Orientador: Everardo Magalhães Carneiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T11:23:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Filiputti_Eliane_D.pdf: 3662221 bytes, checksum: e40ea0446558f8556a8352fd8c98a5fc (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Suspeita-se que a desnutrição intra-uterina e pós-natal produzam mudanças morfológicas e funcionais no pâncreas endócrino e em tecidos periféricos, que se traduzem em insulinopenia e resistência à insulina. Baseado nessas complicações avaliou-se neste trabalho a regulação da secreção de insulina em ilhotas de Langerhans de ratos e camundongos submetidos à restrição protéica e suplementados com leucina. A suplementação com leucina não modificou hábitos alimentares, ingestão hídrica e o peso corpóreo dos animais em estudo, mas alterou parâmetros bioquímicos importantes como glicose (G), ácidos graxos (AGL) em animais desnutridos. A fosforilação do receptor de insulina (IR) e de seu substrato (IRS-l) foi modificada em fígado e músculo levando a uma melhoria na homeostasia glicêmica em ratos desnutridos, a metabolismo de glicose em ilhotas de ratos controle e desnutridos teve redução após suplementação, a potencial de membrana das células B foi restaurado, o movimento de cálcio citoplasmático e a secreção de insulina estimulada por G e leucina apresentaram aumentados em ilhotas de ratos e camundongos desnutridos. Alterações ocorreram também no perfil eletroforético de proteínas citoplasmáticas após suplementação com leucina em ilhotas de ratos. Expressão gênica e protéica de proteínas chaves na cascata de sinalização de insulina como IR, IRS-l, PI3K, mTaR e S6K-l se alteraram em resposta à suplementação com leucina em ilhotas de ratos desnutridos, favorecendo vias de crescimento, em especial o aumento da PI3K a qual resultou em aumento de sua atividade em ilhotas de ratos controle e desnutridos. Por fim, podemos concluir que a suplementação com leucina promoveu modulação da sensibilidade periférica em fígado e músculo de maneira tecido específica. Isto confere uma regulação da homeostase glicêmica de maneira distinta entre animais controle e desnutridos suplementados. Além disso, direcionam para que os sinais metabólicos produzidos pela leucina devam promover seus efeitos, em ilhotas de Langerhans, via dois sensores: a GDH que controla a glutaminólise, e por outro lado está a PI3K que deve exercer seu papel, ativando vis envolvidas com a síntese protéica através da mTOR. Estes dois sensores devem atuar sinergicamente participando do rearranjo da concentração citosólica dos íons cálcio, principalmente em ilhotas de animais desnutridos que foram suplementados com leucina / Abstract: We think that intra-uterine mal nutrition and after birth produce morphological and changes in endocrine pancreas and in peripheric tissue that translate insulinopenia and insulin resistance. Based on these complications we have evaluated in this work the insulin secretion regulation in Langerhans islets from rats and mice fed a low protein diet and supplemented with leucine. The leucine supplementation hasn't changed the diet in the hybrid ingest and body weight but has changed important biochemistry standards as glucose (G) and FFA in malnutrition animals. The insulin receptor phosphorilation and its substract have been changed in liver and musc1e leading to an increase in glicemic homeostase in malnutrition rats. The glucose metabolism in control and malnutrition rats' islets had one reduction after supplementation. B cells potential membranes were restored; the citoplasmatic ca1cium movement and insulin secretion were stimulated by glucose and leucine. They have showed an increased in islets of control and malnourished rats and mice islets. Some alterations have also occurred in the citoplasmatic protein eletrophoretic profile after leucine supplementation in rats islets. The genetic and protein expression from key enzymes in the insulin cascade signalization as: IR; IRS-l; PI3K; mTOR and S6K-l have altered in leucine supplementation answer in malnutrition islets rats favoring growth pathways specially PI3K increase which resulted in an increasement of control and malnutrition rats islets activity. In the end we can conc1ude that the leucine supplementation has promoted peripheric sensibilization in liver and muscle in specific tissue manner. This confirms one glicemic homeostase regulation in distinct manner among control and malnutrition both supplemented animals. Furthermore they lead the metabolic signals produced by leucine should promote their effects in Langerhans islets throw sensor ways: GDH which controls glutaminolisis and on the otherhand is PI3K that should do its role activating growth pathways throw mTOR. These two sensors should work in synergism participating in citosolic concentration changes of ca1cium ions mainly in malnutrition animals' islets, which were supplemented. / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Antônio Fernando Ribeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T20:54:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nogueira_RobertoJoseNegrao_M.pdf: 1953252 bytes, checksum: e871ab6a7b4dfd87e65304e261189087 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A desnutrição é freqüente em pacientes graves e a nutrição entérica é o melhor meio para manter o estado nutricional. Os objetivos desse estudo foram analisar as indicações, prescrições, motivos das interrupções e a evolução da terapia nutricional entérica nos pacientes com menos de 6 meses de idade, internados na UTIPED do HC/UNICAMP. Trata-se de estudo retrospectivo baseado em análise de prontuários, com utilização de ficha padronizada. Avaliou-se o gênero, a data de nascimento e de internação, a presença de óbito, uso de leite materno, o peso nos primeiros 30 dias de internação, as quantidades de energia e proteína prescritas e administradas nos primeiros 7 dias, o uso de