As EPEC típicas apresentam padrão de adesão localizada (LA) em células epiteliais, formando de microcolônias compactas. As EPEC atípicas aderem no padrão de adesão localizada-like (LAL), no qual não se observa microcolônias e que ocorre tardiamente em relação à LA. O objetivo deste estudo foi caracterizar a interação de EPEC atípica que apresenta o padrão LAL com a célula epitelial. A cinética da formação da lesão A/E, característica da patogênese de EPEC, demonstrou um atraso na adesão e na formação da lesão em EPEC atípica, que correspondeu à expressão tardia de Intimina, Tir e EspA. A complementação de EPEC atípica com o regulador perABC antecipou a expressão destes fatores e a formação da lesão A/E. Não foi observada relação entre outras adesinas descritas em DEC com o padrão LAL, bem como a mobilização dos receptores eucarióticos nucleolina e <font face=\"symbol\">b1-Integrina para o foco de adesão. Observou-se a possível interação da Intimina com um peptídeo da membrana da célula epitelial de 300 kDa, podendo tratar-se de um provável receptor para essa adesina. / Typical EPEC exhibit a localized adherence (LA) pattern in epithelial cells, where tight bacterial clusters are produced. Atypical EPEC produce a localized-like (LAL) adhesion pattern, in which the compact clusters are not formed and that occurs in a later stage of the infection. The aim of this study was to characterize the interaction of LAL-adherent atypical EPEC with the epithelial cell. The kinetics of the A/E lesion, the main feature of EPEC pathology, showed a clear delay in its formation by the atypical strains, probably a consequence of the delay observed in the expression of Intimin, Tir and EspA. The complementation of atypical EPEC with the perABC regulator revealed to be effective in not only advancing the expression of these factors, as well the formation of A/E lesion. No correlation was found between the presence of different adhesins already described in DEC and the LAL pattern. The analysis of the possible interaction of Intimin with epithelial cell receptors showed the presence of a 300 kDa peptide that it seems to interact with this adhesin.

Intimina é o principal fator de virulência envolvido na lesão attaching/effacing em E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli enterohemorrágica (EHEC), que são responsáveis pela diarreia infantil e colite hemorrágica/síndrome hemolítico-urêmica, respectivamente. Nos países em desenvolvimento, o diagnóstico desses patógenos ou é demorado e caro, ou não é realizado em laboratórios de rotina. No entanto, a detecção é essencial para definição do tratamento da infecção. O objetivo do presente trabalho foi definir o vetor de expressão mais apropriado e avaliar a sensibilidade e especificidade do scFv-intimina obtido. O gene scFv-intimina anteriormente obtido foi clonado nos vetores de expressão pAE e pSMT3, transformados em uma E. coli BL21 (DE3). A expressão foi induzida com 1 mM de IPTG. Em ambos os vetores, a proteína expressa foi direcionada para o citoplasma bacteriano, dessa forma a construção pAE-scFv-intimina foi utilizada na obtenção do anticorpo recombinante. Após cromatografia de afinidade ao níquel o scFv-intimina foi empregado no ensaio de imunofluorescência indireta para definir um teste de ensaio rápido e confiável, analisando-se 199 isolados de E. coli e isolados de outras Enterobactérias, dos quais 132 resultaram em isolados eae-positivos e 67 isolados eae-negativos. O teste de imunofluorescência mostrou a detecção de 132 isolados eae-positivos (100% de sensibilidade) e a não detecção de 67 isolados eae-negativos (100% especificidade). Assim, o ensaio de imunofluorescência é um método eficaz e rápido, e o scFv-intimina é uma excelente ferramenta para o imunodiagnóstico de EPEC e EHEC. / Intimin is the main virulence factor involved in the attaching/effacing lesion of enteropathogenic E. coli (EPEC) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC), which are responsible for infantile diarrhea and hemorrhagic colitis/hemolytic uremic syndrome, respectively. In developing countries, their diagnosis is either time-consuming and expensive or is not done in the routine laboratory. Nevertheless, their detection is essential in defining the infection treatment. The aim of the study was to define the most suitable expression vector and evaluate the sensitivity and specificity of the scFv-intimin obtained. The scFv-intimin gene previously obtained was cloned into pAE and pSMT3 expression vectors and transformed into an E. coli BL21 (DE3) strain. Expression was induced with 1 mM IPTG. In both vectors, recombinant protein was expressed as inclusion bodies, so pAE was chosen as the expression vector for nickel affinity chromatography. Once purified, scFv-intimin was employed in an indirect immunofluorescence assay to define a rapid and reliable assay testing 199 E. coli strains and other Enterobacteriaceae isolates, of which 132 isolates were eae-positive and 67 isolates were eae-negative. The immunofluorescence assay showed the detection of 132 eae-positive isolates (100% sensitive) and no detection in the 67 eae-negative isolates (100% specific). Thus, immunofluorescence is an effective and rapid method and scFv-intimin an excellent tool for the immunodiagnosis of EPEC and EHEC.

