Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Wagner Luiz Ferreira / Banca: Jancarlo Ferreira Gomes / Resumo: Parasitos gastrintestinais são comuns em animais de companhia. Atualmente, os cães e gatos de estimação apresentam um importante papel entre os humanos, sendo até considerados como membros da família. Por conta deste laço estreito com os humanos, surgem as preocupações dos veterinários em proporcionar uma melhor qualidade de vida para animais, e também em relação a algumas doenças são consideradas de caráter zoonótico. Alguns protozoários e helmintos (Giardia spp., Cryptosporidium spp., Isospora spp., Toxocara spp. e Ancylostoma spp.) são comumente diagnosticados, apesar das medidas terapêuticas e profiláticas existentes. Várias destas enfermidades apresentam sinais clínicos diversos, sendo a diarreia comumente encontrada. As técnicas coproparasitológicas tem como finalidade auxiliar o médico veterinário para um diagnóstico preciso e consequentemente o tratamento adequado ao animal. O objetivo do nosso trabalho foi investigar a ocorrência dos parasitos gastrintestinais em animais filhotes domiciliados. / Abstract: Gastrointestinal parasites are common in pets. Pets play an important role among humans and lately they have been considered members of families Due to the fact of the closely contact between humans and animals, veterinarians worries about zoonotic risk of some parasitic diseases and to promote better life quality for both pets and tutors. Some gastrointestinal parasites (Giardia spp., Cryptosporidium spp., Isospora spp., Toxocara spp. and Ancylostoma spp.) are commonly diagnosed causing diarrhea, despite existing therapeutic and prophylactic evidence. The coproparasitological techniques have been helping veterinarians for an accurate diagnosis and consequently the appropriate treatment to the animal. The objective of this study was to investigate the occurrence of gastrointestinal parasites in domiciled dogs. / Mestre

Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é caracterizada pela expressão do padrão de adesão agregativa (AA) em células HEp-2 e sua classificação em típica e atípica se baseia na presença ou ausência de aggR, respectivamente. O gene shf de EAEC codifica uma proteína com similaridade a IcaB, relacionada à formação de biofilme. Os objetivos deste estudo foram verificar a prevalência de shf em 113 amostras de EAEC isoladas no Brasil e investigar o envolvimento de Shf na formação de biofilme e no padrão AA de EAEC típica e atípica. O gene shf foi detectado em 25 EAEC típicas e em 16 atípicas. As amostras shf+ foram analisadas quanto ao sorogrupo, adesão em células HEp-2 e formação de biofilme. Nenhuma dessas características foi associada a shf e a formação de biofilme foi detectada em todas essas amostras. A mutagênese em shf resultou na diminuição da capacidade de formação de biofilme e na incapacidade de adesão. Foi demonstrado que o gene shf é prevalente e que Shf participa do estabelecimento do padrão AA e de formação de biofilme em EAEC típica e atípica. / Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) is characterized by the expression of the aggregative adherence (AA) pattern to HEp-2 cells. The classification of EAEC in typical and atypical is based on the presence or absence of aggR, respectively. The shf gene encodes a protein with similarity to IcaB, associated with biofilm formation. The objectives of this study were to verify the prevalence of shf in 113 EAEC strains isolated in Brazil and investigate the role of the Shf in the establishment of the AA pattern and biofilm of typical and atypical EAEC. The shf gene was detected in 25 typical and in 16 atypical EAEC. The shf+ strains were analyzed regarding serogroups, adherence to HEp-2 cells and the ability to form biofilm. None of these characteristics was associated with the presence of shf and all strains were able to produce biofilm. The mutagenesis in shf reduced the biofilm formation and abolished the adherence to HEp-2 cells. This study demonstrated that shf is prevalent and Shf is involved in the AA and biofilm formation of typical and atypical EAEC.