sedação contínua e ventilação mecânica, a utilização de nutrição parentérica e a aplicação de nutrição entérica nas primeiras 36 horas de internação. Para a análise estatística, utilizaram-se os testes de Wilcoxon, qui-quadrado, exato de Fisher e Mann-Whitney. Em 9 meses, 110 pacientes foram avaliados, com mediana de tempo de internação de 7 dias. As interrupções da dieta relacionaram-se a problemas do funcionamento do hospital, alterações do trato gastrintestinal e as pausas para a prática de procedimentos. Apenas 4 pacientes (7,84%) não tiveram nenhuma interrupção a partir do início da mesma, mostrando que a nutrição não é administrada de forma ideal. À queles que permaneceram no mínimo 7 dias internados e receberam nutrição entérica exclusiva foram selecionados para análise mais detalhada. Restaram 51 pacientes para aporte energético administrado, onde se observou que, em média, receberam apenas 84,98% do total prescrito (p < 0,0001). Em relação ao aporte protéico, a diferença foi de -4,41g/dia em média (p < 0,0001). Desta forma, os aportes de energia e proteínas foram inadequados, mostrando risco para o paciente e prejuízo financeiro para a instituição hospitalar. Em 93 lactentes em que foi possível concluir sobre desnutrição, 46 estavam desnutridos (49%) e apresentavam maior freqüência de doença de base (p = 0,016), assim como aporte energético recebido significativamente mais adequado que os não desnutridos (p = 0,040). Da mesma maneira que o aporte energético, os desnutridos receberam um aporte protéico significativamente maior (p = 0,015). O tempo de sedação contínua foi mais prolongado entre os desnutridos quando comparados aos não desnutridos (p = 0,009). A média ponderada do Z escore de peso entre os desnutridos foi de ¿ 3,63 e a mediana, de ¿ 1,86; entre os não desnutridos estes valores foram de ¿ 0,83 e ¿ 1,07, respectivamente. A oscilação dos valores obtidos para os desnutridos foi, em média, de ¿ 0,05 e mediana de ¿ 0,03; e para os não desnutridos, de ¿ 0,01 e 0,00, respectivamente. A nutrição entérica precoce foi possível somente em 59 pacientes (53,6%), e, portanto, não foi prática adotada sistematicamente. Houve uma maior quantidade de pacientes sem possibilidade de recebê-la entre os ventilados (p = 0,009). Assim, as práticas vigentes na unidade não se mostraram efetivas para mudar a condição nutricional dos pacientes durante o período de internação. Protocolos com sistematização da utilização da nutrição em pacientes de UTIPED seriam úteis para minimizar as falhas observadas / Abstract: The undernutrition is quite frequently in intensive care patients and the enteral nutrition is the best way to optimize the nutritional status. The aims of this study were to analyze the indications, medical prescriptions, causes of incorrect administration and evolution of the enteral nutrition of the patients 6 months old or younger at the Pediatric Intensive Care Unity, Clinical Hospital (CH/UNICAMP). It was a retrospective study. Data from medical reports were obtained with a registration chart. It was used to obtain data about sex, birthday, admition day, death, previous breast feeding, weight in the first 30 days of hospital stay, amount of energy and protein prescribed and received, time and use of sedation and mechanical ventilation, presence or absence of parenteral nutrition and the possibility of enteral nutrition in the first 36 hours of hospitalar admission. The statistical analysis tests used were Wilcoxon, qui-square, Fisher and Mann-Whitney. In 9 months, 110 patients were evaluated, with median stay in intensive care unit of 7 days. The incorrect administration of the enteral nutrition was related to bad functioning of the hospital, gastrointestinal tract problems and interruptions for procedures. Only 4 patients (7.84%) had nonstop delivery of the enteral nutrition since its start, which shows an imperfect administration of the enteral nutrition. Those patients who were at least 7 days at the hospital and received only enteral nutrition were selected to a minucius analysis. Then it could be observed that in 51 pacients received only 84.98% of the energy prescription (p < 0.0001). In concern to protein the difference was -4.41g/day (p < 0.0001). The energy and protein delivery was insufficient, which shows that the patients were in risk to malnutrition. There were 46 ndernourished patients (total amount of 93. 49%) and this group showed a significant amount of previous diseases (p = 0.016), and an energy delivery significantly higher than the patients non-malnourished patients (p = 0.040). In relation to protein delivery, the malnourished patients also received a significantly larger amount (p = 0.015). The continuous sedation time was longer among malnourished patients (p = 0.009). The average Z score among malnourished children was ¿ 3.63 and the median ¿ 1.86, among non-malnourished children these values were ¿ 0.83 e ¿ 1.07, respectively. The range oscilation of weight in malnourished children was ¿ 0.05 and median of ¿ 0.03 and for the non-malnourished children ¿ 0.01 and 0.00, respectively. Early enteral nutrition was possible in only 59 patients (53.6%), and was not made systematically. There was a greater amount of patients that could not receive early enteral nutrition among those in mechanical ventilation (p = 0.009). This study allowed to conclude that the nutritional delivery at this moment at Pediatric Intensive Care Unit of CH/UNICAMP was not enough to improve the nutritional status of the patients during the stay in this unit. Guidelines would be useful to improve the nutritional delivery in this service / Mestrado / Pediatria / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Orientadores: Claudio Saddy Rodrigues Coy, Maria de Lourdes Setsuko Ayrizono / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T21:08:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Giordano_LucianeCristinaRosimSundfeld_M.pdf: 