O sorotipo O125ac:H6 compreende amostras de Escherichia coli enteropatogênica atípicas que apresentam o padrão de adesão agregativa (AA) em células HEp-2. A construção de um banco de mutantes da amostra protótipo Ec292/84 com o transposon TnphoA gerou quatro mutantes não aderentes. O objetivo deste estudo foi a caracterização genotípica e fenotípica desses mutantes. As regiões adjacentes à inserção do TnphoA no mutante Ec2921/84::01 foram amplificadas, clonadas e seqüenciadas, revelando que a inserção do TnphoA ocorreu no gene secD, parte do sistema de secreção de proteínas do tipo 2 (SST2). O perfil de proteínas de membrana externa (OMP) dos mutantes, em comparação com a amostra selvagem, revelou a ausência de proteínas de 21 e 30 kDa nos mutantes. Um antissoro obtido contra o extrato de OMP da amostra protótipo inibiu o padrão AA e reconheceu a proteína de 30 kDa em immunoblottings com extratos de OMP. Esses dados indicam que esta proteína está envolvida no estabelecimento do padrão AA de E. coli O125ac:H6 e que essa proteína é transportada através do SST2. / The serotype O125ac:H6 comprises atypical Enteropathogenic Escherichia coli strains that express the aggregative adherence (AA) pattern to HEp-2 cells. We obtained four nonadherent mutants using TnphoA insertion in the Ec292/84 strain. The aim of this study was the genetic and phenotypic characterization of these mutants. The genetic analysis of the mutants revealed that the insertion of TnphoA ocurred in the secD gene, part of the bacterial type 2 secretion system (T2SS). The mutant outer membrane proteins (OMP) profile, in comparison to the prototype strain, demonstrated the lack of expression of proteins of 21 and 30 kDa in the mutant profile. An antiserum raised against the OMP extract of the prototype strain, in addition to inhibit the AA pattern, recognized the 30 kDa protein in immunoblotting assays with OMP extract. These data indicate this OMP is involved in the establishment of the AA pattern presented by the atypical EPEC strains of the O125ac:H6 serotype, and that this protein is transported via the T2SS.

Introdução - A diarréia ainda se apresenta como uma das principais causas de morbimortalidade em crianças menores de um ano de idade em países em desenvolvimento. Disparidades nas taxas globais de morbimortalidade entre regiões têm sido observadas em todo o mundo. Estudos recentes apontam redução na mortalidade associada à diarréia. Entretanto, a morbidade pela doença não seguiu a mesma tendência. Considerando a existência de poucos estudos em território nacional a respeito do comportamento da mortalidade e internações por diarréia, considerou-se oportuna a análise da tendência das diarréias sob este ponto de vista. Objetivo - Analisar a tendência das internações e da mortalidade por diarréia em crianças menores de um ano, nas capitais do Brasil, no período de 1995 a 2005, e encontrar possíveis padrões no comportamento dos indicadores. Métodos - Foi realizado um estudo ecológico de séries temporais utilizando dados secundários do Sistema de Informação Hospitalar (SIH) e do Sistema de Informação sobre Mortalidade (SIM) do Ministério da Saúde. Para as análises das tendências das taxas de internações e de mortalidade foram utilizados modelos de regressão polinomial. Resultados - O Brasil e treze capitais brasileiras apresentaram redução tanto nas internações por diarréia quanto na mortalidade infantil por diarréia. Oito capitais tiveram queda somente na mortalidade por diarréia enquanto que três capitais apresentaram decréscimo somente nas taxas de internação por diarréia. Na análise conjunta dos indicadores de diarréia e dos indicadores gerais, observou-se que somente no Brasil e em quatro capitais houve um decréscimo em todas as séries históricas. Conclusões Os resultados encontrados indicam que as medidas empregadas para prevenção e controle da diarréia parecem ter efeito positivo na internação e mortalidade por esta doença em algumas das capitais brasileiras e no Brasil como um todo, necessitando, ainda, de reforço nas ações de prevenção. / Introduction The diarrhea still is presented as one of main causes of morbidity and mortality in children under one year old in developing countries. Differences in the global morbidity and mortality rates among regions have been observed in the whole world. Recent global studies point out a reduction in the mortality associated with the diarrhea. However, the morbidity for the illness did not follow the same