E. coli pertencentes ao sorogrupo O111 são incluem amostras com diferentes fatores de virulência que são responsáveis por gastroenterites por todo o mundo e surtos de diarreia com sangue e síndrome hemolítico-urêmica em países desenvolvidos. Resultados obtidos anteriormente mostraram que o LPS O111 é um bom candidato a antígeno para a formulação de uma vacina contra E. coli O111. Desta forma, o polissacarídeo O111 foi conjugado com proteínas arreadoras. Coelhos foram imunizados pela via subcutânea com o conjugado O111-citocromo c incorporado em sílica SBA-15 como adjuvante, os resultados mostraram que os anticorpos obtidos foram capazes de reconhecer e inibir a adesão de todas as categorias de E. coli pertencentes ao sorogrupo O111. O veículo carreador de antígeno, VaxcineTM , foi incorporado no conjugado O111-EtxB e camundongos foram imunizados pela via oral, o que resultou em resposta imune sistêmica e de mucosa contra o LPS O111. Os anticorpos obtidos foram capazes de reconhecer amostras de todas as categorias de E. coli O111. Os dados obtidos neste trabalho sugerem que a utilização do polissacarídeo O111 em uma formulação conjugada é capaz de prevenir surtos de diarreia causada por E. coli O111 independente do seu mecanismo de virulência. / The E. coli serogroup O111 include samples with different virulence factors that are responsible for enteritis throughout the world and for outbreaks of bloody diarrhea and hemolytic uremic syndrome in developed countries. Previous results obtained have shown that O111 LPS is a good candidate antigen for the development of a vaccine against E. coli O111. Therefore, the polysaccharide was conjugated with carrier proteins. Rabbits were immunized subcutaneously with the O111-cytochrome c conjugate incorporated in silica SBA-15 as an adjuvant, the results obtained show that the antibodies were able to recognize and inhibit the adhesion of all types of E. coli belonging to serogroup O111. The antigen delivery vehicle, VaxcineTM was incorporated into the O111-EtxB conjugate, and mice were immunized by gavage, resulting in systemic and mucosal immune response against O111 LPS. These antibodies were able to recognize all categories of E. coli O111. The results presented in this work indicate that an oral conjugated vaccine that targets the O111 antigen has the potencial to prevent diarrhea by O111 E. coli strains, regardless their mechanism of virulence.

As Escherichia coli enteropatogênica atípicas (EPECa) são capazes de causar a lesão A/E e não transportam o pEAF. Biofilmes microbianos são definidos como comunidades complexas formadas por microrganismos aderidos a superfícies envoltas por uma matriz de exopolissacarídeos. O objetivo deste estudo foi verificar a capacidade de formação de biofilme de 92 amostras de EPEC atípicas em superfícies abióticas e células pré-fixadas, utilizando três metodologias (contagem de UFC/cm2), ensaio colorimétrico com cristal violeta e CLSM). O gene shf e bfpA parecem não ter relação com a formação de biofilme. Não houve diferença significativa de formação de biofilme nas superfícies testadas. Através de CLSM foi possível verificar a formação de biofilme em EPECa. Os biofilmes visualizados em CLSM revelaram uma grande heterogeneidade das amostras. Uma metodologia qualitativa, como CLSM deve ser empregada para indicar a formação de biofilme. A adesão e formação de biofilme por EPEC atípica de longo período pode ser uma possível explicação para os casos de diarréia persistente. / The atypical Escherichia coli enteropathogenic (EPECa) are capable to cause the lesion A/E and they don\'t transport the pEAF. Microbial biofilms are defined as complex communities formed by microrganisms adhered to surfaces embedded in an exopolysacharidic matrix. The objective of this study was to verify the capacity of formation of biofilm of 92 strains of atypical EPEC in abiotics and pre-fixed cells surfaces, using three methodologies (counting of UFC/cm2), colorimetric assay with violet crystal and CLSM). The gene shf and bfpA seem not to have relationship with the biofilm formation. There was not significant difference of biofilm formation in the tested surfaces. Through CLSM it was possible to verify the biofilm formation in EPECa. The biofilms visualized in CLSM revealed a great heterogeneity of the strains. A qualitative methodology, like CLSM should be used to indicate the biofilm formation. The adhesion and biofilm formation for atypical EPEC of long period can be a possible explanation for the cases of persistent diarrhea.