1272088 bytes, checksum: a62f7566f62b1cbbda19579638b0a5d8 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Pacientes com Doença de Crohn (DC) cursam frequentemente com diarréia e desnutrição, sendo estas de difícil manejo e influenciadas pela atividade da doença, extensão e local do acometimento intestinal. O emprego dos probióticos na doença inflamatória intestinal pode ser útil em função de seus efeitos sobre a microbiota intestinal, com potenciais ações anti-inflamatórias e imunológicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do uso dos probióticos Lactobacillus casei e Bifidobacterium breve (PROLB) em portadores de DC por meio da análise da freqüência de evacuações, grau de atividade da doença e variação de parâmetros nutricionais. No período compreendido entre março de 2007 a outubro de 2008, foram estudados 15 doentes portadores de DC, com freqüência de evacuações líquidas maior ou igual a três vezes ao dia. A idade média foi de 43,83 (21-56) anos, com predomínio do sexo feminino (66,67%). Os participantes fizeram uso diário de PROLB oral por três meses, utilizando o produto Regulador Intestinal Yakult LB® (Yakult Honsha Co., Ltd, Tokyo - Japan), que contém em cada envelope de um grama, duas cepas probióticas: Lactobaccillus casei (2 x 107 a 109 UFC) e Bifidobacterium breve (5 x 107 a 109 UFC). Para a avaliação do grau de atividade da doença, foi empregado o índice clínico de Harvey-Bradshaw (H-B) e dosagens de VHS e PCR e a freqüência de evacuações foi obtida a partir de diário preenchido pelos pacientes e por ocasião da primeira e última consulta. A avaliação do estado nutricional (EN) foi realizada pela dosagem sérica de albumina (ALB) e pelas seguintes medidas antropométricas: peso, índice de massa corpórea (IMC), prega cutânea do tríceps (PCT) e circunferência do braço (CB) e medidas derivadas. Para a classificação do EN, foram utilizados os critérios de Frisancho (1981,1990). O emprego do PROLB evidenciou que houve redução do grau de atividade da doença pelo índice de H-B (p<0,05) e do número de evacuações líquidas pela avaliação ambulatorial (p=0,013). Os dados antropométricos evidenciaram aumento do peso atual (p=0,043), da % de alteração do peso habitual (p=0,03), do IMC (p=0,043), da CB (p=0,016). Com relação à classificação do EN, identificou-se diferença da % de adequação da PCT (p=0,043), sem diferenças nos demais parâmetros (% de adequação da CMB e AMBc (p>0,05). As dosagens de ALB sérica, VHS e PCR não apresentaram alterações. O emprego do PROLB possibilitou melhora de parâmetros clínicos relacionados à atividade da doença, do número de evacuações líquidas e dos parâmetros antropométricos relacionados ao peso atual, IMC, CB e da classificação do EN pela PCT. / Abstract: Patients with Crohn's disease (CD) frequently present diarrhea and malnutrition, which is hard to treat and influenced by the disease activity, location and extension of intestinal involvement. The application of probiotics on intestinal inflammatory diseases can be useful because of its effects on intestinal microbiota, with potential anti-inflammatory and immunologic actions. The goal of this study is to assess the effectiveness of the usage of probiotics Lactobacillus casei and Bifidobacterium breve (PROLB) in CD carriers with relation to the evacuation frequency, degree of disease activity, and nutrition parameters variation. Between March 2007 and October 2008, fifteen patients caring CD disease were assessed with liquid evacuation frequency greater than or equal to three times a day. The average age was 43.83 (21-56 years), predominantly females (66,67%). All the participant patients used the PROLB orally for three months, daily ingesting the product Yakult LB Intestinal Regulator (Yakult Honsha Co., Ltd, Tokyo - Japan), which contains in each envelop a gram, two probiotic strains: Lactobaccillus casei (2 x 107 a 109 UFC) and Bifidobacterium breve (5 x 107 a 109 UFC). In order to asses the degree of the disease the clinic index Harvey-Bradshaw (H-B) and erythrocyte sedimentation rate (ESR) and C reative protein (CRP) sampling. The evacuation frequencies were obtained by forms fulfilled by the patients and also during the first and last appointment. The assessment of the nutritional state was performed by albumin seric sampling and through the following anthropometric measures: weight, body mass index (BMI), triceps skinfold thickness (TST), arm circumference (AC), and derived measurements. The Frisancho (1981, 1990) criteria were used to classify the nutritional status. The application of PROLB evidenced (i) the reduction of the disease activity degree by the H-B index and the number of liquid evacuations by the ambulatorial evaluation (p=0.013). The anthropometric data evidenced the increase of the current weight (p=0.043), of the change of the % of the habitual weight (p=0.03), of the BMI (p=0.043), of the AC (p=0.016). With relationship to the nutritional status (NS) classification, it has been identified differences on the suitability percentage of TST, without differences affecting to the additional parameters. The sampling of seric ALB, ESR and CRP did not present any changes. The application of PROLB allowed the improvement of clinic parameters related to the disease activity, to the number of liquid evacuations and to the anthropometric parameters related to the current weight, to the BMI, to the AC, and to the classification of NS by TST. / Mestrado / Pesquisa Experimental / Mestre em Cirurgia