trend. There are few studies witches analyzing the trends of the hospitalization and mortality rates by diarrhea in Brazil. Objectives To analyze the trend of hospital admission rates and mortality rates for diarrhea in children under one year old in Brazil as a whole and in its capitals between 1995 and 2005 and to find standards behaviors. Methods This was an ecological study using time-series analysis. The date of hospital admission and mortality rates were collected from Ministry of Health\'s Hospitalization Data System (SIH-SUS) and from Mortality Data System (SIM-MS). Trends were estimated using polynomial regression models. Results Trends for hospital admission rates as well as mortality rates for Brazil as a whole and in thirteen capitals had decreased. Eight capitals had only had reduction in diarrhea mortality rates whereas three capitals had only presented decrease in diarrhea hospitalization rates. The combined analysis of diarrhea indicators and general indicators revealed that only in Brazil as a whole and in four capitals there was a decrease in all the historical series. Conclusions The results indicate that the official measures for prevention and control of the diarrhea seem to have positive effect in the hospital admission rates and mortality rates for the disease in some of the Brazilian capitals and in Brazil as a whole.

Orientador: Maria Cristina Thomaz / Banca: Vera Maria Barbosa de Moraes / Banca: Rafael Neme / Banca: Fábio Enrique Lemos Budiño / Banca: Danísio Prado Munari / Resumo: O objetivo deste trabalho foi estudar em um sistema de produção comercial de suínos, os efeitos dos acidificantes e probióticos como alternativas ao uso de antibióticos promotores de crescimento para leitões recém-desmamados. Foram utilizados 630 leitões de ambos os sexos com idade inicial de 21 e final de 63 dias. Em cada baia foram alojados 14 leitões os quais constituíram a unidade experimental. As variáveis analisadas foram: desempenho, biometria dos órgãos,morfologia intestinal, escore de diarréia e contagem de coliformes, análise econômica e percentagem de leitões entregues. Os períodos analisados foram: I - de 21 a 35, II - de 21 a 49 e III de 21 a 63 dias de idade. OS tratamentos foram : 1)- controle Negativo – dieta basal; 2)- Antibiótico - dieta basal mais 50ppm de doxiciclina; 3)- Acidificante - dieta basal mais acidificante 4kg/ton dos 21 aos 49 dias e 2kg/ton dos 50 aos 63 dias; 4)- Probiótico - dieta basal mais probiótico (100g/ton); 5)- Probiótico + acidificante - dieta basal mais associação do tratamento 3 e 4. Não houve diferença significativa (P>0,05) para o consumo diário de ração em nenhum dos períodos analisados. Os melhores resultados de GDP e CA foram observados nos animais que receberam ração contendo antibiótico. A incidência de diarréia foi menor (P<0,05) nos animais que receberam antibiótico. Os diferentes aditivos utilizados não influenciaram a ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to study the effects of acidifying and probiotics instead of growth promoters antibiotics for weaned piglets, in a porcine commercial production system. Male and female piglets (n=630) were used, with age ranging from 21 and 63 days. The experimental unity was the stall, each occupied by 14 piglets. The analised variables were: Performance (diary gain of weight – GPD, diary ration consumption – CDR and food conversion – CA), organs morphology (liver and pancreas weight, intestinal morphology), diarrhea score, coliforms counting, economic index and percentage of piglets delivered. The analised periods were: 21-35 days, 21-49 and the total ranging from 21-63 days. The diets were composed by corn, soybeans and nuclei, composing each of the 5 treatments: 1)- Negative control – basal diet; 2)- Antibiotic – basal diet plus doxiciclin (50ppm); 3)- Acidifying – basal diet plus acidifying (4 kg 21-49 days, 2 kg 50-63 days); 4)- Probiotic – basal diet plus probiotic (100g/ton); and 5)- Probiotic plus Acidifying – Associations treatment 3 and 4. None of the analised periods showed significant difference for CDR (P>0.05). The best GPD and CA results were showed by the Antibiotic group. The incidence of diarrhea was lower for antibiotic treated animals (P<0.05). None of the analised periods showed variation for intestinal morphometry and organs weight, with the different additives. The Antibiotic treated group showed a higher percentage of piglets delivered and a higher economic index in comparison to the other treatments. Based on these results we can conclude that antibiotics in piglets ration provides the best performance on the nursery phase. / Doutor