O coronavírus bovino (BCoV) é classificado no grupo 2 do gênero Coronavirus da ordem Nidovirales, família Coronaviridae, causando diarréia em bezerros neonatos, processos respiratórios em bezerros não neonatos e disenteria em vacas adultas. No presente estudo, 203 amostras fecais de bezerros de 19 propriedades leiteiras nos Estados de São Paulo e Minas Gerais foram submetidas à prova de hemaglutinação/ inibição da hemaglutinação (HA/HI) para a detecção de coronavírus e a uma reação de PCR dirigida ao gene codificador da RNA-polimerase RNA-dependente dos coronavírus (PCR pol), sendo feita a comparação entre as duas técnicas através dos testes Kappa e J de Youden. Amostras positivas à PCR pol foram submetidas a uma reação de PCR para amplificação de um segmento de 488 pares de bases correspondentes à região hipervariável do gene codificador da subunidade S1 da proteína S, sendo os fragmentos submetidos a seqüenciamento de DNA para a reconstrução genealógica das amostras estudadas. Ainda, a presença de rotavírus foi pesquisada pela técnica de PAGE. Segundo a técnica de HA/ HI, 35,47% das amostras e 73,68% das propriedades rurais forma positivas para BCoV, enquanto que pela PCR pol 25,12% das amostras e 52,63% das propriedades rurais foram positivas para este vírus. A comparação entre as duas técnicas resultou valores de kappa de -0,048 para os resultados individuais e -0,08 em relação às propriedades rurais e J de Youden de -0,045 para os resultados individuais e -0,1 em relação às propriedades rurais, demonstrando baixa concordância entre as duas provas. A genealogia obtida por máxima parcimônia através de algoritmo heurístico e baseada em seqüências da região hipervariável do gene codificador da subunidade S1 da proteína S de 15 amostras de campo aqui estudadas, da amostra Kakegawa de coronavírus bovino utilizada como controle positivo e de 10 seqüências recuperadas dos GenBank revelou a existência de dois genotipos dentro desta espécie viral, sendo os dois genotipos encontrados entre amostras brasileiras. A identidade média de nucleotídeos entre as 15 amostras brasileiras foi de 98,34%, com similaridade média de aminoácidos de 98%. Amostras pertencentes ao genotipo 2 apresentaram uma deleção de 18 nucleotídeos/ 6 aminoácidos dentro da região correspondente ao domínio II da proteína S. A árvore de máxima parcimônia enraizada tendo bredavírus como grupo externo revelou que esta deleção ocorreu em um único momento na genealogia dos coronavírus bovinos. Rotavírus foi encontrado em 12,6% das amostras fecais individuais e 28, 57% das propriedades rurais pesquisadas. Estes resultados são os primeiros baseados em amostras brasileiras de coronavírus bovino e contribuem para a caracterização molecular do BCoV, para a predição da eficiência de imunógenos e para o encontro de marcadores moleculares úteis para estudos epidemiológicos continuados em relação às diarréias neonatais em bovinos. / Bovine coronavirus (BCoV) belongs to group 2 of the genus Coronavirus from the order Nidovirales, family Coronaviridae and causes diarrhea in newborn calves, respiratory diseases in non-newborn calves and dysentery in cows. In the present study, 203 stool samples of calves from 19 dairy farms from São Paulo and Minas Gerais States were submitted to hemagglutination/ hemagglutination inhibition test (HA/HI) to bovine coronavirus detection and a PCR assay targeted to the RNA-polymerase RNA-dependent gene of coronaviruses (PCR pol), the comparison between the two tests carried out with Kappa and Youden´s J tests. Samples positive to PCR pol were submitted to a PCR assay that