As diferentes formas da desnutrição acometem milhões de pessoas em todo mundo, afetando geralmente crianças, recém-nascidos abaixo do peso para sua idade gestacional, idosos e pacientes sob nutrição parenteral. A desnutrição protéica (DP) induz atrofia em órgãos hemopoéticos, induzindo pancitopenia de sangue periférico, modifica a resposta imune específica e inespecífica, e desta forma, a associação entre doença e DP é freqüente. Alguns estudos indicam que a desnutrição produz vários efeitos celulares como redução da capacidade de proliferação, em vários órgãos. Como conseqüência da constante e elevada demanda de proteína pelo tecido hemopoético, este pode apresentar alterações qualitativas e quantitativas em condições de desnutrição protéica. Neste trabalho avaliamos os efeitos da DP sobre o ciclo celular de células de medula óssea (MO) de camundongos. Camundongos Swiss machos, adultos, foram alimentados ou com ração contendo 2% de proteína (grupo desnutrido, D) ou com ração com 20% de proteína (grupo controle, C). A fonte protéica utilizada foi caseína. Após perda de 25% de peso corpóreo do grupo D, colheu-se sangue e células da MO e do baço. As células do sangue foram quantificadas bem como as do baço e da MO. As células da medula óssea foram posteriormente coradas com laranja de acridina (AO) e Iodeto de propídeo (PI), avaliando-se, por citometria de fluxo, respectivamente DNA/RNA e DNA. Estes mesmos procedimentos foram executados após 10 e 15 dias da administração, em ambos os grupos, do quimioterápico 5-Fluoracil (que leva as células a estado de repouso -G0). Os animais do grupo desnutrido, assim como aqueles após 10 e 15 dias da administração do 5-Fluoracil, apresentaram anemia, além de redução significativa de número de hemácias, hematócrito e reticulócitos, e alterações quantitativas nas linhagens medulares e do baço. Os dados da citometria de fluxo (expressos em % de células da população analisada) mostram que em DP, uma maior quantidade de células da MO encontra-se fora do ciclo celular (G0), e uma menor população de células nas fases proliferativas do ciclo celular, S/G2/M, em populações de todas linhagens medulares, exceto eritróide e linfóide B, e todo os estágios maturativos, assim como células Sca-1, células tronco murina. Esta maior população celular em G0 também é observada após o efeito do 5-Fluoracil, o que corrobora a suposição de incapacidade de retorno ao ciclo celular por parte das células de medula dos animais desnutridos. Estes resultados podem explicar, em parte, a hipoplasia medular e pancitopenia sanguínea. / The different forms of the malnutrition attacks millions of people in everybody generally, affecting children, just-born below of the weight for its gestacional age, aged and patient under parenteral nutrition. The protein malnutrition induces atrophy in haematopoietic organs, inducing pancitopenia of peripheral blood, modifies the specific and inespecífica immune reply, and of this form, the association between illness and DPE are frequent. Some studies indicate that the malnutrition produces some effect cellular as reduction of the proliferation capacity, in some organs. As consequence of the constant and raised protein demand for the bone marrow, that can present qualitative and quantitative alterations in conditions of protein malnutrition. In this work we evaluate the effect of the DP on the cellular cycle of cells of bone marrow of mice. Mice Swiss males, adults, had been fed or with ration I contend 2% of protein (unfed group, D) or with ration with 20% of protein (group has controlled, C). The used protein source was casein. After loss of 25% of corporeal weight of group D, harvested blood and cells of bone marrow and spleen. The cells of the blood had been quantified as well as the ones of spleen and bone marrow. The cells of the bone marrow later had been coradas with orange of acridine (AO) and propidium iodide of (PI), evaluating, for citometria of flow, respectively DNA/RNA and DNA. These same procedures had been executed after 10 and 15 days of the administration, in both the groups, of the 5-Fluoracil (that it takes the cells the state of rest - G0). The animals of the malnutrition group, as well as those after 10 and 15 days of the administration of the 5-Fluoracil, had presented anemia, beyond significant reduction of number of erythrocytis, hematocrit and reticulocytes, and quantitative alterations in the progenitors by bone marrow and of spleen. The data of the flow cytometric (express in % of cells of the analyzed population) show that in DP, a bigger amount of cells of outside meets bone marrow of the cellular cycle (G0), and a lesser population of cells in the proliferative phases of the cellular cycle, S/G2/M, in populations of all progenitors by bone marrow, except erythroids and lymphoids B, and all the maturative periods of training, as well as cells Sca-1, stem cells murina. This bigger cellular population in G0 also is observed after the effect of the 5-Fluoracil, what it corroborates the assumption of incapacity of return to the cellular cycle on the part of the cells of marrow of the malnutrition animals. These results can explain, in part, the hipoplasia to medular and sanguineous pancitopenia.

O nicho endosteal da medula óssea abriga as células-tronco hemopoéticas (CTH) em quiescência/autorrenovação. As CTH podem ser classificadas em dois grupos: células que reconstituem a hemopoese em longo prazo (LT-CTH) e curto prazo (CT-CTH). Investigamos, neste trabalho, os efeitos da desnutrição proteica (DP) no tecido ósseo e a participação do nicho endosteal na sinalização osteoblasto-CTH. Para tanto, utilizamos camundongos submetidos à DP induzida pelo consumo de ração hipoproteica. Os animais desnutridos apresentaram pancitopenia e diminuição nas concentrações de proteínas séricas e albumina. Quantificamos as CTH por citometria de fluxo e verificamos que os desnutridos apresentaram menor porcentagem de LT-CTH, CT-CTH e de progenitores multipotentes (PMP). Avaliamos a expressão das proteínas CD44, CXCR4, Tie-2 e Notch-1 nas LT-CTH. Observamos diminuição da expressão da proteína CD44 nos desnutridos. Isolamos as células LT-CTH por cell sorting e avaliamos a expressão gênica de CD44, CXCR4 e NOTCH-1. Verificamos que os desnutridos apresentaram menor expressão de CD44. Em relação ao ciclo celular, verificamos maior