Orientador: Dirlei Antonio Berto / Banca: Fábio Enrique Lemos Budiño / Banca: José Roberto Satori / Resumo: Para avaliar o fornecimento de probióticos para leitões lactentes e desmamados, foram realizados dois experimentos (E) em delineamento de blocos ao acaso. No E1, foram utilizadas 38 leitegadas distribuídas em dois tratamentos: Fornecimento ou não de 2 mL de suspensão oral de probióticos á base de Enterococcus sp e Lactobacillus sp (5x106 UFC/mL) nas primeiras 24 horas após o nascimento. No E2, foram usados 108 leitões desmamados aos 21 dias de idade, distribuídos em quatro tratamentos: Ração pré-inicial (PI), inicial 1 (I1) e inicial 2 (I2) sem antibióticos e probióticos; Ração PI e I1 com 100 ppm de colistina e I2 com 60 ppm de halquinol; Ração PI, I1 e I2 com 0,04% de probiótico á base de Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis (3,2x109 UFC/g); e Ração PI, I1 e I2 com antibióticos e probióticos. No E1, os leitões que receberam probióticos não apresentaram diferenças no ganho de peso diário, incidência de diarréia, taxa de refugos e mortalidade, em relação aos que não receberam. No E2, no período de 0-17 dias, observou-se interação probióticos X antibiótico (P=0,046) para conversão alimentar (CA), de modo que, na presença do antibiótico, o probiótico resultou em melhora (P=0,072) na CA. Em relação as médias de consumo de ração diário, médias de ganho de peso diário e incidência de diarréia não houve diferença significativa. Nos períodos de 0 a 28 e de 0 a 46 dias não verificou-se efeito dos tratamentos sobre os parâmetros avaliados. Os probióticos avaliados não melhoram o desempenho de leitões lactentes e nem em fase de creche. / Abstract : Two experiments (E) were conducted to evaluate the effects of supplementation of probiotics for suckling and weaned piglets in a randomized block design. In the E1, 38 suckling litters were distributed between two treatments: either no supplementation or oral supplementation with 2 mL of a probiotics suspension of Enterococcus sp and Lactobacillus sp (5x106 UFC/mL) with the first 24 hours after birth. In the E2, 108 weaned piglets with twenty-one days of age were distributed among four treatments: Pre-starter (PS), Starter 1 (S1) e Starter 2 diets (S2) without antibiotics and probiotics; PS and S1 diets with 100 ppm of colistine and S2 diet with 60 ppm of halquinol; PS, S1 and S2 diets with 0.04 % of probiotics Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis (3.2x109 UFC/g); and PS, S1 and S2 diets with antibiotics and probiotics. In the first experiment, the piglets receiving probiotics did not differ those receiving in terms of average daily gain, incidence of diarrhea, incidence of low-weight piglets and mortality. In the E2, there was antibiotic x probiotics interaction (P=0,046) on feed conversion from day 0 to day 17: so in the presence of the antibiotics, probiotics improved (P=0,072) feed conversion, whereas no effect was observed in dairy feed intake, average daily gain and incidence of diarrhea. No treatment effects on the variables were observed from day 0 to day 28 or from day 0 to day 46. The evaluated probiotics did not improve the performance of suckling and weaning piglets. / Mestre

Orientador: Clélia Akiko Hiruma-Lima / Banca: Caden Souccar / Banca: Miriam Sannomiya / Banca: Mirtes Costas / Banca: Cláudia Helena Pellizon / Resumo: Este trabalho visou estudar os efeitos farmacológicos do extrato metanólico (BiMeOH) e partições acetato de etila (AcoEt) e aquosa (AcoAq) das folhas de Byrsonima intermedia A. Juss, espécie do Cerrado brasileiro. A partir de sua indicação popular para gastrite e distúrbios do trato gastrintestinal, foram realizados ensaios in vivo que comprovaram seu potencial terapêutico como antiulcerogênico. Análise fitoquímica do extrato resultou na caracterização de BiMeOH que possui majoritariamente taninos condensados na partição AcoAq e flavonóides derivados de quercetina em AcoEt. A avaliação de toxicidade aguda revelou que BiMeOH causou morte de alguns camundongos fêmeas, indicando cautela em sua utilização. Embora a ação gastroprotetora de BiMeOH não envolva a participação do Óxido Nítrico (NO), as partições testadas apresentaram envolvimento dessa via, bem como de grupamento sulfidrilico (SH). Além disso, apenas a AcoAq apresentou gastroproteção frente às úlceras induzidas por