amplifies a 488 base-pair fragment which corresponds to the hypervariable region of the gene coding for the S1 subunit of the S protein; the amplified fragments were submitted to DNA sequencing aiming the genealogic reconstruction of the studied samples. Rotavirus was surveyed with the PAGE test. The HA/ HI test resulted 35.47% of samples and 73.68% of farms positive to BCoV, while, according to PCR pol, 25.12% of the samples and 52.63% of the farms were positive to this virus. The comparison between the two tests produced a kappa value of -0.048 to individual results and -0.08 to the farms and Youden´s J value of -0.045 to individual results and -0.1 to the farms, showing low agreement between the two tests. Maximum parsimony genealogy with an heuristic algorithm based on sequences of the hypervariable region of the gene coding for the S1 subunit of the S protein from 15 field samples here studied, from the Kakegawa bovine coronavirus strain used as positive control and from 10 sequences retrieved from GenBank showed the existence of two genotypes in this viral species. Mean nucleotide identity between the 15 Brazilian samples was 98.34%, with mean amino acid similarity of 98%. Samples from genotype 2 showed a deletion of 18 nucleotides/ 6 amino acids inside the domain II region of the S protein. Rooted maximum parsimony tree with bredavirus as an outgroup revealed that this deletion has happened only once in bovine coronavirus genealogy. Rotavirus was found in 12.6 % of stool samples and 28.57% of the surveyed farms. These are the first results based on Brazilian strains of bovine coronavirus and contribute to molecular characterization of BCoV, to the prediction of the efficiency of immunogens and to the finding of molecular markers useful to continued epidemiologic surveys on newborn bovine diarrhea.

A diarréia aguda é a segunda causa de morte em crianças < 5 anos em países emergentes. Anaeróbios estritos intestinais como B. fragilis enterotoxigênico e Clostridium difficile estão associados a este quadro infeccioso, assim como Escherichia coli diarreiogênica, Salmonella spp., Shigella spp. e Yersinia enterocolitica. Neste estudo, foi avaliada quantitativamente a presença de enteropatógenos diretamente das fezes. Amostras fecais de crianças com (110) e sem (150) diarréia foram analisadas. Todos os enteropatógenos avaliados foram detectados nas crianças com e sem diarréia, à exceção de Salmonella spp. e Y. enterocolitica que foram observados somente em fezes diarréicas. Os resultados sugerem uma relação bacteriana estreita e presentes em casos diarréicos ou não diarréicos. A presença de espécies EPEC/EHEC e de Shigella spp./EIEC mostraram valores estatisticamente significativos. / Diarrhea is a major cause of mortality and morbidity worldwide achieving children < 5 years old, and is second cause of death in emerging countries. Intestinal anaerobes like enterotoxigenic B. fragilis and Clostridium difficile are associated to acute diarrhea, as well as diarreiogenic Escherichia coli, Salmonella spp., Shigella spp. and Yersinia enterocolitica. In this study, it was evaluated quantitatively the presence of enteropathogens directly from fezes. Stools specimens from children with (110) and without (150) diarrhea were collected. All enteropathogens were detected in children with and without diarrhea except Salmonella spp. and Y. enterocolitica that were only observed in diarrheal fezes. This results suggest a tight bacterial relationship in both groups evaluated. The presence of EPEH/EHEC and Shigella spp./EIEC show statistically significant values.