quantidade de LT-CTH nas fases G0/G1. Caracterizamos as alterações do tecido ósseo femoral, in vivo. Observamos diminuição da densidade mineral óssea e da densidade medular nos desnutridos. A desnutrição acarretou diminuição da área média das seções transversais, do perímetro do periósteo e do endósteo na cortical do fêmur dos animais. E na região trabecular, verificou-se diminuição da razão entre volume ósseo e volume da amostra e do número de trabéculas, aumento da distância entre as trabéculas e prevalência de trabéculas ósseas em formato cilíndrico. Avaliamos a expressão de colágeno, osteonectina (ON) e osteocalcina (OC) por imuno-histoquímica, e de osteopontina (OPN) por imunofluorescência no fêmur e verificamos diminuição da marcação para OPN, colágeno tipo I, OC e ON nos desnutridos. Evidenciamos, pela técnica do Picrosírius, desorganização na distribuição das fibras colágenas e presença de fibras tipo III nos fêmures dos desnutridos, além de maior número de osteoclastos evidenciados pela reação da fosfatase ácida tartarato resistente. Os osteoblastos da região femoral foram isolados por depleção imunomagnética, imunofenotipados por citometria de fluxo e cultivados em meio de indução osteogênica. Observamos menor positividade para fosfatase alcalina e vermelho de alizarina nas culturas dos osteoblastos dos desnutridos. Avaliamos, por Western Blotting, a expressão de colágeno tipo I, OPN, osterix, Runx2, RANKL e osteoprotegerina (OPG), e, por PCR em tempo real, a expressão de COL1A2, SP7, CXCL12, ANGPT1, SPP1, JAG2 e CDH2 nos osteoblastos isolados. Verificamos que a desnutrição acarretou diminuição da expressão proteica de osterix e OPG e menor expressão gênica de ANGPT1. Avaliamos a proliferação das células LSK (Lin-Sca1+c-Kit+) utilizando ensaio de CFSE (carboxifluoresceína succinimidil ester). Foi realizada cocultura de células LSK e osteoblastos (MC3T3-E1) na presença e ausência de anti-CD44. Após uma semana, verificamos menor proliferação das LSK dos desnutridos. O bloqueio de CD44 das LSK do grupo controle diminuiu a proliferação destas em três gerações. Entretanto, nos desnutridos, esse bloqueio não afetou a proliferação. Concluímos que a DP promoveu alterações no tecido ósseo e nas CTH. Entretanto, não podemos afirmar que as alterações observadas no sistema hemopoético foram decorrentes de alterações exclusivas do nicho endosteal. / The bone marrow endosteal niche hosts hematopoietic stem cells (HSC) in quiescence/self-renewal. HSC can be classified into two groups: cells capable of renewing indefinitely (LT-HSC) or repopulating in the short term (ST-HSC). In this work, we investigated the effects of protein malnutrition (PM) on bone tissue and the involvement of the endosteal niche in osteoblast-CTH signaling. Therefore, we used mice subjected to PM induced by the consumption of hypoproteic feed. Malnourished animals presented pancytopenia and decreased concentration of serum protein and albumin. We quantified the HSC by flow cytometry and found that the malnourished ones had lower percentage of LT-HSC, ST-HSC and multipotent progenitors (MPP). We assessed the expression of the CD44, CXCR4, Tie-2 and Notch-1 proteins in LT-HSC. We observed decreased expression of CD44 protein with the malnourished ones. We isolated the LT-HSC cells by means of cell sorting and assessed the gene expression of CD44, CXCR4 and NOTCH-1. We found that malnutrition had lower expression of CD44. Regarding the cell cycle, we see greater amount of LT-HSC in the G0 and G1 phases. We characterized the changes of the femoral bone tissue in vivo. We observed a decrease in the bone mineral density and medullar density in malnourished animals. As for malnourished animals, the femoral cortical region showed a significant decrease in tissue area, periosteal and endosteal perimeter. The femoral trabecular region of malnourished animals showed decreased bone volume/tissue volume ratio, decreased trabecular number, increased trabecular separation and prevalence of rod-like trabeculae. We investigated the expression of collagen, osteonectin (ON) and osteocalcin (OC) by means of immunohistochemistry and the expression of osteopontin (OPN) by immunofluorescence and we found that malnourished animals showed decreased labeling for OPN, type I collagen, OC and ON in the cortical region of the femur. Picrosirius staining was used to analyze disorganization of collagen fibers and presence of type III fibers in the femurs of the malnourished. Cortical and trabecular regions of malnourished animals presented a higher number of osteoclasts as shown by tartrate-resistant acid phosphatase reaction. Moreover, osteoblasts were isolated from the femoral region by immunomagnetic depletion and immunophenotyped by flow cytometry and cultured in osteogenic induction medium. Results proved less positive for alkaline phosphatase and alizarin red in the cultures of osteoblasts of malnourished animals. We assessed, by means of Western blotting, type I collagen expression, OPN, osterix, Runx2, RANKL and osteoprotegerin (OPG) and, by real time PCR, the expression of COL1A2, SP7, CXCL12, ANGPT1, SPP1, JAG2 and CDH2 with the isolated osteoblasts. We found that malnutrition led to osterix and OPG decreased protein expression and lower ANGPT1 gene expression. We evaluated LSK cell (Lin-Sca1+c-Kit+) proliferation by CFSE (carboxyfluorescein succinimidyl ester). LSK cells and osteoblasts (MC3T3-E1) cocultures were performed in the presence and absence of anti-CD44. After a week, we found lower proliferation of LSK in the malnourished. The LSK CD44 blocking in the control group decreased the proliferation of these three generations. However, as for the malnourished, such blockage did not affect proliferation. We concluded that the PM has promoted changes in bone tissue and the CTH. However, we can\'t claim that the alterations observed in hematopoietic system were due to endosteal niche-only changes.

