losartan também não alterou a magnitude destas respostas. Em conclusão, a restrição proteica seguida pela recuperação alimentar eleva a sensibilidade do componente cardiovascular do quimiorreflexo arterial por mecanismos que parecem não depender de receptores AT1. O treinamento físico crônico foi capaz de normalizar a sensibilidade do componente pressor do quimiorreflexo arterial em ratos recuperados de restrição proteica pós-desmame sugerindo que o treinamento físico possa estar corrigindo ou compensando alterações do quimiorreflexo arterial geradas pela restrição/recuperação. _____________________________________________________________________________ / ABSTRACT : In the current study, we tested the effects of low protein intake after weaning followed by a recover protocol combined with exercise on cardiovascular responses to chemoreflex activation before and after systemic AT1 receptors blockade. Male Fischer rats were randomly divided into sedentary (C105 S) and trained (C105 T) control groups, and sedentary (R-RP S) and trained (R-RP T) recovered groups. Recovered rats were fed low protein (8% casein) diet for 35 days after weaning and refed normal protein (20%) diet for 70 days. Control rats received normal protein diet for 105 days. The training protocol was performed daily (5 days per week) for 8 weeks. Training volume and intensity were progressively increased along the weeks. 48 hours after cannulation surgery, mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) were acquired by digital recording system in freely moving rats. Chemoreflex was elicited by intravenous (i.v.) KCN (20-160μg/kg) just before and 75 minutes after AT1 receptors blockade with losartan (20 mg/kg, i.v.). In sedentary rats, the pressor and the bradycardic responses elicited by KCN (60 μg/kg) were higher in R-RP S than in C105 S [25 ± 5 mmHg; -27 ± 9 bpm (C105 S) e 45 ± 4 mmHg e -76 ± 14 bpm (R-RP S)]. Losartan did not affect these responses. In trained rats, pressor responses to chemoreflex activation were similar between C105 T and R-RP T. However, the bradycardic response elicited by KCN (60 μg/kg) was higher in C105 T than in R-RP T [-166 ± 44 bpm (C105 T) e -44 ± 36 bpm (R-RP T). Losartan did not affect this response. In conclusion, low protein intake after weaning followed by recover increases the sensitivity of the cardiovascular component of arterial chemoreflex independently of AT1 receptors. Exercise training normalizes the pressor component of arterial chemoreflex in recovered rats.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-19Bitstream added on 2014-06-13T18:20:28Z : No. of bitstreams: 1 ishikawa_llw_me_botfm.pdf: 1871630 bytes, checksum: fb1dab693391631364f9e4a0c12161d6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Not available

Orientador: Alexandrina Sartori / Banca: Gustavo Pompermaier Garlet / Banca: Ramon Kaneno / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Mestre

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2015-05-28T16:38:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Bruno Henrique Andrade Galvão.pdf: 2504824 bytes, checksum: 6daeadcfa43e3c8d892b11b71b3c2ada (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-28T16:38:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Bruno Henrique Andrade Galvão.pdf: 2504824 bytes, checksum: 6daeadcfa43e3c8d892b11b71b3c2ada (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / CNPQ / Introdução: Desnutrição e esquistossomose são problemas de saúde pública que ocorrem simultaneamente em regiões endêmicas do mundo. Nessas zonas o Schistosoma mansoni, observa-se, frequentemente, uma sobreposição de desnutrição e infecção parasitária. As lesões intestinais causadas pela infecção parasitária e o efeito de uma nutrição deficiente na resposta imunológica intestinal, como ocorre na desnutrição, podem predispor ao desenvolvimento do processo de translocação bacteriana. Objetivo: Observar se em camundongos adultos na fase crônica da esquistossomose, submetidos à desnutrição no período do aleitamento, há diferença na ocorrência de translocação bacteriana em relação ao sexo. Métodos: Camundongos fêmeas Swiss webster (n=60) foram divididos, no período de aleitamento, em 2 grupos: Nutrido (N) e Desnutrido (D) – amamentados por mães alimentadas com dieta contendo 17% e 8% de proteína à base de caseína, respectivamente. Aos 35-45 dias de vida, 15 animais de cada grupo foram infectados com, em média, 30 cercárias de S. mansoni, constituindo os grupos: Nutrido Infectado (NI), Nutrido Não Infectado (NNI), Desnutrido Infectado (DI) e Desnutrido Não Infectado (DNI). O peso corporal (PC) dos animais foi mensurado diariamente no período de aleitamento e semanalmente a partir do 22º dia. 45 dias após a exposição cercariana, foi realizada a confirmação da infecção pelo método de Kato-katz. Aos 161 dias de vida, os animais foram eutanasiados para coleta de amostras biológicas para estudo da translocação bacteriana (TB), análises da microbiota e morfometria intestinal. Para estudo da TB, foram coletados sangue periférico e da veia porta, fragmentos de órgãos e linfonodos mesentéricos. Para a microbiota, as fezes foram coletadas da região média do intestino delgado. Segmentos desta região foram seccionados transversalmente e longitudinalmente para análise morfométrica. Resultados: Os animais do grupo D apresentaram um menor ganho de PC em relação ao grupo N a partir do 3º dia, diferença observada durante todo o período experimental. Verificou-se um maior índice de TB nos animais infectados, comparando-os aos não infectados. Entre os infectados, houve uma maior incidência de TB no grupo D comparado ao N, entretanto, a diferença não foi significativa quanto ao sexo. Observou-se um maior número de ovos e vermes recuperados no grupo N, entretanto não houve diferença na maturação de ovos na mucosa intestinal. Quanto a morfometria intestinal, houve diferença entre NI e NNI para altura e área da vilosidade, e apenas na altura para NI e DNI. Observamos uma maior diversidade de colônias nos grupos de animais desnutridos, controle e esquistossomóticos. Conclusões: A desnutrição modifica a resposta imune e pode favorecer translocação bacteriana em camundongos, em ambos os sexos e é mais intensa nos animais infectados por S. mansoni.