De um total de 187 amostras fecais coletadas no ambulatório do Hospital Universitário/USP, entre 1994 a 1996, 54 (28,9%) foram positivas para rotavírus. Entre as amostras caracterizadas por EGPA foram identificados nove perfis eletroforéticos longos, dois curtos e um tipo não usual. O subgrupo II e o sorotipo G2 foram os mais freqüentemente identificados. Foram caracterizadas três amostras com misturas de sorotipos. As amostras positivas e mais 163 amostras, coletadas em um laboratório particular, em 2000, foram genotipadas. Os genótipos G2P[4] e G1P[8] foram os mais freqüentes nos anos de 1994-1996 e G1P[8] e G9P[8], os mais freqüentes em 2000. Os genótipos G3 e G4 foram detectado em menor freqüência. No HU, 20 (38,5%) amostras foram caracterizadas como misturas de genótipos G e 16 (29,6%), como misturas de genótipos P; não foram identificadas misturas em 2000. Dezoito amostras foram caracterizadas como P[10] por RT-PCR mas a análise da seqüência de nucleotídeos mostrou uma homologia de 90,7 a 98,0% com a amostra padrão P[8]. / From 187 fecal samples collected from outpatients at Hospital Universitário (HU)/ USP, between 1994 to 1996, 54 (28,9%) were positive for rotavirus. Positive samples were submitted to electropherotyping, subgrouping, and G serotype. Electropherotypes were characterized as nine different long genome profiles, one short and one unusual profile. Subgroup II and G2 serotype were the most frequently found and three samples showed mixed serotypes. Rotavirus samples and an additional 163 positive fecal samples, collected in a private laboratory in 2000, were G and P genotyped. Genotypes G2P[4] and G1P[8] were the most frequently found in 1994-1996 and, in 2000, G1P[8] and G9P[8] were the most frequent. Genotype G3 and G4 were detected as minor strains in both years. For HU, G genotype mixtures were found in 20 (38.5%) samples and P mixtures were found in 16 (29.6%). No mixtures were identified in 2000. Nucleotide sequencing and phylogenetic analysis of 18 P[10] samples by RT-PCR showed 90.7 to 98.0% homology with the P[8] prototype.

Em uma unidade produtora de matrizes pesadas, localizada no Estado de São Paulo, foram colhidas duas amostras de conteúdo intestinal de aves com duas semanas de idade, quatro amostras de fezes da cama do mesmo lote às 18 semanas e uma amostra da cama às 30 semanas para pesquisa de coronavirus por uma técnica de nested RT-PCR dirigida a um segmento do gene codificador da RNA–polimerase RNA-dependente (gene pol). Destas, foram positivas 6 amostras correspondentes às duas aves de duas semanas, 3 às aves com 18 semanas e 1 às aves com 30 semanas. A análise filogenética da seqüência do c-DNA correspondente a uma das amostras das aves de duas semanas agrupou este vírus entre os coronavirus do grupo 2. Quando inoculado pelas vias ocular e oral em aves White Leghorn SPF, evidenciou-se diarréia moderada, despigmentação e atraso no crescimento. Os exames anátomo e histopatológicos dos órgãos colhidos revelaram predominantemente enterite e atrofia de vilosidades no reto e duodeno, com infiltração de células mononucleares e exposição de lâmina própria. Aves sentinela SPF alocadas entre os grupos inoculados apresentaram os mesmos sinais clínicos e achados anátomo e histopatógicos. O coronavírus inoculado foi evidenciado em todos os grupos experimentais em intestino delgado, reto, pâncreas e pulmão, assim como em conteúdo entérico. Seqüenciamento e analise filogenética foram realizados com uma amostra positiva por PCR em cada um dos grupos experimentais, confirmando a identidade entres os vírus recuperados e o vírus inoculado e a proximidade deste vírus com os coronavirus do grupo 2, considerando-se o fragmento estudado. Estes resultados demonstram que o coronavirus encontrado, causa doença entérica nas aves, com tropismo predominante por reto e intestino delgado, transmitindo-se horizontalmente de modo eficiente poucas horas após a inoculação e que o segmento do gene pol