A desnutrição pode induzir lesão celular, comprometendo os mecanismos envolvidos de proliferação, diferenciação e morte celular. Estudos de nosso laboratório tem demonstrado, em modelo murino de desnutrição protéica e protéico-energética, hipoplasia medular com evidências histológicas de alteração da matriz extra celular. Nosso objetivo foi avaliar a eventual participação dos processos de apoptose, necrose e autofagia no desenvolvimento da hipoplasia medular observada nesse modelo. Para isso foram utilizados dois grupos de camundongos C57BL/6J machos, adultos, mantidos em gaioleiros metabólicos. O grupo controle (C) recebeu ração normoproteíca contendo 12% de proteína e o grupo desnutrido (D), alimentado com ração hipoprotéica contendo 2% de proteína. A fonte protéica utilizada foi a caseína. O período de indução da desnutrição foi cerca de cinco semanas, definido pela perda de 20 a 25 % de peso corpóreo por parte dos animais do grupo desnutrido. Após esse período, os animais de ambos os grupos foram anestesiados e realizada a coleta das amostras biológicas para avaliação nutricional e hematológica e coletadas células da medula óssea para avaliação da apoptose, necrose e autofagia. Para avaliação da apoptose e necrose as células foram duplamente marcadas com Annexina V, PI e caspase 3 que foram analisadas por citometria de fluxo . A expressão da protéina BCL-2 foi quantificada pela técnica de Western Blotting. A análise não demonstrou diferença estatística entre os grupos para esses parâmetros. Para avaliação da autofagia extraiu-se proteínas das células da medula óssea e avaliou-se a expressão das proteínas Akt e mTOR total e fosforilado , os complexos de mTor (Raptor, Rictor e G&#946;l) , Beclin-1 e LC3II. Os resultados demonstraram aumento significativo de mTOR total ,Raptor , Beclin-1 e LC3II e diminuição na fosforilação de mTOR nas células oriundas de animais desnutridos em relação ao grupo controle. A desnutrição não modificou a expressão de Akt total, porém houve diminuição da fosforilação de Akt e diminuição na expressão das proteínas Rictor e G&#946;l nas células analisadas. Como os processos apoptóticos e autofágicos podem ser de difícil detecção in vivo, também refizemos os experimentos in vitro, estimulando as células com compostos pró-apoptóticos (campotecina) e pró-autofágicos (tamoxifeno). Nesses experimentos observamos que, apenas quando estimulamos as células de animais desnutridos com camptotecina, as mesmas, no período de 12 horas apresentaram maior percentagem de apoptose inicial em relação a 0 horas , sugerindo que há um período em que as células desnutridas são sinalizadas para via apoptótica sendo mais susceptível ao estimulo. As células de animal desnutrido estimulado apresentaram após 12 horas aumento significativo da apoptose tardia em relação ao controle estimulado , indicando que nesse período há um aumento da apoptose tanto em processo inicial , tanto em processo tardio. Avaliamos a autofagia em uma cinética de 0, 2, 6, 18 e 24 horas in vitro e observamos aumento significativo da autofagia em células da medula óssea de animais desnutridos em 0 horas e após 18 horas de estímulo com tamoxifeno (20 &#181;M) em relação ao respectivo controle, demonstrando que nesse período a autofagia começa a ser induzida através do estimulo mais facilmente do que o controle. Autofagia é um dos principais contribuintes para o metabolismo celular, fornecendo nutrientes quando os mesmos estão indisponíveis, e, portanto, no nosso modelo de desnutrição protéica a hipoplasia medular estaria em processo autofágico como mecanismo de reparo e sobrevivência. / Malnutrition can induce cell damage, compromising the mechanisms involved in proliferation, differentiation and cell death. Studies from our laboratory have demonstrated, in a murine model of protein malnutrition and protein-energy, marrow hypoplasia with histologic evidence of alteration of the extracellular matrix. Our objective was to evaluate the possible involvement of the processes of apoptosis, necrosis and autophagy in the development of bone marrow hypoplasia observed in this model. For this we used two groups of C57BL/6J adult male kept in metabolic gaioleiro. The control group (C) received normal protein diet containing 12% protein and undernourished group (D), fed low protein diet containing 2% protein. The protein source used was casein. The induction period of undernutrition was approximately five weeks, as defined by loss of 20 to 25% of body weight per part of group malnourished. After this period, the animals of both groups were anesthetized and held the collection of biological samples for nutritional assessment and hematology and bone marrow cells collected for evaluation of apoptosis, necrosis and autophagy. For assessment of apoptosis and necrosis of the cells were double labeled with Annexina V and PI caspase 3 were analyzed by flow cytometry. The expression of Bcl-2 was quantified by Western Blotting technique. The analysis revealed no statistical difference between the groups for these parameters. For evaluation of autophagy proteins extracted from bone marrow cells and evaluated the expression of proteins Akt and phosphorylated and total mTOR, complexes of mTOR (Raptor, and Rictor G&#946;l), Beclin-1 and LC3II. The results showed significant increase in overall mTOR, Raptor, and LC3II Beclin-1 and decreased phosphorylation of mTOR in cells derived from malnourished animals compared to the control group. Malnutrition did not modify the expression of Akt total, but decreased phosphorylation of Akt and decreased expression of the protein Rictor and G&#946;l cells analyzed. As apoptotic and autophagic processes can be difficult to detect in vivo, also redid the experiments in vitro, stimulating the cells with pro-apoptotic compounds (campotecina) and pro-autophagic (tamoxifen). In these experiments we observed that, when only stimulate cells with camptothecin malnourished, the same at 12 hours had a higher percentage of initial apoptosis compared to 0 hours, suggesting that there is a period in which cells are signaled to via malnourished being more susceptible to apoptotic stimuli. The animals starved cells stimulated after 12 h showed significant increase in apoptosis compared to control late stimulated, indicating that at that time there is an increase in apoptosis both in the initial process, both late process. Autophagy evaluated in kinetics of 0, 2, 6, 18 and 24 hours in vitro and observed a significant increase in autophagy in bone marrow cells of malnourished at 0 hours and after 18 hours stimulation with tamoxifen (20 microM) than the respective control, demonstrating that this period autophagy begins to be induced by stimulating more easily than the control. Autophagy is a major contributor to cellular metabolism, providing nutrients when they are unavailable, and therefore in our model of protein malnutrition in the marrow hypoplasia would autophagic process as a mechanism for survival and repair.