DAINEs, com redução dos níveis de mieloperoxidase (MPO). Também foi mostrada a participação dos neurônios sensitivos à capsaicina tanto da BiMeOH quanto da AcoEt em sua ação gastroprotetora. O extrato e partições também foram efetivos na redução dos danos gástricos no teste de isquemia-reperfusão, com redução da atividade de MPO e aumento dos níveis de glutationa total (GSH) apenas para AcoEt. No duodeno, BiMeOH e AcoAq apresentaram atividades protetoras frente à lesão induzida por cisteamina. Nenhum tratamento agudo (24 hs) do extrato e partições foi capaz de reduzir as lesões promovidas pela isquemia-reperfusão, após a instalação da lesão. Porém, o tratamento de 6 dias com BiMeOH e AcoEt apresentou redução das lesões, acompanhada por diminuição de MPO e interleucina 1-β (IL 1-β) e aumento de interleucina 10 (IL-10). A AcoEt apresentou, ainda... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study evaluated the pharmacological effects of the methanolic extract (BiMeOH) and the ethyl acetate (AcoEt) and aqueous (AcoAq) partitions from the leaves of Byrsonima intermedia A. Juss, a medicinal species of the brazilian Cerrado, in rodent models of gastrointestinal diseases. Although nitric oxide (NO) did not participated in gastroprotective action of BiMeOH the involvement of NO as well as sulfhydril compounds (SH) in the gastroprotection of AcoAq and AcoEt was shown in acute lesion induced by ethanol. Furthermore, only the AcoAq protected against NSAID-induced ulcers, with reduced levels of myeloperoxidase (MPO). It was also shown the involvement of capsaicin-sensitive neurons in the gastroprotection of BiMeOH and AcoEt. The gastric damage induced by ischemia-reperfusion were not affect by acute (24h) treatment with BiMeOH or partitions but the treatment for 6 days reduced the lesions and the MPO activity and increased levels of total glutathione (GSH). However, treatment with AcoEt and BiMeOH for 6 days decreased lesion accompanied by reduction in MPO and interleukin 1-β (IL 1-β) and increase in interleukin 10 (IL-10). The AcoEt also showed increased GSH and reduction of tumor necrosis factor α (TNF-α). On the other hand, AcoAq only increased levels of GSH and IL-10. Chronic treatment with BiMeOH, AcoAq or AcoEt for 14 days, but not for 7 days, reduced significantly the acetic acid-induced gastric lesions in rats with AcoAq and AcoEt increasing significantly the GSH levels in this model. In the duodenum, BiMeOH and AcoAq protected against injury induced by cysteamine administration. Mucosal lesions the evaluation of duodenal mucosa by 7 and 14 days of treatment was also observed reduction of injuries by the extract and partitions, up to GSH in AcoEt the period observed. The BiMeOH and AcoAq prevented the diarrhea induced by the castor oil decreasing... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Cláudia Helena Pellizzon / Banca: Clélia Akiko Hiruma-Lima / Banca: Calos Alan Cândido Dias / Banca: Jairo Kenupp Bastos / Banca: Caden Souccar / Banca: Luis Fernando Barbisan / Banca: Sergio Brito Garcia / Banca: Elfriede Marianne Bacchi / Resumo: As espécies do gênero Mentha apresentam indicação etnofarmacológica para distúrbios gastrointestinais, como a úlcera gástrica (UG) e a diarreia. Este estudo teve por objetivo caracterizar o mecanismo gastroprotetor e antidiarreico do mentol (ME), principal componente dos óleos esenciais do gênero Mentha, em ratos. A atividade gastroprotetora foi avaliada nos modelos de indução de úlcera gástrica por etanol e indometacina. Os mecanismos analisados foram a secreção de muco gástrico, o envolvimento dos compostos sulfidrílicos, da via NO/cGMP/K+ATP e dos canais de cálcio na gastroproteção, a atividade antisecretória, a produção de prostaglandina E2 (PGE2), além da atividade antiapoptótica, antioxidante (dosagem de glutationa - GSH, glutationa peroxidase - GSH-Px, glutosina redutase - GR e superóxido dismutase - SOD) e anti-inflamatória (dosagem das citocinas fator de necrose tumoral alfa - TNF-α, interleucina 6 e 10 - IL-6 e IL-10) na mucosa gástrica. Também foi avaliada a atividade antidiarreica e antiperistáltica. A indução de toxicidade aguda foi avaliada através de dosagens bioquímicas no soro sanguíneo dos ratos. O tratamento oral com ME ofereceu 88.62% e 72.62% de gastroproteção conta a indução de UG por etanol e indometacina, respectivamente. O efeito gastroprotetor do ME estimulou a produção de muco gástrico e de PGE2, além de envolver a manutenção dos compostos sulfidrílicos