estudado aproxima este vírus dos coronavirus do grupo 2. / In a broiler breeder farm located at São Paulo State two samples of intestinal contents of 2-week old birds, four fecal samples of the floor from the same flock at 18 weeks of age and one at 30 weeks of age were surveyed to coronavirus by a nested RT-PCR assay targeted to the RNA-dependent RNA-polymerase gene (pol gene). Six out of these samples were positive, two of which from the 2-week old birds, 3 from the 18-week old birds and 1 from the 30-week old birds. Phylogenetic analysis of the c-DNA sequence from one positive sample of a 2-week old bird showed that the virus clustered among group 2 coronaviruses. Oral and ocular inoculation of White Leghorn SPF birds with this coronavirus led to mild diarrhea, depigmentation and growth delay. Gross and histopatological examinations of collected tissues showed enteritis and atrophy of the villi on the small gut and rectum with mononuclear cells infiltration and exposition of the lamina propria. SPF sentinel birds placed between inoculated groups showed the same clinical signs and gross and histological findings. The inoculated coronavirus was evidenced in all experimental groups in the small gut, rectum, pancreas and lungs and also in intestinal contents. DNA sequencing and phylogenetic analysis was carried out with one positive sample per group, confirming the identity between the recovered viruses and the close relationship between this virus and group 2 coronaviruses taking into account the studied fragment. These results show that the coronavirus here found causes enteric disease in birds, with a predominant tropism by the rectum and the small gut, being horizontally transmitted in a few hours and that the pol gene studied segment bring this virus close to group 2 coronaviruses.

As EPEC típicas apresentam padrão de adesão localizada (LA) em células epiteliais, formando de microcolônias compactas. As EPEC atípicas aderem no padrão de adesão localizada-like (LAL), no qual não se observa microcolônias e que ocorre tardiamente em relação à LA. O objetivo deste estudo foi caracterizar a interação de EPEC atípica que apresenta o padrão LAL com a célula epitelial. A cinética da formação da lesão A/E, característica da patogênese de EPEC, demonstrou um atraso na adesão e na formação da lesão em EPEC atípica, que correspondeu à expressão tardia de Intimina, Tir e EspA. A complementação de EPEC atípica com o regulador perABC antecipou a expressão destes fatores e a formação da lesão A/E. Não foi observada relação entre outras adesinas descritas em DEC com o padrão LAL, bem como a mobilização dos receptores eucarióticos nucleolina e <font face=\"symbol\">b1-Integrina para o foco de adesão. Observou-se a possível interação da Intimina com um peptídeo da membrana da célula epitelial de 300 kDa, podendo tratar-se de um provável receptor para essa adesina. / Typical EPEC exhibit a localized adherence (LA) pattern in epithelial cells, where tight bacterial clusters are produced. Atypical EPEC produce a localized-like (LAL) adhesion pattern, in which the compact clusters are not formed and that occurs in a later stage of the infection. The aim of this study was to characterize the interaction of LAL-adherent atypical EPEC with the epithelial cell. The kinetics of the A/E lesion, the main feature of EPEC pathology, showed a clear delay in its formation by the atypical strains, probably a consequence of the delay observed in the expression of Intimin, Tir and EspA. The complementation of atypical EPEC with the perABC regulator revealed to be effective in not only advancing the expression of these factors, as well the formation of A/E lesion. No correlation was found between the presence of different adhesins already described in DEC and the LAL pattern. The analysis of the possible interaction of Intimin with epithelial cell receptors showed the presence of a 300 kDa peptide that it seems to interact with this adhesin.