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-28T19:21:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Regina Souza Aires.pdf: 1332281 bytes, checksum: 1eb09bc7e0e7343bd5fe0ff4b8d2ac2f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T19:21:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Regina Souza Aires.pdf: 1332281 bytes, checksum: 1eb09bc7e0e7343bd5fe0ff4b8d2ac2f (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / CAPES / Neste trabalho, nimesulida, um inibidor preferencial da ciclooxigenase-2 (COX-2), foi utilizado na investigação de um possível elo entre a inflamação induzida por desnutrição, que culmina com o aumento do estresse oxidativo placentário e a regulação do volume extracelular materno. Além disso, devido à importância da COX-2 durante a nefrogênese, o desenvolvimento renal fetal também foi investigado. Ratas Wistar prenhes foram mantidas com dieta ad libitum, o grupo controle (n=12) ou com 50% de restrição dietética, o grupo desnutrido (n=12). Parte de cada grupo (n=6) foi tratada com nimesulida (5mg/kg/dia, via oral) do 7º ao 20º dia de gestação, formando os grupos controle nimesulida e desnutrido nimesulida. A gravidez foi suspensa no 20° dia para avaliação do estresse oxidativo placentário e hepático materno, bem como do estresse oxidativo hepático fetal e desenvolvimento renal fetal, apenas dos fetos machos. Além disso, parâmetros maternos indicadores de volemia foram avaliados. O estresse oxidativo foi avaliado pela mensuração da peroxidação lipídica e dos níveis de glutationa reduzida. O desenvolvimento renal fetal foi avaliado através da medida da área nefrogênica, e pela expressão do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) e expressão tecidual da angiotensina II, por imunohistoquímica. A expressão proteica da COX-2 foi avaliada por imunoblotting. As diferenças estatísticas entre os grupos foram avaliadas utilizando two way ANOVA seguida pelo teste Bonferroni, com diferenças significicantes para p<0,05. Restrição alimentar da ordem de 50% levou a um aumento do balanço hídrico para manter o volume plasmático materno, apesar do déficit de sódio produzido pela dieta. A peroxidação lipídica apresentou-se aumentada no fígado materno, placenta e fígado fetal de ratos desnutridos, embora a expressão proteica de COX-2 na placenta destas mães tenha se apresentado diminuída. Marcadores do desenvolvimento renal indicaram um retardo na nefrogênese em fetos desnutridos. A nimesulida impediu o aumento do balanço hídrico nas mães desnutridas, assim como, previniu o aumento na peroxidação lipídica no fígado materno, na placenta e no fígado fetal. No entanto, a nimesulida produziu um retardo na nefrogênese. Pode-se concluir que o estresse oxidativo placentário, observado em mães desnutridas é mediado pela atividade da COX-2. No entanto, a atividade da COX-2 se faz necessária para manter a homeostase do volume extracelular materno em ratas grávidas desnutridas e também é necessário para manter o desenvolvimento renal fetal. / In this work, nimesulide, a preferential cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor, was used to investigate whether it could be a link between undernutrition-induced inflammation that culminates with increased placental oxidative stress and maternal handling of extracellular volume. Furthermore, because of the importance of COX-2 during nephrogenesis, fetal kidney development was also investigated. Pregnant Wistar rats were maintained with ad libitum diet, the control group or 50% of dietary restriction, the undernourished group. Part of each group was treated with nimesulide (N, 5mg/kg/ day in drinking water), forming the groups control nimesulide and undernourished nimesulide. Pregnancy was suspended on 20th day for assessment of placental, maternal and fetal liver and fetal kidney development from male fetuses. Moreover, indicators of maternal blood volume parameters were evaluated. Oxidative stress was assessed by measuring lipid peroxidation and reduced glutathione (GSH) levels. Fetal kidney development was assessed by measuring nephrogenic zone and the presence of the proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and presence of angiotensin II by immunohistochemistry. Protein expression of cyclooxygenase was assessed by immunoblotting. Statistical differences between groups were evaluated using two-way ANOVA followed by the Bonferroni test for significant differences with P <0.05. Fifty percent dietary restriction led to increased water balance to maintain plasma volume, despite the restricted sodium intake. Lipid peroxidation was increased in maternal liver, placenta and fetal liver of undernourished rats, although COX-2 protein expression was reduced in placenta. Markers of fetal kidney development indicated a delayed nephrogenesis in undernourished fetuses. Nimesulide prevented the increment of water balance in undernourished mothers, prevented the increment in lipid peroxidation in maternal liver, placenta and fetal liver and recovered COX-2 expression in placenta of undernourished mothers. However, nimesulide produced a delay on nephrogenesis. It may be concluded that COX-2 activity mediates the placental oxidative stress in undernourished mothers. However, COX-2 activity is necessary to maintain maternal extracellular volume homeostasis in undernourished pregnant rats and also it is necessary to maintain the fetal kidney development.