e a ativação dos canais K+ATP. ME apresentou efeito antioxidante, evidenciando pelo aumento na atividade de GSH-Px, GR, do nível de GSH e pela redução da atividade da SOD. A atividade anti-inflamatória foi comprovada através da redução no nível das citocinas inflamatórias TNF-α e IL-6 e aumento no nível da citocina anti-inflamatória IL-10. ME apresentou atividade antidiarreica e antiperistáltica e não induziu alterções bioquímicas no soro dos ratos, comprovando a ausência de toxidade renal e ... / Abstract: Based on ethnopharmacological indications that Mentha species may be used in the treatment of gastrointestinal diseases, this study aimed to characterize the gastroprotective mechanisms of menthol (ME), the major compound of the essential oil from species of the genus Mentha. The gastroprotective action of ME was analyzed in gastric ulcers that were induced by ethanol or indomethacin in Wistar male rats. The mechanisms responsible for the gastroprotective effect were assessed by analyzing the amount of mucus secreted, involvement of non-protein sulfhydryl (NP-SH) compounds, involvement of calcium ion channels and NO/cGMP/K+ATP pathway, gastric antisecretory activity and the prostaglandin E2 (PGE2) production. The anti-diarrheal activity and acute toxicity of ME were also evaluated. Oral treatment with ME (50 mg/kg) offered 88.62% and 72.62% of gastroprotection against ethanol and indomethacin, respectively. There was an increased amount of mucus and PGE2 production. The gastroprotective activity of ME involved NP-SH compounds and the stimulation of K+ATP channels, but not the activation of calcium ion channels or the production of NO. The oral administration of ME induced an antisecretory effect as it decreased the H+ concentration in gastric juices. ME displayed anti-diarrheal and antiperistaltic activity. There were no signs of toxicity in the biochemical analyses performed in the rats‟ serum. These results demonstrated that ME provides gastroprotective and anti-diarrheal activities with no toxicity in rats / Mestre

Orientador: Luís Guilherme de Oliveira / Coorientador: Andressa de Souza Pollo / Banca: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Hélio José Montassier / Resumo: O vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV), do gênero Pestivírus, pode ocasionar significativas perdas econômicas em bovinos. No entanto, este vírus também pode infectar os suínos, nos quais a infecção por BVDV poderá ocasionar sinais clínicos, afetar a diagnose da PSC (Peste Suína Clássica), além de torná-los fonte de disseminação viral. Tendo em vista esta problemática, este trabalho teve por objetivo verificar se leitões infectados experimentalmente por BVDV podem passar a excretar o vírus e se a disseminação viral pode ocorrer por via aerógena. Para tanto, foram realizados dois experimentos. Em cada experimento, seis leitões foram distribuídos em duplas em três câmaras de isolamento, ligadas por tubos com fluxo de ar contínuo, nas quais os animais introduzidos corresponderam ao controle, infectado e sentinela, respectivamente. Os animais da segunda câmara foram inoculados pela administração de inóculo de BVDV-1 estirpe Singer citopático por via nasal e oral. Foram avaliadas amostras de sangue, suabe nasal e retal, e no último dia foi realizada eutanásia e necropsia dos animais e coletada amostras de tecidos. No primeiro experimento, ambos os animais inoculados soroconverteram e apresentaram sinais clínicos da infecção, mas somente em um animal foi detectada excreção do vírus por via nasal e presença de RNA viral nos rins, baço e fígado, avaliadas por RT-PCR. Neste caso, a transmissão do vírus por via aerógena não foi comprovada, uma vez que o experimento foi finalizado um di... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The virus of Bovine Viral Diarrhea (BVDV), belonging to the Pestivirus genus, can cause significant economic losses in cattle. However, this virus can also infect swine, in which infection by BVDV may cause clinical signs, affect the diagnosis of CSF (Classical Swine Fever), and makes them a source of viral spread. Based on these issues, this study aimed to verify whether piglets experimentally infected by BVDV can shed the virus and whether viral airborne transmission is possible. For this, two experiments were carried out. In each experiment, six piglets were distributed in pairs in three isolation chambers, connected by continuous air flow tubes, in which the animals introduced corresponded