A desnutrição é responsável pela metade das 11 milhões de crianças abaixo de 5 anos de idade que falecem todo ano. A desnutrição é fator determinante para instalação de doenças do sistema respiratório e nervoso. Avaliaram-se os efeitos da desnutrição e renutrição no plexo traqueal de ratos. Foram utilizados filhotes dos grupos: nutridos (N) (20% de caseína), desnutridos (D) (5% de caseína) e renutridos (R) (alimentados com 5% de caseína até 21 dias e com 20% até os 42 dias). Os espécimes foram avaliados pela NADH-d; NADPH-d; AChE; SP; VIP e MEV. Observou-se fraca reatividade à AChE dos neurônios do grupo D. Não houve diferença do número de neurônios e gânglios (NADH-d e NADPH-d). A área neuronal foi maior no grupo N (NADH-d e NADPH-d.) Os gânglios do grupo N eram maiores (NADH-d) e sem diferença entre gânglios reativos à NADPH-d. Na metade torácica da traquéia havia cerca de 80% dos neurônios e gânglios (NADH-d e NADPH-d). A desnutrição protéica alterou componentes do plexo traqueal e a renutrição foi responsável pela recuperação parcial deste desenvolvimento. / Malnutrition is responsible for half of the 11 million children under age 5 who die every year. Malnutrition is a determining factor for plant diseases of the respiratory system and nervous. We assessed the effects of malnutrition and renutrition tracheal plexus of rats. We used offspring of the groups: nourished (N) (20% casein), undernourished (UN) (5% casein) and renourish (R) (fed 5% casein up to 21 days and 20% up to 42 days ). The specimens were evaluated by NADH-d, NADPH-d, AChE, SP, VIP and SEM. There was a weak reactivity to AChE neurons of group UN. There was no difference in the number of neurons and ganglia (NADH-d and NADPH-d). The neuronal area was higher in group N (NADH-d and NADPH-d). Ganglia were higher in group N (NADH-d) and no difference between the ganglia reactive to NADPH-d. In half of the thoracic trachea was about 80% of neurons and ganglia (NADH-d and NADPH-d). Protein malnutrition altered components of the tracheal plexus and renutrition was responsible for the partial recovery of this development.

A cartilagem do processo condilar (PC) e a sincondrose basiesfenoidal (SB) participam do processo de crescimento e desenvolvimento craniofacial que são determinados pelo aporte protéico, pela ação hormonal e por fatores de crescimento, sendo o IGF-I o principal deles. Objetivou-se correlacionar as alterações morfológicas no PC e na SB provenientes da subnutrição protéica. Os grupos experimentais foram formados por animais heterogêneos (n=5) com 60 dias de vida, de acordo com o teor de caseína contida nas rações, protéica (20%) ou hipoprotéica (5%), formando, respectivamente, os grupos nutrido (N) e subnutrido (S). Na microscopia de luz foi observado que a subnutrição não alterou as espessuras das camadas do PC e da SB, enquanto que através da imunohistoquímica o número de IGF-I e IGF-IR diminuiu em ambos os tecidos (N&ne;S; p<0,05). No PC, o colágeno do tipo I passou a ser do tipo II no grupo S, enquanto que na SB, o do tipo II foi destacado em ambos os grupos. A matriz extracelular do PC apresentou-se densa e com coloração homogênea nos nutridos, contrastando com o aspecto difuso dos subnutridos. Na SB, tanto no grupo N quanto no S, a MEC manteve-se com aspecto uniforme na distribuição e na homogeneidade da coloração. / The cartilage of the condylar process (CP) and the basiesfenoidal synchondrosis (BS) participate in the process of craniofacial growth and development that are determined by the protein content, the hormonal and growth factors, being the IGF-I main one. This study aimed to correlate the morphological changes in PC and SB from protein malnutrition. The experimental groups were formed by heterogeneous animals (n = 5) at 60 days of life, according to the casein contained in the feed, proteic (20%) or hypoproteic (5%), constituting respectively the nourished (N) and undernourished (U) groups. Under light microscopy it was observed that undernourished did not change the thickness of the layers of CP and BS by immunohistochemical while the number of IGFI and IGF-IR decreased in both tissues (N&ne;S; p<0,05). On the PC, the type I collagen became type II at the U group, while in the SB the type II was noted in both groups. The extracellular matrix (ECM) of the PC presented dense and homogenous coloration in the nourished, contrasting with the diffuse aspect of the undernourished. In SB, both in the N group as U, the ECM remained uniform in appearance and the distribution and uniformity of staining.

Diversos autores comprovam a influência de um episódio de desnutrição crônica no crescimento pôndero-estatural. Entretanto, não são definidas as repercussões da desnutrição protéica precocemente corrigida sobre o potencial genético de crescimento, uma vez que é difícil distinguir o papel da desnutrição do ambiente onde habitualmente ocorre. Deste modo, esta pesquisa teve como objetivo analisar os efeitos da desnutrição protéica precocemente corrigida na morfologia da epífise de crescimento. Assim, como modelos experimentais foram utilizados 13 coelhos adultos da raça Nova Zelândia Branco, sendo 12 fêmeas designadas como matrizes e 1 macho como reprodutor. Foram estabelecidos quatro grupos de acordo com o padrão alimentar: Grupo 1 (gestação e lactação normoprotéicas), grupo li (gestação normoprotéica e lactação hipoprotéica), grupo III (gestação e lactação hipoprotéicas) e grupo IV (gestação hipoprotéica e lactação normoprotéica) Após desmame todos os animais apresentaram correção protéica em suas dietas. Para coleta dos dados, os láparos foram submetidos, semanalmente, às mensurações corpóreas: comprimento crânio-caudal, peso e perímetro cefálico No 100° dia de vida, os animais foram sacrificados para mensurações ósseas e extração da epífise de crescimento proximal da tíbia para análise histológica. Dessa forma, foi possível concluir que a desnutrição protéica precocemente corrigida acarreta efeitos detetérios sobre a morfologia da epífise de crescimento de coelhos, sendo o periodo de lactação considerado como determinante do desenvolvimento pleno do potencial genético de crescimento. / Several authors prove the influence of an episode of chronic malnutrition in the growth in weight and stature. Meantime, there are not defined the repercussion of the protein malnutrition corrected at early age on the genetic potential of growth, as soon as it is difficult distinguishes the paper of the malnutrition of environment where it usually takes place. ln this way, this research had how aim to analyse the effects of the protein malnutrition corrected at early age in the morphology of the epiphyses of growth. So, experimental modeis were used 13 adult rabbits of the race White New Zealand, being 12 females designated like wombs and 1 male like reproducer. Four groups were estabiished in accordance with the food standard: Group 1 (normal protein gestation and lactation), group II (normal protein gestation and low protein lactation), group III (10w protein gestation and lactation) and group IV (10w protein gestation and normal protein lactation) After wean ali the animais presented protein correction in their diets. For collection of the datas, the young rabbits were subjected, weekly, to the corporal measure: length skull-torrent, weight and cephalic perimeter. In the 100th day of life, the animais were sacrificed for bone measure and extraction of the epiphyses of growth proximal of the tibia for histological analysis. In this form, it was possible to end that the protein malnutrition corrected at early age brings harmful effects on the morphology of the epiphyses of growth of rabbits, being the period of lactation was considered as a determinant of the fulI development of the genetic pote ntial of growth.

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:18:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maercio Mota de Souza.pdf: 1161221 bytes, checksum: 5da448cb703f4966f99caaf98de0b9ac (MD5) Previous issue date: 2011-08-18 / Objectives: to analyze the nutritional status of the Brazilian pre-school population assisted in day care centers and its associated factors; examine associated factors to overweight, stunting and underweight in children attending day care centers from João Pessoa and describe the situation of food (in)security of their families. Methodology: literature search was performed in MEDLINE, LILACS and SciELO articles reviewing the nutritional status of children attending day care centers in Brazil, published from 1990 to 2009. Search strategy: (nutritional status OR anthropometry OR malnutrition OR overweight) AND day care centers, and its counterpart in Portuguese. In the MEDLINE search the termBrazil was also used. In cross-sectional study the nutritional status of infants, the food security situation within the family, socioeconomic conditions, the characteristics of the mother and the child attending day care centers in Joao Pessoa were evaluated. Results: children attending day care centers in Brazil showed prevalence of chronic malnutrition ranged from 0.5 to 55%. Overweight has fluctuated between 0.7 and 8.6%. The most citedfactors related to malnutrition in the reviews were child's age, number of siblings, per capitafamily income and frequency of day care attendance. Among children attending day care centers in Joao Pessoa, chronic malnutrition was present in 7.6% and overweight in 6.4%. Factors associated with malnutrition in this sample were short maternal stature and incomplete vaccination scheme. The overweight in children was associated with maternal overweight. Furthermore, 59.6% of the families had food and nutritionalinsecurity, prevailing its milder form (32.4%). Conclusion: overweight and stunting, both in children attending day care centers inJoão Pessoa, as in many Brazilian cities, were the most common nutritional disorders, constituting priorities for public policy today. / Objetivos: analisar o estado nutricional da população pré-escolar brasileira assistida em creches e seus fatores associados; examinar fatores associados a excesso de peso, baixa estatura e déficit de peso em crianças usuárias de creches de João Pessoa e descrever a situação de (in)segurança alimentar de suas famílias. Metodologia: realizou-se busca bibliográfica nas bases MEDLINE, LILACS e SciELO, revisando os artigos sobre estado nutricional de crianças assistidas em creches no Brasil, publicados entre 1990 a 2009. Estratégia de busca: (estado nutricional OR antropometria OR desnutrição OR sobrepeso) AND creches, e seus correspondentes em inglês. No caso da busca na MEDLINE o descritor Brazil também foi usado. Em estudo transversal avaliou-se o estado nutricional infantil, a situação de segurança alimentar intrafamiliar, as condições socioeconômicas, as características da mãe e da criança assistida em creches de João Pessoa. Resultados: Crianças brasileiras usuárias de creches apresentaram prevalência de desnutrição crônica variando entre 0,5 e 55%. O excesso de peso oscilou entre 0,7 e 8,6%. Os fatores associados à desnutrição crônica mais citados na revisão foram idade da criança, número de irmãos, renda familiar per capita e tempo de frequência à creche. Entre crianças usuárias de creches de João Pessoa, a desnutrição crônica foi presente em 7,6% e o excesso de peso em 6,4%. Os fatores associados à desnutrição nesta amostra foram a baixa estatura materna e esquema vacinal incompleto. O excesso de peso infantil apresentou associação com o excesso de peso materno. Ademais, 59,6% das famílias destas crianças apresentaram situação de insegurança alimentar e nutricional, prevalecendo sua forma mais leve (32,4%). Conclusão: excesso de peso e baixa estatura, tanto em crianças assistidas por creches de João Pessoa, quanto em diversas localidades brasileiras, foram os distúrbios nutricionais mais frequentes, constituindo prioridades para políticas públicas atuais.