A diarréia em bezerros é comprovadamente uma das principais causas de perdas econômicas em rebanhos de corte, sendo os prejuízos diretamente derivados da redução do ganho de peso e custos com tratamento. Considerando-se que, para o delineamento de medidas profiláticas adequadas ao controle de uma doença é necessário o conhecimento de suas causas, o presente trabalho teve por objetivo estudar de modo longitudinal a freqüência de ocorrência de coronavírus bovino (BCoV), rotavírus do grupo A (RV-A), protozoários, helmintos e enterobactérias em uma propriedade com casos esporádicos e em outra com casos recorrentes de diarréia em bezerros. Investigou-se, ainda, a presença de genes codificadores de para as toxinas shiga-like 1 e 2 , para as adesinas K99 e F41 e para a intimina (eae) nas E. coli isoladas. Para a detecção de BCoV, utilizou-se uma nested-RT-PCR direcionada ao gene codificador da RNA polimerase RNA dependente, e para a detecção de RV-A utilizou-se ELISA direto duplo sanduíche. O isolamento e caracterização bioquímica das colônias de bactérias foram conduzidos de acordo com técnicas de bacteriologia clássica. A caracterização genotípica das colônias de E. coli isoladas foi realizada através de uma Multiplex-PCR, utilizando primers para os genes codificadores dos seguintes fatores de virulência: Stx1, Stx2, Sta, K99, F41 e eae. A detecção de parasitas foi realizada por centrífugo sedimentação em água-eter e centrífugo-flutuação em solução supersaturada de sacarose, considerando-se como resultado final do exame coproparasitológico todos os parasitas encontrados em ambas as técnicas em sua maior contagem. A freqüência de ocorrência de coronavírus bovino e rotavírus do grupo A foi baixa, restrita a animais com até quatro meses de idade, enquanto que protozoários, helmintos e enterobactérias apresentaram tendência crescente em freqüência relacionada à progressão da idade dos animais. Foram identificados os patotipos STEC, AEEC e um padrão atípico com os genes de K99 e eae. Além disso, encontrou-se associação entre baixo padrão sanitário e maior freqüência de ocorrência de Eimeria spp, Strongyloidea, Strongyloides spp, Trichuris spp e Escherichia coli portadora de fatores de virulência Stx1, Stx2, K99 e eae. O presente trabalho colabora para a caracterização da microbiota entérica de bezerros, mas mantém abertas as questões relativas às diferenças específicas entre as biotas entéricas de bezerros sadios e com diarréia, enfatizando a importância de se realizarem mais estudos que investiguem simultaneamente diversos enteropatógenos potenciais nestes animais / Diarrhea in calves is proved to be one of the main causes of economic loss in beef herds, which is direct originated by reduction of weight gain and increment of treatment costs. It is known that the determination of appropriate preventive measures to control a disease depends on the knowledge of its causes. In this manner, the present work aimed to study longitudinally the frequency of occurrence of bovine coronavirus (BCoV), group A rotavirus (RV-A), protozoa, helminths and enterobacteria in a beef farm presenting sporadic cases and other with recurrent cases of diarrhea. Moreover, the presence of genes that express the following virulence factors were investigated in the isolated E. coli: shiga-like toxins 1 and 2, adhesins K99 and F41 and intimin (eae). A nested-RT-PCR targeted to the RNA-dependent RNA polimerase gene was conducted to detect BCoV, and a double-sandwich direct ELISA was used to detect RV-A. Classical bacteriology techniques were used to isolate and indentify bacterial colonies. A Multiplex-PCR, with primers designed to previously described E. coli genes, was used to genotype these colonies. Centrifuge sedimentation in water-ether and centrifuge flotation in sucrose supersaturated solution were used to detect the presence of parasites. The final result was achieved by the highest count of all the parasites found. The observed frequency of occurrence of both BCoV and RV-A was low and restricted to animals up to 4 months of age whereas protozoa, helminths and enterobacteria showed an increasing tendency on its frequency related to progression of animals aging. STEC, AEEC and an atypical pathotype of E. coli, with K99 and eae genes were found. Moreover, an association between low sanitary pattern and a higher frequency of Eimeria spp, Strongyloidea, Strongyloides spp, Trichuris spp and Escherichia coli bearing Stx1, Stx2, K99 and eae genes was observed. The present study contributes to the characterization of calf enteric microbiota. However, the points related to the specific differences between healthy and diarrheic calves enteric microbiota remain unclear, emphasizing the importance of future studies to investigate different potential enteropathogens in beef calves simultaneously