to control, infected and sentinel, respectively. The animals present in the second chamber were inoculated with BVDV-1 strain Singer cytopathic inoculum by nasally and orally administration. Samples of blood, nasal and rectal swabs, and the last day was conducted euthanasia and necropsy of the animals and tissue samples were evaluated. In the first experiment, both inoculated animals seroconverted and showed clinical signs of infection, but only in one animal nasally virus shedding was detected, as well as, viral RNA presence in kidney, spleen and liver, both identified by RT-PCR. In this case, viral airborne transmission has not been confirmed, since the experiment was finalized one day after the viral shedding. In the second experiment, the two infected animals seroconverted with nine... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luís Guilherme de Oliveira / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Estevam Guilherme Lux Hoppe / Resumo: Os pestivírus possuem importância significativa na suinocultura, sendo que os suínos podem ser infectados pelo Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV) em condições naturais. O presente estudo teve como objetivo induzir a infecção experimental do BVDV-1 em leitões desmamados e avaliar a excreção e possível transmissão do vírus pelas vias lâmina d'água e naso-nasal. Foram conduzidos dois experimentos e uma repetição para cada via de transmissão avaliada. No total foram selecionados 24 leitões, sendo utilizados seis por experimento, divididos em grupos controle (n=2), sentinela (n=2) e infectado (n=2), utilizando isoladores, projetados para estabelecer o contato entre os animais apenas pela via de transmissão em estudo. O grupo infectado recebeu um inóculo contendo BVDV-1, estirpe Singer, enquanto que os grupos controle e sentinela foram inoculados com meio E-MEM. Os animais permaneceram nos isoladores por 25 dias, período em que foram coletadas amostras de suabe nasal diariamente e sangue a cada sete dias. Ao final, os animais foram eutanasiados e necropsiados, sendo realizada coleta de fragmentos de órgãos para histopatologia, imunohistoquímica e RT-PCR. Quando avaliada a via de transmissão lâmina d'água, apenas um animal infectado apresentou excreção de material genômico a partir do 6o dia pós-infecção (dpi), e um animal sentinela apresentou excreção no 20o dpi. Nestes animais, a soroconversão ocorreu no 25o dia apresentando título de anticorpos igual a 20. Um animal infectado ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pestiviruses have significant importance in swine breeding, and pigs can be infected by Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) under natural conditions. The present study aimed to induce the experimental infection of BVDV-1 in weaned piglets and to evaluate the excretion and possible transmission of the virus through the water and naso-nasal routes. Two experiments and one replicate were conducted for each evaluated route of transmission. In total, 24 piglets were selected, and six were used per experiment, divided into control (n = 2), sentinel (n = 2) and infected (n = 2) groups using isolators, designed to establish contact between animals only by Route of study. The infected group received an inoculum containing BVDV-1, Singer strain, while the control and sentinel groups were inoculated with E-MEM medium. The animals remained in the isolators for 25 days, during which samples of nasal swab and blood were collected every seven days. At the end, the animals were euthanized and necropsied, and organ fragments were collected for histopathology, immunohistochemistry and RT-PCR. When the water-borne transmission pathway was evaluated, only one infected animal showed excretion of genomic material from day 6 post-infection (dpi), and one sentinel animal showed excretion at the 20th dpi. In these animals, seroconversion occurred on day 25 with an antibody titer equal to 20. An infected animal did not present seroconversion during the sampled period, but there was excretion from the 5th dpi. In the repeat of the experiment, only one infected animal was seroconverted at day 25, with antibody titer of 20, whose excretion of the genomic material was detected at 21o dpi. In sentinel animals, only one had excretion at the 13th dpi. In relation to the naso-nasal experiment, the infected animals presented excretion of genetic material from the 17th dpi, but seroconversi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre